UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS TROPICALES

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMA:

CLOSTRIDIUM BOTULINUM

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA GENERAL

DOCENTE: BLG.WILBERT QUISPE ZUIGA

PRESENTADO POR:

JUAN JOSE HUARCA SUTTA

PAUL ZAMALLOA VARA

JUNIOR GALVEZ VENEGAS

QUILLABAMBA, NOVIEMBRE 2013

INTRODUCCIN

Los bacilos Gram positivos formadores de esporas son las especies de gneros
Bacillus y Clostridium. Estos bacilos son cosmopolitas y debido a que forman
esporas, pueden sobrevivir en el ambiente por muchos aos. El gnero Bacillus es
aerobio, en tanto que los clostridios son anaerobios obligados.
Los clostridios son bacilos grandes mviles, grampositivos y anaerobios, muchos
descomponen protenas, forman toxinas. Las esporas de los clostridios son, por lo
general, mayores que el dimetro de los bacilos que las forman. En las diversas
especies las esporas se encuentran colocadas ecuatorial, subterminal o terminal.
Son mviles y presentan flagelos peritricos.
Los clostridios comparten antgenos pero tambin poseen antgenos especficos
solubles que permiten agruparlos por medio de pruebas de precipitacin.
Su hbitat natural es el suelo o el intestino de los animales y el hombre, donde
viven como saprfitos. Entre los patgenos se encuentran los causantes del
botulismo, ttanos y la gangrena gaseosa.
Los clostridios causan varias enfermedades graves mediadas por txinas:

Clostridium tetani, ttanos.

Clostridium botulinum, botulismo.

Clostridium difficile, colitis seudomembranosa.

Clostridium perfingens, gangrena gaseosa.

DEFINICIN:
Es una bacteria Gram positiva, anaerobia, que se encuentra por lo general en
la tierra y es productora de la
toxina botulnica, el agente causal
del botulismo. Estos microorganis
mos que tienen forma de varillas
y se

desarrollan

mejor

en condiciones de poco
oxgeno. L a s b a c t e r i a s f o r m a n
esporas

que les permiten

sobrevivir en un estado latente hasta

ser expuestas a condiciones que puedan sostener su crecimiento. La espora es
ovalada subterminal y deformante. Es mvil por flagelos peritricos, no
produce cpsula y es proteoltico y lipoltico

CARACTERISTICAS GENERALES:
o Bacilo grampositivos.

o Anaerobio estricto.
o Esporulado (en posicin subterminal).
o Pertrico.
o Sin cpsula.
o Sin pilis, ni fimbrias.
o Se encuentra en el suelo virgen y cultivado.
o Habita en el intestino de algunos animales silvestres y domsticos.
o Produce la toxina natural ms potente que se conoce. Produce la muerte en
forma muy rpida.

CARACTERISTICAS ESPECFICAS
Produce las toxinas ms potentes conocidas. Se han identificado ocho variedades
de antgenos diferentes de la toxina A-H.

Los tipos A, B y E son los que se relacionan con enfermedades en el

humano: serotipos A y B asociados con carne y E asociados con pescado.

Tipo C produce el cuello blando en los pollos.
Tipo D causa botulismo en el ganado.

La dosis mortal en el hombre de la toxina es inferior a 1-2 ug. Las toxinas son
destruidas por calentamiento durante 20 minutos a 100C

CONDICIONES DE SUPERVIVENCIA

EPIDEMIOLOGIA:

Ubicuos: suelo, aguas.

Pueden contaminar alimentos (vegetales), heridas y colonizar el tracto

digestivo.
Ingesta de alimentos. No es invasor.
Produce la exotoxina ms potente que se conoce.
La toxina es una neurotoxina.
Rara en humanos pero comn en animales.
Forma ms comn de botulismo es el botulismo transmitido por alimentos.

CLOSTRIDIUM BOTULINUM: TOXINAS

Termolbiles. Pueden desarrollarse toxoides.
Existen 7 tipos antignicamente diferentes (A-G). Enfermedad humana asociada a
tipos A, B, E (F).
Neurotoxina:

Acta a nivel del sistema nervioso

perifrico

(placa

sistema autnomo).
Aparicin de parlisis flcida de la
musculatura

neuromuscular

esqueltica

parasimptico
Bloquea
la

liberacin

neurotransmisor

fallo
del

acetilcolina.

