Por qu el hisopo importa en la validacin de

limpieza?
http://www.cemag.us/article/why-swab-matters-cleaning-validation

By Sandeep Kalelkar, Ph.D.

QU ES VALIDACIN DE LIMPIEZA?
La Administracin de Drogas y alimentos (FDA) de Estados Unidos public su
Gua para la Inspeccin de Validacin de Procesos de Limpieza 1 en 1993.
Desde ese tiempo, los protocolos involucrados en los procesos de limpieza en
el ambiente de fabricacin farmacutica y los lugares de muestreo y llenado
han recibido una mayor atencin.2,3 La regulacin principal con respecto a
manejar la necesidad de la validacin de limpieza es la contaminacin cruzada
de la sustancia farmacolgica deseada ya sea otro ingrediente farmacutico
activo (API) de las corridas de los lotes anteriores o los residuos de los agentes
de limpieza usados.
La contaminacin cruzada con residuos extraos de cualquier clase presenta
un riesgo de seguridad a los pacientes que consumen el producto. Esto
amenaza alterar la potencia, la identidad qumica y la integridad de la sustancia
farmacolgica y la formulacin. Por lo tanto, el equipo y ambiente de trabajo
involucrados en los procesos de fabricacin del frmaco debe limpiarse en
intervalos regulares para prevenir la posibilidad de tal contaminacin cruzada.
Estos protocolos de limpieza deben validarse con el fin de garantizar de que lo
que ellos hacen, de hecho, sirve a su propsito limpiar las superficies a
niveles que eviten la posibilidad de contaminacin cruzada.
En los ltimos aos, se ha puesto mayor nfasis en el desarrollo de protocolos
de limpieza validados y robustos, dada la preocupacin sobre la seguridad de
nuestro proveedor de frmacos. El crecimiento en los niveles de
subcontratacin y el off-shoring de la fabricacin farmacutica ha aumentado la
preocupacin de la FDA sobre los procesos de limpieza. La documentacin
inadecuada, el entrenamiento y la validacin de los procesos de limpieza estn
entre los cuatro problemas ms frecuentemente citados. En la forma 483 y las
cartas de advertencia que han sido publicadas por la FDA. 4

POR QU EL HISOPADO?
En un ambiente de fabricacin farmacutica tpico, la limpieza puede realizarse
usando alcohol isoproplico al 70% (IPA) y/o otros qumicos, detergentes y
agentes sanitizantes con el fin de remover los residuos de la corrida del lote
1

anterior. Las reas as limpiadas deben ahora ser muestreadas adecuada y

apropiadamente con el fin de validar el protocolo de limpieza.
EL hisopado y el enjuague son dos de las tcnicas ms comunes usadas para
el muestreo y tales superficies limpias. El hisopado es un mtodo de muestreo
directo, mientras que el enjuague es un mtodo indirecto. En la prctica, el
acceso fsico a las superficies y partes del equipo a limpiar tienden a llevar a la
eleccin del mtodo de muestreo. Por ejemplo, el hisopado podra trabajar
particularmente bien en reas de trabajo ms restringidas tales como
aisladores, campanas y esquinas accesibles del equipo, mientras que el
enjuague puede trabajar mejor en tuberas y tubos ms largos. En general, es
ms deseable una combinacin de ambos es ms conveniente para lograr la
cobertura completa de las superficies a limpiar.
Mientras que la gua de la FDA indica una preferencia por el mtodo directo de
hisopado, la comunicacin ms reciente de la Conferencia Internacional para la
Armonizacin (ICH) en el documento ICH Q7A5 declara que los mtodos de
muestreo deben ser lo suficientemente amplios para cuantificar residuos
solubles e insolubles que queden sobre las superficies despus de la limpieza.
Los protocolos exactos prescritos necesariamente variarn dependiendo de la
naturaleza de los productos, residuos y superficies. Estos protocolos deben
adecuarse a las necesidades de cada entorno.

