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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA

CENTRO TECNOLGICO
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E
ENGENHARIA DE ALIMENTOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA

HIDRLISE ENZIMTICA E BIODIGESTO DE


EFLUENTES DA INDSTRIA DE PRODUTOS
AVCOLAS

Gisanara Dors

Florianpolis, SC, Brasil.


Fevereiro/2006

GISANARA DORS

HIDRLISE ENZIMTICA E BIODIGESTO DE


EFLUENTES DA INDSTRIA DE PRODUTOS AVCOLAS

Dissertao apresentada Universidade Federal de


Santa Catarina, como parte dos requisitos para obteno
do ttulo de Mestre em Engenharia Qumica, rea de
Concentrao: Desenvolvimento de Processos Qumicos
e Biotecnolgicos.
ORIENTADOR: Prof. D.Sc. Agenor Furigo Junior
CO-ORIENTADOR: Prof. Dr. Ernandes Benedito Pereira

Florianpolis, SC, Brasil.


Fevereiro/2006

"Nunca perca a f na humanidade, pois ela


como um oceano. S porque existem
algumas gotas de gua suja nele, no quer
dizer que ele esteja sujo por completo.
Mahatma Ghandi

AGRADECIMENTOS

A Deus, em primeiro lugar.


Aos meus Pais, por todo o apoio e amor que foram a mim dedicados atravs de
ensinamentos, conselhos, lies de vida, finanas e colaborao em todos os
sentidos. Agradeo a vocs por tudo. a vocs, principalmente, que eu dedico esta
conquista.
As minhas irms, Giniani e Janaina, que sempre me apoiaram e ajudaram. Vocs
so e sempre sero, alm de irms, minhas melhores amigas.
Ao Marcelo, por todo amor e dedicao, por compartilhar comigo as horas difceis e
as conquistas.
Ao professor Agenor pela oportunidade, orientao, ensinamentos e amizade.
Ao professor Ernandes pela orientao, pacincia, amizade e aos ensinamentos
para o meu crescimento pessoal e profissional.
A todos os colegas do Laboratrio de Engenharia Bioqumica (ENGEBIO), pelo
apoio, ajuda e companheirismo.
Aos colegas do Laboratrio de Tratamento de Efluentes (LTE), obrigada pelas
anlises de DQO.
Ao Gustavo, Murilo, Ana Cludia, pela amizade e a todos os colegas da Turma
2004 da Ps graduao da Engenharia Qumica da UFSC.
Ao Edevilson por sempre estar disposto a ajudar e compreender.
Ao Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos da UFSC,
seus professores e funcionrios, pela colaborao no desenvolvimento deste
trabalho.
Aos professores, D.Sc. Pedro Henrique Hermes de Arajo e Dr. Jlio Cesar dos
Santos, por terem gentilmente aceitado fazerem parte da banca examinadora deste
trabalho. Exprimo aqui o meu reconhecimento.
A CAPES pelo suporte financeiro.
E a todos que participaram direta ou indiretamente deste trabalho.

SUMRIO

SUMRIO

NDICE DE TABELAS ..................................................................................... i


NDICE DE FIGURAS..................................................................................... ii
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS........................................................ iv
RESUMO ........................................................................................................ v
ABSTRACT ................................................................................................... vi
1 Introduo................................................................................................... 1
2 Objetivos..................................................................................................... 3
2.1 Objetivo geral ................................................................................................... 3
2.2 Objetivos especficos........................................................................................ 3

3 Reviso Bibliogrfica................................................................................. 4
3.1 Introduo......................................................................................................... 4
3.2 Efluentes da indstria de produtos avcolas..................................................... 4
3.2.1 gua no abatedouro: procedncia e tratamento....................................... 6
3.2.2 Caractersticas do efluente do abatedouro ............................................... 7
3.3 Biodegradabilidade........................................................................................... 7
3.4 Lipdeos em guas residurias....................................................................... 11
3.5 Problemas relacionados aos elevados teores de lipdeos no tratamento
anaerbio de guas residurias ........................................................................... 13
3.6 Tratamento de guas residurias utilizando enzimas .................................... 16
3.7 Enzimas.......................................................................................................... 20
3.8 Lipases ........................................................................................................... 21
3.8.1 Fontes ..................................................................................................... 22
3.8.2 Caractersticas e propriedades ............................................................... 23
3.8.3 Reaes catalisadas pelas Lipases........................................................ 23
3.8.4 Fatores que interferem no processo de hidrlise.................................... 24
3.8.5 Aplicaes das Lpases .......................................................................... 27
3.8.5.1 Detergentes.................................................................................... 27
3.8.5.2 Indstria alimentcia ....................................................................... 28
3.8.5.3 Indstria farmacutica e qumica fina............................................. 28
3.8.5.4 Hidrlise de leos e graxas ............................................................ 28
3.8.5.5 Outras aplicaes........................................................................... 30
3.9 Tratamento de guas residurias com elevados teores de lipdeos utilizando
lipases .................................................................................................................. 30

SUMRIO

4 Material e Mtodos................................................................................... 33
4.1 Introduo....................................................................................................... 33
4.2 Material........................................................................................................... 33
4.2.1 Reagentes............................................................................................... 33
4.2.2 Enzimas .................................................................................................. 33
4.2.3 Substrato................................................................................................. 34
4.2.4 Inculo .................................................................................................... 34
4.3 Equipamentos................................................................................................. 34
4.4 Procedimentos Experimentais........................................................................ 34
4.4.1 Caracterizao fsico-qumica do efluente.............................................. 34
4.4.2 Caracterizao das propriedades fsico-qumicas das preparaes
enzimticas ...................................................................................................... 35
4.4.2.1 Determinao da atividade hidroltica ............................................ 35
4.4.2.2 Influncia do pH na atividade da enzima ....................................... 36
4.4.2.3 Influncia da temperatura na atividade da enzima......................... 36
4.4.3 Hidrlise e biodigesto do efluente......................................................... 36
4.5 Anlises .......................................................................................................... 39
4.5.1 Determinao da Demanda Qumica de Oxignio (DQO)...................... 39
4.5.2 Determinao do teor de cidos graxos livres........................................ 40
4.5.3 Determinao do ndice de acidez total.................................................. 40
4.5.4 Determinao do ndice de saponificao .............................................. 41
4.5.5 Determinao de amnia........................................................................ 41
4.5.6 Determinao da concentrao de leos e graxas................................. 42
4.5.7 Determinao da alcalinidade total......................................................... 42
4.5.8 Determinao da concentrao de glicerol............................................. 43
4.5.9 Determinao dos slidos suspensos totais........................................... 43

5 Resultados e Discusso .......................................................................... 45


5.1. Caracterizao fsico-qumica do efluente .................................................... 45
5.2. Caracterizao das propriedades catalticas e fsico-qumicas das Lipases 46
5.2.1. Influncia do pH na atividade das lipases.............................................. 46
5.2.2. Influncia da temperatura na atividade das lipases............................... 48
5.3. Tratamento anaerbio e enzimtico do efluente ........................................... 50
5.3.1. Hidrlise e biodigesto do lodo e do efluente bruto............................... 51
5.3.2. Hidrlise e biodigesto do efluente tratado com a enzima LKM............ 51
5.3.3. Hidrlise e biodigesto do efluente tratado com a enzima LNU ............ 54
5.3.4. Comportamento cintico dos testes de biodegradabilidade de efluente
tratado com as enzimas LKM e LNU ............................................................... 59
5.3.5. Anlises para avaliar o efeito do tratamento enzimtico ....................... 62
5.3.5.1 pH................................................................................................... 62
5.3.5.2 cidos graxos livres e glicerol ........................................................ 64
5.3.5.3 DQO ............................................................................................... 66
5.4 Consideraes finais ...................................................................................... 66

6 Concluso................................................................................................. 68
7 Sugestes ................................................................................................. 70

SUMRIO

8 Referncias Bibliogrficas ...................................................................... 71


Apndices .................................................................................................... 79
Apndice A - Caractersticas fsico-qumicas do efluente da indstria Macedo
Koerich S/A SC.................................................................................................. 79
Apndice B - Padres de emisso de elfuentes lquidos da Legislao Ambiental
do Estado de Santa Catarina ............................................................................... 80
Apndice C - Ficha tcnica da Lipase Pancreatica Kin Master............................ 81
Apndice D - Curvas Padro para quantificao de compostos por
espectrofotometria................................................................................................ 84
D.1 - Curva padro de DQO ............................................................................ 84
D.2 - Curva padro de Amnia ........................................................................ 84
Apndice E - Caracterizao das propriedades catalticas e fsico-qumicas das
preparaes enzimticas...................................................................................... 85
E.1 - Influncia do pH na atividade das lipases ............................................... 85
E.2 - Influncia da temperatura na atividade das lipases ................................ 85
Apndice F - Anlises........................................................................................... 86
F.1 - cidos graxos livres................................................................................. 86
F.2 - Glicerol .................................................................................................... 86
F.3 - DQO ........................................................................................................ 87

LISTA DE TABELAS i

NDICE DE TABELAS

Tabela 1. Tipos de dejetos e subprodutos produzidos nas diferentes etapas do


processamento avcola. ............................................................................................. 6
Tabela 2. Razes da variao do pH em um digestor anaerbio e sua possvel
correo. .................................................................................................................... 9
Tabela 3. Fontes de lipdeos e suas concentraes em guas residurias. ........... 12
Tabela 4. Composio de cidos graxos em diferentes leos e gorduras. ............. 12
Tabela 5. Enzimas com potenciais aplicaes em tratamento de efluentes. .......... 18
Tabela 6. Classificao das enzimas segundo IUBMB. .......................................... 21
Tabela 7. Obteno industrial de enzimas. ............................................................. 22
Tabela 8. Aplicao industrial das lipases no setor de leos e gorduras. ............... 29
Tabela 9. Caracterizao do efluente...................................................................... 46
Tabela 10. Caracterizao das preparaes de lipases LKM e LNU. ..................... 50
Tabela 11. Velocidades iniciais de produo de metano. ....................................... 62
Tabela 12. Medidas de pH....................................................................................... 63
Tabela 13. Eficincia de remoo de DQO. ............................................................ 66

LISTA DE FIGURAS ii

NDICE DE FIGURAS

Figura 1. Etapas da degradao anaerbia dos componentes orgnicos presentes


nos efluentes e dos principais grupos de bactrias. ................................................ 14
Figura 2. Representao esquemtica das reaes catalisadas por lipases. ........ 24
Figura 3. Etapas envolvidas na reao de hidrlise de leos e gorduras............... 25
Figura 4. Gasmetro tipo frasco invertido 1 - Entrada de Biogs; 2 - Frasco de
segurana; 3 - Frasco Duran; 4 - Coletor de NaOH................................................. 37
Figura 5. Fluxograma dos ensaios de Biodegradabilidade. .................................... 38
Figura 6. Aparato experimental utilizado nos ensaios de biodegradabilidade. ....... 39
Figura 7. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm)........................................... 47
Figura 8. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm)............................................ 48
Figura 9. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e
(b) LNU (Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm). ............................ 49
Figura 10. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e
(b) LNU. (Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm). ............................ 49
Figura 11. Produo de metano do lodo (Volume de lodo - 50 mL, Agitao - 100
rpm, 35C, 33 dias). ................................................................................................. 51
Figura 12. Produo de metano do efluente bruto (Volume de lodo - 50 mL, Volume
de efluente bruto - 250 mL, Agitao - 100 rpm, 35C, 33 dias).............................. 51
Figura 14. Produo de metano do efluente tratado com 0,10% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias). ............................................................... 52
Figura 15. Produo de metano do efluente tratado com 0,15% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias). ............................................................... 52
Figura 16. Produo de metano do efluente tratado com 0,20% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias). ............................................................... 52
Figura 17. Produo de metano do efluente tratado com 0,25% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias). ............................................................... 52
Figura 18. Produo de metano do efluente tratado com 0,30% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias). ............................................................... 52

LISTA DE FIGURAS iii

Figura 19. Produo de metano do efluente tratado com 0,35% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias). ............................................................... 52
Figura 20. Produo de metano do efluente tratado com 0,10% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 21. Produo de metano do efluente tratado com 0,15% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 22. Produo de metano do efluente tratado com 0,20% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 23. Produo de metano do efluente tratado com 0,25% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 24. Produo de metano do efluente tratado com 0,30% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 25. Produo de metano do efluente tratado com 0,35% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 26. Enzima LNU precipitada durante os ensaios de biodegradabilidade..... 56
Figura 27. Volume de metano produzido pelas enzimas (a) LKM e (b) LNU nos
ensaios de biodegradabilidade. ............................................................................... 57
Figura 28. Velocidade mdia de produo de metano (a) Lodo (b) Efluente bruto. 59
Figura 29. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade
utilizando a enzima LKM. ......................................................................................... 60
Figura 30. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade
utilizando a enzima LNU. ......................................................................................... 61
Figura 31. Concentrao de cidos graxos livres ao final dos ensaios de
biodegradabilidade e velocidade final de gerao de metano para as lipases LNU
(a) e LKM (b). ........................................................................................................... 64
Figura 32. Quantidade de glicerol antes do inicio e ao final dos ensaios de
biodegradabilidade para as lipases LNU (a) e LKM (b). .......................................... 65

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS iv

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

A.E.

Atividade especfica (U.mg-1)

A.T.

Alcalinidade Total (mg CaCO3.L-1)

AG

cidos Graxos

AGCL

cidos Graxos de Cadeia Longa

AOV

cidos Orgnicos Volteis

BRS

Bactrias redutoras de sulfato

Ci

Concentrao do componente i (moles.L-1)

CDQO

Concentrao de DQO (mg de O2.L-1)

DBO

Demanda Bioqumica de Oxignio

DG

Diacilglicerdeos

DQO

Demanda Qumica de Oxignio

EDTA

Etileno Diamino Acetato Dissdico

ICEPA

Instituto de Planejamento e Economia Agrcola de Santa


Catarina

IUBMB

Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular

LKM

Lipase Kin Master

LNU

Lipase Nuclear

ma

Massa da amostra (g)

MG

Monoacilglicerdeos

MM

Massa molar (g.mol-1)

SST

Slidos Suspensos Totais

SSV

Slidos Solveis Volteis

Tempo de reao (min)

TG

Triacilglicerdeos

UASB

Upflow Anaerobic Sludge Blanket

Volume (L)

RESUMO v

RESUMO

O presente trabalho visa contribuir para o desenvolvimento de tecnologia para


reduo da concentrao de lipdeos contidos em guas residurias da indstria
avcola, importante setor industrial de Santa Catarina, por meio de ao de enzimas,
particularmente lipases pancreticas comerciais. Para tanto, foram caracterizadas as
lipases comerciais empregadas, LKM e LNU, utilizando dois substratos (azeite de oliva
e o efluente bruto), e a gua residuria, proveniente da indstria Macedo Koerich S/A SC. Os testes de biodegradabilidade, utilizando biomassa anaerbia de uma estao
de tratamento de esgotos domsticos, foram realizados simultaneamente com o
tratamento enzimtico, sendo que as concentraes de enzimas variaram de 0,10% a
0,35% p/v. O efluente foi biodegradado por aproximadamente trinta dias em um banhomaria a uma temperatura de 35C com agitao de 100 rpm. A eficincia do tratamento
foi verificada atravs da remoo de DQO e da formao de gs metano. A atividade
enzimtica foi influenciada pelo tipo de substrato uma vez que, quando se utilizou o
azeite de oliva como substrato a atividade mxima ficou acima de 3000 U.mg-1,
enquanto que, utilizando o efluente bruto como substrato a atividade mxima das
enzimas diminuiu para valores abaixo de 700 U.mg-1. A temperatura que proporcionou
atividade mxima foi de 37C para as enzimas estudadas em ambos os substratos,
com exceo da enzima LNU, cujo valor timo foi de 45C quando o efluente bruto foi
utilizado como substrato. Verificou-se que o pH timo para a atividade hidroltica de
ambas as enzimas, nos substratos avaliados, estava na faixa de 7.0 a 8.0. A realizao
dos ensaios de biodegradabilidade e hidrlise simultneos foi possvel, proporcionando
volumes de produo de metano superiores aos encontrados na literatura, nos quais
os testes foram realizados de forma seqencial. Houve uma remoo de DQO de 2,3 a
2,86 vezes maiores do que a remoo obtida no efluente bruto sem o tratamento
enzimtico. A concentrao de enzima, dentro da faixa estudada, no interferiu
consideravelmente na velocidade de remoo da matria orgnica.

ABSTRACT vii

ABSTRACT

The objective of the present work was to contribute to the development of


technologies to reduce the lipids concentration in slaughterhouse wastewater,
important industrial sector of Santa Catarina, by using enzymes, specifically
commercial pancreatic lipases. Therefore, used the commercial lipases, LKM and LNU,
were characterized by two different substrates (olive oil and brut effluent) and the
wastewater was obtained from Macedo Koerich S/A - SC industry. The biodegradability
tests, using anaerobic biomass from a domestic sewerage treatment station, were
carried out simultaneously with the enzymatic treatment, with one enzyme
concentration varying from 0,10% to 0,35% w/v. The effluent was biodegradated for
approximately 30 days in a bath at 35C and 100 rpm stirring rate. The efficiency of the
treatment was verified by the CDO removal and the methane production. The enzyme
was influenced by the substrate, since the maximum activity decreased significantly.
Using the olive oil as substrate, the maximum activity was above 3000 U.mg-1 ,
whereas using the brut effluent the maximum activity was below 700 U.mg-1. The
temperature that resulted in maximum activity was 37C, except for the enzyme LNU
using brut effluent as substrate, which showed maximum activity at 45C. The pH
values that maximized the lipase activity were between 7.0 and 8.0. The
biodegradability and hydrolysis experiments were made simultaneously, providing
volumes of methane yield above those found in the literature, which were obtained
from experiments carried out in sequence. The value CDO removal was 2,3 to 2,86
times higher than that obtained for the brut effluent without enzymatic treatment. The
enzyme concentration in the studied range did not interfere significantly in the velocity
of organic matter removal.

INTRODUO - 1

1 Introduo
A atividade avcola no Brasil tem se desenvolvido satisfatoriamente nos
ltimos anos e isso pode ser comprovado pelos nmeros do setor. Em setembro de
2005, as exportaes brasileiras de carne de frango in natura totalizaram 247,725
mil toneladas, volume que representou aumento de cerca de 18% sobre o mesmo
ms de 2004. No mesmo perodo, a avicultura disponibilizou para o mercado
interno 538,6 mil toneladas de carne de frango e a produo total foi de 786 mil
toneladas. Estima-se que at o final de 2005 a produo total alcance 6,3 milhes
de toneladas, 5,5% a mais que o produzido no ano de 2004 (AVISITE, 2005). O
estado de Santa Catarina destaca-se no mercado de abate de aves no Brasil e at
o ms de agosto de 2005 foram abatidos 454,10 milhes de cabeas de aves,
segundo dados do ICEPA, 2005.
O processo de abate e industrializao de frangos gera subprodutos que,
se mal destinados ou processados, se constituem em potenciais poluentes
ambientais. O processamento e/ou tratamento dos resduos e efluentes do
abatedouro tem sido uma das grandes preocupaes da indstria avcola,
principalmente em decorrncia das restries que o mercado consumidor vem
impondo as questes de meio ambiente e da sua reutilizao (SROKA et al.,
2004).
Estes resduos lquidos so ricos especialmente em protenas e lipdeos
(AMANTE et al., 1999), os quais so os principais responsveis pelas alteraes
dos parmetros de controle ambiental como pH, slidos totais, demanda
bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), entre outros
(PEREIRA, 2004). Os lipdeos contidos nesses efluentes, alm de representarem
uma perda industrial importante, interferem negativamente nos Sistemas de
Tratamento de Efluentes.

INTRODUO - 2

Desta forma, processos alternativos tm sido utilizados na reduo da


concentrao de lipdeos contidos nesses efluentes, por meio de ao de enzimas,
particularmente as lipases. Essas enzimas apresentam uma importncia particular,
pelo fato de hidrolisarem especificamente leos e gorduras, o que pode ser de
grande interesse para o tratamento de efluentes com alto teor destes materiais.
As lipases (glicerol ster hidrolases, E.C.3.1.1.3) compreendem um grupo
de enzimas hidrolticas que atuam na interface orgnico-aquosa, catalisando a
hidrlise de ligaes ster - carboxlicas, presentes em acilgliceris. A sua
utilizao reduz os nveis de slidos suspensos e lipdeos, o que possibilita
melhores condies de operao no tratamento anaerbio e desobstrui filmes de
leos em tubulaes, resultando no aumento da vida til dos equipamentos
(MENDES et al., 2005). Alm disso, a alta especificidade permite controlar os
produtos, o que leva a um aumento dos rendimentos pela no gerao de
subprodutos txicos; condies moderadas de operao, reduo do custo em
termos de energia e de equipamentos. Estas so algumas vantagens que tornam
este processo atrativo sob o ponto de vista ambiental e econmico.
A utilizao de enzimas no tratamento de efluentes com elevados teores de
gordura tem sido estudada nos ltimos anos por grupos de pesquisa brasileiros,
entre os quais se destacam os trabalhos Pereira (2004) e Mendes (2004). Pereira
(2004) utilizou lipases para avaliar a hidrlise e a biodigesto de resduos gerados
pela indstria de produtos avcolas, enquanto Mendes (2004) tratou efluentes da
indstria de produtos lcteos. Uma caracterstica comum entre os trabalhos que
as etapas de tratamento enzimtico e ensaios de biodegradabilidade foram
estudados separadamente, de maneira seqencial.
Este trabalho pretende contribuir para o desenvolvimento de tecnologia de
tratamento de guas residurias da indstria de abate de frangos, setor importante
para o Estado de Santa Catarina, contribuindo com a literatura existente atravs da
anlise dos efeitos causados pela realizao das etapas de hidrlise e biodigesto
simultneas no tratamento desses resduos, e analisando os efeitos do efluente na
alterao da atividade da enzima em relao sua atividade quando utilizado
azeite de oliva.

OBJETIVO - 3

2 Objetivos
2.1 OBJETIVO GERAL
Estudar remoo de gorduras dos resduos gerados por indstrias avcolas
utilizando lipases pancreticas.

