XVIII CONGRESO ANUAL

Antonio Prats Este

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CITOLOGIAVAGINALY EXAMEN DEL

ESPERMA
Dr. Antonio Prats Esteve

CITOLOGIA VAGINAL
Durante las sesiones del congreso ya se habrn abordado adecuadamente los aspectos
tericos de la citologa vaginal: desde la tcnica de la toma de la muestra hasta su lectura, pasando por la extensin, los mtodos de tincin, etc., por lo que no sern objeto
del seminario.
Un seminario como ste tan slo debe pretender dar otra panormica diferente: la de la
utilizacin cotidiana de la tcnica; por decirlo de alguna manera, lo que podemos pedirle
a la citologa vaginal en la clnica diaria, y a la vez aquello que no debemos esperar de
su valoracin si no queremos caer en errores importantes.
Adems un seminario prctico es dinmico e interactivo por lo que probablemente la documentacin que viene a continuacin ser ms un recordatorio terico para consulta
posterior que un guin de lo que se vaya a tratar en la sesin.
Citologa vaginal y ciclo sexual (fisiologa)
1. en perra
2. en gata
Citologa vaginal en clnica y en patologa
1. en perra
2. en gata

ALGUNAS UTILIDADES CLNICAS:

Control seguimiento ciclo-ovulacin para
momento de monta;
inseminacin artificial;
decisin de tratamiento abortivo.
Fase de ciclo
deteccin celos silenciosos
aplicacin progestgenos o inhibidores de ciclo
induccin de celo
Actividad ovrica
diagnstico impuberismo, aplasia gonadal o castracin
Determinacin ovulacin
deteccin ciclos anovulatorios

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Patologa vaginal
Patologa uterina
metritis
hiperplasia endometrial qustica
pimetra
Control de efectividad de tratamientos diversos
La citologa vaginal es una tcnica sencilla de realizar, accesible para cualquier clnico y de costo bajo, que adems proporciona una informacin abundante y de forma rpida.
Los datos que de ella podemos obtener la convierten en una tcnica necesaria en la clnica general, e imprescindible en la clnica de la reproduccin.
Los frotis pueden remitirse a cualquier laboratorio veterinario especializado, pero cualquier clnico con una mnima infraestructura (mtodos de tincin y microscopio) puede procesarlos e interpretarlos con una mnima experiencia; Inicialmente siempre cabe
la posibilidad de contrastar los resultados obtenidos en la clnica con los proporcionados por el laboratorio.
Hasta hace poco la gran mayora de datos que se ofrecan en la bibliografa eran referidos a la perra; el aumento estadstico de la poblacin felina y su consiguiente reflejo
de incidencia en la clnica cotidiana ha hecho que de un tiempo a esta parte los trabajos sobre la aplicacin de la citologa vaginal en la gata hayan ido en aumento, ayudando
entre otras cosas a dilucidar el de por s peculiar ciclo sexual de esta hembra.
Est unnimemente reconocido que los cambios del epitelio vaginal son un reflejo vlido de las variaciones hormonales del ciclo sexual de la hembra, y por tanto que la citologa vaginal que nos informa de aquellos cambios es una referencia directa de estas variaciones; la citologa vaginal es, pues, una herramienta til para el estudio fisiolgico
del ciclo de la perra o de la gata.
Pero tambin se sabe que la gran mayora de cambios patolgicos del aparato reproductor,
ya sea a nivel ovrico, uterino o vaginal, van acompaados de alteraciones significativas en las caractersticas del frotis, sea de su aspecto general o del tipo, proporciones o
caractersticas de sus componentes; en ello reside el inters de la citologa vaginal en el
estudio de las diferentes patologas de la reproduccin en la hembra canina o felina.

