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Biologia Celular, 1 Semestre 2009/2010

Citoesqueleto

A forma e a polaridade
funcional de uma clula so
fornecidas por uma rede
tridimensional de protenas
filamentosas citoesqueleto.
O citoesqueleto estende-se por
toda a clula e est ligado
membrana plasmtica e aos
organelos internos.
O citoesqueleto muito
dinmico comprimento e
dinmica dos filamentos pode
variar grandemente.

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Citoesqueleto

O citoesqueleto composto por trs


sistemas filamentares principais, todos
eles organizados no tempo e no espao:
Microfilamentos (AF)
Microtbulos (MT)
Filamentos intermdios (IF)

Cada sistema filamentar composto por


um polmero de subunidades
agregadas.
g g

As subunidades que compem os


filamentos esto sujeitas a uma
montagem e desmontagem reguladas
a clula apresenta flexibilidade

Microfilamentos

Os microfilamentos so polmeros de
actina organizados em feixes e redes
funcionais por protenas de ligao
actina.

Estes componentes so importantes


na organizao da membrana
plasmtica, incluindo estruturas da
superfcie celular como os
microvilosidades.

Funcionam como pistas para


protenas motoras de miosina que por
aco do ATP transportam carga.

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Microtbulos

Os microtbulos so tubos longos


formados por tubulina e organizados
por p
p
protenas associadas aos
microtbulos.

Estendem-se por toda a clula,


fornecendo a rede organizativa dos
organelos a eles associados e o
suporte estrutural dos clios e dos
flagelos.

Motores moleculares cinesinas e


dinenas transportam cargo ao
longo dos microtbulos (energia
fornecida pela hidrlise do ATP).

Filamentos intermdios

Os filamentos intermdios so
estruturas filamentosas especficas de
determinados tecidos que
desempenham funes distintas:
Suporte estrutural membrana nuclear
Integridade estrutural s clulas
Funes estruturais e de barreira na

pele, cabelos e unhas.

No so conhecidos motores que


usem os filamentos intermedirios
como pista.

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Microfilamentos

Os microfilamentos podem
organizar-se em muitos tipos de
estruturas diferentes na clula
cada uma das estruturas
reflecte
f
uma funo
f
celular
particular:
Exemplos:
Constituir o centro das projeces

em forma de dedo da superfcie


celular microvilosidades

Organizar-se numa rede menos

ordenada crtex celular, abaixo


da membrana plasmtica
organizao e suporte

Numa das ltimas fases da

diviso celular citocinese formam o anel contrctil entre as


duas clulas filhas.

Microfilamentos - actina

O bloco de construo bsico dos microfilamentos a


actina.

A actina uma protena que apresenta a propriedade de


montagem reversvel num filamento polarizado como dois
terminais funcionalmente distintos.

Os filamentos de actina so fibras finas e flexveis com 7 nm


de dimetro e alguns m de comprimento.

Estes filamentos so moldados em estruturas diferentes por


protenas de ligao da actina
actina.

A actina uma protena ancestral, abundante e altamente


conservada.

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Actina

A actina existe como monmeros


globulares designados de Gactina e como polmeros
filamentosos designados de Factina (cadeia linear de
subunidades G-actina).

Cada molcula de actina


(monmero) contm um io Mg2+
complexado com ATP ou ADP.

Uma anlise por cristalografia de


raio-X revela que a G-actina se
encontra dividida por uma fissura
central
t l em 2 lb
lbulos
l d
de iiguall
tamanho e 4 subdomnios.

Os lbulos e a fissura compem o


local onde o ATP e o Mg2+ se
encontram ligados.

Actina

Quando o ATP se encontra


ligado G-actina existe uma
mudana da conformao
da protena.
A adio de caties a uma
soluo de G-actina induz a
polimerizao da G-actina
em F-actina.
Este processo reversvel
A F-actina
F actina despolimerizadespolimeriza
se quando a fora inica da
soluo reduzida.

