Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
RENATO MENEGUELO
So Carlos,
2007.
M541e
Meneguelo, Renato
Efeitos antiproliferativos e apoptticos da
fosfoetanolamina sinttica no melanoma B16F10 / Renato
Meneguelo ; orientador Gilberto Orivaldo Chierice. - So
Carlos, 2007.
AGRADECIMENTOS:
"Quando todos pensam da mesma maneira, porque nenhum pensa grande coisa."
Walter Junior
E principalmente aquele que foi os meus dois braos neste trabalho Adilson
Kleber Ferreira, ns somos uma grande equipe...
Minha sempre amiga Janete Ferreira Rodrigues, obrigado pela pacincia,
voc vai para o cu com certeza.
Aquele que me mostrou um formidvel mundo novo de possibilidades, que
acreditou em minha capacidade, que me escolheu, para mim foi muito mais
que um orientador, me conduziu como se cuida de um filho. Prof. Dr. Gilberto
Orivaldo Chierice. A mente mais brilhante que conheci em minha vida, sou
uma pessoa de muita sorte.
Lista de Abreviaes:
1 %: Porcentagem.
2 MTT: Mtodo Colorimtrico.
3 IC 50 %: Concentrao Inibitria 50%.
4 ug: micrograma.
5 ml: mililitro.
6 CDKs: Quinases Dependentes de Ciclinas.
7 G1: Fase do ciclo celular.
8 S: Fase do ciclo celular.
9 G2: Fase do ciclo celular.
10 M: Fase do ciclo celular.
11 CDKIs: Inibidores de Quinase Dependente de Ciclinas.
12 P15, P16, P21, P53,...: Protenas especfica de ativao.
13 ATP: Aenosina Trifosfato.
14 FO: Fosforilao Oxidativa.
15 DNA: cido Desoxirribonuclico.
16 GTP: Glutamina Trifosfato.
17 mvolts: milivolts.
18 Bcl2: mediador qumico.
40 Ht: Hematcrito.
41 EDTA: Anticoagulante.
42 PHT: Fitohemaglutinina.
43 SFB: Soro Fetal Bovino.
44 Ts: Durao da fase S.
45 Tpot: Tempo de Duplicao Potncial.
46 RPM: Rotaes por Minuto.
47 mg/ml: Miligramas por Mililitro.
48 mg/kg: Miligramas por Kilograma.
49 Hb: Hemoglobina.
50 OMS: Organizao Mundial de Sade.
51 Qt: Quimioterapia.
52 MDR: Resistncia a mltiplas drogas.
53 T/C:Tratado por Controle.
54 Gm CSF: Fator estimulador de colnias do tipo granulcito-moncito.
Lista de Figuras:
10
11
12
de
melanoma
B16F10,
grupos
controle
tratados
com
fosfoetanolamina sinttica.
LISTA DE TABELAS:
Tabela 1. Anlises das fases do ciclo celular obtidas por citometria de fluxo das
clulas de melanoma B16F10 dos grupos: controle, tratados com 6.6 e 1.65
mg/ml de fosfoetanolamina sinttica e com o quimioterpico Taxol.
13
14
Resumo:
MENEGUELO, R.(2007). EFEITOS ANTIPROLIFERATIVOS E
APOPTTICOS DA FOSFOETANOLAMINA SINTTICA NO MELANOMA
B16F10. 106 f. Dissertao (Mestrado) Programa de Ps-graduao da
Interunidades em Bioengenharia (EESC/FMRP/IQSC), Universidade de So
Paulo, So Carlos, 2007.
15
demonstrou
alteraes
relevantes
aps
administrao
da
Conclui-se
que
fosfoetanolamina
sinttica
diminuiu
16
Summary:
MENEGUELO, R.(2007). EFECTS ANTIPROLIFERATION AND APOPTOTIC
OF THE SYNTHETIC PHOSPHOETHANOLAMINE IN MELANOMA B16F10.
