Aplicaciones de Biosensores en La Industria Agroalimentaria

aplicaciones de biosensores en la industria agroalimentaria
aplicaciones
d e b i o s e n s o re s
en la industria
a g ro a l i m e n t a r i a
vt
1
Vctor Gonzlez Rumayor

Esther Garca Iglesias
Olga Ruiz Galn
Lara Gago Cabezas
www.madrimasd.org
vt
vt
informe de vigilancia tecnolgica
CONFEDERACIN EMPRESARIAL
DE MADRID - CEOE
vt
Vctor Gonzlez Rumayor
Esther Garca Iglesias
Olga Ruiz Galn
www.madrimasd.org
Lara Gago Cabezas
informe de vigilancia tecnolgica
aplicaciones
d e b i o s e n s o re s
en la industria
a g ro a l i m e n t a r i a
Coleccin coordinada por:
Fundacin para el conocimiento madri+d

CEIM
Este informe de Vigilancia Tecnolgica se ha realizado

dentro del marco del Contrato Programa suscrito entre la
Direccin General de Universidades e Investigacin de la
Comunidad de Madrid y la Universidad Complutense de
Madrid, con la colaboracin de Parque Cientfico de Madrid
que gestiona el Crculo de Innovacin en
Agroalimentacin, perteneciente al sistema de Promocin
Regional de la Innovacin madri+d.
Los autores agradecen los consejos y la correccin del
manuscrito original a:
Dr. Jos Manuel Pingarrn Carrazn
Catedrtico de Qumica Analtica (UCM)
Dra. Elena Domnguez Caas

Catedrtica de Qumica Analtica (UAH)
Dr. Fernando Martn Gordillo

Director de InterAXN
As como la colaboracin de la Dra. Encarnacin Lorenzo

Abad (Catedrtica de Qumica Analtica. UAM)
Todos los derechos estn reservados. Se autoriza la
reproduccin total o parcial de este infome con fines
educacionales, divulgativos y no comerciales citando la
fuente. La reproduccin para otros fines est expresamente
prohibida sin el permiso de los propietarios del copyright.
De los textos: Los autores.
De la coleccin vt y de la presente edicin:
CEIM
Direccin General de Universidades e Investigacin
Diseo: estudio de diseo fj martnez
Ilustraciones: Pilar Snchez Jorreto y Jorge Espejo Ruiz
Impresin: Elec Industria Grfica
Depsito Legal: M-2213-2005
Fecha: Enero 2005
5
9
13
PRESENTACIN
CAPTULO 1
Resumen ejecutivo
CAPTULO 2
Introduccin
2.1
2.2
19
CAPTULO 3
Tecnologas de los biosensores

3.1
3.2
3.3
41
Aplicaciones de los biosensores en agroalimentacin

4.2
4.3
4.4
59
Tipo de interaccin (PG. 20)

Tcnicas de inmovilizacin (PG. 30)
Sistema de transduccin (PG. 31)
CAPTULO 4
4.1
nd ic e
Clasificacin de los biosensores (PG. 16)

Caractersticas de los biosensores (PG. 17)
Seguridad alimentaria (PG. 43)

Calidad alimentaria (PG. 52)
Control de procesos (PG. 55)
Otras aplicaciones (PG. 57)
CAPTULO 5
Retos y tendencias en tecnologas de biosensores

5.1.
5.2
5.3
5.4
5.5
69
CAPTULO 6
77
CAPTULO 7
87
CAPTULO 8
93
CAPTULO 9
Miniaturizacin (PG. 61)

Regeneracin (PG. 62)
Multi-anlisis (PG. 63)
Molculas biomimticas (PG. 64)
Nuevas tcnicas de inmovilizacin
Aspectos de mercado
Casos prcticos
Resumen y conclusiones
Anexos
Anexo 1
Anexo 2
Anexo 3
113
118
119
(PG. 65)
Patentes (PG. 94)

Grupos de Investigacin (PG. 96)
Proyectos de Investigacin (PG. 104)
CAPTULO 10
Referencias
Lista de abreviaturas
Glosario
PRESENTACIN
vt aplicaciones de biosensores
en la industria agroalimentaria
La Vigilancia Tecnolgica incluye una serie de procedimientos, no

siempre sencillos de establecer, que tienen por objeto
definir mediante el anlisis de informacin estratgica, el
escenario tecnolgico en el que han de competir las
empresas (y por agregacin, los sectores) en el futuro ms
prximo, pudiendo con ello adelantarse a los cambios y
mantenerse en una posicin competitiva en el mercado
globalizado.
Es en estos aspectos en los que las Organizaciones Empresariales

cobran una especial relevancia, en tanto que tienen la
capacidad de definir las necesidades de informacin de
empresas y sectores y establecer los objetivos de anlisis
con los expertos, de forma que la informacin aportada
cumpla con las expectativas empresariales.
El anlisis de Vigilancia Tecnolgica, por su propia naturaleza, ha de
llevarse a cabo desde muy diversos puntos de vista,
englobados en el ms amplio concepto de la inteligencia
competitiva: tecnolgicos, de proteccin de la propiedad
intelectual e industrial, legislativo, de sostenibilidad, de
mercado...., lo que requiere la participacin de expertos en
cada una de estas reas, expertos no siempre accesibles a
las empresas o a las asociaciones al trabajar en diferentes
instituciones tanto de la Comunidad de Madrid como del
resto de Espaa.
El Sistema Regional de Innovacin madri+d, del que CEIM forma parte y
que est coordinado y financiado por la Direccin General
de Universidades e Investigacin tiene una especial
vocacin de prestar servicios de valor aadido, entre ellos
el de Vigilancia Tecnolgica, a las empresas y a las
asociaciones empresariales, utilizando en red los
importantes recursos cientficos y tecnolgicos de la

Comunidad de Madrid y entre los que se encuentran la
coordinacin de expertos en los campos de conocimiento
que se integran en la Vigilancia Tecnolgica
La capacidad de las organizaciones empresariales para definir las
necesidades e informacin tecnolgica de sectores y
empresas, y la del Sistema madri+d para satisfacerlas ha
llevado a definir esta nueva Coleccin de Informes de
Vigilancia Tecnolgica, que se inicia con un estudio sobre
la aplicacin de los biosensores a la industria
agroalimentaria, tecnologa ampliamente utilizada en otros
sectores tecnolgicamente avanzados como el
farmacutico o el de medio ambiente, pero todava con
escasa penetracin en el sector agroalimentario,
estratgico en la Comunidad de Madrid.
Gerardo Daz Ferrn

Presidente de CEIM
PRESENTACIN
En el desarrollo de la Coleccin se prev una estrecha cooperacin

entre los expertos en Vigilancia Tecnolgica y las
empresas y asociaciones empresariales para definir los
campos de anlisis de mayor inters estratgico, por lo
que esperamos que esta Coleccin que ahora se inicia sea
til para los sectores empresariales y para fortalecer los
puentes de colaboracin entre la universidad y los
centros de investigacin y el sector empresarial, tan
necesaria para mantener la competitividad de la
Comunidad de Madrid.
CAPTULO 1
Resumen ejecutivo
La industria productora de alimentos y bebidas en la Unin Europea (an antes de la

ampliacin) est valorada en casi 600.000 millones de euros, un 15% de la
produccin total, ocupando a un total de 2,6 millones de empleados y siendo el
segundo sector industrial ms importante. La comparacin con el resto del mundo
indica que la UE es el mayor productor de productos alimenticios y bebidas. Por otra
parte el sector agrcola tiene una produccin anual de 220.000 millones de euros y
ocupa a 7,5 millones de personas. Dentro de este entorno Espaa ocupa un lugar
destacado por detrs de Francia, Alemania y Reino Unido. (1)
La industria agroalimentaria espaola ha alcanzado un elevado grado de madurez y
modernizacin adaptndose a los continuos cambios del entorno y a los hbitos de
consumo. De esta forma ha llegado a convertirse en el primer sector industrial del
pas y en un componente altamente estratgico de la industria espaola. En el ao
2000 existan en el pas un total de 33.342 industrias agroalimentarias lo que supone
un 14% del total de empresas industriales, ocupando a 381.000 empleados (14% de los
trabajadores de la industria), con unas ventas de 55.704 millones de euros (16% del
total). (2)
La innovacin y el desarrollo de la industria agroalimentaria pasan de forma genrica
por dos ejes fundamentales: la seguridad y la calidad de los alimentos. La cada vez
mayor complejidad de la cadena alimentaria exige, por otra parte, el desarrollo de
eficaces sistemas de trazabilidad que aseguren la solidez de todos los eslabones. El
Libro Blanco sobre Seguridad Alimentaria recoge esta necesidad enunciando que los
consumidores deberan poder acceder a una amplia gama de productos seguros y de
elevada calidad procedentes de todos los estados miembros. (3)
10
Tanto el VI Programa Marco de la UE a travs de su Prioridad temtica de Calidad y
Seguridad de los alimentos, como el Plan Nacional de Ciencia y Tecnologa 2004-2007 a
travs de sus programas nacionales de Biotecnologa y Recursos y Tecnologas
Agroalimentarias, recogen la necesidad de desarrollar e implantar sistemas de control
encaminados a aumentar la seguridad y la calidad de los alimentos y a mejorar los
sistemas de trazabilidad. En ambos casos se define la prioridad de desarrollar mtodos
moleculares de deteccin, anlisis y diagnstico que sean rpidos, de alta sensibilidad
y que permitan rastreos automatizados para un amplio espectro de agentes que
amenazan la inocuidad de los alimentos. Por su parte, el borrador del IV PRICIT de la
Comunidad de Madrid recoge esta misma preocupacin mediante la definicin de lneas
de investigacin prioritarias de similares caractersticas en las reas de Biotecnologa y
Tecnologas Agroalimentarias. (4)
La tecnologa de biosensores, o quiz ms correcto, las tecnologas de biosensores han
experimentado un notable avance en los ltimos aos, debido fundamentalmente al
desarrollo de dispositivos aplicados al rea de biomedicina, que en el ao 1996
representaba el 92% (90% slo para deteccin de glucosa en sangre) del total del
mercado. Estas tecnologas en avanzado estado de madurez han ido transfirindose

paulatinamente de forma horizontal a otros sectores como el medioambiental, y de
forma ms incipiente al agroalimentario. En el momento actual los biosensores suponen
potentes herramientas de anlisis con numerosas aplicaciones a la industria
agroalimentaria, apoyndose en los instrumentos de la biotecnologa y en los
resultados de la investigacin postgenmica.
Las caractersticas ms destacables de estos dispositivos que los convierten en
opciones altamente atractivas para competir en el mercado agroalimentario con otras
tecnologas son: su especificidad, su alta sensibilidad, su corto tiempo de anlisis,
su capacidad de inclusin en sistemas integrados, su facilidad de automatizacin, su
capacidad de trabajar en tiempo real, su versatilidad que permite el diseo de
dispositivos a la carta, y su bajo coste, entre otras.
A lo largo del informe se describen las caractersticas tcnicas de los diferentes
dispositivos disponibles en el mercado o de inminente aparicin, analizando las
ventajas e inconvenientes de cada dispositivo en las diferentes aplicaciones. Se
describen tres grandes reas de aplicacin: seguridad alimentaria, calidad
alimentaria y control de procesos. Se analizan, adems los retos y las tendencias de
las tecnologas de biosensores y sus implicaciones y posibles aplicaciones a la industria
agroalimentaria.
Por ltimo se analizan los motivos del desfase existente entre el alto grado de
desarrollo cientfico y tecnolgico, y la todava escasa penetracin de estos
dispositivos en la industria agroalimentaria. Estas barreras no son de carcter
tecnolgico y responden, en trminos generales, a las caractersticas estructurales del
propio sector y a factores del entorno.
Este informe pretende, en fin, acercar a la industria agroalimentaria los ltimos
avances cientficos y desarrollos tecnolgicos en materia de biosensores, con el
objetivo de facilitar su incorporacin a los procesos productivos e involucrar a la
propia industria en el diseo y desarrollo de nuevas aplicaciones.
CAPTULO 1 Resumen ejecutivo
Por otra parte se pretende evaluar el potencial cientfico-tecnolgico a travs del mapa
de los grupos de investigacin de la Comunidad de Madrid y del anlisis de los
proyectos de investigacin europeos del V Programa Marco y del Plan Nacional de
Ciencia y Tecnologa 2000-2003, as como de las patentes ms relevantes. Como
resultado de este anlisis se infiere que la Comunidad de Madrid presenta un enorme
potencial cientfico e investigador en el rea de biosensores, con grupos de
investigacin enormemente competitivos que ya se encuentran trabajando en el sector
agroalimentario.
11
CAPTULO 2
Introduccin
Un biosensor se define como un dispositivo compacto de anlisis que incorpora un

elemento de reconocimiento biolgico (cido nucleico, enzima, anticuerpo, receptor,
tejido, clula) o biomimtico (PIMs, aptmeros, PNAs) asociado a un sistema de
transduccin que permite procesar la seal producida por la interaccin entre el
elemento de reconocimiento y el analito.
14
El principio de deteccin de un biosensor se

basa en la interaccin especfica entre el
compuesto o microorganismo de inters y el
elemento de reconocimiento. Como resultado
de esta unin se produce la variacin de una o
varias propiedades fsico-qumicas (pH,
transferencia de electrones, de calor, cambio de
potencial, de masa, variacin de las
propiedades pticas, etc) que detecta el
transductor. Este sistema transforma la
respuesta del elemento de reconocimiento en
una seal electrnica indicativa de la presencia
del analito sometido a estudio o proporcional a
su concentracin en la muestra. (5)
El trmino biosensor aparece en la literatura
cientfica a finales de los aos 70, aunque el
concepto bsico e incluso la comercializacin
comenz antes. El primer biosensor fue un
analizador de glucosa desarrollado por Clark y Lyons en 1962 y comercializado a partir de
1975 por Yellow Springs Instrument Company. Este biosensor se denomin enzyme
electrode y consista en una enzima glucosa oxidasa acoplada a un electrodo para oxgeno.
La enzima oxida la glucosa y como consecuencia se produce un descenso proporcional de la
concentracin de oxgeno en la muestra, que es detectado por el electrodo. En los aos
siguientes se desarrollaron electrodos enzimticos para distintas sustancias de inters
clnico mediante la unin de enzimas apropiadas a sensores electroqumicos.
El trmino biosensor comenz a utilizarse a partir de 1977 cuando se desarroll el
primer dispositivo utilizando microorganismos vivos inmovilizados en la superficie de
un electrodo sensible a amonio. Este dispositivo se utilizaba para detectar el
aminocido arginina y sus creadores lo denominaron sensor bio-selectivo.
Posteriormente para acortar, se denomin biosensor y este trmino ha permanecido
desde entonces para designar la unin entre un material biolgico y un transductor
fsico. A partir de ese momento el diseo y las aplicaciones de los biosensores en
distintos campos de la qumica analtica ha continuado creciendo.
El desarrollo de los biosensores desde entonces ha estado centrado principalmente en
el campo del diagnstico clnico (con un gran xito de los biosensores para glucosa) y
existe un inters ms reciente en los campos medioambiental, qumico, farmacutico y

militar. En el campo agroalimentario, que es del que nos ocuparemos en este informe,
su inters se centra en el anlisis de la composicin de los alimentos, en la seguridad
alimentaria (deteccin de compuestos contaminantes, alrgenos, antinutrientes,
toxinas y microorganismos patgenos) y en el control de procesos on line.
El nmero de publicaciones cientficas, revisiones y patentes sobre biosensores
desarrollados en los ltimos aos es muy elevado, lo que refleja el gran inters que
despierta este tema en la comunidad cientfica. A pesar de este inters, la salida de
estos dispositivos del laboratorio al mercado agroalimentario ha sido lenta (5), salvo
algunas excepciones, debido a una serie de obstculos relacionados principalmente con
las caractersticas del propio mercado (legislacin, inercia metodolgica, capacidad de
absorcin, etc).
El desarrollo de las diferentes tecnologas implicadas en el diseo y construccin de
biosensores ha permitido en los ltimos aos solventar las dificultades tcnicas que
inicialmente presentaban estos dispositivos para su aplicacin en la industria
agroalimentaria. La diversidad de dispositivos ensayados en la actualidad, con
diferentes combinaciones entre los distintos elementos que los componen, permite un
diseo a la carta de los biosensores que cubre, desde el punto de vista tcnico, la
prctica totalidad de las necesidades.
15
CAPTULO 2 Intrtoduccin
FIGURA 1. Funcionamiento general de biosensores. En una muestra compleja, el elemento de

reconocimiento biolgico es capaz de discriminar entre los distintos componentes de la misma e
interaccionar con el compuesto a analizar. Una vez producida la interaccin se dispara una seal que
es conducida por el transductor. La seal as transmitida es convenientemente registrada y
almacenada para su tratamiento posterior.
Elemento de
reconocimiento
Analito
Otros componentes
de la muestra
2.1
Clasificacin
de Biosensores
Como indica la siguiente tabla estos dispositivos pueden clasificarse en funcin de: el
tipo de interaccin que se establece entre el elemento de reconocimiento y el analito;
el mtodo utilizado para detectar dicha interaccin; la naturaleza del elemento de
reconocimiento; o del sistema de transduccin.
TABLA 1. Criterios de clasificacin de los biosensores
16
Tipo de interaccin
Biocataltica.
Bioafinidad.
Elemento de reconocimiento
Enzima.
Orgnulo, tejido o clula completa.
Receptor biolgico.
Anticuerpo.
cidos nucleicos.
PIM, PNA, aptmero.
Deteccin de la interaccin
Directa.
Indirecta.
Sistema de transduccin
Electroqumico.
ptico.
Piezoelctrico.
Termomtrico.
Nanomecnico.
Existen mltiples elementos de reconocimiento y sistemas de transduccin.

