Produccin de cido Ctrico.

La fermentacin del cido ctrico fue la primera fermentacin industrial

aerobia. El cido ctrico es un cido tricarboxlico con 6 tomos de
carbono que fue aislado inicialmente a partir del jugo de limn. Es una
sustancia orgnica producto del metabolismo de la mayora de los seres
vivos, producido en el ciclo de Krebs.

cido oxalactico + Acetil-CoA = cido ctrico

En 1860 comenz a obtenerse a partir de frutas mediante el uso de

sales de calcio, pero eran necesarias enormes cantidades de limones
para obtener una cantidad significativa de cido ctrico. Hoy en da, la
obtencin a partir de frutos carece de significado. Actualmente se
obtiene mediante fermentacin con Aspergillus niger partiendo de
diversas materias primas. Principalmente se utiliza la melaza de caa,
dado que por su composicin permite un perfecto desarrollo de los
microorganismos, aunque tambin se utiliza azcar, hidrolizado de
almidn, melaza de remolacha y caldo de caa.

El cido ctrico es un saborizante muy utilizado por la industria

alimentaria. Tambin se utiliza en la manufactura de bebidas alcohlicas
como acidulante, como auxiliar en la fabricacin de mermeladas y como
aditivo general en las industrias de repostera. Para la produccin
industrial de cido ctrico se utiliza el hongo Aspergillus.

Aunque las frutas ctricas (como los limones) cuando son verdes pueden
contener hasta un 9 % de cido ctrico, el 99 % de la produccin mundial
de cido ctrico se realiza mediante los hongos miceliares. Por tanto, la
mayora de fermentaciones de cido ctrico se realizan a travs de cepas
mutadas de A. niger debido a su alta productividad, adaptabilidad en
fermentadores industriales, rendimiento econmico y mnima produccin
de productos no deseados.

Procesos bioqumicos de la fermentacin aerbica del cido

ctrico:

El cido ctrico es una intermediario estndar del ciclo TCA (ciclo de los
cidos tricarboxlicos o tambin llamado Ciclo de Krebs).

En la fermentacin del cido ctrico, son importantes dos enzimas clave:

la citrato aconitasa (CA) y la isocitrato deshidrogenasa (ICDH).

Durante la etapa de produccin de cido ctrico se expresan todas las

enzimas del ciclo de Krebs excepto la -cetoglutarato deshidrogenasa
(KGDH). La actividad de citrato sintasa (CS) aumenta por un factor de
10, mientras que las actividades de las enzimas que catabolizan el cido
ctrico, aconitasa (CA) e isocitrato deshidrogenasa (ICDH), se reducen
drsticamente. Esto da lugar a una acumulacin y excrecin de cido
ctrico por el microorganismo sobrecargado.

El hierro es un cofactor necesario para la enzima citrato aconitasa (CA).

Por ello, se mantiene un dficit del metal que favorece a la acumulacin
de cido ctrico. La restriccin de la actividad de esta enzima es la clave
para tener xito en la fermentacin del cido ctrico.

Todas estas variaciones en la expresin de las enzimas del ciclo de Krebs

suceden una vez el hongo ha crecido, es decir, cuando se encuentra en
la fase estacionaria. Los azcares son catalizados a travs de la
gluclisis y van al ciclo de Krebs, produciendo cido ctrico. Aunque ste
sea un metabolito bsico ligado al metabolismo primario, su produccin
se puede considerar como la de un tpico metabolito secundario, ya que
en primer lugar el micelio va creciendo a partir del carbohidrato (como
por ejemplo: sacarosa) y cuando se llega a la fase estacionaria, empieza
la idiofase con la excrecin del ctrico causada por las disminuciones de
las enzimas -cetoglutarato deshidrogenasa, citrato aconitasa e
isocitrato deshidrogenasa y la falta de hierro.

Debido a este motivo, como el ciclo de Krebs se encuentra debilitado, los

otros compuestos del ciclo necesarios como intermediarios biosintticos
se sintetizan por rutas anaplerticas (PEPC: fosfoenolpiruvato
carboxilasa y la PC: piruvato carboxilasa).

En 50 aos se ha multiplicado considerablemente la produccin de cido

ctrico a nivel mundial. El cido ctrico se fabrica en ms de 20 pases. La
Unin Europea, Estados Unidos y China renen el 88% del mercado total
mundial. La Unin Europea increment su elaboracin debido
fundamentalmente a su uso como materia prima para fabricar
detergentes biodegradables.