106 f. Dissertao (Mestrado) Programa de Ps-graduao da Interunidades
em Bioengenharia (EESC/FMRP/IQSC), Universidade de So Paulo, So
Carlos, 2007.
17
cellular cycle was carried through. The results of the treatment with the
synthetic phosphoethanolamine in vitro had shows that the composition
induces selective citotoxicity for the tumor cells with IC 50% of 1.69ug/ml
without affecting the proliferative capacity of normal cells. The bearing animals
of dorsal tumors of melanoma B16F10 had presented significant reduction
tumor load, showing to inhibition of the capacity of growth and the
metastatization. The hematological evaluation did not show alterations the
administration of the synthetic phosphoethanolamine by the intraperitoneal way
in the bearing animals of melanoma. The synthetic phosphoethanolamine
significantly reduced the size of tumors of selective form, without alterations in
normal cells; with advantage in relation to the commercial quimioterapics
therefore the same one did not present the terrible collaterals effect of the same
ones. In this work it was evident the inhibitory capacity of the synthetic
phosphoethanolamine in the inhibition of the progression and dissemination of
the tumor cells.
18
SUMRIO:
1 INTRODUO:
1.1 Pele.............................................................................................................1
1.2 Cncer.......................................................................................................3
1.3 Etiologia......................................................................................................3
1.4 Tumorignese e Melanoma........................................................................5
1.5 Epidemiologia do Melanoma Cutneo........................................................8
1.6 Aspectos Clnicos do Melanoma...............................................................10
1.7 Citotoxicidade: morte celular apoptose e necrose.................................11
1.8 Apoptose...................................................................................................13
1.9 Aletraes Ultraestruturais Mitocondriais.................................................14
1.10 Apoptose mediado pela via mitocndrial................................................16
1.11 Fosfoetanolamina...................................................................................17
2 OBJETIVOS:
3 MATERIAIS E MTODOS:
19
4 RESULTADOS:
20
5 DISCUSSO:........................................................................................82
6 CONCLUSES:....................................................................................93
7 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS......................................................96.
21
Introduo:
22
1- INTRODUO:
1.1 - Pele:
A pele constituda por dois principais componentes, a derme e a
epiderme. A derme basicamente constituda por tecido conectivo formando
por fibras de colgeno, elsticas e reticulares, ricamente irrigadas por vasos
sanguneos e linfticos, alm de conter estruturas originalmente derivadas da
epiderme, que so as glndulas sebceas e sudorparas, folculos pilosos e
pelos. A derme possui terminaes nervosas de medeiam s sensaes de
tato, calor, frio e dor, entre nervos do sistema nervoso autnomo simptico que
regulam a atividade das glndulas sudorparas e arterola1.
Em contraste, a epiderme uma fina camada (0,1 a 0,15 milmetros de
espessura) desprovida de vasos sanguneos e terminaes nervosas.
composta por duas populaes distintas de clulas, clulas epiteliais ou
queratincitos
(tambm
conhecidas
como
clulas
de
Malpighi,
que
Estrato
basal
(camada
basal
ou
estrato
germinativo):
polidricas
irregulares
cobertas
por
estruturas
23
clulas
queratinizadas
mortas,
prximas
umas
das
outras2, 3,4.
Os melancitos so clulas altamente especializadas que produzem e
exportam melanina, um heteropolmero cuja estrutura precisa at hoje
desconhecida. Em mamferos, esto presentes na camada basal da epiderme,
nos folculos pilosos, na derme, na retina e ris. Na pele, os melanossomos
(organelas que contm melanina produzida nos melancitos so transferidas
para os queratincitos vizinhos por um mecanismo ainda no totalmente
esclarecido, mas que parece envolver a fagocitose da ponta dos processos
dendriticos dos melancitos pelos queratincitos)5, 6,7.
Por serem altamente diferenciados, os melancitos apresentam baixa
atividade mittica in vitro e in vivo estas clulas necessitam de uma
combinao de fatores de crescimento e agentes que elevem a atividade das
protenas quinase A e C, para manter uma taxa tima de proliferao8, 9,10.
