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ISSN 1806-7727

Anlise bioqumica do fluido salivar de


indivduos portadores de doena periodontal
Biochemical analysis of saliva of subjects with
periodontal disease
Mnica Erthal SCHTZEMBERGER*
Regina Teixeira SOUZA*
Romina Eullio PETRUCCI*
Maringela NAVAL MACHADO**
Vula PAPALEXIOU***
Joo Armando BRANCHER****

Endereo para correspondncia:


Joo Armando Brancher
Rua Professor Pedro Viriato P. de Souza, 2.664 ap. 81B Mossungu
Curitiba PR CEP 81200-100
E-mail: brancher.a@pucpr.br
* Acadmicas do curso de Odontologia da PUC-PR.
** Professora adjunta da disciplina de Periodontia da PUC-PR. Doutora em Periodontia.
*** Professora adjunta da disciplina de Periodontia da PUC-PR. Doutora em Periodontia.
**** Professor-assistente da disciplina de Bioqumica da PUC-PR. Mestre em Bioqumica.

Recebido em 27/2/07. Aceito em 2/4/07.

Palavras-chave:
fluxo salivar; uria;
doena periodontal.

Resumo
A doena periodontal est associada ao acmulo local de biofilme.
uma infeco de origem microbiana que, alm da destruio de tecidos
periodontais, formao de clculo dentrio e perda de dentes, provoca
doenas sistmicas. A saliva um fluido de origem glandular que recobre
as superfcies bucais e possui propriedades fsico -qumicas
extremamente variadas. O objetivo deste estudo foi avaliar se a doena
periodontal capaz de induzir alteraes na composio do fluido salivar.
Participaram da pesquisa 40 indivduos, divididos em dois grupos de
20 pessoas: grupo-controle (GC n = 20) e grupo-teste (GT n = 20);
neste as pessoas eram portadoras de doena periodontal. Avaliaramse os seguintes parmetros salivares: capacidade de tamponamento
salivar, velocidade do fluxo salivar, pH, concentraes de clcio, uria
e protenas totais. Os valores mdios e o desvio-padro obtidos foram:
pH GC 7,43 ( 0,62), GT 8,1 ( 0,49); fluxo salivar GC 1,21
( 0,23), GT 1,01 ( 0,75); clcio GC 4,7 ( 1,2), GT 5,4 ( 0,85);
uria GC 30,7 ( 9,6), GT 38,6 ( 19,9); protenas totais GC 355,5
( 256,7), GT 299,2 ( 132,4). Observou-se uma elevao significativa

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na quantidade de uria e clcio na saliva dos indivduos portadores de


doena periodontal. No entanto a quantidade de protenas totais na
sua saliva diminuiu, sugerindo uma mudana na microbiota bucal. O
pH salivar dos portadores de doena periodontal ligeiramente maior
do que o do GT. Fluxo salivar e capacidade de tamponamento salivar
foram considerados normais em ambos os grupos.

Keywords:
salivary flow; urea;
periodontal disease.

Abstract
The most common diseases of periodontal tissues are inflammatory
processes of gum and insertion of teeth normality associated to the local
accumulation of teeth biofilm. The objective of this search is evaluating
if the periodontal diseases are able to induce qualitative and quantitative
alteration in saliva of subjects with periodontal diseases. Forty subjects,
divided in 2 groups of 20, being one the control group (CG) and the
other the test group (TG), based on age and sex were evaluated. There
were analyzed the following salivary parameters: capacity of buffer, salivary
flow speed, pH, calcium, urea and total proteins concentrations. The
medium values and standard directions were: pH: CG 7.43 ( 0.62),
TG 8.1 ( 0.49); salivary flow CG 1.21 ( 0.23); TG 1.01 ( 0.75);
calcium CG 4.7 ( 1.2), TG 5.4 ( 0.85); urea CG 30.7 ( 9.6), TG 38.6
( 19.9); total proteins CG 355.5 ( 256.7), TG 299.2 ( 132.4).
Significant rise in the amount of urea and calcium in the saliva of the
periodontal disease individuals was observed whereas the amount of
total proteins in the saliva of these individuals diminished, suggesting a
change in microbiota. Salivary pH in the individuals of the TG is slightly
higher of that of the CG. Salivary flow and capacity of buffer have been
considered normal in both groups.

