Gua Cintica Enzimtica

Docente: Cecilia Arellano

Sede: Renca

BIOQUIMICA
1.- La hidrlisis de N-glutaril-L-fenilalanina-p-nitroanilida (GPNA) para dar p-nitroanilina y
N-glutaril-L-fenilalanina, est catalizada por la enzima -quimotripsina. En unas
determinadas condiciones de pH y temperatura, los datos cinticos obtenidos han sido
los siguientes:
GPNA x (10-4 M)

V (mmmol L-1min-1)

2,5

2,11

3,73

10

5,9

15

7,1

a) Asumiendo una cintica de tipo Michaelis-Menten, calclese grfcamente los

valores de Vmx y Km. (Aplique el Lineweaber Burke para determinar estos
valores)
b) Determine el valor del nmero de recambio sabiendo que la concentracin de
enzima empleada es de 4x10-6 M (E0). Considere la siguiente frmula para el
nmero de recambio enzimtico:
NRE = Vmx/E0
2.- Qu relacin numrica existe entre el Km y [S] cuando una reaccin catalizada
enzimticamente alcanza un 80% de la Vmx?

3.- Efecto de la concentracin de enzima: En el siguiente experimento con la enzima

fosfatasa cida de semillas de trigo germinante, se vari la concentracin de la enzima
en cubeta a dos concentraciones de sustrato y se obtuvieron los resultados siguientes:
[FP] 0.1 mM

[FP] 10 mM

Velocidad
(nmol/min)

Velocidad
(nmol/min)

1.920

6.307

10

4.059

13.169

15

5.956

19.145

20

7.766

25.694

25

9.479

32.282

30

11.844

37.882

[Enzima] (l)

a) Cmo vara la velocidad de la reaccin en funcin de la cantidad de enzima

aadida?
b) Qu pasa si dividimos la velocidad registrada por la cantidad de enzima aadida
al ensayo?
c) Utilizando la ecuacin de Michaelis-Menten, explique sus respuestas a las
preguntas anteriores.

4.- Cintica de una enzima: La actividad de la Acetil-CoA carboxilasa, medida con tres
diferentes concentraciones de enzima y a diferentes concentraciones de sustrato fue la
siguiente:
[AcetilCoA]
(ug de protena)

0,1

[Sustrato]
(M)

0,2

0,5

Velocidad
(mol/min)

0,05

0,275

0,546

1,373

0,14

0,482

1,001

2,502

0,23

0,580

1,185

2,891

0,32

0,642

1,385

3,463

0,5

0,755

1,494

3,656

0,59

0,766

1,497

3,810

a) Calcule para cada experimento el valor de Km y el valor de Vmx

b) Son los valores de Km y Vmx iguales o diferentes?, por qu?
c) Sabiendo que la enzima pesa 220.000 g/mol, haga una grfica de Vmx v/s mol
de enzima.
d) Qu representa la pendiente de esta grfica?
e) Cuntas molculas de sustrato por minuto es capaz de hidrolizar la enzima
segn cada concentracin?

5.- La enzima Aspartato transaminasa, cataliza la reaccin:

Aspartato + Oxoglutarato Glutamato + Oxoloacetato
Se realizaron los siguientes tres experimentos obteniendo los siguientes datos:
[Asp] = 1mM
Velocidad
[OxG] (mM)
(mol/min)

[Asp] = 0,02mM
Velocidad
[OxG] (mM)
(mol/min)

[Asp] = 0,5mM
Velocidad
[OxG] (mM)
(mol/min)

0,002

0,444

0,007

0,411

0,007

0,468

0,018

2,031

0,048

1,268

0,048

2.017

0,037

2,781

0,171

1,722

0,171

3,317

0,063

3,336

0,335

1,850

0,335

3,866

0,094

3,756

0,547

1,983

0,547

4,123

0,493

4,324

1,016

2,031

1,016

4,324

a)
b)
c)
d)

Calcule la Km y Vmx para cada sustrato

Cambian las Vmx?, por qu?
Explique que pas en el segundo experimento, con respecto al tercero
A qu concentracin de enzima, se hace ms eficiente la hidrlisis?