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AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL

MEDIO AMBIENTE

INDICE
INTRODUCCIN....................................................................................2
OBJETIVO..............................................................................................3
MARCO TEORICO..................................................................................3
MATERIALES..........................................................................................6
1. Muestras......................................................................................6
2. Medios de cultivo:........................................................................6
3. Equipos y Reactivos:....................................................................7
PROCEDIMIENTO...................................................................................7
FOTOS...................................................................................................8
INTERPRETACIN DE RESULTADOS.....................................................10
BIBLIOGRAFIA.....................................................................................11

PRACTICA N8
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS DEL MEDIO
AMBIENTE

Moscas y cucarachas portadores de microorganismos

infecto contagiosos
INTRODUCCIN
Los insectos domsticos son portadores de una gran variedad de
microorganismos muchas vacas peligrosos para la salud humana,
estos insectos vectores tienen un amplio y variados ambientes como
agua, aire, suelo que al recorrer captan en sus extremidades
microorganismos infecto contagiosos Que al ponerse en contacto son
los alimentos desprotegidos los contaminan perjudicando la salud
humana. Es muy amplio el rol en los diferentes ambientes por lo que
se realizaran las determinaciones en insectos domsticos
OBJETIVO
Demostrar la presencia de microorganismos infectos contagiosos en
los insectos domsticos y a travs de ellos puede llegar a los
alimentos
MARCO TEORICO
Para aislar e identificar una especie bacteriana del medio y de otra
especie que pueda confundirse morfolgicamente es necesario usar
medios de cultivos, ya que nos permiten diferenciar las caractersticas
del crecimiento de las bacterias y establecer su identidad segn el
medio de cultivo que se use.
Los microorganismos se encuentran en muchos ambientes naturales
como el agua, el suelo, aire, el hombre y otros seres vivos, alimentos,
entre otros. Haciendo parte de los diferentes ecosistemas. Por esto se
deben usar los medios de cultivo adecuados que se asemejen al
ambiente si queremos posibilitar el crecimiento de la bacteria.
Un medio de cultivo est diseado para posibilitar el desarrollo y
nutricin de las bacterias por esto cuenta con una cantidad de
sustancias como: carbono, agua, azufre, fosforo, nitrgeno, potasio,
sodio, magnesio, entre otros. Tambin su crecimiento depende de
muchos factores entre ellos: un pH preferiblemente neutro, humedad,
oxigeno, temperatura, presin osmtica, todo esto en condiciones
adecuadas.
Los medios de cultivo se clasifican dependiendo de las caractersticas
que se necesiten para su ptimo desarrollo los cuales segn su
consistencia pueden ser:

Lquidos: no contienen agar y favorecen el crecimiento

bacteriano ya que las bacterias poseen una gran libertad de
movimiento y al difundirse por todo el medio encuentran su

componente nutritivo y requerimiento de oxigeno ms ptimo

con gran facilidad, por ejemplo: las aerobias estrictas crecen en
los primeros 10-15mm de la superficie del medio, las
microaerofilas ligeramente por la superficie del medio, las
anaerobias estrictas en los 10-20mm del fondo y las facultativas
por todo el medio.
Solidos: su concentracin de agar es de 1.5% a 2%, en estos
las bacterias crecen con mayor dificultad, ya que los nutrientes
pueden agotarse fcilmente, se utilizan para ver colonias, aislar
microorganismos, caractersticas de crecimiento, color, tamao,
taxonoma, entre otros.
semi-solido: su concentracin de agar es de 0.5% y se utiliza
para estudiar el movimiento y algunas propiedades
bioqumicas.

Tambin segn su aplicacin se usa:

Simples: son apropiados para la mayora de microorganismos

ya que poseen requisitos nutricionales mnimos para
desarrollarse.

Enriquecidos: permiten el crecimiento de bacterias difciles de

cultivar, puesto que se aade ciertos componentes muy ricos
en nutrientes.

Selectivos: estos medios contienen componentes que inhiben

el crecimiento de algunas bacterias cuyo crecimiento no
interesa, permitiendo as aislar una determinada especie.

Diferenciales: en este se les adiciona sustancias para el

crecimiento de determinadas bacterias y al actuar sobre dichas
sustancias adquieren un color que las diferencia de otras
colonias.

Enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen la

multiplicacin de bacterias cuando la muestra obtenida es
pobre.

De acuerdo con su aplicacin los componentes usuales de los medios

de cultivo son:

Extracto de carne: constituye una fuente de carbono,

nitrgeno, sales orgnicas y otros nutrientes.
Peptonas: son protenas degradadas, ricas en nitrgeno y
carbono.
Cloruro de sodio: importante para proporcionar un adecuado
equilibrio osmtico.

