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NORMA CHILENA
NCh3044/1-2006
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004
Prembulo
El Instituto Nacional de Normalizacin, INN, es el organismo que tiene a su cargo el
estudio y preparacin de las normas tcnicas a nivel nacional. Es miembro de la
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION
PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos
organismos.
Esta norma se estudi a travs del Comit Tcnico Ensayos en leche, para especificar
un mtodo de ensayo para la determinacin del contenido de nitritos y nitratos en leche
y productos lcteos, mediante reduccin por cadmio y espectrometra.
Esta norma es idntica a la versin en ingls de la Norma Internacional
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004 (E) Milk and milk products - Determination of
nitrate and nitrite contens - Part 1: Method using cadmium reduction and spectrometry.
La Nota Explicativa incluida en un recuadro en clusula 2 Referencias normativas y Anexo
Bibliografa, es un cambio editorial que se incluye con el propsito de informar la
correspondencia con norma chilena de las normas internacionales citadas en esta norma.
La norma NCh3044/1 ha sido preparada por la Divisin de Normas del Instituto Nacional
de Normalizacin, y en su estudio el Comit estuvo constituido por las organizaciones y
personas naturales siguientes:
Instituto Nacional de Normalizacin, INN
Nestl Chile S.A.
NCh3044/1
En forma adicional a las organizaciones que participaron en Comit, el Instituto recibi
respuesta durante el perodo de consulta pblica de esta norma, de las entidades
siguientes:
Universidad de Santiago de Chile
Vialat S.A.
El Anexo A no forma parte de la norma, se inserta slo a ttulo informativo.
II
NCh3044/1
Contenido
Pgina
Prembulo
Alcance
Referencias normativas
Trminos y definiciones
Principio
Reactivos
Aparatos
Muestreo
8.1
8.2
Casena y caseinatos
8.3
Queso
8.4
Queso de suero
Procedimiento
9.1
9.2
9.3
Regeneracin de la columna
10
9.4
10
III
NCh3044/1
Contenido
Pgina
9.5
Extraccin y desproteinizacin
11
9.6
12
9.7
Ensayo en blanco
12
9.8
Determinacin
12
9.9
13
10
13
10.1
Contenido de nitrito
13
10.2
Contenido de nitrato
14
11
Precisin
15
11.1
General
15
11.2
Repetibilidad
15
12
Informe de ensayo
17
19
Anexos
Figuras
Figura 1 Columna de reduccin
IV
18
NORMA CHILENA
NCh3044/1-2006
ISO 14673-1:2004 (4)/IDF 189-1:2004
1 Alcance
Esta parte de la norma especifica un mtodo de ensayo para la determinacin del
contenido de nitratos y nitritos en leche y productos lcteos, mediante reduccin por
cadmio y espectrometra.
El mtodo es aplicable a:
-
queso procesado;
NCh3044/1
2 Referencias normativas
Los siguientes documentos referenciales son indispensables para la aplicacin de este
documento. Para referencias fechadas, se aplica slo la edicin citada. Para referencias
no fechadas se aplica la ltima edicin del citado documento, (incluidas las enmiendas).
ISO 565
ISO 648
ISO 835-1
ISO 1042
Test sieves - Metal wire cloth, perforated metal plate and electroformed
sheet - Nominal sizes of openings.
Laboratory glassware - One-mark pipettes.
Laboratory glassware - Graduated pipettes - Part 1: General requirements.
Laboratory glassware - One-mark volumetric flasks.
Norma nacional
Grado de correspondencia
ISO 565
No hay
ISO 648
No hay
ISO 835-1
No hay
ISO 1042
No hay
3 Trminos y definiciones
Para los propsitos de este documento se aplican los trminos y definiciones siguientes:
3.1 contenido de nitrato: fraccin de masa de nitrato, determinada por el procedimiento
especificado en esta norma
NOTA - El contenido de nitrato se expresa como masa en miligramos de iones nitrato (NO3) por kilogramo
de producto.
