Rodrguez-Ledesma y Gonzlez-Barbosa (2012)

DEPURACIN DEL AGUA RESIDUAL DE LA INDUSTRIA TEXTIL POR SU COMUNIDAD

BACTERIANA
1

Jos Antonio Rodrguez Ledesma y 2M, en C. Ricardo Gonzlez Barbosa

Departamento de Ciencias Ambientales. Divisin de Ciencias de la Vida. UG

jarl2585@hotmail.com
2
Departamento de Ciencias Ambientales. Divisin de Ciencias de la Vida. UG
gonzalezbarric@gmail.com.

RESUMEN
La problemtica ambiental necesita alternativas biolgicas para mitigar la contaminacin en los
ecosistemas. La utilizacin de la biotecnologa microbiana es eficiente para la depuracin del agua
textil. En Irapuato se ha desarrollado en gran medida el ramo industrial. Esta investigacin esta
enfocada al estudio del aislamiento de microorganismos que ayuden a reducir el colorante del agua
textil. Se aislaron un total de ocho bacterias, de las cuales cuatro mostraron una disminucin,
mientras que las otras cuatro mostraron un aumento del colorante. El pH se mantuvo constante a
6.99. Lo cual nos indic hacer un escrutinio de microorganismos que fueran capaces de depurar
esta agua. Se aislaron 10 hongos del Ro Lerma, de los cuales cuatro (C14, C19, C20 y C23), de
los cuales tres mostraron una reduccin del colorante hasta en un 86%. Por lo que podemos
concluir que los microorganismos son una buena herramienta para este fin.
PALABRAS CLAVE
Depuracin, agua Industrial textil, Absorbancia, pH, DNA
INTRODUCCIN
El crecimiento de la poblacin va en aumento da a da, por lo cual ha incrementado la demanda de
productos para consumo humano. Esto tiene como consecuencias la produccin de grandes
masas de contaminantes prevenientes del proceso de la manufactura de productos que afectan las
aguas y el suelo. En el suelo estos contaminantes pueden cambiar su estructura y propiedades
fisicoqumicas (pH, contenido de materia orgnica), as como en el ecosistema [1]. Lo anterior
genera una prdida de biodiversidad, la erosin y salinizacin del suelo [2]. En el caso del agua
estos contaminantes producen cambios en la demanda biolgica de oxgeno (DBO) y la demanda
qumica de oxgeno (DQO) y en el pH [1]. Podemos mencionar los procesos de produccin de las
empresas textiles, que generan un volumen considerado de agua con gran cantidad de colorante
afectando los ecosistemas acuticos ya que al entrar en contacto con el medio ambiente y al
degradarse produce aminas las cuales son mutagnicas y cancergenas [2].
Existen mtodos qumicos para flocular el colorante textil, sin embargo, es importante implementar
nuevas alternativas biolgicas para contrarrestar esta contaminacin. Los microorganismos son
una buena fuente biotecnolgica para los procesos de biorremediacin, tanto de agua como de
suelo, donde la comunidad microbiolgica estn directamente en contacto con los agentes
contaminantes [4,5]. Investigaciones realizadas han demostrado la eficacia de como los

