UNIVERSIDAD TCNICA DE MANAB

FACULTAD DE CIENCIAS MATEMTICAS, FSICAS Y QUMICAS

7mo DE INGENIERA QUMICA

FUNDAMENTO DE MICROBIOLOGA Y LABORATORIO II
ING. VIRGINIA SNCHEZ
PROYECTO INVESTIGATIVO

INTEGRANTES
CHVEZ LOOR JORGE JAVIER
SABANDO MOLINA CRISTINA

INTRODUCCIN
En el presente trabajo investigativo consiste en la implementacin de
pruebas microbiolgicas para el anlisis, afirmacin y confirmacin de la
presencia de la bacteria Estafilococo ureo en muestras una en alimentos
(queso y carne).
Los sistemas ms importantes para la identificacin de microrganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
los laboratorios.
Al gram se evidencia como una coccea gram positiva de 1um dispuesta en
racimos, aunque tambin se le puede evidenciar en cadenas cortas o
diplococos. Es inmvil y no forma esporas.
Se mencionan tambin algunas caractersticas principales para el
aislamiento y el estudio del patgeno, utilizando procedimientos
microbiolgicos.

OBJETIVOS
OBJETIVO
GENERAL

Aislar
la
bacteria
Staphylococcus Aureus
en muestras especficas
utilizando medios de
cultivos para identificar
el gnero y especie,
aplicando
pruebas
bioqumicas.

OBJETIVOS
ESPECFICOS

Reconocer
las
propiedades
morfolgicas, fsicas y patgenas de la
bacteria Staphylococcus Aureus para
poder realizar las prcticas respectivas.
Emplear el medio de cultivo adecuado
para la identificacin de la bacteria
Staphylococcus Aureus.
Analizar
las respectivas pruebas
bioqumicas necesarias correctamente
para obtener los resultados requeridos.

MARCO TERICO

ESTAFILOCOCOS

Staphylococcus (del griego staphyl,

"racimo de uvas" y kkkos, "grnulo")
es
un
gnero
de
bacterias
estafilococceas de la clase Cocos.
Comprende microorganismos que
estn presentes en la mucosa y en la
piel de los humanos y de otros
mamferos y aves.

CARACTERSTICAS
GENERALES

Morfolgicamente los Staphylococcus

son
cocos
Gram-Positivos,
cuyo
dimetro oscila entre 0.5 y 1.5 micras.

ESTAFILOCOCOS AUREUS

Este microorganismo fue descrito por primera

vez en el ao 1880, concretamente en la ciudad
escocesa de Aberdeen, por el cirujano
Alexander Ogston en el pus que drenaba un
absceso infectado
En 1884, Friederich Julius Rosenbach acu el
nombre binominal de esta especie.
En 1961, Jevons hizo el primer reporte de la
existencia de un Staphyloccocus aureus
resistente a meticilina; cuando esta era una
causa importante de infeccin nosocomial en
Europa.

CONCEPTO
El nombre binominal de esta
bacteria proviene de la raz
griega, que se compone de
staphyl, que significa racimo
y coccus, que significa grano,
baya o uva; y del latn aureus
que significa dorado.

CLASIFICACIN CIENTFICA
MORFOLOGA
Reino: Bacteria
Filo: Firmicutes
Clase: Bacilli
Orden: Bacillales
Familia: Staphylococcaceae
Gnero: Staphylococcus

Especie: S. aureus
(ROSENBACH 1884)

S. aureus es un coco inmvil,

de 0,5 a 1 m de dimetro,
que se divide en tres planos
para formar grupos de clulas
irregulares semejantes a
racimos de uvas. En
extendidos de pus los cocos
aparecen solos, en pares, en
racimos o en cadenas cortas.

METABOLISMO

GENOMA

Staphylococcus aureus se
desarrolla rpidamente en
todos los medios, fermentan
lentamente en carbohidratos,
como el manitol, pero no
produce gas.
S. aureus produce pigmentos
que varan desde un color
blanco hasta un amarillo
intenso.

S. aureus tiene un cromosoma

circular de aproximadamente
2800 kilopares de bases, sin
contar el material gentico de
prfagos, plsmidos y
transposones.
Los factores de virulencia de la
bacteria estn contenidos en
todos estos vehculos

EPIDEMIOLOGA

PATOGENIA

Es un agente patognico
ubicuo que es considerado
como parte de la microbiota
normal.
Los seres humanos son un
reservorio natural de S.
aureus. Entre el 30 y el 50% de
los adultos sanos estn
colonizados, y entre el 10 y el
20% se mantienen colonizados
persistentemente.

