CURSO DE BIOLOGA CELULAR Y

MOLECULAR

1. RESUMEN
El microscopio es sin duda el elemento ms importante en cualquier laboratorio. El
microscopio ptico engloba a todos lo que utilizan luz en combinacin con lentes
pticas para aumentar la imagen de la muestra que se observa
En esta prctica se identific cada una de las de las partes microscopio y la ubicacin
de ellas, conociendo su funcionalidad y el cuidado que se debe tener con el microscopio
al cogerlo y al limpiarlo.
Como muestras para la observacin en el microscopio se recort una letra e de un papel
peridico y un pedazo de lana, estas muestras fueron colocadas en lminas porta
objetos y con el cubre objetos colocndolas en la platina se observaron en 3 diferentes
aumentos: 4x, 10x y 40x.

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2. INTRODUCCION
La importancia del estudio y manejo del microscopio ptico radica en el hecho de
permitirnos observar clulas, microorganismos y bacterias, lo cual es imposible de
observar a simple vista.
Con el microscopio hemos descubierto infinidades de cosas que nos han ayudado a
evolucionar como por ejemplo hemos descubierto enfermedades que seran imposible
de detectar sin la ayuda del microscopio tambin hemos descubierto las cura para esas y
muchas ms enfermedades. El microscopio ha sido una de las herramientas esenciales
para el estudio de las ciencias de la vida. Abri el ojo humano hacia una nueva
dimensin.
Los elementos mnimos que componen el microscopio ptico son un lente objetivo y
otra ocular que produce imgenes ampliadas .Adems del sistema ptico de lentes, los
microscopios pticos poseen un sistema de soporte, un sistema mecnico de ajuste y un
sistema de iluminacin .El principio de funcionamiento del microscopio ptico es el de
utilizar dos juegos de lentes convergentes que se encuentran situados en los extremos de
un tubo para amplificar una imagen .1

El microscopio ptico permite aumentar las imgenes de las clulas hasta mil veces y
tener acceso a detalles hasta de 0.2 u (limitacin impuesta por la naturaleza ondulatoria
de la luz, no por la calidad de las lentes).Se requieren tres elementos para visualizar
clulas con el microscopio ptico. En primer lugar, debe proyectarse una luz brillante la
muestra por los lentes del condensador .Segundo, la muestra tiene que ser
cuidadosamente preparada para que la luz pueda atravesarla .Tercero, un sistema de
lentes apropiado (objetivo ocular) debe estar alineado para enfocar una imagen de la
muestra en el ojo. 2

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3 . O B J E T I VO S
OBJETIVO GENERAL
Identificar las partes pticas y mecnicas del microscopio para su ptimo
desempeo.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Conocer y ejercer el correcto manejo del microscopio.
Preparar lminas para su observacin posterior al microscopio.
Observar y realizar preparaciones microscpicas temporales con los objetivos
de 4x, 10x y 40 x.
Realizar y comprender el proceso de enfoque de una muestra.

4 . M AT E R I A L E S Y M E T O D O S
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MATERIALES:
o Lminas portaobjetos
o Laminillas
o Microscopio ptico compuesto
o Hoja de peridico
o Tijeras
o Algodn y/o lana
o Papel lente
o Solucin limpiadora de lentes pticos
o Pinzas de punta fina
o Goteros

MTODOS:
Para la preparacin de las muestras
a Para muestras con color y espesor
- Cortar de un peridico la letra ``e.
- Montar la letra en posicin de lectura sobre una lmina
portaobjetos
- Colocar una gota de agua y encima una laminilla o cubreobjetos
con un ngulo de 45.
- Observar en el microscopio dicha letra a diferentes aumentos:
4x, 10x y 40x.
b Para una muestra fibrosa
- Montar las hebras de lana sobre las lminas portaobjetos.
- Colocar una gota de agua a la muestra y una laminilla.
- Observar la muestra en microscopio a diferentes aumentos.
- Realizar esquemas de los observaciones observando organismo
y colorantes, cuando corresponda.
Pasos generales a seguir para enfocar una muestra
1 Enchufar el microscopio a la corriente.
2 Con el tornillo macromtrico hay que separar lo mximo posible la
platina del tubo, o sea, bajar la platina.