2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Caracterizao do efluente gerado em indstrias avcolas;

Caracterizao das propriedades catalticas das lipases pancreticas


LKM e LNU, utilizando como substratos azeite de oliva e o efluente
bruto da indstria avcola;

Avaliao da influncia da concentrao das lipases pancreticas na


remoo da matria orgnica;

Avaliao da influncia da realizao simultnea das etapas de hidrlise


e biodigesto na degradao da matria orgnica, expressa pela
formao de metano e reduo da DQO.

REVISO BIBLIOGRFICA - 4

3 Reviso Bibliogrfica
3.1 INTRODUO
Este captulo tem como objetivo fundamentar conceitos tericos utilizados
neste

trabalho.

Nesta

reviso

bibliogrfica

so

citados

vrios

trabalhos

desenvolvidos na caracterizao e aplicao de enzimas no tratamento de guas


residurias, em especial as lipases.
3.2 EFLUENTES DA INDSTRIA DE PRODUTOS AVCOLAS
A indstria de abate de animais se destaca na regio sul do Brasil, onde os
locais de abate variam de simples pranchas de abate at matadouros muito
modernos. O processo de abate inicia com a morte do animal, em seguida, o
sangue, o couro ou pele, intestinos e rgos internos so retirados. A carcaa
transformada em diferentes produtos crneos atravs de: corte, migagem, cura ou
enlatamento (CETESB, 2003).
So produzidas grandes quantidades de despojos comestveis e no
comestveis. A maior parte destes produtos poderia sofrer processamento e ser
utilizada, mas isto nem sempre acontece. Os subprodutos so freqentemente
desperdiados e atirados ou descarregados nas guas de superfcie (CETESB,
2003).
No processo de abate os seguintes subprodutos e resduos ficam
disponveis: I) estrume, contedos do rmen e intestinos; II) produtos comestveis
como o sangue e fgado; III) produtos no comestveis como plo, ossos e penas;
IV) gordura retirada das guas residuais; e V) guas residuais. Do ponto de vista
econmico

ambiental

muito

destes

produtos

residuais

poderiam

ser

transformados em subprodutos teis (para consumo humano, comida para


animais, indstria de raes ou fertilizantes) (CETESB, 2003).

REVISO BIBLIOGRFICA - 5

Abate feito em ms condies, falta de equipamento para processamento


dos subprodutos e baixo valor final destes, contribui para a produo de resduos
dos matadouros. O uso liberal da gua leva a grande quantidade de guas
residuais. A descarga direta de guas residuais no tratadas nas guas superficiais
ou no sistema pblico de esgotos causa mau cheiro, gua pobre em oxignio,
problemas sanitrios e ambientais (CETESB, 2003).
Os efluentes deste tipo de indstria contm uma DBO elevada (variando de
800 a 32.000 mg.L-1), grande presena de leos e graxas, material flotvel
(gordura), alta concentrao de slidos sedimentveis (podem chegar at 15g.L-1)
e slidos suspensos, alta concentrao de nitrognio orgnico, presena de slidos
grosseiros e microrganismos patognicos (SCARASSATI et al., 2003).
Esses despejos so altamente putrescveis, entrando em decomposio
poucas horas depois de seu aparecimento, liberando odor caracterstico. O
aspecto do despejo possui cor avermelhada, pelancas, pedaos de gordura em
suspenso; so praticamente opacas e em sua parte coloidal apresentam
microrganismos patognicos. Isso ocorre sempre que os animais abatidos no
estiverem em perfeito estado de sade (CETESB, 2003).
O elevado teor de lipdeos presente nesses efluentes, alm de representar
uma perda industrial importante, interfere negativamente nos Sistemas de
Tratamento de Efluentes. Quando biolgicos, dificultam a sedimentao do lodo,
demandam maior tempo de reteno e aerao, a operao do reator de digesto
anaerbia (UASB) apresenta diversos problemas operacionais devido formao
de escuma, colmatao de camadas de lipdeos, formao de caminhos
preferenciais no leito de lodo e arraste da biomassa, levando perda da eficincia
e at mesmo ao colapso do reator (LEAL, 2000; HU et al., 2002); e quando fsicoqumicos, demanda maior quantidade de produtos floculantes com significativo
aumento na gerao do lodo (LIE & MOLIN, 1991).
Neste contexto, processos alternativos que tm por objetivo a recuperao
ou diminuio da carga orgnica de efluentes so de extremo interesse para a
indstria. A aplicao de um pr-tratamento visando hidrlise dos slidos
solveis, especialmente gorduras, pode melhorar a digesto anaerbia de
efluentes gerados em indstrias de processamento de aves e animais.
O processo alternativo de reduo da carga de matria orgnica e
acelerao da biodegradao de leos e gorduras em compostos mais simples

REVISO BIBLIOGRFICA - 6

consiste em utilizar lipases para promover a reao de hidrlise por via seqencial
dos grupos acila no glicerdeo (HARALDSSON, 1991 apud PEREIRA, 2004). A
aplicao desta tcnica permite a reduo do tempo de residncia hidrulico e
conseqentemente do volume do reator, pois acelera a velocidade de hidrlise de
gorduras, alm de evitar problema de colmatao e entupimento do leito de lodo
em reatores anaerbios do tipo de fluxo ascendente.

3.2.1 gua no abatedouro: procedncia e tratamento


O consumo de gua varia muito dentro de um matadouro, segundo dados
obtidos com fabricantes e tcnicos do setor de equipamentos para matadouros e
frigorficos. Porm utiliza-se como base de clculo de 25 a 50 litros de gua por
cabea de ave abatida (CETESB, 2003).
Esses resduos lquidos so ricos especialmente em protenas e lipdeos,
os quais so os principais responsveis pelas alteraes dos parmetros de
controle ambientais como o pH, slidos totais, demanda bioqumica de oxignio
(DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), entre outros (AMANTE et al., 1999).
Os tipos de dejetos e subprodutos produzidos nos diferentes estgios do
processamento so mostrados na Tabela 1, e incluem a manuteno das aves
desde o momento em que elas chegam plataforma de recepo at a obteno
do produto final.
Tabela 1. Tipos de dejetos e subprodutos produzidos nas diferentes etapas do
processamento avcola.
Etapa do processamento

Tipo de dejeto ou subproduto

Recepo

Fezes, penas, gua de limpeza.

Sacrifcio

Sangue, gua de limpeza.

Escalda / Depenamento

Penas, sangue/gordura, gua de limpeza.

Eviscerao

Vsceras, sangue, gordura, pequenos pedaos de


carne, gua de limpeza.

Resfriamento

Sangue, gordura, pequenos pedaos de carne, gua.

Classificao e empacotamento

gua de limpeza.

Limpeza da planta

gua de limpeza.

Fonte: RIBEIRO, 1995 apud PEREIRA, 2004.

O tratamento da gua utilizada na planta tem o objetivo de possibilitar a


introduo dos efluentes tratados no ambiente sem levar poluio do mesmo.
Considerando que este processo deve ser realizado a um custo que seja

REVISO BIBLIOGRFICA - 7

compatvel e no inviabilize a operao lucrativa da planta de processamento.


Os efluentes so, normalmente, peneirados para remoo de pedaos de
carne, penas e vsceras que foram lavados no processo. Posteriormente, usam-se
retentores de gordura em tanques. Lagoas ou tanques de sedimentao auxiliam
na remoo de slidos, os quais ficam no fundo e devem ser removidos
periodicamente. Uma filtrao final para retirar partculas finas em suspenso e um
tratamento qumico e/ou biolgico posterior visa reduzir a quantidade de elementos
indesejveis, os nveis de DBO da gua e a presena de microrganismos para
dentro de limites aceitveis para a descarga no sistema de tratamento pblico, ou
mesmo para possibilitar o reaproveitamento da gua pela prpria planta. Possveis
tratamentos qumicos incluem a adio de cal, formalina, persulfato de amnia ou
cido frmico, entre outros. Ao final, uma clorao desta gua pode ser realizada
para eliminar os microrganismos patognicos (NASCIMENTO et al., 2000).

3.2.2 Caractersticas do efluente do abatedouro


A quantidade e concentrao dos despejos de uma determinada indstria
variam dentro de amplos limites, dependendo dos processos de fabricao
empregados e dos mtodos de controle dos despejos. Com isto, a caracterizao
de efluentes uma tarefa bsica para o equacionamento adequado do problema
de tratamento dos mesmos. a etapa de trabalho que gera informaes quanto
composio e vazo da gua residual, levando em conta as suas variaes ao
longo do tempo, em funo das atividades responsveis por sua gerao. Com
base nessas informaes, podem ser adotados mtodos fsicos, qumicos ou
biolgicos de tratamento (GLAZER & NIKAIDO, 1995 apud PEREIRA, 2004).
O Apndice A apresenta uma composio tpica de guas residurias
proveniente do processo industrial de escaldagem e depenagem, da lavagem do
frango, das vsceras, dos equipamentos, dos pisos e outros, da Indstria Macedo
Koerich S/A SC. No Apndice B encontram-se os padres de emisso de
efluentes lquidos previstos pela Legislao Ambiental do Estado de Santa
Catarina.

3.3 BIODEGRADABILIDADE
O objetivo principal da biodegradabilidade avaliar o potencial de

REVISO BIBLIOGRFICA - 8

biodegradao de um resduo ou substncia qumica em condies anaerbias.


A caracterizao dos efluentes, por meio de testes de biodegradabilidade,
de fundamental importncia, uma vez que os efluentes apresentam grande
variabilidade quanto qualidade, quantidade, demanda qumica de oxignio (DQO)
e presena de compostos orgnicos refratrios. Adiciona-se a isso, outras
caractersticas importantes ao tratamento anaerbio: pH, alcalinidade, nutrientes
inorgnicos, temperatura e a eventual presena de compostos potencialmente
txicos (SOARES & HIRATA, 1999).
Os testes de biodegradabilidade consistem em colocar uma quantidade
adequada de lodo anaerbio previamente estabilizado em um reator, alimentandoo com o resduo ou substncia que se quer testar. O processo acompanhado por
medidas peridicas de metano produzido, de AOV e de DQO solvel no meio
(SOARES & HIRATA, 1999).
Algumas

recomendaes

importantes

devem

ser

consideradas:

-1

concentrao do lodo normalmente adequada de 5 g.L . Caso o lodo tenha uma


atividade metanognica maior que 0,2 gDQO-CH4.(gSSV.dia)-1, pode-se usar uma
concentrao menor, porm no mnimo 1,5 g.L-1. Outro fator a ser avaliado a
concentrao de substrato (DQO) que deve ser alta o suficiente para que as
medidas de metano e AOV possam ser feitas com preciso, porem no alta demais
que possa causar inibio. Geralmente 5 gDQO.L-1 uma concentrao adequada.
Se o resduo tiver algum inibidor da metanognese, a concentrao deve ser
abaixada (2g.L-1) e deve-se utilizar um reator maior que dois litros (SOARES &
HIRATA, 1999).
Entre os parmetros importantes da digesto anaerbia podemos citar:

Temperatura: as bactrias metanognicas so bastante sensveis a

variaes, especialmente a elevaes de temperatura, as quais devem, portanto,


sempre ser evitadas. O processo pode ocorrer nas faixas mesoflica (15C a 45C)
ou termoflica (50C a 65C) de temperatura. Na faixa mesoflica a digesto
anaerbia se desenvolve bem em temperaturas desde 30C at 40C (temperatura
tima entre 35C e 37C). Muito mais importante, porm, do que operar na
temperatura tima operar sem variaes significativas na temperatura. Na faixa
termoflica, a temperatura tima est entre 57C e 62C. A velocidade de digesto
maior a temperaturas termoflicas em relao as mesoflicas. A operao na faixa
termoflica resulta em lodos mais facilmente desidratveis e em maior remoo de

REVISO BIBLIOGRFICA - 9

patognicos. Os custos relativos ao aquecimento, em geral no compensam a


utilizao de temperaturas termoflicas. As temperaturas mais distantes da
ambiente provocam variaes muito grandes e afetam o processo. Para resduos
que j so gerados a temperaturas relativamente elevadas, pode ser bastante
interessante utilizao do processo termoflico de digesto anaerbia (CETESB,
2003).

pH: de acordo com Viera e Souza (1981 apud CETESB, 2003), o pH um

dos fatores mais importantes a ser mantido para se obter uma boa eficincia do
processo. Na digesto anaerbia, a faixa de pH timo o resultado das diversas
reaes que ocorrem no processo. O pH no digestor funo do contedo de CO2
no gs, da concentrao de cidos volteis, alm da prpria alcalinidade da
matria prima. As bactrias envolvidas no processo de fermentao so altamente
sensveis s mudanas no pH do meio (pH na soluo do digestor). Sua queda
revela um acmulo de intermedirios cidos num nvel superior ao tolerado pela
capacidade tampo do meio, o que pode ser resultado de um desequilbrio entre a
produo e o consumo dessas substncias, decorrente da falta de equilbrio entre
as populaes. Segundo Batista (1981 apud CETESB, 2003) a faixa de operao
dos digestores em pH entre 6.0 e 8.0, tendo como ponto timo pH 7.0 7.2. Fora
destes limites, a digesto pode realizar-se, mas com menor eficincia. As possveis
causas de variao do pH em um digestor e suas possveis correes se resumem
na Tabela 2.
Tabela 2. Razes da variao do pH em um digestor anaerbio e sua possvel
correo.
Condio

Possveis razes

Correes

Demasiado cido (pH: 6.0


ou menor).

Velocidade de alimentao
demasiadamente rpida.

Reduzir a velocidade de
alimentao. Adicionar
amonaco.

Flutuao ampla da temperatura.

Estabilizar a temperatura.

Formao de espuma.

Eliminar espuma.

Presena de substncias txicas.

Eliminar espuma.

Material demasiadamente
alcalino.

Esperar (no acidificar o


digestor).

Demasiado bsico
Fonte: CETESB, 2003.

Agitao:

permite

melhorar

produtividade

assegurando

boa

homogeneidade do contedo do digestor e facilitando as trocas trmicas. Alm


disso, ela permite assegurar, em parte, a degaseificao dos resduos. Essa

REVISO BIBLIOGRFICA - 10

agitao pode ser feita mecanicamente ou por simples recirculao do gs ou do


efluente (SCRIBAN, 1985).
Dentre os principais parmetros de controle do processo de biodigesto esto:

cidos orgnicos volteis (AOV): um dos parmetros mais importantes

para o acompanhamento e controle da digesto anaerbia, pois este mede o


equilbrio entre as populaes de microrganismos acidognicos e metanognios. O
acmulo dos mesmos indica desequilbrio do processo e conseqentemente a
falha. Vrios mtodos esto disponveis para sua medida, das quais podemos
destacar a cromatografia em fase gasosa ou em fase lquida, por fornecer
informaes mais detalhadas, rapidez no resultado podendo ser aplicada em
linha e de grande preciso analtica (HIRATA, 1999 apud SOARES & ZAIAT,
2005).

Alcalinidade: a medida da alcalinidade mostra o nvel da capacidade

tampo, sendo por isso importante para a preveno de quedas de pH. Existem
diversas espcies qumicas que conferem alcalinidade ao meio: bicarbonato, sais
de cidos volteis e outros (SOARES & ZAIAT, 2005).

Relao AOV/Alcalinidade: o parmetro mais adequado para o

monitoramento do processo, pois permite prever e evitar a queda do pH, que


poderia provocar uma falha do sistema. Os valores recomendados ficam entre 0,1
e 0,35 M/M, que correspondem a 0,06 e 0,2 quando ambos os parmetros esto
expressos em mg.L-1. Com estes valores pode-se estimar a quantidade de
bicarbonato necessria para neutralizar os possveis cidos formados a partir de
determinada concentrao de matria orgnica da gua residuria. (HIRATA, 1999
apud SOARES & ZAIAT, 2005).

Volume total de gs e porcentagem de metano no biogs: os principais

produtos finais do processo anaerbio de degradao da matria orgnica so o


metano e o dixido de carbono. Ambos so compostos que, nas condies
ambientais do processo, so produtos gasosos que podem ser separados e
quantificados facilmente. A medida do volume total de gs produzido e sua
composio refletem a condio do processo, ambos indicando o equilbrio entre
as vrias populaes de microrganismos. Esta medida rpida, simples e eficaz
para indicar a falha de um processo anaerbio. A quantidade de biogs e o seu
porcentual de metano, relativamente ao de dixido de carbono, dependente da
composio da matria orgnica alimentada no sistema. Alm da diferente

REVISO BIBLIOGRFICA - 11

estequiometria de degradao dos compostos orgnicos, a dissoluo dos gases


no meio lquido diferenciada e varia conforme a composio do meio. O metano
um gs muito pouco solvel em gua nas condies ambientais (2,86 mL.L-1 a
20C) enquanto que o dixido de carbono muito mais solvel (1770 mL.L-1 a
20C). Alm da maior solubilidade comparada ao metano, a solubilidade do CO2
varia com a alcalinidade e o pH do meio, tornando-se ainda mais solvel. Portanto,
a medida da quantidade de metano produzido mais consistente para ser utilizada
como parmetro de controle do processo. (SOARES & ZAIAT, 2005).

Outros gases de interesse: alm do metano e do dixido de carbono, outros

gases so gerados na degradao da matria orgnica em ambientes anaerbios,


como o hidrognio e o monxido de carbono. No entanto, estes gases em
condies de equilbrio do sistema, se apresentam em concentraes muito
baixas, pois so compostos intermedirios em toda cadeia metablica da
biodigesto. (SOARES & ZAIAT, 2005).

Atividade metanognica especfica: mede a relao entre a quantidade de

substrato consumido e a quantidade de biomassa, por unidade de tempo. Ela


mede exatamente a capacidade mxima do consrcio de microrganismos existente
em um biodigestor em degradar um substrato especfico, levando-o at metano e
dixido de carbono. (SOARES & ZAIAT, 2005).
H uma srie de outros parmetros de controle de processo baseados na
resposta do sistema que esto reportados na literatura, porm mostram-se pouco
eficazes ou difceis de serem usados, ou ainda esto em fase de desenvolvimento
(SWITZENBAUM et al., 1991; SPEECE, 1996 apud SOARES e ZAIAT, 2005).
3.4 LIPDEOS EM GUAS RESIDURIAS
A frao de lipdeos caracterizada por leos, graxas, gorduras e cidos
graxos livres e que, juntamente com protenas e carboidratos, compem os
principais compostos orgnicos de guas residurias de diversas indstrias de
alimentos (MENDES et al., 2005).
Lipdeos so compostos que causam grandes danos ao meio ambiente,
como a formao de filmes de leo nas superfcies aquticas, impedindo a difuso
de oxignio do ar para esse meio e o mais importante, promovem a mortandade da
vida aqutica (MONGKOLTHANARUK & DHARMISTHITI, 2002). Os lipdeos
encontram-se, preferencialmente, na forma de triacilgliceris e uma pequena parte

REVISO BIBLIOGRFICA - 12

como cidos graxos de cadeia longa (AGCL).


As principais fontes de gerao de lipdeos so indstrias de leos
comestveis, sorvetes, laticnios, curtumes, matadouros, os efluentes domsticos e
de restaurantes, principalmente de fast food (MENDES et al., 2005). Os valores
de concentrao de lipdeos, nesses efluentes, so mostrados na Tabela 3.
Tabela 3. Fontes de lipdeos e suas concentraes em guas residurias.
Tipos de efluentes

Concentrao de lipdeos (mg.L-1)

Domstico

40 100

Matadouros e avcolas

Acima de 500

Laticnios

4.680

Restaurantes

98

Azeite de oliva

16.000

Sorvetes

845

Fonte: MENDES et al., 2005.

Na Tabela 4 apresentada a composio em cidos graxos de diferentes


leos e gorduras. Observa-se que a gordura de frango possui uma composio em
cidos graxos similar encontrada no azeite de oliva, possibilitando a utilizao
desse material como substrato referencial nas hidrlises de lipdeos presentes no
efluente proveniente de indstria avcola (PEREIRA, 2004).
Tabela 4. Composio de cidos graxos em diferentes leos e gorduras.
cido Graxo

leo Vegetal
Mamona Arroz

Soja

Octanico

Decanico

Lurico

Mirstico

0,1

3,7

3,1

Palmtico

16,9

10,5

1,2

17,5

25,1

29,1

25,2

Esterico

2,7

3,2

1,0

1,3

22,7

18,9

5,9

Olico

61,9

22,3

3,3

39,9

39,8

44

40,5

Linolico

14,8

54,5

3,6

39,1

2,6

0,3

18,4

Linolnico

0,6

8,3

0,2

0,3

0,7

Ricinoleico

89,2

Dihidroesterico

1,4

0,4

0,2

0,3

1,8

1,4

0,5

Eicosenico

Fonte: LEE & FOGLIA, 2000 apud PEREIRA, 2004.

Boi

Gordura animal
Porco Frango

Oliva

REVISO BIBLIOGRFICA - 13

Nas estaes de tratamento desses efluentes, a elevada concentrao de


triacilgliceris necessita inicialmente ser hidrolisada para, em seguida, ser
transformada em fonte de carbono para as bactrias e, posteriormente, ser
convertido em biomassa (lodo ativado) (DUEHOLM, 2001).
A transformao de lipdeos em lodo ativado necessria por duas razes:
os lipdeos contribuem com 30 - 40% da matria orgnica presente nos efluentes e
esses compostos estimulam o crescimento de microrganismos filamentosos,
importantes na remoo de nutrientes como fsforo e nitrognio, promovendo a
sustentao do lodo formado. Com baixa concentrao desses microrganismos, a
probabilidade de formao de grnulos maiores de lodo reduzida, acarretando
sua flotao (MENDES et al., 2005).

3.5 PROBLEMAS RELACIONADOS AOS ELEVADOS TEORES DE LIPDEOS NO TRATAMENTO


ANAERBIO DE GUAS RESIDURIAS

Os efluentes gerados pela indstria de processamento de alimentos contm


freqentemente gorduras e protenas em quantidades significativas. Parte da carga
orgnica pode ser removida pelo tratamento fsicoqumico, entretanto, o custo
destes reagentes elevado e a eficincia da remoo de DQO baixa. As
gorduras e as protenas presentes nestes efluentes tm um baixo coeficiente de
biodegradabilidade. Alm disso, as gorduras podem solidificar em temperaturas
mais baixas e causar danos operacionais como obstruir e desenvolver odores
desagradveis, representando um problema srio para os processos biolgicos
anaerbios. Flotao e o desenvolvimento de lodos com caractersticas fsicas
diferentes causam perda de atividade da biomassa, diminuindo sua quantidade
dentro do reator, interferindo na eficincia do tratamento. Alm disso, o leo e a
graxa adsorvida na superfcie do lodo anaerbico podem limitar o transporte de
substrato solvel para a biomassa e conseqentemente reduzir a taxa da
converso do substrato (CAMAROTA et al., 2001).
Segundo Chernicharo (1997 apud MORAES, 2000), as etapas da
biodegradao de lipdeos e de outros compostos encontrados em efluentes, como
protenas e carboidratos, so descritas e apresentadas na Figura 1. O esquema
ilustrativo (Figura 1) permite visualizar os diferentes estgios de interao entre os
substratos e os grupos de bactrias, desde a sua entrada, como matria orgnica
composta, at sua decomposio em metano, gs carbnico, gua, gs sulfdrico,

REVISO BIBLIOGRFICA - 14

e amnia, alm de novas clulas bacterianas.