Tericamente estos componentes admiten diversas combinaciones. En la prctica, la
eleccin del material biolgico/biomimtico depende de las caractersticas del
compuesto a analizar. Por ejemplo, cuando se trata de detectar una sustancia alrgena
se utilizan anticuerpos.
La eleccin del transductor est condicionada por el tipo de elemento de
reconocimiento elegido, ya que ste determina cul ser la variacin en las propiedades
fsico-qumicas que ocurra como consecuencia de la interaccin.
2.2
Caractersticas
de Biosensores
En las mltiples aplicaciones de los biosensores dentro de la industria agroalimentaria

es deseable que estos dispositivos cuenten con las siguientes caractersticas:
Alta sensibilidad para el anlisis de ciertos analitos -como por ejemplo, muchos
compuestos xenobiticos- con efectos txicos sobre la salud humana y animal
incluso a concentraciones de partes por billn (mg/l). Existen unidades capaces de
detectar cantidades inferiores a los lmites exigidos por la ley en el caso de residuos
de plaguicidas. (5)
Alta selectividad para que el dispositivo interaccione exclusivamente con el
compuesto de inters y no con otros de propiedades similares. Se consigue mediante
elementos de reconocimiento muy especficos. A pesar de ello, se conocen algunas
excepciones de biosensores que sufren interferencias con sustancias de la misma
familia que el analito o bien con componentes del alimento.
17
Alta fiabilidad. Los sistemas de transduccin se disean de manera que no puedan

ser alterados (o lo sean mnimamente) por la muestra y no tengan problemas de
ruidos.
Bajo coste de produccin. En general, estos sistemas pueden fabricarse a escala

industrial, lo cual redundara en un ms que considerable abaratamiento de los
costes de produccin. A pesar de ello, la disponibilidad limitada de algunas enzimas
y la existencia de fases crticas en su construccin (procesos de inmovilizacin)
dificultan, en algunos casos, la fabricacin de biosensores en masa.
Tiempo de anlisis corto que posibilite una actuacin rpida, por ejemplo, la
retirada de materias primas o productos contaminados o deteriorados antes de su uso
o venta o la intervencin para corregir algn parmetro en un proceso industrial.
Muchos biosensores consumen pocos minutos en cuantificar el compuesto de inters
y no precisan un perodo de espera largo hasta el siguiente anlisis.
CAPTULO 2 Intrtoduccin
Tiempo de vida largo que no obligue al empleo del dispositivo tras un corto perodo
desde su fabricacin ni a sustituciones frecuentes del mismo si est integrado en la
lnea de produccin de una industria. La estabilidad qumica, fsica y mecnica del
elemento de reconocimiento condiciona su duracin. Los componentes biolgicos por
su propia naturaleza cuentan con una vida media limitada pero las nuevas
alternativas basadas en molculas biomimticas no presentan este inconveniente.
Pretratamiento de la muestra innecesario lo que supone un ahorro de tiempo,

materiales y reactivos. Aunque en la mayora de las ocasiones esto es as, en ciertas
determinaciones son imprescindibles las etapas de concentracin y purificacin.
stas permiten eliminar interferencias y asegurar la presencia de una cantidad
suficiente del analito en el pequeo volumen utilizado (deteccin de
microorganismos patgenos).
Manejo sencillo. Esta tecnologa no requiere personal cualificado.
Capaces de realizar anlisis en tiempo real. Esta caracterstica es especialmente

interesante en el control de procesos, ya que permite controlar los parmetros
deseados de forma inmediata y automtica.
18
Porttiles para que sea posible realizar anlisis in situ.

Automatizables. Prescindir del control manual de estas unidades facilita su
integracin dentro de los sistemas que monitorizan los procesos industriales.
Miniaturizables. Gracias a los desarrollos en microelectrnica y nanotecnologa se
han logrado reducir las dimensiones de estos dispositivos. As pueden ensamblarse
varios de ellos en un mismo sistema que realiza varias tareas a la vez y son
aplicables a ensayos donde el tamao fsico del dispositivo, el volumen de la
muestra o la localizacin de la medida son factores limitantes.
Pocos requerimientos operativos y de almacenamiento que faciliten su empleo y no
supongan un coste adicional. Los biosensores que incorporan molculas
biomimticas suelen presentar estas caractersticas. En el resto de dispositivos, los
componentes biolgicos pueden necesitar condiciones controladas (pH, temperatura)
para su uso y conservacin debido a su baja estabilidad.
Con capacidad multi-anlisis. Ciertos biosensores llevan a cabo la determinacin de
diferentes analitos de forma simultnea.
Existe una amplia variedad de biosensores distintos y no todos poseen cada una de las
caractersticas citadas anteriormente. La combinacin de varias de ellas podra situar a
muchos de estos dispositivos en una posicin ventajosa frente a las tcnicas de
anlisis convencionales (cromatografa, espectrometra, etc). Adems, permiten que
sean aplicables a la monitorizacin en tiempo real de procesos industriales. (6) (7)
CAPTULO 3
Tecnologas de Biosensores
3.1
Tipo de Interaccin
3.1.1 Sensores Biocatalticos
Son los biosensores mejor conocidos y los ms aplicados. Se basan en la utilizacin de

biocatalizadores, que son elementos que favorecen que ocurra una reaccin qumica en
la cual a partir de uno o varios sustratos se forman uno o varios productos conocidos
sin consumo del biocatalizador, que se regenera y puede ser utilizado de nuevo.
20
Estos biocatalizadores pueden ser sistemas que contienen enzimas o sistemas

multienzimticos aislados, orgnulos celulares, clulas completas o tejidos animales o
vegetales en los que estos sistemas se encuentran en su medio natural (7). Pueden
utilizarse para detectar la presencia de alguno de los sustratos que participan en la
reaccin, mediante la deteccin de la desaparicin de algn cosustrato conocido distinto
de aquel que se quiere detectar o bien por la aparicin de algn producto conocido.
Existen sustancias txicas como insecticidas o herbicidas que inhiben la actividad de
determinados sistemas enzimticos de manera selectiva, de modo que estos sistemas se
utilizan para detectar su presencia. Si en presencia de los sustratos adecuados no se
produce la aparicin de los productos correspondientes o sta ocurre en menor
extensin de la esperada, significa que en la muestra existe una sustancia txica que
inhibe la reaccin que favorece el biocatalizador.
A continuacin se describen los elementos de reconocimiento de tipo biocataltico.
Estos elementos de reconocimiento pueden acoplarse a distintos tipos de transductores
como electroqumicos, pticos, termomtricos y acsticos.
3.1.1.1 Enzimas
Las enzimas son protenas que catalizan reacciones qumicas en los seres vivos. En una
reaccin catalizada por una enzima se produce una unin del sustrato en una regin
concreta de la enzima denominada centro activo, que comprende un sitio de unin y un
sitio cataltico. Una vez formados los productos la enzima se recupera pudiendo
comenzar un nuevo ciclo de reaccin. En ocasiones puede ser necesaria la presencia de
cofactores para que la enzima pueda regenerarse y estar activa de nuevo.
La actividad enzimtica est controlada normalmente por el pH, la fuerza inica, la
temperatura y la presencia de cofactores. La estabilidad de las enzimas es un factor
limitante para el tiempo de vida de un biosensor de tipo enzimtico y se utilizan
distintas tcnicas para aumentarla, como estabilizacin qumica y/o inmovilizacin.
En algunas ocasiones se utilizan cascadas multienzimticas, en las que la enzima que

acta como elemento de reconocimiento no acta directamente sobre el analito, sino
sobre algn producto derivado del mismo. Este sistema es muy utilizado en el caso de
algunos azcares en los que se utilizan enzimas que actan sobre los productos de la
hidrlisis de los mismos.
Entre las enzimas disponibles comercialmente las ms utilizadas suelen ser las xidoreductasas. Son enzimas muy estables que catalizan fenmenos de oxidacin o
reduccin utilizando oxgeno o cofactores. (7)
Las enzimas pueden acoplarse a transductores de los tipos potenciomtrico,
amperomtrico, optoelctrico, calorimtrico o piezoelctrico, y bsicamente todas
funcionan por inmovilizacin de la enzima en el propio transductor. (7)
Existen enzimas que no se pueden utilizar aisladas debido a que no son
suficientemente estables o a que su purificacin es difcil o demasiado cara. En estas
circunstancias pueden utilizarse orgnulos celulares, clulas completas o tejidos que
contienen las enzimas en una forma natural en un medio ms estable.
21
VENTAJAS DE LAS ENZIMAS COMO ELEMENTO DE RECONOCIMIENTO
Las ventajas que presentan las enzimas para su utilizacin en biosensores son:
Elevada selectividad.
Respuesta rpida.
Elevada variedad de enzimas disponibles. (8)
Autorregenerables.
Algunas resultan econmicas.
Simplicidad de construccin de los dispositivos.
3.1.1.2 Clulas Completas

Pueden ser clulas bacterianas, fngicas, protozoos o clulas procedentes de
organismos superiores y pueden ser viables o no viables. (7)
En este caso en lugar de purificar las enzimas se utiliza como elemento biolgico una
clula completa, que posee en su interior mltiples sistemas multienzimticos en su medio
natural. Se pueden utilizar clulas modificadas genticamente que expresen enzimas
determinadas que no se expresen normalmente o que posean una actividad mayor.
Las clulas viables pueden metabolizar diversos compuestos orgnicos dando lugar a la
aparicin de distintos productos como amonio, dixido de carbono o cidos que pueden
CAPTULO 3 Tecnologas de Biosensores
ser monitorizados mediante distintos transductores. Se pueden utilizar para detectar la

presencia de compuestos relacionados con el crecimiento como vitaminas, azcares,
cidos orgnicos o compuestos nitrogenados, o bien para detectar compuestos que
inhiben la respiracin microbiana como contaminantes ambientales o sustancias
txicas. (9)
La mayor limitacin a la hora de utilizar clulas completas es la difusin de sustratos y

productos a travs de la membrana celular, que da como resultado una respuesta ms
lenta comparada con los sensores basados en enzimas. (9)
22
Esta limitacin se puede paliar mediante la permeabilizacin de la membrana por medio

de mtodos fsicos (congelacin y descongelacin), qumicos (detergentes) o
enzimticos (lisozima, papana). Mediante estos tratamientos se forman poros en las
membranas que permiten la difusin de molculas de pequeo tamao, reteniendo la
mayor parte de los compuestos macromoleculares, como es el caso de las enzimas,
dentro de la clula. Como consecuencia de estos tratamientos la clula deja de ser
viable, pero puede servir como una fuente econmica de enzimas intracelulares. Se
pueden utilizar para aplicaciones que no requieren regeneracin celular de cofactores o
respiracin metablica, como es el caso de glucosa oxidasa, -galactosidasa,
aminocido oxidasas, invertasas, etc. (9)
Otra limitacin de las clulas completas, en comparacin con enzimas purificadas, es
que tienen una menor especificidad debido a reacciones catalizadas por otras enzimas
presentes en la clula. Una posible solucin para minimizar estas reacciones
indeseables es permeabilizar la membrana de modo que los cofactores salgan al exterior
de la clula. (9)
Las clulas se pueden inmovilizar en membranas de acetato o celulosa, o atraparse en
una matriz, como un gel de agar. (6)
3.1.1.3 Orgnulos Subcelulares

En ocasiones en lugar de utilizar clulas completas o sistemas multienzimticos
aislados, pueden utilizarse orgnulos subcelulares, que contienen determinados
sistemas enzimticos completos, pero no poseen todos aquellos que presenta una
clula completa, como es el caso de cloroplastos completos, tilacoides o
mitocondrias. (9)
Mitocondrias y cloroplastos son orgnulos de doble membrana que poseen sistemas
enzimticos relacionados con la obtencin de energa en la membrana interior.
Determinados agentes txicos como plaguicidas, metales pesados o detergentes actan
sobre estos sistemas enzimticos inhibindolos, de modo que estos orgnulos o sus
membranas internas pueden utilizarse como biosensores para detectar este tipo de
compuestos. (9)
3.1.1.4 Tejidos
Existen determinados tejidos vegetales que debido a su funcin fisiolgica en el
organismo son una fuente de determinadas enzimas o sistemas enzimticos.
Pueden utilizarse distintos tejidos como hojas, races, frutas o semillas, en rodajas o
bien en forma de homogeneizados. Suelen ir asociados a transductores electroqumicos.
(10)
Algunos ejemplos que aparecen en la literatura cientfica son la utilizacin de rodajas
de patata (ricas en la enzima polifenol oxidasa) junto con electrodos de oxgeno para
la determinacin de mono y polifenoles (9), o de homogeneizados del hongo Agaricus
bisporus para la determinacin de alcohol. (11)
La utilizacin de orgnulos, clulas completas o tejidos vegetales en biosensores posee
varias ventajas e inconvenientes comparada con la utilizacin de enzimas o sistemas
enzimticos aislados.
23
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE TEJIDOS COMO ELEMENTOS DE RECONOCIMIENTO
Bajo coste.
Evitan procesos de extraccin y purificacin de enzimas.
No requieren la adicin de cofactores para la regeneracin enzimtica.
Simplicidad de construccin.
Elevada estabilidad.
Vida til larga.
Elevada actividad.
Inconvenientes
Baja sensibilidad.
Respuesta lenta.
Limitada selectividad.
3.1.2 Sensores de Bioafinidad

Los sensores de bioafinidad se basan en la interaccin del analito de inters con el
elemento de reconocimiento, sin que exista transformacin cataltica, sino que se
produce una reaccin de equilibrio en la que se forma un complejo analito-receptor. (7)
Ventajas
Para medir la interaccin, ya que no existe consumo de sustratos ni generacin de

productos, se suele utilizar un marcaje del receptor o bien de un elemento que compita
con el analito por la unin al receptor, con una enzima que da una reaccin
biocataltica complementaria que es la que se detecta por el sistema de transduccin.
El inconveniente que plantea este tipo de sistema es que se requieren pasos posteriores
de lavado y separacin del exceso de molculas marcadas y la adicin de sustratos para
que ocurra la reaccin que cataliza la enzima que se usa como marcaje. (7)
Puede utilizarse tambin un sistema de deteccin directa de la interaccin entre el

receptor y el analito basndose en los cambios que se producen en la masa de la
superficie, o bien por los cambios en las propiedades de la luz que se producen como
consecuencia de esta unin.
Este tipo de interacciones presenta en ocasiones un rango de operacin de
concentracin estrecho, debido a que se puede producir una saturacin del receptor y a
menudo no permiten una monitorizacin continua de la concentracin del analito. El
elemento de reconocimiento debe estar en contacto directo con la muestra y no se
puede incorporar una membrana exterior para separar el elemento receptor de la matriz
de la muestra, de modo que algunos de estos biosensores tienen dificultades para
operar en matrices biolgicas complejas.
Se pueden utilizar para la deteccin de material gentico de microorganismos, para
detectar la presencia de patgenos o pesticidas o de cualquier tipo de sustancias que
puedan causar una respuesta inmune (y por tanto permitir el desarrollo de
anticuerpos).
24
Existen distintos tipos de receptores de bioafinidad como anticuerpos, lectinas,
receptores, clulas completas, cidos nucleicos, PIMs, aptmeros y PNAs.
3.1.2.1 Anticuerpos
Un anticuerpo es una protena que se une de manera selectiva a una molcula
complementaria denominada antgeno, que en este caso corresponde al analito. La
mayor parte de los biosensores de bioafinidad se basan en reacciones de unin de
antgenos a anticuerpos especficos.
La deteccin de cada antgeno requiere la produccin de un anticuerpo particular, su
aislamiento y en ocasiones su purificacin. Pueden utilizarse anticuerpos monoclonales
o policlonales. Los anticuerpos policlonales son poblaciones complejas de anticuerpos
formadas por distintos tipos de anticuerpos que reconocen diferentes regiones del
antgeno, mientras que los monoclonales son molculas idnticas y poseen la misma
especificidad. Los anticuerpos policlonales poseen mayor sensibilidad y menor
especificidad que los monoclonales, de modo que en funcin de qu caracterstica se

quiera potenciar se elegirn unos u otros.
La deteccin del complejo antgeno-anticuerpo se puede hacer directamente, aunque
para aumentar la sensibilidad se suelen acoplar enzimas para el marcaje de los
anticuerpos o los antgenos. (7)
La especificidad y afinidad de la interaccin antgeno-anticuerpo determinan la
selectividad y la sensibilidad del inmunosensor as como la posibilidad de regeneracin.
En la prctica para alcanzar una sensibilidad adecuada se necesita que el complejo
tenga una afinidad alta, siendo difcil su disociacin, por lo que suelen ser sistemas de
un solo uso. No obstante, el anticuerpo puede regenerarse por disociacin de los
complejos mediante la aplicacin de distintos agentes que cambian las condiciones del
medio y favorecen esta disociacin, aunque estas condiciones suelen daar la
estructura del anticuerpo. (8)
Por ltimo, es necesario minimizar las uniones no especficas, para garantizar la
especificidad de la deteccin del analito.
25
3.1.2.2 Receptores
En las membranas celulares existen distintos receptores moleculares y protenas de
unin que pueden aislarse e inmovilizarse en diferentes superficies y utilizarse como
elementos de reconocimiento asociados a diversos transductores.
Pueden utilizarse para determinar compuestos txicos que ejercen su accin en los
organismos mediante la unin a dianas especficas como el caso de los ganglisidos
que se utilizan como receptores para detectar la toxina colrica (17).
3.1.2.3 Clulas Completas

En las clulas existen distintos receptores moleculares de membrana que ante la
unin de su ligando correspondiente disparan respuestas fisiolgicas amplificadas,
como la apertura de canales inicos, la activacin de sistemas mensajeros
Existen protenas transportadoras que forman canales que pueden acoplarse a

membranas lipdicas sintetizadas de manera artificial. La unin del analito a estos
receptores produce la formacin de canales a travs de los que se genera un flujo
de iones que se puede monitorizar mediante distintos tipos de transductores como
los electroqumicos, por lo que normalmente este tipo de receptores no necesitan
que haya un marcaje enzimtico.
secundarios y la activacin de enzimas, que pueden ser monitorizados por

distintos transductores.
Determinados compuestos txicos ejercen su accin bloqueando los sistemas de seales

asociados a estos receptores debido a que se unen a ellos de manera especfica e
impiden la unin del ligando correspondiente, por lo que pueden usarse para detectar
la presencia de estos compuestos. Por ejemplo las toxinas paralizantes de origen
marino ejercen su accin toxica bloqueando canales de sodio, que son muy abundantes
en las clulas que forman la membrana de la vejiga de rana, de modo que puede
utilizarse este tejido para la fabricacin de biosensores. (13)
Este tipo de receptores suelen tener afinidad por compuestos relacionados
estructuralmente, lo cual resulta interesante para la deteccin multianalito.
Pueden utilizarse clulas que expresen los receptores de manera natural o bien se
pueden modificar genticamente para que expresen los receptores que interesan.
3.1.2.4 Lectinas
Las lectinas son un grupo de protenas que se unen de manera selectiva y reversible a
distintos sacridos, como los oligosacridos que se encuentran en las paredes celulares
bacterianas. Son molculas de reconocimiento fcilmente disponibles y econmicas que
pueden asociarse a distintos transductores como transductores piezoelctricos o de
resonancia de plasmones superficiales.
26
3.1.2.5 cidos Nucleicos

Los biosensores para el anlisis de ADN se basan en el proceso de hibridacin, que es
la unin de una cadena de ADN con su cadena complementaria. Estos biosensores,
tambin conocidos como gene chips se usan para el reconocimiento y cuantificacin
de ADNs diana en muestras de inters. La hibridacin puede hacerse en disolucin o en
soportes slidos y una vez que se ha realizado se utilizan marcajes especficos que se
unen a las secuencia hibridadas, como marcajes fluorescentes o enzimticos. Pueden
acoplarse sistemas de transduccin pticos, gravimtricos o electroqumicos. (14)
Algunos de estos chips son lo suficientemente sensibles como para eliminar la
necesidad de amplificacin mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Este tipo de elementos de reconocimiento pueden utilizarse para la deteccin de
organismos modificados genticamente y microorganismos patgenos.
3.1.2.6 Polmeros de Impresin Molecular