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Actina

Em microscopia electrnica a
F-actina aparece como uma
corda dobrada cujo dimetro
varia entre 7 e 9 nm.

As subunidades de actina
esto organizadas num
estrutura helicoidal em que
cada filamento apresenta
duas cadeias helicoidais
enroladas uma na outra.

Todas as subunidades do
filamento de actina apontam
para o mesmo terminal do
filamento os filamentos
apresentam polaridade.

Actina

Um dos terminais
favorecido para a adio
de subunidades de actina
terminal (+)
O outro terminal
favorecido para a
dissociao do filamento
terminal (-)
No terminal (+), a fissura
de ligao ao ATP
contacta com subunidade
vizinha, enquanto que no
terminal (-), a fissura
exposta soluo
envolvente.

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Actina

A polaridade dos filamentos de actina foi demonstrada por


microscopia electrnica em experincias de decorao, que
exploram a capacidade da miosina (protena de ligao miosina) se
ligar especificamente aos filamentos de actina.
Os domnios S1 de miosina ligam-se s subunidades de actina numa orientao

em particular.

Quando ligados a todas as subunidades de um filamento (quando em excesso),

S1 aparece em espiral volta do filamento.

Esta cobertura de miosina produz uma sries de decoraes em forma de seta.


A polaridade na decorao define uma extremidade em ponta (-) e uma

extremidade barbada (+).

Dinmica dos filamentos de actina

O citoesqueleto de actina no esttico em muitas estruturas os


microfilamentos esto em crescimento ou em encolhimento.

A polimerizao in vitro de actina (com monmeros de actina num tampo com


ATP e nveis reduzidos de caties) ocorre em trs passos:

Fase de nucleao sub-unidades de G-actina combinam-se em olgomeros pequenos e


instveis. Quando o olgomero contm trs subunidades em comprimento, funciona como
um ncleo de polimerizao.

Fase de elongamento o ncleo aumenta rapidamente o comprimento do filamento por


adio de monmeros de actina a ambos os terminais.

Fase de estado estvel os monmeros de G-actina so trocados por subunidades nos


filamentos terminais, mas no ocorrem alteraes na massa total dos filamentos.

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Dinmica dos filamentos de actina

Os terminais dos filamentos de


actina crescem a taxas
diferentes a taxa de adio
de ATP-G-actina livre 10x
mais rpida no terminal (+) do
que no terminal (-).

Existe uma concentrao crtica


(Cc) de G-actina livre na qual a
montagem num terminal do
filamento contrabalanado
pela perda de G-actina.

Quando a concentrao de G
Gactina se encontra superior ao
Cc, o terminal do filamento ir
crescer; quando inferior ao Cc o
filamento ir diminuir de
tamanho.

Dinmica dos filamentos de actina

No estado estvel, a adio de


monmeros a uma extremidade
acompanhada pela sua
dissociao na extremidade
oposta
p
((fenmeno de treadmill).
)

A energia deste processo de


polimerizao / despolimerizao
advm da hidrlise do ATP:

Quando a ATP-G-actina se liga ao


terminal (+) o ATP hidrolisado em
ADP e Pi.

O Pi libertado aos poucos das


subunidades do filamento, de tal
forma que o filamento fica
assimtrico, com sub-unidades ATPactina no terminal (+),
( ) seguidos por
uma regio com ADP-Pi-actina e
subunidades ADP-actina perto do
terminal (-).

Aps a perda do Pi, a ADP-actina


dissocia-se do terminal (-).

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Drogas anti-microfilamentos

Algumas das drogas usadas em biologia


celular actuam ligando-se actina e
afectando a sua polimerizao:
Citocalasinas liga-se s extremidades

barbadas (+) dos filamentos de actina,


bloqueando o alongamento inibio de alguns
tipos de movimentos celulares.

Faloidina liga-se fortemente aos filamentos de

actina, prevenindo a sua dissociao em


molculas de actina individuais
(despolimerizao).