24
1.2 - Cncer:
Cncer o nome dado a uma patologia com mais de 100 subdivises
que tm em comum o crescimento desordenado (maligno) de clulas que
invadem os tecidos e rgos, podendo espalhar-se (metstase) para outras
regies do corpo. A maioria dos cnceres origina-se de uma nica clula
alterada. O cncer o resultado de uma srie de alteraes que controlam
o crescimento e o comportamento celular. Dividindo-se rapidamente, estas
clulas tendem a ser muito agressivas e incontrolveis, determinando a
formao de tumores (acmulo de clulas cancerosas) ou neoplasias
malignas. Por outro lado, um tumor benigno significa simplesmente uma
massa localizada de clulas que se multiplicam vagarosamente e se
assemelham ao seu tecido original, raramente constituindo risco de vida. As
clulas
cancerosas
mostram
uma
variedade
de
caractersticas
propriedades notveis11.
As clulas malignas possuem traos morfolgicos que as distinguem,
incluindo um ncleo maior, mitocndrias pouco funcionais, alteraes ultra
estruturais
do
citoesqueleto,
variao
na
diferena
de
potencial
1.3 - Etiologia:
As causas de cncer so variadas, podendo ser externas ou internas ao
organismo,
estando
ambas
inter-relacionadas.
As
causas
externas
25
26
17
carcingenos
ambientais.
No
entanto,
aparecimento
27
seus respectivos pontos de controle permitem que a clula complete seu ciclo
normal, replicando-se sem dar origem a clulas anormais. A diviso celular
normal positivamente regulada ou estimulada atravs de vias sinalizadoras.
Estas vias respondem a fatores extracelulares, os quais agem atravs de uma
seqncia de protenas por exemplo: receptores protena G protenaquinase fatores de transcrio. A progresso pelo ciclo celular a seguir, em
parte, controlada, por uma srie de protenas chamadas quinases
dependentes de ciclinas (CDKs), particularmente nas transies de fases,
tanto de G1 para S quanto de G2 para M19. Os nveis de ciclinas oscilam
durante as fases do ciclo, determinando o momento apropriado de sua ligao
com CDKs. Este grupo de enzimas, por sua vez, fosforila a progresso de uma
fase a outra do ciclo celular. Por outro lado, um grupo de inibidores do ciclo
atua impedindo ou regulando negativamente as vias sinalizadoras de tal
progresso no ciclo de diviso celular. semelhana dos fatores estimuladores
que levam produo de ciclinas/CDKs, os reguladores negativos ativaro
inibidores dos CDKs: os CDKIs19.
Podemos distinguir duas famlias de CDKIs, de acordo com seu
mecanismo de ao, homologia e CDK alvo:
1) o grupo do p21, p27 e p57.
2) o grupo do p15, p16, p18 e p1919 .
Anormalidades tanto nos genes estimuladores de diviso celular
(chamados de oncogenes), como nos protetores ou bloqueadores do ciclo
celular (chamados de genes supressores tumorais), podem conferir a uma
clula vantagens de crescimento e desenvolvimento sobre as clulas normais.
28
Cada uma das protenas envolvidas no ciclo celular codificada por um gene.
Mutaes nestes genes podem levar desregulao do ciclo celular.
Os genes que atuam de forma positiva, induzindo ou estimulando a
progresso do ciclo, so chamados proto-oncogenes, pois ao sofrerem
mutaes se tornaro oncogenes, cuja ao permitir ganho de funo clula
mutante. Ao contrrio, as protenas envolvidas no controle negativo do ciclo
celular so codificadas pelos assim chamados genes supressores tumorais.
Mutaes neste grupo de genes se manifestaro pela sua falta de ao, mas o
efeito final ser similar: perda dos mecanismos controladores do ciclo celular
normal17. J se sabe h muito tempo que expresso imprpria de fatores de
crescimento ou de seus receptores contribui para o desenvolvimento de
neoplasias. Mais recentemente, demonstrou-se que hiper-expresso da
ciclina D1 induz progresso de hiperplasia a carcinomas em camundongos.