Los polmeros de impresin molecular o PIMs son matrices sintetizadas artificialmente
que presentan, en teora, la capacidad de reconocer e interaccionar de forma especfica
con determinados compuestos. Es decir, se trata de materiales biomimticos que
reproducen de un modo ms bsico el mecanismo de reconocimiento de los sistemas
biolgicos (hormona-receptor, enzima-sustrato, antgeno-anticuerpo). Idealmente, ste
es el comportamiento que cabra esperar; sin embargo, en la prctica no sucede as
debido a la existencia de interacciones de distinta naturaleza.
Estos polmeros con memoria selectiva cuentan con una serie de caractersticas muy
interesantes para las tecnologas de los biosensores. Su gran potencial como sustitutos
de las estructuras de origen biolgico se ha materializado en el desarrollo de los
primeros dispositivos que incorporan PIMs como elementos de reconocimiento, por
ejemplo, para la deteccin de plaguicidas, frmacos o toxinas marinas.
En el proceso de obtencin de los PIMs participan:
El analito de inters que acta como molde o plantilla.
27
Los monmeros funcionales que interaccionan con el analito y para cuya eleccin
debe considerarse la naturaleza qumica del mismo (cida, bsica, ion metlico) y los
monmeros de entrecruzamiento que contribuyen a estabilizar la estructura del
polmero.
Los principales mecanismos de preparacin de los PIMs se dividen en covalentes y no

covalentes. En el primer caso, las uniones que se establecen entre el analito o molcula
molde y los monmeros funcionales son de carcter covalente. En cambio, en la ruta de
sntesis no covalente las interacciones son de tipo enlace de hidrgeno, enlace de Van
der Waals, interacciones electrostticas,... A partir de estas uniones los monmeros
funcionales se organizan en torno al analito, polimerizan y junto con las unidades de
entrecruzamiento generan una red tridimensional. Por ltimo, la molcula molde se
extrae de esta matriz para dejar libres los puntos de reconocimiento mediante diversas
tcnicas (reaccin de hidrlisis para la ruptura de enlaces covalentes o extraccin con
disolventes en la va de preparacin no covalente). (15)
Otros compuestos: iniciadores de la polimerizacin, disolventes para la fase de

sntesis, disolventes para la extraccin del analito,...
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS PIMs COMO ELEMENTOS DE RECONOCIMIENTO

Ventajas
Sensibilidad y selectividad elevadas.
Posibilidad de desarrollar PIMs destinados a muy diversos analitos incluyendo especies para
las que an no se ha encontrado un elemento de reconocimiento biolgico.
Especificidad predecible tericamente aunque, en la prctica, la existencia de interacciones
de carcter no especfico hace difcil su determinacin.
Produccin con un bajo coste a gran escala.
Tiempo de vida largo: estabilidad qumica, trmica y mecnica altas. (16)
Inconvenientes
Tecnologa en desarrollo en el mbito de los biosensores.
En general, las constantes de afinidad son bajas, es decir, que la tendencia del analito y del
PIM a unirse es pequea. Esto implica mayores tiempos de anlisis.
Requiere altas concentraciones de molcula molde.
El procedimento de sntesis de los PIMs conlleva mltiples etapas y resulta laborioso.
Adems hay prdidas de material til y se obtienen redes con una distribucin poco
homognea de los puntos de unin.
Dificultad para operar en medios acuosos porque no se produce el reconocimiento
del analito. (17)
3.1.2.7 Aptmeros
Un aptmero es una secuencia de oligonucleticos (ADN o ARN) de cadena sencilla
sintetizada artificialmente, capaz de reconocer diversas molculas diana con una
afinidad y especificidad elevadas.
28
Estas molculas biomimticas se asemejan a los anticuerpos. Se pliegan en el espacio y
adquieren una conformacin con determinadas regiones a las que puede unirse el analito.
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS APTMEROS COMO ELEMENTOS DE RECONOCIMIENTO
Ventajas
Mayor estabilidad en comparacin con los elementos biolgicos.
Inmovilizacin sencilla sobre las superficies.
Produccin a gran escala con un coste bajo.
Inconvenientes
Constantes de afinidad pequeas.
3.1.2.8 cidos Nucleicos Peptdicos

Los cidos nucleicos peptdicos o PNAs (en sus siglas inglesas) son otro tipo de
molculas sintticas que mimetizan al ADN-ARN. De hecho, su estructura es muy similar
a la de estos cidos. Estn formados por un esqueleto de monmeros (N-2-aminoetilglicina) unidos por enlaces peptdicos con bases nitrogenadas pricas y pirimidnicas. A
diferencia de los cidos nucleicos, los PNAs no contienen pentosas ni grupos fosfato.
La principal ventaja de estas molculas biomimticas frente a sus anlogos naturales es
su gran afinidad para establecer enlaces con cadenas de ADN. La falta de repulsin
electrosttica entre ellas hace que dichos enlaces sean ms fuertes que los existentes
entre dos hebras de ADN.
Este elemento de reconocimiento se utiliza en la deteccin de microorganismos
patgenos junto a transductores pticos de tipo SPR. (18)
La tabla 2 recoge las principales ventajas e inconvenientes de los elementos de
reconocimiento ms utilizados en biosensores, es decir, enzimas en el caso de los
biosensores de tipo biocataltico, y anticuerpos en el caso de los biosensores de
bioafinidad.
TABLA 2. Ventajas e inconvenientes de enzimas y anticuerpos como elementos

de reconocimiento en biosensores
29
ENZIMAS
Ventajas
Sensibilidad frente a condiciones ambientales

(pH, temperatura o fuerza inica).
En ocasiones requieren presencia
de cofactores.
Pueden ser inhibidos por sustancias
de la muestra.
Tiempo de vida limitado.
ANTICUERPOS
Ventajas
Elevadas sensibilidad y especificidad.
Estabilidad qumica.
Afinidad variable.
Respuesta rpida.
Bajo coste.
Inconvenientes
Difcil regeneracin.
Requieren contacto directo con la muestra.
En ocasiones requieren marcaje.
No amplifican la seal.
No existe consumo del analito por lo que se
saturan (rango de operacin de concentracin
estrecho).
No permiten detectar sustancias desconocidas.
Elevada sensibilidad.
Respuesta rpida.
Autorregenerables.
Permiten monitorizacin continua.
No requieren pasos de lavado.
Gran variedad de enzimas disponibles.
Permiten detectar txicos desconocidos
que inhiben enzimas.
Permiten amplificar seales.
Diseo sencillo.
Fcil construccin.
Bajo coste.
Manejo sencillo.
Inconvenientes
3.2
Tcnicas de Inmovilizacin
Una etapa clave en la construccin de un biosensor es la inmovilizacin del elemento de

reconocimiento sobre una membrana o matriz, que a su vez se fija a la superficie del
transductor. Este material de base puede actuar nicamente como soporte del componente
biolgico o participar adems en la transmisin de la seal al sistema de transduccin (por
ejemplo, mediante la inclusin de mediadores para las reacciones redox).
Entre las tcnicas empleadas las ms comunes son la adsorcin fsica, el atrapamiento, el
entrecruzamiento o reticulado (cross-linking) y la formacin de enlaces covalentes. La
siguiente tabla resume las principales caractersticas de cada uno de ellos. La eleccin de uno
u otro procedimiento depende de la naturaleza del elemento biolgico, el tipo de transductor,
las propiedades fsico-qumicas del analito y las condiciones de trabajo del biosensor. (7)
TABLA 3.- Ventajas e incovenientes de las tcnicas de inmovilizacin ms comunes
en la fabricacin de biosensores. (7) (9)
Tcnica de
inmovilizacin
Descripcin
Matriz
Ventajas
Inconvenientes
Adsorcin fsica
Unin del ER* a la

matriz mediante
interacciones
inicas, puentes de
hidrgeno, fuerzas
de Van der Waals.
Celulosa.
Gel de slice.
Colgeno.
Hidroxiapatita.
Acetato.
Sencilla.
Bajo coste.
Matriz regenerable.
Sin modificaciones
en ER.
Unin dbil: prdida

de ER por condiciones
externas.
Control estricto
del proceso.
Atrapamiento
Retencin fsica
del ER en las
cavidades interiores
de la matriz.
Geles: agar,
nylon, almidn,
poliacrilamida.
Matrices
electrdicas
compositas rgidas:
grafito-tefln o
grafito-resina epoxi.
Sencilla.
Bajo coste.
Se necesita poca
cantidad de ER.
Sin modificaciones
en ER.
Proximidad entre
ER y el transductor.
Unin dbil.
Control estricto
de la polimerizacin
de la matriz.
No regenerable.
Entrecruzamiento
Uniones
irreversibles
de los ER entre s
mediante reactivos
funcionales.
Reactivos:
Glutaraldehdo
Hexametilen-diisocianato, 2,4dinitro-benceno.
Coste moderado.
Estable en
condiciones
extremas. Mnima
prdida de ER.
Tratamiento con
sustancias qumicas
txicas.
No regenerable.
Manipulacin
sencilla.
Estable en
condiciones
extremas.
Alteracin del ER
(centro activo en enzimas).
Inadecuado para ERs muy
sensibles (pH, temperatura)
No regenerable.
Tratamiento con sustancias
qumicas txicas.
Coste elevado.
30
Enlaces covalentes Uniones covalentes

del ER con grupos
qumicos activados
de la matriz o
directamente del
transductor.
* ER: elemento de reconocimiento.
3.3
Sistema de Transduccin
El sistema de transduccin o transductor es el elemento que convierte las variaciones

de las propiedades fsicas o qumicas que se producen por la interaccin entre el
elemento de reconocimiento y el analito en una seal que puede ser amplificada,
almacenada y registrada. La seal generada por el transductor en algunos casos no
puede ser interpretada directamente y es necesario la utilizacin de un software para
su procesamiento.
Existen varios tipos de transductores: electroqumicos, pticos, piezoelctricos
(msicos, gravimtricos, acsticos), termomtricos y nanomecnicos. Dependiendo de
la naturaleza de la interaccin entre el elemento de reconocimiento y la especie de
inters se puede utilizar un tipo de transductor u otro. (20)
3.3.1 Transductor Electroqumico

Los transductores electroqumicos transforman la seal que se produce por la
interaccin entre el sistema de reconocimiento y el analito a detectar en una seal
elctrica. Proporcionan informacin analtica cuantitativa o semicuantitativa
especfica. El elemento de reconocimiento biolgico y el elemento de transduccin
deben estar en contacto.
31
FIGURA 3. Sensor electroqumico amperomtrico. La interaccin entre el elemento de reconocimiento

y el analito provoca la conversin electroqumica de una especie redox que genera una corriente
elctrica.
Se diferencian cuatro tipos de biosensores electroqumicos que son conductimtricos,

potenciomtricos, amperomtricos e impedimtricos en funcin de si detectan cambios
en la conductividad, en el potencial, en una corriente generada o en la impedancia.
En general se utilizan junto con elementos de reconocimiento biocatalticos ya que las

reacciones enzimticas generan aparicin de sustancias electroactivas, cambios en el
pH o en el potencial, etc.
TABLA 4. Tipos de transductores electroqumicos. (5) (6) (7) (21)
Transductor
electroqumico
32
Tipo de medida
Ventajas
Inconvenientes
Conductmetro
Variacin de
conductividad
del medio.
Potenciomtrico
Diferencia de
potencial elctrico.
Simplicidad de operacin. Menor sensibilidad

Pequeo tamao.
que amperomtricos.
Unin inespecfica a otros
iones presentes en la
muestra.
Para muestras con gran
cantidad de analito.
Amperomtrico
Corriente generada
por la reduccin u
oxidacin de especies
electroactivas.
Pequeos y robustos.
Sensibles.
Rpidos.
Econmicos.
Fcil para ensayos
de campo.
Impedimtrico
Incremento de
conductancia.
Pueden tener baja

selectividad.
Existe un tipo de sensores de reciente desarrollo consistente en una combinacin entre

los sistemas de transduccin ptico y electroqumico denominados light-addressable
potentiometric sensor (LAPS) (6). Estos sensores permiten detectar cambios de pH en
las disoluciones, lo que se puede aplicar en la monitorizacin de algunas reacciones
enzimticas o alteraciones celulares que producen variaciones en el pH del medio.
Un LAPS es un sensor qumico cuya estructura consta de un electrolito, un aislante
cuya superficie se encuentra en contacto con la muestra que debe ser una disolucin
acuosa, y un semiconductor de silicio. El aislante se encuentra cargado en funcin del
pH de la disolucin acuosa que baa el chip.
Cuando se aplica una diferencia de potencial a esta estructura y se ilumina la parte
posterior mediante un diodo, se produce una fotocorriente que depende del voltaje
aplicado y de la carga de la superficie de la capa aislante. Si se produce un cambio en
el pH del medio, el voltaje aplicado debe ser ajustado para que la fotocorriente
permanezca constante. Este cambio de voltaje es proporcional al cambio de pH que se
ha producido en el medio.
La fotocorriente slo se genera en zonas discretas, donde el sensor es iluminado por el

diodo, de modo que podran medirse cambios locales con mltiples diodos lo que
permitira la deteccin simultnea de mltiples analitos usando un solo sensor.
Existe un LAPS disponible comercialmente que se denomina Threshold Immunoassay
System y sirve para detectar bacterias y esporas.
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS TRANSDUCTORES ELECTROQUMICOS
Ventajas
Econmicos, posibilidad de produccin masiva.

Fcil miniaturizacin.
Respuesta rpida.
Alta sensibilidad.
Posibilidad de automatizacin.
Aplicaciones en elevada variedad de muestras.
Inconvenientes
Es necesaria la utilizacin de electrodos de referencia (excepto en los conductimtricos).
33
3.3.2 Transductor ptico
Este tipo de transductores pueden acoplarse a elementos de reconocimiento

biocatalticos o de bioafinidad.
Los transductores que tienen propiedades pticas son muy variados en funcin de las
propiedades, incluyendo sensores de fibra ptica, sensores de resonancia de plasmones
y sensores de onda evanescente.
3.3.2.1 Sensor de Fibra ptica

Tambin conocido como optodo u optrodo, consiste en una fibra ptica en uno de
cuyos extremos se inmoviliza el elemento de reconocimiento, que puede ser de tipo
Los transductores pticos se basan en la medicin de las variaciones que se producen

en las propiedades de la luz como consecuencia de la interaccin fsica o qumica entre
el analito a detectar y el elemento biolgico de reconocimiento del biosensor. Las
bases fsicas de este tipo de sensores son los cambios que ocurren en absorcin,
fluorescencia, luminiscencia, dispersin o ndice de refraccin, cuando la luz se refleja
en las superficies de reconocimiento. El sistema bsico de medida consiste en una
fuente de luz, el elemento sensor (donde se encontraran las molculas receptoras) y el
detector. Se diferencian mtodos de deteccin directa, sin necesidad de marcaje y
deteccin indirecta, en la que es necesario utilizar marcaje. (5)
biocatalco o de bioafinidad y en el otro el elemento de deteccin (figura 4). Es

necesaria la utilizacin de marcadores que pueden ser indicadores pticamente activos
como colorantes sensibles al pH, a la concentracin de oxgeno o al perxido de
hidrgeno, molculas fluorescentes y, en menor medida, molculas bio o
quimioluminiscentes. Como consecuencia de la interaccin entre el analito y el
elemento de reconocimiento se produce un cambio detectable en el marcador que se
propaga por la fibra ptica hacia el detector. (7)
34
FIGURA 4.- Sensor de fibra ptica
Existe otro tipo de transductores pticos que se basa en las interacciones que ocurren
en la interfase entre una superficie en la que se encuentra el elemento de
reconocimiento y la disolucin en la que se encuentra el analito. La superficie suele ser
un prisma de cristal recubierto con una capa de oro o plata. Cuando esta interfase se
ilumina con un rayo de luz, se producen cambios en el ngulo de resonancia. Se
diferencian transductores de resonancia de plasmones superficiales y de resonancia de
espejos.
3.3.2.2 Resonancia de Plasmones Superficiales (SPR).

Los plasmones son oscilaciones colectivas de los electrones de conduccin de un metal.
La resonancia de plasmones superficiales es un fenmeno ptico que ocurre cuando una
luz polarizada se dirige desde una capa de mayor ndice de refraccin (un prisma) hacia
una de menor ndice de refraccin, que en este caso es una capa metlica, de oro o de
plata, que se sita entre el prisma y la muestra. La luz que incide en la interfase entre
el metal y el prisma provoca la excitacin de un plasmn superficial para un
determinado ngulo de incidencia de dicha luz, llamado ngulo de resonancia. El
ngulo de resonancia depende fuertemente del ndice de refraccin del medio
colindante a la lmina metlica, por lo que las variaciones que se produzcan en el
mismo van a ser detectadas como cambios del ngulo de resonancia y este cambio es
proporcional a la concentracin. La unin de los analitos al elemento de
reconocimiento supone un cambio de ndice de refraccin sobre la superficie del metal
y, como consecuencia, un desplazamiento del ngulo de resonancia. Esto permite
realizar medidas directas en tiempo real, sin marcaje, as como el anlisis de muestras
complejas sin purificacin previa. (8)
Puede utilizarse tambin con marcaje con molculas fluorescentes. Esto presenta como
ventaja una mejora en la sensibilidad relativa por la reflexin total interna de
fluorescencia.
La instrumentacin que requiere este tipo de anlisis es un sensor, un detector de SPR,
software para el control y tratamiento de datos y un sistema para introducir los
reactivos y analitos en la superficie del sensor.
35
3.3.2.3 Resonancia de Espejos

Es una variacin de la SPR en la cual se utilizan filtros polarizados para bloquear la luz
reflejada internamente. Un espejo de resonancia consiste en una capa de silicio de bajo
ndice de refraccin tapizado con un material de alto ndice de refraccin. Esta
estructura se utiliza en lugar de la capa de metal que se usa en la SPR. La luz que entra
en la capa de silicio con un ngulo de incidencia (ngulo de resonancia), va hacia la
capa con elevado ndice de refraccin y sufre una serie de reflexiones que producen un
campo evanescente, que penetra en la muestra. Cambios en el ndice de refraccin en la
superficie debidos a la interaccin entre el analito y el elemento de reconocimiento
FIGURA 5.- Biosensor de resonancia de plasmones superficiales. El ngulo de luz incidente que excita
a los plasmones de superficie vara en funcin de la concentracin de analito que interacciona con el
elemento de reconocimiento.
producen cambios en el ngulo de resonancia que se pueden detectar y relacionar con la

concentracin de analito. Las reflexiones que se producen incrementan la sensibilidad
del mtodo con respecto a la SPR pudiendo llegar a ser 10 veces ms sensible. (8)
3.3.2.4 Onda Evanescente (Ew)