Dinmica dos filamentos de actina

A polimerizao e despolimerizao dos filamentos de actina


regulado por um grupo diverso de protenas de ligao actina.

Estas protenas podem regular a formao e a estabilidade do


citoesqueleto de actina a diversos nveis:
Ligao ao longo do filamento, estabilizando-o e permitindo a ligao com outros

filamentos

Ligao s regies terminais, estabilizado o filamento e prevenindo a sua

dissociao

Desmontagem dos filamentos de actina, por corte ou por promoo da

despolimerizao.

Ligao a G-actina e controlo da sua adio, regulando a troca de ATP por ADP.

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Dinmica dos filamentos de actina

Montagem e dinmica dos filamentos de actina

Nos passos iniciais necessrio que ocorra a nucleao os monmeros


de actina tm que interagir correctamente.

Dois tipos de protenas, formina e Arp2/3 (actin-related protein), determinam


onde os filamentos so formados na clula, por facilitarem a nucleao.

As forminas so protenas que esto envolvidas na nucleao dos monmeros


inicias de actina e movem-se ao longo do filamento em crescimento,
adicionando novos monmeros extremidade barbada (+).

As forminas promovem a montagem dos filamentos longos de actina.

Estes filamentos longos so relativamente estveis devido aco de


protenas estabilizadoras dos filamentos como a tropomiosina.

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Montagem e dinmica dos filamentos de actina

Os microfilamentos de
actina ramificam-se
activamente.

Estes microfilamentos
ramificados so nucleados
pelo complexo Arp2/3, que
se liga ATP-actina junto
da extremidade (+).

O complexo Arp2/3
composto por 7 protenas, 2
das quais muito similares
actina.

Este complexo liga-se a um


dos lados do filamento de
actina e forma um novo
ramo.

Montagem e dinmica dos filamentos de actina

Outro tipo de protenas


ligadoras actina modificam
filamentos existentes.

A ADF/cofilina uma factor de


d
despolimerizao
li
i
d
da actina
ti que
se liga aos filamentos de actina
e melhora a taxa de
dissociao dos monmeros
de ADP-actina na extremidade
(-).

Esta protena tambm pode


cortar os filamentos de actina.

Como esta protena se liga


preferencialmente ADPactina, permanece ligada aos
monmeros de actina aps a
desmontagem dos filamentos,
prevenindo a sua
reincorporao nos filamentos.

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Montagem e dinmica dos filamentos de actina

Outra protena profilina


pode reverter este efeito da
cofilina e estimular a
incorporao dos
monmeros de actina nos
filamentos.

A profilina estimula a troca


do ADP por ATP e este
passo leva dissociao
dos monmeros de ATPactina da cofilina.

Existe ainda outra protena Timosina-4 - que funciona


como um reservatrio de Gactina, fornecendo a Gactina apenas medida que
necessria.

Montagem e dinmica dos filamentos de actina

Finalmente existem
protenas que se ligam aos
terminais dos filamentos e
que formam um capuz que
bloqueia a montagem ou a
desmontagem e
consequentemente o
crescimento dos filamentos
de actina:
Duas classes de protenas:

Tropomodulina

Ligao ao terminal (+):

CapZ
p
Ligao ao terminal (-):

tropomodulina (associada
tropomiosina).

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Organizao dos filamentos de actina

Os filamentos individuais de actina so montados em 2 tipos


de estruturas feixes de actina e redes de actina que
desempenham papis distintos na clulas.

Nos feixes de actina, os filamentos de actina apresentam


ligaes cruzadas e organizam-se em feixes paralelos.

Nas redes de actina, os filamentos apresentam ligaes


cruzadas em estruturas ortogonais que formam uma malha
tridimensional.