(Acetilcolinesterasa)

PATOGENIA DE LA ENFERMEDAD
1. Causado por alimentos:
Es la ms grave y contiene una potente neurotoxina formada durante el
crecimiento bacteriano. La toxina puede destruirse por calentamiento a 80
C durante 10 minutos. La incidencia de la enfermedad es baja, pero es
considerada de elevada tasa de mortalidad si no se diagnostica y se trata
rpidamente. Aproximadamente entre el 5 y el 10% de las personas con
botulismo por va alimenticia mueren. Con frecuencia, se debe a alimentos
enlatados en casa, procesados de manera inapropiada. Una persona debe
ingerir alimentos contaminados que no hayan sido cocidos o recalentados
apropiadamente despus de que la toxina haya sido producida por las
bacterias
2. Infantil:
Es causado por ingestin de esporas de Clostridium botulinum que
colonizan y produce la toxina en el tracto intestinal de los nios. La ingesta
de miel est relacionada con esta enfermedad, no se debe alimentar a
infantes menores de 12 meses de edad con miel y almbar de maz. En el
botulismo infantil, el beb debe ingerir esporas bacterianas y luego producir
la toxina en su sistema gastrointestinal

3. Causado por heridas:

Ocurre cuando una herida se ha contaminado con tierra o arena gruesa
incrustada en la piel y la herida es aislada del aire fresco y ocurre cuando
se introducen esporas del botulismo en una herida. La herida debe
desbridarse (retirar la suciedad, los objetos extraos, el tejido lesionado
para evitar la infeccin y facilitar la cicatrizacin). Es la forma ms rara y
ocurre similar al ttano.
4. Forma sin clasificacin:
Se trata de una forma del botulismo del lactante que aparece en adultos y
est asociado a anomalas en el tracto digestivo.

HABITAT Y ALIMENTOS IMPLICADOS:

Sus esporas estn distribuidas en la naturaleza tanto en los suelos de cultivo
como los de gran vegetacin. En sedimentos de las cadas de agua, en los lagos y
las aguas costeras, y en el tracto intestinal de los peces y mamferos, as como en
las branquias y en las vsceras de los crustceos y otros mariscos. Tambin se
encuentra en el polvo.
Las carne y productos crnicos, sometidos a procesos de conservacin o
enlatado caseros como por ejemplo el jamn ahumado, magro de cerdo,
pats y embutidos (el nombre de botulismo deriva del latn botulus =
embutido).
Los peces tambin se pueden contaminar con C. botulinum, especialmente
por el tipo E, en el medio acutico y de aqu que los productos ahumados
derivados del pescado hayan sido responsables de varios brotes de
botulismo.
La contaminacin del suelo es un origen importante de C. botulinum
existente en los alimentos y constituye un origen al que estn
inevitablemente expuestas las hortalizas, de modo especial los cultivos de
races y bulbos, como por ejemplo platos preparados de ensaladas de

patatas cocidas (parcialmente), ensaladas de hortalizas pre envasadas,

etc...
La toxina es inestable a temperaturas que superan los 30 C y a pH
superior a 7 y a un pH menor de 4.5 no hay ni crecimiento ni produccin de
la toxina. Puesto que los alimentos enlatados poco cidos pueden
satisfacer todos los criterios anteriores, para garantizar su inocuidad, en la
industria del enlatado ha sido necesario implantar rigurosas medidas de
control del tratamiento. Sin embargo, cuando los alimentos enlatados se
preparan como actividad domstica en pequea escala (hortalizas
embotelladas o enlatadas), la mayor variabilidad y el control menos riguroso
del tratamiento al que se someten son evidentemente origen de problemas
sanitarios de importancia.

MEDIDAS DE CONTROL ALIMENTARIAS:

1. La toxina es termolbil, por lo que se puede destruir al calentar la comida
durante 10 minutos a 60 C-100C
2. Asegurarse que el tratamiento trmico de los alimentos embotellados y
enlatados (pH<4.5) es suficiente para destruir las esporas ms termo
resistentes de C. botulinum.
3. Utilizar para la refrigeracin de las latas procesadas agua clorada lo ms
limpia posible. Cuando se utilice aire fro asegurarse de que la
contaminacin cruzada a partir de las materias primas, del equipo sucio o a
consecuencia de la manipulacin se evita durante la refrigeracin.
4. Cuando se empleen tratamientos trmicos suaves asegurarse que se
aaden

compuestos

inhibidores

adecuados

que

el

pH

es

lo

suficientemente bajo como para prevenir el crecimiento de C. botulinum.

5. Comprobar que el tratamiento trmico de los alimentos procesados o
semiprocesados, envasados al vaco, es el adecuado y que no se
almacenan a temperatura mayor de 3C.
6. Nunca debe probarse un alimento sospechoso, a no ser que se precaliente
a 100 C.
7. Rechazar conservas con envase abombado y oxidado. Aplicar altas
temperaturas de cocinado.