Se basa en un fenmeno conocido como reflexin interna total de fluorescencia, que
consiste en la absorcin y emisin de fotones. En este sensor una radiacin que viaja a
travs de una gua de ondas por reflexin interna total crea un campo electromagntico
denominado campo evanescente, que puede penetrar una determinada distancia desde
la superficie dependiendo del ngulo de incidencia en la interfase y la longitud de onda
de la radiacin de excitacin. Cualquier interaccin molecular que se produzca en este
campo (como la unin de un analito a un receptor inmovilizado en la superficie de la
gua de ondas) produce cambios en las caractersticas de la luz que se propaga por la
gua de ondas que pueden medirse y relacionarse con la concentracin de analito. Es
necesario utilizar marcaje con molculas con propiedades fluorescentes. Permite una
deteccin directa, rpida y selectiva del analito. (6)
Existe otro tipo de transductores basados en la onda evanescente que son los
interfermetros Mach-Zender. En estos sensores la propagacin de la radiacin se divide
en dos ramas, una de las cuales contiene el elemento de reconocimiento y la otra acta
como referencia. Estas ramas tras recorrer una cierta distancia vuelven a unirse. La
interaccin entre el analito y el elemento de reconocimiento produce cambios en el
campo evanescente que dependern de la concentracin de analito en el medio. (22)
36
TABLA 5. Caractersticas de los distintos transductores pticos
Transductor
Ventajas
Inconvenientes
Optrodos
(Fibra ptica)
Flexibilidad.
Bajo coste.
Anlisis in situ remoto.
Anlisis en tiempo real.
Fcil miniaturizacin.
Requiere marcaje.
Seal proporcional a la cantidad de analito.
Vida limitada del componente biolgico.
Fciles de usar.
Deteccin directa.
Deteccin en tiempo real.
Elevada sensibilidad.
Muestras sin purificar.
Sensibles a temperatura.
Ineficaz para diluidos
(requiere preenriquecimiento).
Ineficaz para pequeo tamao.
Elevado coste. (21)
(SPR)
Resonancia
de plasmones
superficiales
(SPR)
Resonancia Mayor sensibilidad
de espejos que SPR.
Onda
evanescente
(EW)
Detecin directa,
rpida y selectiva
del analito.
Elevado coste. (21)
Requiere marcaje.
3.3.3 Transductor Piezoelctrico

Los sistemas de transduccin piezoelctricos, msicos, gravimtricos o acsticos miden
cambios directos de masa inducidos por la formacin del complejo antgeno-anticuerpo.
Los materiales que se utilizan para el diseo de este tipo de biosensores son materiales
piezoelctricos, que son aquellos que entran en resonancia por la aplicacin de un
campo elctrico alterno externo. Estos cristales se recubren con el elemento de
reconocimiento que suele ser de bioafinidad (anticuerpos, lectinas, etc) y se ponen en
contacto con la muestra que contiene el analito que se desea detectar (14). La
frecuencia de oscilacin viene determinada por la masa del cristal, que vara cuando se
produce la interaccin entre el elemento de reconocimiento y el analito y da lugar a
una variacin en la frecuencia de oscilacin.
37
Se diferencian dos tipos principales:

Bulk acoustic wave (BW), tambin denominados quartz crystal microbalance (QCM)
o thickness slear mode. La resonancia ocurre en toda la masa del cristal.
Surface acustic wave (SAW). Ondas acsticas de superficie. La resonancia ocurre
slo en la superficie del cristal.
FIGURA 6. Biosensor piezoelctrico. Como consecuencia de la interaccin entre el elemento de

reconocimiento y el analito se produce un cambio en la frecuencia de resonancia del cristal.
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LOS BIOSENSORES PIEZOELCTRICOS.

Ventajas (21)
Deteccin directa (sin marcaje) en tiempo real de la reaccin de unin.
Anlisis on-line.
Permite varios formatos de inmunoensayo.
Fciles de usar.
Bajo coste. (5)
Inconvenientes (21) (14)

Falta de selectividad.
Tiempos de incubacin relativamente largos.
Problemas con la regeneracin de la superficie del cristal.
Nmero de pasos de lavado y secado elevado.
Puede haber dificultades para recubrir los cristales al inmovilizar el elemento de
reconocimiento.
Es necesaria la calibracin de cada cristal. (5)
Interferencias producidas cuando se usa en medio lquido.
3.3.4 Transductor Termomtrico

Los transductores termomtricos se basan en la deteccin del calor generado en las
reacciones enzimticas exotrmicas, que se puede relacionar con la concentracin de
analito. Estos cambios de temperatura normalmente se determinan por medio de
termistores a la entrada y a la salida del dispositivo en el que se encuentran
inmovilizadas las enzimas.
38
Presentan como inconveniente que pueden existir prdidas de calor por irradiacin,
conduccin o conveccin.
FIGURA 7. Biosensor termomtrico. Como consecuencia de la interaccin entre el elemento de

reconocimiento y el aalito se produce una reaccin exotrmica que es proporcional a la
concentracin de analito.
3.3.5 Transductor Nanomecnico

En los transductores nanomecnicos el elemento de reconocimiento biolgico se
inmoviliza sobre la superficie de una micropalanca de silicio, que se sumerge en una
muestra lquida. Generalmente se utilizan anticuerpos. La interaccin entre el elemento
de reconocimiento y el analito produce un cambio diferencial en la tensin superficial
del lquido y la micropalanca sufre una respuesta de tipo nanomecnico que consiste en
un cambio de la deflexin y/o de la frecuencia de resonancia. (23)
La deteccin de la respuesta nanomecnica puede hacerse de modo dinmico o de
modo esttico.
En el modo esttico, la magnitud medida es la deflexin de la micropalanca. Las
molculas receptoras se inmovilizan slo en uno de los lados de la micropalanca.
Cuando se introducen en la disolucin las molculas del analito, stas se enlazan sobre
la superficie funcionalizada, producindose un cambio de la tensin superficial de este
lado con respecto al otro lado de la micropalanca, dando lugar a un curvamiento de la
micropalanca y una deflexin del orden del nanometro. Sin embargo, la deflexin de la
micropalanca es muy sensible a cambios de temperatura debido al efecto bimetlico.
39
En el modo dinmico se mide la frecuencia de resonancia, que depende tanto del

cambio de tensin superficial como del cambio de masa. La frecuencia de resonancia es
independiente de los cambios de temperatura.
Trabajos recientes han mostrado que esta tcnica puede detectar errores de hibridacin
de una sola base en oligonucletidos y pequeos contenidos de protenas antignicas
con gran sensibilidad (24). Actualmente estos dispositivos se estn desarrollando para
detectar mutaciones y polimorfismos en genes humanos as como para la deteccin de
contaminantes en aguas con alta sensibilidad.
40
FIGURA 8. Biosensor nanomecnico. El aumento de masa producto de la interaccin entre el analito

y el elemento de reconocimiento provoca un curvamiento de la micropalanca.
CAPTULO 4
Aplicaciones de Biosensores en Agroalimentacin
Como muestra la tabla 6 las aplicaciones actuales de los biosensores en el mbito

agroalimentario se orientan hacia las siguientes reas principales: la seguridad
alimentaria, la calidad alimentaria y el control de procesos industriales.
TABLA 6. Principales reas de aplicacin de las tecnologas de biosensores dentro del campo
agroalimentario
Seguridad alimentaria
Compuesto xenobiticos
Aditivos.
Frmacos.
Plaguicidas y fertilizantes.
Otros contaminantes (dioxinas, PCBs,
HAPs, metales pesados)
Composicin del alimento

Azcares.
Aminocidos.
Alcoholes.
cidos orgnicos.
Colesterol.
Biotoxinas
Toxinas bacterianas.
Micotoxinas.
Toxinas marinas.
Vida til
Polifenoles y cidos grasos (enranciamiento).
Azcares y cidos orgnicos (madurez).
Aminas bigenas (ndice de frescura).
Microorganismos patgenos
Virus.
Bacterias.
Protozoos.
Compuestos aromticos
Alina (ajo y cebolla).
Control de procesos
42
Calidad alimentaria
Azcares (fermentacin y pasteurizacin).

Alcoholes (fermentacin alcohlica).
Aminocidos (fermentacin).
cido lctico (elaboracin de quesos).
Otras aplicaciones
OMGs.
Ciclo reproductivo animal.
4.1
Seguridad Alimentaria
El concepto de seguridad alimentaria implica garantizar la produccin y

comercializacin de alimentos que no supongan un riesgo potencial para la salud del
consumidor. En este campo los biosensores se utilizan para detectar:
Compuestos xenobiticos, es decir, sustancias externas al producto alimenticio que
no han sintetizado los seres vivos (aditivos, frmacos, plaguicidas,...).
Ciertos componentes del alimento (alrgenos y antinutrientes).
Toxinas de diversos orgenes (toxinas bacterianas, micotoxinas y toxinas marinas).
Microorganismos patgenos que afectan al hombre, al ganado y a los cultivos.
4.1.1 Aditivos Alimentarios
43
La cantidad y tipo de aditivos alimentarios incorporados a un producto se encuentran

estrechamente regulados por la legislacin comunitaria. Su deteccin y cuantificacin
son importantes para evitar posibles usos fraudulentos o malas prcticas de
fabricacin. Adems, estos compuestos pueden provocar problemas de intolerancias,
alergias u otras reacciones adversas a determinados grupos de la poblacin.
Como muestra la tabla 7 generalmente se emplean biosensores enzimticos en la

determinacin de aditivos alimentarios.
En algunos casos se han observado reacciones de interferencia que disminuyen la
eficacia de estos dispositivos. Por ejemplo, ciertos biosensores utilizados para detectar
sorbitol interaccionan tambin con otro edulcorante artificial, el xilitol. En algunos
dispositivos destinados a la determinacin del cido benzico tambin surgen
problemas de este tipo por la presencia de otros antioxidantes (BHA y propil galato).
CAPTULO 4 Aplicaciones de Biosensores en Agroalimentacin
De momento, son pocos los ejemplos de biosensores aplicados a este campo. Se han
identificado dispositivos para el anlisis de edulcorantes artificiales, aspartamo y
sorbitol, y de conservantes, cido benzico y sulfitos. En el primer caso se trata de
sustancias con efecto laxante cuando se ingieren en grandes cantidades. Al mismo
tiempo, el aspartamo contiene fenilalanina un aminocido que los enfermos
fenilcetonricos son incapaces de metabolizar y acumulan en el organismo.
TABLA 7. Ejemplos de biosensores utilizados en el anlisis de aditivos alimentarios

Tipo de
interaccin
Sistema de reconocimiento
(una o varias clases de enzimas)
Biocataltica
Biocataltica
Biocataltica
Biocataltica
Carboxil esterasa y alcohol oxidasa

Caboxipeptidasa y L-aspartasa
Peptidasa y aspartato
aminotransferasa y glutamo oxidasa
-Quimotripsina y alcohol y oxidasa
Amperomtrico
Amperomtrico
Biocataltica
Sorbitol deshidrogenasa y NAD
Amperomtrico
cido benzico (27) Biocataltica
Tirosinasa
Amperomtrico
Sulfitos (7)
Sulfito oxidasa
Amperomtrico
Analito
Aspartamo (25)
Sorbitol (26)
44
Biocataltica
Sistema de transduccin
Amperomtrico
Amperomtrico
4.1.2 Frmacos
El uso de frmacos para el tratamiento de animales, tanto con fines teraputicos como
con fines de promocin del crecimiento est muy extendido en ganadera. Como
consecuencia de este uso, pueden aparecer residuos en los alimentos de origen animal,
de ah el inters en su deteccin, tanto en los animales vivos, como en las canales o
en los productos derivados de los mismos (leche, huevos, miel, etc.). Los mtodos
tradicionales de cribado de muestras para detectar estos frmacos en ocasiones no
tienen suficiente sensibilidad, y los mtodos ms actuales como cromatografa y
espectrometra de masas requieren personal cualificado. (5)
Los biosensores desarrollados para la deteccin de este tipo de compuestos son
principalmente biosensores de bioafinidad, combinados con transductores pticos de
tipo SRP. En la tabla 8 se recogen algunos de los biosensores de resonancia de
plasmones superficiales desarrollados en los ltimos aos para la deteccin de
antibiticos y promotores del crecimiento.
TABLA 8. Ejemplos de biosensores utilizados en el anlisis de frmacos

Analito
Tejido
Referencias
Levamisol
Hgado y leche
Crooks, et al (28)
Sulfonamidas
Suero de pollo
Haasnoot, et al (29)
Penicilina G
Leche
Gustavsson, et al (30)
Nicarbacina
Hgado y huevos
McCarney, et al (31)
Aminoglucosidos
Leche desnatada
Haasnoot, et al (32)
Cloranfenicol
Leche
Gaudin, et al (33)
Sulphametacina
Orina
Akkoyun et al (34)
Residuos de -agonistas
Hgado
Traynor, et al (35)
4.1.3 Residuos de Plaguicidas y Fertilizantes

La presencia de residuos de plaguicidas y fertilizantes en productos destinados al
consumo humano es indeseable porque muchos de ellos cuentan con una toxicidad
elevada. Algunos plaguicidas tienen la capacidad de acumularse en el tejido graso
animal mientras que los nitratos, nitritos y fosfatos procedentes del empleo abusivo de
fertilizantes contaminan el medio, fundamentalmente, los acuferos subterrneos. La
tabla 9 recoge los principales biosensores utilizados en la deteccin de este tipo de
compuestos en alimentos y agua. Entre ellos los ms extendidos son los biosensores
enzimticos, dentro de los cuales se diferencian:
Dispositivos basados en la inhibicin de la actividad enzimtica. Aqu se encuentran
los biosensores que incorporan enzimas como colinesterasas (acetil y/o
butirilcolinesterasas), tirosinasas o fosfatasas alcalinas.
Unidades en las que se catalizan reacciones que afectan al analito de inters. ste es
el caso de los biosensores que incluyen hidrolasas, reductasas,...
Con respecto a los herbicidas (fenilureas, triazinas) -que actan inhibiendo la
fotosntesis- se han diseado biosensores con receptores (de membrana de tilacoides y
cloroplastos, fotosistemas, centros de reaccin) o clulas completas (algas unicelulares,
bacterias prpuras) que participan o realizan este proceso. Aqu se emplean, sobre
todo, transductores amperomtricos y pticos. (6)
Este epgrafe engloba un conjunto heterogneo de sustancias potencialmente txicas

para el hombre con un alto impacto sobre el medioambiente. Se trata de residuos
contaminantes presentes en el agua y el suelo que pueden alcanzar la cadena
alimentaria de manera accidental. Se dividen en:
Compuestos orgnicos, subproductos originados en diversos procesos industriales
(dioxinas), usados como agentes dielctricos o fluidos hidrulicos (bifenilos
policlorados o PCBs) o generados en la combustin de carbn, petrleo o madera
(hidrocarburos aromticos policclicos o HAPs). Tambin se incluyen el benceno,
tolueno y xileno (denominados BETX) y derivados fenlicos (tabla 9).
Metales pesados (arsnico, cadmio, mercurio, plomo,...) (tabla 10).
Aunque no se destinan al anlisis en matrices alimentarias, se han diseado numerosos
dispositivos para determinar los niveles de estos contaminantes en muestras del medio
ambiente. Se utilizan inmunosensores, biosensores enzimticos y biosensores con
4.1.4 Otros Contaminantes
45
clulas completas en la deteccin de los compuestos orgnicos descritos (6) (39),

mientras que para los metales pesados son mayoritarios los biosensores que incorporan
microorganismos modificados genticamente y enzimas (ureasa, colinesterasas, glucosa
oxidasa, fosfatasa alcalina, ascorbato oxidasa, peroxidasa,...) (40). En ambos casos los
sistemas de transduccin destacados son los electroqumicos y los pticos.
TABLA 9. Biosensores utilizados en la deteccin de plaguicidas, fertilizantes y otros contaminantes.
(5) (6) (7) (36)
Tipo de
interaccin
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Paration
Biocataltica
Paration hidrolasa
Amperomtrico
Propoxur y carbaril (37)
Biocataltica
Acetilcolinesterasa
Fibra ptica
Diazinn y diclorvs
Biocataltica
Tirosinasa
Amperomtrico
Paraoxn
Biocataltica
Fosfatasa alcalina
ptico
DDT (24)
Bioafinidad
Anticuerpo
Nanomecnico
Terbutilazina (38)
Bioafinidad
Anticuerpo
LAPS
Atrazina
Bioafinidad
Anticuerpo
Amperomtrico
Atrazina y 2, 4-D
Bioafinidad
PIMs
Electroqumico
Nitrato
Biocataltica
Nitrato reductasa
Amperomtrico
Nitrito
Biocataltica
Nitrito reductasa
ptico
Fosfato
Biocataltica
Polifenol oxidasa y fosfatasa alcalina Amperomtrico

Fosforilasa A, fosfoglucomutasa
y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
Analito
Plaguicidas
Fertilizantes
46
Contaminantes orgnicos
Precursos de dioxinas* (41) Bioafinidad
Anticuerpo
SPR
PCBs
Bioafinidad
Anticuerpo
Electroqumico
Fibra ptica
HAPs
Bioafinidad
Anticuerpo
Electroqumico
BETX
Biocataltica
E. coli recombinante
ptico
Compuestos fenlicos**
Biocataltica
Tirosinasa
Amperomtrico
Cobre y mercurio
Biocataltica
Spirulina subsalsa
Amperomtrico
Cobre
Biocataltica
Saccharomyces cerevisiae
recombinante
Amperomtrico
Cadmio y plomo
Biocataltica
Staphylococcus aureus o Bacillus

subtilis recombinantes
ptico
Arsnico, cadmio y bismuto Biocataltica
Colinesterasas
Electroqumico
Cadmio, cobre, cromo,

niquel, zinc
Biocataltica
Ureasa
ptico
Cobre y mercurio
Biocataltica
Glucosa oxidasa
Amperomtrico
Metales pesados
* 2,4-diclorofenol.
** Fenol, catecol, p-cresol, p-clorofenol, dopamina, p-metoxifenol y 1,4-benzoquinona.
4.1.5 Componentes del Alimento