NCh3044/1
4 Principio
Una porcin de ensayo es dispersada en agua caliente, con precipitacin de grasas y
protenas, y luego filtrada. Los iones nitrato son reducidos a iones nitritos en una
porcin del filtrado, por medio de cadmio cuprizado.
Por la adicin de sulfanilamida y N-1- naftil etilendiamina dihidrocloruro, se desarrolla un
color rojo, tanto del filtrado no reducido, como de la solucin reducida. Las mediciones
espectromtricas se realizan a una longitud de onda de 538 nm.
El contenido de nitrito de la muestra y el contenido total de nitrito despus de la
reduccin de los iones nitratos, se calcula por comparacin de las absorbancias
medidas, con aquellas de un set de soluciones de calibracin de nitrito de sodio. El
contenido de nitrato se calcula a partir de la diferencia entre estos dos contenidos.
5 Reactivos
Usar solamente reactivos de reconocido grado analtico, salvo especificaciones en otro
sentido.
5.1 Agua, destilada o desionizada, o agua de pureza equivalente, libre de iones nitrato y
nitrito.
Para evitar la posible inclusin de pequeas burbujas de gas en la columna de cadmio
cuprizado (ver 9.1.6) hervir suavemente el agua destilada o desionizada y enfriarla a
temperatura ambiente. Usar el agua as preparada para la preparacin de la columna
(ver 9.1), para comprobar la capacidad de reduccin de la columna (ver 9.2) y para
regenerar la columna (ver 9.3).
5.2 Grnulos de cadmio, de 0,3 mm a 0,8 mm de dimetro.
Preparar los grnulos de cadmio, si no estn disponibles comercialmente, como sigue:
Colocar una cantidad apropiada de varillas de zinc en un vaso de precipitado. Cubrir las
varillas con una solucin de sulfato de cadmio (ver 5.3). Raspar la capa de cadmio de
las varillas, ocacionalmente, por un perodo de 24 h. Retirar las varillas de zinc y dejar
decantar el residuo de cadmio formado. Dejar agua suficiente para cubrir la capa de
cadmio. Lavar dos o tres veces el residuo de cadmio con agua. Transferir la capa de
cadmio a un mezclador de laboratorio, junto con 400 ml de solucin de trabajo de cido
clorhdrico (ver 5.7) y mezclar durante unos pocos segundos para obtener grnulos del
tamao requerido. Devolver el contenido del mezclador al vaso de precipitado y dejarlo
en reposo por varias horas, revolviendo ocasionalmente para eliminar burbujas. Retirar la
mayora del lquido e inmediatamente, cuprizar los grnulos, como se describe en 9.1.
PRECAUCION - A causa de su toxicidad, el cadmio utilizado debiera ser enviado como
desecho qumico a las autoridades pertinentes.
NCh3044/1
5.3 Solucin de sulfato de cadmio, c (CdSO4 x 8H2O) = 40g/L.
Disolver 40 g de solucin de sulfato de cadmio en agua, en un matraz volumtrico
de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.4 Solucin de sulfato de cobre (II), c (CuSO4 x 5H2O) = 20g/L.
Disolver 20 g de sulfato de cobre (II) en agua, en un matraz volumtrico de 1 000 ml
(ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.5 Acido clorhdrico, (HCl), (20=1,19 g/ml)
5.6 Acido clorhdrico diluido, c (HCl) 2 mol/L
Agregar cuidadosamente 160 ml de cido clorhdrico (ver 5.5) a aproximadamente
700 ml de agua, en un matraz volumtrico de 1 000 ml (ver 6.4) agitando regularmente
el contenido. Enfriar el contenido a temperatura ambiente. Diluir con agua hasta el aforo
y mezclar cuidadosamente.
5.7 Solucin de trabajo de cido clorhdrico, c (HCl) 0,1 mol/L.
Agregar 50 ml de cido clorhdrico diluido (ver 5.6) a un matraz volumtrico de
1 000 ml. Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.8 Solucin de sulfato de zinc, c (ZnS04 x 7H2O) = 535 g/L.