Fonte: CHERNICHARO, 1997 apud MORAES, 2000.

Figura 1. Etapas da degradao anaerbia dos componentes orgnicos presentes


nos efluentes e dos principais grupos de bactrias.
De acordo com Chernicharo (1997 apud MORAES, 2000) na hidrlise, a
matria orgnica complexa afluente convertida em materiais mais simples,
dissolvidos atravs da ao de exoenzimas produzidas pelas bactrias
fermentativas hidrolticas. Na acidognese, os produtos solveis oriundos da fase
anterior so metabolizados no interior das clulas das bactrias fermentativas,
sendo convertidos em diversos compostos mais simples, que so excretados.
Como os cidos graxos volteis so os principais produtos das bactrias
fermentativas, estas so designadas bactrias fermentativas acidognicas. Na
acetognese, bactrias acetognicas oxidam os produtos gerados na fase

REVISO BIBLIOGRFICA - 15

acidognica em substratos apropriados (cido actico) para as bactrias


metanognicas, fazendo parte, assim, de um grupo metablico intermedirio. A
etapa final do processo efetuada pelas bactrias metanognicas que so
divididas em dois grupos principais, em funo de sua afinidade por diferentes
substratos: as acetoclsticas, que utilizam cido actico ou metanol na produo
de metano e as hidrogenotrficas que utilizam hidrognio e dixido de carbono na
formao de metano. Quando h presena de sulfato no afluente, muitos dos
compostos intermedirios passam a ser utilizados pelas bactrias redutoras de
sulfato (BRS), provocando uma alterao das rotas metablicas no reator
anaerbio. Dessa forma, as BRS passam a competir com as bactrias
fermentativas, acetognicas e metanognicas pelos substratos disponveis.
Nos processos anaerbios ou, nos sistemas de biodigesto anaerbia, a
degradao da matria orgnica envolve a atuao de microrganismos
procariticos anaerbios facultativos e obrigatrios, cujas espcies pertencem ao
grupo

de

bactrias

hidrolticas-fermentativas,

acetognicas

produtoras

de

hidrognio e metanognicas. A bioconverso da matria orgnica poluente com


produo de metano requer a cooperao entre culturas bacterianas. Na atividade
microbiana anaerbia em biodigestores, o que se observa a ocorrncia da
oxidao de compostos complexos, resultando nos precursores do metano, acetato
e hidrognio (VAZOLLER, 1996).
A capacidade de uma bactria anaerbia decompor um determinado
substrato especfica, dependendo principalmente das enzimas que possui. As
enzimas, responsveis pelas reaes do processo de decomposio, apresentam
alto grau de especificidade. A eficincia global de converso da matria orgnica
em produtos estabilizados depende da eficincia de cada reao e do equilbrio
entre as diversas espcies e entre os grupos de bactrias presentes no sistema
anaerbio (LEMA et al., 1991 apud PEREIRA, 2004).
A hidrlise de lipdeos a etapa limitante na digesto anaerbia de slidos
presentes em diversos tipos de efluentes, devido ao baixo consumo de cidos
graxos de cadeia longa pelas bactrias (KOMATSU et al., 1991; QUMNUER &
MARTY, 1994 apud MENDES et al., 2005) e necessidade de uma pequena
concentrao de hidrognio, formado nas reaes de encurtamento da cadeia
carbnica dos AGCL. O acmulo deste gs pode afetar o equilbrio das reaes de
decomposio dos AGCL que so termodinamicamente desfavorveis. Desta

REVISO BIBLIOGRFICA - 16

forma, a acumulao de AGCL pode causar problemas na digesto anaerbia de


efluentes, como toxicidade a microrganismos acetognicos e metanognicos e a
formao de espumas, devido ao acmulo de cidos graxos no biodegradados
(SALMINEN & RINTALA, 2002; HANAKI et al., 1981 apud MENDES, 2005).
Os cidos graxos de cadeia longa (AGCL) dentro das clulas microbianas
so incorporados a complexos lipdicos, como a membrana plasmtica ou
catabolizados para a formao de compostos de baixa massa molar (CO2, CH4 e
H2O) (WENG e JERIS, 1976 apud MENDES, 2005).
Os AGCL, em concentraes milimolares, podem se tornar inibidores dos
microrganismos anaerbios, pois impedem a adsoro de microrganismos
causando flotao da biomassa e impedindo a formao de grnulos de lodo em
reatores anaerbios de fluxo ascendente. A flotao do lodo decorrente da
dificuldade de liberao de gases produzidos na digesto anaerbia (HWU et al.;
1998, PETRUY & LETTINGA, 1997).

3.6 TRATAMENTO DE GUAS RESIDURIAS UTILIZANDO ENZIMAS


O uso de enzimas no tratamento de despejos industriais foi proposto em
1930. Entretanto, s recentemente seu desenvolvimento como alternativa ao
tratamento convencional de efluentes tem despertado grande interesse de
pesquisa, em funo das vantagens apresentadas, entre as quais podem ser
citadas (MENDES et al., 2005):

A taxa de introduo no ambiente de poluentes orgnicos estranhos aos

microrganismos e recalcitrantes tm aumentado o que diminui as possibilidades de


se realizar um tratamento convencional biolgico ou qumico eficiente;

H um crescente reconhecimento da capacidade das enzimas para atuar

sobre poluentes especficos no tratamento;

Avanos recentes na biotecnologia permitiram a produo de algumas

enzimas tcnica e economicamente vivel, devido ao desenvolvimento dos


procedimentos de isolamento e de purificao de microrganismos.
Enzimas so catalisadores biolgicos e seu uso no tratamento de efluentes
apresenta vrias vantagens potenciais, tais como:

Simplicidade e facilidade no controle do processo;

No h necessidade de aclimatao de biomassa;

REVISO BIBLIOGRFICA - 17

No h efeitos de choque por carga de poluentes;

Podem ser aplicadas em processos com baixa ou alta concentrao de

poluentes;

Operam em amplas faixas de pH, temperatura e salinidade.


Entretanto, o uso de enzimas apresenta alguns problemas que muitas

vezes limitam a sua utilizao no tratamento de efluentes: instabilidade trmica,


suscetibilidade ao ataque por proteases, inibio da atividade, alm do elevado
custo desses biocatalisadores (LEAL, 2000).
Em contraste com os catalisadores inorgnicos, como cidos, bases, metais
pesados e xidos metlicos, as enzimas tm alta especificidade. Esta
caracterstica muito til nos processos industriais, porque quantidades mnimas
de produtos secundrios so produzidas, o que representa benefcios econmicos
e ambientais com a eliminao da necessidade de separao de subprodutos e
com reduo qualitativa e quantitativa de efluentes industriais (AITKEN, 1993 apud
PEREIRA, 2004).
Entre vrias possibilidades, os biocatalisadores podem ser usados no
tratamento de efluentes gerados nas indstrias petrolfera, txtil, papel, derivados
de celulose e alimentcias em geral, como mostra a Tabela 5.
Na indstria de abate de frango, um dos principais problemas a
degradao das penas de aves, subproduto do abate de frangos e de difcil
biodegradao anaerbia. As penas so constitudas de queratina, protena com
alto grau de ligaes cruzadas entre grupamentos dissulfito, presentes na cistena
(aminocido) que confere rigidez cadeia polipeptdica. Estudos tm sido
realizados para a obteno de linhagens capazes de biodegradar essa
macromolcula por meio de enzimas proteolticas, como endopeptidases, obtidas,
principalmente, das espcies bacterianas Fervidobacterium pennavorans e Bacillus
licheniformis (SALMINEN & RINTALA, 2002). Uma outra aplicao promissora de
enzimas proteolticas a hidrlise de protenas contidas em guas residurias
provenientes, principalmente, das indstrias de laticnios (JUNG et al., 2002).

REVISO BIBLIOGRFICA - 18

Tabela 5. Enzimas com potenciais aplicaes em tratamento de efluentes.


Enzimas e Fontes
Azorredutase (Pseudomonas luteola)

Poluentes e efluentes
Indstrias de tintas.

Celulase - (Trichoderma harzianum)

Polpa de acar de beterraba.

(Trichoderma viride)

Pr-tratamento termoqumico de celulignina.

Cianidase (Fusaruium solani)

Ciandio.

Cianidase hidratase (Trichoderma sp.)

Ciandio.

Monooxigenase e Iminodiacetato deidrogenase (gneros


Chelatobacter e Chelatococcus)

Remoo de compostos derivados de cidos aminopolicarboxilcos, por ex. EDTA, em


efluentes municipais.

Oxirredutases e NTA Deidrogenase (gneros Chelatobacter e


Chelatococcus)

Remoo de compostos derivados de cidos aminopolicarboxilcos, por ex. EDTA, em


efluentes municipais.

Polifosfatase e Fosfotransferase

Remoo de fosfato biolgico de efluentes.

Nitrogenase (Klebsiella oxytoca)

Remoo de excesso de lodo e protenas em estaes de tratamento de efluentes.

Protease

Ciandio.

Protease pronase (Pseudomonas aeruginosa)

Inativao de vrus bacterifago Cox A9 de efluentes, para reutilizao da gua.

Enzimas Oxirredutases (Pseudomonas syringae)

Remoo de compostos fenlicos e catecol.

Acetilcolinesterase e enzimas antioxidantes

Degradao de pesticidas de ambientes marinhos.

Carbaril Hidrolase (Arthrobacter sp. RC100)

Degradao de inseticidas base de N-metilcarbamato.

Naftaleno-dioxigenase

Remoo de naftaleno.

Catalase (Bacillus sp.)

Remoo de H2O2 presente em efluentes de branqueamento de tecidos.

-Glicosidase e Mangans peroxidase (Phanerochaete

chrysosporium e Pleurotus sajorcaju


Lipase - (Pseudomonas aeruginosa)

Remoo de corantes azo da indstria de alimentos e da indstria txtil.


Reduo do teor de lipdeos em efluentes de restaurantes.

REVISO BIBLIOGRFICA - 19

(Pancretica PL250)

Reduo do tamanho das partculas de lipdeos, de efluente de matadouros, em at 60%.

(Penicillium P4)

Reduo do teor de DQO de efluente da indstria de leo de oliva, em 60%.

(Penicillium restrictum)

Remoo de DQO, em termos de lipdeos, de efluente da indstria de derivados lcteos.

(Yarrowia lipolytica)

Reduo de DQO, em at 80%, de efluente da indstria de extrao de leo de oliva.

(Pseudomonas aeruginosa LP602 e Anicetobacter


calcoaceticus LP609)

Reduo do teor de lipdeos e DBO de efluente.

(Anicetobacter sp.)

Reduo do teor de lipdeos de efluentes de restaurantes.

(Candida rugosa)

Reduo do teor de lipdeos e DQO de efluentes de abatedouros de frango.

(pncreas de porco)

Reduo do teor de lipdeos e de slidos suspensos de efluentes da indstria de derivados


lcteos.

Lacase - (Coriolus versicolor e Funalia trogii)

Tratamento de efluentes da indstria txtil.

(Chalara (syn. Thielaviopsis) paradoxa)

Remoo de compostos fenlicos da indstria de extrao de leo de oliva.

(Trametes versicolor)

Remoo de pesticidas base de uria, N, N-(dimetil)-N-(2-hidroxifenil) uria (2-HF).

Lacase e Mangans peroxidase (Trametes versicolor)

Remoo de hidrocarbonetos aromticos.

(Panus triginus)

Remoo de compostos fenlicos da indstria de extrao de leo de oliva.

(Geotrichum sp. CCMI 1019)

Remoo de compostos azo, tintas, presentes em efluentes da indstria txtil.

(Phanerochaete flavido-alba)

Remoo de compostos fenlicos e cor.

Peroxidase - Lignina peroxidase (Phanerochaete


chrysosporium)

Tintas, clorofenis, dibenzo[p]dioxinas, metoxifenis, metilfenis, 2-nitrofenol, fenol,


hidrocarbonetos aromticos policclicos e licor de madeira pinus obtido por exploso
vapor.

Mangans peroxidase (Phanerochaete flavido-alba)

Efluentes de indstrias de extrao de leo de oliva, ricos em compostos fenlicos.

Peroxidase de soja

Remoo de compostos fenlicos da indstria de extrao de leo de soja.

Tirosinase (Agaricus bisporus)


Fonte: MENDES et al., 2005.

Degradao de compostos fenlicos.

REVISO BIBLIOGRFICA - 20

A utilizao de enzimas em biocatlise ambiental vem ao encontro da forte


tendncia dos governos atuais de intensificar as restries poluio ambiental.
No caso brasileiro, o controle ambiental ainda mais relevante por sermos
responsveis pela preservao dos nossos ecossistemas que, em funo da sua
extenso e biodiversidade, constitui em ativo de valor incalculvel, alm de garantir
a representatividade brasileira no cenrio mundial (BON e PEREIRA, 1999 apud
MENDES et al., 2005).

3.7 ENZIMAS
As enzimas, conhecidas industrialmente como biocatalisadores, so em sua
maioria protenas, formadas por longas cadeias de aminocidos com ligaes
peptdicas, com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com
propriedades catalticas. A maioria das enzimas sintetizadas por clulas so retidas
para funes intracelulares. As enzimas extracelulares so subseqentemente
secretadas para fora dos limites da membrana celular. Enzimas esto presentes
em todas as clulas vivas, onde exercem as funes vitais de controle dos
processos de transformao dos nutrientes em energia e em material celular. Alm
disto, participam dos processos de quebra de nutrientes complexos em
substncias mais simples. (ZANOTTO, 2003).
De acordo com Sharma et al. (2001) quase 4000 enzimas so conhecidas,
e destas, aproximadamente 200 so utilizadas comercialmente, sendo que a
maioria de origem microbiana. A demanda mundial de enzimas satisfeita por 12
produtores principais e por 400 fornecedores menores. Ao redor de 60% da fonte
total de enzimas industriais so produzidas na Europa. Em torno de 75% de todas
as enzimas industriais (incluindo as lipases) so de ao hidroltica. Segundo a
Novozymes (2005) o mercado mundial de enzimas gira em torno de US$ 2,4
bilhes, com um crescimento mdio anual entre 4 e 5%.
A classificao da Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular
(IUBMB) divide as reaes catalisadas por enzimas em seis grupos principais, nas
quais esto inclusas subclasses de acordo com o tipo de reao catalisada. A
Tabela 6 apresenta esta classificao.

REVISO BIBLIOGRFICA - 21

Tabela 6. Classificao das enzimas segundo IUBMB.


Classes

Funo cataltica

Subclasses
Desidrogenases

1 - Oxidorredutases

Catalisam reaes de oxidao-reduo


envolvendo oxigenaes e remoo ou
adio de tomos de hidrognio.

Oxidases
Hidrogenases
Peroxidases

2 - Transferases

Enzimas que mediam a transferncia de


grupos tais como aldedos, cetonas, etc.

Metiltransferases
Transaminases
Carboidrases

Catalisam reaes de hidrlise e


formao de glicosdeos, anidridos e
steres, bem como amidas, peptdeos e
outras funes contendo a ligao C-N.

3 - Hidrolases

Esterases
Lipases
Fosfatases
Proteases

Catalisam reaes de adio,


usualmente de HX, a duplas ligaes
como: C=C, C=N e C=O, e tambm os
processos reversos.

4 - Liases

Descarboxilases
Cetocidolises
Hidratases
Racemases

5 - Isomerases

Catalisam processos de isomerizao,


tais como racemizao.

Isomerases
Mutases

Mediam a formao ou clivagem de


ligaes C-C, C-O, C-S, C-N e steres
de fosfato.

6 - Ligases

Sintetases

Fonte: FABER, 2000 apud SANTOS, 2003.

Na classe das Hidrolases destacam-se as Lipases, que so glicoprotenas


nas quais a parte glicosilada hidrofbica circunda o stio ativo. Elas tm sido
isoladas de uma variedade de tecidos de animais e plantas, e podem ser tambm
produzidas

por

processos

de

fermentao

usando

vrias

espcies

de

microrganismos (fungos e bactrias) (SANTOS, 2003).

3.8 LIPASES
As lipases (glicerol ster hidrolases, E.C. 3.1.1.3) compreendem um grupo
de enzimas hidrolticas que atuam geralmente na interface orgnica aquosa,
catalisando a hidrlise de ligaes ster - carboxlicas presentes em acilgliceris
para liberar cidos orgnicos e glicerol (JAEGER et al., 1994 apud LEAL, 2000).
Esta definio exclui as enzimas que agem em steres solveis em gua
(esterases) ou que hidrolisam outros lipdeos (acilidrolases, colesterolesterase,

REVISO BIBLIOGRFICA - 22

tioesterases e outras) (CARVALHO et al., 2003).


As lipases catalisam a reao de hidrlise de triacilglicerdeos (TG)
resultando na formao de diacilglicerdeos (DG), monoacilglicerdeos (MG),
cidos graxos (AG) e glicerol. Entretanto, dependendo das condies reacionais,
as lipases podem tambm catalisar a sntese reversa, ou seja, pode ocorrer a
sntese do MG, DG ou TG a partir de cidos graxos e glicerol (SAXENA et al.,
1999).
A maioria das pesquisas sobre lipases est focalizada na caracterizao
estrutural, elucidao do mecanismo de ao, cintica, sequenciamento e clone de
genes das lipases e caractersticas gerais do seu desempenho (SHARMA et al.,
2001).
As razes do enorme potencial biotecnolgico dessa enzima incluem fatos
relacionados com: I) sua alta estabilidade em solventes orgnicos; II) no requerem a
presena de co-fatores; III) possuem uma larga especificidade pelo substrato e, IV)
exibem uma alta enantiosseletividade (CASTRO et al., 2004).

3.8.1 Fontes
As lipases so comumente encontradas na natureza, podendo ser obtidas a
partir de fontes animais, vegetais e microbianas. Suas caractersticas diferem em
funo de sua origem e das formas empregadas para a sua obteno (LEAL,
2000). Do ponto de vista econmico e industrial, os microrganismos so preferveis
a as lipases de fontes animais e plantas, devido ao alto custo do seu isolamento
(NASCIMENTO et al., 2004).
Na Tabela 7 apresenta as fontes, principais origens e mtodos de obteno
de enzimas.
Tabela 7. Obteno industrial de enzimas.
Fonte

Origens

Mtodo de obteno

Vegetais

Sementes, Sucos, Polpas,


Razes.

Triturao de tecidos

Animais

Mucosas, Pncreas, Fgado,


Sangue.

Triturao de tecidos

Microrganismos

Bactrias, Fungos, Leveduras.

Cultura submersa ou semi - slida.

Fonte: VICENZI, 2004.

REVISO BIBLIOGRFICA - 23

3.8.2 Caractersticas e propriedades


Dependendo da fonte, as lipases podem ter massa molecular variando
entre 20 a 75 kDa, atividade em pH na faixa entre 4.0 a 9.0 e em temperaturas
variando desde a ambiente at 70C. So enzimas usualmente estveis em
solues aquosas neutras temperatura ambiente, apresentando, em sua maioria,
uma atividade tima na faixa de temperatura entre 30 e 40C (VULFSON, 1994
apud MENDES, 2004). Sua termoestabilidade varia consideravelmente em funo
de sua origem, sendo as microbianas as que possuem maior estabilidade trmica
(MACRAE & HAMMOND, 1985 apud PEREIRA, 2004).
A estrutura tridimensional da lipase fngica de Rhizomucor miehei e da
lipase pancretica foram determinadas em 1990. Desde ento, mais de onze
estruturas de lipases j foram determinadas, das quais, com exceo da lipase
pancretica, todas so de origem microbiana. Estas enzimas mostram uma
caracterstica padro conhecida como o entrelaado de / hidrolase (CASTRO et
al., 2004).
Segundo Faber (2000 apud PAQUES & MACEDO, 2006) as lipases so
divididas da seguinte forma:

Regiosseletivas - subdivididas em:

Lipases no-especficas - hidrolisam steres de cidos graxos

primrios ou secundrios, liberando cidos graxos na posio 1(3) ou 2;

Lipases 1,3-especficas - hidrolisam apenas steres de cidos

graxos primrios, isto , na posio 1 ou 3.

Tipo-seletivas - com relao ao tamanho da cadeia carbnica e/ou ao

nmero de insaturao do grupo acila.

Enantiosseletivas.

3.8.3 Reaes catalisadas pelas Lipases


As lipases catalisam uma srie de diferentes reaes, podem ser
empregadas tanto em meio aquoso como em meio orgnico proporcionando assim
diversas aplicaes. De fato, embora sua funo natural seja a quebra das
ligaes de ster de triacilgliceris com o consumo de molculas de gua
(hidrlise), as lipases so tambm capazes de catalisar a reao reversa sob
condies microaquosas, como por exemplo, a formao de ligaes ster a partir

REVISO BIBLIOGRFICA - 24

de lcool e cido carboxlico (sntese de ster) (PEREIRA, 1999). O deslocamento


do equilbrio na reao, no sentido direto (hidrlise) ou inverso (sntese),
controlado pela quantidade de gua presente na mistura reacional (NASCIMENTO,
2004). A Figura 2 mostra que alm da hidrlise, as lipases tambm so capazes de
catalisar reaes como a esterificao, transesterificao (interesterificao,
alcolises e acidlises), aminlise (sntese de amidas) e lactonizao (esterificao
intramolecular), sendo que a atividade de gua do meio reacional um dos fatores
determinantes para cada classe de reao (PAQUES & MACEDO, 2006).

Fonte: PAQUES & MACEDO, 2006.

Figura 2. Representao esquemtica das reaes catalisadas por lipases.