Los factores antinutricionales y los alrgenos son compuestos presentes de forma
natural en el alimento que pueden ocasionar trastornos en el organismo. Los primeros
dificultan o impiden la absorcin y metabolizacin de distintos nutrientes produciendo
un dficit de los mismos. En cambio, los alrgenos desencadenan una respuesta inmune
en personas hipersensibles.
En la tabla 10 se recogen algunos ejemplos de biosensores aplicados a este campo.
TABLA 10. Biosensores utilizados en la deteccin de antinutrientes, y alrgenos.
Tipo de
interaccin
Sistema de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Oxalato
(espinacas, t, fresas)
Biocataltica
Oxalato oxidasa
Amperomtrico
Amigdalina
(almendras amargas)
Biocataltica
-blucosidasa y otras
Amperomtrico
Potenciomtrico
Glucoalcaloides
Biocataltica
Colinesterasas
Potenciomtrico
Del cacahuete
Bioafinidad
Anticuerpo
SPR
De la avellana
Bioafinidad
Anticuerpo
SPR
Gluten
Bioafinidad
Anticuerpo
Electroqumico
ptico
Piezoelctrico
Analito
Antinutrientes
47
Alrgenos
4.1.6 Biotoxinas
En los alimentos pueden aparecer toxinas que pueden relacionarse con cuadros de
intoxicacin alimentaria. Estas toxinas pueden proceder del crecimiento de bacterias,
de hongos (micotoxinas) o por contaminacin de productos de origen marino
(ficotoxinas). Al igual que ocurre con los patgenos de alimentos es necesario un
conocimiento rpido de su presencia en los alimentos con el fin de conseguir una
proteccin del consumidor adecuada.
La mayor parte de estas toxinas son compuestos de naturaleza proteica y su anlisis
suele ser complejo, ya que su deteccin y caracterizacin suele implicar procesos de
extraccin y purificacin que requieren tiempos relativamente largos e incluso ensayos
en animales, como el ensayo de ratn. Los biosensores podran ser una alternativa ya
que no es necesaria la purificacin de los compuestos.
Aptmero
Pueden utilizarse biosensores basados en reacciones de bioafinidad, mediante sntesis

de anticuerpos especficos contra estas toxinas o bien en reacciones biocatalticas, ya
que muchas de estas toxinas son inhibidores enzimticos.
Los biosensores aplicados a la deteccin de biotoxinas se recogen en la tabla 11.
TABLA 11. Biosensores utilizados en la deteccin de biotoxinas
Elemento
de reconocimiento
Sistema
de transduccin
Referencia
Enterotoxina A
estafiloccica
Anticuerpos
Onda evanescente
Rasooly, et al (45)
Enterotoxina B
Anticuerpos
SPR
Fibra ptica
Piezoelctrico
Slavk, et al. (46)

King, et al. (47)
Lin, et al. (48)
Toxina A de
Clostridium
botulinum
Anticuerpos
Fibra ptica
(6)
Toxina colrica
Anticuerpos
Receptores
(gangliosidos)
QCM
Onda evanescente
Spangler, et al. (49)

Rowe-Taitt, et al. (12)
Enterotoxina
Anticuerpos
termolbil de E. coli
QCM
Spangler, et al. (49)
Micotoxinas de
Anticuerpos
Fusarium y
Aspergillus
(zearalenona, DON
fuminisina B1 y
aflatoxin B1)
SPR
Gaag, et al. (50)
Fumonisina
Anticuerpos
SPR
Mullett, et al. (51)
Aflatoxinas
Anticuerpos
Biosensor fluorimtrico Velasco-Garca (5)

de inmunoafinidad
Fibra ptica
Mello, et al. (7)
Toxina
Bacteriano
Origen
Fngico
48
Marino
Toxinas paralizantes Canales de sodio

(PSP)
Electroqumico
Cheun, et al. (13)
cido okadoico
QCM
Tang, et al. (52)
Electroqumico
Kreuzer, et al. (53)
Anticuerpos
cido okadoico,
Anticuerpos
brevetoxina, cido
domoico y
tetrodotoxina
4.1.7 Microorganismos Patgenos

El aumento en los ltimos aos de toxiinfecciones producidas por bacterias
patgenas ha incrementado la necesidad de mtodos de deteccin ms rpidos,
sensibles y especficos. En la actualidad se utilizan mtodos basados en anticuerpos
y en ADN, que han permitido acortar el tiempo de anlisis pero no una deteccin en
tiempo real. (21)
Frente a estos mtodos de anlisis, los biosensores tienen el potencial de que permiten
la deteccin en tiempo real, pero presentan como inconveniente que, en caso de un
nmero bajo de microorganismos, es necesario hacer un pre-enriquecimiento o una
concentracin de la muestra, con el consiguiente aumento del tiempo de anlisis.
Los biosensores que existen para detectar microorganismos patgenos en alimentos
(tabla 12) son principalmente de tipo inmunolgico combinados con transductores
piezoelctricos, pticos, bioluminiscentes o de impedancia, que permiten una
deteccin directa sin marcaje de la interaccin antgeno-anticuerpo. (5) (54)
Existen tambin biosensores que permiten una deteccin indirecta de los
microorganismos, entre los que se incluye deteccin mediante marcaje con
fluorescencia, deteccin de metabolitos microbianos y deteccin electroqumica.
Aunque no se trata de un patgeno de origen alimentario en sentido estricto, existe un

gran inters en la deteccin de Bacillus anthracis (tanto sus esporas como la toxina que
produce esta bacteria) debido a la posibilidad de ataques bioterroristas como los envos
de cartas con esporas de ntrax que se produjeron a partir del 11 de septiembre de
2001. La deteccin de este agente mediante biosensores permitira actuaciones
rpidas.
Un ejemplo de biosensores que permite detectar este microorganismo es el sensor
denominado cellular analysis and notification of antigen risks and yields (CANARY en
sus siglas en ingls). El elemento de reconocimiento son linfocitos B modificados
genticamente para expresar una protena bioluminiscente sensible al calcio y
anticuerpos de membrana especficos para el patgeno de inters. Cuando se produce la
unin entre el patgeno y los anticuerpos de membrana se elevan los niveles
intracelulares de calcio y la protena bioluminiscente emite luz que puede ser
cuantificada. (56)
Un grupo de biosensores muy importantes en la deteccin de microorganismos

patgenos son los biosensores basados en ADN. Asimismo, es posible la aplicacin de
estos dispositivos en sanidad animal para determinar la presencia de microorganismos
patgenos en sangre. Por ejemplo, pueden detectarse varias cepas de Salmonella en
pollos infectados gracias a un biosensor de SPR. (55)
49
4.1.8 Otros Agentes Patgenos
Adems de las bacterias patgenas las tecnologas de los biosensores se aplican a otros
agentes infecciosos entre los que se incluyen los virus que afectan a cultivos y ganado
as como ciertos parsitos entricos (protozoos) transmitidos por las aguas de riego
contaminadas. En la tabla 13 se muestran algunos de ellos.
50
Se experimenta con inmunosensores para la deteccin de virus tan importantes como el

de la peste porcina africana (57) o el de la fiebre aftosa (58) en suero u otros fluidos
(saliva, orina, leche). Estos sistemas de anlisis permiten identificar de forma rpida y
econmica los animales infectados asintomticos; gracias a ello, se evita la
propagacin de la enfermedad al resto del rebao. Tambin se investiga su utilizacin
para algunos virus que afectan a las plantas. (59)
En cuanto al anlisis de parsitos entricos los datos encontrados se limitan a muestras
de agua aunque las infecciones que causan estos protozoos pueden originarse a partir
del consumo de productos vegetales o animales infectados crudos o poco cocinados.
TABLA 12. Biosensores utilizados en la deteccin de microorganismos patgenos.
(5) (6) (8) (14) (21)
Sistema
de transduccin
Elemento
de reconocimiento
Electroqumico
Anticuerpos
S. typhimurium, E. coli 0157:H7

Campylobacter, S. aureus
Light-addresable
potentiometric sensor
(LAPS)
Anticuerpos
S. typhimurium, E. coli 0157:H7

B. subtilis, Y. Pestis, Neisseria meningitidis,
Brucella melitensis
Impedimtrico
Microorganismo
Salmonella, Proteus vulgaris
Piezoelctrico tipo QCM
Anticuerpos,
receptores
protena A
Vibrio cholerae, S. enteritidis,

S. typhimurium, Listeria monocytogenes,
Candida albicans, Campylobacter, E. coli,
Shigella dysenteriae, Yersinia pestis,
Proteus, Serratia, Klebsiella
Piezoelctrico tipo SAW
Anticuerpos
E. coli, Legionella, Salmonella
Nanoelectromecnico
Anticuerpos
E. coli 0157:H7
SPR
Anticuerpos
E. coli 0157:H7, Salmonella enteritidis,

Listerio monocytogenes, B. subtilis
Resonancia de espejos
Anticuerpos
S. aureus
Bioluminiscencia
Mycobacterium avium, M. paratuberculosis,

Salmonella, Listeria
FIA (Fluorescent
immunoassays)
Anticuerpos
S. typhimuriu, Yersinia, V cholerae, E. coli
Interferometra ptica
Anticuerpos
Salmonella typhimurium
Fibra ptica
Anticuerpos
E. coli 0157:H7, S. aureus
TABLA 13. Biosensores utilizados para la deteccin de virus y protozoos

Agente
patgeno
Tipo de
interaccin
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Virus de la peste porcina africana
Bioafinidad
Anticuerpo
Piezoelctrico
Virus de la fiebre aftosa
Bioafinidad
Anticuerpo
Piezoelctrico
Virus de la diarrea viral bovina
Bioafinidad
Anticuerpo
ptico
Virus del mosaico del tabaco
Bioafinidad
Anticuerpo
SPR
Cryptosporidium (60)
Bioafinidad
Oligonucletido
Electroqumico
Piezoelctrico
Cryptosporidium y Giardia
Bioafinidad
Anticuerpo
Onda
evanescente
Virus
Protozoos
51
4.2
Calidad Alimentaria
La calidad alimentaria se puede entender como aquellos factores que diferencian los
productos de acuerdo con sus caractersticas organolpticas, de composicin o con sus
propiedades funcionales.
El anlisis de la composicin de los alimentos permite caracterizarlos y comprobar si
contienen las cantidades que se requiere de los distintos componentes, tanto para
aquellos que se encuentran de manera natural en los alimentos como para otros
compuestos que se aaden para su enriquecimiento, como es el caso de algunas
vitaminas o minerales.
A continuacin se muestra la tabla 14 en la que se recogen los distintos biosensores
desarrollados para evaluar la composicin de los alimentos incluyendo aquellos que se
utilizan para evaluar la presencia y contenido de componentes normales del alimento
(contenido en etanol, glucosa, almidn) y de otros que se aaden como vitaminas,
aminocidos, etc.
TABLA 14. Biosensores aplicados a la evaluacin de la calidad de los alimentos
52
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Mosto, vino, zumo, bebidas

refrescantes, miel, leche y yogur
Glucosa oxidasa
Amperomtrico
Fructosa
Zumo, miel, leche, gelatina

y edulcorantes artificiales
Fructosa deshidrogenasa
Amperomtrico
Lactosa
Leche
-galactosidasa
Amperomtrico
Lactato
Sidra y vino
Transaminasa y lactato
deshidrogenasa
Amperomtrico
Lactulosa
Leche
Fructosa deshidrogenasa
y -galactosidasa
Amperomtrico
Almidn
Harina de trigo
-amilasa y amiloglucosidasa Amperomtrico

y glucosa oxidasa
L-aminoacidos
Leche y zumo de frutas
Aminocido oxidasa
L-glutamato
Salsa de soja y condimentos
Glutamato oxidasa
Amperomtrico
L-lisina
Leche y pasta
Lisina oxidasa
Amperomtrico
L-malato
Vino, sidra y zumos
Malato deshidrogenasa
y otras
Amperomtrico
Etanol
Cerveza, vino y otras

bebidas alcohlicas
Alcohol oxidasa
Amperomtrico
Glicerol
Vino
Glicerofosfato oxidasa
y glicerolquinasa
Amperomtrico
Analito
Matriz
Glucosa
Amperomtrico
TABLA 14. Biosensores aplicados a la evaluacin de la calidad de los alimentos (cont.)
Analito
Matriz
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Catecol
Cerveza
Polifenol oxidasa
Amperomtrico
Colesterol
Mantequilla, manteca y huevo
Colesterol oxidasa
y peroxidasa
Amperomtrico
cido ctrico
Zumo y bebidas para deportistas Citrato liasa
Amperomtrico
cido flico
Alimentos fortificados
Anticuerpos
SPR
Biotina y folatos
Frmulas infantiles y leche
Anticuerpos
SPR
Lecitina
Yema de huevo y harina

y aceite de soja
Fosfolipasa D y colina
oxidasa
Electroqumico
La evaluacin de la composicin permite tambin conocer la frescura de algunos

productos, como carnes, pescados, frutas y verduras. Durante el almacenamiento de los
productos se sintetizan distintos compuestos que dan sabores y aromas anormales,
como los compuestos que se producen por la degradacin de las grasas o las aminas
que aparecen durante el deterioro del pescado y la carne, que en ocasiones pueden ser
perjudiciales para la salud y se pueden utilizar como ndices de frescura.
53
El ndice de frescura se relaciona con la calidad sanitaria del alimento, ya que los
alimentos sirven como medio de crecimiento para distintos microorganismos, que
pueden ocasionar toxiinfecciones alimentarias o desarrollar toxinas. Por tanto, un
ndice de frescura bajo indica una mayor probabilidad de crecimiento microbiano y una
menor seguridad del alimento.
Existen otros compuestos que dan lugar a la aparicin de sabores y aromas

desagradables como es el caso del 2,4,6-tricloroanisol en los vinos (62), que es un
compuesto de origen microbiano relacionado con los corchos que tapan las botellas y
cuya presencia causa grandes prdidas en la industria vitivincola.
En otros casos, se pueden detectar indicadores del proceso al que ha sido sometido el
alimento, como es el caso de la lactulosa, que es un disacrido que se forma en el
tratamiento trmico de la leche y permite diferenciar entre leche sometida a una
tratamiento UHT y leche esterilizada en el envase.
A continuacin se muestra una tabla en la que se recogen los distintos biosensores
desarrollados para evaluar la frescura y la vida til de los alimentos.
En el caso de frutas se puede analizar el contenido de algunos cidos orgnicos y

azcares que son indicadores de la madurez de las mismas.
TABLA 15. Biosensores utilizados en la evaluacin de la vida til (62) (7)
Matriz
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Polifenoles
Aceite de oliva
Tirosinasa
Amperomtrico
cidos grasos
de cadena corta
Leche y derivados
Lipasa
Electroqumico
Orinitina y aminas Gambas
Ornitina carbamil transferasa,

nuclesido fosforilasa
y xantina oxidasa
Amperomtrico
Aminas
Pescado
Diamina oxidasa
Amperomtrico
Aminas bigenas
Pescado
Amina oxidasa y peroxidas
Amperomtrico
Histamina
Pescado
Amina oxidasa
Amperomtrico
Hipoxantina
Pescado
Xantina oxidasa
Amperomtrico
Aminas
Frutas y verduras
Diamina oxidasa
Poliamina oxidasa
Amperomtrico
Carne
Xantina oxidasa
Carne
Enzimtico
Amperomtrico
Glucosa
Frutas
Glucosa oxidasa
Electroqumico
Sacarosa
Frutas
Invertasa, mutarotasa
y glucosa oxidasa
Electroqumico
Isocitrato
Frutas
Isoctrico deshidogenasa
Potenciomtrico
Anticuerpos
Electroqumico
Analito
Evaluacin del
enranciamiento
ndice de frescura
cido lctico
Evaluacin
de la madurez
54
Evaluacin
del deterioro
2,4,6-tricloroanisol Vino
4.3
Control de Procesos
Los sistemas de monitorizacin continua de un proceso industrial permiten detectar en

tiempo real los posibles errores de la cadena de produccin para subsanarlos de manera
inmediata. Hasta el momento se han utilizado en el control de parmetros como el pH,
la temperatura, la presin, etc. Gracias a las tecnologas de biosensores ahora tambin
pueden determinarse y cuantificarse on line diversos compuestos de gran importancia
como (tabla 16):
Azcares: fuentes de carbono y factores limitantes del crecimiento de las levaduras
que participan en los procesos fermentativos (glucosa). Concentraciones bajas de los
mismos disminuyen la productividad del biorreactor. Otro ejemplo es la aparicin de
lactulosa que indica un tratamiento trmico excesivo de la leche durante la
pasteurizacin. (43)
Alcoholes: productos finales de la fermentacin alcohlica (cerveza, vino). Con
respecto al etanol las reacciones enzimticas se inhiben cuando su cantidad supera
el 14%. Por otra parte, la proporcin de glicerol debe mantenerse en 1:10 respecto al
alcohol total si no hay alteraciones indeseables durante el proceso. (64)
55
Otras molculas: aminocidos (lisina) obtenidos por fermentacin y empleados como

suplementos en piensos animales, cido lctico para controlar la acidez y formacin
de la corteza de quesos.
Tipo
de interaccin
Elemento de
reconocimiento
Sistema de
transduccin
Glucosa
Biocataltica
Glucosa oxidasa
Amperomtrico
Lactosa
Biocataltica
-Galactosidasa y glucosa oxidasa
Lactulosa
Biocataltica
-Galactosidasa y fructosa deshidrogenasa
Etanol
Biocataltica
Alcohol deshidrogenasa
Gluconobacter oxydans
Amperomtrico
Glicerol
Biocataltica
Gliceroquinasa y glicerol-3-P-oxidasa
Amperomtrico
L-lisina
Biocataltica
Lisina oxidasa
Amperomtrico
cido lctico
Biocataltica
Lactato oxidasa
Amperomtrico
Analito
Azcares
Alcoholes
Otros
TABLA 16. Compuestos monitorizados en tiempo real mediante las tecnologas de los biosensores. (7)
La utilizacin de biosensores para la monitorizacin en tiempo real de los analitos

citados supone menores prdidas econmicas para el fabricante. Adems, estos
dispositivos pueden integrarse en el sistema APPCC (Anlisis de Peligros y Puntos de
Control Crticos) y verificar que el proceso se ha realizado correctamente.
A pesar de todo, esta tecnologa ve limitado su uso en el control de procesos por varios
motivos. El corto tiempo de vida de los sensores enzimticos, la necesidad de
calibrarlos con frecuencia, la falta de una respuesta fiable a diferentes concentraciones
o con condiciones variables en el medio son algunos de ellos. (65)
56
4.4
Otras Aplicaciones
4.4.1 Organismos Modificados Genticamente