La patogenicidad de las
infecciones por
Staphylococcus aureus se
relaciona con diversos
componentes de la superficie
Es una de las principales
bacterias implicadas en
enfermedades transmitidas
por alimentos (ETA).

SNTOMAS QUE HA SIDO AFECTADA

POR UNA INTOXICACIN
ALIMENTARIA ESTAFILOCCICA
Para saber si somos vctimas de una intoxicacin
alimentaria enterotoxignica, es necesario saber cules
son los sntomas que cada microorganismo produce en el
organismo humano.
As, se encuentra una relacin de estos con los que el
paciente ha consumido.
Los sntomas que presenta una persona que ha sido
afectada por una Intoxicacin Alimentaria Estafiloccica
son muy particulares
Tales manifestaciones clnicas abarcan:
Vmitos intensos, diarrea y clicos que inician entre 2 y 6
horas despus de la ingesta. La resolucin es rpida
(menos de 24 h).

PROFILAXIS

Prevenir la transmisin horizontal de estafilococos de una

persona a otra es sumamente difcil, no obstante, seguir
medidas como una buena tcnica asptica, difundir el
correcto lavado de manos (no solo a nivel hospitalario) y la
cobertura de las superficies de piel expuestas son buenas
medidas para prevenir infecciones por este (y otros)
microorganismos.

MICROSCOPA
En frotis teidos con gram, los estafilococos aparecen como cocos grampositivos con dimetros de 0,5 hasta casi 1,5 m. Los estafilococos al
microscopio son cocos gram-positivos con forma de racimos cuando
crecen en medio agar y aparecen solos, en pares, en cadenas cortas, en
pequeos grupos.

MORFOLOGA COLONIAL
La morfologa colonial es til para distinguir
entre especies de Staphylococcus y
Micrococcus ya que la mayora de las
especies de Staphylococcus (incluido S.
aureus) crecen ms rpido y son ms
grandes en un cultivo a 24 h.
Las colonias de S. aureus son grandes, lisas,
enteras, presentan consistencia cremosa.

CULTIVO
Los estafilococos crecen rpidamente en casi todos los medios
bacteriolgicos bajo condiciones aerobias o microaeroflicas.
Los Medios diferenciales para S.aureus son el medio manitol-salino o
Chapman, el medio Baird-Parker, agar estafilococos N 110, agar DNAsa.

PRUEBAS BIOQUMICAS
Coagulasa
La prueba de la coagulasa es sencilla y tiene una especificidad muy alta.
La prueba se puede realizar con un cultivo o en tubo y consiste en la
bsqueda del factor de aglutinacin.

Desoxirribonucleasa (DNasa)
Como se mencion, S. aureus produce DNasa termoestable que es
detectable en el medio de prueba del mismo nombre. Su uso es
principalmente como confirmacin diagnstica.

Catalasa
Los estafilococos y los micrococos se
diferencian de los estreptococos y los
enterococos por esta prueba.

Sensibilidad a la lisostafina
Esta prueba mide la facilidad con la que
los microorganismos estafiloccicos se
lisan en presencia de lisostafina.
Lisostafina es una endopeptidasa que
rompe
los
puentes
de
entrecruzamiento de glicina en el
peptidoglucano.

Oxidasa
Esta prueba es rpida, se usan discos de
papel
filtro
con
tetrametil-pfenilendiamina como reactivo y DMSO
para hacer permeables a las bacterias al
reactivo. La prueba se basa en que
evidenciar la reaccin de xido-reduccin

Enzimoinmunoanlisis
Estas pruebas buscan la presencia de protenas especficas de S. aureus, la
mayora de ellas busca a la protena A y la -N-acetilglucosaminidasa. La
sensibilidad y especificidad de este estudio, en cultivos no contaminados es
cercana al 100%.

MEDIOS DE CULTIVOS Y
PRUEBAS BIOQUMICAS
APLICADAS EN EL
LABORATORIO

AGAR ESTNDAR
MTODOS

Muestra #
1 (Carne)

Se emplea para el recuento

microbiano en leches, carnes,
productos alimenticios en general,
productos farmacuticos, productos
cosmticos y cualquier tipo de
muestra.