3.8.4 Fatores que interferem no processo de hidrlise


A hidrlise de steres de triacilgliceris ocorre por clivagem seqencial dos
grupos acila no glicerdeo, de tal forma, que num dado momento, a mistura

REVISO BIBLIOGRFICA - 25

reacional contm no somente triacilgliceris, gua, glicerol e cidos graxos, como


tambm diacilgliceris e monoacilgliceris (HARALDSSON, 1991), conforme
mostrado na Figura 3.
O processo de hidrlise enzimtica necessita de dois requisitos para a
operao: a formao de uma interface lipdeo/gua e a adsoro da enzima nesta
interface. Assim, quanto maior a interface, maior ser a quantidade de enzima
adsorvida, acarretando velocidades de hidrlise mais elevadas (PEREIRA, 2004).

Figura 3. Etapas envolvidas na reao de hidrlise de leos e gorduras.


Diferentes parmetros podem influenciar o desempenho da hidrlise de

REVISO BIBLIOGRFICA - 26

leos e gorduras e, conseqentemente diversas tcnicas tm sido utilizadas para


aumentar a taxa de hidrlise de leos e gorduras usando lipases como
catalisadores. Dentre esses parmetros podemos citar:
Relao fase aquosa / fase oleosa;
Eventual ao inibitria dos produtos formados;
Influncia do tipo de agente emulsificante: apesar do efeito dos agentes
emulsificantes em lipases no ter sido extensivamente estudado, a goma arbica
o agente tensoativo mais utilizado, conduzindo elevada atividade lipoltica
(VEERARAGAVAN, 1990). O uso de tensoativo para estabilizar emulses na
determinao de atividade lipoltica, deve ter em conta que a atividade da lipase
varia tanto em funo do tipo de tensoativo, como da sua concentrao
(MOZAFFAR et al., 1994).
Efeito da agitao na velocidade de reao: para o caso da lipase situada
na interface leo-gua, a agitao mostra-se um fator essencial para aumentar a
freqncia das colises entre a enzima e o substrato, de modo a acelerar o
desenvolvimento da reao enzimtica (GROSS, 1996).
Concentrao de substrato: a velocidade de uma reao catalisada por
enzimas aumenta conforme a concentrao de substrato, at atingir uma
velocidade mxima. A obteno de um plat na velocidade de reao em altas
concentraes de substrato reflete a saturao pelo substrato de todos os stios de
ligao disponveis na enzima (CHAMPE & HARVEY, 1997).
pH: a maioria das enzimas apresenta um pH caracterstico em que sua
atividade mxima, chamado pH timo da enzima, acima ou abaixo do qual a
atividade decresce. O pH timo est associado ao tipo de substrato, estado de
pureza da lipase, tampo e mtodos de ensaio. Entretanto, grande parte das
lipases tem uma atividade tima em pH alcalino (CHAMPE & HARVEY, 1997). A
lipase de pncreas de porco tem uma atividade tima em pH entre 8.0 e 9.0, mas
dependendo do substrato e do tipo de agente emulsificante, pode desenvolver
atividade em pH entre 6.0 e 7.0 (SHAHANI, 1975).
Temperatura: o aumento na temperatura imprime maior energia cintica s
molculas de enzima e substrato, ocasionando um maior nmero de colises
produtivas por unidade de tempo. Uma elevao adicional da temperatura resulta
em uma reduo na velocidade de reao, como resultado da desnaturao da
enzima induzida pela temperatura (CHAMPE & HARVEY, 1997). A temperatura

REVISO BIBLIOGRFICA - 27

tima das lipases microbianas e pancreticas se encontra normalmente entre 30C


- 40C (SHAHANI, 1975).

3.8.5 Aplicaes das Lpases

3.8.5.1 Detergentes
Os detergentes so caracterizados por serem compostos que possuem em
sua estrutura uma poro hidroflica e uma hidrofbica. Os sais dos cidos graxos
tm na cadeia hidrocarbonada a poro hidrofbica e na carboxila dissociada
(carga negativa neutralizada por sdio ou potssio), a poro hidroflica (SANTOS,
2005). A ao de limpar e a habilidade de emulsificar de um detergente dependem
de sua capacidade de formar partculas de leo estveis e reduzir a tenso
interfacial, facilitando a penetrao da gua.
As lipases utilizadas em detergentes so selecionadas a fim de satisfazer
as seguintes exigncias: ter uma baixa especificidade em relao ao substrato, isto
, uma habilidade de hidrolisar gorduras de vrias composies, habilidade de
suportar as condies de lavagem relativamente severas (pH 10-11, 30-60 C),
habilidade de resistir a surfactantes e enzimas que so ingredientes importantes na
formulao de detergentes (SHARMA et al., 2001).
As principais razes do interesse crescente do uso de enzimas, utilizadas
como aditivo nas formulaes de novos detergentes, situa-se basicamente na
possibilidade e eliminar manchas de gorduras nas baixas temperaturas de lavagem
e conseguir a reduo do consumo de surfactantes por razes ambientais
(TATARA et al., 1985 apud LEAL, 2000).
As projees indicam que combinaes variadas de misturas de enzimas
venham a substituir, cada vez mais, os ingredientes menos aceitveis do ponto de
vista ambiental, nas formulaes de detergentes. Um exemplo est na fabricao
de detergentes de mquinas de lavar louas automticas, no mercado europeu. A
substituio de muitos dos ingredientes que agrediam o meio ambiente por
enzimas tornou possvel manuteno do mesmo desempenho (OLIVEIRA, et al.,
2004).

REVISO BIBLIOGRFICA - 28

3.8.5.2 Indstria alimentcia


As lipases so empregadas em diversos campos da manufatura de
alimentos. Estas so utilizadas com a finalidade de aprimorar o aroma e a textura
dos mesmos.
Na indstria de laticnios, as lipases so largamente utilizadas na hidrlise
da gordura do leite (SAXENA et al., 1999), na acelerao dos processos de
maturao de queijos e no desenvolvimento de aromas e sabores. A adio de
lipases ao leite de vaca gera um sabor similar ao do leite de cabra, e com este leite
so fabricados os chamados queijos modificados enzimaticamente.
Gorduras e leos so componentes importantes da alimentao. O valor
nutricional e as propriedades fsicas de um triglicerdeo so muito influenciados por
fatores como a posio do cido graxo na estrutura principal do glicerol, o
comprimento de cadeia do cido graxo e seu grau de instaurao. As lipases
permitem modificar as propriedades de lipdeos alterando a posio do cido graxo
na estrutura do glicerdeo e substituindo um ou mais dos cidos graxos por novos
(SHARMA et al., 2001).

3.8.5.3 Indstria farmacutica e qumica fina


Este tipo de indstria vem utilizando intensivamente lipases em seus
processos produtivos. As caractersticas de enancio estreo seletividade das
lipases permitem a sua utilizao na resoluo de misturas racmicas e na
remoo seletiva de certos compostos. Alm disto, estas enzimas, em geral,
apresentam excelente estabilidade em presena de solventes orgnicos, nos quais
os substratos destas reaes so solveis (KATZ et al., 1993 apud LEAL, 2000).

3.8.5.4 Hidrlise de leos e graxas


A gama de aplicaes de lipases na indstria oleoqumica enorme, e o
emprego dos biocatalisadores proporciona diminuio de gastos com energia e
minimiza a degradao trmica dos compostos, quando comparados s vias
qumicas tradicionais (LEAL, 2000).
O procedimento usual para a hidrlise de leos e graxas, catalisada pela

REVISO BIBLIOGRFICA - 29

lipase, consiste em misturar a gordura com a lipase solubilizada em gua. O


processo enzimtico para a hidrlise de leos e graxo tem um custo elevado, por
isso grande a busca por processos de produo de enzimas a custo reduzido
(LEAL, 2000).
A Tabela 8 apresenta um resumo das principais aplicaes no setor de
leos e gorduras.
Tabela 8. Aplicao industrial das lipases no setor de leos e gorduras.
Setor

Efeito utilizado

Produto

Alimentcio
Laticnio

Hidrlise da gordura do leite

Agente aromatizante para


manufatura de produtos
lcteos.

Panificao

Melhoramento do sabor /
qualidade, prolongamento do
tempo de prateleira.

Confeitos e bolos.

Bebidas

Melhoramento do aroma e
acelerao da fermentao,
por remoo de lipdeos.

Bebidas alcolicas

Processamento de
derivados do ovo

Melhoramento da qualidade do
ovo por hidrlise dos lipdeos

Maionese, molhos e
cremes.

Processamento de carne e
peixe

Desenvolvimento de aroma e
remoo de excesso de
gorduras

Produtos embutidos

Processamento de leos

Transesterificao de leos
naturais. Hidrlise de leos
(cidos graxos, DG e MG).

leos e gorduras
modificadas (substitutos da
manteiga de cacau)

Qumica fina

Sntese de steres

steres

Detergentes

Remoo de manchas de leo


e gordura

Detergentes

Farmacutico

Digesto de leos e gorduras


de alimentos

Digestivos

Analtico

Anlise de triglicerdeos no
sangue

Diagnstico

Cosmtico

Remoo de lipdeos

Cosmticos em geral

Curtume

Remoo de gorduras das


peles dos animais

Produtos de couro

Diversos

Decomposio e remoo de
substncias oleosas

Limpeza de tubulao,
tratamento de efluentes.

Qumico

Fonte: (CASTRO et al., 2004).

REVISO BIBLIOGRFICA - 30

3.8.5.5 Outras aplicaes


A versatilidade cataltica das lipases proporciona a estas enzimas uma
diversidade de aplicaes. As lipases podem ser empregadas na produo de
cosmticos, perfumaria, diagnsticos mdicos, sntese de compostos opticamente
ativos, resoluo de racematos, produo de aromas e fragrncias e modificaes
de lipdeos (GHANDI, 1997; SHARMA et al., 2001). A indstria de cosmticos e de
perfumes pode empregar lipases para a produo de aromas e de surfactantes, ou
de emolientes usados em cremes para a pele e cremes bronzeadores (SAXENA et
al., 1999). Na indstria de couro, lipases podem ser empregadas em conjunto com
outras hidrolases para a remoo de gordura subcutnea e pelos.
Na indstria de polpa e papel, triglicerdeos e ceras contidas na madeira na
remoo do pitch que dificultam o processo de produo de papel podem ser
removidos pelo emprego de lipases (JAEGER & REETZ, 1998).
Atualmente, o tratamento de resduos tambm representa um campo de
vasta aplicao para estas enzimas, seja na preveno ou limpeza de filmes
gordurosos, seja na biodegradao de plsticos, ou seja, no pr-tratamento de
efluentes contendo compostos gordurosos como os gerados em atividades
zootcnicas (LIE & MOLIN, 1991; GROSS, 1996; TEIXEIRA, 2001; MASSE et al.,
2001; LEAL et al., 2002; MENDES, 2004; PEREIRA, 2004).

3.9 TRATAMENTO DE GUAS RESIDURIAS COM ELEVADOS TEORES DE LIPDEOS


UTILIZANDO LIPASES

Os microrganismos hidrolisam os triacilglicerdeos em meio extracelular, por


ao de lipases, produzindo cidos graxos e glicerol. As lipases (glicerol ster
hidrolases, E.C. 3.1.1.3) compreendem um grupo de enzimas hidrolticas que
atuam na interface orgnica - aquosa, catalisando a hidrlise de ligaes ster carboxlicas, presentes em acilgliceris (SAXENA et al., 2003).
Essas enzimas clivam triacilgliceris especficos, entretanto, podem no ser
totalmente especficas e catalisar as reaes de hidrlise de triacilglicerdeos que
contm, em sua composio, diferentes cidos graxos, o que pode ser de grande
interesse para o tratamento de efluentes com alto teor de gordura (SAXENA et al.,
2003).
As lipases tm sido usadas na remoo de gorduras de aeradores de

REVISO BIBLIOGRFICA - 31

estaes de tratamento que empregam lodo ativado. Esta camada de gordura


impede a transferncia de oxignio, comprometendo a reposio de oxignio
necessrio biomassa na degradao da matria orgnica. A empresa japonesa
Meito Sangyo Co. vem produzindo lipase de Candida rugosa (Lipase - MY), que
empregada em estaes de tratamento de efluentes nos Estados Unidos, para a
remoo de gorduras em equipamentos. O tempo de vida til de equipamentos
industriais e de estaes de tratamento de efluentes eleva-se com a remoo de
slidos, como gorduras (MENDES et al., 2005).
As lipases podem ser utilizadas diretamente na forma bruta (caldo
fermentado) ou isoladas para promover um pr-tratamento do efluente antes da
digesto anaerbia. Entretanto, estudos tm sido realizados para verificar a
possibilidade de cultivo de microrganismos produtores de lipases do gnero
Penicillium em associao com a digesto do efluente de extrao de azeite de
oliva (ROBLES et al., 2000).
Um complexo enzimtico contendo hidrolases, como proteases, amilases,
celulases e lipases, produzidas por Bacillus subtilis, foi testado em efluentes ricos
em lipdeos por Cail et al. (1986). O pr-tratamento enzimtico aumentou a
remoo de DQO de 59% no controle para 78% no reator anaerbio e reduziu os
teores de lipdeos e slidos de 70% para 47% e de 70% para 34%,
respectivamente.
A hidrlise de lipdeos de efluentes gerados em frigorficos avcolas,
empregando lipase microbiana de Candida rugosa foi realizada por Pereira et al.
(2003). As porcentagens de hidrlise mais elevadas foram alcanadas em
efluentes tamponados no pH timo de atuao dessa preparao enzimtica (pH
7.0). Verificou-se a influncia das concentraes de enzima, agente emulsificante e
ons clcio no desempenho da hidrlise dos lipdeos, por um perodo de 3 horas. A
porcentagem de hidrlise mxima obtida foi de 20,9%, com influncia significativa,
em nveis mximos, das concentraes de enzima (0,4%) e agente emulsificante
(3%). O ajuste do pH do efluente com solues de NaOH ou NaHCO3 em
substituio soluo tampo e aps 12 horas de tratamento, elevou a
porcentagem de hidrlise dos lipdeos para 35%. A eficincia do pr-tratamento
enzimtico, verificada por meio de testes de atividade metanognica, revelou uma
reduo no tempo de digesto anaerbia da ordem de 33%.
Desta forma, pode-se afirmar que a enzima lipase tem uma grande

REVISO BIBLIOGRFICA - 32

potencialidade para o tratamento de efluentes gordurosos tendo em vista sua


grande especificidade e capacidade de hidrolisar os lipdeos presentes nesses
efluentes.
Para viabilizar economicamente este tipo de tratamento, alguns pontos de
natureza tcnica devem ser considerados. necessrio conhecer em detalhes os
processos industriais responsveis pela produo dos efluentes: suas variaes ao
longo do tempo, os insumos empregados, o regime de descarga dos efluentes, o
procedimento para limpeza das instalaes, sua freqncia e produtos utilizados
para esse fim. Todos esses detalhes operacionais podem influenciar na qualidade
dos efluentes. necessrio tambm fazer uso de preparaes enzimticas ativas e
otimizar as condies adequadas de hidrlise (MENDES et al., 2005).

MATERIAL E MTODOS - 33

4 Material e Mtodos
4.1 INTRODUO
Neste captulo esto apresentados o material e os mtodos utilizados, bem
como a descrio dos procedimentos laboratoriais realizados durante a fase
experimental deste trabalho. Os procedimentos experimentais relacionados a este
trabalho

foram

desenvolvidos

no

Laboratrio

de

Engenharia

Bioqumica

(ENGEBIO) do Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos


da Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC).

4.2 MATERIAL

4.2.1 Reagentes
Os reagentes utilizados foram de grau analtico, adquirido das empresas
Nuclear, Synth, Quimex, Colleman e Vetec. Dentre esses, podem ser citados:

Solventes (acetona, lcool etlico, hexano);

Sais (fosfato dibsico de potssio, fosfato monobsico de potssio);

Emulsificante (goma arbica);

Bases (hidrxido de sdio, hidrxido de potssio);

cido (cido sulfrico, cido clordrico).

4.2.2 Enzimas
Foram utilizadas preparaes enzimticas comerciais de origem animal:

Lipase pancreatina (LKM) fornecida pela empresa Kin Master / RS. Os


dados desta enzima esto no Apndice C.

MATERIAL E MTODOS - 34

Lipase pancreatina (LNU) - fornecida pela empresa Nuclear / SP.

4.2.3 Substrato
Como substratos foram usados:

Azeite de Oliva controle;

Efluente da indstria de abate de frango Indstria Macedo Koerich / SC.


O efluente foi coletado no tanque de equalizao, proveniente do processo

industrial de escaldagem e depenagem, da lavagem do frango, das vceras, dos


equipamentos, dos pisos e outros. O efluente foi guardado em recipientes de
plsticos no esterilizados e armazenado em freezer a 0C, para conservao das
suas caractersticas.

4.2.4 Inculo
O inculo utilizado foi obtido de reatores de manta de lodo com fluxo
ascendente (UASB), utilizado para o tratamento de esgoto domstico, pela
Companhia de Saneamento bsico do Estado de Santa Catarina (CASAN), na
cidade de Florianpolis, e posteriormente foi estocado em recipientes plsticos
armazenados a 20C.

4.3 EQUIPAMENTOS
Dentre os equipamentos utilizados podemos citar:

pHmetro modelo WTW pH 330i, fabricado por Wissenschaftlich Technische


Werkstatten GmbH & Co.KG para medidas de pH;

Espectofotmetro modelo E-225D, fabricado por CELM para anlises de


DQO;

Banho Maria modelo Dubnoff digital NT 232, fabricado por Nova Tcnica
para dosagens de atividade enzimtica e testes de biodegradabilidade.

4.4 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

4.4.1 Caracterizao fsico-qumica do efluente


Alquotas foram separadas e caracterizadas quanto aos parmetros de

MATERIAL E MTODOS - 35

interesse para o processo: pH, demanda qumica de oxignio (DQO), alcalinidade


total, leos e graxas, acidez, cidos graxos livres, massa especfica, amnia, ndice
de saponificao, segundo normas recomendadas por mtodos oficiais (APHA,
1995).

4.4.2 Caracterizao das propriedades fsico-qumicas das preparaes


enzimticas
As lipases pancreticas LKM e LNU foram caracterizadas quanto sua
atividade especfica em funo do pH e da temperatura, realizada frente a dois
substratos, o azeite de oliva e o efluente bruto.

4.4.2.1 Determinao da atividade hidroltica


A atividade enzimtica foi determinada pelo mtodo de hidrlise, conforme
metodologia adotada por Pereira (2004). O substrato foi preparado pela emulso
de 50 mL de azeite de oliva ou efluente e 50 mL de goma arbica a 7% (p/v)
quando o azeite de oliva era utilizado e 3% (p/v) quando se utilizava o efluente. Em
frascos erlenmeyer de 125 mL foram adicionados: 5 mL de substrato,
anteriormente preparado, 4 mL de soluo tampo fosfato de sdio (0,1M, pH 7.0)
e 1 mL da soluo enzimtica (5 mg.mL-1). Os frascos foram incubados a 37C por
10 minutos, em banho termostatizado com agitao. Aps o perodo de incubao,
a reao foi paralisada pela adio de 15 mL de uma mistura de acetona e etanol
(1:1). Os cidos graxos liberados foram titulados com soluo de KOH 0,02M,
utilizando fenolftalena como indicador. Para cada anlise de atividade, foi
realizado um branco utilizando gua destilada. Os ensaios foram realizados em
triplicata e os valores de atividade especfica foram obtidos atravs da Equao
4.1. Uma unidade de atividade foi definida como a quantidade de enzima que libera
1mol de cido graxo por minuto de reao, nas condies do ensaio.

A.E. (moles.min 1 ) =

(V V ).C KOH .10


a

VE .C E .t
Onde: CKOH = concentrao da soluo de KOH (M);

(4.1)

MATERIAL E MTODOS - 36

t = tempo de reao (minutos);


Va = volume de KOH gasto na titulao da amostra (mL);
Vb = volume do KOH gasto na titulao do branco (mL);
VE = volume da soluo enzimtica (mL);
CE = concentrao de protenas na soluo enzimtica (mg.mL-1).
A.E. = atividade especfica (moles.(mg.min) -1 ou U.mg-1).

4.4.2.2 Influncia do pH na atividade da enzima


As atividades das lipases foram estudadas utilizando-se a reao de
hidrlise dos substratos (azeite de oliva e o efluente) na faixa de pH entre 5.8 a 10.
Para este estudo foi empregada mesma metodologia descrita no item 4.4.2.1.
variando o pH do tampo fosfato de sdio (0,1M), a temperatura de 37C.

4.4.2.3 Influncia da temperatura na atividade da enzima


Foi verificada a influncia da temperatura na atividade enzimtica das
lipases empregando-se a reao de hidrlise dos substratos (azeite de oliva e o
efluente), conforme metodologia descrita no item 4.4.2.1, nas temperaturas de
30C a 60C, no pH timo de cada preparao de lipase.

4.4.3 Hidrlise e biodigesto do efluente


As etapas de hidrlise e digesto anaerbia do efluente bruto e tratado
enzimaticamente foram realizadas simultaneamente.
As concentraes de biomassa e substrato foram de acordo com as
recomendadas por Soares e Hiriata (1999) e a concentrao de enzima foi variada
de 0,10% a 0,35% (p/v).
Os experimentos foram conduzidos em frascos vedados de vidro tipo soro,
com volume til de 500 mL, aos quais foram adicionados o lodo anaerbio (50 mL),
o efluente (250 mL) e a enzima em diferentes concentraes.
A Figura 4 mostra como foram feitas as medidas do volume de metano. O
biogs produzido no reator entra no sistema pelo ponto 1, passando por frasco de
segurana, ponto 2, que tem o objetivo de proteger o reator de possveis

MATERIAL E MTODOS - 37

vazamentos de soda custica que est presente no frasco Duran invertido, ponto 3.
Aps passar pelo frasco de segurana o biogs borbulhado no frasco Duran, que
contm uma soluo de NaOH 5%, fazendo com que o CO2 que est presente no
biogs reaja com a soda custica. Desta maneira o CO2 eliminado do biogs
restando apenas o CH4, que fica retido na parte superior do frasco Duran invertido.
medida que o metano vai sendo acumulado no sistema a soda custica vai
sendo deslocada para o frasco de coleta, ponto 4. Com auxilio de uma proveta, em
determinados perodos de tempo este volume era quantificado, representando a
produo de metano.

Fonte: SANTANA, 2002.

