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Universidade Federal de Gois

Faculdade de Farmcia

Determinao de Compostos Fenlicos Totais pelo


Mtodo de Folin-Denis em Ch Verde (Camellia
sinensis) comercial

Discente: Sabryne de Oliveira Souza


Docente: Dr. Virgnia Farias Alves
Turma: A01

Trabalho n 06 Como
exigncia da disciplina de Qumica e Bioqumica de Alimentos

Goinia, junho de 2015.


1. Introduo

O ch produzido a partir das folhas da planta Camellia sinensis (C. sinensis) ,


depois da gua, a bebida no alcolica mais consumida no mundo. Durante sculos,
o ch tem sido considerado pelos orientais como uma bebida saudvel, sendo
utilizado na China h aproximadamente 3.000 anos, sendo este pas o seu principal
produtor. A C. sinensis amplamente cultivada no sul da sia, incluindo China, ndia,
Japo, Tailndia, Sri Lanka e Indonsia (RIETVELD e WISEMAN, 2003; TANAKA e
KOUNO, 2003).
A partir das folhas da Camellia sinensis so produzidos os tipos de ch, que so
dividos em categorias dependendo do tipo de processo a que so submetidas (ASIA,
2010). Basicamente h trs tipos de chs tendo como nome cientfico Camelia
sinensis, que so mais consumidos mundialmente: ch verde (sem fermentao),
Oolong (parcialmente fermentado) e ch preto (totalmente fermentado) (LIMA et al.,
2004; MATSUBARA & RODRIGUEZ-AMAYA, 2006; BETTELHEIM et al., 1995;
FERRARA et al., 2001).
O ch verde tem como principal caracterstica suas folhas que no sofrem
fermentao. Aps a colheita, elas recebem uma vaporizao e depois vo para a
secagem. Dentro da categoria dos chs verdes, os japoneses ainda subdividem
conforme a composio do mix (folhas de primeira colheita, colheita de vero e
outono, folhas grandes, misturadas a talos, selecionadas, com gros grelhados). A
escolha uma questo de preferncia. De uma forma geral, o sabor levemente
amargo e o aroma sempre remete a natureza e frescor (ASIA, 2010).
O ch verde estimulante, adstringente, antioxidante, bactericida e diurtico.
Tem atividade anti-tumor reportada em estudos clnicos. Rico em flor, o ch verde
previne a queda de dentes. tambm til como cicatrizante, para combater cncer
do estmago e da pele, e para reforar o sistema imunolgico. O ch verde
utilizado para desordens estomacais, vmitos e diarria. A cafena, como agente
ativo, resulta na estimulao do SNC. O tanino tem efeito anti-diarrico (ODY, 1993),
proteo da parede do intestino e ataque a bactrias nocivas (O GLOBO, 1999).
Os constituintes mais importantes das folhas do ch de Camelia sinensis so
compostos fenlicos, em especial taninos (cido glico) e flavonides (quercetina,
miricetina, canferol e catequinas) (LIMA et al., 2004; MATSUBARA & RODRIGUEZAMAYA, 2006; BETTELHEIM et al., 1995; FERRARA et al., 2001).
Os taninos so distribudos em plantas, alimentos e bebidas (MAKKAR e
BECKER, 1998; SANTOS et al. 1997). So solveis em gua e em solventes
orgnicos polares, sendo capazes de precipitar protenas (HARTISH e KOLODZIEJ,
1997). Podem atuar como agentes de quelao, removendo as molculas de metal
do organismo e impedindo a sua absoro. Contudo, os cientistas ressalvam que,
como a maioria das pessoas recebe atravs da dieta alimentar uma dose de ferro
superior necessria, uma ou duas chvenas de ch por dia dificilmente resultaro
em ndices insuficientes de ferro no organismo (ALERT, 2009).
Existem vrias tcnicas para a determinao de taninos em vegetais, entre os
mtodos colorimtricos, o mtodo de Folin-Denis bem reconhecido e largamente
usado, mas no faz distino entre compostos fenlicos e outros materiais redutores
ou antioxidantes, como o cido ascrbico, formando precipitados que interferem na
leitura espectrofotomtrica (SCHOFIELD e PELL, 2001).
O objetivo desta prtica foi determinar a quantidade de taninos presentes em
ch verde atravs do mtodo de Folin-Denis.