INTERPRETACIN:
Un frotis vaginal, ya sea de gata o de perra, rara vez puede interpretarse de forma aislada (como el valor numrico de una prueba bioqumica) sino que requiere ser valorado
en un contexto de otros frotis sucesivos en el tiempo y en conexin estrecha con la situacin del animal.
Tampoco es fcil enfocar la valoracin del frotis con metdicas similares a las del estudio de la sangre, pues el frotis vaginal carece de la homogeneidad necesaria: una gota
de sangre siempre es idntica a otra de la misma muestra, mientras que una porcin
del frotis puede ser totalmente diferente de la mayora del resto.

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Por todo ello el protocolo ms aconsejable parece ser aqul que parte de una evaluacin general a mnimos aumentos que nos permita obtener una "panormica general", para luego
ir concentrando la atencin (y la magnificacin) en algunas de las zonas identificadas como
significativas, hasta hacer una valoracin detallada de las clulas y dems datos a evaluar.
Los datos bsicos para la interpretacin son:
-

tipos de clulas epiteliales que aparecen, sus caractersticas individuales, su nmero y las proporciones numricas entre ellas (lo que proporciona los diversos
ndices determinados en los trabajos experimentales: IM= ndice de maduracin,
ICP= ndice cariopicntico, IE= ndice eosinoflico, etc de los que hablaremos ms
adelante). Son las clulas basales, intermedias, superficiales, etc.

clulas de otro origen que pueden hallarse en el frotis, su identificacin, nmero, caractersticas, etc. Pueden ser hemates, clulas de la serie blanca, clulas glandulares, espermatozoides, etc.

- el aspecto general del frotis en cuanto a presencia de restos, mucina, etc, y su

cantidad, as como la sensacin de suciedad o limpieza del fondo del frotis.
-

caractersticas basfilas o acidfilas del frotis en conjunto y de las clulas en

concreto.

- relacin evolutiva respecto a frotis anteriores o posteriores, y su relacin con

el cuadro y estado clnico (tanto fisiolgico como patolgico) de la hembra.
CLULAS EPITELIALES
Son las provenientes de la descamacin continuada y cclica del epitelio pavimentoso que
recubre las paredes vaginales. Esta renovacin est ligada a los cambios hormonales especialmente, y casi exclusivamente, a los de los niveles de estrgenos sanguneos. Los
mecanismos y las caractersticas de este recambio son prcticamente idnticos en la perra y en la gata, como lo son tambin las caractersticas de las clulas epiteliales que se
van a identificar.
Diversos autores consideran tan slo cuatro tipos de clulas epiteliales: parabasales, intermedias, superficiales y escamas (o superficiales queratinizadas). Otros tenemos tambin en cuenta las clulas basales que, si bien se descaman con menos facilidad, s merecen ser consideradas en la valoracin de los frotis, especialmente en el caso de la gata.
A continuacin, describiremos las principales caractersticas de los diversos tipos de clulas epiteliales vaginales en orden progresivo de envejecimiento celular, desde los estratos ms profundos a los ms superficiales:
Clulas basales:
Dimetro del ncleo es mayor que la distancia entre ncleo y membrana celular.
ncleo esfrico
perfil redondeado, regular
basfilas
en ocasiones se presentan agrupadas formando como racimos.