Organizao dos filamentos de actina

As protenas que promovem as ligaes cruzadas em feixes


(protenas dos feixes de actina) so pequenas e rgidas, forando os
filamentos a ficarem alinhados uns com os outros:
Exemplo: fibrina

As protenas que organizam os filamentos de actina em redes so


grandes e flexveis, permitindo as ligaes cruzadas entre filamentos
perpendiculares.
Exemplo: filamina

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Papel da actina no movimento celular

Os filamentos de actina associados


com a miosina so responsveis por
muitos tipos de movimentos celulares.

A miosina um motor molecular


protena que converte energia qumica
na forma de ATP em energia mecnica,
gerando fora e movimento.

O tipo de miosina que foi primeiro


estudada (nos msculos) a miosina
II protena de grandes dimenses
que consiste em duas cadeias pesadas
idnticas e dois pares de cadeias
pequenas.

Cada cadeia pesada consiste num


regio da cabea globular e uma longa
cauda -helicoidal. As caudas das
duas cadeias pesadas enrolam-se uma
na outra formando um dmero e duas
cadeias leves associam-se com o
pescoo da regio da cabea.

Papel da actina no movimento celular

As cabeas globulares da
miosina ligam a actina. Para
alm disso ligam e hidrolisam
ATP, que fornece a energia
para que o filamento deslize.

O modelo actualmente aceite


sugere que a hidrlise de ATP
permite ciclo repetidos de
interaces entre as cabeas
da miosina e a actina.

Durante cada ciclo ocorrem


mudanas conformacionais na
miosina que resultam no
movimento das cabeas de
miosina ao longo dos
filamentos de actina.

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Papel da actina no movimento celular

O ciclo comea com a


miosina levemente ligada
actina (na ausncia de ATP).

A ligao de ATP dissocia o


complexo miosina-actina.

A hidrlise de ATP induz uma


mudana conformacional na
miosina afecta a regio do
pescoo da miosina que liga
as cadeias leves
leves.

Papel da actina no movimento celular

Os produtos da hidrlise (ADP


e Pi) permanecem ligados
cabea da miosina.

A cabea da miosina religa-se


a uma nova posio do
filamento de actina o que leva
libertao do Pi.

O ADP libertado e a cabea


da miosina regressa sua
conformao inicial.
inicial

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Papel da actina no movimento celular

Para alm da miosina II


encontrada nas clulas
musculares, existem outros tipos
de miosinas nas clulas no
musculares.

Estes tipos de miosinas, no


apresentam caudas com
capacidade para formar
estruturas enroladas e por isso
no esto envolvidas na
contraco.

Contudo, so importantes numa


Contudo
variedades de movimentos
celulares transporte de
vesculas membranares e
organelos ao longo dos
filamentos de actina e na
fagocitose.

Papel da actina no movimento celular

A miosina I contm uma


cabea globular que actua
como motor molecular, e uma
cauda muito mais curta do que
a presente na miosina II.

Esta cauda mais pequena ligase a outras estruturas


membrana das vescula ou de
organelos.

O movimento da miosina I ao
longo do filamento de actina,
transporta a carga que est
ligada cauda curta da
miosina I.

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Filamentos intermdios

Os filamentos intermdios
apresentam dimetro entre
os 8 e 11 nm.
Contrariamente aos
filamentos de actina e
microtbulos os filamentos
intermdios no esto
directamente envolvidos com
os movimentos celulares.
Estes filamentos
desempenham um papel
importante ao nvel
estrutural, fornecendo fora
mecnica s clulas e
tecidos.

Filamentos intermdios

Os filamentos intermdios so compostos por um conjunto


variado de protenas, expressas em diferentes tipos de
clulas.

J foram identificadas mais de 65 protenas diferentes,


classificadas em 6 tipos de acordo com similaridades na
sequncia de a.a.

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Filamentos intermdios

Tipos I e II dois grupos de queratinas


Expressas nas clulas epiteliais
Cada tipo de clula epitelial sintetiza pelo

menos uma queratina do tipo I (acdica) e


uma do tipo II (neutra/bsica), que copolimerizam para formar filamentos.

Alguns tipos de queratinas (I e II) so

usadas na produo de estruturas como


cabelos, unhas e cornos.

