1. Qu es un antibiograma?

R/ es un mtodo in vitro que se usa para determinar la susceptibilidad de los microorganismos a una
variedad de agentes antimicrobianos, bajo condiciones de laboratorio especificas y estandarizadas.
2. Qu es un antimicrobiano?
R/ Un antimicrobiano es una sustancia qumica que, a bajas concentraciones, acta contra los
microorganismos, destruyndolos o inhibiendo su crecimiento. Algunos ejemplos de antimicrobianos
dirigidos a las bacterias son los antibiticos que actan contra las infecciones humanas o animales, y
los biocidas como los desinfectantes y los conservantes.
3. Los antimicrobianos se clasifican en 4 grupos principales de acuerdo a su mecanismo de
accin. Cuales son y que antimicrobianos pertenecen a cada uno de estos grupos.
R/
a. inhibidores de las sntesis de pared celular:
- betalactamicos: penicilinas, aminopenicilinas, ureidopenicilinas, carboxipenicilinas, penicilinas
resistentes a penicilinasas, betalactamicos inhibidores de betalactamasas, cefalosporinas,
carbapenemicos, glucopptidos,
b. inhibidores de la sntesis de protenas:
- Macrlidos: A.C.E
- Aminoglucsidos
- Tetraciclinas
- Oxazolidonas
- Cloranfenicol
- Lincosamidas
- Estreptograminas
c. Inhibidores de la sntesis de cidos nuclecos:
- Quinolonas
- Rifampicina, rifabutina
- Metrodinazol
d. Antimetabolitos:
- Sulfonamidas
4. Qu determina el adecuado tratamiento en un proceso infeccioso?
R/ El diagnstico oportuno del agente etiolgico causante de un proceso infeccioso es determinante
para iniciar el tratamiento adecuado contra este. Dicho diagnostico se puede establecer al momento en
que se asla e identifica el agente causante. En algunas oportunidades no es posible este aislamiento,
por lo que el diagnstico debe establecerse mediante otros parmetros, como son aumento del ttulo
de anticuerpos, o bien el hallazgo de antgenos, componentes celulares o un producto metablico
especfico del microorganismo. El aislamiento y la identificacin de bacterias y virus necesitan de la
cooperacin del mdico tratante y el laboratorio de microbiologa, el cual es de mucha importancia, ya
que puede brindarles a los mdicos tratantes informacin y resultados a travs de:
- Informacin adecuada y actualizada para la toma de muestras.
- Deteccin e identificacin de los patgenos aislados.
- Determinacin de la sensibilidad de estos microorganismos, lo que permite el inicio de un
tratamiento con frmacos para eliminar el agente infeccioso.

5. Qu mtodos existen para determinar la sensibilidad bacteriana? Explique cada uno.

R/ los mtodos existentes para determinar la sensibilidad bacteriana a antimicrobianos son: Difusin
en disco, dilucin en medio lquido, dilucin en medio slido con agar.

a. Mtodo de difusin en disco: La difusin en disco hace referencia a la difusin que experimenta
un agente antimicrobiano a una determinada concentracin a partir de discos, tiras o tabletas, que
se depositan en un medio de cultivo slido que ha sido sembrado con un inculo bacteriano
estandarizado. El mtodo de difusin en disco se basa en la determinacin de una zona de
inhibicin del crecimiento que es proporcional a la sensibilidad de la bacteria frente al
antimicrobiano presente en el disco.
b. Mtodos de dilucin en medio lquido y en medio slido: La finalidad de estos mtodos es
determinar la concentracin ms baja del antimicrobiano ensayado que es capaz de inhibir el
crecimiento de la bacteria analizada (MIC, concentracin mnima inhibitoria, que normalmente se
expresa en microgramos/mililitro o miligramos/litro). Sin embargo, la MIC no siempre representa un
valor absoluto. La "verdadera" MIC es un punto que se encuentra entre la concentracin ms baja
del ensayo que inhibe el crecimiento de la bacteria y la siguiente concentracin ms baja del
ensayo.
-

Dilucin en caldos de cultivo: La dilucin en medio lquido es una tcnica en la que se

prueba una suspensin normalizada de bacterias frente a varias concentraciones de un agente
antimicrobiano (normalmente mediante diluciones seriadas que reducen la concentracin a la
mitad) en un medio lquido estandarizado. El mtodo se puede realizar tanto en tubos con un
contenido mnimo de 2 ml (macrodilucin) como en volmenes ms pequeos, utilizando
placas de microtitulacin (microdilucin).
Existen comercialmente en el mercado varios tipos de placas de microtitulacin que contienen
antibiticos prediluidos dentro de los pocillos de las placas. El uso de lotes idnticos de estas
placas de microtitulacin ayuda a eliminar errores potenciales que pueden surgir durante la
preparacin y dilucin de los antimicrobianos. Dicho uso, junto a un protocolo normalizado,
incluyendo cepas de referencia con control de calidad, puede facilitar la homologacin si se
dispone de suficientes recursos financieros.