EL PROCEDIMIENTO DE HISOPADO CONSIDERACIONES

El hisopo a usar para el muestreo tpicamente es pre-humedecido con agua u
otro solvente adecuado con el fin de remover los residuos de la superficie.
Presionando los lados del hisopo contra el interior del vial remueve el exceso
del solvente antes del muestreo. Esto es importante debido a que el exceso de
solvente puede por s mismo servir como una fuente de residuos que lleve a
resultados variables. Hay una interaccin fsica directa entre el hisopo, el
solvente y los residuos a remover; por lo tanto, la eleccin del hisopo es crtica
para la efectividad de los procesos de muestreo. El hisopo usado debe ofrecer
un nivel ultra-bajo de partculas y fibras, alta absorbancia y mnimas
interferencias extrables. Los hisopos de polister son procesados
especialmente para reunir los requerimientos ms estrictos asociados con los
protocolos de validacin de limpieza. La naturaleza fsica del proceso de
hisopado implica que se realicen niveles significativos de entrenamiento del
operador antes de la implementacin de los protocolos de la validacin de
limpieza. Este entrenamiento debe servir para minimizar la subjetividad que es
inherente a tal actividad de muestreo. Las instrucciones recomendadas y los
movimientos utilizados en el hisopado real de un rea como se muestra en la
figura 1debe detallarse en el entrenamiento para asegurar el ms alto nivel de
2

consistencia. Se pueden usar patrones alternos de muestreo por hisopo si esto

ayuda a maximizar el por ciento de recobro.

Se usa un solvente de extraccin adecuado para liberar los residuos de la

cabeza del hisopo. Dependiendo del PNO particular en cada rea, este
muestra de hisopo puede necesitar ser filtrado o sonicado para extraer los
residuos tan completamente como sea posible. Estos procedimientos de
preparacin de la muestra colocan una carga pesada sobre la calidad
intrnseca de los materiales usados en el cabezal del hisopo y los filtros. El uso
de cualquier cosa de menor calidad que los hisopos de polister pre-tratado
puede proveer una fuente de contaminacin en el ensayo posterior.

Los pasos para el desarrollo y validacin del mtodo frecuentemente se

realizan sobre cupones para servir como ejemplos de la superficie de los
equipos a limpiar. La eleccin del filtro y solvente a usar en la preparacin de la
muestra tambin es crtica ya que puede tener un impacto sobre el recobro,
influir sobre los extractos y la eficiencia de la filtracin. Yang et al. ha reportado
un estudio sistemtico de una variedad de condiciones de solventes y pH y su
impacto en el por ciento de recobro y la eficiencia de la filtracin. 6 Si bien la
eleccin de la condiciones del solvente usado en el anlisis posterior (por
3

ejemplo, HPLC) puede hacerse de manera intuitiva, esto algunas veces puede
comprometer la eficiencia del filtrado y el por ciento de recobro.

ANLISIS DE RESIDUOS CONSIDERACIONES ANALTICAS

El propsito del muestreo por hisopo como parte de un protocolo de validacin
de limpieza es tener la habilidad de probar que el proceso de limpieza sirve
para su propsito. Este propsito (limpiar las superficies para evitar la
contaminacin cruzada) es mejor medido en el paso de la validacin como un
por ciento de recobro de residuos. Tal medida provee un estimado del lmite
aceptable de residuos aceptables (LAR). La medida del por ciento de recobro
se realiza a travs de una prueba analtica, tpicamente ya sea HPLC
(cromatografa de lquidos de alta resolucin) o TOC (carbono orgnico total)
Los sistemas HPLC generalmente llevan detectores adicionales, tales como
espectrometra de masas (MS para especificidad e identificacin). Es
importante realizar al principio en el proceso del desarrollo del mtodo para la
validacin de limpieza que el por ciento de recobro ser influenciado
directamente por la interaccin del detector en particular con cada una de las
variables involucradas en el protocolo. Es mejor realizar un pre-estudio de la
influencia de los varios factores involucrados en la limpieza con el fin de
asegurar que sus efectos sobre el por ciento de recobro final medido es bien
conocido. Tpicamente es muy engorroso deshacer un resultado aberrante de
por ciento de recobro despus del hecho para un mtodo que puede haber
estado en uso por un perodo grande tiempo. La validacin de limpieza es una
actividad compleja que requiere una eleccin cuidadosa del procedimiento de
muestreo y mtodo analtico. Entonces es altamente recomendable siempre
usar slo materiales de la ms alta calidad para los hisopos, filtros y solventes
en los protocolos de validacin de limpieza con el fin de asegurar que ellos no
puedan servir como fuentes de resultados aberrantes, siempre y cuando esos
resultados se produzcan.
Tanto el HPLC y el TOC son mtodos altamente sensibles que sirven como
ensayos para los protocolos de validacin de limpieza. El HPLC por su propia
naturaleza es un ensayo especfico en el que se puedan identificar picos y
asignarlos a residuos especficos. Mientras
que el TOC es medicin
clsicamente no especfica de la carga total de carbn en un entrono
determinado. Ya que esos ensayos son cuantitativos, los parmetros tpicos
tales como exactitud, precisin, linealidad, lmites de deteccin y cuantificacin
deben evaluarse como parte del desarrollo del mtodo.