Introduo
As doenas mais comuns dos tecidos
periodontais so processos inflamatrios da gengiva
e do periodonto de sustentao do dente. Entre elas,
destacam-se as infeces microbianas associadas ao
acmulo local de biofilme [11].
As condies patolgicas que mais afetam o
periodonto so a gengivite e a periodontite. A
gengivite um processo inflamatrio da gengiva, no
qual o epitlio juncional, ainda que alterado pela
doena, est prximo ou na juno cemento
esmalte, aderido ao dente. Na periodontite ocorre a
destruio do ligamento periodontal, do cemento e
do osso alveolar, os quais conferem sustentao ao
dente. Isso est associado migrao apical do
epitlio juncional em direo ao apice radicular.
Portanto, por definio, a periodontite acontece
quando o epitlio juncional migra apicalmente da
juno cementoesmalte para a raiz [11, 15].
Vrios sistemas de classificao foram
desenvolvidos para organizar e denominar as
condies patolgicas que afetam os tecidos
periodontais. Atualmente, os sistemas de

classificao para doenas periodontais consideram


a aparncia clnica e radiogrfica dos dentes, assim
como a sade sistmica e as condies patolgicas
do paciente [11].
A Academia Americana de Periodontologia
(AAP) [1] adotou, em 1999, a seguinte classificao
para as doenas periodontais:
I Doenas gengivais;
II Periodontite crnica;
III Periodontite agressiva;
IV Periodontite como manifestao de doena
sistmica;
V Doenas periodontais necrosantes;
VI Abcessos do periodonto;
VII Periodontite associada a leses endodnticas;
VIII Condies e deformidades de desenvolvimento
ou adquiridas.
importante destacar que as doenas
periodontais so infeces de origem microbiana
que, alm da destruio de tecidos periodontais,
formao de clculo dentrio e perda de dentes,
produzem alteraes significativas no ambiente
bucal, como o aumento de bactrias anaerbicas
ou aerbicas facultativas [16]. Pode haver

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tambm o agravamento da situao, porque a


infeco bacteriana, em alguns casos, no est
limitada ao ambiente bucal, acarretando efeitos
sistmicos [5].
A saliva um fluido de origem glandular que
recobre as superfcies bucais e possui
propriedades fsico - qumicas extremamente
variadas. A secreo salivar induzida por
estmulos psquicos, mecnicos, fsicos, qumicos
e biolgicos, e o fluxo salivar estimulado varia de
1,0 a 1,5 mL/min [14]. A composio salivar
tambm muito diferenciada e inclui ons como
clcio, fosfato, bicarbonato, fluoreto, sdio e
potssio, substncias orgnicas como
glicoprotenas, enzimas digestivas, glicose e uria,
alm de restos alimentares, microrganismos,
produtos do metabolismo bacteriano, clulas que
descamam do epitlio oral, muco da cavidade
nasal e da faringe, fluido transudato da mucosa
e exsudato dos sulcos gengivais [9, 27].
Entre as funes da saliva, destacam-se as
de limpeza, proteo e manuteno do pH bucal.
Essa ltima denominada de capacidade de
tamponamento salivar (CTS) e mantm o pH
bucal em 6,8. Qualquer alterao nos nveis de
pH para baixo ou para cima prontamente
neutralizada pelos sistemas de tamponamento
salivares [8].
Os mais importantes elementos inorgnicos
da saliva so: cloreto (geralmente tem uma taxa
inferior do plasma sangneo e varia em relao
proporcional taxa de fluxo salivar. Sua principal
funo osmorreguladora), bicarbonato (varia
segundo o fluxo salivar e, s vezes, pode exceder
a taxa do plasma. Provm do metabolismo da
glndula ou da transferncia em troca com cloro,
pelo menos nas pores mais distais do tbulo;
alm disso, atua como osmorregulador e, no
sistema-tampo salivar, atinge uma concentrao
superior do plasma e no depende da taxa do
fluxo salivar), fosfato (participa do processo de
remineralizao no sistema-tampo e um
osmorregulador. Atinge uma concentrao
superior do plasma sem depender da taxa de
fluxo salivar), iodeto (alcana altas concentraes,
de 100 a 200 vezes se comparado ao plasma),
fluoreto (previne a crie dentria), sdio (depende
diretamente do fluxo salivar, osmorregulador e
participa no transporte ativo de componentes por
meio da membrana celular), potssio (possui taxa

