Você está na página 1de 5

Comunicado 212

Tcnico
ISSN 1679-6535
Maio, 2015
Fortaleza, CE

Foto: Celli Rodrigues Muniz

Preparao de Nanocpsulas
Polimricas para Visualizao
em Microscopia Eletrnica
de Varredura

Kirley Marques Canuto1


Nyra de Oliveira Frederico Pinto2
Celli Rodrigues Muniz3
Henriette Monteiro Cordeiro de Azeredo4

Introduo
Nanocpsulas polimricas so sistemas carreadores
de ingredientes ativos, slidos ou lquidos, que
apresentam dimetro inferior a 1 m, compostos
de um ncleo oleoso revestido por uma parede
polimrica ultrafina com elevada capacidade de
carga (Figura 1) (BECK et al., 2011; SURASSMO et
al., 2010). Desenvolvidos a partir de formulaes
cujas cpsulas se encontram em suspenso
coloidal, os carreadores nanoencapsulados
so estabilizados por agentes tensoativos de
natureza lipoflica ou hidroflica, sendo sua parede
composta por materiais polimricos biocompatveis
e biodegradveis que, conjuntamente, devem
garantir a formao do sistema de entrega do
componente ativo (LARA, 2008).

Ncleo oleoso

Parede
polimrica

Figura 1. Representao esquemtica de nanocpsulas


polimricas.
Fonte: Adaptado de Nanomedicina, 2014.

Farmacutico, D.Sc. em Qumica Orgnica, pesquisador da Embrapa Agroindstria Tropical, Fortaleza, CE,
kirley.canuto@embrapa.br
2
Engenheira de alimentos, M.Sc. em Engenharia Qumica pela Universidade Federal do Cear, Fortaleza, CE,
nnayrapinto@gmail.com
3
Biloga, D.Sc. em Biotecnologia, analista da Embrapa Agroindstria Tropical, Fortaleza, CE, celli.muniz@embrapa.br
4
Engenheira de alimentos, D.Sc. em Tecnologia de Alimentos, pesquisadora da Embrapa Agroindstria Tropical,
Fortaleza, CE, henriette.azeredo@embrapa.br

Preparao de Nanocpsulas Polimricas para Visualizao em Microscopia Eletrnica de Varredura

Utilizada principalmente como veculo para


frmacos lipoflicos, a nanoencapsulao uma
tcnica que tem sido empregada para melhorar
as caractersticas de ingredientes ativos quanto
solubilidade em gua, forma de armazenamento
e estabilidade trmica, com possibilidade de
liberao controlada em concentraes reduzidas
(HABIB et al., 2012; FLORES et al., 2011). Essas
caractersticas so conferidas devido ao seu
tamanho submicromtrico, sendo a distribuio de
tamanho um fator fundamental para garantir a sua
qualidade nanotecnolgica (BECK et al., 2011).
A microscopia eletrnica de varredura (MEV)
uma importante ferramenta na caracterizao
morfolgica das nanocpsulas, pois possibilita
avaliar, alm da forma e da superfcie das cpsulas
geradas, o tamanho e a sua distribuio,
permitindo aumentos acima de 50.000 vezes e
imagens tridimensionais de alta resoluo
(>1 nm), o que torna essa tcnica bastante
verstil (DOMINGUES et al., 2008; DEDAVID et
al., 2007).
A caracterizao morfolgica das nanocpsulas,
porm, pode ser comprometida devido sua
natureza coloidal e presena dos constituintes
que compem suas formulaes, tornando-as
aglomeradas e agrupadas, quando visualizadas
no MEV, impedindo a observao individualizada
dessas nanoestruturas. Faz-se necessria,
portanto, preparao prvia das amostras a fim
de que seja possvel uma visualizao eficiente.
Dessa forma, prope-se uma metodologia
adaptada de Youm et al. (2011), descrita
abaixo, que visa recuperao e separao das
nanocpsulas obtidas, mediante o uso de uma
etapa de ultracentrifugao, que as separa do
material em suspenso coloidal, cujo componente
principal um tensoativo. Para isso, foram
empregadas nesta metodologia nanocpsulas
polimricas em suspenso, produzidas utilizando-se
policaprolactona como polmero de revestimento
e um tensoativo do tipo no inico como agente
estabilizante (PINTO et al., 2013).