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microorganismos ayudan a la depuracin de e agua que desecha la industria textil, lo cual ha sido
muy eficiente dando buenos resultados [1]. Nuestro proyecto de investigacin esta basado en la
bsqueda de alternativas biolgicas para mitigar la contaminacin ambiental del agua textil, la cual
esta afectando los ecosistemas acuticos. En este trabajo tenemos como hiptesis que las cepas
aisladas e identificadas sean capaces de reducir el colorante presente en el efluente de una
industria textil de Irapuato, Gto. Para cual nos planteamos el siguiente objetivo general: Aislamiento
de microorganismos presentes del contenedor del agua de una industria textil de Irapuato, Gto y
hacer un escrutinio de cepas capaces de reducir el colorante del efluente textil, as como identificar
molecularmente los microorganismos que sean capaces de reducir el colorante.
MATERIALES Y MTODOS
La muestra de agua se tom directamente del efluente de la industria textil utilizando recipientes de
plstico con tapa hermtica; se almacenaron a 4C hasta su uso. Las bacterias aisladas del
contenedor de la industria textil se cultivaron en medio slido de Luria Bertani (LB), hasta obtener
cepas puras, posteriormente se inocularon estas cepas en LB lquido para los otros ensayos y se
incubaron a 37C por 12 horas con agitacin. Para los ensayos de reduccin del colorante se
esterilizaron 35 ml del agua textil en matraces de 250 ml, en los cuales se inocularon 50 l del
crecimiento bacteriano de 12 h, las cuales se incubaron a 37C por 12 a 14 horas con agitacin.
Se toman alcuotas del agua textil inicial para medir el pH en un potencimetro (Scholar 425), antes
y despus de esterilizar, as como despus de crecimiento de las bacterias, de las mismas
muestras se determin la absorbencia a 660nm en un espectrofotmetro (Jenwar 6305).
Se determin de las bacterias aisladas de tincin de Gram con cristal violeta, lugol, alcohol-acetona
y la safranina para saber su morfologa.
Para hacer el escrutinio microbiano capaz de reducir el colorante del agua textil, se muestreo agua
y suelo del Ro Lerma, de los cuales se aislaron diez hongos y se cultivaron, hasta obtener cepas
puras en medio de cultivo slido de Agar Papa Dextrosa (PDA) a pH 4.5, estos hongos se
cultivaron en el agua textil estril como se describe para las bacterias, solo que a 28C por tres
das. Del medio de cultivo PDA se tom una muestra con cinta Adhesiva (Kristal) y se puso con
azul de algodn en un portaobjeto y se coloc encima un cubreobjeto para observar las
caractersticas morfolgicas al microscopio.
La extraccin del DNA se hizo por medio de Hai-Rong Cheng y Ning Jiang (2006) en el cual se
utilizaron los reguladores STE (NaCl 100 mM, Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM), TE (Tris-HCl 10 mM,
EDTA 1 mM) y fenol-cloroformol
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) se determin con las condiciones de la tabla 1 y 2,
con oligonucletidos para amplificar una pare del gen 16S de bacterias. Los productos obtenidos
tanto del DNA como al fragmento de amplificacin se les realizaron una electroforesis horizontal en
un gel de agarosa al 1% y se uso el Bromuro de etidio como colorante para observar las bandas de
DNA.
Tabla 1. Condiciones de la Tabla
PCR 2. Condiciones de temperatura para la PCR.

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RESULTADOS Y DISCUSIN
En nuestra investigacin logramos aislar ocho bacterias directamente del contenedor de una
industria textil de Irapuato, Gto.(fig. 1).

Fig. 1 Bacterias aisladas del contenedor de la industria textil.

Cuatro de las cepas bacterianas resultaron ser bacilos Gram positivos, tres bacilos Gram negativos
y un coco Gram negativo.
El agua textil sin esterilizar tuvo un pH de 6.99, al ser esterilizada cambio a un pH a 8.5 en
promedio y al crecer a los microorganismos en el agua el pH promedio fue de 8.08 (Tabla 3).
La absorbencia (ABS) del agua textil se determin a 660nm, Por lo que se determin ABS del
agua textil inicial sin esterilizar, estril y despus de crecer las bacterias (Tabla 3). Las bacterias
aisladas del contenedor de la industria textil no lograron reducir el colorante y tres de ellas oxidaron
el colorante del agua.
De las ocho bacterias que se extrajo el DNA se obtuvo un buen resultado de cuatro de ellas,
probablemente por el comportamiento que tuvieron en su crecimiento (Fig. 4).
Se logr amplificar por PCR el DNA de las cuatro bacterias obteniendo un fragmento de
aproximadamente 850 pb con oligonucletidos del gen 16S para bacterias (Fig. 5). El cual se
mandar secuenciar al LANGEBIO (por falta de tiempo no obtuvimos la identidad de la secuencia).
De los microorganismos que se aislaron del Rio Lerma se lograron aislar diez hongos de suelo y
agua, los cuales se sometieron a un escrutinio para la reduccin del colorante del agua textil,
obteniendo cuatro cepas capaces de reducir hasta el 86% (Fig.2).