Tipo III vimentina e desmina (clulas


musculares)

Tipo IV protenas neurofilamentosas


(NF) encontradas nos neurnios
neurnios.

Tipo V lminas nucleares

Tipo VI nestina (expressas durante o


desenvolvimento embrionrio em
diversos tipos de clulas estaminais).

Filamentos intermdios

Apesar de variarem bastante em tamanho e sequncia


de a.a., todas as protenas dos filamentos intermdios
partilham uma estrutura organizativa comum:
Haste
H t central
t l com uma estrutura
t t
em -hlice
hli com 310 a 350

a.a. importante na montagem do filamento.

Esta haste flanqueada pelos terminais amnico (cabea) e

carboxlico (cauda) que variam entre os diferentes


filamentos intermdios em tamanho e na estrutura e
sequncia secundria importante na determinao da
funo especfica de cada tipo de filamento intermdio.

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Montagem dos filamentos intermdios

A montagem dos
filamentos intermdios
comea com a formao
de dmeros, nos quais as
hastes centrais de duas
cadeias polipeptdicas se
enrolam uma na outra,
numa estrutura similar s
cadeias pesadas da
miosina II.

Os dmeros de filamentos
intermdios associam
associam-se
se
de uma forma anti-paralela
em tetrmeros, que por
sua vez interagem
terminal-terminal para
formar protofilamentos.

Montagem dos filamentos intermdios

A interaco de oito
protofilamentos
enrolados uns nos
outros formando uma
estrutura em forma de
corda filamento.
Uma vez que so
constitudos por
tetrmeros antiparalelos, os dois
terminais dos filamentos
intermdios so
equivalentes e apolares.

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Montagem dos filamentos intermdios

Os filamentos intermdios so mais estveis


do que os filamentos
a e tos de act
actina
a e microtbulos
c otbu os
e no exibem um comportamento dinmico.

Contudo, as protenas dos filamentos


intermdios so frequentemente modificadas
por fosforilao, o que pode regular a sua
montagem e desmontagem na clula.
Exemplo: fosforilao das lminas nucleares

dissociao da lmina nuclear e quebra do invlucro


nuclear durante a mitose.

Microtbulos

Os microtbulos so hastes
ocas com cerca de 25 nm de
dimetro.

So estruturas dinmicas
que sofrem uma contnua
montagem e desmontagem
na clula.

Funcionam quer na
determinao da forma da
clula, quer numa variedade
de movimentos celulares
locomoo celular,
transporte intracelular de
organelos e separao dos
cromossomas durante a
mitose.

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Microtbulos - estrutura

Os microtbulos so compostos por


um nico tipo de protenas globulares
tubulina.

O blocos
Os
bl
d
de construo
t d
dos
microtbulos so dmeros de tubulina
compostos por 2 polipeptdeos
relacionados com 55 kd : -tubulina e
-tubulina.

Os dmeros de tubulina polimerizamse para formar os microtbulos


constitudos por 13 protofilamentos
montados volta de um centro oco.

Os protofilamentos so compostos
por conjuntos de dmeros de tubulina
paralelos e com uma cabea e uma
cauda estruturas polares que
determinam a direco do movimento
ao longo dos microtbulos.

Microtbulos - dinmica

Os dmeros de tubulina podem polimerizar e despolimerizar e, assim, os


microtbulos podem sofrer ciclos rpidos de montagem e desmontagem.

Ambos os tipos de tubulina, ligam-se ao GTP, que funciona de forma anloga


ao ATP ligado actina para regular a polimerizao.

Em particular, o GTP ligado -tubulina hidrolisado em GDP durante ou


pouco depois da polimerizao. Esta hidrlise enfraquece a afinidade da ligao
da tubulina a molculas adjacentes favorecimento da despolimerizao.