Amplificaes da ciclina D1 tambm foram encontradas em tumores primrios
e linhagens celulares tumorais19. No ser humano, medidas indiretas baseadas
na prevalncia de tumores em diferentes faixas etrias, permitem inferir que
so necessrias cerca de cinco a seis mutaes sucessivas para que uma
clula se torne maligna e agressiva18.
Os mecanismos pelos quais os melancitos tornam-se malignos in vivo
ainda pouco conhecido; no entanto, a ativao e inativao de oncogenes
dominantes e recessivos esto envolvidos no processo tumoral. Sabe-se que
as clulas neoplsicas apresentam profunda anormalidade quando interagem
com seu micro ambiente, as transformaes malignas so provavelmente
tambm alteraes gnicas que codificam fatores de crescimento e/ou seus
29
30
2 - nevo displsico;
3 - melanoma de crescimento radial;
4 - melanoma de crescimento vertical;
5 - melanoma metasttico.28
Tanto
nevo
melanoctico
benigno
quanto
displsico
so
21, 24, 28
melanoma
corresponde
ao
estgio
final
da
carcinognese
31
32
33
34
1.8 - Apoptose:
O termo apoptose e usado nos casos de morte celular quando, a clula
diminui seu volume, apresenta alteraes em sua superfcie como a
externalizao de fosfatidilserina (que se liga com alta afinidade a protena
anexina V), alteraes nucleares tpicas como condensao e marginalizao
da cromatina, alm da quebra do DNA em pequenos fragmentos36.
Com respeito aos mecanismos intracelulares que participam da
apoptose, estes processos podem ter incio com a ativao de um receptor
especfico ou por alteraes nas mitoncndrias, sendo que ambos levam ao
vazamento do citocromo c dessa organela e a ativao de caspases, famlia de
sistenas proteases que coordenam e atuam como efetores da apoptose,
promovendo a hidrlise de protenas e DNA, alteraes do citoesqueleto,
dentre outros processos apoptoticos37.
A resistncia a apoptose uma caracterstica das clulas cancergenas.
O conceito de que a apoptose pode influenciar o fentipo maligno de uma
clula foi primeiramente mencionado em 197236. Contudo, a importncia do
processo na patognese do cncer permaneceu sob investigao por quase
duas dcadas, at que evidencias de genes reguladores da apoptose no
processo de tumorignese
35
regulao deste tipo de morte celular podem tornar o tumor mais resistente ao
tratamento, assim especulasse que um desequilibrio das protenas reguladoras
do processo apopttico possa contribuir a resistncia do melanoma maligno ao
tratamento. As bases moleculares para a resistncia a apoptose em melanoma
ainda no so bem compreendidas, alteraes nas diversas etapas do
programa da morte celular, tem sido descritos, variando desde a ineficincia da
sinalizao extracelular, ativao de caspase 8 at o desbalano na expresso
de protenas pr e anti apopttica37.
36
37
38
1.11 - Fosfoetanolamina:
39
tem
aumentado
outros
trabalhos
abrangendo
40
41
56
42
Objetivo:
43
2 - Objetivos:
determinao
das
concentraes
inibitrias
(IC50%)
44
Materiais e Mtodos:
45
3 - Materiais e Mtodos:
46
47
48
49
50
Os
animais
foram
sacrificados
cada
etapa
de
tratamento,
anticoagulante
EDTA.
Utilizando-se
mtodo
da
51
52
sistmicas
aes
farmacolgicas
ou
teraputicas.
infecciosas
inflamatrias,
acompanhamento
de
terapias
inflamaes,
intoxicaes,
interaes
medicamentosas
53
3.13 - Preparo das amostras paras anlises histoqumicas PicrosiriusRed e Van Gienson-Verhoff:
54
55
Resultados:
56
fosfoetanolamina
sinttica
no
inibe
resposta
proliferativa
57
Mortas
Vivas
120
100
80
60
40
20
0
6000
3000
1500
750
325
162
81
40
20
10
2.5
Figura
Determinao
da
atividade
citotxica
da
58
(%) Inibio
80
70
IC50% = 2.3mg/ml
60
50
40
30
20
10
0
0
2000
4000
6000
8000
59
150
100
50
0
Co 10%SFB25ug
125ug
6ug
3ug
60
consecutivos
com
fosfoetanolamina
sinttica,
apresentaram
Aps a
no
tratado.