La legislacin que regula los organismos modificados genticamente (OMGs) vara de
un pas a otro. En concreto, en Europa es obligatorio el etiquetado de ciertos productos
que contengan OMGs o derivados de stos. Un OMG se define como un organismo vivo
en cuyo genoma se ha introducido material gentico exgeno que codifica para
determinadas protenas. Dichas protenas le confieren nuevas caractersticas de inters
agronmico como, por ejemplo, tolerancia a herbicidas, resistencia a virus, insectos,...
El ADN introducido incorpora determinadas secuencias -regin promotora y regin de
terminacin- que regulan la expresin de los genes forneos. Basndose en ello se han
diseado biosensores de cidos nucleicos complementarios a estas regiones y, por
tanto, capaces de hibridar con ellas, una vez que el material gentico de la muestra ha
sido aislado y amplificado por PCR.
57
Los biosensores ms comunes en la deteccin de OMGs combinan ADN con
transductores piezoelctricos (QCM) y pticos (SPR). (66) (67)
4.4.2 Ciclo Reproductivo Animal
Las tecnologas de biosensores permiten monitorizar en tiempo real la cantidad de

progesterona en leche fresca. Segn la concentracin de esta hormona sexual no slo
puede determinarse el celo sino tambin si estn preadas o hay problemas de fertilidad
en las hembras. Los dispositivos empleados en este caso son inmunosensores con
sistemas de transduccin amperomtricos y pticos. Adems, la incorporacin de estas
unidades de anlisis en el manejo animal abarata considerablemente los costes. (5)
La tcnica de inseminacin artificial tan frecuente en produccin animal requiere de un

conocimiento preciso de los perodos de celo de las hembras. Hasta ahora esta etapa
del ciclo reproductivo se predeca bien por observacin del ganado bien a partir de
ensayos ELISA. Esta ltima opcin cuenta con una elevada especificidad (98%) pero
consume mucho tiempo y necesita personal cualificado, que normalmente no se
encuentra en una granja.
CAPTULO 5
Retos y tendencias en Tecnologas de Biosensores
A pesar de la gran cantidad de investigaciones sobre tecnologas de biosensores en

agroalimentacin los productos comercializados son escasos. Con el fin de optimizar los
prototipos experimentales existentes se trabaja para corregir sus limitaciones tcnicas.
En el apartado 2.2 de este informe se detallan las principales caractersticas que cabra
esperar de los mismos como potenciales sustitutos parciales de las tcnicas de anlisis
convencionales.
Segn el tipo de biosensor (la naturaleza del elemento de reconocimiento y el sistema

de transduccin elegido) y la aplicacin a la que se destine los requisitos que debe
cumplir el dispositivo varan. As, en algunos casos puede interesar especialmente una
mejora de la selectividad y sensibilidad del sensor mientras que en otros se trate del
tiempo de respuesta o la capacidad de regeneracin de la superficie de interaccin.
Un nmero importante de lneas de investigacin en tecnologas de biosensores aborda
los siguientes aspectos (6) (7):
Miniaturizacin de estos dispositivos hasta una escala de micro y nanometros.
Diseo de biosensores reutilizables de manera que un mismo sistema pueda llevar a
cabo varios anlisis sin prdida de sensibilidad.
Desarrollo de unidades con capacidad para detectar diversos analitos
simultneamente.
60
Estudio de nuevos elementos de reconocimiento que mimeticen las molculas

biolgicas con un tiempo de vida y una estabilidad mayores.
Avances en los procedimientos de inmovilizacin que eviten o minimicen las
alteraciones del elemento de reconocimiento durante este proceso.
Aparte de estos desarrollos, otras reas de estudio se centran en ampliar los
conocimientos sobre los fenmenos implicados en las reacciones qumicas entre el
elemento de reconocimiento y el analito. Como resultado se ha logrado mejorar la
transmisin de la seal producida por la interaccin analito-enzima. Para ello se han
sintetizado artificialmente molculas que actan como mediadores en dichas reacciones
y que son ms eficaces y estables que sus anlogos naturales.
Tambin se investigan el empleo de materiales novedosos (polmeros conductores) para
la construccin de biosensores y nuevas tcnicas de fabricacin (fotolitografa, etching,
screen-printing). (18)
5.1
Miniaturizacin
A la reduccin de las dimensiones de los biosensores han contribuido los

procedimientos de microfabricacin, la nanotecnologa y la microelectrnica as como
los constantes avances en el campo de los dispositivos microfludicos o lab-on-achip. Estos chips incorporan funciones que los biosensores no abordan. Por ejemplo,
los lab-on-a-chip no slo llevan a cabo el anlisis sino tambin la preparacin de la
muestra. (68)
Gracias a su menor tamao se ha incrementado el nmero de posibles aplicaciones de
los biosensores, especialmente, entre aquellas en las que el espacio fsico, el volumen
de muestra o la localizacin del anlisis son limitados. Adems, estructuras de
dimensiones reducidas pueden integrarse en sistemas ms complejos que lleven a cabo
diversas tareas a la vez (sistemas multisensores). Tambin permiten disponer de
dispositivos analticos porttiles para ensayos in situ.
Muchos de estos dispositivos de pequeas dimensiones se componen de un elemento
de reconocimiento biocataltico combinado con un microtransductor (transistores de
efecto de campo ion selectivos o ISFET, microelectrodos de oxgeno y perxido de
hidrgeno, electrodos de fibra de carbono,...). (7)
61
CAPTULO 5 Retos y tendencias en Tecnologas de Biosensores
5.2
Regeneracin
Otra caracterstica deseable en un biosensor es la regeneracin sin prdida de

sensibilidad de la superficie donde sucede la interaccin con el compuesto de inters.
Para ello es necesario que haya elementos de reconocimiento libres donde puedan
unirse las nuevas molculas de analito tras la primera determinacin. Esto permite
realizar varios anlisis consecutivos. Hay ejemplos de este tipo de dispositivos en el
campo del control de procesos, en concreto, en la monitorizacin de metanol y etanol
en bebidas alcohlicas.
62
Se han diseado sensores amperomtricos cuyos electrodos se regeneran con un simple

pulido de su superficie. Entre las matrices utilizadas para el atrapamiento del elemento
de reconocimiento se encuentran las matrices electrdicas compsitas rgidas de
grafito-tefln y de grafito-resina epoxi.
Su construccin resulta bastante sencilla ya que las enzimas y los mediadores de las
reacciones se introducen en la matriz que compone el electrodo. Una vez finalizado el
primer ensayo, la superficie del mismo se pule quedando disponibles los puntos de
interaccin del elemento de reconocimiento para el siguiente anlisis. (69)
5.3
Multi-Anlisis
Es interesante contar con unidades que detecten simultneamente varios analitos

puesto que su empleo supone un ahorro econmico y de tiempo considerables. Esta
alternativa se aplica en el control de distintos azcares y alcoholes en procesos
fermentativos y en la determinacin de diversos plaguicidas en muestras de agua y
suelo.
En este ltimo caso, se han desarrollado sensores biocatalticos para detectar
organofosforados y carbamatos. Se trata de dispositivos multienzimticos que operan
con varias acetilcolinesterasas obtenidas de microorganismos modificados
genticamente. Cada una de ellas muestra una afinidad diferente hacia los analitos
estudiados y tienen capacidad para discriminar entre compuestos de la misma
naturaleza qumica. (70)
Otros desarrollos similares aptos para realizar ensayos multianalito son los biochips o
microarrays de ADN. Se trata de dispositivos que incluyen diversos fragmentos de
material gentico inmovilizados sobre un soporte slido que puede estar asociado a un
sistema de transduccin, en cuyo caso se tratara de un biosensor, o no. Estos
dispositivos permiten detectar varios analitos (plaguicidas, microorganismos, OMGs,...)
a la vez segn las secuencias de ADN seleccionadas. (68)
63
5.4
Molculas Biomimticas
La incorporacin de componentes biolgicos en un biosensor implica un control de las

condiciones ambientales durante la fabricacin, uso y almacenamiento del dispositivo.
An as no resulta sencillo alcanzar el mximo rendimiento del sistema. En general, se
trata de elementos con una vida til corta, que pueden sufrir alteraciones en las etapas
de aislamiento e inmovilizacin o en medios cambiantes (por ejemplo, durante la
monitorizacin de un proceso industrial). Adems, en algunos casos no se han
detectado molculas en la naturaleza capaces de interaccionar especficamente con
determinados txicos o bien su obtencin resulta demasiado costosa.
64
Frente a estos componentes biolgicos se encuentran las molculas biomimticas,

sintetizadas de forma artificial y con una estabilidad qumica y mecnica superior. En
teora, estos elementos pueden disearse para cualquier tipo de analito. Presentan una
sensibilidad y selectividad elevadas y pueden producirse a gran escala con un coste bajo.
Entre las molculas biomimticas utilizadas en las tecnologas de biosensores destacan
los PIMs, los PNAs y los aptmeros, descritos en el punto 3.1.2 de este informe.
5.5
Nuevas Tcnicas de Inmovilizacin
Dentro de las fases de fabricacin de un biosensor una de las ms problemticas es la

inmovilizacin del elemento de reconocimiento. Los procedimientos utilizados hasta
ahora afectan en mayor o menor grado a la estabilidad y capacidad analtica del
biosensor.
Con el objetivo de minimizar estos inconvenientes se investigan mecanismos
alternativos de inmovilizacin. Tecnologas como la sol-gel, las pelculas polimerizadas
por plasma, las monocapas autoensambladas, las membranas de bicapas lipdicas y las
partculas magnticas bacterianas comienzan a emplearse en el campo de los
biosensores.
En el proceso sol-gel se parte de un precursor (sales inorgnicas de metales o
compuestos organometlicos) que se somete a reacciones de hidrlisis y polimerizacin
hasta que da lugar a una suspensin coloidal o sol (partculas con un dimetro de nm
inmersas en una fase lquida).
65
Dicha suspensin se deposita sobre la superficie a recubrir mediante diversos mtodos

(pulverizacin, centrifugado,...) donde las partculas condensan en una nueva fase
(gel) formando una capa muy fina. Posteriormente, se procede a la densificacin de la
pelcula mediante un tratamiento trmico suave que da lugar a una matriz slida
porosa.
Una disolucin de los elementos de reconocimiento correspondientes (enzimas,

anticuerpos) se aade durante la transicin de sol a gel. Como resultado estos
componentes biolgicos quedan retenidos en las cavidades de la matriz. La tecnologa
sol-gel se ha utilizado, por ejemplo, en la fabricacin de un biosensor amperomtrico
que detecta compuestos fenlicos a travs de la enzima tirosinasa inmovilizada en una
matriz de derivados de titanio. (71)
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA INMOVILIZACIN SOL-GEL

Ventajas
Es un procedimiento que se lleva a cabo a temperaturas prximas a la ambiente lo que
reduce el riesgo de alteraciones trmicas en los componentes biolgicos. Hasta ahora,
nicamente los recubrimientos de polmeros orgnicos eran compatibles con la fabricacin
a baja temperatura.
Da lugar a matrices muy homogneas y de alta pureza.
Pueden obtenerse pelculas de pequeo grosor (40-2000 nm).
El analito difunde sin dificultad en el interior de la matriz y accede fcilmente al elemento
de reconocimiento.
Inconvenientes
66
Algunos de los compuestos qumicos implicados en la formacin de la pelcula pueden

desnaturalizar los elementos de reconocimiento.
La matriz puede sufrir problemas de contraccin y fracturas que daen la estructura y la
capacidad de respuesta del transductor.
La polimerizacin asistida por plasma consiste en generar un gas altamente ionizado

-denominado plasma- mediante una descarga electromagntica a baja temperatura y en
condiciones de vaco. En este estado el gas es muy reactivo y su energa desencadena
la polimerizacin de monmeros gaseosos en lminas de pequeo espesor (nm). Gracias
al plasma esta pelcula slida (plasma polymerized film o PPF) se deposita fcilmente
sobre la superficie de cualquier material sin que ste se altere.
Las caractersticas del recubrimiento obtenido dependen del monmero seleccionado y
sus grupos funcionales con los que interaccionan los elementos de reconocimiento.
Esta tecnologa se aplica en la fijacin de anticuerpos en transductores de tipo QCM y
SPR. (18)
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LA POLIMERIZACIN ASISTIDA POR PLASMA

Ventajas
Puede controlarse el espesor de la pelcula formada y obtenerse recubrimientos de menos
de 50 nm de grosor.
Las PPFs presentan una adhesin fuerte al material base.
Son lminas homogneas, no porosas y estables qumica y mecnicamente.
Este procedimiento es aplicable a numerosos monmeros orgnicos y materiales base
(metales, cristales,...). Por tanto, aumentan los grupos funcionales disponibles para la
unin de los elementos de reconocimiento.
Es compatible con la produccin a gran escala y los procesos de miniaturizacin.
Inconvenientes
Es un proceso costoso y el control de fabricacin resulta bastante complejo.
El biosensor obtenido mediante esta tcnica tiene una baja repetibilidad porque resulta
complicado obtener dos PPFs con idnticos grupos funcionales y entrecruzamientos.
Las monocapas autoensambladas (self-assemble monolayers o SAMs) se forman a

partir de la organizacin espontnea de molculas con ciertos grupos funcionales,
principalmente grupos tiol, sobre la superficie de un metal. Estos grupos tiol se fijan al
sustrato que se desea cubrir a travs de un mecanismo de adsorcin qumica y el resto
de la molcula establece uniones electrostticas, estricas, de Van der Waals,... con sus
vecinas.
Las monocapas moleculares obtenidas se ponen en contacto con una disolucin que
contenga los componentes biolgicos a inmovilizar. La interaccin de los elementos de
reconocimiento con las molculas autoensambladas se produce a travs de grupos
funcionales -distintos de los que las unen al metal- que se han activado previamente
con diversos compuestos qumicos.
En esta tcnica se utilizan con bastante frecuencia alcanotioles como componentes de
la monocapa adsorbidos en pelculas de oro. Por ejemplo, se ha desarrollado un
inmunosensor piezoelctrico para la deteccin de E.coli con estas caractersticas. (72)
Actualmente se investigan otras opciones como cidos carboxlicos y difosfatos que
podran presentar propiedades de adsorcin frente a los metales interesantes.
67
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LAS MONOCAPAS AUTOENSAMBLADAS
Ventajas
Inconvenientes
Se trata de una tecnologa en desarrollo sobre la que se desconocen algunos aspectos como
qu parmetros influyen en cada una de las etapas de preparacin de la monocapa.
Resulta bastante complicado depositar la misma cantidad de elementos de reconocimiento
en cada transductor; esto supone que los biosensores comerciales no seran totalmente
homogneos.
El empleo de membranas de bicapas lipdicas (bilayer lipid membranes o BLMs) en la

construccin de biosensores no es algo reciente. Sin embargo, los problemas de
estabilidad mecnica y conductividad inica de este mtodo de inmovilizacin han
limitado su uso en este campo.
Recientemente se investigan estructuras alternativas basadas en las BLMs que no
presentan estos inconvenientes. Para mejorar la estabilidad se han diseado membranas
Son capas con una estabilidad elevada.

Permiten controlar la distribucin espacial del elemento de reconocimiento sobre la
superficie del transductor.
Los componentes biolgicos pueden situarse muy prximos al sistema de transduccin; esto
sucede cuando se seleccionan, por ejemplo, alcanotioles de cadena corta.
Su obtencin es sencilla; basta con baar la superficie del transductor con una disolucin
que contenga las molculas que generarn la monocapa.
unidas directamente a un soporte slido (solid supported bilayer lipid membranes o sBLMs). Cuentan con una SAM de alcanotioles y/o tiolpidos adsorbida sobre la superficie
del transductor ms una monocapa lipdica que interacciona con ella.
Con respecto a la baja conductividad inica se trabaja con molculas voluminosas que se
fijan al soporte, por un extremo, y a la bicapa lipdica mediante enlaces covalentes, por
el otro. Esta disposicin (tethered bilayer lipid membranes o t-BLMs) crea un pequeo
espacio entre la superficie slida y la membrana que sirve de reservorio acuoso. Gracias a
l, la corriente de iones generada por la interaccin entre el elemento de reconocimiento
y el analito puede alcanzar con facilidad el sistema de transduccin. (73)
VENTAJAS E INCONVENIENTES DE LAS MEMBRANAS DE BICAPAS LIPDICAS

Ventajas
Permiten inmovilizar de manera sencilla los elementos de reconocimiento biolgicos,
especialmente enzimas y receptores de membrana as como otros intermediarios
relacionados con ellos (canales inicos, protenas asociadas, etc).
Proporcionan un entorno ptimo para los componentes biolgicos que reduce el riesgo de
desnaturalizacin y prdida de actividad.
En general, la generacin de seales elctricas y su transduccin puede medirse fcilmente
en sistemas que incorporan BLMs.
Inconvenientes
Las BLMs tradicionales presentan baja estabilidad mecnica.
Suelen presentar menor fluidez que las bicapas lipdicas naturales.
68
Por ltimo, las partculas magnticas bacterianas (bacterial magnetic particles o

BMPs) son partculas minerales de greigita o magnetita, de pequeo tamao (50-100
nm), que estn recubiertas por una membrana citoplasmtica. Estos corpsculos son
sintetizados de forma natural por algunos microorganismos.
Sobre la membrana de las BMPs pueden inmovilizarse distintos elementos de
reconocimiento (enzimas, anticuerpos, cidos nucleicos). Para ello existen dos
posibilidades:
La inmovilizacin directa mediante reacciones qumicas que generan
entrecruzamientos entre el elemento biolgico y la bicapa lipdica de la BMP.
La transformacin de una bacteria para que sintetice estas partculas y exprese en su
membrana el elemento de reconocimiento de inters.
Actualmente se utilizan para fijar anticuerpos en inmunoensayos para alrgenos
alimentarios y discriminacin de especies de inters comercial (atn). En un futuro
prximo esta tecnologa podra aplicarse a la fabricacin de biosensores. (18)
CAPTULO 6
Aspectos de Mercado
Estudios recientes cifran el mercado mundial de biosensores a finales de 2003 en 7.300

millones de dlares y se espera que en los aos venideros tenga una tasa de
crecimiento del 10.4%, alcanzando para 2007 los 10.800 millones de dlares (75). Las
demandas de este mercado provienen de cuatro sectores bien diferentes: el
biosanitario-farmacetico, el medioambiental, el agroalimentario y el militar.
Estas demandas sectoriales generan desarrollos tecnolgicos especficos que presentan

una rpida transferencia horizontal entre sectores. Sin embargo, esta tecnologa, si
bien se encuentra perfectamente implantada en el sector biosanitario (detectores de
glucosa, biosensores de diagnstico, etc), todava no ha penetrado de forma incisiva en
otros sectores como el agroalimentario o el medioambiental.
70
7300 M $
Mercado mundial de biosensores. Las tecnologas desarrolladas para satisfacer las necesidades de
cada uno de los mercados en los cuatro sectores de implantacin, son rpidamente transferidas de
forma horizontal de un sector a otro. El resultado es un mercado global en continua expansin
cifrado en la actualidad en 7300 millones de dlares.
No obstante, como se ha visto ampliamente en los apartados anteriores, las diversas