LA TOXIINFECCIN ALIMENTARIA
1. Sntomas: Incluyen visin borrosa o doble, debilidad general, reflejos
pobres, dificultad para tragar, respirar o hablar, vrtigos, parlisis flcida y, a
veces, la muerte por insuficiencia respiratoria y obstruccin de la entrada de
aire en la trquea. En cuanto a los sntomas gastrointestinales son: dolor
abdominal, diarrea o congestin.
2. Periodo de incubacin: De 12 a 36 horas, pero puede extenderse
hasta 8 das en algunos casos.
3. Tratamiento: Se necesita atencin hospitalaria. Se administra una
antitoxina polivalente de origen equino en ciertos casos de botulismo
provocado por alimentos, aunque no en casos de botulismo infantil. Puede
ser necesario tener que inducir al vmito o aplicar un enema para retirar los
alimentos contaminados. Tambin se administra penicilina G.
No existe el contagio entre personas. Es de severidad variable (de leve a
mortal), cuanto antes se presentan los sntomas ms grave es. En caso de
curacin, la recuperacin puede durar de varias semanas a meses. Las
personas que han sufrido botulismo pueden sufrir fatiga y dificultad
respiratoria durante aos.
4. Diagnstico: La forma ms efectiva y directa de confirmar el diagnstico
clnico de esta enfermedad en el laboratorio es demostrando la presencia
de la toxina en el suero o en las heces fecales de los pacientes o en los
alimentos consumidos por los mismos. Actualmente el mtodo ms sensible
y de mayor uso para la deteccin de la toxina es a travs de la
neutralizacin de un roedor.

DETERMINACION DEL CLOSTRIDIUM BOTULINUM EN

ALIMENTOS
Cultivo en Agar de yema de huevo.
Cultivo en caldo de carne de
Clostridium
La capa de aceite mineral estril permite que
la superficie del caldo con carne molida de
corazn de vaca quede totalmente cubierta
para impedir la difusin de O2 al medio. Antes
de inocular es conveniente hervir el medio
durante 10 min para liberar el O2.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE CLOSTRIDIUM BOTULINUM PRODUCTORA

DE TOXINA
MATERIALES.

Medios de cultivo.
Latas de atn abombadas, chancadas o abolladas.
Ratones de laboratorio.
Triturador mecnico.
Bao mara.
Tubos de dilucin con tapa rosca.
Mechero bunsen.
Pipetas.
Frascos esterilizados.
Gradillas.
Centrifuga.
Agujas hipodrmicas.

PROCEDIMIENTO.Prueba exploratoria de presencia de la toxina

Triturar u homogenizar el alimento (muestra)
Poner en el tubo de dilucin de tapa rosca muestra a igual al peso de la
solucin salina a utilizar (dilucin 1/1).
Centrifugar el homogenizado a alta velocidad, preferentemente en
centrifuga refrigerada (se tendrn 2 tubos, o sea dos muestras).
Cogemos uno de s tubos centrifugados y lo sometemos a bao Mara por
10 min. (agua hervida).
Del contenido, inyectamos 0.5 ml. Al ratn de prueba, esto con aguja de
tuberculina (N 25) va intraperitoneal.
Del otro tubo centrifugado se le inyectara a otro ratn de prueba de la
misma cantidad de inoculo.
Se recomienda que antes de inyectarle el sobrenadante a los ratones se le
debe inocular la antitoxina
Observar por 4 das
La positividad de la prueba se comprueba por la parlisis motora
progresiva, es abdomen contrado, respiracin dificultosa, arrastre de las
patas, debilidad de la muestra.
La presencia de la toxina E causa una mucho ms rpida (en menos de 24)

AISLAMIENTO (en alimentos):

Para el aislamiento usamos medios enriquecidos como el de carne cocida o

el medio tripticasa-glucosa (ATG).
En tubos de dilucin con tapa rosca colocamos 10 ml del medio a usar (este
esta previamente calentado, por lo tanto semilquido).
Previamente en cada tubo hemos agregado un poco de la muestra y luego
agregaremos en cada tubo el ATG semilquido calentado previamente.
Luego sometemos los dos tubos a temperaturas diferentes
El primer tubo no se calienta
El segundo tubo lo calentamos en bao Mara a 60 C por 10 min.
El tercer tubo lo calentamos a 80 C por 30 min.
Luego incubamos los tubos por 3 a 4 das en jarra de Bre Wer
(anaerobiosis)
Se podr observar (si la muestra es positiva) la presencia de gas y
resquebrajamiento del medio.