2. Materiais e Mtodos
2

2.1. Materiais
2.1.1.Equipamentos

Balana analtica

Balo volumtrico

Bquer

Condensador

Espectrofotmetro

Pipetas

Suporte de tubo de ensaio

Tubos de ensaio

2.1.2.Reagentes

Reagente de Folin-Denis

Soluo saturada de carbonato de sdio

Soluo recm preparada de cido tnico

Reagente Folin-Denis

Adicionou-se 100 g de tungstato de sdio diidratado p.a, 20 g


de cido fosfomolbdico, 50 mL de cido fosfrico p.a.

concentrado em 750 mL de gua destilada


Colocou-se em refluxo durante 2 horas
Esfriou-se e diluiu-se para 1000 mL (o reagente foi protegido

da exposio luz)
Esta soluo foi preparada pelo monitor.

Soluo saturada de carbonato de sdio


Adicionou-se 25 g de carbonato de sdio anidro e 100 mL de
gua destilada, dissolveu-se a 70C e deixou-se esfriar

durante a noite
Adicionou-se alguns

cristais

de

carbonato

de

sdio

decaidratado p.a., deixou-se em repouso at cristalizao e

filtrou-se atravs de l de vidro


Soluo preparada pelo monitor

Soluo recm preparada de cido tnico


Dissolveu-se 50 mg de cido tnico p.a. com gua destilada
em balo volumtrico de 500 mL

2.2. Amostra (Ch Verde)

Esquentou-se em chapa eltrica 200 mL de gua destilada


em um bquer at 80C.

Pesou-se 1,5 g do ch verde em um bquer. Adicionou-se a


gua destilada. Manteve-se a infuso por 5 minutos, com
agitao peridica

Filtrou-se o ch verde (papel de filtro) em um balo


volumtrico de 200 mL

Esfriou-se o ch em banho de gelo e completou-se o volume


do balo com gua destilada para 200 mL.

2.3. Procedimento
2.3.1.Padro de cido tnico

Pipetou-se alquotas de 8,5 8,3 8,1 7,9 7,7 7,5 mL de

gua destilada em tubos de ensaio previamente numerados


Adicionou-se, respectivamente, 0,0 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 mL

da soluo de cido tnico nos tubos de ensaio


Adicionou-se 0,5 mL do reagente de Folin-Denis em cada tubo
Adicionou-se 1,0 mL da soluo de carbonato de sdio em cada

tubo. Agitou-se todos os tubos


Deixou-se em repouso por 30 minutos e leu-se a absorbncia a
760 nm.

2.3.2. Amostra

Transferiu-se 5 mL da amostra para um balo volumtrico de 50


mL e completou-se o volume com gua destilada. Agitou-se o

balo
Pipetou-se alquotas de 8,3 8,2 8,1 8,0 7,9 mL de gua
destilada em tubos de ensaio previamente numerados

Adicionou-se, respectivamente, 0,2 0,3 0,4 0,5 mL da

amostra nos tubos de ensaio


Adicionou-se 0,5 mL do reagente de Folin-Denis em cada tubo
4

Adicionou-se 1,0 mL da soluo de carbonato de sdio em cada

tubo. Agitou-se todos os tubos


Deixou-se em repouso por 30 minutos e leu-se a absorbncia a
760 nm.

3. Resultados
3.1.
Mtodo de Origin
3.1.1.

Padro de cido Tnico

Os valores para as absorbncias do contedo dos tubos de ensaio


encontram-se na tabela abaixo, relacionados com a quantidade de cido tnico
contida nas respectivas alquotas retiradas da soluo estoque.
Tubo
1
2
3
4
5

Alquota (mL)
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0

Absorbncia
0,139
0,241
0,328
0,394
0,469

Quantidade de cido tnico (mg)


0,02
0,04
0,06
0,08
0,10

A quantidade pesada de para soluo estoque foi de 50 mg. O clculo da


massa de cido tnico presente nas alquotas foi realizado da seguinte maneira:
500 mL soluo estoque ___________ 0,50 mg de cido tnico
0,2 mL (alquota tubo 01) ___________ XXXXXXXXXX

X = 0,02 mg de cido tnico


X = 0,04 mg de cido tnico
X = 0,06 mg de cido tnico
X = 0,08 mg de cido tnico
X = 0,10 mg de cido tnico
Utilizando o software Excel 2010 lanou-se os valores das concentraes de
cido tnico e das absorbncias para os eixos X e Y, respectivamente, obtendo-se a
curva padro a seguir:
5

0.5
0.45

f(x) = 4.07x + 0.07


R = 0.99

0.4
0.35
0.3
0.25

Linear ()

0.2
0.15
0.1
0.05
0
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.1 0.11

3.1.2.