tecnologas implicadas en biosensores han permitido disponer ya de dispositivos de
muy diversas caractersticas con aplicaciones en la prctica totalidad de la cadena
alimentaria, algunos en fase de laboratorio, otros en fase de desarrollo, y una creciente
minora en fase de comercializacin.
Las razones de este desfase entre tecnologa disponible y realidades en el mercado no
responden, en trminos generales, a limitaciones de la propia tecnologa, si bien
algunos de estos aspectos son todava manifiestamente mejorables, y las recientes
investigaciones apuntan en este sentido, como se especifica en el apartado 5.
Los motivos se encuentran en factores inherentes al propio sector y en factores
ambientales.
Entre los primeros, cabe destacar en primer lugar la inercia metodolgica del sector,
especialmente caracterstica en el caso de transferencia horizontal de tecnologas de un
sector a otro.
Las tcnicas analticas convencionales satisfacen hasta el momento la prctica
totalidad de las necesidades del sector, en ocasiones con equipamientos enormemente
sofisticados y caros, cuya amortizacin queda justificada en trminos de aumento de la
seguridad alimentaria y de los procesos productivos.
En estos casos la inercia metodolgica se agrava especialmente, sobre todo si
consideramos que los biosensores, si bien pueden ser multianlisis, no son tecnologas
de carcter generalista que permitan el anlisis de amplios espectros de compuestos
como ocurre en el caso de cromatografas, espectrometras de masas, etc.
Pese a todo ello, es de esperar una creciente penetracin en el mercado de estos
dispositivos como elementos de discriminacin previa, sobre todo en aquellos casos en
los que la trazabilidad del alimento lo demanda, ya sea por motivos legales o por
motivos de seguridad de los distintos eslabones de la cadena alimentaria.
71
Este fenmeno redunda en un uso extendido de la tecnologa, con un abaratamiento de
los costes de produccin, que a medio plazo resulta en la ampliacin de su uso en los
protocolos analticos de rutina. El fenmeno es similar al que ocurriera para el caso de
los biosensores de glucosa aplicados a salud humana, en los que la generalizacin del
uso como mecanismo de autocontrol en pacientes diabticos, extendi su aplicacin a
los protocolos analticos hospitalarios y de atencin primaria en pases como Japn.
Por otro lado, como se puede apreciar en la tabla 17, la mayora de las empresas que
desarrollan y comercializan biosensores aplicados a la industria agroalimentaria, no
provienen del campo de la instrumentacin analtica especfica de este sector. En
general, se trata de empresas dedicadas a la biotecnologa, con fuerte implantacin en
el sector biosanitario y/o medioambiental. Por tanto, su capacidad de penetracin en
los canales de distribucin especficos del sector agroalimentario es todava dbil, y su
experiencia en la comercializacin escasa.
No obstante, algunas grandes empresas dedicadas al control de la seguridad y calidad
alimentaria, van incorporando de forma progresiva la tecnologa de biosensores a su
CAPTULO 6 Aspectos de Mercado
Se espera, por tanto, que la actual demanda del mercado vaya aumentando
progresivamente, de forma que se incremente la todava deficiente capacidad de
absorcin del sector agroalimentario de esta tecnologa. Ello redundara en un
abaratamiento de costes, de forma similar a como ya ocurriera con los biosensores
diseados para diagnstico clnico, en los que el precio de venta al pblico puede
llegar a ser incluso inferior al euro (glucosa).
oferta tecnolgica, como alternativa para la satisfaccin de demandas especficas del

sector.
72
Los factores que denominamos ambientales son de tipo normativo. Hacen referencia a
aquellos casos en los que la legislacin especifica los protocolos a seguir para el
anlisis de determinados compuestos con referencia explcita al equipamiento que se
ha de utilizar (por ejemplo el RD 604/2003 referente a los mtodos de anlisis de
dioxinas y PCBs). Este hecho dificulta la implementacin de estas tecnologas en la
industria, que ve como, pese a ser potentes instrumentos de anlisis , no estn
recogidos en la legislacin. Esta situacin va cambiando despacio, y algunas nuevas
normativas slo recogen la exactitud, la precisin y el lmite de deteccin que debe
reunir el mtodo analtico sin especificar la instrumentacin. Este es el caso del RD
140/2003 sobre criterios sanitarios de la calidad del agua de consumo humano.
Por otra parte, la legislacin actual no es, en general, especialmente exigente en
cuanto a la periodicidad de los controles que la industria debe realizar para detectar
agentes que amenacen la inocuidad de los alimentos. Sin embargo, las cada vez
mayores exigencias en cuanto a seguridad alimentaria hacen prever que se har cada
vez ms necesaria una mayor frecuencia en los controles higinico-sanitarios de los
sistemas productivos, y que por tanto la demanda de este tipo de dispositivos ir
aumentando progresivamente.
A continuacin se describen algunas de las empresas que hemos elegido como ms
representativas cuya actividad se centra en la fabricacin y/o comercializacin de
biosensores especialmente diseados para la industria agroalimentaria. El resto de las
empresas y sus productos con su correspondiente aplicacin se reflejan en la tabla 17.
AFFINITY SENSORS
Affinity Sensors es una empresa del Reino Unido que comenz a investigar en 1987, en
colaboracin con GEC-Marconi y el Instituto de Biotecnologa de la Universidad de
Cambridge, en la resonancia de espejos, obteniendo como resultado de esta
colaboracin una nueva tecnologa denominada IAsys.
IAsys permite un anlisis de las interacciones biomoleculares en tiempo real sin
marcaje para la determinacin de perfiles cinticos, reconocimiento molecular y
determinacin de concentracin de analitos.
BIACORE AB
Biacore es una empresa sueca lder en la deteccin y monitorizacin de uniones
biomoleculares mediante la tecnologa de Resonancia de Plasmones Superficiales (SPR)
con aproximadamente un 90% del mercado mundial. Biacore desarrolla, manufactura y
comercializa sistemas bioanalticos que proporcionan datos cuantitativos de
interacciones de unin entre molculas en tiempo real. Ofrecen sistemas, reactivos y
know-how para las aplicaciones de esta tecnologa en distintos campos entre los que se
incluye la industria alimentaria.
Sus aplicaciones en la industria alimentaria se centran en el control de calidad, donde
han desarrollado anlisis de vitaminas hidrosolubles, y en la seguridad alimentaria,
donde poseen sistemas para detectar residuos qumicos y veterinarios, as como
micotoxinas. Entre sus proyectos para futuros desarrollos se incluyen la deteccin de
alrgenos, protenas modificadas genticamente, priones, patgenos y residuos de
biocidas.
La tecnologa desarrollada por Biacore permite la determinacin cualitativa y
cuantitativa de distintos analitos y proporciona resultados rpidos con elevada
productividad, costes bajos y elevada sensibilidad; ya que permite el anlisis de gran
cantidad de productos automticamente, con una preparacin de la muestra mnima y
un tiempo de anlisis corto.
73
RESEARCH INTERNATIONAL
Comercializan distintos productos con diferentes formatos, pero en general son

biosensores de bioafinidad con anticuerpos como elementos de reconocimiento y
transductores de tipo ptico.
TEXAS INSTRUMENTS
Texas Instruments es una empresa norteamericana lder en el mercado de sensores de
presin para automocin y mercados industriales.
Tiene patentado y comercializa un producto denominado Spreeta, basado en la
resonancia de plasmones superficiales, que permite la determinacin en tiempo real de
Es una empresa estadounidense que desarrolla, manufactura y comercializa sensores

con distintas aplicaciones, entre las que se encuentra la deteccin de toxinas y
microorganismos con inters en la seguridad alimentaria como bacterias patgenas,
virus y esporas de distintos mohos.
distintos compuestos, entre los que se encuentran analitos de inters en la industria

alimentaria.
CHEMEL AB
Chemel AB es una empresa sueca fundada en 1996 como una spin-off del European
Institute of Science, que posee un 7% del accionariado. Sus principales actividades
incluyen el desarrollo, manufactura y comercializacin del biosensor SIRE, basado en
la tecnologa patentada SIRE (Sensors based on Injection of the Recognition
Element), cuyos derechos adquirieron en 1997 del European Institute of Science.
74
Poseen un acuerdo de distribucin y colaboracin con Diffchamb Inc, que es una

empresa suministradora de productos para el anlisis de alimentos. La empresa Chemel
AB se encuentra en la actualidad desarrollando mtodos y software que permita la
utilizacin de este biosensor para monitorizacin de procesos como fermentaciones.
8500 Affinity Chip Analyzer

BIOS-1
www.appliedbiosystems.com
Schaffhauserstrasse 580
8052 Zrich
USA
Suiza
Suecia
Italia
Francia
USA
Espaa
USA
Suecia
Rusia
Applied Biosystems
Artificial Sensing Instruments
Biacore AB
BioFutura Srl
Biomerieux
Biosensor Systems Desing
Biosensores S.L.
Biotrace
Chemel AB
IVA Co Ltd
Microorganismos y sustancias txicas

Sustancias txicas
Microorganismos
OptiSense Technology
Politox
Uni-lite Bev-Trace
www.biosd.com
www.biosensores.com
www.chemel.com
AscoSens
www.inventus-biotec.com
(1) Antes Clinical Micro sensor.
IBIS iSPR
www.ibis-spr.nl
Alemania
SPR-20
ESensor
Inventus Bio Tec
www.dkktoa.net
Denki Kagaku Keiki
IBIS Technologies BV
www.motorola.com
www.iva.usue.ru
cido ascrbico
Microorganismos y OMGs
Metales pesados
Glucosa, sacarosa, etanol, metanol y lactato
Microorganismos
Microorganismos
Vitek
Bactometer
www.biomerieux.com
SIRE
Glucosa, fructosa, cido mlico y lctico (fermentacin)
PerBacco 2000 y 2002
www.biofutura.com
www.biotrace.com
Vitaminas hidrosolubles, residuos

qumicos y veterinarios, micotoxinas.
BiacoreQ
Motorola (1)
Japn
Patgenos como Salmonella y Enterococcus
AMBRI Biosensor
www.ambri.com
Australia
Ambri Limited
www.biacore.com
S. aureus, Toxina colrica
IASys plus e IASys

Auto+Advantage
www.affinity-sensors.com
Reino Unido
Affinity Sensors
Contaminantes
Array multi-element clulas completas.

Screening de agua on site
ToxSen
www.abtechsci.com
USA
Analito
Abtech Scientific
Productos
Pas
Empresa
Direccin - URL
TABLA 17. Empresas que comercializan biosensores aplicados a la industria agroalimentaria.
75
www.jandratek.de
The Manor Manor Royal Crawley
West Sussex RH10 2PY UK
3400 Horizon Drive,
King of Prussia PA 19406
www.microsens.ch
Alemania
Reino Unido
USA
Suiza
Jandratek (2)
Malthus Instruments, Ltd
Molecular Circuitry Inc.
Microsens
USA
USA
USA
USA
USA
Alemania
Research International
Texas Instruments Inc.
Universal Sensors
Yellow Springs Instruments Co
Innovative Biosensors, Inc
XanTec Bioanalytics GBR
(2) Antes Biotul AG.
www.reichertai.com
USA
Reichert Analytical Instruments
www.xantec.com
www.innovativebiosensors.com
www.ysi.com
http://intel.ucc.ie/sensors/universal
www.ti.com
www.resrchintl.com
www.q-sense.com
Suecia
Q-Sense AB
www.nle-lab.co.jp
Japn
Nippon Laser Electronics
Molecular Devices
www.moleculardevices.com
Direccin - URL
Empresa
Pas
CANARY
YSI 2700 SELECT

Biochemical Analyzer
ABD 3000 Biosensor

Assay System
Spreeta
Analyte 2000
FAST 6000
Raptor
Reichert SR 7000
SPR-670M,SPR-MACS
NANOSENSOR
Microorganismos patgenos
Glucosa, sacarosa, lactosa, L-lactato, galactosa,

L-glutamato, etanol H2O2, almidn, glutamina, colina
Etanol, metanol, glucosa, sacarosa, lactosa, L-aas,

glutamato, cido ascrbico y oxalato
Alrgenos de cacahuete, antibiticos
Protenas, virus, bacterias y esporas

Toxinas,virus,bacterias,esporas y hongos
Seis analitos simultneamente
Microorganismos
Cloro
MAES-2402
Threshold System
E. coli 0157
Salmonella, Listeria, Campylobacter
Detex
Microorganismos
Analito
Malthus 2000
Plasmonic
Productos
TABLA 17. Empresas que comercializan biosensores aplicados a la industria agroalimentaria (cont.).
76
CAPTULO 7
Casos prcticos de I+D
A continuacin se detallan tres casos prcticos de grupos de investigacin de la

Comunidad Autnoma de Madrid, que se encuentran desarrollando en la actualidad
investigaciones en biosensores aplicados a diferentes aspectos de la industria
agroalimentaria. La informacin contenida en las fichas es el resultado de la
cumplimentacin de un cuestionario por los propios investigadores. En ellas se reflejan
los recursos humanos destinados a la investigacin, as como el nivel de experiencia
del equipo a travs de las lneas y los proyectos de investigacin ms recientes en que
ha desarrollado su trabajo el grupo. Se pretende tambin reflejar la cartera tecnolgica
del grupo a travs de las patentes y de la oferta de servicios a empresas. Por ltimo,
mediante la relacin de las lneas futuras de inters y de la percepcin sobre las
tendencias, se pretende explorar el futuro inmediato de la investigacin en biosensores
aplicados a la agroalimentacin.
Institucin
Universidad Complutense de Madrid

Departamento de Qumica Analtica
www.ucm.es/info/analitic
Director
Jos Manuel Pingarrn Carrazn
pingarro@quim.ucm.es
78
1. GRUPO DE INVESTIGACIN
Personal
rea de experiencia
1 Catedrtico
Deteccin y determinacin de componentes,

aditivos y contaminantes en alimentos. Por
ejemplo cido lctico en yogures y vinos o
colesterol en materias grasas.
5 Profesores titulares
1 Profesor titular interino
1 Ayudante Doctor
3 Becarios postdoctorales
8 Becarios predoctorales
Formacin
Determinacin de antibiticos en alimentos de

Qumicos
origen animal y derivados. Por ejemplo
sulfadrogas en leche de vaca.
Monitorizacin de patgenos
en alimentos.
2. PRINCIPALES LNEAS DE INVESTIGACIN DEL GRUPO

Diseo de biosensores electroqumicos para la deteccin de especies orgnicas de
inters ambiental y toxicolgico y de parmetros qumicos en alimentos.
Biosensores basados en monocapas autoensambladas y biosensores de ADN.
Desarrollo de biosensores electroqumicos para la determinacin de patgenos en
alimentos.
Empleo de microelectrodos como sensores electroqumicos.
Desarrollo de polmeros de impresin molecular como sistemas de preconcentracin y
como sistemas sensores para el anlisis de residuos en alimentos.
Deteccin electroqumica en electroforesis capilar.
3. PROYECTOS DE INVESTIGACIN FINANCIADOS Y COSTE

Proyecto de investigacin
Organismo
Coste
79
133.666
Diseo de nuevos biosensores para la deteccin

rpida de microorganismos patgenos y de
organismos modificados genticamente en
alimentos. Proyecto BQU2003-00365.
Ministerio de Ciencia y
Tecnologa. Plan Nacional de
I+D+I 2000-2003.
182.900
Evaluation/validation of novel biosensors in real

environmental and food samples. QLK3-200001311.
European Comisin.
Desarrollo de biosensores amperomtricos

basados en monocapas autoensambladas para la
determinacin de lactulosa y perxido de
hidrgeno en leche.
Danone/UCM.
27.600
4. PATENTES O SOLICITUDES DE PATENTES

Biosensor amperomtrico compsito para la determinacin de colesterol en
alimentos. Nmero de patente: ES2167258 - WO02/12550.
6.010
CAPTULO 7 Casos prcticos de I+D
Diseo y desarrollo de biosensores basados en

Ministerio de Ciencia y
monocapas autoensambladas y de sensores
biomimticos basados en polmeros formados por Tecnologa. Programa
Nacional de Biotecnologa.
impresin molecular. Proyecto BIO2000-0928.
5. TENDENCIAS EN LA INVESTIGACIN
DE BIOSENSORES APLICADOS A LA AGROALIMENTACIN
Control de calidad de productos agroalimentarios para el consumo humano.
Control de los procesos de obtencin de los productos agroalimentarios.
6. OFERTA DE SERVICIOS A EMPRESAS

Biosensores para la determinacin de perxido de hidrgeno.
Biosensores de glucosa y fructosa en mostos y vinos.

Biosensores para la determinacin de cido lctico en yogures y vinos.
Biosensores para la monitorizacin de compuestos fenlicos y aminas aromticas en
aguas.
Determinacin de colesterol en muestras de alimentos (mantequilla, huevos, etc.).
Determinacin de aminocidos en alimentos, distinguiendo la forma L- de la D-.
Determinacin de etanol y metanol en bebidas alcohlicas.
Determinacin de cido benzico en alimentos (refrescos de cola, mayonesa, etc.).
Determinacin de propil galato en alimentos (aceite de oliva, caldo deshidratado, etc.).
80
7. BARRERAS Y LIMITACIONES EN LA INVESTIGACIN

La principal limitacin es disponer de objetivos relacionados con problemas analticos
reales para desarrollar mtodos analticos especficos que resuelvan problemas de
control de calidad y de control del procesado del alimento empleando biosensores
electroqumicos.
Institucin
Universidad Autnoma de Madrid

Departamento de Qumica Analtica y Anlisis Instrumental
www.uam.es/departamentos/ciencias/quimanalitica/default.html
Directora
M Encarnacin Lorenzo Abad
encarnacion.lorenzo@uam.es
Personal
rea de experiencia
1 Catedrtico de universidad
Electroanlisis de compuestos orgnicos, en

particular frmacos y pesticidas.
Formacin
2 Titulares de universidad
1 Contratado doctor
1 Ayudante de universidad
3 Becarios predoctorales
Desarrollo de biosensores para la

determinacin de analitos de inters
medioambiental, agroalimentario y clnico.
Qumicos
Bilogos
81
Biosensores para pesticidas, xido ntrico,

alcoholes, aldehidos, fructosa, lactato,
glutamato, entre otros.
Sntesis y caracterizacin de intercaladores de ADN.

Anlisis de superficies modificadas con material biolgico.
Desarrollo de sensores y biosensores electroqumicos.

Organismo
Coste
Desarrollo de electrodos modificados (enzimticos y no

enzimticos) para la electrooxidacin cataltica de
NAD(P)H y su utilizacin en biosensores y en reactores CICYT
(Plan Nacional de I+D)
enzimticos con reciclado de cofactores.
82
Electrodos modificados: nuevas estrategias para su

utilizacin en qumica analtica.
DGICYT
Desarrollo de nuevos electrodos modificados y su

aplicacin en qumica analtica: electrodos con
superficies de monocapas autoensambladas y sol-gel.
DGICYT
Preparacin de immunosensores y electrodos de

enzima.
DGICYT (Ayuda a grupos

precompetitivos)
Electroanalysis with surface modified

ultramicroelectrodes.
NATO
Biosensores enzimticos para la determinacin de

pesticidas organofosforados y carbamatos.
CAM
Aplicacin de biosensores enzimticos de NADH al

control de biorreactores diseados para la utilizacin
de deshidrogenasas en procesos de sntesis
estereoespecfica.
CICYT
(Plan Nacional de I+D).
Proyecto coordinado
6.010
21.035
Sensores amperomtricos para la determinacin de

xidos de nitrgeno en sistemas biolgicos. Aplicacin
CAM
en anlisis medioambiental.
Estrategias electroanalticas para la determinacin de
xidos de nitrgeno: aplicacin en anlisis
medioambiental.
CAM
30.050
Desarrollo de biosensores para el reconocimiento de

secuencias de DNA.
DGDESEIC
(Plan Nacional)
78.131
Inmovilizacin orientada de enzimas sobre superficies

metlicas: Desarrollo de biosensores.
DGI (Plan Nacional)
92.615
Designed interfacial assembly of redox active enzymes

and recognition layers for biosensor applications.
National Science
Foundation (NSF) USA
Sntesis y caracterizacin de intercaladores

multifuncionales de ADN: aplicacin al desarrollo de
biosensores.
DGI (Plan Nacional)
69.000
4. TENDENCIAS EN LA INVESTIGACIN DE BIOSENSORES

APLICADOS A LA AGROALIMENTACIN
Desarrollo de biosensores robustos que permitan medidas en continuo y
determinacin de varios analitos simultneamente.