Tambm
foram
observadas
diminuies
61
62
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
Apo Co
G0/G1 Co
S - Co
G2/M - Co
***
B
15.0
12.5
10.0
7.5
***
5.0
***
2.5
***
0.0
Apoptose
G0/G1
G2/M
63
clulas
com
capacidade
proliferativa
(G2/M)
diminuram
64
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
Apo Co
G0/G1 Co
S - Co
G2/M - Co
***
***
15
10
***
5
0
Apoptose
G0/G1
G2/M
65
fosfoetanolamina
sinttica
na
concentrao
de
6.6
mg
diminui
66
17.5
15.0
12.5
10.0
7.5
5.0
2.5
0.0
Apoptose
G0/G1
G2/M
20
15
10
Apoptose
G0/G1
G2/M
F a se s d o C i c l o C e l u l a r
67
20
A
15
10
Apoptose
G0/G1
G2/M
20
15
B
10
Apoptose
G0/G1
G2/M
F a se s d o C i c l o C e l u l a r
68
Linhagem B16F10
Sub-G1
G0/G1
G2/M
/ Tratamento
(%)
(%)
(%)
(%)
6.9 3.4
25.6 4.8
23.1 4.6
51.3 3.0
12.8 4.4
2.9 0.9
1.49 0.28
2.1 0.89
17.5 2.3
12.7 4.1
4.9 1.2
11.9 2.2
15.4 8.7
2.6 1.6
0.61 0.43
1.38 0.7
Controle
Fosfoetanolamina
6.6mg/mL
(0.0468uM)
(80 x)
Fosfoetanolamina
1.65mg/mL
(0.0117uM)
(320 x)
69
70
&
71
&
Grupo Controle
72
73
&
74
&
75
Fgado
&
Rim
Fgado
Pulmo
*
76
77
78
Controle
Fosfo 9.9 mg
Fosfo 6.6mg
Fosfo 1.65 mg
15.0
12.5
10.0
7.5
5.0
*78%
*87%
2.5
*89%
0.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
25.0
27.5
30.0
32.5
35.0
Dias de Tratamento
de
melanoma
B16F10
durante
tratamento
com
79
100
90
80
70
60
50
40
30
20
***
10
***
***
0
Controle
9.9 mg
6.6mg
1.65mg
80
10000
9000
8000
Controle - Salina
Taxol 3.75mg/Kg+Etoposideo 2.5mg/Kg
7000
6000
5000
4000
66.7%
3000
2000
91%
1000
0
11
12
14
16
18
20
22
Tempo (dias)
24
27
29
31
81
retirados
fotodocumentados
realizados
as
anlises
histopatolgicas.
Os animais do grupo controle possuem massas tumorais dorsais
volumosas, ocupando em torno de 40 60% de seu peso corpreo, seus
tumores
ulcerados
macroscopicamente
e
necrticos.
apresentavam-se
Histologicamente
nodulares,
observou-se,
pigmentados,
massa
celular,
82
A
Aumento 400X
Aumento 200X
83
Os
animais
do
grupo
controle
apresentaram
uma
quantidade
84
Aumento 200X
Aumento 400X
85
86
Aumento 200X
Aumento 200X
Aumento 400X
extensa
rea
de
necrose
intra-tumoral
(A),
infiltrado
87
Aumento 400X
Aumento 400X
88
de
massas
tumorais
nodulares,
pouco
pigmentadas.
89
Aumento 200X
Aumento 400X
Aumento 400X
90
Aumento 200X
Aumento 200X
com
1.65mg/ml
de
fosfoetanolamina
sinttica.