Figura 4. Gasmetro tipo frasco invertido 1 - Entrada de Biogs; 2 - Frasco de


segurana; 3 - Frasco Duran; 4 - Coletor de NaOH.
O frasco controle foi alimentado com efluente bruto, permitindo desta forma
uma comparao da eficincia de remoo avaliando-se somente o efeito do
tratamento enzimtico (hidrlise das gorduras no efluente). Para descontar
eventuais interferncias, um segundo frasco controle foi alimentado somente com
lodo, que permitiu conhecer a contribuio da produo de gs do lodo utilizado.
Antes do incio dos ensaios, foi aplicado nitrognio durante 10 minutos para
garantir condies de anaerobiose. Os frascos foram colocados imediatamente em
um banho-maria com a temperatura e agitao ajustadas a 35 C e 100 rpm,
respectivamente.
Nos tempos inicial e final de cada ensaio foram quantificados os seguintes

MATERIAL E MTODOS - 38

parmetros: DQO, pH, cidos graxos e glicerol.


Podemos avaliar a biodegradabilidade como a porcentagem de DQO
biodegradada, calculada pela reao entre a DQO solvel final e a DQO solvel
inicial.

C DQOi C DQOf
Eficincia de remoo =

C DQOi

(4.3)

Onde: CDQO.i = Concentrao DQO no incio do teste (mg.L-1);


CDQO.f = Concentrao DQO no final do teste (mg.L-1);
A velocidade mdia de produo de metano foi avaliada em todos os
ensaios de biodegradabilidade. Para o clculo da derivada do volume calculou-se a
mdia da inclinao entre dois pontos adjacentes de acordo com a Equao 4.4:

dV 1 Vi + 1 Vi Vi Vi 1

+
=
dt
2 t
t i t i 1
t
i+1 i

(4.4)

Onde: Vi = Volume no instante i (mL-1);

ti = Tempo no instante i (h).


Foram realizadas cinco baterias de ensaios. Cada bateria possua trs
frascos, em duplicata. Estas foram estabelecidas a partir de combinaes de lodo,
concentraes diferentes das enzimas LKM e LNU e o efluente. A Figura 5
apresenta o fluxograma dos ensaios.

Figura 5. Fluxograma dos ensaios de Biodegradabilidade.

MATERIAL E MTODOS - 39

Figura 6. Aparato experimental utilizado nos ensaios de biodegradabilidade.


4.5 ANLISES

4.5.1 Determinao da Demanda Qumica de Oxignio (DQO)


A DQO do efluente foi medida pelo Mtodo Padro Colorimtrico de Refluxo
Fechado, segundo procedimento do Standard methods for the examination of water
and wastewater (APHA, 1995). A DQO se baseia no fato de alguns compostos
orgnicos, so oxidados por agentes qumicos oxidantes considerados fortes,
como o K2Cr2O7 (bicromato de potssio) em meio cido, sendo o resultado final
desta oxidao o dixido de carbono e gua. A DQO quantidade de O2
necessria para a oxidao da matria orgnica atravs de um agente qumico.
Para oxidao de compostos orgnicos de baixo peso molecular e os cidos
graxos utiliza-se o sulfato de prata (Ag2SO4) como catalisador.
Para o preparo da curva de calibrao, foi necessrio o preparo de pelo
menos cinco padres de biftalato de potssio com DQO equivalentes entre as
concentraes de 20 a 500 mg de O2.L-1, como apresentado no Apndice D.1. Para
os testes colocou-se 2,5 mL da amostra num tubo ou ampola, adicionou-se 1,5 mL
da soluo digestora e em seguida 3,5 mL do cido sulfrico reagente,

MATERIAL E MTODOS - 40

cuidadosamente. As amostras foram diludas adequadamente e digeridas em


estufa ou bloco digestor a 150 C por 2 horas. Resfriavam-se os tubos e a leitura
foi feita diretamente em espectrofotmetro a 600 nm.

4.5.2 Determinao do teor de cidos graxos livres


A concentrao de cido graxo livre foi determinada por titulao de
alquotas dissolvidas em 10 mL de etanol P.A., empregando-se soluo alcolica
de KOH 0,02N e fenolftalena como indicador (MACDO, 1997). A concentrao
de cidos graxos foi calculada pela Equao 4.5.

cidos graxos livres (g cido graxo.g

)=

V .C

KOH

.MM

cidos graxos

(4.5)

ma

Onde: V = volume da soluo de KOH gastos na titulao (L);


CKOH = concentrao de KOH (M);
MM cidos graxos = massa molecular dos cidos graxos titulados (g.mol-1);
ma = massa da amostra (g).

4.5.3 Determinao do ndice de acidez total


Definido como o nmero de miligramas de hidrxido de potssio necessrio
para neutralizar os cidos livres de uma grama da amostra, o ndice de acidez
revela o estado de converso do leo. Pesou-se 2 g da amostra em um frasco
erlenmeyer de 125 mL. Adicionou-se 25 mL de soluo de ter e lcool (2:1)
neutra. Agitou-se e adicionou-se 2 gotas de indicador fenolftalena. Titulou-se com
soluo de hidrxido de sdio 0,1N at colorao rsea (MORETTO & FETT,
1998). A acidez foi obtida atravs da Equao 4.6.

ndice de Acidez (mg KOH .g

)=

V .C

NaOH

.MM

KOH

.10 3

ma

Onde: V = volume da soluo de NaOH gastos na titulao (L);


CNaOH = concentrao de NaOH (M);
ma = massa da amostra (g);
MMKOH = massa molecular do KOH (g.mol-1).

(4.6)

MATERIAL E MTODOS - 41

4.5.4 Determinao do ndice de saponificao


O ndice de saponificao definido como a massa, em miligramas, de
hidrxido de potssio necessrio para neutralizar os cidos graxos, resultantes da
hidrlise de um grama de amostra e inversamente proporcional a massa
molecular mdia dos cidos graxos dos glicerdeos presentes. O procedimento
consistiu em pesar 2 g da amostra em um frasco erlenmeyer de 250 mL. Adicionar,
com o auxilio de uma bureta, 20 mL de soluo alcolica de hidrxido de potssio
4%. Ao erlenmeyer foi adaptado um refrigerante de fluxo. Aqueceu-se at ebulio
branda, durante 30 minutos e resfriou-se. Em seguida foram adicionadas duas
gotas do indicador fenolftalena e titulou-se com cido clordrico 0,5N at que a
colorao rsea desaparecesse. Para a prova em branco procedeu-se da mesma
forma, exceto a adio da amostra. A diferena entre os volumes do branco e da
amostra gastos nas titulaes equivalente quantidade de hidrxido de potssio
gasto na saponificao (MORETTO & FETT, 1998). O ndice de saponificao foi
calculado atravs da Equao 4.7.

ndice de Saponificao (mg KOH .g

)=

V .C

HCl

.MM

KOH

.10 3

ma

(4.7)

Onde: V = diferena entre os volumes do HCl gastos nas duas titulaes (L);
CHCl = concentrao de HCl (M);
ma = massa da amostra (g);
MMKOH = massa molecular do KOH (g.mol-1).
Para o clculo da massa molecular dos cidos graxos utilizou-se a Equao
4.8 (HORTWIZ, 1980 apud SINGHAL & KULKARNI, 1990):

MM cido graxo(g.mol 1 ) =

56000
12,67
IS

(4.8)

Onde: IS = ndice de saponificao (mg.g-1);


MMcido graxo = massa molecular dos cidos graxos (g.mol-1);

4.5.5 Determinao de amnia


A determinao de amnio foi realizada segundo o mtodo de Nessler,
descrito por Vogel (1981). Inicialmente foi preparado o reagente de Nessler

MATERIAL E MTODOS - 42

dissolvendo 100g de iodeto de mercrio (II) e 70g de iodeto de potssio em 100 mL


de gua, adicionando a seguir uma soluo fria de 160g de NaOH em 700 mL de
gua destilada, completando o volume final da soluo para 1L. O precipitado foi
deixado decantar por alguns dias antes de utilizar o reagente, o qual deve ser
submetido a uma padronizao, utilizando uma soluo de cloreto de amnio.
Para determinao da concentrao de amnio, foram adicionados 100L
do reagente de Nessler para 5 mL de amostra e, aps aguardou-se 10 minutos de
reao e foi efetuada a leitura da absorbncia em espectrofotmetro a 525nm.
Com o valor da absorbncia, foi obtida a concentrao de amnio a partir da curva
padro apresentada no Apndice D.2.

4.5.6 Determinao da concentrao de leos e graxas


A anlise de leos e Graxas foi realizada pelo Laboratrio de Saneamento
Bsico, localizado junto ao Centro Federal de Educao Tecnolgica de Santa
Catarina (CEFET SC), situado em Florianpolis, SC. O teor de leos e graxas no
efluente foi determinado pelo mtodo gravimtrico segundo procedimento padro
(APHA, 1995).

4.5.7 Determinao da alcalinidade total


A alcalinidade do efluente foi medida atravs do seguinte procedimento:
mediu-se 50 mL da amostra e adicionou-se 3 gotas de fenolftalena. Caso a
amostra tornasse rsea, titulavasse com cido sulfrico 0,02 N, at o
descoramento do indicador. Como a amostra no ficou rsea, e isto significa que a
alcalinidade a fenolftalena igual a zero, ento se adicionou 2 gotas de
metilorange na mesma amostra e titulou-se com cido sulfrico 0,02 N, at que a
colorao mude de amarelo para laranja rseo. (APHA, 1995). A alcalinidade
total (A.T.) do efluente foi calculada pela Equao 4.9.

A.T . (mgCaCO3 .L ) =

V .C

H 2 SO 4

MM

CaCO3

.10

amostra

Onde: V = volume de H2SO4 gastos na amostra (L);


CH2SO4 = concentrao de H2SO4 (M);

(4.9)

MATERIAL E MTODOS - 43

MMCaCO3 = massa molecular do CaCO3 (g.mol-1);


Vamostra = volume da amostra (L).

4.5.8 Determinao da concentrao de glicerol


A determinao da concentrao de glicerol consistiu da reao do glicerol
presente na amostra com periodato de sdio (NaIO4) em soluo aquosa cida
para produzir formaldedo e cido frmico, este ltimo foi utilizado como medida do
glicerol (COCKS E VAN REDE, 1966 apud PEREIRA, 2004). A amostra contendo
entre 1 a 2g de massa era previamente diluda em 50 mL de gua destilada, sendo
a mesma acidificada com cido sulfrico 0,2N, utilizando bromotimol como
indicador. A soluo era, ento, neutralizada com NaOH 0,05N at colorao azul.
Paralelamente, uma soluo em branco era preparada contendo 50 mL de gua
destilada, sem a presena de glicerol, sendo que o mesmo procedimento adotado
para a amostra a ser analisada foi aplicado ao branco. Em seguida, 100 mL de
soluo de periodato de sdio (60g.L-1) eram adicionados amostra e ao branco e
mantidas no escuro por 30 min. Aps este perodo, 10 mL de soluo de
etilenoglicol (1:1) eram adicionados mistura, a qual era deixada temperatura
ambiente, no escuro, por mais 20 min. As amostras eram, ento, diludas a 300 mL
com gua destilada e tituladas com soluo de NaOH 0,125N, usando pHmetro
para determinar o ponto final, pH de 6.5 para o branco e 8.1 para a amostra. A
percentagem de glicerol contida na amostra era determinada pela equao 4.10.

% Glicerol ( g glicerol .g 1 ) =

MM

Glicerol

NaOH

(V V )

(4.10)

Onde: CNaOH = concentrao de NaOH (M);


ma = massa da amostra (g);
V1 = volume da soluo de NaOH gasto na amostra (L);
V2 = volume da soluo de NaOH gasto no branco (L);
MMGlicerol = massa molecular do Glicerol (g.mol-1).

4.5.9 Determinao dos slidos suspensos totais


Para estimar a concentrao celular do lodo, foi determinada a massa de
slidos suspensos totais (gSST) presente em determinado volume de amostra (L).

MATERIAL E MTODOS - 44

Primeiramente, foram recortados papis de filtro comum de forma circular com


aproximadamente 5 cm de dimetro, enumerados e secos em microondas por 15
minutos, a 20% da potncia. Terminado este tempo, os papis foram
imediatamente pesados.
A seguir, foram filtrados 20 mL de suspenso de lodo em filtro a vcuo,
efetuando a amostragem em triplicata. Os papis contendo o lodo foram
novamente levados ao aparelho de microondas, permanecendo por 15 minutos a
20% da potncia para retirada da umidade. Aps nova pesagem foi obtida a massa
de slidos, por diferena de peso, presente nos 20 mL de amostra. Atravs de uma
simples relao para 1000 mL, foi obtida a concentrao de slidos do lodo em
gSST/L (KIELING, 2004).

RESULTADOS E DISCUSSO - 45

5 Resultados e Discusso
5.1. CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DO EFLUENTE
Abatedouros e indstrias de processamento de carnes so processos
realizados em vrios estgios onde cada etapa gera resduos com diferentes
caractersticas. Os efluentes deste tipo de indstria contm uma grande variedade
e quantidade de contaminantes, caracterizadas principalmente por uma mistura
complexa de lipdeos, substncias proticas, elevadas cargas orgnicas e alta
concentrao de slidos em suspenso. As caractersticas de todo efluente do
abatedouro variam consideravelmente com o tempo por causa da descontinuidade
do processo e so provenientes do processo de abate e dos processos de lavagem
de pisos e equipamentos.
A caracterizao do efluente proveniente do frigorfico Macedo Koerich foi
realizada de acordo com as metodologias descritas no item 4.5, cujos resultados
encontram-se descritos na Tabela 9. O efluente utilizado foi coletado no tanque de
equalizao da Estao de Tratamento de Efluentes da indstria.
O valor encontrado para o ndice de saponificao (125,24 mg KOH.g-1) se
encontra abaixo do valor obtido por Pereira (2004) (188,60 mg KOH.g-1), que
utilizou efluente da mesma indstria. Segundo Pereira (2004) o ndice de
saponificao comprova a presena de composto insaturado que de extrema
importncia no clculo da massa molecular mdia dos cidos graxos presentes no
efluente. Desta forma atravs da Equao 4.8 calculou-se a massa molecular
mdia, obtendo um valor de 434,47 g.mol-1.
A alcalinidade total representa a soma da alcalinidade advinda dos cidos
graxos volteis e dos bicarbonatos. Para resduos com pH em torno de 5.0, a
alcalinidade total constituda basicamente por sais derivados de cidos graxos
volteis (LEITE, et al., 2004), neste caso a alcalinidade foi de 73 mgCaCO3.L-1 em

RESULTADOS E DISCUSSO - 46

pH entre 6.3 6.7.


Tabela 9. Caracterizao do efluente.
Parmetros
pH

Resultados
6.5

Pereira, 2004
6.2

Incide de acidez (mg KOH .g-1)

40,4

30

Alcalinidade Total (mg CaCO3.L-1)

73,0

75,1

6720*

3930

7,1

17,4

125,24

188,6

434,47

318,3

2005*

4830

1,01

0,92

3,1

5,4

-1

DQO (mg O2.L )


-1

Amnia (mg NH4 L )


ndice de saponificao (mg KOH.g-1)
-1

Massa molecular cidos graxos (g.mol )


-1

leos e graxas (mg.L )


Massa especfica (g.mL-1)
-1

cidos graxos livres (mg cido graxo.g )


*Dado fornecido por Macedo Koerich S/A.

O ponto positivo de ter-se o tanque de equalizao em um processo de


tratamento de efluentes de indstrias deste tipo, est no fato de que este tanque
provoca uma homogeneizao e diluio do efluente. Mesmo assim, a instabilidade
do processo de industrializao modifica as caractersticas do efluente diariamente.
Comparando os resultados obtidos com os valores encontrados por Pereira (2004)
percebe-se esta variao em alguns dos parmetros analisados. Outro fator a ser
considerado que podem ter ocorrido mudanas nos processos produtivos e isso
interfere diretamente nos resduos gerados.

5.2. CARACTERIZAO DAS PROPRIEDADES CATALTICAS E FSICO-QUMICAS DAS


LIPASES
Para a concretizao deste trabalho foram utilizadas duas diferentes
amostras de lipases comerciais fornecidas por duas produtoras brasileiras, Kin
Master/RS e Nuclear/SP. Neste item foram discutidos os resultados da influncia
do pH e temperatura na atividade das lipases, frente a dois substratos (azeite de
oliva e o efluente).

5.2.1. Influncia do pH na atividade das lipases


Geralmente as enzimas so ativas numa faixa restrita de pH e na maioria
dos casos h um pH timo definido na qual sua atividade mxima. A inter-relao

RESULTADOS E DISCUSSO - 47

da atividade enzimtica com o pH, para qualquer enzima, depende do


comportamento cido-bsico e do substrato, principalmente. Mas outros fatores
que so, em geral, difceis de analisar quantitativamente tambm interferem nesta
relao, como por exemplo: concentrao de ons metlicos contaminantes,
concentrao de cofatores da enzima e natureza qumica do tampo (PEREIRA &
FURIGO, 2001).
A fim de se avaliar a influncia do pH no desempenho cataltico das lipases
(LKM e LNU) na reao de hidrlise dos substratos (azeite de oliva e o efluente),
variou-se o pH de incubao na faixa de 5.8 a 10, numa temperatura fixa de 37C,
empregando a metodologia descrita no item 4.4.2.2.
Atravs da Figura 7, pode-se observar que a lipase LNU atingiu a atividade
mxima de 3913,33 U.mg-1 em pH igual a 7.0 e a LKM apresentou um valor de pH
timo em faixas mais alcalinas, alcanando atividade mxima de 3320 U.mg-1 em
pH 8.0; utilizando como substrato o azeite de oliva.
5000
4500
4000

4000

3500

3500

-1

3000
2500
2000
1500
1000
500

Azeite de oliva - LNU

4500

Atividade (U.mg )

-1

Atividade (U.mg )

5000

Azeite de oliva - LKM

3000
2500
2000
1500
1000
500

0
6

10

pH

(a) Lipase LKM

10

pH

(b) Lipase LNU

Figura 7. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm).
Pereira (2004) trabalhou com as mesmas enzimas e alcanou atividades
mximas de 4606 U.mg-1 e 3992 U.mg-1, para a LKM e LNU, respectivamente, em
pH 8.0 para ambas. importante salientar que este autor utilizou s um tipo de
substrato, o azeite de oliva.
Na Figura 8, podemos observar o comportamento das preparaes
enzimticas, em relao ao pH, utilizando como substrato o efluente bruto. A
enzima LNU atingiu uma atividade mxima de 220 U.mg-1 em pH igual a 7.5 e a
LKM apresentou uma atividade mxima de 580 U.mg-1 em pH 7.0.

RESULTADOS E DISCUSSO - 48

700

700

Efluente bruto - LNU

600

500

500

Atividade U.mg

-1

600

-1

Atividade (U.mg )

Efluente bruto - LKM

400
300
200
100

400
300
200
100

0
5,5

6,0

6,5

7,0

7,5

8,0

8,5

0
5,5

6,0

6,5

pH

(a) Lipase LKM

7,0

7,5

8,0

8,5

pH

(b) Lipase LNU

Figura 8. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm).
Analisando a influncia de diferentes substratos sobre a atividade das
enzimas podemos verificar atravs das Figuras 7 e 8 que a enzima LNU
apresentou comportamento semelhante para os dois substratos, enquanto que a
enzima LKM apresentou um patamar entre o pH 6.5 e 8.0 quando se utilizou o
azeite de oliva como substrato. Quanto atividade, para os ensaios realizados com
o azeite de oliva como substrato, obtiveram-se valores bem superiores quando
comparados com os resultados alcanados utilizando-se o efluente como
substrato. O detalhamento dos resultados est apresentado no Apndice E.1.

5.2.2. Influncia da temperatura na atividade das lipases


A atividade cataltica das enzimas altamente dependente da temperatura,
medida que se eleva a temperatura dois efeitos ocorrem simultaneamente: a taxa
de reao aumenta e a estabilidade da protena decresce devido desativao
trmica. O efeito da temperatura sobre a atividade de uma enzima depende de
alguns fatores que incluem o pH, fora inica do meio e a presena ou ausncia de
ligantes. Geralmente os substratos protegem a enzima da desnaturao pelo calor,
processo na qual ocorre perda da atividade biolgica da enzima (PEREIRA &
FURIGO, 2001). A determinao da temperatura tima das lipases foi realizada
variando-se a temperatura de incubao de 30 a 60C em seus respectivos valores
de pH timos de atuao, empregando a metodologia descrita no item 4.4.2.3.
Na faixa estudada observa-se que as lipases LNU e LKM apresentaram
uma atividade mxima de 3913 U.mg-1 e 3320 U.mg-1, respectivamente, na

RESULTADOS E DISCUSSO - 49

temperatura de 37C, utilizando como substrato o azeite de oliva, como pode ser
visto na Figura 9. (Apndice E.2). Pereira (2004) observou uma temperatura tima
de 45C para LKM e 37C para a LNU, com atividades mximas de 4606 U.mg-1 e
3992 U.mg-1, respectivamente.
5000

5000

Azeite de oliva - LKM

Azeite de oliva - LNU

4500

4000

4000

3500

3500

-1

Atividade (U.mg )

-1

Atividade (U.mg )

4500

3000
2500
2000
1500
1000
500

3000
2500
2000
1500
1000
500

0
25

30

35

40

45

50

55

60

65

25

30

35

Temperatura (C)

40

45

50

55

60

65

Temperatura (C)

(a) Lipase LKM

(b) Lipase LNU

Figura 9. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b)
LNU (Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm).
J na Figura 10, onde temos o comportamento das lipases em relao
temperatura utilizando como substrato o efluente bruto, nota-se que a LKM
apresenta uma atividade mxima de 580 U.mg-1 em um intervalo de temperatura de
37C a 40 C; enquanto que a LNU a 45 C atingiu uma atividade mxima de 680
U.mg-1.
800

800

Efluente bruto - LKM

700

-1

-1

600

Atividade (U.mg )

600

Atividade (U.mg )

Efluente bruto - LNU

700

500
400
300
200
100

500
400
300
200
100

0
25

30

35

40

45

50

Temperatura (C)

(a) Lipase LKM

55

60

65

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Temperatura (C)

(b) Lipase LNU

Figura 10. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b)
LNU. (Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm).