superior do plasma e tem funes semelhantes


s do sdio), clcio (depende do fluxo salivar,
ativador de determinadas enzimas e atua na
remineralizao do esmalte) [7, 27].
O uso da saliva como mtodo de diagnstico
avanou exponencialmente nos ltimos 10 anos.
A literatura contm mais de 2.000 artigos
referentes a testes salivares realizados desde
1982, descrevendo o uso de saliva total a fim de
monitorar doenas sistmicas e bucais [25].
A vantagem principal da utilizao do fluido
salivar para o diagnstico em substituio ao
sangue o acesso fcil boca, com coleta noinvasiva.
Em 1984, Stuchell et al . [26] empregaram
sialometria e sialoqumica em pacientes
portadores da sndrome de Sjgren (SS) e
concluram que a sialoqumica um mtodo
valioso de diagnstico da doena, alm de servir
para o acompanhamento longitudinal dos
pacientes. Os portadores da SS tinham maior
concentrao de sdio, cloro, protenas totais,
imunoglobulina G, imunoglobulina A, lactoferrina
e albumina e menores taxas de fosfato e amilase.
A velocidade do fluxo salivar apresentou- se
diminuda nos portadores da SS.
Estudos demonstraram que existe correlao
entre a concentrao de clcio salivar e doenas
periodontais. Indivduos com elevada
concentrao de clcio salivar so afetados por
periodontite [22], entretanto existe a relao
inversa: apesar de haver a periodontite, pessoas
que possuem alta taxa de clcio salivar podem
ter dentes intactos, ou seja, sem cries [2].
Em 1922, Hench e Aldrich [12] propuseram
que a quantificao da uria na saliva poderia
ser utilizada como teste - diagnstico de
insuficincia renal, hiptese essa contestada por
Stealy [24]. No entanto sabe-se que em pacientes
acometidos de insuficincia renal o componente
que aumenta na saliva a uria [6]. O nitrognio
urico varia com a ingesto protica, porque o
nitrognio liberado durante a degradao de
protena e aminocidos quase totalmente
convertido em uria. A uria produzida tem dois
destinos possveis: ou degradada por bactrias
intestinais e excretada pelo rim ou acumulada
na gua do organismo [20]. A uria salivar
excretada especialmente pelo tbulo intralobular
estriado das glndulas salivares [7] e contribui

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para a elevao do pH bucal, o que causa a doena


periodontal [16].
O objetivo deste estudo foi avaliar se a doena
periodontal capaz de induzir alteraes na
concentrao de uria, protenas totais, pH,
capacidade de tamponamento, clcio e fluxo
salivar na saliva dos indivduos portadores da
doena.