Disolver 53,5 g de sulfato de zinc en agua, en un matraz volumtrico de 100 ml
(ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.9 Solucin de potasio hexacianoferrato (II), c (K4[Fe (Cn)6] x 3H2O) = 172 g/L.
Disolver 17,2 g de hexacianoferrato de potasio trihidratado (II), en agua, en un matraz
volumtrico de 100 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
5.10
Solucin
de
disodio
(Na2C10H14N2O8 x 2H2O)
etilendiamina
tetraacetato
dihidratado
(EDTA),
5.11 Solucin I
Cuidadosamente agregar 450 ml de cido clorhdrico (ver 5.5) en un matraz volumtrico
de 1 000 ml (ver 6.4). Diluir con agua hasta el aforo y mezclar.
NCh3044/1
5.12 Solucin II
Disolver por calentamiento en un bao de agua (ver 6.15), 0,5 g de sulfanilamida
(NH2C6H4SO2NH2) en una mezcla de 75 ml de agua y 5 ml de cido clorhdrico (ver 5.5)
en un matraz volumtrico de 100 ml (ver 6.4). Enfriar a temperatura ambiente. Diluir
con agua hasta el aforo y mezclar. Filtrar la solucin obtenida, si es necesario.
NCh3044/1
5.18 Solucin de amonaco, (NH3), (20 = 0,91 g/ml)
Si no se dispone de una solucin de amonaco de la concentracin antes mencionada,
en 5.19 se puede utilizar una cantidad equivalente de una solucin de amonaco ms
concentrada [por ejemplo, 103 ml de una solucin de amonaco de 35% (fraccin de
masa), (20 =1,19 g/ml)].
6 Aparatos
Limpiar cuidadosamente todo el material de vidrio y enjuagar con agua destilada para
asegurarse que est libre de iones nitritos y nitratos.
Equipamiento usual de laboratorio y en particular el siguiente:
6.1 Balanza analtica, capaz de pesar con una exactitud de 1 mg, con lectura de 0,1 mg.
6.2 Contenedor de muestra, provisto de tapa hermtica.
6.3 Matraces cnicos, de 250 ml, 500 ml y 1 000 ml de capacidad.
6.4 Matraces volumtricos, de 100 ml, 500 ml, y 1 000 ml de capacidad nominal, que
cumplan con los requisitos de ISO 1042, clase B.
6.5 Pipetas, capaces de entregar 2 ml, 4 ml, 5 ml, 6 ml, 8 ml,10 ml, 12 ml, 20 ml y
25 ml, que cumplan con los requisitos de ISO 648 clase A, o ISO 835-1. Cuando sea
apropiado, se puede utilizar buretas en lugar de pipetas.
6.6 Cilindros de medicin, de 5 ml, 10 ml, 25 ml, 100 ml, 250 ml, 500 ml y 1 000 ml
de capacidad.
6.7 Embudos de vidrio, de 7 cm de dimetro, con vstago corto.
6.8 Papel filtro, grado medio, de dimetro aproximado de 15 cm, libre de iones nitrato y
nitrito.
6.9 Columna de reduccin, hecha de vidrio, un ejemplo de la cual se muestra en Figura 1.
6.10 Espectrmetro, adecuado para medir absorbancia en una longitud de onda de
538 nm, con celdas de trayectoria ptica de 1 cm a 2 cm de longitud.
NCh3044/1
6.11 Dispositivo de molienda, adecuado para moler la muestra de ensayo, si es
necesario. Para evitar prdidas de humedad, el dispositivo no debe producir calor
indebido. No se debe usar molino de martillo.
6.12 Mezclador de laboratorio u homogeneizador, con contenedores de vidrio de 250 ml
o 400 ml de capacidad, apropiados para poner en suspensin porciones de ensayo de
queso o queso de suero.
6.13 Tamiz de ensayo, de tejido de malla metlica de 200 mm de dimetro, aberturas de
tamao nominal de 500 m y un recipiente que cumpla con los requisitos de ISO 565.