RESULTADOS E DISCUSSO - 50

Verificamos atravs das Figuras 9 e 10 que a enzima LNU apresentou picos


na atividade hidroltica nos dois substratos, enquanto que a enzima LKM
apresentou um patamar na atividade dentro de uma faixa de temperatura de 37C
a 40C quando se utilizou o efluente como substrato. Os valores de atividade mais
uma vez foram superiores utilizando o azeite de oliva como substrato.
Na Tabela 10 apresentado um resumo da caracterizao das lipases LKM
e LNU. importante destacar que a utilizao de diferentes substratos interfere
sensivelmente na atividade das enzimas, assim como nos valores de pH e
temperatura timos.
Tabela 10. Caracterizao das preparaes de lipases LKM e LNU.
Lipases

Propriedades catalticas
pH timo
Temperatura tima ( C)

LKM
8.0

LNU
7.0

Efluente

7.0

7.5

Azeite de oliva

37

37

37 - 40

45

Azeite de oliva

Efluente

5.3. TRATAMENTO ANAERBIO E ENZIMTICO DO EFLUENTE


Conforme descrito no item 4.4.3 os ensaios de hidrlise e biodigesto foram
realizados simultaneamente com a variao da concentrao de enzima. Nos
tempos finais e iniciais foram retiradas amostras e quantificados: DQO, pH, cidos
graxos e glicerol.
O lodo utilizado como inculo nos ensaios de biodegradabilidade do
efluente bruto, do lodo e das concentraes 0,10% - 0,20% (p/v) da enzima LKM,
apresentou uma DQO de 4439,09 mg de O2.L-1 e um valor de 59,2 g.L-1 de slidos
suspensos totais.
Estudos relatados na literatura mostram uma grande eficincia na formao
de biogs e remoo de DQO em reatores anaerbios que operam temperatura
de 35C (HAWKES et al., 1995; GAVALA et al., 1999; LEAL et al., 2002; PEREIRA,
2004, MENDES, 2004) e, devido a esse fato, a temperatura adotada nos testes de
biodegradabilidade do presente trabalho foi de 35C.
importante salientar que nos ensaios de biodegradabilidade deste
trabalho, no foram utilizados agentes emulsificantes e/ou compostos inicos, ou
seja, nenhum tipo de suplementao foi empregado para o incremento da atividade

RESULTADOS E DISCUSSO - 51

das

lipases.

Os

resultados

graficados

nas

curvas

dos

ensaios

de

biodegradabilidade representam a mdia dos valores obtidos das duplicatas.

5.3.1. Hidrlise e biodigesto do lodo e do efluente bruto


Os ensaios realizados com o lodo e com o efluente bruto foram tomados
como controle, a fim de verificar contribuio destes na produo de metano. Os
resultados obtidos so apresentados nas Figuras 11 e 12.
A produo de metano do lodo, apresentada na Figura 11, foi de 502,8 mL.
Na Figura 12 possvel observar o comportamento do efluente bruto, que teve
uma produo de 538,4 mL de metano. A reduo na produo de metano
aconteceu a partir de 650 horas. Os ensaios com o lodo e o efluente bruto foram
encerrados em 823 horas, com uma produo quase nula de metano, mas ainda

1000

1000

800

800

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

com DOQ residual.

600
400
200
0

600

400

200

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 11. Produo de metano do lodo


(Volume de lodo - 50 mL, Agitao - 100 rpm,
35C, 33 dias).

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 12. Produo de metano do efluente


bruto (Volume de lodo - 50 mL, Volume de
efluente bruto - 250 mL, Agitao - 100 rpm,
35C, 33 dias).

A DQO do lodo e do efluente bruto no incio dos ensaios de


biodegradabilidade foi de 896,69 mg O2.L-1 e 581,81 mg O2.L-1, respectivamente.
Ao final dos testes o valor da DQO para o lodo foi de 555,57 mg O2.L-1 e de 398,13
mg O2.L-1 para o efluente bruto. Em termos de remoo de matria orgnica
atingiram-se valores de 38,04% para o lodo e 31,57% para o efluente bruto.

5.3.2. Hidrlise e biodigesto do efluente tratado com a enzima LKM


Foram testadas as concentraes de 0,10% - 0,35% (p/v) de enzima. Os
testes ocorreram a uma temperatura de 35C e sob uma agitao de 100 rpm.

RESULTADOS E DISCUSSO - 52

800

800

Volume de CH4 (mL)

1000

Volume de CH4 (mL)

1000

600
400
200

600
400
200
0

0
0

200

400

600

800

200

Figura 14. Produo de metano do efluente


tratado com 0,10% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias).

600

800

Figura 15. Produo de metano do efluente


tratado com 0,15% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias).

1000

1000

800

800

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

400

Tempo (h)

Tempo (h)

600
400
200
0

600
400
200
0

200

400

600

800

200

Tempo (h)

400

600

800

Tempo (h)

Figura 16. Produo de metano do efluente


tratado com 0,20% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 32 dias).

Figura 17. Produo de metano do efluente


tratado com 0,25% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias).
1200

1000

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

1000

800
600
400
200
0

800
600
400
200
0

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 18. Produo de metano do efluente


tratado com 0,30% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias).

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 19. Produo de metano do efluente


tratado com 0,35% (p/v) de enzima LKM
(Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias).

RESULTADOS E DISCUSSO - 53

Para a concentrao de enzima de 0,10% (p/v), o volume de metano


produzido em funo do tempo esta representado na Figura 14. Verifica-se uma
produo de 728,45 mL de CH4.
J a concentrao de enzima 0,15% (p/v) resultou na produo de um
volume de 589,2 mL de metano. Observamos, na Figura 15, que a partir de 500
horas

comeamos

ter

uma

diminuio

na

produo

de

metano

conseqentemente reduo na velocidade de biodegradao.


Na Figura 16, observa-se que com a concentrao de enzima de 0,20%
(p/v), obteve-se uma produo de 732,6 mL de metano. Esta produo comea a
diminui a partir de 640 horas, como pode ser observado na. Os ensaios com as
concentraes de 0,10%; 0,15%; 0,20% (p/v) duraram 32 dias.
A Figura 17 representa o ensaio de biodegradabilidade do efluente tratado
com uma concentrao de 0,25% (p/v) de enzima, que teve uma produo de
877,65 mL de metano, representando um aumento de 1,32 vezes do volume de
metano gerado quando comparamos com o volume produzido pelo efluente bruto
sem tratamento enzimtico.
Com a concentrao de 0,30% (p/v) de enzima foram produzidos 975,65
mL de metano, como pode se visto na Figura 18, representando um aumento de
1,47 vezes quando comparado como o volume produzido pelo efluente bruto sem
tratamento enzimtico.
Um volume de 1137,75 mL de metano foi obtido utilizando a concentrao
de enzima de 0,35% (p/v), a maior produo de todas as concentraes testadas,
como podemos observar na Figura 19, representando um aumento de 1,72 vezes
em relao ao volume de metano produzido pelo efluente bruto sem tratamento
enzimtico.
Podemos observar nas Figuras 17, 18 e 19 que uma pequena reduo na
produo de metano ocorreu entre 520 horas e 620 horas. O tempo de ensaio,
utilizando as concentraes de 0,25%; 0,30% e 0,35% (p/v) de enzima foi de 31
dias.
A partir do ensaio com a concentrao de 0,25% (p/v) de enzima, o lodo
utilizado como inculo foi substitudo por uma nova amostra, que apresentou uma
DQO de 660,53 mg de O2.L-1 e um valor de 69,78 g.L-1 de slidos suspensos totais.
Outro fator importante a ser considerado que a partir deste mesmo ensaio, o
aparato experimental utilizado foi substitudo. No incio dos testes, ou seja, at o

RESULTADOS E DISCUSSO - 54

ensaio com a concentrao de 0,20% (p/v) da enzima LKM eram utilizadas


mangueiras de ltex, que tinham um srio problema de vazamentos, estas ento
foram substitudas por mangueiras de silicone. Estas alteraes refletiram
diretamente no volume de metano produzido.

5.3.3. Hidrlise e biodigesto do efluente tratado com a enzima LNU


Da mesma forma que para a enzima LKM, para a LNU foram testadas as
concentraes de 0,10% a 0,35% (p/v) de enzima. Os testes tambm ocorreram a
uma temperatura de 35C e sob 100 rpm de agitao.
As Figuras 20, 21 e 22 representam os ensaios de biodegradabilidade
utilizando concentraes da enzima LNU de 0,10%; 0,15% e 0,20% (p/v),
respectivamente.
No ensaio com a concentrao de 0,10% (p/v) o volume de metano
produzido foi de 904 mL, como mostra a Figura 20. A maior produo de metano
obtido de todas as concentraes testadas para esta enzima foi com a
concentrao de 0,15% (p/v). A Figura 21 mostra que se alcanou um volume de
1251,95 mL de metano e representou um aumento de 1,89 vezes quando
comparado com o volume produzido pelo efluente bruto sem tratamento
enzimtico. J na Figura 22 a produo de gs metano foi de 985,95 mL, para a
concentrao de 0,20% (p/v).
O comportamento das concentraes 0,25%; 0,30% e 0,35% (p/v) esto
representadas nas Figuras 23, 24 e 25, respectivamente. Verifica-se uma produo
de 900,05 mL de gs metano para a concentrao de 0,25% (p/v) de enzima,
1110,55 mL para a concentrao de 0,30% (p/v) e 936,55 mL para a concentrao
de 0,35% (p/v).
O volume de metano produzido pelas concentraes 0,25%; 0,30% e
0,35% (p/v) de enzima representou um aumento de 1,36; 1,68 e 1,41 vezes,
respectivamente, em comparao com o volume de metano produzido pelo
efluente bruto.
Analisando as Figuras 23, 24 e 25, percebe-se que entre 500 horas e 600
horas ocorre uma reduo na produo de metano, indicando que o ensaio poderia
ter sido encerrado com 26 dias.

RESULTADOS E DISCUSSO - 55

1000

1400
1200

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

800
600
400
200
0

1000
800
600
400
200
0

200

400

600

800

200

Figura 20. Produo de metano do efluente


tratado com 0,10% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias).

800

1000

1000

800

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

600

Figura 21. Produo de metano do efluente


tratado com 0,15% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias).

1200

800
600
400
200

600
400
200
0

0
0

200

400

600

800

200

Tempo (h)

400

600

800

Tempo (h)

Figura 22. Produo de metano do efluente


tratado com 0,20% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias).

Figura 23. Produo de metano do efluente


tratado com 0,25% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias).

1200

1000

1000

800

Volume de CH4 (mL)

Volume de CH4 (mL)

400

Tempo (h)

Tempo (h)

800
600
400
200

600

400

200

0
0

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 24. Produo de metano do efluente


tratado com 0,30% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias).

200

400

600

800

Tempo (h)

Figura 25. Produo de metano do efluente


tratado com 0,35% (p/v) de enzima LNU
(Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias).

RESULTADOS E DISCUSSO - 56

O tempo dos ensaios de biodegradabilidade para as concentraes de


0,10%; 0,15% e 0,20% (p/v) de enzima foi de 34 dias, enquanto que para as
concentraes de 0,25%; 0,30% e 0,35% (p/v) de enzima foi de 29 dias. Esta
diferena aconteceu, pois se esperou que ocorresse a estabilizao da produo
de metano nas concentraes de 0,10%; 0,15% e 0,20% (p/v) de enzima.
Problemas relacionados com a precipitao da enzima LNU ocorreram
durante os ensaios de biodegradabilidade, como podemos observar na Figura 26.
Supe-se que esta precipitao pode ter influenciado negativamente a velocidade
de produo de metano nas concentraes de 0,25%, 0,30% e 0,35%.

Figura 26. Enzima LNU precipitada durante os ensaios de biodegradabilidade.


A estabilizao da produo de metano que pode ser melhor visualizada
quando se utilizou a enzima LKM, segundo Isoldi et al. (2001) pode ser explicada
pela reduo da concentrao de matria orgnica contida no efluente e pelo
decrscimo do pH do meio reacional, o que reduz a capacidade de formao de
gs metano. As arqueas metanognicas tm um crescimento timo na faixa de pH
entre 6.6 e 7.4 e as bactrias produtoras de cidos orgnicos tm um crescimento
timo na faixa de pH entre 5.0 e 6.0, mas podem se mostrar ativas mesmo para
valores de pH prximos a 4.5. Na prtica, isso significa que a produo de cidos
em um reator pode continuar livremente, apesar da produo de metano ter sido
interrompida devido aos baixos valores de pH.
A Figura 27 apresenta um resumo da produo de gs metano durante os
ensaios de biodegradabilidade.

RESULTADOS E DISCUSSO - 57

1400

Volume de CH4 (mL)

1200
1000
800
600
400
200
0

0.10% 0.15% 0.20% 0.25% 0.30% 0.35% Efluente Lodo


Concentrao da enzima LKM (p/v)

(a) Enzima LKM

1400

Volume de CH4 (mL)

1200
1000
800
600
400
200
0

0.10% 0.15% 0.20% 0.25% 0.30% 0.35% Efluente Lodo

Concentrao da enzima LNU (p/v)

(b) Enzima LNU

Figura 27. Volume de metano produzido pelas enzimas (a) LKM e (b) LNU nos
ensaios de biodegradabilidade.
Analisando a Figura 27 observamos que as duas enzimas, LKM e LNU, no
apresentaram uma variao considervel na produo de metano entre as
concentraes de enzimas testadas, ou seja, no se pode afirmar que existe uma
relao entre a concentrao de enzima e a produo de metano. A baixa
produo de metano da enzima LKM nas concentraes de 0,10%, 0,15% e 0,20%
(p/v) pode estar relacionada com o fato de que o lodo empregado como inculo
nos ensaios ter sido uma amostra diferente daquela utilizada nos demais ensaios
de biodegradabilidade.
Nos testes de biodegradabilidade anaerbia de guas residurias da
indstria de abate de frango, realizados por Pereira (2004), foram utilizadas
enzimas comerciais de fonte microbiana (Cndida rugosa - LCR) e de pncreas de
porco (LKM e LNU), no pr-tratamento (etapa de hidrlise) dessas guas
residurias, por um perodo de 12 horas, utilizando uma concentrao de 0,4%
(p/v) de enzima. O tempo dos ensaios de biodegradabilidade foi de 30 dias, a uma

RESULTADOS E DISCUSSO - 58

temperatura de 35C. A eficincia de formao de gs metano foi de 107 mL para


o efluente bruto e com o pr-tratamento enzimtico foram obtidos volumes finais de
metano de 500 29 mL, para a lipase LCR, 523 7 mL, para a lipase LKM e 510
22 mL para a lipase LNU. Os rendimentos de formao de gs metano, obtidos
para os efluentes pr-tratados enzimaticamente foram aproximadamente 5 vezes
superiores aos do efluente bruto. Esses resultados confirmam que a aplicao de
enzimas hidrolticas no pr-tratamento de guas residurias com elevados teores
de lipdeos, anterior etapa de biodegradabilidade anaerbia, importante na
remoo de compostos orgnicos presentes nessas guas.
Preparaes de lipases pancreticas de procedncia nacional (pancreatina
Kin Master LKM) e importada (pancretica Sigma, Tipo II - LPP) foram utilizadas
na hidrlise de lipdeos contidos no soro de queijo (MENDES & CASTRO, 2003).
Diferentes condies experimentais foram testadas para verificar a influncia da
concentrao do agente emulsificante, ons clcio e ajuste de pH na formao de
cidos graxos e as preparaes enzimticas utilizadas obtiveram desempenhos
bastante similares, resultando em porcentagem de hidrlise da ordem de 23%. A
lipase de procedncia nacional resultou em melhor relao custo/benefcio, por ser
trs vezes mais barata que a importada.
Os resultados obtidos nos testes de biodegradabilidade anaerbia do
efluente bruto, proveniente da indstria de produtos lcteos, e pr-tratado
enzimaticamente (hidrolisado), por Mendes (2004), que aplicou a lipase LNU no
pr-tratamento, reduziram sensivelmente a concentrao de matria orgnica em
termos de DQO. Sendo constatado para o efluente bruto uma reduo de 45%,
enquanto que para nas amostras hidrolisadas foram obtidas redues superiores a
69%, atingindo nveis mximos de 80,9%, com o efluente pr-tratado por 24 horas.
As

condies

aplicadas

ao

efluente

pr-tratado

enzimaticamente

foram

previamente estabelecidas: 5 mg.mL-1 de lipase, 10 mM de ons clcio e ajuste de


pH 8.0 com soluo alcalinizante NaOH. importante ressaltar a eficincia de
remoo de DQO da ordem de 74,4% obtida no efluente bruto no teste realizado
com as etapas de hidrlise e biodigesto simultneas. Essa eficincia foi superior
aos ensaios efetuados com efluentes pr-tratados nos tempos de hidrlise de 4 e 8
horas, isto , 69,1 e 70,9 % de remoo de DQO, respectivamente.

RESULTADOS E DISCUSSO - 59

5.3.4. Comportamento cintico dos testes de biodegradabilidade de


efluente tratado com as enzimas LKM e LNU
Para garantir que os microrganismos cresam necessidade essencial no
tratamento biolgico deve-se permitir que os mesmos permaneam no sistema o
tempo suficiente para que se reproduzam. O tempo requerido depende de sua
velocidade de crescimento, a qual relacionada diretamente com a velocidade de
metabolismo ou utilizao do substrato. Desta maneira, supondo que as condies
so controladas adequadamente, pode-se assegurar a estabilizao efetiva da
gua residuria (degradao do substrato), ao se controlar a velocidade de
crescimento dos microrganismos (CRITES & TCHOBANOGLOUS, 2000 apud
MENDONA, 2002).
A biodegradabilidade do efluente pode ser relacionada aos valores dos
parmetros cinticos, desde que as mesmas condies experimentais sejam
mantidas. Assim, quanto maior for o valor da velocidade inicial de produo de
metano, mais biodegradvel ser o substrato.
Desta forma, a Figura 28 mostra as velocidades mdias de produo de
metano dos ensaios com o lodo e com o efluente bruto. Para o lodo obteve-se uma
velocidade inicial de 3,8100 mL.h-1, este valor decai

para 0,5634 mL.h-1

bruscamente e permanece constante durante todo o ensaio. Enquanto que o


efluente bruto teve uma velocidade inicial de 0,8205 mL.h-1, diminuindo para
0,2157 mL.h-1 e permanecendo praticamente constante at o final do teste.
10

Ajuste Exponencial

8
6
4
2
0
0

200

400

Tempo (h)

(a) Lodo.

600

800

Velocidade de produo de CH (mL/h)


4

-1

Velocidade de produo de CH (mL.h )


4

10

Ajuste Exponencial

0
0

200

400

600

Tempo (h)

(b) Efluente bruto.

Figura 28. Velocidade mdia de produo de metano (a) Lodo (b) Efluente bruto.

800

-1

10

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

-1

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

RESULTADOS E DISCUSSO - 60

Ajuste Exponencial

8
6
4
2
0
0

200

400

600

800

10

Ajuste Exponencial

8
6
4
2
0
0

-1

Ajuste Exponencial

8
6
4
2
0
0

200

400

600

800

Tempo (h)

10

-1

-1

6
4
2
0
400

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

200

600

Tempo (h)

(e) 0,30% (p/v) de lipase.

Ajuste Exponencial

6
4
2
0
0

200

400

600

800

Tempo (h)

(d) 0,25% (p/v) de lipase.

Ajuste Exponencial

800

(c) 0,20% (p/v) de lipase.


10

600

(b) 0,15% (p/v) de lipase.


Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

-1

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

10

400

Tempo (h)

Tempo (h)

(a) 0,10% (p/v) de lipase.

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

200

800

10

Ajuste Exponencial

8
6
4
2
0
0

200

400

600

800

Tempo (h)

(f) 0,35% (p/v) de lipase.

Figura 29. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade utilizando


a enzima LKM.

8
6
4
2
0
0

200

400

10

Ajuste Exponencial

-1

Ajuste Exponencial

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

10

-1

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

RESULTADOS E DISCUSSO - 61

600

800

8
6
4
2
0
0

200

Tempo (h)

6
4

2
0
200

400

10

600

800

6
4

2
0
0

200

Tempo (h)

2
0
400

600

(e) 0,30% (p/v) de lipase.

10

800

Ajuste Exponencial

-1

Tempo (h)

Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

-1

Velocidade de produo de CH (mL.h )


4

200

600

(d) 0,25% (p/v) de lipase.

Ajuste Exponencial

400

Tempo (h)

(c) 0,20% (p/v) de lipase.


10

800

Ajuste Exponencial

-1

-1

Velocidade de produo de CH (mL.h )


4

Ajuste Exponencial

600

(b) 0,15% (p/v) de lipase.


Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

(a) 0,10% (p/v) de lipase.


10

400

Tempo (h)

800

6
4

2
0
0

200

400

600

800

Tempo (h)

(f) 0,35% (p/v) de lipase.

Figura 30. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade


utilizando a enzima LNU.

RESULTADOS E DISCUSSO - 62

Analisando a Tabela 11 e as Figuras 29 e 30 podem-se perceber fases


distintas no perfil cintico de produo de metano. Durante as primeiras 100 horas,
nota-se que a velocidade de produo de metano nos ensaios com tratamento
enzimtico nitidamente superior, comparada ao ensaio onde utilizado apenas o
efluente bruto. A velocidade inicial de produo de metano chega a ser em mdia 5
vezes superior que a velocidade utilizando-se somente efluente bruto. Tambm se
observa que no decorrer das primeiras 100 horas do experimento, a velocidade de
biodegradao decresce exponencialmente, indicando que a enzima est sofrendo
um processo inibitrio ou perdendo atividade. Aps este perodo, a velocidade de
produo de metano praticamente constante e da mesma ordem de grandeza da
velocidade observada para o efluente bruto, sugerindo que a enzima no est mais
atuando.
Tabela 11. Velocidades iniciais de produo de metano.
Concentrao de lipase (p/v)
0,10%

Velocidades iniciais de produo de metano (mL.h-1)


LKM
LNU
0,7789
5,3152

0,15%

1,4292

6,3522

0,20%

1,2817

6,7218

0,25%

6,0005

7,6600

0,30%

7,1130

8,1296

0,35%

6,6982

6,4649

Mais uma vez podemos perceber o quanto o lodo utilizado como inculo
interfere na degradao do substrato, quando trocamos de inculo a produo de
metano aumentou e conseqentemente as velocidades de degradao do
substrato tambm aumentaram.

5.3.5. Anlises para avaliar o efeito do tratamento enzimtico


No inicio e no final dos testes de biodegradabilidade foram realizadas
medidas de pH e analisados cidos graxos livres, glicerol e DQO, a fim de avaliar o
tratamento anaerbio e enzimtico.