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Microtbulos - dinmica

Tal como os filamentos de actina, os microtbulos sofrem treadmilling:


Comportamento dinmico em que as molculas de tubulina ligadas ao GDP so

continuamente perdidas do terminal (-) e substitudas pela adio de molculas


de tubulina ligadas ao GTP no terminal (+) do mesmo microtbulo.

O terminal ((-)) cresce mais devagar do que o terminal (+)


(+).
O treadmilling ocorre a concentraes dos dmeros de tubulina intermedirias

entre as concentraes crticas para os terminais (+) e (-).

Estado estvel

Microtbulos - dinmica

Nos microtbulos, a hidrlise rpida


de GTP resulta num
comportamento conhecido por
instabilidade dinmica em que
microtbulos individuais alternam
entre ciclos de crescimento e
encolhimento.

Se um microtbulos cresce ou
encolhe determinado em parte
pela taxa de adio de tubulina
relativa taxa de hidrlise de GTP:

Enquanto foram adicionadas novas


molculas de tubulina-GTP os
microtbulos retm um capuz de GTP
no terminal (+) e o crescimento do
microtbulo continua
continua.

Se a taxa de polimerizao diminuir, o


GTP ligado tubulina no terminal (+)
ser hidrolisado em GDP. Se isso
ocorrer, a GDP-tubulina ir dissociarse, resultando na rpida
despolimerizao e encolhimento dos
microtbulos.

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Microtbulos - dinmica

Drogas microtubulares

A propriedade de instabilidade dinmica dos


microtbulos crtica na remodelao do
citoesqueleto que ocorre durante a mitose.
Por causa deste papel central dos microtbulos,
drogas que afectem a montagem dos microtbulos
so importantes ferramentas experimentais com
aplicaes ao nvel do tratamento do cancro.
Entre estas drogas podemos encontrar:
Colquicina e colcemida ligam-se tubulina e inibem a

polimerizao dos microtbulos bloqueia a mitose.

Vimblastina inibem selectivamente clulas com

elevadas taxas de diviso (agente anticancergeno).

Taxol estabiliza os microtbulos em vez de inibir a sua

montagem. Esta estabilizao tambm bloqueia a diviso


celular (agente anticancergeno).

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Montagem dos microtbulos

Todos os microtbulos so
nucleados a partir de
estruturas conhecidas
como centros
organizadores de
microtbulos (MTOCs).
Na maior parte dos casos o
terminal (-) permanece
ancorado no MTOCs.
Nas clulas animais no
mitticas (interfsicas) o
MTOC conhecido como
centrossoma e encontra-se
localizado junto ao ncleo.

Montagem dos microtbulos

Durante a mitose, os
microtbulos afastam-se
dos centrossomas
(duplicados) para formar o
fuso acromtico, que
responsvel pela
separao e distribuio
dos cromossomas pelas
clulas filhas.
As clulas vegetais no
apresentam centrossomas;
os microtbulos

afastam-se
f
a partir do ncleo.

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Montagem dos microtbulos

O centrossoma o local de
iniciao da montagem de
microtbulos, que crescem, num
conjunto radial com os terminais (+)
( )
orientados para a periferia da
clulas.

A iniciao do crescimento dos


microtbulos nos centrossomas
estabelece a polaridade dos
microtbulos na clula.

Em clulas animais, os
centrossoma consiste num par de
centrolos cilindricos (orientados
perpendicularmente um ao outro)
rodeados por material
aparentemente amorfo material
pericentriolar.

Centrolos

Os centrolos so estruturas
cilndricas altamente
organizadas e estveis que
so compostas por 9
conjuntos
j t de
d tripletos
t i l t de
d
microtbulos.

No so os centrolos que
iniciam a nucleao dos
microtbulos mas factores
do material pericentriolar.

Um componente importante
o complexo em anel de tubulina.

Este complexo proteico


consiste em mltiplas cpias
de -tubulina, associada
com outras protenas.

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Montagem dos microtbulos

O complexo de -tubulina
funciona como um molde para
ligar dmeros de tubulina
para a formao de um novo
microtbulo a taxa de
crescimento neste ponto
muito rpida.