Recuperao das nanocpsulas


polimricas para visualizao em
MEV
Para a recuperao das nanocpsulas, cerca de
35 mL da suspenso coloidal foram transferidos

para um tubo Falcon com tampa (50 mL). O tubo


fechado contendo a amostra foi ento levado
ultracentrfuga (Eppendorf, modelo 5810R) com
programao de velocidade e temperatura de
12.000 rpm a 5 C, respectivamente, durante 30
minutos. Aps o primeiro ciclo de centrifugao, o
sobrenadante foi descartado, e o tubo, completado
com gua deionizada em volume aproximado de
35 mL. O tubo fechado foi agitado manualmente
para facilitar a retirada de tensoativo residual. Esse
ciclo foi repetido por mais uma vez acompanhado
de uma terceira centrifugao. O processo de
recuperao foi finalizado com o ltimo descarte
de sobrenadante e a obteno das nanocpsulas
concentradas (Figura 2). Uma gota da amostra
obtida foi retirada com o auxlio de uma pipeta
de pasteur e diluda com gua deionizada em
um balo volumtrico de 50 mL. Gotas das
nanocpsulas diludas foram ento depositadas
sobre stubs (porta-amostras que entram no MEV),
que foram submetidos secagem em temperatura
ambiente (~25 C) sob abrigo de luz e vento.
Aps a secagem, as gotas depositadas formaram
uma pelcula que, em seguida, foi submetida
ao recobrimento metlico para visualizao em
MEV.
Para efeito de comparao, amostras da suspenso
de nanocpsulas no recuperadas tambm foram
preparadas para visualizao em MEV. Gotas da
suspenso de nanocpsulas (0,5 L) diluda em
gua deionizada (50 mL) foram depositadas sobre
os porta-amostras, submetidas secagem em
temperatura ambiente (~25 C), sob abrigo de
luz e vento e recobertas com o material metlico.
Uma segunda amostra consistiu no gotejamento da
suspenso de nanocpsulas no diludas, seguindo
os mesmos procedimentos para realizao da
anlise.

Microscopia eletrnica de varredura


A anlise morfolgica foi realizada em instrumento
de MEV Zeiss DSM, modelo 940A. A amostra
seca foi recoberta com uma camada de platina
de 60 nm de espessura em evaporadora EMS
e observada a uma voltagem de acelerao de
15 kV. As fotomicrografias foram registradas
com representatividade da rea total da amostra
depositada no stub e aumentos de imagens de
1.000 a 20.000 vezes.

Preparao de Nanocpsulas Polimricas para Visualizao em Microscopia Eletrnica de Varredura

Suspenso de
nanocpsulas
(35 mL)

1 Centrifugao

1 Descarte do
sobrenadante

Adio de gua
deionizada/agitao
manual

2 Centrifugao

2 Descarte do
sobrenadante

Adio de gua
deionizada/agitao
manual

3 Centrifugao

3 Descarte do
sobrenadante

Nanocpsulas
concentradas

Figura 2. Fluxograma do processo de recuperao de nanocpsulas em suspenso coloidal.

As imagens referentes s amostras de nanocpsulas


no recuperadas e no submetidas metodologia
aqui descrita esto mostradas na Figura 3 a, b, c, d.
Nessas imagens, observa-se a compactao e
agregao do material, impossibilitando a perfeita
caracterizao microscpica das amostras. A
formao de aglomerado frequentemente
evidenciada em imagens obtidas por tcnicas de
microscopia de alta resoluo em suspenses
coloidais de nanocpsulas (HABIB et al., 2012;
SURASSMO et al., 2010; CHOI et al., 2009), sendo
particularmente difcil de separ-las para visualizao
em microscopia.
Por outro lado, a lavagem da suspenso de
nanocpsulas seguida do processo de separao

por ultracentrifugao permitiu sua caracterizao


morfolgica efetiva. Por meio das fotomicrografias
da populao de nanocpsulas recuperadas por
ultracentrifugao (Figura 3 e, f, g, h), foi possvel
a visualizao, em escala nanomtrica, de cpsulas
esfricas bem definidas, individualizadas e
homogneas. As nanocpsulas mantiveram-se mais
separadas e menos agregadas, podendo-se perceber,
assim, detalhes de suas estruturas, como, por
exemplo, a ausncia de fissuras na superfcie das
partculas, indicando a formao de filme contnuo
na parede externa das cpsulas. Foi possvel
observar tambm que as partculas apresentaram
dimetros abaixo de 500 nm (Figura 3h), dentro
da faixa caracterstica de sistemas nanocapsulados
(GOGOTSI, 2006).

Preparao de Nanocpsulas Polimricas para Visualizao em Microscopia Eletrnica de Varredura

Fotos: Celli Rodrigues Muniz

Figura 3. Nanocpsulas em suspenso concentrada (a, b); diludas (c, d) e recuperadas por ultracentrifugao (e, f, g, h). As
fotomicrografias foram obtidas por meio de MEV com aumento de 2.000x (a, c, e), 5.000x (b, d, f), 10.000x (g) e 20.000x (h).