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Clulas parabasales:
tamao algo mayor que las basales, con una relacin ncleo/citoplasma de 02; el
dimetro del ncleo es menor que la distancia entre ste y la membrana celular.
ncleo todava esfrico o redondeado
perfil menos regular, ovaladas o alargadas
basfilas
Clulas intermedias
tamao prcticamente el doble que las clulas parabasales, con una relacin ncleo/citoplasma de 006, y por tanto un dimetro nuclear mucho menor que la
distancia entre el ncleo y la membrana celular.
el ncleo todava es redondeado o levemente ovalado, moderadamente picntico
perfil ms irregular, con bordes sinuosos aunque sin angulaciones
normalmente basfilas aunque en ocasiones empiezan a mostrar anfofilia o in cluso clara apetencia acidfila
Clulas superficiales
mucho mayor tamao; son las de mayor tamao que podemos encontrar en el
frotis, equivalentes al triple de una parabasal o a la mitad ms de una intermedia;
la relacin ncleo/citoplasma es de 002, y por tanto el dimetro del ncleo es
muchsimo menor que la distancia entre el ncleo y la membrana celular
ncleo ovalado y ya claramente picntico
perfil irregular, bordes sinuosos e incluso angulados, que indican la tendencia
a plegarse sobre s mismos.
acidfilas, con leve tendencia anffila en algunos casos
Clulas superficiales queratinizadas o escamas
Son el ltimo eslabn del envejecimiento celular, careciendo de ncleo y de estructuras celulares diferenciables por lo que en un sentido estrictamente tcnico no mereceran la denominacin de clulas; sin embargo deben incluirse en
la interpretacin del frotis por el papel significativo que poseen.
tamao algo menor que las superficiales porque ya han empezado a sufrir un
"arrugamiento"
anucleadas o con slo leves atisbos de restos nucleares
perfil irregular con bordes angulados, doblados sobre s mismos
acidfilas
Mediante el contaje de una zona homognea del frotis y en base a las proporciones existentes entre los diversos tipos de estas clulas epiteliales se pueden establecer una serie
de ndices (elaborados especialmente en y para la perra), pero cuya utilidad prctica es
bastante limitada. Estos ndices son:
ndice eosinoflico (IE): porcentaje de clulas epiteliales queratinizadas
ndice de maduracin (IM): porcentaje de clulas de los estratos superficiales
del epitelio respecto al total de clulas epiteliales. Es muy paralelo al IE.
ndice cariopicntico (ICP): nmero de clulas anucleadas o con ncleo picntico respecto al nmero total de clulas superficiales.
De las clulas descamadas del epitelio vaginal, adems de sus tipos y proporciones, puede ser interesante valorar su estado en base a criterios de degeneracin celular como son

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la presencia de ncleos sueltos, vacuolizaciones citoplasmticas, cuerpos intra-citoplasmticos, halos perinucleares, binucleaciones, cariorrexis, ciertas anfofilias, etc.
OTRAS CLULAS
En la interpretacin de otros componentes celulares del frotis es donde el clnico puede
tener necesidad, en determinadas ocasiones, de solicitar la colaboracin del anatomopatlogo para la identificacin y diferenciacin de clulas tumorales, clulas de tracto
superior, anomalas celulares, etc.
Tanto en la perra como en la gata, y en un posible orden decreciente de frecuencia de
su presentacin podemos tener en consideracin:
Leucocitos: suele tratarse le neutrfilos polimorfonucleares; su grado de madurez ser tambin un dato a tener en cuenta: formas muy maduras o piocitos, con
ncleos muy lobulados o divididos, o formas jvenes con ncleos poco lobulados.
La presencia especialmente de formas jvenes y en cantidad moderada puede considerarse fisiolgica en determinadas fases (metaestro, anoestro), y es comn especialmente en la perra aunque menos en la gata; su significacin patolgica es comn
a ambas especies y viene ligada a la presencia en cantidad y especialmente de formas degeneradas, que suelen acompaar a procesos inflamatorios o infecciosos.
Hemates. Los glbulos rojos son fisiolgicos en la fase proestro de la perra y
en algunas ocasiones aparecen tambin en la de estro; si aparecen en el frotis
de la gata o en el de la perra en otras fases debe sospecharse de un cuadro patolgico, a no ser que sean el resultado de pequeos traumatismos en el momento
de la obtencin de la muestra.
Clulas del tracto superior.Slo aparecen en algunos cuadros inflamatorios de
la zona alta, y se trata normalmente de clulas provenientes del epitelio glandular del tero. En ocasiones no son fciles de identificar.
Clulas tumorales. Su hallazgo es poco frecuente en la perra, salvo en el linfosarcoma venreo, pues son raros los tumores que afecten el epitelio vaginal; y
lo es menos todava en la gata donde estas patologas son raras.
Espermatozoides: su deteccin e identificacin, as como su significado, estn
al alcance de cualquier clnico; su presencia proporciona datos de inters como
veremos. En las tinciones simples pueden pasar desapercibidos por su poca afinidad por los colorantes, por lo que conviene aumentar los tiempos de tincin
si se emplea una de estas tcnicas.
Bacterias. La vagina y vulva son ricas en flora bacteriana cuya significacin patolgica es escasa pero que puede aparecer lgicamente en el frotis vaginal. Son
ms abundantes, lgicamente, en cuadros infecciosos.
ASPECTO GENERAL DEL FROTIS
La primera valoracin del frotis debe efectuarse de forma panormica, a pocos aumentos; ello nos proporciona la oportunidad de analizar las caractersticas del fondo; en la
gata un fondo limpio es caracterstico de la fase de estro.
Tanto en la perra como en la gata la "suciedad" caracterstica del fondo del frotis parece ser debida a las secreciones de las glndulas vestibulares y del crvix; la desaparicin