5.3.5.1 pH
Na Tabela 12 podemos acompanhar a variao do pH entre o incio e o fim
dos testes de biodegradabilidade. Analisando os dados do pH, constata-se que os

RESULTADOS E DISCUSSO - 63

resduos apresentaram valores de pH variando de 6.8 a 7.6 quanto tratados com


as enzima LKM e LNU, ou seja, no houve uma considervel alterao se
comparamos com o valor do pH do efluente bruto que esteve entre 6.9 e 7.4.
A metanognese extremamente sensvel s variaes do pH. Assim, para
garantir a presena satisfatria de bactrias metanognicas, esse parmetro deve
ser mantido entre um mnimo de 6.0 e um mximo de 8.0. Extrapolando esses
limites do pH, formam-se compostos que se mostram txicos para as bactrias
formadoras do gs metano. importante salientar que neste trabalho no foi
adotada nenhuma medida para correo do pH.
Obladen e Aisse (1983 apud CETESB, 2003) afirmam que o pH timo para
a fermentao metnica est entre 7.0 e 8.0, mas as metanobactrias no so
prejudicadas se o pH diminui para 6.0. O valor do pH pode cair quando: inicia-se o
processo; houver a afluncia de cargas de choque; houver flutuao de
temperatura ou houver a presena de materiais inibidores. Em certas condies
pode-se tornar conveniente a adio de lcalis ou bicarbonato de sdio para ajuste
de pH, pois se o biodigestor ficar sobrecarregado, haver formao de cidos em
excesso e o pH baixar.
Tabela 12. Medidas de pH.
pH
Concentrao de lipase (p/v)

LKM
30 Dias
7.21

0 Dia
7.69

LNU
30 Dias
6.96

0,10%

0 Dia
7.29

0,15%

7.55

7.27

7.55

6.96

0,20%

7.44

7.14

6.90

7.01

0,25%

7.60

7.35

6.97

7.27

0,30%

7.40

7.45

6.92

7.34

0,35%

6.89

7.48

6.91

7.38

Lodo

0 Dia
8.20

30 Dias
8.35

Efluente bruto

6.97

7.49

Pereira (2004) estudou os efeitos provocados pelo ajuste de pH na etapa


de hidrlise utilizando a enzima LKM. Atravs de anlises estatsticas o autor
concluiu que o ajuste do pH do meio adicionando bicarbonato de sdio teve um
efeito negativo, mas o contrrio ocorreu quando se utilizou uma soluo de

RESULTADOS E DISCUSSO - 64

hidrxido de sdio, sugerindo uma influncia marcante na hidrlise do efluente pela


ao da LKM do tipo de soluo alcalinizante usada para o ajuste do pH do meio
reacional. Nessas condies, o autor conseguiu uma reduo de teor total de
gordura da ordem de 57,14%.

5.3.5.2 cidos graxos livres e glicerol


O comportamento da concentrao de cidos graxos livres e as
velocidades de formao de metano so mostrados na Figura 31 e detalhados no

-1

cidos graxos (mg.g )


-1
Velocidade de produo de CH4 (mL.h )

Apndice F.1.
9

-1

cidos graxos livres (mg cidos graxos.g ) - LNU


-1
Velocidade final de gerao de CH4 (mL.h ) - LNU

8
7
6
5
4
3
2
1
0

0,10%

0,15%

0,20%

0,25%

0,30%

0,35%

-1

cidos graxos (mg.g )


-1
Velocidade produo de CH4 (mL.h )

Concentrao de Enzima (p/v)


8

(a) Enzima LNU


-1

cidos graxos livres (mg cidos graxos.g ) - LKM


-1
Velocidade final de gerao de CH4 (mL.h ) - LKM

7
6
5
4
3
2
1
0

0,10%

0,15%

0,20%

0,25%

0,30%

Concentrao de Enzima (p/v)

0,35%

(b) Enzima LKM

Figura 31. Concentrao de cidos graxos livres ao final dos ensaios de


biodegradabilidade e velocidade final de gerao de metano para as lipases LNU
(a) e LKM (b).
Analisando a Figura 31 podemos dizer que a concentrao de cidos
graxos livres praticamente constante ao final dos experimentos e independe da

RESULTADOS E DISCUSSO - 65

concentrao de enzima. Como no final dos ensaios de biodegradabilidade ainda


h gerao de metano, indicando consumo de cidos, tambm deve haver a
gerao destes cidos, a velocidades semelhantes. Assim, conclui-se que a
concentrao de enzima no interfere na velocidade de formao dos cidos
graxos livres.
Os resultados obtidos com relao quantidade de glicerol so
apresentados na Figura 32 e detalhados no Apndice F.2.
0,40

antes de comear os ensaios de biodigesto - LNU


final dos ensaios de biodigesto - LNU

0,35

% Glicerol (g/g)

0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00

0,10%

0,15%

0,20%

0,25%

0,30%

0,35%

Concentrao de enzima (p/v)

0,40

(a) Enzima LNU

antes de comear os ensaios de biodigesto - LKM


final dos ensaios de biodigesto - LKM

0,35

% Glicerol (g/g)

0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00

0,10%

0,15%

0,20%

0,25%

0,30%

Concentrao de enzima (p/v)

0,35%

(b) Enzima LKM

Figura 32. Quantidade de glicerol antes do inicio e ao final dos ensaios de


biodegradabilidade para as lipases LNU (a) e LKM (b).
O acmulo de glicerol, apesar de o glicerol estar sendo consumido, indica
que a hidrlise est sendo realizada. A velocidade de consumo do glicerol inferior
a sua velocidade de gerao e isso faz com que haja o acmulo de glicerol.

RESULTADOS E DISCUSSO - 66

Sabemos que a reao de hidrlise de leos e gorduras gera trs


molculas de cidos graxos e uma molcula de glicerol. Atravs dos resultados
obtidos podemos dizer que os cidos graxos so consumidos mais facilmente que
o glicerol.

5.3.5.3 DQO
O principal parmetro para avaliar se um tratamento foi eficiente ou no a
eficincia da remoo de matria orgnica, que neste trabalho foi quantificada em
termos de DQO. Para os testes realizados com o lodo e o efluente bruto, obteve-se
uma remoo de 38,04% e 31,57%, respectivamente. Podemos observar, atravs
dos resultados apresentados na Tabela 13, que o uso de enzimas no tratamento
de efluentes com altos teores de lipdios bastante eficiente em termos de
remoo de DQO (Apndice F.3).
Tabela 13. Eficincia de remoo de DQO.
Concentrao de lipase (p/v)
0,10%

Eficincia de remoo de DQO (%)


LKM
LNU
59,96
88,46

0,15%

79,55

91,92

0,20%

61,33

88,16

0,25%

69,66

88,67

0,30%

82,65

92,03

0,35%

83,21

95,02

Lodo

38,04

Efluente bruto

31,57

A lipase LKM apresentou um aumento em mdia de 2,3 vezes na remoo


de DQO, enquanto que com a enzima LNU obteve-se um aumento de 2,86 vezes,
quando comparado com a remoo obtida no ensaio como o efluente bruto. Esta
maior eficincia da enzima LNU pode ser evidenciada tambm pelos altos volumes
de metano produzido durante os testes de biodegradabilidade.

5.4 CONSIDERAES FINAIS


Neste trabalho no foi utilizado nenhum tipo de suplementao de agentes
emulsificantes ou de compostos inicos para o incremento da atividade das lipases
LKM e LNU, e as etapas de hidrlise e biodigesto foram realizadas

RESULTADOS E DISCUSSO - 67

simultaneamente.
Esta nova forma de implementar o tratamento enzimtico em efluentes com
elevados teores de gordura faz com que este tipo de tratamento em escala
industrial seja menos dispendioso.
O fato de que as enzimas utilizadas apresentam grau de pureza limitado e
de ambas serem produzidas por empresas nacionais torna o processo ainda mais
atraente.
A produo de biogs realizando as etapas de hidrlise e biodigesto foi
superior quando comparada com os trabalhos realizados por Pereira (2004), que
obteve de 523 mL 7 mL para a LKM e 510 mL 22 mL para a LNU de metano,
utilizando uma concentrao de 0,4% (p/v) de enzima. Em outro trabalho, Mendes
(2004), conseguiu um volume de 445 mL 29 mL de metano para uma hidrlise de
12 horas e 437 mL de metano para uma hidrlise de 24 horas. importante
salientar que estes autores realizaram as etapas de hidrlise e biodigesto de
maneira seqencial. O aproveitamento deste biogs como insumo energtico
uma opo para uma reduo de custos.

CONCLUSO - 68

6 Concluso
O objetivo principal deste trabalho foi estudar remoo de gorduras dos
resduos gerados por indstrias avcolas utilizando lipases pancreticas em
diferentes concentraes. Da anlise e discusso dos resultados obtidos pode-se
concluir que:

O substrato interfere nas propriedades catalticas das lipases. Quando


utilizado o azeite de oliva como substrato, a atividade mxima da enzima
est acima de 3000 U.mg-1 (3320 U.mg-1 para a lipase LKM e 3913 U.mg-1
para a lipase LNU). Quando se utiliza o efluente bruto da indstria avcola
como substrato, a atividade mxima da enzima cai para valores abaixo de
700 U.mg-1 (680 U.mg-1 para a lipase LNU e 580 U.mg-1 para a lipase LKM),
indicando que o efluente exerce algum tipo de inibio na reao
enzimtica.

Quando se utiliza o azeite de oliva como substrato, a temperatura que


maximiza a atividade da enzima em torno de 37C, para as duas enzimas
estudadas (LKM e LNU). Utilizando o efluente bruto como substrato, a
temperatura tima para a atividade a mesma para a enzima LKM,
enquanto que para a enzima LNU o valor foi deslocado para 45C. Na faixa
de pH entre 7.0 e 8.0 a atividade das lipases, LKM e LNU, maximizada.

realizao

dos

ensaios

de

biodegradabilidade

hidrlise

simultaneamente foi possvel. Analisando os resultados em termos de


produo de metano, podemos dizer que a lipase LNU teve uma produo
ligeiramente maior, com um volume de 1252 mL de metano, enquanto que
a lipase LKM apresentou um volume mximo 1138 mL de metano. Os
volumes encontrados foram superiores aos volumes encontrados nos

CONCLUSO - 69

trabalhos da literatura que realizaram o tratamento de guas residurias


com elevados teores de gordura de maneira seqencial, ou seja, primeiro a
hidrlise enzimtica das gorduras seguida de um tratamento anaerbio.

Em relao ao comportamento cintico dos ensaios de biodegradabilidade


as lipases LKM e LNU tiveram um perfil parecido, com velocidades iniciais
maiores, e a partir de certo tempo de ensaio estas velocidades ficaram
constantes at o final do experimento. As velocidades constantes foram
verificadas na maior parte dos experimentos, variando de 0,11 mL.h-1 a 1,4
mL.h-1.

Maiores eficincias de remoo de matria orgnica foram observadas


quando se utilizou a enzima LNU, alcanando um valor mximo de 95%
enquanto que a LKM obteve uma remoo mxima de 83%. As lipases
LKM e LNU apresentaram um aumento em mdia de 2,3 e 2,86 vezes,
respectivamente, na remoo de DQO quando comparado com a remoo
obtida no ensaio com o efluente bruto sem tratamento enzimtico, que foi
de 32%.

A concentrao de cidos graxos livres no final dos ensaios de


biodegradabilidade foi praticamente constante, em mdia 4,8 g cidos
graxos/g amostra, para as duas lipases. Houve um acmulo na quantidade
de glicerol, indicando que a hidrlise estava acontecendo e que velocidade
de consumo de glicerol menor que a velocidade de consumo dos cidos
graxos para a formao do metano.

Dentro da faixa estudada de concentraes de enzimas (0,10% p/v a 0,35%


p/v), no foi possvel observar variao consistente da velocidade de
biodegradao, indicando que a concentrao de enzima no interfere
significativamente na velocidade de remoo da matria orgnica. Essa
informao interessante, pois pode-se seguir os estudos diminuindo a
concentrao de enzimas, promovendo a reduo do custo do processo.

SUGESTES - 70

7 Sugestes
Para dar continuidade aos estudos que envolvem o tratamento enzimtico e
anaerbio de efluentes com elevados teores de gordura provenientes da indstria
frigorfica avcola, sugere-se:

Testar concentraes menores de enzimas, a fim de verificar qual a


concentrao de enzima que ir interferir de maneira negativa no
tratamento anaerbio deste tipo de gua residuria;

Realizar um estudo para verificar qual a substncia que est diminuindo a


atividade da enzima quando se utiliza o efluente como substrato;

Testar enzimas imobilizadas;

Acompanhar a cintica de biodegradao, atravs da retirada e anlise de


amostras e adio de enzima ao longo dos ensaios de biodegradabilidade,
a fim de estudar a possibilidade de reduo do tempo de tratamento deste
tipo de gua residuria.

Estudar a possibilidade de desenvolver em laboratrio um lodo em


condies padro, com a finalidade de aperfeioar o tratamento anaerbio.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 71

8 Referncias Bibliogrficas
AITKEN, M. D. (1993). Waste treatment applications of enzymes: Opportunities and
obstacles. The Chemical Engineering Journal, v.52, p. 49-58.
AMANTE, E.R.; CASTILHO JR, A.B.; KANZAWA, A.; ENSSLIN, L.; MURAKI, M.
(1999). Um panorama da tecnologia limpa na indstria de frangos. Sociedade
Brasileira de Cincia e Tecnologia de Alimentos, SBCTA, v. 33, n. 1, p. 16-21.
APHA; AWWA; WPCF. (1995). Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater, 19th edition, New York.
AVISITE. 2005: ano de avaliao da maturidade do setor. 2005. Disponvel em
www.avisite.com.br/economia/default.asp. Acesso em: 10/11/2005.
BATISTA, L.F. (1981). Manual Tcnico Construo e Operao de Biodigestores.
Empresa Brasileira de Assistncia Tcnica e Extenso Rural, Braslia, CDU 620.97
(20). 54 p.
BON, E. P. S. & PEREIRA JR., N. (1999). Tecnologia Enzimtica, Editado pelo
Enzitec. 113p.
CAIL, R. G.; BARFORD, J. P.; LICHACZ, R. (1986). Anaerobic digestion of wool
scouring wastewater in a digester operated semi-continuously for biomass
retention. Agricultural Wastes, v.18, n.1, p.27-38.
CAMMAROTA, M. C.; TEIXEIRA, G. A.; FREIRE, D. M. G. (2001). Enzymatic
prehydrolysis and anaerobic degradation of wastewaters with high fat contents.
Biotechnology Letters, v. 23, p. 1591-1595.
CARVALHO, P. O.; CAMPOS, P. R. B.; DADDIO NOFFS, M.; OLIVEIRA, J. G.;
SHIMIZU, M. T.; SILVA, D. M. (2003). Aplicao de lipases microbianas na
obteno de concentrados de cidos graxos poliinsaturados. Qumica Nova, v. 26,
n. 1, p. 75-80.
CASTRO, H.F.; MENDES, A.A.; SANTOS, J.C.; AGUIAR, C.L. (2004). Modificao
de leos e gorduras por biotransformao. Qumica Nova, v. 27, n. 1, p. 146-156.
CETESB (2003). Companhia de Tecnologia e Saneamento Ambiental & SMA-SP

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 72

Secretaria do Meio Ambiente do Estado de So Paulo. Relatrio tcnico n. 2 do


convnio SMA/MCT n. 01.0053.00/2001 Efluentes. Disponvel em
www.mct.gov.br/CLIMA/brasil/pdf/Efluente_preliminar.pdf. Acesso em: 20/11/2005.
CHAMPE, P. C. & HARVEY, R. A. (1997). Bioqumica ilustrada, 2ed. Artes
Mdicas, Porto Alegre. p. 53-92 e p. 177-192.
CHERNICHARO, C.A.L. (1997). Princpios do Tratamento Biolgico de guas
Residurias, Reatores Anaerbios. Belo Horizonte. SEGRAC. 246p.
COKS, L. V. & VAN REDE, C. (1966). In: Laboratory handbook for oils and fats
analysis, 1st ed., Academy Press, London.
CRITES, R. & TCHOBANOGLOUS, G. (2000). Tratamiento de guas residuales
em pequeas poblaciones. McGraw-Hill, 776p., Bogot, Colmbia.
DUEHOLM, T.E.; ANDREASEN, K.H.; NIELSEN, P.H. (2001). Transformation of
lipids in activate sludge. Water Science and Technology, v. 73, n. 1, p. 165-172.
FABER, K. (2000). Biotransformations in Organic Chemistry. Springer -Verlag, New
York.
GANDHI, N. N. (1997). Applications of lipases. Journal of the American Oil
Chemists Society, v.74, n.6, p. 621-634.
GAVALA, H.N.; KOPSINIS, H.; SKIADAS, I.V.; STAMATELATOU, K.;
LYBERATOS, G. (1999). Treatment of dairy wastewater using na upflow anaerobic
sludge blanket reactor. Journal of Agricultural Engineering Research, v. 73, p. 5963.
GLAZER, A.N. & NIKAIDO, H. (1995). Environmental applications. In: Microbial
Biotechnology. Eds. W. H. Freeman & Co. N. York, p. 561-620.
GROSS, R. (1996). Hidrlise enzimtica de gorduras de origem animal.
Dissertao de Mestrado, UFSC, Florianpolis, SC, 63p.
HANAKI, K.; MATSUO, T.; NAGASE, M. (1981). Mechanism of inhibition caused by
long chain fatty acids in anaerobic digestion process. Biotechnology and
Bioengineering, v. 23, p.1591-1610.
HARALDSSON, G. G. (1991). The applications of lipases for modification of fats
and oils, including marine oils. Marine Lipids Biotechnology, cap. 7, p. 337-352.
HAWKES, F.R.; DONNELY, T.; ANDERSON, G.K. (1995). Comparative
performance of anaerobic digesters operating on ice-cream wastewater. Water
Research, v. 29, n. 2, p. 525-533.
HIRATA, Y. S. (1999). Coleta, preservao e caracterizao de efluentes. In: IV
Curso de Tratamento Biolgico de Resduos. Florianpolis/SC. CBAB, MCT/ CNPq,
CPGENQ/UFSC, CDB.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 73

HORWITZ, W., (ed) (1980).Methods of Analysis of the Association of Official


Analytical Chemists, 13 th edn., Association of Official Analytical Chemists, p. 504508, 519-520.
HU, W.C.; THAYANITHY, J.B.; FOSTER, C.F. (2002). A kinetic study of the
anaerobic digestion of ice-cream wastewater. Process Biochemistry, v.37, p.965971.
HWU, C. S.; TSENG, S. K.; YUAN, C. Y.; KULIK, Z.; LETTINGA, G. (1998).
Biosorption of long-chain fatty acids in UASB treatment process. Water Research,
v. 32, n. 5, p.1571-1579.
ICEPA. Agroindicador Indicadores para a agricultura Catarinense. 2005.
Disponvel em www.icepa.com.br. Acesso em: 28/11/2005.
ISOLDI, L. A.; KOETZ, P. R.; FARIA, O. L. V.; ISOLDI, L. A. (2001). Parmetros de
operao do reator UASB em um sistema combinado reator UASB - reator aerbio.
Revista Eletrnica do Mestrado em Engenharia Ambiental, v. 6, p. 16-30.
JAEGER, K. E. & REETZ, M. T. (1998). Microbial lipases form versatile for
biotechnology. Trends in Biotechnology, v.16, n.9, p.396-403.
JAEGER, K.E; RANSAC, S.; DIJKSTRA, B. W.; COLSON, C.; HEUVELM, M. O.
(1994). Bacterial lipases. FEMS Microbiology Reviews, v.15, p. 29-63.
JUNG, J.; XING, X.H.; MATSUMOTO, K. (2002). Recoverability of protease
released from disrupted excess sludge and its potential application to enhanced
hydrolysis of proteins in wastewater. Biochemical Engineering Journal, v. 10, n. 1,
p. 67-72.
KATZ, L.; MARCIN, C.; ZITANO, L. et al., (1993). Screening and selection of a
microbial lipase for the stereospecific hydrolysis of Verlukast. Journal Ind. Microbial,
v. 11, p. 89-94.
KIELING, D.D. (2004). Estudo da remoo biolgica de nitrognio a partir de lodo
nitrificante cultivado em meio autotrfico sob condies anxicas. Dissertao de
Mestrado, UFSC, Florianpolis, SC, 106p.
KOMATSU, T.; HANAKI, K.; MATSUO, T. (1991). Prevention of lipid inhibition in
anaerobic process by introducing a two-phase system. Water Science and
Technology, v. 23, p.1189-1200.
LEAL, M. C. M. R.; CAMMAROTA, M. C.; FREIRE, D. M. G.; SANTANNA JR., G.
L. (2002). Hydrolytic enzymes as coadjuvants in the anaerobic treatment of dairy
wastewater. Brazilian Journal of Chemical Engineering, v.19, n.2, p.175-180.
LEAL, M.C.M.R. (2000). Utilizao de enzimas hidrolticas no tratamento de
resduos da indstria de laticnios. Dissertao de Mestrado, Universidade Federal
do Rio de Janeiro, COOPE/UFRJ, Rio de Janeiro, RJ, Brasil. 111p.
LEE, K.T. & FOGLIA, T.A. (2000). Fractionation of chicken fat triacylglycerois:

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 74

synthesis of structured lipids whit immobilized lipases. Journal of Food Science, v.