Amostra
Aps leitura de absorbncia da amostra de ch verde a 760 nm,

obteve-se os valores apresentados na tabela a seguir:


Tubo
1
2
3
4

Volume da alquota de
amostra no tubo (mL)
0,2
0,3
0,4
0,5

Absorbncia (nm)
0,247
0,337
0,429
0,493

Tabela 2: Absorbncia da amostra de ch verde

Comparando os valores de absorbncia da soluo padro com os


valores da amostra, observa-se que a absorbncia da amostra de ch que
mais se aproxima do valor central da curva padro, a absorbncia do tubo
2, com 0,337 nm comparando-se a absorbncia de 0,328 nm do tubo 3 da
curva padro. Portanto, tomamos como melhor tubo, o tubo nmero 2 da
amostra de ch, utilizando este valor de absorbncia para efeito do clculo
da concentrao de taninos nesta amostra.
Ento, a partir da equao da reta:
Y =4,065 x +0,0703
6

X a concentrao de taninos existente na amostra e Y a melhor


absorbncia observada. Isolando X, e substituindo o valor de 0,337 nm em
Y, temos:
4,065 x=Y 0,0703

4,065 x=0,3370,0703
4,065 x=0,2667

X =0,0656 mg de tanino em0,3 mL de amostra

Ento, considerando a amostra de ch verde analisada, um saquinho,


que continha 1,6 g foi diludo em 200 mL e posteriormente em 50 mL, temos:
1,5 g

200 mL --------------------------------- C

5 mL

50 mL -------- B

0,3 mL ------- 0,0656 mg de


tanino
Por regra de trs simples, encontra-se A:
1,5 g ----- 200 mL
A

------ 5 mL

A = 0,0375 g
Encontra-se B:
50 mL ----- B
0,3 mL ----- 0,0656 mg de tanino
B = 10,93 mg
E encontra-se C:
1,5 g ---- 200 mL ------ C
0,0375 g ---- 5 mL ------ 10,93 mg
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C = 437,2 mg
1500 mg de ch ------ 100%
437,2mg

------ x

X = 29,15% de taninos

4. Discusso
Portanto, a amostra de ch verde analisada contm 29,15% de taninos. Simes
et. al (2004), em estudo para determinao de taninos em folhas no fermentadas
da Camellia sinensis L., as folhas do ch verde, encontrou valores entre 10 a 24%
de taninos. J Schimitz (2005) encontrou em seu experimento, que as folhas do ch
verde continham, cerca de 30% de compostos fenlicos, que contribuem para o
sabor, o aroma e a colorao dos vegetais em geral, sendo que o tanino um
composto fenlico. E Lima et. al (2009), obteve valores de taninos para o ch verde
entre 13% e 69%. Nota-se que, o valor encontrado neste experimento est de
acordo com os citados em literatura, principalmente o valor verificado por Schimitz
(2005), j que este encontrou variaes nos teores de at 30% de taninos, um valor
muito prximo de 29,15% que foi o encontrado no experimento.
A maioria dos compostos fenlicos no encontrada no estado livre na natureza,
mas sob forma de steres ou de heterosdeos sendo, portanto, solveis em gua e
em solventes orgnicos polares (MELLO e SANTOS, 2001). Por serem fenlicos, os
taninos so muito reativos quimicamente, formam pontes de hidrognio, intra e
intermoleculares. Um mol de taninos pode ligar-se a doze moles de protenas;
fundamentando-se nessa propriedade pode-se identificar taninos por teste de
precipitao de gelatinas, por exemplo (MELLO e SANTOS, 2001; CHUNG1 et. al,
1998; BIANCO e SAVOLAINEN, 1997; VICKERY e VICKERY, 1981). Estes
compostos so facilmente oxidveis, tanto atravs de enzimas vegetais especficas
quanto por influncia de metais, como cloreto frrico, o que ocasiona o
escurecimento de suas solues (MELLO e SANTOS, 2001).
Como o mtodo de Folin-Denis no faz distino entre compostos fenlicos e
outros materiais redutores ou antioxidantes, pode-se afirmar que o valor encontrado
uma estimativa da quantidade de taninos presentes na amostra de ch verde, o
que pode justificar ainda as diferenas dos valores encontrados em literatura. Os
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taninos vegetais tm sido quantificados por diversos tipos de ensaios, como