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de estos restos no celulares y filamentos de mucosidades eosinoflicos, dando lugar a un

fondo limpio, recuerda parcialmente a los cambios que se observan en el mucus vaginal
en el momento de la ovulacin en la mujer.
La cantidad y aspecto de las mucosidades pueden colaborar en la valoracin tanto para
un diagnstico como para la evolucin de un proceso o incluso de un tratamiento.
CONSERVACIN DE LOS FROTIS
La conservacin durante pocos das puede hacerse en cualquier caja adecuada, simplemente que los proteja del polvo y los riesgos de rotura; en caso de quererse guardar indefinidamente hay que sellar el frotis mediante un cubreobjetos adherido con un sellador para citologa.

CITOLOGIA VAGINAL Y CICLO SEXUAL

Ya se ha dicho que difcilmente un solo frotis podr aportar ms all de una orientacin
clnica; la informacin completa la obtendremos siempre de la comparacin entre frotis
sucesivos y el anlisis de su evolucin. Y para cualquier evaluacin, debe conocerse primero la imagen fisiolgica normal de cada fase del ciclo.
En el caso de la perra, las imgenes caractersticas de cada una de las fases estn perfectamente definidas; en la gata existen me
En el caso de la perra, las imgenes caractersticas de cada una de las fases estn perfectamente definidas; en la gata existen me
CITOLOGA VAGINAL EN LAS DIFERENTES FASES DEL CICLO DE LA PERRA
Anestro:
frotis pobre en clulas
predominio de basales y parabasales
no hay hemates
escasos leucocitos
frotis basfilo, con bastante suciedad en el fondo
Proestro:
parecen clulas intermedias y superficiales en el inicio, dominando stas
ltimas a medida que avanza la fase.
abundantes hemates
algunos leucocitos escasos nicamente en el inicio
tendencia a la acidofilia general a medida que avanza
Estro:
absoluto predominio de clulas superficiales cada vez con un porcentaje mayor de queratinizacin y ausencia de ncleo a medida que avanza la fase.
Las escamas pueden aparecer ms o menos agrupadas. Fondo limpio
van desapareciendo los hemates aunque pueden reaparecer en algunos
casos sin que ello tenga demasiada relevancia.
no deben aparecer leucocitos
frotis claramente acidfilo