Materiais e mtodos
Esta pesquisa foi iniciada aps aprovao pelo
Comit de tica em Pesquisa da Pontifcia
Universidade Catlica do Paran (PUC-PR), sob o
registro nmero 606. Neste estudo foram avaliados
40 indivduos de ambos os sexos, na faixa etria de
20 a 35 anos, divididos em dois grupos. O primeiro,
denominado grupo-teste (GT), foi composto de 20
pessoas atendidas na Clnica de Periodontia da PUCPR, diagnosticadas como portadoras de doena
periodontal crnica segundo os critrios da AAP [1].
O segundo grupo, chamado de controle (GC),
foi constitudo por 20 indivduos voluntrios,
estudantes do curso de Odontologia, pareados em
sexo e idade com o GT. Eles tambm foram
submetidos anamnese e ao exame clnico.
Aps explicao completa e pormenorizada
sobre a natureza da pesquisa, seus objetivos,
mtodos, benefcios previstos, potenciais de risco
e o incmodo que a metodologia poderia
acarretar, os participantes assinaram o termo de
consentimento livre e esclarecido, autorizando a
participao voluntria no experimento.
As amostras de saliva total foram obtidas pelo
mtodo de coleta spitting , segundo a tcnica
preconizada por Navazesh [19]. O voluntrio
mastigou continuamente, durante 6 min, um
pedao de ltex estril padronizado de 1 cm. O
tempo foi controlado por meio de um cronmetro.
Toda a saliva produzida durante o primeiro
minuto de estimulao foi desprezada, e pediuse para o indivduo expeli-la ou degluti-la.
Durante os 5 min subseqentes, o participante
continuou a mascar o ltex e a expelir toda a
saliva produzida num coletor universal estril
previamente numerado e pesado [10, 18].
As amostras de saliva foram acondicionadas
em um recipiente de isopor contendo gelo no seu
interior e encaminhadas imediatamente ao
Laboratrio de Bioqumica da PUC-PR, para
anlise volumtrica e bioqumica.

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Mensurou-se o pH salivar com o auxlio de


um potencimetro. Esse aparelho possui um
eletrodo de vidro com HCl 0,1 N, um eletrodo de
calomelano e um sistema de medida de voltagem.
O eletrodo de vidro foi imerso na soluo salivar;
o seu contato com a referida soluo provoca uma
diferena de potencial entre os eletrodos
diretamente proporcional concentrao de ons
hidrognio na saliva. Tal valor expresso como
pH. No intervalo de cada medio, o bulbo de
vidro do potencimetro foi lavado com gua
destilada e secado com gaze a fim de evitar
possveis distores na leitura.
Para a determinao da CTS, utilizou-se a
tcnica descrita por Aranha [2] e procedeu-se
titulometria, medindo-se o volume de cido ltico
0,1 N necessrio para baixar o pH salivar at 3,9.
Na avaliao sialoqumica da saliva foram
empregados testes colorimtricos enzimticos da
Labtest Diagnstica e Wiener Lab , seguindo-se
as recomendaes preconizadas pelo fabricante
para preparo bioqumico das amostras. Os testes
sialoqumicos foram realizados em triplicata para
cada amostra de saliva.

Resultados
Examinaram-se 40 indivduos (20 homens e
20 mulheres), pareados em idade e sexo. Os
valores obtidos para cada varivel esto
sumarizados na tabela I. A taxa de secreo
salivar entre os grupos similar, sendo,
respectivamente, 1,01 ( 0,75) e 1,21 ( 0,23)
para o grupo-teste e o controle. Os valores mdios
e o desvio-padro de clcio e uria das amostras
de saliva foram, respectivamente, 4,7 mg/dL ( 1,2)
e 5,4 mg/dL ( 0,85) para o GC e 30,7 mg/dL ( 9,6)
e 38,6 mg/dL ( 19,9) para o GT, conforme ilustra
a figura 1. Esses resultados revelam que a
concentrao de clcio e uria na saliva dos
portadores de doena periodontal mais alta do
que nos indivduos saudveis. Contrapondo-se a
tais dados, a taxa de protenas totais na saliva
dos indivduos do GC foi maior do que no GT
(figura 2).
Em ambos os grupos o volume de cido ltico
utilizado foi maior do que 1 mL, indicando que a
CTS normal tanto nas pessoas saudveis quanto
nas que possuem a doena.