Depois de montados, os
microtbulos podem ser
libertados deste centro e
organizar-se noutros locais da
clula.

As clulas podem iniciar


microtbulos na ausncia do
centrossoma,
t
uma vez que a
-tubulina tambm
encontrada no citosol.

Nas clulas vegetais a tubulina encontra-se


concentrada na periferia do
ncleo.

Organizao dos microtbulos nas clulas

Devido sua instabilidade inerente, microtbulos no


modificados seriam frequentemente desmontados nas
clulas.
Contudo, a estabilidade dos microtbulos modulada
quer por extensas modificaes ps-traducionais da
tubulina quer por interaces dos microtbulos com
protenas associadas com os microtbulos (MAPs).
As modificaes ps-traducionais incluem fosforilao,
acetilao, remoo de tirosinas no terminal-C ou adio
de mltiplas
p
glutaminas e g
g
glicinas estas modificaes

afectam directamente o comportamento dos microtbulos


ou fornecem locais de ligao de MAPs especficas.
A actividade de muitas MAPs regulada por fosforilao,
o que permite clula controlar a estabilidade dos
microtbulos.

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10122009

Organizao dos microtbulos nas clulas

Tal como nos microfilamentos, algumas das MAPs estabilizam os


microtbulos atravs da adio de um capuz nos terminais (+) e (-), enquanto
outras actuam na desmontagem dos microtbulos, quer por corte (catanina)
quer p
q
por aumento da taxa de despolimerizao
p
da tubulina ((Op18).
p )

Outras MAPs so protenas de deteco dos terminais (+), que se ligam


GTP-tubulina e guiam microtbulos em crescimento para localizaes
celulares especficas.

Organizao dos microtbulos nas clulas

A estrutura das MAP estabilizadoras


consiste em dois domnios domnio
bsico de ligao ao microtbulo e
domnio com p
projeco
j acdica.

Este brao pode ligar-se s membranas,


filamentos intermdios ou outros
microtbulos, e o seu comprimento
determina quo espaados se encontram
os microtbulos.

O domnio de ligao ao microtbulo


contm algumas repeties de uma
sequncia conservada, carregada
positivamente e composta por 4 a.a. que
se ligam ao terminal-C carregado
negativamente da tubulina.

Este ligao neutraliza a repulso de


cargas entre subunidades de tubulinas
num microtbulo estabilizao do
polmero.

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Motores dos microtbulos e movimento

Tal como nos filamentos de actina os


movimentos celulares atravs dos microtbulos
efectuam-se por:
Polimerizao e despolimerizao dos microtbulos
Aco de protenas motoras que usam a energia da

hidrlise do ATP para produzir fora e movimento.

Os membros de 2 grandes famlias de protenas


cinesnas e dinenas so responsveis pelos
movimentos motores em que os microtbulos
participam.

Cinesina

A cinesina I estruturalmente
similar miosina.
uma molcula com 380kd que
apresenta 2 cadeias pesadas e 2
cadeias leves.
As cadeias pesadas apresentam
regies longas em -helicoidais
que se entrelaam entre si para
formar uma estrutura enrolada.
Os domnios da cabea globular
do terminal-N
terminal N das cadeias
pesadas so o motor da
molcula.

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Cinesina

Este domnio liga-se quer aos


microtbulos quer a ATP, cuja
hidrlise fornece a energia necessria
ao movimento.
A cauda da cinesina consiste em duas
cadeias leves em associao com o
terminal-C dos domnios das cadeias
pesadas responsvel pela ligao
a outros componentes celulares que
so transportados atravs dos
microtbulos por aco dos motores
de cinesina.
cinesina
A cinesina move-se no sentido do
terminal (+).

Cinesina movimento ao longo do microtbulo

Cada uma das cabeas globulares de


cinesina est ligada ao ADP.