Fig 1. Girando el
tornillo
macromtrico
para poder bajar
la platina.
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Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual

facilita el hallazgo de estructuras importantes este objetivo tiene
que estar alineado con el condensador.

Fig. 2. En esta
imagen se observa
el enfoque del
objetivo de menor
aumento (el del
color rojo, 4x).

Encender la fuente de luz.

Fig. 3. Se observa
el sentido de giro
para encender la
fuente de luz.

Colocar y ajustar la preparacin sobre la platina detenindola con el

sujetador de portaobjetos (en este caso la muestra es la letra e), de
forma que la estructura a observar quede en elFig.
orificio
central
de la
4. En
esta
platina.
figura
se
observa
al
portaobjetos
con la muestra
(letra
e)
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colocado
y
sujetado
encima de la
platina.

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Fig. 5. Se
muestra aqu
la
muestra
ms
ampliada
(letra e).

Mueva la platina hasta centrar la muestra con la fuente de luz.

Puede ayudarse cerrando el diafragma.

Fig.
6.
Girando
el
tornillo
condensador
para
poder
mover
la
platina.

Subir la platina accionando el tornillo macromtrico y mirando la

preparacin desde fuera hasta alcanzar el tope superior. En ningn
caso tocar la preparacin con los objetivos.

Fig.
7.
Se
observa el giro
que se har
para realizar el
ajuste
macromtrico
y as poder
subir
la
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platina. 6

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Observe a travs del ocular la imagen y ajuste el enfoque con el

tornillo micromtrico hasta ver la imagen ntidamente.

Fig. 8. Girando
el micromtrico
para poder ver la
imagen
ntidamente.

Regule la cantidad de luz que incide sobre la muestra haciendo uso

del diafragma. Cuando se tiene muestras con buena coloracin
conviene abrir el diafragma, caso contrario cuando la muestra es
poco coloreada.

Fig. 9. Sealando
la perilla del
diafragma que se
mover
para
regular
la
cantidad de luz.

10 Para observar la preparacin a mayores aumentos cambiar de

objetivo con un simple giro del revlver.

Fig. 10. Girando

el revlver para
cambiar
el
objetivo y poder
ver
la
preparacin
a
mayores
aumentos.
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11 Las pequeas variaciones que se observen en el enfoque que se

producen al cambiar de objetivo se corrigen con el tornillo
micromtrico.

Fig. 11. Girando

el micromtrico
para poder ajustar
la nitidez que se
vari
en
el
aumento.

5 . R E S U LTA D O S
Muestra con espesor y color: Letra e.

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Fig. 12. Muestra papel peridico letra e

imagen 64x aumento.

Fig. 13. Muestra papel peridico letra e

imagen 160x aumento

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Fig. 14. Muestra papel peridico letra e

imagen 640x aumento.

Muestra fibrosa: Lana

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Fig. 15. Muestra fibrillas de lana

imagen 64x aumento

Fig. 15. Muestra fibrillas de lana

imagen 160x aumento

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Fig. 16. Muestra fibrillas de lana

imagen 640x aumento

6. DISCUSION
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Para el primer caso en la observacin de la letra e, lo que se esperaba ver a travs de
los lentes del microscopio era la imagen de esta letra de forma invertida y aumentada
segn lo ledo acerca de la formacin de la imagen en un microscopio(esto se debe a
que el objeto se halla fuera de la distancia focal y, al pasar la luz por l, se refracta y la
imagen que se forma es de mayor tamao, invertido y real), y al lograr observar esto se
cumpli por lo tanto se obtuvo el resultado esperado.
La lana no tena muy buena resolucin aumentada a 64 x (no se podan distinguir las
fibras de celulosa), pero donde pudimos apreciar claramente fue en el de 640x.

7 . C O N C LU S I O N E S
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En la primera muestra con espesor y color pudimos observar la letra ``e y tambin las
diversas lneas que atraviesan el papel y son propias de este ya que el papel est
compuesto por clulas vegetales muerta procesadas.
En el segundo caso en la muestra fibrosa se observ en el microscopio las fibras de lana
roja que al ser su color tan intenso y regulando la luz que pasa por el diafragma se
pudo contemplar al detalle sus fibras y las pequeas fibras que salen de ella y que no se
pueden contemplar con la fotografa tomada a la muestra.

