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BIOFSICA CELULAR 2015/16

Professores: Rosa Maria Santos e Lus Martinho do Rosrio

TEMAS PRINCIPAIS
1. Difuso e permeabilidade em membranas (LMR)
2. Transporte activo: bombas e trocadores (LMR)
3. Transduo de sinais (LMR)
4. Canais inicos (RMS)
5. Electrognese da excitabilidade celular e propagao de sinais elctricos (RMS)

Membrana plasmtica
Clula

Organelos
Citoplasma

Citoesqueleto
Citossol

Membrana plasmtica
- Compartimentalizao
- Transporte (transportadores)
- Reconhecimento (receptores)
- Actividade enzimtica (enzimas)
- Excitabilidade (canais inicos, etc)
- Exocitose, endocitose

TEMA 1: Difuso e permeabilidade


em membranas

Fluxo num meio homogneo


Primeira lei de difuso de Fick e coeficiente de difuso
Distncia mdia percorrida por difuso e lapso de tempo difusional
Difuso atravs de uma barreira / bicamada lipdica
Coeficiente de permeabilidade membranar e coeficiente de partio
Difuso facilitada e transportadores de glicose
Difuso facilitada de ies e ionforos

Bibliografia recomendada para o TEMA 1


Sperelakis (Caps. 1, 5 e 11)
Hille (Cap. 11)
Atkins (Cap. 24)

Fontes complementares* (no mencionadas na bibliografia geral recomendada)


Eckert (Cap. 4)
Vander (Cap. 6)
Gil Ferreira (Caps. 3 e 5)
*Human Physiology - The Mechanisms of Body Function (A.J. Vander, J.H. Sherman,
D.S. Luciano - McGraw-Hill, Inc.)
*The Biophysical Basis of Excitability (H. Gil Ferreira, M.W. Marshall - Cambridge University Press)

FLUXO DE PARTCULAS NUM MEIO HOMOGNEO


Fluxo (J) : quantidade de matria que fli por unidade de rea
por unidade de tempo

Experimentalmente: J prop. dN/dz


N = n de partculas por unidade de volume

dN/dz < 0, J > 0


J = -D dN/dz
Primeira Lei de Difuso de Fick
Gradiente de concentrao
(dN/dz)

D = constante ou coeficiente de difuso

Em fase condensada (soluo):


J = -D dC/dz

C = concentrao do soluto
[J] = mole.cm-2.s-1
[D] = cm2.s-1
BC/#01

ASPECTOS TEMPORAIS DA DIFUSO EM SOLUO LIVRE

Equao de difuso
(segunda lei de difuso de Fick)

gua

camada de acar
(t = 0)

Problema unidimensional (x)


C/t = D 2C/x2
C = C(x,t)

Dt = 0.05
CA/n0

C = n0/A (Dt)-1/2 exp(-x2/4Dt)

0.1
0.3
1.0

A = rea da base do vaso


n0 = nmero total de molculas de
acar

BC/#02

DISTNCIA MDIA PERCORRIDA POR DIFUSO


(problema unidireccional)
Terminal nervoso

fenda
sinptica

Difuso nos dois sentidos a partir


da origem
<x>20 nm

D (ACh) = 7.6x10-6 cm2.s-1

<x2> 2Dt

t 0.3 s

ACh

<x2> = distncia ao quadrado mdia

Clula muscular

t =

tecido

D (gli) = 6.7x10-6 cm2.s-1


t 70 ms

glicose

percorrida por difuso


lapso de tempo difusional

t <x>2/2D
<x> = distncia mdia percorrida
por difuso

capilar

glicose

t 21 horas !!

neurnio

glicose

<x> 1 cm

BC/#03

Exerccios
1 verdadeira ou falsa a seguinte afirmao? Porqu?
O tempo mdio que uma molcula demora a percorrer por difuso
simples uma distncia de 30 m trs vezes superior ao que
demora a percorrer 10 m
2 Calcule o lapso de tempo difusional para a glicose ao longo de um
internodo (segmento entre nodos de Ranvier consecutivos) num
axnio mielinizado. Como ocorre a distribuio de transportadores
de glicose nestes axnios e qual a possvel consequncia desta
distribuio? Formule uma hiptese.

