I

MASTER MIX PCR

Clculos de master mix PCR

1. Cunto de agua PCR debo aadir a primers liofilizados con 74.4 n moles para obtener una
concentracin final de 200uM?
M=#moles/Vol(litros)
(74.4x10-9uM) /(200x10-6M) uL = 0.372X10-3L
1106 uL
0.372 X uL
X=372 uL de agua PCR
2. Cunto de agua PCR debo aadir a este para obtener una solucin al 20 uM?
De la anterior puedo tomar 5 uL
(200uM) (5 uL) = (20uM) (V2)
5 0uL=V2

... H2O PCR: 45 uL

O tambien podra trabajar com la solucin completa (375 uL) , obtenindose
(200uM) (375 uL) = (20uM) (V2)
3720 uL=V2

... H2O PCR:3345 uL

Cuanto de agua PCR debo aadir a primers liofilizados con 58.6 nM para obtener una concentracin
final de 200 uM?
M=#moles/Vol(litros)
(58.6x10-9M) / (200 X10-6M)
0.293 X10-3 L293 uL de agua PCR

3. Cunto de agua PCR debo aadir a este para obtener una solucin al 10 uM?
De la anterior puedo tomar 5 uL
(200uM) ( 5uL) = (10uM) (V2)
100 uL=V2

... H2O PCR: 95 uL

O tambin podra trabajar com la solucin completa (293 uL) , obtenindose
(200uM) (293 uL) = (10uM) (V2)
5860uL=V2

... H2O PCR: 5567 uL

Clculos de master mix PCR
Completar la siguiente tabla
Componente

Concentraci

Concentracin

Volumen por

Volumen (uL)

n inicial

final

reaccin

para tubos (7

1uL

tubos )
1uL para cada

muestra
56

Muestra de ADN
H 2O
Buffer 10X
MgCl2

10x
25mM

1x
2.5mM

2.5 uL
2.5uL

17.5
17.5

dNTPs

2.5Mm

0.2mMc/u

2uL

14

Primer forward

10uM

1uM

2.5uL

17.5

Primer reverse

10uM

1uM

2.5uL

17.5

Taq polimerasa

5U/Ul

1U/Ul

5uL

35

25 uL

Componente

Concentrac

Concentracin

Volumen por

Volumen (uL)

in inicial

final

reaccin

para tubos(7
tubos )

Muestra de ADN
H2O
Buffer 10X
MgCl2
dNTPs
Primer forward
Primer reverse
Taq polimerasa
Volumen total

5x
50mM
2.5mM
20 uM
20uM
5U/uL
-

1uL

1uL para cada

1x
2.5Mm
0.2mMc/u
1uM
1uM
1u/uL
-

1.125
2.5uL
0.625uL
1uL
0.625 uL
0.625uL
5uL
12.5uL

muestra
7.875
17.5
4.375
7
4.375
4.375
35

1. Cunto de cada reactivo debo aadir si mi artculo de referencia me indica que el

protocolo es el siguiente?
Componente

Stock

Concentracin

Volumen

Volumen por

final

final (uL)

Reaccin

TRIS HCl
MgCl2
DNTp

20mM
3mM
400uM

10mM
1.5mM
200uM

KCl
TaQ

0.5M
50U/mL

50 Mm
1.25

1.25
0.19

1.25
1.19
1
1
1

6.25

3.125
1.5625
1.5625

DNApolimerasa
Primer forward
Primer reverse
Muestra de ADN

20uM
20uM
-

0.5uM
0.5uM
10ng

( no es medible )
1
1
1

Agua PCR

0.81

12.5

12.5

Volumen final
KCl:
C1v1=c2v2
(0.5M)X=(50mM)(12.5uL)
X=50mMx12.5ul/0.5x103mM=1.25 uL
Taq polimerasa
1000ul50 U
6.25uLX
X=0.3 U
1.25 U-0.3= 0.95 U
1uL5U

x 0.95 U
X=0.19 uL
No es medible, entonces se hara una disolucin pero manteniendo la concentracin:
Disolucin de 1:10
Volumen de taq polimerasa 1.9 en 8.9 uL de agua PCR