8. CUESTIONARIO
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1. Cul es la diferencia entre el microscopio ptico

y uno electrnico?
Los principios fundamentales de la observacin con el microscopio electrnico son
similares a los del microscopio ptico; la diferencia principal es que las lentes
electromagnticas, en lugar de las lentes pticas, enfocan un haz de electrones de alta
velocidad en lugar de hacerlo con la luz visible.
Incluso con los microscopios mejorados y las tcnicas para teir clulas, los
microscopios pticos convencionales slo pueden distinguir los detalles ms gruesos de
muchas de las partes de la clula.
El poder de resolucin para el ojo de una persona adulta es de aproximadamente 100
m. El mejor microscopio ptico tiene un poder de resolucin de aproximadamente 0.2
m (200nm).En comparacin, algunos microscopios electrnicos tienen poder de
resolucin de tan slo 1 nm. Esto es posible ya que los electrones tienen longitudes de
onda muy cortas, del orden de aproximadamente 0.1 y 0.2 nm. Aunque es difcil
alcanzar esta resolucin con material biolgico, los investigadores pueden conseguirla
cuando examinan molculas aisladas, como protenas y ADN. Este alto grado de
resolucin permite amplificaciones de ms de un milln de veces comparadas con las
ampliaciones tpicas de no ms de 1500 a 2000 veces del microscopio ptico.
La imagen formada por el microscopio electrnico no es visible directamente. El propio
haz de electrones est formado por electrones cargados de energa que , debido a su
carga negativa, pueden enfocarse con electroimanes, igual que una imagen se enfoca
con las lentes del microscopio ptico.

2. Qu cuidados bsicos debe tenerse con un

microscopio?

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Normas bsicas para el cuidado del microscopio

Al ser el microscopio un aparato de precisin y, por lo tanto, delicado, es muy
conveniente asegurar un buen funcionamiento atendiendo siempre a las siguientes
normas:
1. Para transportar el microscopio deben utilizarse siempre las dos manos, sujetndolo
por el brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra.
2. Una vez colocado el microscopio en su sitio, no debe moverse hasta que finalice la
prctica. Cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover l y no el
microscopio.
3. Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
4. Nunca poner los dedos en las lentes del ocular ni del objetivo. Si se ensucian dichas
lentes se limpiarn con un pao suave de algodn, sin utilizar ningn disolvente.
5. No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en
cuyo caso la operacin debe realizarse lo ms rpidamente posible, para evitar la
entrada de polvo.
6. Asegurarse de que el portaobjetos est bien seco cuando va a ser colocado sobre la
platina.
7. Al enfocar, sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el
extremo del objetivo choque con la preparacin. Para ello acercaremos el objetivo a la
preparacin mirando lateralmente y luego, mirando ya a travs del ocular, enfocamos
alejando el objetivo.

Cuidados que requiere un microscopio

Un microscopio es una valiosa pieza del equipo de investigacin de un laboratorio.

Tambin es una buena herramienta de aprendizaje para usar en el hogar, que da a los
cientficos aficionados una vista de imgenes invisibles a simple vista. Como los
microscopios son instrumentos de precisin delicados, requieren una cuidadosa
manipulacin y limpieza suave. Debes realizar un mantenimiento regular del mismo
para garantizar el mximo rendimiento del instrumento, y evitar al mismo tiempo
procedimientos de visin descuidados que pueden conducir a daos en los componentes
y reparaciones costosas.

Manipulacin de un microscopio
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Los microscopios son ms pesados de lo que parece, as que siempre carga el
microscopio con una mano que d apoyo a su base y otra que agarre su brazo. Antes de
colocar el portaobjetos, baja la plataforma del microscopio y gira el lente objetivo de
menor potencia en su posicin. Cuando ests listo para ver el portaobjetos, utiliza slo
el nivel de luz requerido para proporcionar una visin detallada de tu muestra. El uso
continuo de una bombilla de microscopio a toda potencia puede apagar la bombilla u
ocasionar que la carcasa se ablande lentamente y se deforme por el calor de la bombilla.