91
Aumento 200X
Aumento 200X
92
93
Aumento 200X
Aumento 400X
94
95
Aumento 200X
B
Aumento 200X
96
que
em
todas
as
concentraes
administradas
pela
via
97
***
80
***
70
60
**
50
40
30
20
10
Co - Tumor
9.9
6.6
1.65
Controle
Fosfoetanolamina (mg/ml)
98
55
50
45
H e m a t o c r it o ( H t % )
40
***
35
###
***
###
30
***
###
###
25
20
15
10
C0 - Tumor
9.9
6.6
1.65
Controle
Fosfoetanolamina mg/ml
*** Diferenas estatsticas entre os grupos controle portador de tumor e tratado com
fosfoetanolamina sinttica.
### Diferenas estatsticas entre os grupos controle e tratado com fosfoeatanolamina.
Teste Estatstico de Varincia de ANOVA.
Hemoglobina g/dl
15
10
Co - Tumor
9.9
6.6
1.65
Controle
Fosfoetanolamina (mg/ml)
100
1000
800
600
400
200
0
Co - Tumor
9.9
6.6
1.65
Controle
Fosfoetanolamina mg/ml
101
***
3
2
###
###
###
Co - Tumor
9.9
6.6
1.65
Controle
Fosfoetanolamina mg/ml
*** Diferenas estatsticas entre os grupos controle portador de tumor e tratado com
fosfoetanolamina sinttica.
### Diferenas estatsticas entre os grupos controle e tratado com fosfoeatanolamina.
Teste Estatstico de Varincia de ANOVA.
102
Discusso:
103
5 - Discusso
novos
mecanismos
de
ao
esto
sendo
explorados
no
105
106
107
108
respectivamente 230 e 100 vezes, mais potente nesta inibio que a droga
comercial.
Na fase S de sntese foi demonstrado que a fosfoetanolamina sinttica
na dose de 6.6 mg/ml >93% equivalente ao quimioterpico comercial Taxol
>97%, enquanto que na dose de 1.65mg/ml seu efeito foi significativo >78%, na
inibio, porm em menor proporo.
O Taxol um taxano inibidor da polimerizao dos microfilamentos
envolvidos na formao do fuso equatorial durante a diviso mittica, o
tratamento das clulas de melanoma B16F10 foi capaz de inibir em mdia 97%
das clulas na fase G2/M. O tratamento com a fosfoetanolamina sinttica nas
concentraes de 6.6 e 1.65mg/mL inibiram respectivamente, 96 e 77% das
clulas
em
diviso
celular.
Como
frmaco
comercial
Taxol,
do
agente
promotor,
convertendo-se
em
um
processo
109
110
mostrou
ausncia
de
neovascularizao,
anemia,
111
infecciosas
inflamatrias,
acompanhamento
de
terapias
inflamaes,
intoxicaes,
interaes
medicamentosas
112
No
foram
evidenciadas
alteraes
quantitativas
ou
113
Concluses:
6 - Concluses:
114
fases
G0/G1,
no
proliferativas
aumentou
115
um
agente
antitumoral
de
efetividade
altamente
significativa.
116
Referncia Bibliogrfica:
7 - Referncia Bibliogrfica:
Melanoma:
reapraisal
of
prognostic
factors.
8 - Grichnik JM, Burch JA, Burchette J, Shea CR. - The SCF/KIT pathway plays a
critical role in the control of normal human melanocyte homeostasis.
J. Invest. Dermatol. 111:233-238, 1998.
9 - Pui CH, Behm FG, Christ WM. - Clinical and biologic relevance of
immunologia marker Studies in childhood acute lymphoblastic leukemia.
Blood, 82:323-380, 1993.
118
11 - Roberts DL, Anstey AV, Barlow RJ. - U.K. guidelines for the management of
cutaneous melanoma. Br. J. Dermatol. 146:7-17, 2002.
13 - Sober AJ, Chuang TY, Duvic M. - Guidelines of care for primary cutaneous
melanoma. J. Am. Acad. Dermatol. 45:579-586, 2001.
