1.

OBJETO
Describir la metodologa a seguir para determinar la concentracin de
grasas y aceites en muestras de agua
2. APLICACIN
Este mtodo es aplicable para muestras lquidas, aguas continentales
superficiales y marinas. Tambin es adecuado para la mayora de aguas
residuales industriales o efluentes tratados, aunque la complejidad de la
muestra puede arrojar resultados bajos o altos debido a la falta de
especificidad analtica. El mtodo no es aplicable a fracciones de bajo punto
de ebullicin que volaticen por debajo de 85C.
3. DEFINICIONES
Emulsin: Es una mezcla de lquidos inmiscibles de manera ms o menos
homognea. Un lquido (la fase dispersa) es dispersado en otro (la fase
continua o fase dispersante)
Extracto: Sustancia que en forma concentrada se extraer de otra de la cual
conservar sus propiedades esenciales y constitutivas.
Grasas y Aceites: Son estres (compuestos orgnicos) formados por la unin
de cidos grasos y gricerol. Su estado fsico es slido o lquido. Son solubles
en solventes no polares y prcticamente insolubles en agua Solvente:
Nombre genrico de un lquido capaz de disolver o dispersar otras
sustancias. Sustancias orgnicas en estado lquido, utilizadas para disolver
slidos, gases u otros lquidos. La mayora de ellos son derivados del
petrleo o sintticos.
4. FUNDAMENTO DEL MTODO
Se define como aceites y grasas a cualquier material recuperado como
sustancia soluble en un solvente. Incluye otros materiales extrados por el
solvente de muestras acidificadas (tales como compuestos azufrados,
ciertos pigmentos orgnicos, y clorofila) y no volatilizados durante la
prueba. Algunas sustancias extrables, como los cidos grasos y grasas
insaturadas, se oxidan rpidamente, de ah, se incluyen precauciones
especiales para minimizar este efecto.
Se utiliza el mtodo de particin gravimtrica liquido/liquido, basado en la
tcnica del Standard Methods 5520B, para determinar la concentracin de
aceites y grasas en muestras liquidas. Los aceites y grasas disueltas o
emulsificados son extrados del agua por contacto ntimo con un solvente
extractor. El solvente es n- hexano al 85% o una mezcla de solventes (80%
n-hexano y 20% metil-terbutil ter) para el mtodo gravimtrico. Se
determina el contenido de aceites y grasas en la muestra inicial por
diferencia gravimtrica.
Los solventes orgnicos agitados con algunas muestras pueden formar una
emulsin difcil de romper. Este mtodo incluye una forma de manejar esas
emulsiones. Se recomienda en lo posible reciclar el solvente, ya que la
recuperacin de este reduce la emisin de vapores a la atmsfera y los
costos de suministro de solvente.

5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES
a. Los solventes orgnicos pueden disolver no solo el aceite y la grasa sino
tambin otras sustancias orgnicas. Cualquier sustancia filtrable soluble en
el solvente (azufre elemental, aromticos complejos, derivados de
hidrocarburos con cloro, azufre y nitrgeno, y ciertos pigmentos orgnicos)
son extrados y recuperados como aceite y grasa. No existe un solvente que
disuelva selectivamente solo aceites y grasas.
b. Para todos los mtodos excepto el de particin infrarrojo, la remocin de
solvente causa la prdida de los hidrocarburos de cadena corta y aromticos
simples por volatilizacin. Seguir los tiempos de secado estrictamente, para
estandarizar la prdida gradual de peso. Para esos mtodos, durante el
enfriamiento del frasco de destilacin y del material extrado, puede
observarse un ligero aumento de peso, posiblemente por la absorcin de
agua si no usa un desecador. Para el mtodo infrarrojo, el uso del detector
puede obviar algunas interferencias coextradas. Para el mtodo Soxhlet
respetar los tiempos de extraccin por la solubilidad variable de las grasas.
Para el mtodo de hidrocarburos, los hidrocarburos ms polares, como
aromticos complejos y derivados con cloro, nitrgeno y azufre, pueden ser
adsorbidos en la slica gel. La materia grasa tambin puede interferir.
c. Si se forman emulsiones difciles de romper por centrifugacin, usar otros
mtodos. Esas muestras pueden ser efluentes de proceso de papel, y
manufacturas de zeolita. Determinar el mtodo a usar en cada caso.
d. Algunas matrices pueden elevar la cantidad de agua distribuida en el
fluido orgnico de extraccin. Cuando se seca el solvente con sulfato de
sodio, puede excederse la capacidad secante del sulfato de sodio,
disolvindose y pasando al frasco tarado. Luego del secado los cristales de
sulfato se hacen visibles. Esta es una interferencia positiva en mtodos
gravimtricos. Si esto sucede, redisolver el aceite y grasa con 30 mL de
solvente de extraccin, luego drenar el solvente a travs de un embudo con
papel filtro lavado con solvente, a otro frasco tarado. Lavar el primer frasco
dos veces mas, combinando todo el solvente en el frasco nuevo, y luego
tratarlo como una muestra extrada.
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN
Tomar una muestra en una botella de vidrio mbar de 1L o ms (o frasco de
vidrio de boca ancha con tapa de PTFE), lavada previamente con jabn (Tipo
extrn), enjuagado con agua, y con acetona u otro solvente para remover
cualquier residuo que pueda interferir con el anlisis. No rebosar el frasco, y
no subdividir la muestra en el laboratorio. Recoger adems una rplica de la
muestra, estas deben ser colectadas en paralelo.Si el anlisis se va a
realizar despus de pasadas 2 horas, acidificar a pH 2 o menos con HCl o
H2SO4 concentrado y refrigerar, para garantizar la preservacin de la
muestra. Cuando se requiera la concentracin promedio en un periodo
extendido, examinar porciones individuales recogidas a intervalos prescritos
para eliminar las prdidas de grasa en el equipo de muestreo durante la
recoleccin de una muestra compuesta.
Al recolectar lodos, procurar obtener muestras representativas. Cuando no
se pueda analizar dentro de las 2 h siguientes, preservar con 1 mL HCl