Figura 2. Reduccin del colorante del agua textil por hongos.

Se observaron las caractersticas morfolgicas de los hongos de inters. Todos presentan micelio
septado y tres de ellos presentaron estructuras reproductoras (Tabla 4).

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Tabla 3. Resultados de las bacterias presentes en el efluente de la industria textil de Irapuato, Gto.
Bacterias

Gra
m

Forma de
la bacteria

pH del
agua
textil

pH del
agua
textil
estril

pH del
agua del
crecimient
o
bacteriano

ABS
660nm
del
control

ABS 660
nm

% de
Depuraci
n

IC1-C3B

Bacilo

6.99

8.56

8.15

1.183

0.595

50

IC2-C3A
IC3-C2A
IC4-C3A1

+
+
-

Bacilo
Bacilo
Bacilo

6.99
6.99
6.99

8.53
8.5
8.61

8.02
8.15
8.07

1.183
1.183
1.183

2.216
2.128
O.521

56

IC5-C1B1
IC6-C1B
IC7-C1A

+
-

Bacilo
Bacilo
Coco

6.99
6.99
6.99

8.54
8.49
8.52

8.06
8.03
8.05

1.183
1.183
1.183

0.672
1.57
0.906

43.2
23.4

IC8-C1A1

Bacilo

6.99

8.57

8.07

1.183

0.94

20.5

Se obtuvieron tres bacterias que aumentaban la coloracin del agua textil, por lo cual se necesita
hacer unas diluciones para ajustar la absorbancia (Fig. 3).
Fig. 3. Aumento de la ABS por tres bacterias

Tabla 4 Caractersticas morfolgicas de los hongos aislados del Rio Lerma y resultados de la
reduccin del colorante agua textil.

Hongo

C14
C14

C19
C19
C20

C20

morfolog pH del
a del
agua
hongo
textil
Aparienci
a de
sucesin
basipeta
Aparienci
a de
sucesin
basifuga
Forma de
dictiospo
ra

pH del
control
del
agua
textil
esteril

pH del
pH del
agua
agua
textil
textil
+
+ agar
hongo

ABS del
control
660nm.

ABS del
control
+ agar
660nm.

ABS de las
muestras6
60 nm

% de
Depuraci
n

6.99

8.41

8.42

7.5

0.8

0.78

0.239

69

6.99

8.41

8.42

0.8

0.78

0.372

52

6.99

8.41

8.42

7.7

0.8

0.78

0.106

86

C23

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Forma de
hifas con
septos

6.99

8.41

8.42

7.9

0.8

0.78

0.679

13

IC7

IC4

IC2

IC1

IC1
IC2
IC3
IC4
IC5
IC6
IC7
IC8

C23

1517 pb
850 pb
500 pb

Figura 4. DNA bacteriano

Figura 5. PCR bacteriano

CONCLUSIONES
Los microorganismos presentes del contenedor de la industria textil no fueron capaces de reducir el
colorante del agua, por lo que es necesario seguir con la bsqueda de microorganismos para la
depuracin del contaminante.
La biotecnologa microbiana es una buena herramienta para la reduccin del colorante, ya que
los hongos aislados del Ro Lerma mostraron ser una buena alternativa para la depuracin del
agua textil.
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a la profesora Ma. Teresa Vieyra H. por su apoyo incondicional en el desarrollo,
preparacin y formacin acadmica, al profesor Ricardo Gonzales Barbosa por brindarme la
oportunidad de participar en el verano de investigacin como su asesorado, a la Universidad de
Guanajuato la cual me ha otorgado sus instalaciones para la realizacin de mis proyectos, a mis
compaeros de trabajo Ma. Candelaria Guerrero Rangel, Daniel Soto Rangel que han sido de gran
ayuda en la realizacin de muchos experimentos
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