A ligao de uma cabea subunidade de


-tubulina induz a remoo
de ADP e uma
ligao muito forte da cabea ao
microtbulo.

A cabea da frente liga-se de seguida ao


ATP mudana conformacional na
regio de ligao entre as duas cabeas
que faz com que a cabea de trs passe
para a parte da frente.

A nova cabea dianteira liga-se aos


microtbulos e liberta o ADP, o que faz
com que a nova cabea trasiera hidrolise
o ATP em ADP e Pi.

O Pi libertado, e a cabea traseira pode


dissociar-se do microtbulo e o ciclo
repetir-se.

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Dinenas

A dinena citoplasmtica uma


molcula extremamente grande
(at 2000 kd) que consiste em
2 a 3 cadeias pesadas
complexadas com um nmero
varivel de cadeias leves e
intermdias.

As cadeias pesadas formam os


domnios globulares que ligam
ATP e que funcionam como
motores.

A parte basal da molcula


tida
id como o llocall d
de liligao a
estruturas subcelulares, como
organelos e vesculas.

As dinenas movem-se no
sentido do terminal (-).

Dinenas modo de funcionamento

Uma nica cadeia pesada de


dinena consiste num caule e
numa cabea redonda onde ocorre
actividade de ATPase e de onde
sai uma haste.

No final de cada haste encontra-se


o local de ligao aos
microtbulos.

A aco da dinena envolve a


rotao da cabea redonda.

Contrariamente cinesina a
dinena no consegue mediar o
transporte de carga por ela prpria
necessita de dinactina, um
complexo proteico de grandes
dimenses que tambm regula a
actividade da dinena.

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Transporte de carga e organizao intracelular

Uma vez que os microtbulos esto orientados com o


terminal (-) ancorado no centrossoma e os terminais (+) se
estendem at periferia celular, as cinesinas e as
dinenas transportam carga em direces opostas no
citoplasma.
A seleco da carga pode ser muito especfica:
Exemplo: Cinesina II transporte mRNAs seleccionado para o

crtex celular.

Transporte de carga e organizao


intracelular

Para alm do transporte de vesculas nas vias secretoras e


endocticas, os microtbulos e protenas motoras associadas
posicionam organelos envoltos por membranas (RE, Complexo de
Golgi,
g , lisossomas e mitocndrias)) na clula.
Exemplo: A cinesina I empurra o RE ao longo dos microtbulos na direco do

terminal (+), em direco periferia da clula.

Similarmente, a cinesina tem um papel fundamental no posicionamento dos

lisossomas longe do centro da clula.

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Transporte de carga e organizao


intracelular

No sentido inverso, a dinena conhecida pelo papel fundamental que


desempenha no posicionamento do Complexo de Golgi que se
encontra localizado no centro da clula perto do centrossoma.

Al
Alguns
organelos
l da
d via
i endoctica
d ti tambm
t b esto
t associados
i d com a
dinena-dinactina, incluindo os endossomas.

Clios e flagelos

Os clios e os flagelos so
projeces baseadas em
microtbulos da membrana
plasmtica responsveis
p
p
p
pelo
movimento de uma variedade
clulas eucariticas.

A estrutura fundamental dos


clios e flagelos o axonema
que composto por
microtbulos e protenas
associadas.

Os microtbulos esto
arranjados num padro
caracterstico 9 +2 par
central de microtbulos
rodeado por 9 dupletos de
microtbulos externos.

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Clios e flagelos

Os dois microtbulos fundidos de cada dupleto externo


so distintos: tbulo A com um microtbulo completo (13
protofilamentos); tbulo B com um microtbulo
i
incompleto
l t (10-11
(10 11 protofilamentos).
t fil
t )

Clios e flagelos

Os dupletos externos esto ligados ao par central por raios e entre


si por uma protena nexina.

Adicionalmente, existem 2 braos de dinena ligados a cada tbulo A


motor
oto da act
actividade
dade que medeia
ede a o movimento
o
e to dos cclios
os e
flagelos.

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