Luego:
1.910 uL
x6.25uL de mix
x=1.19uL
Primers
(20uM)(XuL)= (0.5uM) 12.5 x=0.3125 uL (no es medible)

... se hara una disolucin 1:10

3.125uL de primer con 6.875 uL de H2O PCR (ESTO SE PREPARA Y SE COGE 1uL segn lo
requerido)
O tambin:
X (1uL) = (0.5uM) (12.5uL)
X=6.25uM concentracin de la que se partir
(20uM) (x)= 6.25 uM (10uM)
X=3.125 uL
Entonces de H2O PCR =6.875uL

2. Se tiene en stock los siguiente reactivos :Mix 2X

MIX :
4.17
uL

Componente

Stock

Concentracin
final

TRIS HCl
MgCl2
DNTp

30mM
3mM
400uM

10mM
1mM
100uM

Volumen
final (uL)

Volumen
final (uL)
4.17

3.125( tendra que salir

4.17 ya que va dentro del
mix,
entonces
la
concentracin final de
trabajara al 133.3uM )

Volumen por
reaccin
(uL)
1.39
0.695
0.695

TaQ

50U/mL

1.25

0.178

1.29

1.29

sa
KCl

0.5M

20mM

0.5

0.5

0.5

Primer

20uM

1uM

forward
Primer

20uM

1uM

reverse
Muestra de

10ng

ADN
Agua PCR

3.54

DNApolimera

Volumen final

12.5
KCl:
C1v1=c2v2
(0.5M)X=(20mM)(12.5uL)
X=20mMx12.5ul/0.5x103mM=0.5 uL
Taq polimerasa
1000ul50 U
7.295uLX
X=0.36 U
1.25 U-0.36= 0.89 U
1uL5U
x 0.89 U
X=0.178 uL

No es medible, entonces se hara una disolucin pero manteniendo la concentracin:

Disolucin de 1:10
Volumen de taq polimerasa 1.78 en 8.22 uL de agua PCR
Luego :
1.7810uL
x 7.295uL(mix )
x= 1.29 uL

Primers
(20uM)(XuL)= (1uM) 12.5 x=0.625 uL (no es medible)

... se hara una disolucin 1:10

6.25uL de primer con 3.75 uL de H2O PCR
O tambin:
X (1uL) = (1U) (12.5uL)
X=12.5uM concentracin de la que se partir
(20uM) (x)= 12.5 uM(10uM)
X=6.25 uL
Entonces de H2O PCR =3.75 uL

II PREPARACIN DE BUFFERS Y SOLUCIONES EN BIOLOGA

MOLECULAR
1. Calcule las siguientes concentraciones :
a. 10M NaOH , diluido 0.05 X
0.05=1:20
(10M) (1mL)= X (20mL)
0.05 M=X
b. 2M HCl , diluido 1:5
(2M)(10mL) = (X) (50mL)
0.4 M=X
c. 1000 mg/L glucosa, diluido 1:10 y luego 1:2 = _____ mg/L
1000mg1 L

1:10

100mgcompletar a 1L
1:2
50mg completar a 1 L

d. 250 ml de 5% NaCl contienen ____ g de NaCl

Xg NaCl = 5%/100% X 250 mL=12.5 g de NaCl
e. Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 100 ml de CuSO4 al 5%?
PM del CuSO4 5 H2O: 250 g/mol, PM del CuSO4: 160 g/mol
1g CuSO4 .5H2O250g/mol
X g CuSO4-160g/mol
Operando da como resultado: 0.64 g.
As que en 1 g de CuSO4.5H2O hay 0.64 de CuSO4
5%=5g
0.64g CuSO4. 1 g CuSO4. 5H2O
5g CuSO4- X CuSO4. 5H2O
f.

X=7.8125 g de CuSO4. 5H2O

Qu porcentaje de CuSO4 5 H2O es agua?
1 g CuSO4 .5H2O0.64g CuSO4

... H2O es 0.36 g 36%

g.