Tampones estabilizadores del pH: necesarios para

contrarrestar las variaciones del pH debido a los productos del
metabolismo bacteriano.

Nutrientes para medios de enriquecimiento:

Extracto de levadura: rico en vitaminas del complejo B,

protenas y cidos nucleicos.
Extracto de glbulos rojos: suministra los factores X
(hemina) y V (difosfopiridin-adenin-nucleotido o coenzima I)
imprescindibles para el crecimiento bacteriano de algunos
microorganismo.
Infusin de hgado o corazn y cerebro: son infusiones
ricas en aminocidos azufrados que reducen el potencial de
xido reduccin.
Agentes reductores:
Se adicionan tioglicolato sdico, cistena, cido ascrbico a los
medios de cultivo para promover la anaerobiosis.

Agentes selectivos:
Colorantes: el cristal violeta, azul de metileno, el verde brillante
y otras sustancias usadas por su efecto toxico sobre las Gram
positivas.
Cloruro sdico a altas concentraciones.
Bilis o Sales biliares
Antibiticos
Cicloheximida o actidiona: se aade para impedir el crecimiento
de hongos ambientales en los medios de cultivo.

Azucares: Se puede adicionar para fines nutritivos o para investigar

la actividad metablica.
Indicadores de pH: Es esencial para detectar variaciones en la
acidez o alcalinidad del medio causadas por el metabolismo
bacteriano. Los medios de cultivo usados en el laboratorio fueron:

Agar nutritivo: est compuesto de extracto de carne,

peptona, ClNa, agar y agua destilada. Se usa como medio de
cultivo general para la mayor parte de los microorganismos y
como base para la preparacin de medios selectivos y
enriquecidos.
Agar sangre: compuesto por extracto de carne, peptona, ClNa,
sangre, agra y agua destilada. Lleva como base el agar nutritivo
y se le adiciona sangre desfibrinada en una porcin del 5-10%,
principalmente sangre de conejo, carnero y caballo ya que
ofrecen buenas reacciones hemolticas. No se usa sangre

humana procedente de banco puesto que contiene citrato que

puede inhibir el crecimiento de algunos microorganismos y
glucosa que falsea las reacciones de hemolisis, aparte de
anticuerpos y agentes antimicrobianos. Aqu crecen la mayora
de bacterias patgenas y algunas levaduras. Este medio es
adecuado para el cultivo y aislamiento de microorganismos
exigentes, tambin para estudiar la actividad hemolica.

La hemolisis puede ser de 3 tipos: hemolisis: clarificacin

parcial de la sangre en una colonia, que produce un cambio de
color gris verdoso o pardusco en el medio; hemolisis: zona de
clarificacin completa de la sangre alrededor de las colonias
debido una lisis completa de eritrocitos que produce una
eliminacin de la sangre del medio debajo de las colonias y a su
alrededor; hemolisis: sin lisis o cambio de color en los
eritrocitos.
Agar MacConkey: est compuesto por peptona, lactosa, ClNa,
sales biliares, cristal violeta, rojo neutro, agar y agua destilada.
Los medios usados para el aislamiento selectivo de
enterobacterias se caracterizan por contener lactosa y un
indicador de cambio de pH que detecta la actividad
fermentadora sobre este azcar. Adems estos medios de
cultivos llevan sustancias inhibidoras de Gram positivos. Las
sales biliares y el cristal violeta actan como inhibidores. El
indicador vira a rojo ladrillo en medio acido. Las bacterias que
fermentan la lactosa producen colonias de color rojo que
pueden estar rodeadas de una zona opaca debida a la
precipitacin de sales biliares; las no fermentadoras dan
colonias incoloras ms o menos transparentes.

Agar EMB (Eosina azul de metileno): compuesto por

peptona, fosfato dipotsico, lactosa, eosina azul de metileno,
agar y agua destilada. Su uso es prcticamente el mismo del
agar MacConkey. El azul de metileno acta como indicador e
inhibidor al mismo tiempo. Las colonias fermentadoras de
lactosa presentan un tono violeta ms o menos intenso. Por
ejemplo Escherichia Coli origina colonias muy oscuras,
frecuentemente con brillo verde metlico que facilita su
deteccin en aguas contaminadas con materias fecales.