6.14 Agitador magntico.
6.15 Bao de agua, capaz de hervir agua.
6.16 Horno, capaz de mantener la temperatura entre 110C y 120C.
7 Muestreo
El muestreo no es parte del mtodo especificado en esta norma. Un mtodo de
muestreo recomendado se indica en ISO 707.
Es importante que el laboratorio reciba una muestra que sea realmente representativa y
que no haya sido daada o cambiada durante el transporte o almacenamiento.
Almacenar la muestra de ensayo de tal modo que se prevenga deterioro o cambios en la
composicin.
NCh3044/1
8.2.3 Si la muestra de ensayo no pasa completamente a travs del tamiz, usar el
dispositivo de molienda (ver 6.11) para conseguir tal condicin. Inmediatamente
transferir el total de la muestra de ensayo tamizada al contenedor de muestra (ver 6.2) y
mezclar cuidadosamente en el contenedor cerrado. Durante esas operaciones, tomar
precauciones para evitar cualquier cambio en el contenido de agua del producto.
8.2.4 Despus que la muestra de ensayo haya sido preparada, proceder con la
preparacin de la porcin de ensayo (ver 9.4) tan pronto como sea posible.
8.3 Queso
8.3.1 Antes de los anlisis, remover la corteza o capa superficial mohosa de la muestra
de ensayo, de modo de proporcionar una muestra de ensayo representativa del queso
como es generalmente consumido.
8.3.2 Moler la muestra de ensayo mediante un dispositivo apropiado (ver 6.11). Mezclar
la masa molida rpidamente y si es posible, moler una segunda vez y nuevamente
mezclar cuidadosamente. Limpiar el dispositivo despus de la molienda de cada muestra.
Si la muestra de ensayo no puede ser molida, mezclarla cuidadosamente revolviendo y
amasando intensamente.
8.3.3 Tan pronto como sea posible despus de la molienda, transferir la muestra de
ensayo a un contenedor de muestra (ver 6.2) hermtico para esperar la determinacin,
la cual preferentemente se debiera hacer inmediatamente. Si es inevitable una demora,
tomar todas las precauciones para asegurar adecuada conservacin de la muestra de
ensayo y para prevenir la acumulacin de humedad en la superficie interior del
contenedor.
8.3.4 No examinar queso molido que muestre crecimiento no deseado de mohos o que
se empiece a deteriorar.
9 Procedimiento
9.1 Preparacin de la columna de cadmio cuprizado
9.1.1 Transferir una cantidad de grnulos de cadmio (ver 5.2) de 40 g a 60 g por cada
columna a un matraz cnico de 250 ml (ver 6.3). Agregar suficiente solucin de trabajo
de cido clorhdrico (ver 5.7) para cubrir el cadmio. Agitar por algunos minutos.
9.1.2 Decantar la solucin (ver 9.1.1). Lavar el cadmio en el matraz cnico con agua
hasta que est libre de iones cloruro (es decir, hasta que la reaccin con nitrato de plata
sea negativa).
NCh3044/1
9.1.3 Cuprizar los grnulos de cadmio agregando la solucin de sulfato de cobre (II)
(ver 5.4), de la cual se requiere aproximadamente 2,5 ml de solucin cprica por gramo
de cadmio. Agitar durante 1 min.
9.1.4 Decantar la solucin (ver 9.1.3) y lavar el cadmio cuprizado inmediatamente con
agua, teniendo cuidado que el cadmio est continuamente cubierto con agua. Terminar
el lavado cuando el agua de lavado est libre de cobre precipitado.
9.1.5 Ajustar un tapn de lana de vidrio al fondo de la columna de vidrio (ver 6.9)
destinado a contener el cadmio cuprizado (ver Figura 1). Llenar la columna de vidrio con
agua.
9.1.6 Transferir el cadmio cuprizado a la columna de vidrio con una mnima exposicin
al aire. La altura del cadmio cuprizado debe ser de 15 cm a 20 cm. Evitar burbujas de
aire atrapadas entre los grnulos de cadmio cuprizado. El nivel del lquido no debe
descender por debajo de la parte superior del cadmio cuprizado.