concentrado/80 g muestra y refrigerar. Nunca preservar muestras con

cloroformo (CHCl3) o benzoato de sodio.
7. MATERIALES Y EQUIPOS
- Botella de vidrio mbar de 500 ml o 1L - Balanza analtica de precisin
0,0001g - Pipetas de 5, 10 mL - Embudos de separacin de capacidad
mayor o igual a 1L, con llave de tefln (o equivalente). - Recipientes de
vidrio igual o mayor a 100 mL para recibir el extracto - Probeta igual o
mayor a 1L - Soporte universal metlico - Desecador - Receptculo para
solvente recuperado (beaker pequeo, viales de 10 mL) - Bomba de vaco u
otra fuente de vaco
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES
- cido clorhdrico, o cido sulfrico concentrado
- n- hexano, mnimo 85% de pureza, punto de ebullicin 69C. No use
mangueras para transferir solvente entre contenedores.
- Metil- tert-butil ter, punto de ebullicin 55 a 56C. No use mangueras
para transferir solvente entre contenedores
- Sulfato de sodio anhidro , Na2 SO4
- Mezcla de solvente 80% n-hexano; 20% v/v metil-tert-butil ter .
- Solucin estndar de calibracin: Prepare una solucin de acetona que
contenga una cantidad conocida de vaselina (grado analtico): Disuelva unos
0,500 gramos de vaselina en 50 mL de Acetona. La solucin preparada tiene
una concentracin de 10 mg/mL de solucin. Prepare una muestra sinttica
de 5mg/L adicionando 500 L (0,5 mL) de la solucin anterior en 1L de agua
desionizada. Utilice este como material de referencia.

9. PROCEDIMIENTO
- Si previamente la muestra no ha sido acidificada baje el pH <2 con H2SO4
o HCl.
- Marque el nivel de la botella hasta donde se encuentra el menisco de
agua (si no se encuentra llena), para medir posteriormente el volumen.
- Transfiera toda la muestra de la botella al embudo de separacin. Agregue 30 mL o ms de hexano a la botella vaca. Tape y agite
vigorosamente por algunos segundos. Transfiera el hexano al embudo de
separacin.
-Tape el embudo y agite por unos segundos y afloje la llave para que salgan
los vapores. Agite nuevamente por 5 minutos ms.
-Coloque el embudo en el soporte universal y deje separar las fases.
-Recoja la fase acuosa en la misma botella de la muestra y transfiera el
extracto hexnico que contiene los aceites y las grasas a un recipiente de
vidrio.

- Repita el proceso dos veces ms agregando a la muestra 30 mL de

hexano. Mezcle las fases hexnicas con el primer extracto contenido en el
recipiente de vidrio.
- Para determinar el volumen inicial de la muestra, llenar la botella con
agua(del grifo) hasta la marca realizada y trasferir a una probeta.
- Para remover el exceso de agua en el extracto de hexano, agregar
aproximadamente 10 g de Sulfato de Sodio anhidro (Na2SO4). Tape y
almacene.
-Deposite el extracto en vial o beaker pequeo previamente pesado, usando
una pipeta pasteur, evitando el paso de sulfato de sodio al recipiente.
- Deje secar los viales a temperatura ambiente y registre su peso final. Para
acelerar el secado del extracto use la bomba de vaco soplando aire con la
manguera.(Se recomienda usar una corriente de nitrgeno o gas inerte
seco). - Para verificar peso constante dejar por 2 horas y anotar peso final.
Si es diferente al anotado anteriormente, dejar 2 horas ms, hasta obtener
peso constante.

NOTA: El principal residuo de este mtodo es el solvente empleado, el cual

debe recolectarse de un sistema de secado (rotovapor) y almacenar
apropiadamente en contenedores rotulados. La muestra extrada puede
desecharse, sin embargo, se debe tener la precaucin de ajustarle a un
valor de pH entre 6 y 8 unidades (si lo requiere) antes de ser descargadas al
vertedero. 10. CLCULOS
Por diferencia de pesos del vial donde se recolecta el extracto, se calcula la
concentracin de aceites y grasas, en mg/L, as:
Wf - Wi [AyG] (mg/L) = ----------------

x 1000000

Vm

Wf = Peso final del vial luego de evaporar el solvente (g) Wi = Peso

inicial del vial (g) Vm = Volumen de muestra sometida a anlisis (mL)
El mtodo de particin gravimtrica liquido/liquido fue probada en un
estudio de validacin de mtodos en un nico laboratorio y entre
laboratorios. Los datos combinados de estos estudios arrojaron una
Recuperacin del 93% y una precisin (como desviacin relativa estndar)
del 8,7%.