BC/Q1

Clculo para molculas


com D = 5x10-6 cm2.s-1

A difuso simples um processo:


rpido escala microscpica
lento escala macroscpica
Mistura por conveco
Fluxo sanguneo distncia
Irrigao capilar de tecidos
Tamanho das clulas

Recuperao de um episdio isqumico


no se efectua por difuso de O2 e
nutrientes

BC/#4

DIFUSO ATRAVS DE UMA BARREIRA PERMEVEL


AO SOLUTO E SOLVENTE

C1
Perfil linear de variao da concentrao
do soluto na barreira
dC/dz = cte
C2
Barreira
(ex: papel de filtro)

J = -D C/ = D/ (C1 C2)
P = D/: constante ou coeficiente de permeabilidade
[P] = cm.s-1

BC/#5

Exerccios
1 Derive formalmente a equao de fluxo em BC/#5
Sugesto: aplique condies-fronteira variao linear da concentrao

BC/Q2

DIFUSO SIMPLES ATRAVS DE UMA MEMBRANA


(BICAMADA LIPDICA)

(1) Partio entre a fase aquosa (comp.1) e lipdica

C1

K = k1/k-1: coeficiente de partio

k1

k1

(3)
k-1

(1)
k-1

(2) Difuso atravs da membrana


Dm: coeficiente de difuso membranar

C2
(2)

(3) Partio entre a fase lipdica e aquosa (comp.2)

Considerando (2) como o passo determinante,

J = DmK/ (C1 C2)


Pm = DmK/ : coeficiente de permeabilidade
da membrana
[Pm] = cm.s-1

BC/#6

RELAO ENTRE A PERMEABILIDADE DA MEMBRANA


E O COEFICIENTE DE PARTIO
Pm = DmK/
Pm radioistopos
K e Dm simulao utilizando outros lpidos
K = (conc. soluto em lpido)/(conc. soluto em gua)

microscopia electrnica ou medio da capacidade


elctrica da membrana

Equao de Stokes-Einstein

Dm = kT/6a
viscosidade raio da partcula

Glicerol C3H8O3 MW=92


muito polar (=42.5)
Uretano NH2COOC2H5 MW=89
pouco polar (=3.2)

hidratada

BC/#7

Exerccios
1 Proponha um mtodo para determinar experimentalmente o
coeficiente de partio
2 Demonstre que o influxo inicial de uma molcula que atravessa a
membrana celular por difuso simples directamente proporcional
sua concentrao extracelular, assumindo que esta se mantm
constante ao longo da experincia

Co > Ci
Ci

Co = 0
influxo

J
Ci = C0

(influxo
inicial)

Ci
Co
Tempo
BC/Q3

TRANSPORTE MEDIADO
Transportadores
Molculas ou ies transportados
Factores que determinam a magnitude do fluxo:
- Concentrao, afinidade
- Nmero de transportadores
- Velocidade da alterao conformacional

difuso simples

Transporte mediado

transporte
mediado

Difuso facilitada: transporte de acordo com

o gradiente electroqumico
Transporte activo: transporte contra o
gradiente electroqumico (fonte de energia)

BC/#8

DIFUSO FACILITADA
Transportadores de monossacardeos,
aminocidos, cidos gordos, gua,
ies, etc

Transportadores de glicose
[glicose]i < [glicose]o (metabolismo)
Substratos (GLUT-1): hexoses (ex:

Isoformas: GLUT-1, 2, 3, 4, 5, etc

D-glicose, D-manose, D-galactose);


pentoses (ex: D-xilose, L-arabinose,
D-ribose)

Diferem em (i) km (afinidade); (ii) Vmax


(capacidade); (iii) regulao

No-substratos: L-glicose, L-galactose,


L-xilose

Inibidores: competitivos (substratos);


no-competitivos (citocalasina B,
floretina)

GLUT-1: tr. basal (crebro, eritrcitos, etc)


GLUT-2: tr. vs. homeostasia (hepatcitos,
clula )

GLUT-4: tr. vs. homeostasia, dep. insulina


(adipcitos, msculo esqueltico)

BC/#9

REGULAO DE GLUT-4 POR INSULINA

Regulao por recrutamento de


transportadores para a membrana
Rpida (ocorre em minutos)

No requer sntese de novos transportadores


Essencial para a homeostasia da glicose

Artigos de reviso: Watson & Pessin (2006) Trends Biochem. Sci. 31: 215-222
Chang et al. (2004) Mol. Medicine 10: 7-12

BC/#10

TRANSLOCAO DE GLUT-4 E ACTIVAO DO RECEPTOR DE INSULINA

via TC10

Adipcito
Myc: an engineered epitope tag
EGFP: enhanced green fluorescent protein

via PPIn 3-cinase

IRS: insulin receptor substrate


PDK1: phosphoinositide-dependent kinase 1

Watson & Pessin (2006) Bridging the gap between insulin signaling and GLUT4 translocation.
Trends Biochem. Sci. 31: 215-222

BC/#11

DIFUSO FACILITADA DE IES


Para a bicamada lipdica
P = DK/

D = uRT/zF
u = mobilidade do io
(m2.s-1.V-1)