Dilucin en medio slido: La dilucin en medio slido implica la incorporacin de un agente

antimicrobiano a concentraciones progresivamente crecientes en un medio solidificado con
agar y la aplicacin de un inculo bacteriano definido a la superficie de la placa que contiene el
agar. A menudo, los resultados derivados de estos ensayos se consideran como los estndares
de oro en la determinacin del valor MIC para una determinada combinacin
bacteria/antimicrobiano en una prueba concreta.

6. Qu medios de cultivo se usan en un antibiograma? Cmo se preparan?

R/ El medio estandarizado para la realizacin del antibiograma es el medio Mueller-Hinton, al que se le
aade sangre u otros suplementos para bacterias que no crecen en l. Este medio presenta buena
reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de
sulfonamidas, trimetoprim y tetraciclina es bajo, la mayora de los patgenos crece satisfactoriamente y
una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo.
-

Preparacin: Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar

embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitacin frecuente y hervir durante 1 minuto.
Esterilizar a 121C durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y distribuir a cajas de Petri (o
agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal
(25-30 ml en placas de 9 cm de dimetro).

7. Cmo se deben conservar los discos de sensibilidad?

R/ Refrigere a 8C o congele a -14C o menos.

Betalactmicos: mantngalos congelados, slo refrigere lo que est en uso (mximo 7 das).
Antimicrobianos lbiles (imipenem, combinaciones con clavulanato) son ms estables si se
mantienen siempre congelados.
La superficie del agar debe estar hmeda pero sin gotas de agua visible.
Retire del refrigerador 1 a 2 horas antes de utilizarlo(s).
Los envases deben tener desecantes.
La fecha de expiracin debe estar vigente.

8. Para cuales microorganismos se utiliza el antibiograma Kirby Bauer y para cuales no?
R/ El mtodo Kirby Bauer se encuentra estandarizado para el estudio de: Enterobacterias,
Pseudomonas aeruginosas y Acinetobacter spp., Staphylococcus spp., Enterococcus spp,
Haemophilus spp, Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus spp, Vibrio
cholerae.
9. Cmo se prepara un inculo?
R/ - El primer paso es la recuperacin de la cepa microbiana o el asilamiento de la misma si es que se
encuentra en un ambiente donde existan otros microorganismos.
- El segundo paso consiste en cultivar el microorganismo en un medio solido como mtodo de
pre-cultivo, esto con el fin de que el microorganismo se adapte a este tipo de crecimiento.
- El tercer paso es el crecimiento en un medio de cultivo lquido para preparar al inoculo para
poder pasarlo a un biorreactor.
10. Explique el procedimiento de lectura e interpretacin de resultados
R/ La lectura de los resultados consiste en la categorizacin clnica de los resultados, es decir, en la
traduccin por medio de los puntos de corte clnicos, los halos de inhibicin o los valores de CMI en las
categoras clnicas sensible:
Sensible: cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un
antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad con el xito teraputico.
Intermedio: cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un
antimicrobiano que se asocia a un efecto teraputico incierto.
Resistente: cuando un aislado bacteriano es inhibido in vitro por una concentracin de un
antimicrobiano que se asocia a una alta probabilidad con el fracaso teraputico.
Un requisito esencial para poder realizar una adecuada lectura interpretada es conocer la identidad del
microorganismo estudiado, tanto el gnero como la especie, ya que sin ella el resultado puede llevar a
errores en la utilizacin de los antimicrobianos. Otro requisito para poder realizar correctamente la
lectura interpretada del antibiograma es conocer el fenotipo de sensibilidad de un microorganismo, ya
que hay bacterias que siempre son resistentes a determinados antibiticos y otras que siempre son
sensibles, y la desviacin de estos patrones indica si el patrn del antibiograma corresponde a un fenotipo
habitual, raro o imposible

11. Que
se
debe
tener presente en
el
control
de
calidad,
de
acuerdo
a
la
norma.
R/
- Estabilidad de los antibiticos
- Identificacin de los antibiticos
- Potencia de las soluciones madre de los antimicrobianos
- Cumplimiento del sistema de calidad recomendado para los productos
- Almacenamiento correcto de las drogas (para prevenir el deterioro)
- Pericia del personal que realiza las pruebas de sensibilidad
- Observacin de los procedimientos que indican las normas (por ej. condiciones de incubacin,
preparacin del inculo, interpretacin del punto final).
12. Qu errores se pueden cometer?
R/ Utilizacin de un medio diferente al de Mueller-Hinton.
Preparacin incorrecta del medio de Mueller-Hinton, particularmente en lo que se refiere a la
determinacin del pH.
Uso de medios con fecha de expiracin vencida o uso de medio incorrectamente almacenado.
Preparacin incorrecta y almacenamiento incorrecto del estndar de turbidez.
Almacenamiento incorrecto de los discos.
Inadecuada estandarizacin de la concentracin del inculo.
Demora excesiva en la estandarizacin del cultivo o demora en la inoculacin del medio slido.
Demora excesiva en la aplicacin de los discos despus de haber hecho la inoculacin en el
medio slido.
Demora excesiva en la incubacin del medio despus de haber sido puestos los discos.
Incubacin a temperatura diferente de 35C o incubacin en atmsfera de C02.
Lectura prematura de los resultados antes de un periodo de incubacin de 16-18 horas.