9.1.7 Acondicionar la columna recin preparada haciendo correr a travs de ella, una
mezcla de 750 ml de agua, 225 ml de solucin de trabajo de nitrato de potasio
(ver 5.17), 20 ml de solucin tampn (ver 5.19) y 20 ml de solucin EDTA (ver 5.10), a
una velocidad que no exceda 6 ml/min. Lavar la columna con 50 ml de agua.
NCh3044/1
9.2.6 Calcular el porcentaje de capacidad de reduccin de la columna (0,067 g de NO2
por mililitro corresponde a 100% de capacidad reductora) a partir del contenido de nitrito
obtenido en 10.1 del eluyente diluido (ver 9.2.5) y determinado del grfico de calibracin
(ver 9.9.4). Si la capacidad de reduccin es menor de 95%, regenerar la columna como se
especifica en 9.3.
10
NCh3044/1
9.4.3 Casenas
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.2). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C y 10 ml de solucin tampn (ver 5.19). Dispersar
la porcin de ensayo mediante agitacin utilizando el agitador magntico (ver 6.14).
9.4.4 Caseinatos
Pesar, con una exactitud de 0,1 mg, aproximadamente 2 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.2). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente a un matraz
cnico de 500 ml (ver 6.3). Agregar progresivamente a la porcin de ensayo, 136 ml de
agua precalentada entre 50C y 55C y 10 ml de solucin tampn (ver 5.19). Dispersar
la porcin de ensayo mediante agitacin utilizando el agitador magntico (ver 6.14).
9.4.5 Queso
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 10 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.3). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente al contenedor de
vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6.12). Agregar progresivamente a
la porcin de ensayo, 144 ml de agua precalentada entre 50C y 55C. Mezclar en el
mezclador u homogeneizador (ver 6.12) hasta que la porcin de ensayo est bien
suspendida.
9.4.6 Queso de suero
Pesar, con una exactitud de 1 mg, aproximadamente 5 g de la muestra de ensayo
preparada (ver 8.4). Transferir la porcin de ensayo cuantitativamente al contenedor de
vidrio del mezclador u homogeneizador de laboratorio (ver 6.12). Agregar
progresivamente a la porcin de ensayo, 134 ml de agua precalentada entre 50C y
55C. Mezclar en el mezclador u homogeneizador (ver 6.12) hasta que la porcin de
ensayo est bien dispersada.
11
NCh3044/1
9.5.1.2 Es esencial obtener un filtrado claro dentro del tiempo especificado. Para este
propsito puede ser necesario utilizar un mayor volumen de cada reactivo de
precipitacin (ver 5.8 y 5.9) (por ejemplo, si es analizado un queso bien maduro).
Reducir el volumen del agua precalentada, ajustndose a la necesidad de mantener el
volumen de filtrado en aproximadamente 200 ml.
NOTA - El volumen total del filtrado debe ser de aproximadamente 200 ml. Este volumen es asumido en los
clculos (ver 10.1 y 10.2).
9.5.2 Queso
Agregar a la porcin de ensayo (ver 9.4.5) en el orden siguiente, 6 ml de solucin de
sulfato de zinc (ver 5.8), 6 ml de solucin de hexacianoferrato de potasio (II) (ver 5.9) y
40 ml de solucin tampn (ver 5.19), agitar cuidadosamente despus de cada adicin y
mezclar. Para obtener un filtrado claro dejar la mezcla en el contenedor de vidrio por al
menos 15 min, pero no por ms de 1 h. Luego pasar a travs de un papel filtro
(ver 6.8), recogiendo el filtrado en un matraz cnico de 250 ml (ver 6.3) (ver 9.5.1.2
y Nota).
9.8 Determinacin
9.8.1 Colocar volmenes iguales (por ejemplo 25 ml) del filtrado obtenido en 9.5.1
9.5.2 y del eluyente (ver 9.6.3) en matraces volumtricos de 100 ml separados
(ver 6.4). Agregar agua a cada uno de los matraces para obtener un volumen de
aproximadamente 60 ml y mezclar.