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Metaestro (diestro)
fondo nuevamente sucio
en el inicio vuelven a hacer su aparicin, junto a las clulas superficiales, clulas basfilas, intermedias y parabasales, que acaban dominando
el frotis en pocos das. Se ven con frecuencia las denominadas "clulas de
metaestro" o "clulas en sello" consistentes en un leucocito sobre una clula epitelial intermedia.
sin hemates
algunos leucocitos no degenerados
anfofilia con tendencia a la basofilia a medida que avanzan los das.
CITOLOGIA VAGINAL EN EL CICLO ESTRAL DE LA GATA
Las peculiaridades del ciclo sexual de la hembra felina se traducen tambin en caractersticas especiales de los diferentes frotis vaginales que se encuentran en l.
Aunque existen divergencias entre los autores, de manera prctica se tiende a considerar el ciclo sexual de la gata en tres fases:
una fase folicular, en la que quedaran comprendidos proestro y estro y que vendra caracterizada por los elevados niveles estrognicos en sangre
una fase de interestro entre dos fases foliculares
y una fase de anestro (diestro-metaestro)
En cada una de estas fases el frotis vaginal vendra caracterizado por:
Fase folicular
aclaramiento del fondo del frotis
presencia casi exclusiva de clulas superficiales y escamas
ausencia de hemates incluso en las fases iniciales
Interestro
frotis compuesto por una "coexistencia" prcticamente impensable en la
perra: clulas intermedias y superficiales, con parabasales y escamas.
Anestro (diestro-metaestro)
escasas clulas
abundante suciedad de fondo
predominio de clulas basfilas: basales, parabasales y algunas intermedias; las escasas superficiales que ocasionalmente aparecen podran tener
un origen vestibular
algunos leucocitos normalmente poco maduros

UTILIDAD CLNICA DE LA CITOLOGA VAGINAL

Un protocolo uniforme en la obtencin, procesado y valoracin de los frotis, junto con
el estudio de su evolucin en el tiempo y su correspondencia con la situacin y estado
clnico del animal convierten a la citologa vaginal en una tcnica de la que obtener una
til y variada informacin clnica.
Determinacin de la fase del ciclo, en base a las caractersticas que hemos descrito a lo
largo del captulo; Adems, por consecuencia, nos permitir determinar la existencia de

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actividad ovrica y la deteccin de celos silenciosos o inaparentes mediante la realizacin a intervalos determinados, de frotis seriados.
Esta determinacin de la fase del ciclo nos ser de gran utilidad a la hora de establecer
tratamientos de inhibicin, a base de progestgenos, que deben iniciarse en anoestro
La deteccin de la fase de proestro y su paso a estro es una herramienta imprescindible
en la determinacin del momento de fertilidad en la perra, junto con otras valoraciones,
como la valoracin de la progesteronemia, de la LH, los datos clnicos, etc (ver captulo
correspondiente) especialmente si se trata de efectuar una inseminacin artificial tanto
si es con semen fresco como con refrigerado o congelado.
Un frotis vaginal en las primeras horas de una monta o de una posible monta (tras una
fuga de la hembra en celo, al haber entrado un macho en su territorio, etc) nos permitir ratificar o no la monta (si se detectan espermatozoides) y la conveniencia de iniciar
una terapia abortiva en base a las posibilidades de fecundacin (segn en la fase en que
se encuentre la hembra). Por ejemplo, una perra en una de estas situaciones en cuyo frotis no aparecen espermatozoides y que se encuentra en fase de inicio de proestro, difcilmente puede quedar gestante. Puede acabar de precisarse determinando el momento
de la ovulacin mediante la valoracin de la progesteronemia.
Determinacin de monta y valoracin del macho. Un frotis vaginal efectuado inmediatamente despus de una monta nos permitir (especialmente en el caso del gato donde
la obtencin de esperma es dificultosa y la monta muy rpida) determinar si ha existido monta o no y deducir algo respecto a la capacidad reproductora del semental.
En el diagnstico de afecciones vaginales el frotis es una herramienta imprescindible
tanto en el diagnstico como en el seguimiento del tratamiento en base a la cantidad y
aspecto de los leucocitos, caractersticas de la mucosidad, etc
Diagnstico de las afecciones uterinas (mucmetras, pimetras, endometritis, etc) y seguimiento de su evolucin, en base a los mismo parmetros que acabamos de citar. Aunque se hable de "pimetras cerradas", el frotis vaginal siempre detectar la presencia anormal de piocitos, mucina, etc en estos procesos.
En aquellas patologas ovricas que causan alteraciones en los niveles estrognicos
(quistes foliculares, determinados tumores, etc) los cambios del frotis vaginal sern un
dato til.
Por ltimo, la citologa vaginal debe convertirse en una prctica imprescindible en todos los protocolos diagnstico de la infertilidad y en el seguimiento de la respuesta a
los tratamientos establecidos.