Mientras que el HPLC es una herramienta muy utilizada en la industria

farmacutica, la complejidad, la sensibilidad en niveles de trazas, y la criticidad
del protocolo de validacin para la seguridad del frmaco merece atencin
especial a los resultados del anlisis de HPLC. Es importante evitar el uso de
materiales que puedan servir como fuentes de contaminacin a travs de la
interferencia con el espectro UV, o el detector de eleccin. En el caso de que tal
interferencia en el ensayo sea inevitable, el conocimiento e incluso la
cuantificacin de la interferencia de tal forma que el protocolo de validacin de
limpieza est basado cientficamente podran pasar la prueba bajo una
investigacin. Se debe tratar de identificar cualquier pico adicional que
aparezca en los cromatogramas de las muestras de los hisopos adems de los
derivados de los residuos esperados.
El TOC es (carbono orgnico total) es un ensayo conductimtrico que se
correlaciona con la concentracin de carbn el cual provee una estimacin
global no especifica de la carga de residuos de un lote anterior dejados en la
superficie. Las mediciones del TOC son altamente sensibles y tpicamente
reportadas en niveles de partes por billn (ppb o g/L). como tal, se debe
tomar gran cuidado durante el muestreo con hisopo y la preparacin de la
muestra para minimizar la contaminacin de carbono orgnico de fuentes
externas.

RESUMEN
La validacin de limpieza es un paso esencial en la limpieza crtica del entrono
de fabricacin farmacutica. El hisopado es el mtodo preferido de muestreo
de las superficies en el proceso de validacin de limpieza. Los mtodos de
muestreo y anlisis tienen un impacto directo y medible sobre los resultados
del por ciento de recobro ya sea para los ensayos de HPLC o TOC. Es crtico
asegurar que el hisopo, filtros y materiales asociados usados durante el
proceso sean de la ms alta calidad posible y no contribuyan con niveles trazas
de impurezas que puedan interferir con los resultados.

Referencias
Guide to Inspections of Validation of Cleaning Processes, FDA Office of
Regulatory Affairs, Rockville, MD, 1993.
Carlson, J. Is swabbing a regulatory requirement? Journal of GXP
Compliance, (14):1, 2010.
Pluta, P. and Sharnez, R., Avoiding Pitfalls of Cleaning Validation. Journal of
GXP Compliance, (14):3, 2010.
5

McCormick, D. Poor OOS Review Leads Causes of FDA Citations. Pharma

Technol. Oct 2005
ICH Guidance for Industry, Q7A; Good Manufacturing Practice Guidance for
Active Pharmaceutical Ingredients, Aug 2001.
Yang, P, Burson, K., Feder, D. and Macdonald, F. Method Development of
Swab Sampling for Cleaning Validation. Pharmaceutical Technology, Jan 2005.

Sandeep Kalelkar is Director of Marketing for Texwipe, an ITW Company.

www.texwipe.com