Cuntos gramos de MgCl2 hay en 1 g de MgCl2 3 H2O? PM del MgCl2 3 H2O:

149 g/mol, PM del MgCl2: 95 g/mol
1gMgCl2.3H2O149 g/mol
Xg MgCl295g/mol
Xg MgCl2 = (1gMgCl2.3H2O) X (95g/mol) /149 g/mol
Xg MgCl2=0.638

h. Cuntos mililitros de NaOH 0.4 M se necesitan para preparar 20 ml de una solucin

2M?

C 1 V 1=C 2V 2

(2M) (X) =0.4M) (20mL)

X=4 mL.
i.

Qu porcentaje de Mg contiene el MgCl2 3 H2O?

149g/mol MgCl2.3H2O100%
24g MgCl2X%
Operando: 16.1 % Mg contiene el MgCl2 3 H2O
j.

Cunto CuSO4 5 H2O debe ser pesado para preparar 1 L de una solucin que
contenga 80 mg de CuSO4?
Del ejercicio 0.64 g CuSO41 g CuSO4 .5H2O
0.08gX g CuSO4 .5H2O

X g CuSO4 .5H2O=0.08gX 1 g/0.64 g= 0.125 g CuSO4 5 H2O debe ser pesado

k.

El peso molecular de CaCO3 es 100 g/mol, cuntos gramos son necesarios para
preparar:
1 L de 0.1 M CaCO3?
100 g/mol1M
X 0.1M
X= 10g/moL son necesarios para preparar 1 L de 0.1 M CaCO3

50 mg/L de CaCO3?
100 g 1 mol
0.05 gx
x=n=5x10-4
n=Wsoluto/PM
5x10-4/100 =
0.05 g de CaCO3
l.

Una solucin estndar de hemoglobina contiene 200 g/L. Cuntos ml deben usarse
para preparar 6 ml de las siguientes concentraciones:
200 g/L
200 g 1000Ml
X 1 mL
Operando x=0.2g/mL
0.2 g1mL
x 6mL
x=1.2 g

C 1 V 1=C 2V 2
(0.2 g/mL) X= (0.2 g/mL)(6 mL)

X=6mL
150 g/L
150 g1000mL
x1mL
x=0.15 g
6 ml 0.2g/mL
X mL0.15 g/mL
X=4.5 mL
100 g/L 0.1g/mL
6 mL 0.2 g/mL
x 0.1 g/ mL
x= 3 mL
50 g/L 0.05g/mL
6 mL 0.2 g/mL
x 0.05 g/ mL
x=1.5 mL
m. La solucin salina normal tiene una concentracin de 0.85%. Cul es su
molaridad? (PM NaCl : 58.5 g/mol)
n=58.5 g / mol1 M segn M=n/V
58.5 g/mol 1000 mL -1M
0.85 g 1000mL
X=0.0145 M
n.

Cuntos gramos de Na2HPO4 deben ser pesados para preparar 1 L de una solucin
cuya concentracin es de 50 mg/ml?

Cd=Ms/Vd
Ms=Cd xVd
(0.05g/mL) (1000mL) =50 g

o. Cul es la dilucin final de una muestra de suero en un tubo que contiene 200 l de
suero, 500 l de solucin salina y 300 l de reactivo?

Suero

200 uL

SS

500uL

300uL

2
2/8 =1/4
=0.25=25/100=
1/51:5

p. Cul es la concentracin en mol/L de una solucin que tiene 100 g de NaOH

disueltos en 100 ml de agua? PM NaOH: 40 g/mol
40 g 1 mol
100gX mol
X=2.5 moles
M= n/v
M=n/0.1 2.5 mol /0.1 L=25 mol /L

Gelatina al 0.001 %, volumen final de 12.5uL

Solucin stock
1mL 0.5mg0.05%
1mL0.1 mg 0.01%
C1 v1=c2v2
0.01X= (0.001%) (12.5uL)
X=1.25 uL
O tambin
1mL 0.5mg0.05%
C1 v1=c2v2
(0.05%)X=(0.01%)(1000uL)
X=200uL
Ms 800 uL de agua
Luego (0.01%)(X)=(0.001%)(12.5 uL)
X=1.25 uL