EXAMEN DEL ESPERMA.

Obtencin
Manejo
Conservacin

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volumen: entre 1 y 30 ml; sin relacin con la calidad

color: blanco opalescente; sangre en prstatas hiperplasicas, amarillento
en contaminacin por orina, etc.
Bacteriologa: menos de 10.000 bacterias/ml
pH: 6'3-6'7 (hasta 7 con la fraccin prosttica)
Fosfatasas alcalinas: indicadoras del vaciado del epiddimo. 5.000 - 40.000
UI/ml. Misma tcnica de suero.
Citologa: microcentrifugacin
Cuerpos extraos y motilidad: 1 gota focalizada a 4x y luego pasar a 10x.
Ms del 70% mviles y en oleadas. Presencia de hemates, leucocitos, clulas epiteliales, restos celulares.
Fijacin y tincin: observacin a inmersin. Morfologa.
Tincin con Diff-Quik 5' en cada colorante, aunque tiene el inconveniente de no teir
bien el acrosoma; existen tinciones especficas para esperma (Spermac). Contar 100 y ver
porcentaje con anomalas. Ha de haber un 80% de normales.
Anomalas: pueden afectar a cualquiera de las partes del espermatozoide (acrosoma, cabeza, pieza intermedia, cola) y se suelen clasificar en:
Primarias o mayores: gota proximal, microcefalia, etc. Es ms fcil que
afecten a la funcionalidad del esperma, y normalmente se producen durante la espermatognesis.
Secundarias o menores: cola doblada, cabezas desprendidas, colas enrolladas, gota distal, etc. Suelen producirse cuando ya esta formado el semen, como consecuencia de calor, envejecimiento, traumas, etc.
Contaje como hematolgico (cmara de Neubauer) x volumen (concentracin
muy variable, proporcin de lquido prosttico, etc). Normal entre 300 millones y 2 billones (entre 50.000 y 600.000 por ml.)

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Fotos correspondientes al seminario Citologa vaginal y evaluacin de semen del Dr.

Antonio Prats Esteve.

Fig. 1 Esquema dela distribucin de los distintios tipos de

clulas en el espasor del epitelio vaginal.

Fig. 2. Clula Basal (centro) ( x1.000).

Fig. 3. Clulas parabasales (x400).

Fig. 4 . Clula intermedia (x400).

Fig. 5 . Clula superficial (x400).

Fig. 6 . Anoestro en perra (x100).

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Fig. 7. Proestro en perra (x100).

Fig. 8 . Estro en perra (x100).

Fig. 9 . Fase folicular en gata (x100)

Fig. 10. Fase de interestro en gata (x100).

Fig. 11. Abundantes bacterias (x400). Tincin de ematoxili na-eosina

Fig. 12. La presencia de espermatozoides en el frotis vaginal

y las caractersticas de ste confirman la existencia de mon ta y la posibilidad de gestacin (x400).

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Foto 13. Un slo frotis como ste puede hacer difcil deter minar si se trata de un inicio de proestro o un final de es tro. Final estro (x100).

Foto 14. Imagen de una vaginitis prepuberal (x40).

Foto 16. Imagen de piometra en el mismo caso anterior,

con tincin policromtica (x400).
Foto 15. Frotis vaginal de una perra con piometra (x400).
La tincin de Hematoxilina-eosina no facilita la caracteriza cin de las clulas epiteliales.

Foto 18. Una mala tcnica ( extensin, secado, tincin...) im posibilita la interpretacin (x100).

Foto 17. Metrorragia (las celas epiteliales, escasas y bas filas descartan un proestro) (x40).

Foto 19. Fraccin prosttica de un perro con hiperplsia prosttica

y protatitis crnica: abundantes clula epiteliales gladulares, poli morfonucleares, etc. (x100). H-E.

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