Preparao de Nanocpsulas Polimricas para Visualizao em Microscopia Eletrnica de Varredura

Com base nas imagens obtidas, pode-se concluir


que a metodologia aqui sugerida permite a
visualizao individualizada de nanocpsulas
polimricas em microscopia eletrnica de
varredura, sob condies de tima resoluo, com
visualizao das nanocpsulas individualizadas e
menos agregadas. Outras metodologias existentes,
que procedem visualizao de nanocpsulas sem
o preparo aqui descrito, resultaram em imagens de
menor qualidade e sem definio das estruturas.
Dessa forma, a metodologia empregada permite a
obteno de imagens de MEV de boa qualidade de
suspenses de nanocpsulas contendo tensoativo,
assegurando uma caracterizao morfolgica
adequada para esse tipo de material.

Referncias
BECK, R.; GUTERRES, S.; POHLMANN, A. (Ed.). Nanocosmetics
and nanomedicines: new approaches for skin care. Berlin: Springer,
2011. p. 369.
CHOI, M-J.; SOOTTITANTAWAT, A.; NUCHUCHUA, O.;
MIN, S-G.; RUKTANONCHAI, U. Physical and light oxidative
properties of eugenol encapsulated by molecular inclusion and
emulsion-diffusion method. Food Research International, v. 42,
p. 148-156, 2009.
DEDAVID, B. A.; GOMES, C. I.; MACHADO, G. Microscopia
eletrnica de varredura: aplicaes e preparao de amostras
materiais polimricos, metlicos e semicondutores. Porto
Alegre: EDIPUCRS, 2007. p. 60.
DOMINGUES, G. S.; GUTERRES, S. S.; BECK, R. C. R.;
POHLMANN, A. F. Micropartculas nanorrevestidas contendo
um frmaco modelo hidrofbico: preparao em etapa nica e

Comunicado
Tcnico, 212

Exemplares desta edio podem ser adquiridos na:


Embrapa Agroindstria Tropical
Endereo: Rua Dra. Sara Mesquita 2270, Pici,
CEP 60511-110 Fortaleza, CE
Fone: (0xx85) 3391-7100
Fax: (0xx85) 3391-7109 / 3391-7141
E-mail: www.embrapa.br/fale-conosco
1 edio (2015): disponibilizada on-line no
formato PDF
a

caracterizao biofarmacutica. Qumica Nova, v. 31, p. 19661972, 2008.


GOGOTSI, Y. Nanomaterials Handbook. Boca Raton: Taylor &
Francis, 2006.
FLORES, F. C.; RIBEIRO, R. F.; OURIQUE, A. F.; ROLIM, C. M.
B.; SILVA, C. B.; POHLMANN, A. R.; BECK, C. R.; GUTERRES,
S. S. Nanostructured systems containing an essential oil:
protection against volatilization. Qumica Nova, v. 34, p. 968972, 2011.
HABIB, S.M; AMR, A.S.; HAMADNEH, I.M. Nanoencapsulation
of Alpha-linolenic Acid with Modified Emulsion Diffusion
Method. Journal of the American Oil Chemists Society, v. 89,
p. 695-703, 2012.
LARA, V. C. D. Desenvolvimento de nanocpsulas contendo
cido retinico para tratamento tpico da acne. 2008.
Dissertao (Mestrado em Cincias Farmacuticas) Faculdade
de Farmcia, Universidade Federal de Minas Gerais, Belo
Horizonte.
NANOMEDICINA. Farmacologia. Disponvel em: <http://
nanomedicina.webnode.pt/nanotecnologia-e-medicina/
farmacologia/>. Acesso em: 15 mar. 2014.
PINTO, N. O. F.; AZEREDO, H. M. C.; RODRIGUES, T. H. S.;
CANUTO, K. M. Desenvolvimento de nanoemulso do leo
essencial de Lippia sidoides. In: CONGRESSO BRASILEIRO
DE QUMICA, 53., Rio de Janeiro, 2013. Qumica: ampliando
fronteiras resumos. Rio de Janeiro: ABQ, 2013.
SURASSMO, S.; MIN, S-G.; BEJRAPHA, P.; CHOI, M-J. Effects
of surfactants on the physical propeties of capsicum oleoresinloaded nanocapsules formulated through the emulsion-diffusion
method. Food Research International. v. 43, p. 8-17, 2010.
YOUM, I.; YANG, X.; MUROWCHICK, J. B.; YOUAN, B-B. C.
Encapsulation of docetaxel in oily core polyester nanocapsules
intended for breast cancer therapy. Nanoscale Research Letters,
v. 630, p. 1-12, 2011.

Comit de
Publicaes

Presidente: Marlon Vagner Valentim Martins


Secretrio-Executivo: Marcos Antnio Nakayama
Membros: Jos de Arimatia Duarte de Freitas, Celli
Rodrigues Muniz, Renato Manzini Bonfim, Rita de
Cassia Costa Cid, Rubens Sonsol Gondim, Fbio
Rodrigues de Miranda.

Expediente

Reviso de texto: Marcos Antnio Nakayama


Editorao eletrnica: Arilo Nobre de Oliveira
Normalizao bibliogrfica: Rita de Cassia Costa Cid