14 - Sondak VK, Taylor JM, Sabel MS. - Mitotic rate and younger age are
predictors of sentinel lymph node positivity: lessons learned from the generation
of a probabilistic model. Ann. Surg. Oncol. 11:247- 258, 2004.
15 - Balch CM, Buzaid AC, Soong SJ. - Final version of the American Joint
Committee
on
Cancer
staging
system
for
cutaneous
melanoma.
119
17 - Ward LS. - Molecular basis for the diagnosis and therapy of the thyroid
cancer. Rev. Bras. Clin. Terap. 26:103-7, 2000.
20 - Brodland DG. - The life of a skin cancer. Mayo Clin. Proc. 72:475-8. 1997.
22 - Castle CM, Skinner TC, Hampson SE. - Young women and suntanning: an
evaluation of a health education leaflet. Psychol. Health. 14:517-27, 1999.
23 - Coleman WP, Loria PR, Reed RJ, Krementz ET. - Acral lentiginous
melanoma. Arch. Dermatol. 116:773-6, 1980.
120
in
relationship
to
patterns
of
sun-exposure.
27 - MacKie RM, Hole DJ. Incidence and thickness of primary tumours and
survival of patients with cutaneous malignant melanoma in relation to
socioeconomic status. BMJ, 312:1125-8, 1996.
30 - Sober AJ, Chuang TY, Duvic M, et al. - Guidelines of care for primary
cutaneous melanoma. J Am Acad Dermatol, 45:579-586, 2001.
121
35 - Leist M, Nicotera P. The shape of cell death. Biochem Biophys Res Commun.
9:1-9, 1997.
36 - Kerr JF, Wyllie AH, Currie AR. Apoptosis: a basic biological phenomenon with
wide-ranging implications in tissue kinetics. Br J Cancer. 26:239-57, 1972.
122
40 - Verhagen A, Ekert PG, Pakusch M, Silke J, Connolly LM, Reid GE, Moritz RL,
Simpson RJ, Vaux DL.. Identification of DIABLO, a mammalian protein that promotes
apoptosis by binding to and antagonizing IAP proteins. Cell. 102: 43- 53, 2000.
41 - Rodrigues CMP, Linehan-Stieers C, Keene CD, Ma X, Kren BT, Low WC, Steer
CJ.Tauroursodeoxycholic acid partially prevents apoptosis induced by 3-nitropropionic
acid: evidence for a mitochondrial pathway independent of the permeability transition.
J. Neurochem. 75: 23:68 - 79, 2000.
45 - Folsch G, Osterberg R. The apparent acid ionization constants of some Ophosphorylated peptides and related compounds. Biol Chem. 234:2298-303, 1959.
123
series
of
metal
complexes
of
the
sodium
salts
of
Crystallization of
Thermodynamic
51 - Perry TL, Berry K, Hansen S, Diamond S, Mok C. Related Articles, Links Regional
distribution of amino acids in human brain obtained at autopsy. J Neurochem. 18:5139, 1971.
52 - Corazzi L, Porcellati G, Freydz L, Binaglia L, Roberti, R. Arienti, G. Ethanolamine
base-exchange reaction in rat brain microsomal subfractions. J. Neurochem.
46:202-207, 1986.
124
into
the
phospholipids
of
isolated
brain
microsomes.
J Neurochem.18:1395-417,1971.
57 - Ellison DW, Beal MF, Martin JB. Phosphoethanolamine and ethanolamine are
decreased
in
Alzheimer's
disease
and
Huntington's
disease.
58 - Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application
to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 65:55-63, 1983.
125
cells
and
its
relation
to
chromosome
breakage.
126
68 - Stebel M, Vatta P, Ruaro ME, Del Sal G, Parton RG & Schneider C. The
growth suppressing gas1 product is a GPI-linked protein. FEBS Letters.
481: 152-158. 2000.
and
venous
smooth
cells:
differential
regulation
by
COX-2.
127
128
129
130
132
133