65, n. 5, p. 826-831.
LEITE, V.D.; LOPES, W.S.; SOUSA, J.T.; PRASAD, S. (2004). Tratamento
anaerbio de resduos orgnicos com baixa concentrao de slidos. Nota
Tcnica, v. 9, n. 4, p. 280-284.
LEMA, J. M.; MNDEZ, R.; IZA, J.; POLANCO, F. (1991). Chemical reactor
engineering concepts in design and operation of anaerobic treatment processes.
Water Science and Technology, v. 24, n. 8, p.79-86.
LIE, E.; MOLIN, G. (1991). Conversion of low grade fats by biological means. In:
Martin, A. M. (Ed.) Bioconversion of waste materials to industrial products. Elsevier
Applied Science, New York, 401-416.
MACDO, G.A. (1997). Sntese de steres de aroma por lipases microbianas em
meio livre de solvente orgnico. Tese Doutorado. Universidade Estadual de
Campinas. Faculdade de Engenharia de Alimentos - Universidade Estadual de
Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos, So Paulo, SP, Brasil. 143p.
MACRAE, A. R. & HAMMOND, R. C. (1985). Present and future applications of
lipases, Review. Biotechnology and Genetic Engineering, v. 3, n. 9, p. 193-217.
MASSE, L.; KENNED, K. J.; CHOU, S. (2001). Testing of alkaline and enzymatic
pretreatment for fat particles in slaughterhouses wastewater. Bioresource
Technology, v. 77, n. 2, p.145-155.
MENDES, A.A. (2004). Avaliao da biodegradabilidade de efluentes com alto teor
de lipdeos previamente tratados com enzimas hidrolticas. Dissertao de
Mestrado, Faculdade de Engenharia Qumica de Lorena, FAENQUIL, Lorena, SP,
Brasil. 135p.
MENDES, A.A. & CASTRO, H.F. (2003). Biotratamento para reduo de teor de
lipdeos em efluentes das indstrias de produtos lcteos. In: Anais do XIV Simpsio
Nacional de Fermentaes - SINAFERM, Florianpolis, SC.
MENDES, A.A.; CASTRO, H.F.; PEREIRA, E.B.; FURIGO JR, A. (2005). Aplicao
de lipases no tratamento de guas residurias com elevados teores de lipdeos.
Qumica Nova, v. 28, n. 2, p. 296-305.
MENDONA, L.C. (2002). Microbiologia e cintica de lodos ativados como ps
tratamento de efluente de reator anaerbio de leito expandido. Tese de Doutorado,
Escola de Engenharia de So Carlos, Universidade de So Paulo, So Carlos, SP,
219p.
MONGKOLTHANARUK, W. & DHARMISTHITI, S. (2002). Biodegradation of lipidrich wastewater by a mixed bacterial consortium. International Biodeterioration &
Biodegradation, v. 50, p. 101-105.
MORAES, L.M. (2000). Avaliao da biodegradabilidade anaerbia de dejetos
oriundos de atividades zootcnicas. Dissertao Mestrado. Universidade Estadual

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 75

de Campinas, Faculdade de Engenharia Agrcola. Campinas, SP, 112p.


MORETTO, E. & FETT, R. (1998) Tecnologia de leos e gorduras vegetais na
industria de alimentos. So Paulo Varela 153p. ISBN 858551941X : (broch.)
MOZAFFAR, Z.; WEETE, J. D.; DUTE, R. (1994). Influence of surfactants on an
extracellular lipase from pythium-ultimum. Journal of the American Oil Chemists
Society, v. 71, n. 1, p. 75-79.
NASCIMENTO, M.G.; DALLA-VECCHIA, R.; SOLDI, V. (2004). Aplicaes
sintticas de lipases imobilizadas em polmeros. Qumica Nova, v. 27, n. 4, p. 623630.
NASCIMENTO, V. P., SALLE, C. T. P., MORAES, H. L.S., FALLAVENA, C.B.,
CANAL, C.W., SANTOS, L.R., RODRIGUES, L.B., LEO, J. A, PILOTTO, F.,
NEVES, N., NASCIMENTO, L.P. (2000). Qualidade microbiolgica e prevalncia de
Salmonella no processo de tratamento de efluentes de abatedouros avcolas.
Simpsio sobre resduos da produo avcola, Concrdia, SC. Anais. Concrdia:
Embrapa Sunos e Aves, 74 p.
NOVOZYMES LATIN AMERICA LTDA. Mercado mundial de enzimas. [mensagem
pessoal]. Mensagem recebida por < adrg@novozymes.com > 29/12/05.
OBLADEN N.L. & AISSE M.M. (1983). A energia das Biomassas Biodigesto.
12 Congresso Brasileiro de Engenharia Sanitria e Ambiental. Balnerio
Camboriu/SC.
OLIVEIRA, C.; MULLER, F.; SEGATO, M. Aplicaes de enzimas em produtos de
limpeza.
2004.
Disponvel
em
www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_grad2004/detergentes/enzi
mas_produtos_limpeza.htm. Acesso em: 25/10/2005.
PAQUES, F.W. & MACEDO, G.A. (2006). Lipases de ltex vegetais: propriedades
e aplicaes industriais. Qumica. Nova, v. 29, n.1, p. 93-99.
PEREIRA, E. B.; DE CASTRO, H. F.; FURIGO JR, A. (2003). Hidrlise enzimtica
do efluente proveniente de frigorfico avcola empregando lipase de Candida
rugosa. In: Anais do XIV Simpsio Nacional de Fermentaes - SINAFERM,
Florianpolis, SC.
PEREIRA, E.B. (1999). Lipase livre e imobilizada em quitosana: Caracterizao e
potencial de aplicao em reaes de hidrlise e sntese. Dissertao de Mestrado,
Universidade Estadual de Maring, 128p.
PEREIRA, E.B., FURIGO, A.JR. Cintica enzimtica. 2001. Disponvel em
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq.htm. Acesso em: 30/07/2005.
PEREIRA, E.B. (2004). Tratamento enzimtico para remoo de gorduras dos
resduos gerados por indstrias de produtos avcolas. Tese de Doutorado,
Universidade Federal de Santa Catarina, UFSC, Florianpolis, SC, Brasil. 154p.
PETRUY, R. & LETTINGA, G. (1997). Digestion of a milk-fat emulsion. Bioresource

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 76

Technology, v. 61, p. 141-149.


QUMNUER, M. & MARTY, Y. (1994). Fatty acids and sterols in domestic
wastewater. Water Research, v.28, p.1217-1226.
RIBEIRO, D.F. (1995). Influncia do manejo de pr-abate e das operaes de
abate na qualidade e rendimento das carcaas. Revista Nacional da Carne, So
Paulo, v. 19, n. 223, p. 38-46.
ROBLES, A.; LUCAS, R.; CIENFUEGOS, R.; GLVEZ, A. (2000). Biomass
production and detoxification of wastewater from the olive industry by strains of
Penicillium isolated from wastewater disposal ponds. Bioresource Technology, v.
74, p. 217-221.
SALMINEN, E. & RINTALA, J. (2002). Anaerobic digestion of organic solid poultry
slaughterhouse waste - A review. Bioresource Technology, v.83, p. 13-26.
SANTANA, F.B (2002). Tratamento anaerbio de guas residurias da indstria de
couro. Dissertao de Mestrado, Universidade Federal de Santa Catarina, UFSC,
Florianpolis, SC, Brasil, 102p.
SANTOS, R. (2003). Imobilizao de lipases em gel de Pectina. Dissertao de
Mestrado, Universidade Federal de Santa Catarina, Universidade Regional de
Blumenau, UFSC/FURB, Florianpolis/Blumenau, SC, Brasil, 77p.
SANTOS,
T.M.
Lipdeos.
2005.
Disponvel
http://geocities.yahoo.com.br/anutrio/lipidios.htm. Acesso em: 8/10/2005.

em

SAXENA, R. K.; SHEORAN, A.; GIRI, B.; DAVIDSON, W. S. (2003). Purification


strategies for microbial. Journal of Microbiological Methods, v. 52, p. 1-18.
SAXENA, R.K.; GHOSH, P.K.; GUPTA, R. et al., (1999). Microbial lipases: potential
biocatalysts for the future industry. Current Science, v. 77, p. 101-115.
SCARASSATI, D.; CARVALHO, R.F.; DELGADO, V.L.; CONEGLIAN, C.M.R.;
BRITO, N.N.; TONSO, S.; SOBRINHO, G.D.; PELEGRINI, R. (2003). Tratamento
de efluentes de matadouros e frigorficos. III Frum de estudos contbeis.
Unicamp, Campinas, SP, Brasil.
SCRIBAN, R. (1985). Biotecnologia. Editora Malone Ltda., So Paulo, Brasil, 489p.
SHAHANI, K. M. (1975). Lipases and Esterases, In: REED, Gerald (Ed), Enzymes
in Food Processing, 2 ed., New York: Academic Press, p. 182-214.
SHARMA, R.; CHISTI, Y.; BANERJEE, U.C. (2001). Production, purification,
characterization and applications of lipases. Biotechnology advances, v.19, p. 627662.
SINGHAL, R. S. & KULKARNI, P. R. (1990). Effect of puffing on oil characteristics
of Anaranth (Rajgeera) seeds. Journal of the American Oil Chemists Society, v.67,
n. 12, p. 952-954.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 77

SOARES, H. M. & HIRATA, Y. S. (1999). Prticas de laboratrio. In: IV Curso de


Tratamento Biolgico de Resduos. Florianpolis/SC. CBAB, MCT/ CNPq,
CPGENQ/UFSC, CDB, 23p.
SOARES, H. M. & ZAIAT, M. (2005). Processos anaerbios de tratamento de
matria orgnica. In: V Curso de Tratamento Biolgico de Resduos.
Florianpolis/SC. Projeto PROSUL/CNPq UFSC/UDELAR/UNLP, cap. V.2, 37p.
SPEECE, R.E. (1996). Anaerobic biotechnology for industrial wastewater. Archae
Press, 396p.
SROKA, A.; KAMINSKI, W.; BOHDZIEWICZ, J. (2004). Biological treatment of
meat industry wastewater. Desalination 162, p. 85-91.
SWITZENBAUM, M.S. (1995). Obstacles in the implementation of anaerobic
treatment technology. Bioresource Technology, v. 3, n. 3, 255p.
TATARA, T.; FUJI, T.; KAWASE, T. et al., (1985). Studies applications of lipolytic
enzymes in detergency. II Evaluation adaptability of various kinds of lipases in
pratical laundry conditions. Journal of the American Oil Chemists Society, v.62, p.
1053-1058.
TEIXEIRA, G. A. (2001). Tratamento seqencial de efluentes da indstria de
laticnios: Hidrlise de gorduras e tratamento biolgico. Dissertao de Mestrado,
COOPE/ UFRJ, Rio de Janeiro, RJ, 106p.
VAZOLLER, R.F. Diversidade microbiana e desenvolvimento sustentvel.
Microbiologia e Saneamento ambiental. In: Biodiversidade: perceptivas e
oportunidades
tecnolgicas.
1996.
Disponvel
em
http://www.bdt.fat.org.br/publicaoes/padct/bio/cap9/3. Acesso em: 26/09/2005.
VEERARAGAVAN, K. (1990). A simple and sensitive method for the estimation of
microbial lipase activity. Analytical Biochemistry, v. 186, p. 301-305.
VICENZI, R. (2004). Biotecnologia de Alimentos. Universidade Regional do
Noroeste
do
Estado
do
RS,
UNIJUI,
101p.
Disponvel
em
www.sinprors.org.br/paginasPessoais/arquivos/Prof_394/APOSTILA%20BIOTECN
OLOGIA%20DE%20ALIMENTOS.pdf. Acesso em: 30/08/2005.
VIEIRA, S.M.M. & SOUZA, M. E. (1981). Mtodos analticos para o
acompanhamento da biodigesto. CETESB Superintendncia de Pesquisa, v. III.
VOGEL, A.I. (1981). Anlise Inorgnica Quantitativa. 4 edio, Editora Guanabara.
Rio de Janeiro, RJ.
VULFSON, E.N. (1994). Industrial applications of lipases. In: Woolley, P.; Petersen,
S.B. (eds) Lipase: Their Structure, Biochemistry and Application, Cambridge
University Press, Great Britain, p. 271-288.
WENG, C. -N. & JERIS, J. S. (1976). Biochemical mechanisms in the methane
fermentation of glutamic and oleic acids. Water Research, v. 10, p. 9-18.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 78

ZANOTTO, S.P. (2003). Utilizao de enzimas e microrganismos para a obteno


de compostos oticamente ativos. Tese de Doutorado, Universidade Federal de
Santa Catarina, UFSC, Florianpolis, SC, Brasil. 123p.

APNDICES - 79

Apndices
APNDICE A - CARACTERSTICAS FSICO-QUMICAS DO EFLUENTE DA INDSTRIA
MACEDO KOERICH S/A SC

Parmetros analisados

Amostra 1

Amostra 2

Amostra 3

Amostra 4

Amostra 5

Amnia (mgNH3.L-1)

79.29

19.82

54.10

43

39.55

pH

6.35

6.63

6.63

7.11

7.54

26

0.10

0,40

<0.10

<0.10

leos e graxas (mg.L-1)

2005

48.75

67.40

46.25

26.37

Slido total (mg.L-1)

8390

131

174

119

104

Slido total voltil (mg.L-1)

8052

67

71

67.5

66

Slido suspenso total (mg.L-1)

1966

80

87

85

63

DQO (mg O2.L-1)

6720

402

352.91

304.87

248

DBO5 (mg O2.L-1)

4434

374.46

310.80

250.56

169.48

DBO5 solvel (mg O2.L-1)

1587

337.29

301.82

203.40

70.50

Nitrognio total (mg N2.L-1)

92.35

20.67

55.43

50.33

32.87

Fsforo total (mg PO4.L-1)

8.64

2.02

1.98

1.51

1.20

Slido sedimentvel (mL.L-1)

Observaes: Amostra 1 - Entrada do Tanque de Equalizao


Amostra 2 - Sada do Flotador
Amostra 3 - Sada da 2a Lagoa
Amostra 4 - Sada da 3a Lagoa
Amostra 5 - Sada para o rio aps a clorao
Fonte: Indstria Macedo Koerich S/A - SC, 2005.

APNDICES - 80

APNDICE B - PADRES DE EMISSO DE ELFUENTES LQUIDOS DA LEGISLAO


AMBIENTAL DO ESTADO DE SANTA CATARINA

Parmetros
pH
Slido sedimentvel (mL.L-1)

Limite mximo permitido


6.0 9.0
1,0

leos minerais (mg.L-1)

At 20

leos vegetais e gorduras animais (mg.L-1)

At 30

DQO (mg O2.L-1)

72

DBO5 20C (mg.L-1)

60

Nitrognio total (mg N2.L-1)

10

Fsforo total (mg PO4.L-1)

1,0

Fonte: Legislao Ambiental Bsica do Estado de Santa Catarina de maio de 1995, Lei N
5.795, Decreto N 14.250, que dispe de padres de emisso de efluentes lquidos no Art.
19.

APNDICES - 81

APNDICE C - FICHA TCNICA DA LIPASE PANCREATICA KIN MASTER

FICHA TCNICA FT/PAN05


Reviso 01
Pg.1/3
PANCREATINA 3NF

Cdigo: 50.1003.01-OR

Pancreatina uma substncia obtida a partir do pncreas suno, que contm


importantes quantidades de enzimas proteolticas, lipolticas e aminolticas. Todas as
enzimas proteolticas do pncreas se encontram em um estado inativo (zimognios). A
tripsina pode se auto-ativar ou ser ativada pela heteroquinase. As demais proenzimas so
totalmente ativadas pela tripsina.
A caracterstica principal das enzimas proteolticas da pancreatina que elas so
uma mistura de endo e exopeptidases; existem pelo menos quatro enzimas proteolticas
com especificidade totalmente diferentes, que podem ou no estar em forma de
zimognios.
Atravs da anlise da protease possvel distinguir dois tipos de atividades
proteolticas, a atividade proteoltica livre e atividade proteoltica total, esta ltima pode ser
medida aps a ativao completa dos zimognios efetuando-se a pr-incubao da soluo
com heteroquinase.
A amilase pancretica tambm presente na Pancreatina determinada atravs da
capacidade da -amilase (-1,4-glucano glucanohidrolase) de romper as ligaes do
substrato (amido) em soluo.
A lipase pancretica outra enzima presente na Pancreatina, ela uma mistura
de duas isoenzimas, a lipase A e lipase B, as quais diferenciam-se das outras estearases
por sua caractersticas de emulsionar substratos.
Os resultados da atividade enzimtica so obtidas de acordo com mtodo FIP
utilizando padres FIP.

APNDICES - 82

FICHA TCNICA FT/PAN05


Reviso 01
Pg. 2/3
ENZIMAS PANCRETICAS:
PROTEASES

Carboxipeptidase A (peptidil - L-amino acido hidrolase, E.C.3.4.2.1)

Carboxipeptidase B (peptidil - L-lisina hidrolase, E.C.3.4.2.2)

Tripsina (E.C.3.4.21.4)

Quimotripsina (E.C.3.4.21.1)

Elastase (pancreato peptidase E, E.C.3.4.4.7)

LIPASE

Lipase Pancretica (glicerol - ester hidrolase E.C.3.1.1.3)

AMILASE

- amilase ( - 1,4 - glucano glucanohidrolase, E.C 3.2.1)

CONSERVAO:
Conservar em recipientes bem fechados, preferencialmente em temperaturas que
no venham exceder a 30C.

APLICAO TERAPUTICA:
A

pancreatina utilizada em tratamentos de insuficincia

pancretica, como:

pancreatites e mucoviscidoses, e em deficincias do pncreas excrino como: dispepsia


amilcea, fibrose sstica entre outras. Atravs da catalizao da hidrlise do amido, a
Pancreatina

favorece

condies

para

desenvolvimento

da

flora

glucidoltica

(Lactobacteriaceae), a qual possui propriedades antagnicas aos microorganismos


patognicos intestinais. Os efeitos colaterais da Pancreatina so mnimos, em altas
dosagens pode ocasionar nuseas, diarria e hiperuricemia.
Uma vez que enzimas pancreticas podem ser destrudas pela ao dos cidos
naturais e enzimas proteolticas, recomenda-se utiliz-las na forma de comprimidos
revestidos ou cpsulas gastro-resistentes.

APNDICES - 83

FICHA TCNICA FT/PAN05


Reviso 01
Pg.3/3
ESPECIFICAES:
1. Descrio:
(Referncia Interna)
2. Perda por dessecao:

P amorfo de colorao bege,


ligeiramente higroscpico e com odor
caracterstico.
No mais que 5,0% (105C / 4 horas)

(Farmacopia Brasileira,1988)
3. Lipdios:

No mais que 3,0%

(Farmacopia Europia,1997)
4. Atividade enzimtica:
(Farmacopia Europia,1997)
4.1

Amilase:

No menos que 20.700 U FIP/g

4.2

Lipase:

No menos que 24.700 U FIP/g

4.3

Protease:

No menos que 1.100 U FIP/g

5. Controle microbiolgico:
(Farmacopia Brasileira,1988)
5.1

Bactrias

No mais que 1 x 104 UFC/g

5.2

Fungos e leveduras

No mais que 1 x 102 UFC/g

5.3

Pseudomonas aeruginosa

Ausente

5.4

Staphylococcus aureus

Ausente

5.5

Escherichia coli

Ausente

5.6

Salmonella sp

Ausente

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:

Farmacopia Brasileira, IV edio, 1988.

Pharmacopoeia European, 3 edio, 1997.

APNDICES - 84

APNDICE D - CURVAS PADRO PARA QUANTIFICAO DE COMPOSTOS POR


ESPECTROFOTOMETRIA

D.1 - Curva padro de DQO

Absorbncia

0,028

20

0,037

100

0,072

300

0,148

400

0,191

500

0,212

500

Concentrao (mg de O2 /L)

-1

(mg de O2.L )

400

300

200

Y = 2624X - 80,891
R = 0,9945

100

0
0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25

Absorbncia

D.2 - Curva padro de Amnia

-1

Absorbncia

16

0,045

14

0,238

10

0,443

15

0,638

Concentrao (mg de NH4 /L)

(mg de NH4.L )

12
10
8
6

Y = 23,69461X - 0,32986
R = 0,99892

4
2
0
0,0

0,1

0,2

0,3

0,4

Absorbncia

0,5

0,6

0,7

APNDICES - 85

APNDICE E - CARACTERIZAO DAS PROPRIEDADES CATALTICAS E FSICO-QUMICAS


DAS PREPARAES ENZIMTICAS

E.1 - Influncia do pH na atividade das lipases


Atividade (U.mg-1)
Lipase pancreatina
Lipase pancreatina
LKM
LNU
Azeite de oliva
Efluente
Azeite de oliva
Efluente
720
100
1700
140

pH
6.0
6.5

2520

200

1746,67

140

7.0

2866,67

580

3913,33

180

7.5

3000

200

1720

220

8.0

3320

460

1440

160

9.0

2080

10.0

1920

E.2 - Influncia da temperatura na atividade das lipases


Temperatura
(C)
30

Atividade (U.mg-1)
Lipase pancreatina
Lipase pancreatina
LKM
LNU
Azeite de oliva
Efluente
Azeite de oliva
Efluente
1440
280
786,67
320

35

1400

520

1080

340

37

3320

580

3913,33

220

40

1386,67

580

1013,33

220

45

1066,67

300

866,67

620

50

1800

340

840

280

55

460

400

60

1173,33

1000

APNDICES - 86

APNDICE F - ANLISES

F.1 - cidos graxos livres

Concentrao de
lipase (p/v)

cidos Graxos Livres (g.L-1)


Lipase
Lipase
pancreatina
pancreatina
(LKM)
(LNU)
0 Dia

30 Dias

0 Dia

30 Dias

0,10%

2,2449

2,2520

2,7952

2,4398

0,15%

2,4756

2,2878

3,3184

2,8248

0,20%

3,1002

2,9068

4,4637

3,6944

0,25%

4,3964

2,5489

4,0117

3,3359

0,30%

5,5344

2,2981

4,2409

3,1368

0,35%

6,1784

3,4966

5,7516

3,0271

F.2 - Glicerol

Concentrao de
lipase (p/v)

% Glicerol (g.g-1)
Lipase
Lipase
pancreatina
pancreatina
LNU
LKM
0 Dia
30 Dias
0 Dia
30 Dias

0,10%

0,1149

0,1796

0,1212

0,1782

0,15%

0,1145

0,1914

0,1616

0,1908

0,20%

0,1137

0,1644

0,1122

0,1533

0,25%

0,1435

0,2334

0,1393

0,1676

0,30%

0,1751

0,2349

0,1715

0,1890

0,35%

0,1762

0,2219

0,1632

0,2039

APNDICES - 87

F.3 - DQO

Concentrao de
lipase (p/v)

DQO (mg O2.L-1)


Lipase
Lipase
pancreatina
pancreatina
LNU
LKM
0 Dia
30 Dias
0 Dia
30 Dias

0,10%

660,53

266,93

949,17

109,49

0,15%

1132,85

240,69

1697,01

135,73

0,20%

485,91

188,21

1775,73

214,45

0,25%

1080,37

358,77

2025,01

227,57

0,30%

1539,57

266,93

2864,69

227,57

0,35%

1920,05

319,41

3271,41

161,97

Lodo

0 Dia
896,69

30 Dias
55,57

Efluente bruto

581,81

398,13