K e u podem ser aumentados:

s = uE
velocidade do io
em soluo

u0eK0
(H2O) 80 >> (lpidos) 2-5

fisiologicamente (canais inicos nativos)


artificialmente (ionforos)
campo elctrico

Ionforos difusveis
Ex: valinomicina
(antibitico macrocclico polipeptdico)

K+

Cavidade hidroflica
Exterior hidrofbico

Altamente selectivo para K+


(K+ >> Na+ > H+)

Outros exemplos: desacopladores


mitocondriais (FCCP, DNP)

BC/#12

IONFOROS-CANAIS
cadeias laterais
de AAs (hidrofbicas)

Gramicidina A
Bacillus brevis
ies e H2O

Mon.1

Poro: 2 hemicanais, ligados topo


a topo por ligaes H
Hemicanal: 15 AAs neutros

Mon.2

poro hidroflico
( 4A)

Sequncia de selectividade
(solues simtricas):

Outros ionforos-canais:

H+ > Cs+ Rb+ > NH4+ > Tl+ > Na+ > Li+
9.31

2.06

2.07

1.96

1.98

1.33

1.03

Nistatina (caties monovalentes e anies)


Alameticina (K+, Na+ e Cl-)

D (x10-5 cm2/s)

Selectivo para caties


= 100 mV

fluxo de ~ 4x106 ies/s

BC/#13

Tema de suporte

Polaridade da gua e de
biomolculas

gua como solvente biolgico


Polaridade e momento dipolar permanente. Unidades
Polarizao do dielctrico por aco de um campo elctrico: polarizao
por orientao e induo
Momento dipolar induzido e polarizabilidade
Permissividade do meio e constante dielctrica
Relao entre momento dipolar e constante dielctrica
Constante dielctrica da gua e dissoluo de sais e molculas polares
Bibliografia recomendada para este tema
Sperelakis (Caps. 1, 3 e 4)
Hille (Caps. 1 e 10)

Fontes complementares* (no mencionadas na bibliografia geral recomendada)


Eckert (Caps. 2 e 4)
Atkins (Caps. 22 e 24)
Moore (Caps. 10 e 15)
*Animal Physiology: Mechanisms and Adaptations (R. Eckert, D. Randall e G. Augustine
- W.H. Freeman)
*Physical Chemistry (P.W. Atkins - Oxford University Press)
*Physical Chemistry (W.J. Moore - Longman Group limited)

Citossol
- Solubilizao / acumulao de ies, molculas polares
- Gradientes ( exterior, organelos)
- Papel central da gua

Aglomerados lbeis

+
H
2Ligaes de hidrognio

O
H
+

(D)

[D = debye]

Momento dipolar
permanente,
-q

d
= q.d

+q

e
d = 0.1 nm
qe = 4.8x10-10 esu
= 4.8x10-18 esu.cm
1 D = 10-18 esu.cm
= 4.8 D

H2O
CH3OH
NH3
HCl
CHCl3
HI
CCl4

1.85
1.71
1.47
1.08
1.01
0.42
0

Questes
1 Qual a razo por que o momento dipolar do tetracloreto de carbono
nulo?
2 Por que razo que os momentos dipolares dos cidos clordrico
e ioddrico so to diferentes?

E>0
Cl-

E=0

Na+

ClDielctrico

+
Polarizao do dielctrico
por aco de um campo
elctrico (par Na+/Cl-)

P
+P

Na+

-P

P: Polarizao do dielctrico
(momento dipolar mdio por
unidade de volume)

Reduz a fora do campo E em


qualquer ponto do dielctrico

Lei de Coulomb
Clq-

Na+
q+

Constante dielctrica

Vcuo:

Soluo:

(ou permissividade relativa)

r = /0
>0

= permissividade do vcuo
= permissividade do meio
0

Lei de Coulomb para o par Na+/Clnum dielctrico


F = q+q-/(4 rd2)
0

= permissividade do vcuo
r = constante dielctrica
0

reflecte a atenuao da intensidade de E


causada pela polarizao por orientao ( perm)
e pela polarizao induzida ( ind)
r

ind = .E

= polarizabilidade da molcula

perm (D)

Vcuo
Ar
Benzeno
CHCl3
NH3
Etanol
CH3OH

0
1.01
1.47
1.69
1.71

1
1.00054
2.28
4.8
16.9
24.3
32.6

H2O

1.85

78.5

Questes

1 - Por que razo que molculas simtricas (ex: benzeno) tm uma


constante dielctrica diferente de zero?
Exerccios
1 Proponha um mtodo para determinar experimentalmente a constante
dielctrica

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