Produccin de cortisona a partir de

progesterona
La utilizacin de microorganismos en la biotransformacin ha tenido
especial xito en la produccin de esteroides, como es el caso de la
cortisona. Inicialmente los esteroides se producan mediante extraccin
de tejidos animales o mediante una sntesis qumica muy compleja, pero
los dos procedimientos eran excesivamente caros. Algunos pasos clave
de la sntesis qumica pueden realizarse de forma ms eficaz mediante
el uso de enzimas. La mayora de esteroides que se fabrican hoy en da
se hacen mediante un proceso mixto de biotransformacin microbiana y
transformaciones qumicas.

La cortisona es la forma oxidada del cortisol, una hormona esteroidea

perteneciente al grupo de los glucocorticoides. Los glucocorticoides son
sustancias con importantes actividades biolgicas que los hacen tiles
en medicina. Tienen propiedades antiinflamatorias, por eso se utilizan
como frmacos para el tratamiento de alergias, asma, artritis
reumatoide, desordenes dermatolgicos, etc.

Existen ciertos trastornos relacionados con la alteracin de los niveles de

cortisol en el organismo. Uno de ellos es la enfermedad de Addison que
consiste en la insuficiente produccin de cortisol. El tratamiento para
esta enfermedad se basa en la administracin de dosis hormonales de
cortisol a diario a los pacientes.

Fig. Estructura molecular del

cortisol

El descubrimiento del efecto antiinflamatorio de la cortisona tuvo un

gran impacto en el mundo mdico de tal manera que Kendall, Reichstein
y Hench ganaron el premio Nobel en 1950. La gran demanda de la
cortisona impuls el desarrollo de la sntesis qumica de este producto.

En 1952 investigadores de Upjohn descubrieron un hongo, Rhizopus

nigricans que poda hidroxilar la progesterona (un intermediario en la
sntesis de la cortisona) en el C11, reduciendo as las etapas del proceso.
Desde entonces, la produccin de cortisona se realiza industrialmente
mediante ste hongo que contiene unas enzimas que realizan la
hidroxilacin especfica de la progesterona produciendo 11hidroxiprogesterona. El tomo de oxgeno del C11 es esencial para el
efecto antiinflamatorio de la cortisona. Esta oxidacin altamente
especfica hizo posible reducir la sntesis industrial de cortisona de 31 a
11 pasos. El resto de pasos desde la progesterona hasta la hormona
esteroidea cortisona se realizan qumicamente.
Despus de este descubrimiento, el precio comercial de 1g de cortisona
baj de 200$ a 6$. La produccin de esteroides es actualmente un gran
negocio, las cifras de venta de los cuatro esteroides principales:
cortisona, hidrocortisona, prednisona y prednisolona es de unas 800
toneladas/ao.

Fig,
Biotransformacin
de la progesterona
para obtener
cortisona,
mediante el
microorganismo
Rhizopus nigricans.

Las materias primas que se utilizan en este proceso son la diosgenina,

obtenida a partir del barbasco mejicano o el estigmasterol que se
obtiene del aceite de soja. A partir de estos esteroles vegetales,
mediante procesos qumicos se obtiene la progesterona, que es el
precursor el cual Rhizopus nigricans realiza la 11-hidroxilacin para
obtener la 11- hidroxiprogesterona.

En el proceso de produccin de cortisona, mediante el sistema de

clulas en crecimiento, el microorganismo Rhizopus nigricans se cultiva
en grandes fermentadores, en condiciones controladas. El
microorganismo se deja crecer de manera exponencial para obtener la
mxima cantidad de biomasa antes de aadirle el sustrato. Una vez el
microorganismo se ha desarrollado, se aade el esteroide precursor de
la cortisona, es decir la progesterona. Despus de un perodo de
incubacin durante el cual el microorganismo acta sobre el compuesto
qumico, se extrae el caldo de fermentacin y se recupera el esteroide
transformado. El ratio de conversin de la progesterona a 11hidroxiprogesterona es del 85%. La purificacin del producto depende de
si el producto de inters es acumulado en las clulas o es excretado. Los
productos finales de las biotransformaciones suelen ser extracelulares y
se pueden encontrar disueltos o en suspensin.
Gracias al reemplazamiento de varios pasos qumicos por reacciones
especificas catalizadas por enzimas, como es el caso de la 11hidroxilacin de los esteroides, ha sido posible abaratar mucho la
produccin de cortisona; esteroide que por sus cualidades
antiinflamatorias ha tenido un gran impacto mdico y supone un gran
impulso en la industria de los esteroides.