Limpieza de las lentes

Utiliza papel especial para limpiar lentes en el microscopio. Nunca uses un pauelo de
papel, ya que puede rayar las lentes, y nunca las toques con los dedos. Tan pronto como
notes suciedad que se acumula en el papel para lentes, deschalo y utiliza un papel
nuevo. Utiliza varios papeles para limpiar una lente en lugar de contaminar o daar el
costoso componente por querer reciclar el papel ya sucio. Nunca soples sobre una lente
para eliminar el polvo de su superficie. Corres el riesgo de rociar el cristal con saliva, lo
que puede degradar la capacidad de imagen de la lente.

Trabajar con aceite de inmersin

El aceite de inmersin proporciona una imagen ms clara y detallada mediante la
reduccin de la refraccin de la luz que llega al objetivo de la lente de tu microscopio.
Sin embargo, si no eliminas completamente el aceite residual del microscopio despus
de ver la muestra, el resto del aceite puede fluir dentro de la carcasa del microscopio, y
causar daos a los engranajes, las sujeciones y la lente del condensador. Siempre limpia
la plataforma del microscopio inmediatamente despus de ver los portaobjetos, as como
cualquier otra parte que haya estado en contacto con el aceite. Cuando ests colocando
el portaobjetos, nunca gires una lente seca en la posicin de visin. Si el aceite de
inmersin se sube a una lente cncava seca, es muy difcil limpiar completamente el
objetivo.

Almacenamiento del microscopio

Cuando hayas terminado de usar el microscopio, regresa las lentes del objetivo a sus
cajas y coloca los tapones del microscopio de nuevo en sus tomas de lentes. Un
microscopio siempre se debe guardar en un espacio cerrado, como un armario, para
minimizar su exposicin al polvo y la suciedad. Si ests trabajando en un laboratorio
con equipos que produzcan vibraciones, guarda el microscopio bien lejos de esa
maquinaria. Siempre coloca la cubierta protectora del microscopio, incluso si se
almacena en un armario, ya que esto proporciona una barrera adicional contra el polvo y
los contaminantes.

Cmo transportar un microscopio

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Un microscopio es una pieza valiosa del equipamiento de un laboratorio que debe ser
manipulada con cuidado. Transportar un microscopio es fcil con estos simples
consejos.

Instrucciones
La preparacin es importante para trasladar un microscopio. Asegrate de que el camino
hacia el nuevo lugar est desobstruido y la zona donde se colocar est despejada. Si el
microscopio debe ser trasladado de una habitacin a otra, tmate un momento para
mantener las puertas abiertas.
Prepara el microscopio para el traslado. Si hay un portaobjetos debajo del
microscopio, qutalo y limpia las lentes con papel para lentes. Si el microscopio
est enchufado a una toma elctrica, desenchfalo y enrolla el cable.
Cuidadosamente coloca una mano en el brazo del microscopio. Lentamente
levntalo, y coloca tu otra mano en la base para sostenerlo.
Camina despacio y mantn el microscopio cerca de tu cuerpo cuando lo cargues
hacia su nuevo destino.
Apoya el microscopio con delicadeza en su nueva ubicacin. Si es necesario,
enchufa el cable a la toma elctrica ms cercana y con cuidado acomoda el cable
sobrante.
Tmate tu tiempo cuando levantes el microscopio. Estos pueden ser ms pesados
o livianos de lo que piensas.
El mantenimiento y almacenamiento adecuado protegen al microscopio del
polvo y la suciedad.

3. Qu es un colorante? Qu tipos de colorantes

existen?
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Son sustancias mediante las cuales se consigue colorear a los tejidos. Los colorantes son
normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en
los tejidos gracias a afinidades electro-qumicas. Se utilizan normalmente para teir a
las clulas y componentes tisulares que van a ser observados con el microscopio ptico
y por ello se realizan habitualmente sobre secciones de tejido, siendo las ms utilizadas
las secciones obtenidas a partir de inclusiones en parafina u obtenidas en el criostato.
Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales. Son molculas
que poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es
un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta
el color, denominado cromforo, y otro que posibilita la unin a elementos del tejido
denominado auxocromo. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se
denomina cromgeno.
Segn la naturaleza qumica del cromforo hay varios tipos de colorantes: nitrosos,
ozoicos, derivados de la antroquinona, derivados de la acridina, derivados de iminas
quinnicas, derivados de diferrilmetano y triferrilmetano, derivados del xanteno y
derivados de las talocianinas.
Segn la naturaleza qumica del radical auxocromo los colorantes se clasifican en:

Bsicos: son sales en las que la base aporta el color, mientras que la parte cida es
incolora. Tienen apetencia por sustancias cidas del tejido como el ADN o ciertos
componentes de la matriz extracelular como los glicosaminoglicanos. As, ponen de
manifiesto el ncleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser
muy abundante, as como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes cidos.
Ejemplos de colorantes bsicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de
metileno o la hematoxilina

cidos: son sales con el anin coloreado y la base incolora. Tienen apetencia por
sustancias bsicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular
y tambin por el colgeno de la matriz extracelular. Ejemplos de colorantes cidos son
la fucsina cida, verde rpido, naranja G o la eosina.

Neutros: poseen una porcin cida y otra bsica, ambas con capacidad para aportar
color. Por tanto un mismo colorante puede teir tanto las partes bsicas como las cidas
de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.

Indiferentes: realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad

qumica sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudn se disuelve
en los lpidos y por tanto teir a las gotas de lpidos, especialmente en los adipocitos.
En algunas ocasiones necesitamos resaltar elementos tisulares de manera especfica y
para ello usamos colorantes que tienen apetencia por dichas estructuras. Por ejemplo, la
tincin denominada azn contiene azocarmn y naranja-anilina-cido actico que tie
los ncleos de rojo y sobre todo destaca el conectivo intensamente teido de azul. Otra
tincin combinada es el tricrmio de Mallory que tie el colgeno de verde, las clulas
musculares de rojo.
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Cuando un colorante se une al tejido y refleja un color diferente al que tiene en solucin
se dice que ha ocurrido un fenmeno de metacromasia. Esto se debe a que las
propiedades de absorcin de la luz del colorante cambian al unirse a componentes
celulares. Por ejemplo, el azul de toluidina se vuelve prpura cuando se une a ciertos
grnulos de los mastocitos. Cuando el colorante unido al tejido tiene el mismo color que
en solucin se denomina ortocromasia.

4. Explique por qu una lmina montada con una

muestra bacteriana puede verse solo al objetivo
de inmersin, y cul es el fundamento tcnico de
emplear el aceite de inmersin.
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Esto debido a que el microscopio ptico nunca puede resolver detalles menores a 0,2
m (200 nm), la medida de una pequea bacteria. Entonces al ser el aumento de los
oculares por ejemplo de 16x le colocamos el lente objetivo de inmersin con aumento
de 100x obtenemos un aumento total de 1600x esto implica que la imagen de la bacteria
pequea la veamos a travs del microscopio con detalles a 320 m.
El ojo humano slo puede discriminar dos puntos separados por ms de 0,1 mm 100
micrmetros ( m o mm). En conclusin podramos distinguir algunas partes de la
bacteria solo al objetivo de inmersin.
El fundamento tcnico de emplear el aceite de inmersin es que este para microscopia
tiene aproximadamente el mismo ndice de refraccin que el vidrio. Mediante el aceite
de inmersin se elimina casi completamente la desviacin de los rayos de luz y se
aumenta considerablemente la eficacia de los objetivos de los microscopios.

9 . B I B L I O G RA F I A
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1.-MARA DOLORES ESCARABAJAL ARRIETA .Fundamentos de psicobiologa.

Captulo 6: uso del microscopio ptico .1 Ed. Delta publicaciones.66-69.
2.-BRUCE ALBERTS, DENNIS BRAY . Biologa Molecular de la Clula
(2008).Capitulo 1: Las clulas bajo el microscopio. 5ta. edicin .Ed. Mdica
Panamericana.8-9.
3.-LODISH H, DARNELL J., BERK A. ZIPURSKY L., MATSUDAIRA P. y
BALTIMORE D. Biologa Celular y Molecular. Captulo 5 Biomembranas y
arquitectura celular.5 Ed. Editorial Mdica Panamericana. 184-192.
4.-SOLOMON E, BERG, MARTIN D, Biologa, Parte 1 La organizacin de la vida .
2013 .9na edicin. 74-102.

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