La composicin del medio basada en

la peptona de casena como
aportacin nutritiva, el extracto de
levadura como sustrato vitamnico y la
glucosa como fuente energtica,
favorece el crecimiento de la mayor
parte de los microorganismos, sin
precisar de otros aditivos

Muestra #2
(Queso)
AGAR SAL Y
MANITOL

Se emplea para el
aislamiento selectivo y
recuento de Estafilococos
patgenos en productos
lcteos, crnicos, marinos
y otros productos
alimenticios. Tambin se
emplea con el mismo fin
en productos
farmacuticos y
cosmticos.

El efecto inhibidor se debe

a la alta concentracin de
Sodio Cloruro del medio.
Con la fermentacin de la
D(-)-Manita se genera
cido que ocasiona el
viraje del rojo de fenol al
amarillo, permitiendo as
una mayor claridad en el
momento de establecer el
diagnstico, ya que la
mayora de los
Estafilococos patgenos
fermentan este azcar.

ROJO DE METILO
Determina la habilidad del
organismo de romper el Indol
del aminocido triptfano,
esta divisin molecular es
lograda por una serie de
encimas intracelulares
diferentes, un sistema que en
conjunto se lo llama con
frecuencia triptofanosa.
INDOL

Evala la capacidad de la
bacteria de utilizar la glucosa
por la va acido mixto
Las bacterias que utilizan la
glucosa por la va acida mixta
genera como producto finales
cido actico, cido frmico,
acido succnico y cido lctico,
los cuales provocan un fuerte
descenso en el pH del medio,

Encima catalasa, desdobla el

perxido de hidrgeno en
agua y oxgeno, despendiendo
burbujas.

CATALASA

AGAR TSI
La reaccin de la oxidasa se debe
a la presencia de un sistema
citocromo-oxidasa que activa la
oxidacin de citocromo que es
reducido por el oxgeno
molecular que produce agua y
perxido de hidrgeno segn la
especie bacteriana.

OXIDASA

Gracias a su composicin es uno

de los medios de cultivo ms
empleados.
Para la diferencia de
anterobacterias segn:
Fermente o no glucosa.
Fermenten o no lactosa o
sacarosa.
Produzcan o no cido sulfhdrico.
Produzcan o no gas.

La tincin o coloracin de Gram

es un tipo de tincin diferencial
empleado en bacteriologa para
la visualizacin de bacterias.
Para observar al microscopio
ptico es conveniente hacerlo a
100x con aceite de inmersin.

PRUEBA DE TINCIN DE GRAM

MATERIALES Y SUSTANCIAS

EQUIPOS Y MATERIALES
Pipetas
Balanza analtica
Peras
Autoclave
Porta y cubre
Incubadora
objetos
Calentador- agitador
Asas (en punta y
Cabina de flujo laminar
redonda)
Mechero
Pastilla agitadora
Mortero
Campana de
Matraz Erlenmeyer
Durham
Cajas Petri
Algodn
Cuchara metlica
Gasa
Tubos de ensayo
Papel kraft
Gradilla
Piola nailn
Vidrio reloj
Cinta adhesiva de
Probeta
papel.

SUSTANCIAS Y REACTIVOS

Carne (Muestra #1)

Queso macerado (Muestra#2)
Agua destilada
Agua peptonada
Agar Mtodos Estndar. (Muestra #1)
Agar Sal y Manitol (Muestra # 2)
Agar TSI
Cristal violeta
Reactivo de kovac
Perxido de Hidrgeno
Lugol
Alcohol
Safranina.

PROCEDIMIENTO
Se esterilizaron todos
los materiales y equipos
previos a la prctica,
esto se lo realiz en la
autoclave y en la estufa.

Etapa N1 Obtencin
de las muestras (5.22g
en 47ml de agua
peptona )

Etapa N2 Preparacin
de las soluciones.