12
NCh3044/1
9.8.2 Agregar 6 ml de solucin I (ver 5.11) a la solucin del matraz (ver 9.8.1) y
seguidamente, 5 ml de solucin II (ver 5.12). Mezclar las soluciones cuidadosamente y
dejar el matraz durante 5 min a temperatura ambiente y protegido de la luz solar.
9.8.3 Agregar 2 ml de solucin III (ver 5.13) a la solucin del matraz (ver 9.8.2).
Mezclar nuevamente estas soluciones cuidadosamente y dejar el matraz por 5 min a
temperatura ambiente y protegido de la luz solar. Diluir con agua el contenido del matraz
hasta el aforo de 100 ml y mezclar.
9.8.4 Medir la absorbancia de la solucin obtenida en 9.8.3 en contraste con la del test
en blanco (ver 9.5) utilizando el espectrmetro (ver 6.10), a una longitud de onda
de 538 nm, en el plazo de 15 min.
N1 =
20 000 c1
mV
en que:
13
NCh3044/1
c1
100 000 c2
N1
mV
N 2 = 1,35
en que:
c2
100 000 c2
N 2 = 1,35
14
mV
100
N1
NCh3044/1
en que:
11 Precisin
11.1 General
Los valores para los lmites de repetibilidad y reproducibilidad se expresan para un nivel
del 95% de probabilidad y no pueden ser aplicables a rangos de concentracin y matrices
diferentes de aquellas dadas.
NOTA - Los valores para repetibilidad y reproducibilidad han sido adoptados de las antiguas normas
internacionales para la determinacin de contenido de nitrito y nitrato en productos lcteos, ISO 4099,
ISO 6736, ISO 6739, ISO 6740 e ISO 8195. Estas normas internacionales fueron anuladas y reemplazadas
por ISO 14673-1:2001.
11.2 Repetibilidad
11.2.1 Nitritos
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes, obtenidos
utilizando el mismo mtodo sobre idntico material, en el mismo laboratorio, por el mismo
operador, empleando el mismo equipamiento, dentro de un corto intervalo de tiempo ser,
en no ms del 5% de los casos, mayor que 1 mg/kg de producto.
11.2.2 Nitratos
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples independientes, obtenidos
utilizando el mismo mtodo sobre idntico material, en el mismo laboratorio, por el mismo
operador, empleando el mismo equipamiento, dentro de un corto intervalo de tiempo ser,
en no ms del 5% de los casos, mayor que:
- para leche deshidratada, suero deshidratado, casenas,
caseinatos y queso con un contenido de nitrato
< 30 mg/kg
3 mg/kg;
10% de la media
aritmtica de los
resultados;
15
NCh3044/1
- para queso
< 30 mg/kg
de
suero
con
un
contenido
de
nitrato
5 mg/kg;
- para queso
30 mg/kg
de
suero
con
un
contenido
de
nitrato
15% de la media
aritmtica de los
resultados.
11.2.3 Reproducibilidad
La diferencia absoluta entre dos resultados de ensayos simples, obtenidos utilizando el
mismo mtodo sobre idntico material de ensayo, en diferentes laboratorios, con
diferentes operadores empleando diferente equipamiento ser, en no ms del 5% de los
casos, mayor que:
- para leche deshidratada con un contenido de nitrato
< 30 mg/kg:
8 mg/kg;
25% de la media
aritmtica de los
resultados;
5 mg/kg;
15% de la media
aritmtica de los
resultados;
25% de la media
aritmtica de los
resultados;
6 mg/kg;
25% de la media
aritmtica de los
resultados;
- para suero de
< 30 mg/kg:
queso
con
un
contenido
de
nitrato
10 mg/kg;
- para suero de
30 mg/kg:
queso
con
un
contenido
de
nitrato
15% de la media
aritmtica de los
resultados.
16
NCh3044/1
12 Informe de ensayo
El informe de ensayo debe especificar:
17
NCh3044/1
18
NCh3044/1
Anexo A
(Informativo)
Bibliografa
[1]
Norma nacional
NCh1011/2
Grado de correspondencia
Equivalente
19