precipitao de metais ou protenas e por mtodos colorimtricos, sendo esses
ltimos mais comuns. Os mtodos mais apropriados para determinao de taninos
so os ensaios com precipitao de protenas (HAGERMAN e BUTLER, 1989;
HAGERMAN et. al, 1997). Alguns ensaios colorimtricos so usados para quantificar
grupos de taninos especficos, muito embora estes mtodos sejam amplamente
usados para analisar taninos de uma maneira geral (MONDAL et. al, 2001;
MUELLER-HARVEY, 2001), talvez por isto, haja ainda tais variaes encontradas
pelos autores e neste experimento.
As variaes dos teores encontrados para fenis totais e taninos, em literatura e
no experimento, no so fixos, o que foi observado. Como as plantas, que apesar de
imveis so organismos dinmicos, o esperado que o acmulo de polifenis varie
ao longo das estaes do ano, pois o contedo polifenlico dependente de fatores
intrnsecos (genticos) e extrnsecos - ambientais (FRATIANNI et al. 2007) variando
diante de diversas situaes, como o tipo de rgo da planta (FALLEH et al. 2008),
fase do desenvolvimento vegetal (SCHWEITZER et al. 2008), local de cultivo ou
ocorrncia e entre as diferentes estaes do ano (BUSSOTTI et al. 1998, MA et al.
2003, BROOKS & FEENY 2004). As variaes do contedo polifenlico so
definidas por base gentica que fortemente afetada pelas condies seja do
ambiente natural ou de cultivo (CONDE et al. 2008). Estas justificativas servem
ainda, para explicar e confirmar as variaes existentes em cada pesquisa
encontrada por literatura e no experimento realizado.
Os taninos so considerados nutricionalmente indesejveis porque precipitam
protenas, inibem enzimas digestivas e afetam a utilizao de vitaminas e minerais
podendo, ainda, em alta concentrao, desenvolver cncer de bochecha e esfago
(CHUNG1 et. al, 1998; CHUNG2 et. al, 1998; CASTRO et. al, 1999; SINGH et. al,
2001) e so responsveis pela adstringncia de muitos frutos e plantas em geral
(AERTS et. al, 1999). Apesar de apresentar desvantagens, um alimento rico em
taninos considerado um alimento funcional, por isso recomenda-se o consumo de
ch verde: vrias doenas degenerativas como cncer, esclerose mltipla,
arteroesclerose e o prprio processo de envelhecimento esto associados a altas
concentraes intercelulares de radicais livres, estudos recentes mostram que vrios
taninos atuam como captadores de radicais, os quais interceptam o oxignio ativo

formando radicais estveis (MELLO e SANTOS, 2001), ou seja, atuam como


antioxidantes naturais.
Alm disso, por via interna exercem efeito antidiarrico e anti-sptico; por via
externa impermeabilizam as camadas mais expostas da pele e mucosas,
protegendo assim as camadas subjacentes. Ao precipitar protenas, os taninos
propiciam um efeito antimicrobiano e antifngico. Ademais, os taninos so
hemostticos e, como precipitam alcalides, podem servir de antdoto em casos de
intoxicaes (BRUNETON, 1991). Em processos de cura de feridas, queimaduras e
inflamaes, os taninos auxiliam formando uma camada protetora (complexo taninoprotena e/ou polissacardeo) sobre tecidos epiteliais lesionados, podendo, logo
abaixo dessa camada, o processo curativo ocorrer naturalmente (MELLO e
SANTOS, 2001).

5. Concluso
Pode-se concluir que o mtodo de Folin-Denis foi efetivo para a extrao e
taninos totais em ch verde (Camellia sinensis), devido ao valor encontrado no
experimento estar compreendido nas faixas encontradas para essa determinao
em literatura. Apesar das diferenas apresentadas pelos autores, pode-se dizer que
o valor aceitavl, j que a prpria tcnica utilizada apresenta desvantagens e que
tambm, as tcnicas utilizadas pelos autores citados, pode no ser a mesma
utilizada neste experimento, sendo outras mais especficas, fornecendo, portanto,
valores mais especficos ou para diferentes formas de taninos.
Outro ponto observado foi que condies ambientais que a planta estava sujeita
tambm interferem na quantificao destes compostos, portanto, para conferir total
eficincia para tal comparao, seria necessrio padronizar as amostra analisadas
quanto, por exemplo, idade, poca de colheita, condies de armazenamento, etc.,
visto que os taninos so muito reativos e isto afetar no valor final destes.
Esta aula foi de grande valia ao conhecimento de um profissional farmacutico,
visto que, pode se aprender acerca de um composto considerado nutricional, mas
que em determinadas condies se torna um fator antinutricional.
O resultado est dentro dos valores esperados e a experincia adquirida foi de
suma valia. Uma maior ateno por parte dos alunos, assim como um maior
interesse acarretaria em resultados ainda melhores e um aprendizado mais slido.

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