Etapa N 3 PreEnriquecimiento

Etapa N 4 Siembra en
los medios de cultivo

Etapa N 5 Pruebas
Bioqumicas

CLCULOS

RESULTADOS
Estndar Mtodos Agar
MICROORGANISMO
Staphylococcus Aureus

DESARROLLO

COLOR DE COLONIA

CONFIRMACIN

Satisfactorio

Medianas-Crema

Positivo

PRUEBA BIOQUMICA

TSI
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
Aislamiento en Estndar Mtodos Agar
1era Muestra
10-1

Replica

10-2

10-3

10-4

10-5

10-1

10-2

10-3

10-4

Fermentacin de Glucosa

Fermentacin de Lactosa

Fermentacin de Sacarosa

Produccin de SH2

1era Muestra

PRUEBAS BIOQUMICAS

Replica

10-1

10-2

10-3

10-4

10-5

10-1

10-2

10-3

10-4

Catalasa
Oxidasa
Indol
Rojo de Metilo

+
+
+

+
+
+

+
*
+
+

*
*
*
*

*
*
*
*

+
+
+

*
+

*
*
*
*

*
*
*

Prueba de Gram

Rojo de Metilo

Catalasa

Prueba de Gram

Oxidasa

Sal y Manitol Agar

MICROORGANISMO
Staphylococcus Aureus

DESARROLLO
Satisfactorio

COLOR DE COLONIA
Amarillo

CONFIRMACIN
Negativo

CONCLUSIONES GENERALES

De los resultados obtenidos el Agar Estndar Mtodos y Sal Manitol siendo este el medio de cultivo adecuado
para la identificacin de la Staphylococcus Aureus como satisfactorio.

La caracterstica que se presentaron de las colonias Staphylococcus Aureus en el agar Estndar Mtodos con la
muestra (Carne) fueron videntes desde su estructura, tamao, color, apariencia hasta su forma de agrupacin; en
cambio con el agar Sal Manitol con la muestra (queso) hubo ausencia de Staphylococcus Aureus.

Aplicando varias prueba bioqumica permitieron su anlisis e interpretacin; de manera que la pruebas de indol,
rojo de metilo, catalasa, TSI y Tincin de Gram dieron valores positivo en su resultado a excepcin de la prueba
oxidasa que fue la nica que arroja un valor negativo cmo resultado. Todo eso se debe a que como ya se haba
mencionado antes la Staphylococcus Aureus es una bacteria catalasa-positivo.

En el microscopio se pudo evidenciar como una coccea gram positiva, dispuesta en racimos, aunque tambin
se le puede evidenciar en cadenas cortas o diplococos, tambin se observ que es inmvil y no forma esporas.

RECOMENDACIONES GENERALES

Se recomienda tomar las debidas precauciones de las reglas del laboratorio mandil, guantes y mascarilla por la
atmosfera no tan estril que se presenta durante la realizacin del proyecto.
Esterilizar muy bien los materiales.
Al realizar las disoluciones con la mayor exactitud.
Utilizar la debida proteccin y asepsia en los equipos del laboratorio de Microbiologa.
Emplea los reactivos reveladores en orden y en buen estado.
Tenemos que tomar las precauciones adecuadas en cada prctica sin importar el grado de peligrosidad que se
presenten.
En el momento de preparar el agar y todas las soluciones de la prctica leer las instrucciones que vienen
marcadas en el envase del agar. Ya que hubo muchos problemas al momento de preparar el agar y no dejar que el
medio de cultivo hierva demasiado ya que se puede subir y ensuciar los equipos lo que puede causar el dao de
los mismos.
Para que nuestra siembra sea de mayor eficacia realizarla dentro de la cabina de flujo laminar as se evita la
contaminacin de las muestras como del medio de cultivo.
Al momento de terminar la prctica se deben dejar todos los materiales y equipos limpios y en su debido lugar
para su posterior uso.
Avisar cuando se desea la entrada al laboratorio, para que haya la debida supervisin.

BIBLIOGRAFA
Abbot S (1999) Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, and Berratia. En:
Murray P, Baron E, Pfaller M, Tenover F, Yolken (Ed), Manual of
Clinical Microbiology. 7th edition. ASM Press, Washington, Estados
Unidos de Amrica, p. 475-482.
http://www.britannica.com/EBchecked/topic/685512/Enterobacter
https://books.google.com.ec/books?id=9EIfkks8uxMC&pg=PA37&lpg
=PA37&dq=enterobacter+aerogenes+en+a
http://es.slideshare.net/carolinacartagenad/cultivo-y-aislamiento-debacterias
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Cuenta-enplaca_6527.pdf.
http://www.qo.fcen.uba.ar/quimor/wp-content/uploads/2013/09/GUIATP-CONTROL-2013.pdf.