Agar AMS (Manitol sal): es un medio de cultivo altamente

selectivo, pues tiene una alta concentracin de cloruro de sodio
que impide el crecimiento de la mayora de las bacterias, sin
embargo tolera los estafilococos. Adems el cultivo contiene
manitol como nico carbohidrato y rojo fenol como indicador del
pH, cuyo mbito de viraje esta entre pH 8,4 (rojo) y pH 6,8
(amarillo). Cuando hay produccin de cido a causa de la

fermentacin de manitol, las colonias aparecen rodeadas de un

halo amarillo; el medio permanecer sin cambio de color o
acentuara a rojo medio si las bacterias no fermentan el manitol.

Caldo nutritivo: es un medio lquido compuesto por una

infusin de carne, ClNa, peptona, extracto de levadura y
tambin fosfato disdico. Es usado como base para otros caldos
que puedan contener ms nutrientes.

MATERIALES
1. Muestras
o Cucarachas
o Pulgas
o Hormigas

o Mosca
o Zancudo
o Araas

2. Medios de cultivo:
6 placas con Tnplicaza soya o Miuler Hinton
6 placas con Mac conkey,
6 placas con Manitol sal
10 tubos con TSI
10 tubos con LIA
6 placas con TCBS
6 placas con Agar sangre
6 frascos con 2ml de suero fisiolgico estril
3.
4. Equipos y Reactivos:
Mechero de Bunsen, Algodn. Alcohol
Asa de Col,
6 Pipetas de 10ml estriles 0 pipetas de 2ml estriles
Lminas porta objeto
Coloracin de Gram
Microscopio
5.

6. PROCEDIMIENTO
7.
1. Emulsionar los muestras anteriores en 2ml de suero fisiolgico estril,
con ayuda de una pipeta, extraer 01ml y sembrarlo en Trypticasa
agar (recuento de mesfilos)
2. En el Mac ConKey (para

Enterobacterias),

Manitol

sal

(para

Estafilococos), TCBS (para Vibrium) .Por diseminacin con ayuda de

3.
4.
5.
6.

una asa de plstico descartable.

Rotular las placas para su identificacin posterior
Incubar a 37*C por 24-48 horas
Recuento total de colonias en medio Trypticasa soya
Identificacin de las colonias en los medios selectivos, para repicarlas

en medios de pruebas Bioqumicas como TSI, LIA

7. Siembra por puntura en LIA, TSI Incubar a 37C por 24 horas
8. Identificacin
8.

9. FOTOS
10.

11.

12.
13.
14.
15.

16.
17.
18.

19.

20.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS

21.

A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

22.
23.
GELOSA SANGRE
24.
25.
Para el aislamiento, cultivo y deteccin de actividad hemol
tica de Staphylococcus, Streptococcus y otrosmicroorganismos
fastidiosos. Se observan colonias blancas casi grises, Grandes, c
onvexas de consistenciabutircea, Presentan bordes regulares.
Se observa que Presenta hemlisis. Las colonias en medio
slido son redondeadas, uniformes, Estos crecen rpidamente a
37 C pero tienden a formar pigmentos mejor a temperatura
ambiente (20 C)
26.
27.
.MANITOL SAL AGAR (MSA)
28.
Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar
especies clnicas de estafilococos El manitol cuando esutilizado
por los
microorganismos, vira
de
su color
original rojo
a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas,convexas, de
consistencia butircea , presentan bordes irregulares. S. aureus
Manitol sal Colonia amarilla S.epidermidis Manitol sal Colonia
incolora
29.

ESTAFILOCOCOS 110

30. S 110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan

colonias chicas, convexas, De consistencia butircea y bordes
Regulares.
31.
B) DESCRIPCIN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS
32.
33.
Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en
cuenta las siguientes caractersticas:
34.
.FORMA: puntiforme, circular, rizoide, irregular, filamentosa..
TAMAO: grande (ms de 3 Mm.), mediana (2-3 Mm.), pequea
(1-2 Mm.).
COLOR. Reportar el color final despus de la incubacin.
BORDE: entero, ondulado, lobulado, filamentoso, ondeado
.ELEVACIN: plano, elevado, convexo, pulvinado, umbonado.
SUPERFICIE: suave, brillante, rugosa, plegada, seca, polvorient
a
35.

36.
37.Principales morfologa celulares y coloniales.
38.
39.
40.
41.

42.
43.

BIBLIOGRAFIA

Biologa de los Microorganismos; Michael T. Madigan, John M.

Martinko, Jack Parker; 8 edicin, editorialPrentice may.
http://www.prodiversitas.bioetica.
http://es.wikipedia.org/wiki/Foramin%C3%ADfero
http://www.duiops.net/seresvivos/algas.htm
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.

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52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
65.
66.
67.
68.
69.
70.
71.
72.
73.

74.
75.
76.
77.
78.
79.
80.
81.
82.
83.
84.

85.
86.
87.
88.
89.
90.
91.

92.