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Tabela I Estatstica descritiva do estudo

Figura 1 Distribuio dos valores da concentrao do clcio


e uria salivar segundo os grupos
Obs.: Os valores so dados em mg/dL

Figura 2 Distribuio dos valores da concentrao de


protenas salivares totais segundo os grupos

Discusso
A CTS considerada um fator endgeno
importante contra a crie dental e a doena
periodontal. De acordo com Aranha [2], o indivduo
resistente crie dentria quando o volume de cido
ltico gasto para diminuir o pH salivar para 3,9
maior do que 1 mL. Neste estudo, todas as amostras
de saliva receberam mais do que 1 mL de cido ltico
0,1 N, demonstrando uma boa capacidade de
tamponamento. No houve diferena estatstica

significativa na capacidade de tamponamento e no


fluxo salivar de ambos os grupos, porm o pH salivar
do GT foi maior do que o do GC.
Na prtica clnica a sialometria indicada como
parte do exame inicial de um paciente, durante a
avaliao de um tratamento profiltico teraputico e
como parte dos procedimentos de diagnstico de
hipossalivao. O fluxo salivar estimulado varia de
1,0 a 1,5 mL [14], e nesta pesquisa os resultados
obtidos so considerados normais. No h correlao
entre fluxo salivar e pH da saliva, uma vez que no GT
o pH salivar se apresentou com um ndice mais alto
mesmo com uma secreo salivar menor.
As protenas salivares so importantes para a
proteo das estruturas bucais e fornecem
superfcies receptoras para adeso de bactrias [21].
A uria, um produto do metabolismo de substncias
nitrogenadas, especialmente as protenas,
secretada na saliva em concentraes que vo de 12
a 24 mg/dL [4]. Em pacientes com doenas renais o
ndice de uria mais elevado [23]. Quando o
biofilme bacteriano exposto a carboidratos
fermentveis, as bactrias o convertem em vrios
cidos, causando uma queda no pH bucal [6]. Neste
trabalho o pH salivar dos indivduos do GT
consideravelmente mais alto do que o do GC,
sugerindo uma mudana na microbiota bucal com
predomnio de bactrias que utilizam protenas e
uria como fonte de nitrognio, uma vez que houve
um decrscimo acentuado na concentrao de
protenas totais da saliva dos portadores de doena
periodontal: 299,25 mg/dL contra 355,5 mg/dL na
saliva dos indivduos saudveis.
A uria presente na cavidade bucal degradada
pelas ureases produzidas pela microbiota, o que
resulta na produo de amnia, contribuindo para
a elevao do pH bucal fator essencial na formao
do clculo dentrio [6]. Nesta pesquisa a

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concentrao de uria salivar foi mais elevada no


GT (38,6 mg/dL) do que no GC (30,7 mg/dL), o que
pode justificar a elevao do pH bucal nos indivduos
com a doena periodontal para 8,15.
Altos nveis de uria esto tambm associados
diminuio da percepo do paladar, dor,
formao de petquias e equimoses [13]. Larato [17]
observou irritao na mucosa bucal que resultou
em estomatite e glossite.
O clculo dentrio resultado da calcificao
do biofilme. Para que exista efetivamente a
mineralizao do biofilme bacteriano, necessria
a precipitao de cristais de clcio e fosfato sobre a
superfcie amolecida do biofilme, o que favorecido
pelo aumento do pH bucal. Neste trabalho notou-se
um aumento do clcio salivar nos indivduos com
doena periodontal, possibilitando a formao do
cristal sobre o esmalte, resultado que confirmou os
dados de Sewon et al. [22]. Segundo esses autores,
a anlise do clcio salivar pode ser utilizada para o
diagnstico de doena periodontal.

Concluso
Observou-se uma elevao significativa na
quantidade de uria e clcio na saliva dos indivduos
portadores de doena periodontal, enquanto a taxa
de protenas totais na saliva deles diminuiu,
sugerindo uma mudana na microbiota bucal. O pH
salivar dos portadores de doena periodontal
ligeiramente maior do que nos indivduos do grupoteste. O fluxo salivar e a capacidade de
tamponamento salivar foram considerados normais
em ambos os grupos.

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