Puesta a punto de mtodos de anlisis selectivos, sensibles y rpidos basados en la
utilizacin de biosensores para analitos, de inters agroalimentario, clnico y
mediambiental.
6. LNEAS FUTURAS DE INTERS

Nuevas estrategias de inmovilizacin de material biolgico que originen
biosuperficies activas y estables. Miniaturizacin de los biosensores y acoplamiento
a sistemas microfludicos.
83
7. BARRERAS Y LIMITACIONES EN LA INVESTIGACIN

Falta de financiacin para personal cualificado que realice el trabajo de
investigacin.
Institucin
Universidad de Alcal de Henares

Departamento de Qumica Analtica e Ingeniera Qumica
www2.uah.es/dep_qaiq
Directora
Elena Domnguez Caas
elena.dominguez@uah.es
Personal
rea de experiencia
Formacin
1 Catedrtica de Universidad
1 Contrato Ramn y Cajal
Desarrollo de (bio)sensores
1 Titular de Universidad
Grupo multidisciplinar por su

propia formacin y trayectoria
y a travs de las diversas
colaboraciones que posee.
1 Tcnico de laboratorio

Qumica de superficies: modificacin e inmovilizacin controlada de (bio)receptores
sobre superficies transductoras.
84
Qumica sinttica. Diseo de mediadores redox para la comunicacin electroqumica

entre elementos biolgicos de reconocimiento molecular y superficies transductoras.
Desarrollo de sensores catalticos y de afinidad para la resolucin de problemas
analticios en tiempo real y con bajo coste en el mbito agroalimentario,
medioambiental.

Organismo
Coste
Nuevas tecnologas para el control eficaz de

residuos de antibiticos y corticoesteroides en
productos agroalimentarios (ARGOS).
Ministerio de Ciencia
y Tecnologa.
AGL2002-04635-C04-02
100.000
4. PATENTES O SOLICITUDES DE PATENTES

Biosensor para la medida de fructosa, manera de prepararlo y su aplicacin al
anlisis de fructosa en productos alimenticios. Josefina Parellada, Elena Domnguez y
Vctor M. Fernndez.
Espaa: ES2091714.
Universidad de Alcal y Consejo Superior de Investigaciones Cientficas.
Mtodo de construccin de electrodos de pasta de carbono. Elena Domnguez,
Arntzazu Narvez, Josefina Parellada, y Ioanis Katakis.
Espaa, Alemania, Suecia, Reino Unido y Francia: EP0757246 ES2103197.
Universidad de Alcal y Universitat Rovira i Virgili-Servei de Tecnologa Qumica.
Procedimiento de modificacin nucleoflica de protenas y su aplicacin a la
inmovilizacin de las mismas. Elena Domnguez, Guillaume Surez, Arntzazu
Narvez. Solicitada en 2004.
5. TENDENCIAS EN LA INVESTIGACIN DE BIOSENSORES

APLICADOS A LA AGROALIMENTACIN
85
Instrumentacin porttil y de bajo coste capaz de discriminar concentraciones

admisibles de plaguicidas y en general de compuestos sometidos a legislacin
alimentaria o indicativos de calidad y seguridad.
7. LNEAS FUTURAS DE INTERS

Nuevos elementos de biorreconocimiento molecular.
Integracin.
Procesamiento de seales.
8. BARRERAS Y LIMITACIONES EN LA INVESTIGACIN:

Escasa tradicin en innovacin y tranferencia de tecnologa.
Inercia y reticencia en nuevas tecnologas analticas.
Escalado a nivel de produccin industrial.
Asesoramiento y desarrollo de metodologa analtica.
CAPTULO 8
Resumen y conclusiones
En agroalimentacin los biosensores se aplican en multitud de reas, algunas de las

cuales despiertan un gran inters en nuestros das como sucede con la seguridad y la
calidad alimentarias. Estos dispositivos analticos pueden detectar y cuantificar
microorganismos y compuestos que afectan a la salud humana y animal y a la
composicin y propiedades organolpticas del alimento. Asimismo, permiten la
monitorizacin en tiempo real de diversos procesos industriales. En este informe se
recogen numerosos ejemplos sobre estos aspectos.
En trminos generales, se trata de dispositivos de anlisis que combinan de forma
eficaz la especificidad y selectividad que ofrecen las reacciones biolgicas con el
altsimo poder de procesamiento de los ltimos desarrollos de la moderna electrnica.
Presentan una serie de caractersticas enormemente ventajosas si se comparan, todas
ellas combinadas, con las tcnicas de anlisis convencionales (cromatografa,
espectrometra, ELISA). Entre estas caractersticas destacan:
Selectividad elevada. Son capaces de discriminar compuestos de estructuras qumicas
muy similares.
Sensibilidad elevada. Detectan sustancias txicas a concentraciones inferiores a los
lmites mximos fijados por la ley.
Manejo sencillo. No requieren personal cualificado.
Automatizables.
88
Miniaturizables.
No se necesita llevar a cabo un pretratamiento de la muestra para trabajar con ella.
Multianlisis. Detectan varios analitos de forma simultnea.
Reutilizables para determinaciones consecutivas gracias a las superficies de
interaccin regenerables.
Porttiles. Permiten realizar anlisis in situ.
Corto tiempo de anlisis. En algunas ocasiones se permite incluso el anlisis en
tiempo real.
Fabricacin a gran escala con un coste bajo.
Si se tienen en cuenta estas caractersticas y la alarma social y los efectos econmicos
negativos que desencadenan las alertas alimentarias, cabe esperar que las tecnologas
de biosensores introduzcan cambios importantes en el anlisis de compuestos de

inters alimentario. De hecho, el Observatorio de Prospectiva Tecnolgica Industrial
(OPTI) estimaba en un estudio realizado en los aos 1999-2000 que el impacto de
estos dispositivos sobre el desarrollo industrial sera del 59,15% (control de procesos y
productos) para el perodo 1999-2004. (74)
Debe considerarse que existen diferentes tipos de biosensores segn los elementos de
reconocimiento y los transductores seleccionados, cada uno con unas ventajas y unas
limitaciones tcnicas especficas. Y segn las aplicaciones a las que se destinen, los
requisitos que se exigen a estos dispositivos son distintos. Por tanto, su viabilidad
como sistemas analticos frente a los procedimientos habituales y su posibilidades
comerciales varan en cada situacin. La eleccin del dispositivo a utilizar en cada caso
depende de tres factores:
La naturaleza del analito. Este factor determina la eleccin de un sistema de
reconocimiento que garantice la especificidad y sensibilidad necesarias.
Las condiciones de uso. Suelen determinar no slo el elemento de reconocimiento
sino tambin el sistema de transduccin de seal. Hace referencia a cuestiones como
la medida en continuo frente a los dispositivos de un solo uso, a la necesidad de
integracin en sistemas de control de procesos y la consiguiente medida en tiempo
real, a la necesidad de miniaturizacin, a la necesidad de portabilidad para medidas
de campo, etc.
En la actualidad existen dos retos tecnolgicos que surgen de la concepcin inicial de

los propios biosensores, as como del grado de desarrollo de alguna de las tecnologas
implicadas en el proceso y/o su combinacin en el dispositivo final:
La propia naturaleza del biosensor limita, en ocasiones, su tiempo de vida til. Los
elementos de reconocimiento biolgicos tienen una duracin corta y son sensibles a
las variaciones externas. Asimismo, precisan unas condiciones ambientales
controladas durante su uso y almacenamiento y su inmovilizacin en la superficie del
transductor puede ser problemtica.
En cuanto a los sistemas de transduccin las dificultades radican mayoritariamente
en el diseo de circuitos de dimensiones reducidas y en el conocimiento de los
fenmenos que ocurren a escala de micro y nanmetros junto a la falta de materiales
y procesos de fabricacin que cubran ciertas necesidades operativas (mnima
interaccin con la muestra, eliminacin de ruidos).
CAPTULO 8 Resumen y conclusiones
Los requerimientos legales. El dispositivo debe cumplir los requisitos recogidos en

los reglamentos, disposiciones y regulaciones que especifica la ley en cada caso.
89
Estos dos retos, definen a su vez dos tendencias en la I+D que pretenden evitar que
estas limitaciones tcnicas comprometan el gran potencial de las tecnologas de
biosensores en el campo agroalimentario, abriendo el campo de aplicacin de estos
dispositivos a la satisfaccin de demandas tradicionales que an no han sido cubiertas.
En primer lugar, se pretende optimizar los prototipos desarrollados mediante la

miniaturizacin de sus circuitos. Esto permite ensamblar varios biosensores en un
mismo chip y disponer de dispositivos porttiles. Tambin se construyen dispositivos
con superficies regenerables que llevan a cabo anlisis consecutivos o con capacidad
para detectar distintos compuestos de forma simultnea. Igualmente, se trabaja en
la bsqueda de nuevos materiales y tcnicas de fabricacin destinados a los sistemas
de transduccin.
Otras investigaciones se centran en el estudio de elementos de reconocimiento
biomimticos (PIMs, aptmeros y PNAs) que presentan una estabilidad y tiempo de
vida superiores a los de los componentes biolgicos. Por otra parte, y de forma
complementaria, existen numerosas lneas de investigacin que se ocupan del
desarrollo y aplicacin de novedosos procedimientos de inmovilizacin (tcnicas de
sol-gel, PPFs, SAMs, BLMs y BMPs).
Estas dos tendencias en la investigacin deben ser a su vez complementadas por
mayores esfuerzos en los procesos de fabricacin de los dispositivos a gran escala, de
forma que se mejore sustancialmente su robustez.
90
Las aplicaciones de biosensores a la industria agroalimentaria abarcan la prctica

totalidad de la cadena alimentaria, desde la produccin primaria hasta la distribucin
final al consumidor, pasando por los procesos de transformacin, tanto desde el punto
de vista de la calidad como de la seguridad alimentaria. Por otra parte la capacidad de
procesamiento y tratamiento de la informacin permite su fcil incorporacin a
sistemas de informacin integrados. Por todo ello los biosensores suponen herramientas
analticas muy verstiles con un enorme potencial de aplicacin a la trazabilidad
alimentaria. En este sentido cabe destacar la importancia de la utilizacin de estos
dispositivos no slo en los mecanismos de control del proceso productivo, sino tambin
en el producto final (envases inteligentes, etc), de suerte que el propio consumidor
perciba la utilidad de estas herramientas como un valor aadido del producto, que
garantiza la seguridad y calidad del alimento que consume.
El mercado de biosensores en la industria agroalimentaria es un mercado en contnua
expansin, con una penetracin en el sector todava incipiente, debido
fundamentalmente a la inmadurez de los canales de distribucin y a la inercia
metodolgica del propio sector. No obstante, se espera que en un futuro inmediato
estas condiciones cambien. A medida que los propios canales de distribucin vayan
siendo ms giles y el uso de estos dispositivos se vaya extendiendo, se generarn
nuevas demandas en el sector, tanto para satisfacer sus propias necesidades como para
atender a las demandas especficas del consumidor final.
Por ltimo, se ha de tener en cuenta que los biosensores no suponen una tecnologa de
sustitucin de las tecnologas analticas convencionales, sino que representan
alternativas interesantes para demandas concretas. Frente al carcter generalista de
tecnologas convencionales como la espectrometra de masas o las distintas
cromatografas, con equipos costosos que permiten analizar amplios espectros de
compuestos, los biosensores son especficamente diseados para la deteccin y/o
cuantificacin de uno o unos pocos analitos, como respuesta a problemas concretos.
Esta concrecin del propsito del biosensor permite el diseo de dispositivos a la
carta, combinando las diferentes tecnologas implicadas en los elementos de
reconocimiento, los sistemas de inmovilizacin y los sistemas de transduccin de seal.
Es precisamente esta capacidad de diseo a medida, la que hace deseable y necesaria
un implicacin de la industria agroalimentaria, como usuaria final de la tecnologa, en
el desarrollo de estos dispositivos.
91
CAPTULO 8 Resumen y conclusiones
CAPTULO 9
Anexos
Anexo 1
Patentes
A continuacin se reflejan las patentes ms relevantes de biosensores aplicados a la

industria agroalimentaria solicitadas con posterioridad a 2000.
94
N. de patente
Ttulo
Solicitante (Pas)
Ao
US6718077
Method and device for the detection of

microorganisms by fiber optics
Fundaao Oswaldo Cruz- Friocruz;

Universidade Federal do Rio de
Janeiro (Brasil)
2004
WO04/025268
Optical biosensors and methods of use thereof Carnegie Mellon University (USA)
2004
EP1398634
Biosensor
Hewlett Packard Development Co. (USA) 2004
US6706160
Chemical sensor and use thereof
Chemel AB (Suecia)
2004
US6667159
Optical fiber biosensor array comprising cell

populations confined to microcavities
Trustees of Tufts College (USA)
2003
US2003/0232322*
Nitrate sensor
2003
US6656702
Biosensor containing glucose dehydrogenase Matsushita Electric Industrial Co.

Ltd (Japn)
2003
WO03/093820
Biomolecule diagnostic devices and method Kimberly-Clark Worldwide Inc. (USA) 2003
for producing biomolecule diagnostic devices
EP1356280
Tissue-based water quality biosensors for

detecting chemical warfare agents
UT Battelle LLC (USA)
2003
US6638752
Biodetectors targeted to specific ligands
Xenogen Corp. (USA)
2003
WO03/069301
Conductimetric biosensor device, method and Michigan State University (USA)

system
WO03/062786
Biosensor for small molecule analytes
Regenesis (USA)
2003
WO03/056345
Electrochemical biosensors
I-Sens Inc. (Corea del Sur)
2003
US6589798
Method and system for analyte determination Biacore AB (Suecia)
2003
US2003/0119174*
Penicillin biosensor
2003
WO03/031562
Portable biosensor apparatus with controlled Pritest Inc. (USA)

flow
2003
EP1302545
Enzyme biosensor
Hoffmann La Roche (Suiza); Roche

Diagnostics GmbH ( Alemania)
2003
US6547954
Biosensor and method for quantitating

biochemical substrate using the same
Matsushita Electric Industrial Co.

Ltd. (Japn)
2003
WO03/027680
Biosensor for detection of toxic substances
R.B. Silvert (USA)
2003
WO03/025627
Optical biosensor with enhanced activity

retention for detection of halogenated
organic compounds
Colorado State University Research

Foundation (USA)
2003
WO03/014378
Amperometric biosensor in thick film

technology
A. Adlassnig; J. Schuster (Austria)
2003
US6521446
Biosensor
Duke University (USA)
2003
US6514402
Sensor and method for detecting an air

borne or exogenously introduced analyte
Corning Inc. (USA)
2003
2003
2003
US2003/0008340*
Metabolic biosensor and uses thereof
US6503701
Analytic sensor apparatus and method
Biosensor Systems Design Inc. (USA) 2003
US6503381
Biosensor
TheraSense Inc. (USA)
2003
US6503771
Nucleic acid biosensor diagnostics
UJ Krull; PA Piunno; RH Hudson;

A.H Uddin (USA)
2003
EP1258533
Process for detection and determination of

toxic agents and related biosensor
Tecnav SNC di Marco Antonio

Stracuzzi EC. (Italia)
2002
N. de patente
Ttulo
Solicitante (Pas)
US6436651
Optical diffraction biosensor
Kimberly-Clark Worldwide Inc. (USA) 2002
US6432723
Biosensors utilizing ligand induced

conformation changes
Clinical Micro Sensors Inc. (USA)
2002
US6387614
Methods for using redox liposome biosensors The Regents of the University of
California (USA)
2002
WO02/31504
An analyte detection system
US2002/0028445*
Method and device for detecting the toxic

and mutagenic effect of chemicals and
mixtures of substances
US6342347
Electromagnetic sensor
Biosensor Systems Design Inc.(USA) 2002
WO02/12550
Composite amperometric biosensor for

determining cholesterol in foodstuffs
Universidad Complutense de Madrid 2002

(Espaa)
US6340597
Electrochemical biosensors and process for

their preparation
Saicom Srl. (Italia)
US6322963
Sensor for analyte detection
WO01/81921
Use of ink-jet printing to produce diffraction Kimberly-Clark Worldwide Inc. (USA) 2001
based biosensors
EP1134585
Biosensor and method for the monitoring of

herbicides
Consiglio Nazionale Ricerche

(Italia)
2001
US6254830
Magnetic focusing immunosensor for the

detection of pathogens
The Board Governors for Higher

Education (USA)
2001
JP2001174432
Biosensor
Matsushita Electric Ind Co. Ltd (Japn) 2001
WO01/25472
Biosensor and its use to indicate the status

of a product
Bioett AB (Suecia)
2001
WO01/14878
Method and kit for detecting betalactamcontaining compounds
Biacore AB (Suecia)
2001
WO01/06248
Biosensors for monitoring air conditioning

and refrigeration processes
Carrier Corporation (USA)
2001
WO01/02827
Biosensor
Forskarpatent I Syd AB (Suecia)
2001
US6171238
Portable hand-held device with a biosensor
BST Bio Sensor Technologies GmbH

(Alemania)
2001
WO00/57166
Method of determing substrate, and

biosensor
Sapporo Immuno Diagnostic

Laboratory (Japn)
2000
WO00/46393
PH-sensitive amperometric biosensor
Saicom Srl. (Italia)
2000
US6096497
Electrostatic enzyme biosensor
WO00/43552
Multifunctional and multispectral biosensor

devices and methods of use
Lockheed Martin Energy Research

Co. (USA)
2000
WO00/42433
Method and biosensor for detecting antigen
Ebara Corporation (Japn)
2000
WO00/36416
Patterned deposition of antibody binding

proteins for optical diffraction-based
biosensors
Kimberly-Clark Worldwide Inc. (USA) 2000
WO00/77522
Analytic sensor apparatus and method
RU2149182
Biosensor for detection of nitrate or nitrite

ions and methods of detection of nitrate
or/and nitrate ions
British Nuclear Fuels Plc

(Reino Unido)
2000
WO00/14267
Biosensor
Aberdeen University (Reino Unido)
2000
WO00/04378
Method for assaying L-phenylalanine and Lphenylalanine sensor
Sapporo Immuno Diagnostic

Laboratory (Japn)
2000
EP0973023
High throughput surface plasmon resonance

analysis system
Texas Instruments Inc. (USA)
2000

2002
2002
95
CAPTULO 9 Anexos
* Solicitud de patente
Ao
Anexo 2
Grupos de Investigacin
En este epgrafe se recogen los principales grupos de investigacin espaoles que

trabajan en biosensores y tecnologas relacionadas (tcnicas de inmovilizacin,
nanomateriales). Se han organizado en dos secciones: equipos de investigadores
ubicados en la Comunidad de Madrid y grupos de otras autonomas.
96
2.1 Comunidad de Madrid
Universidad de Alcal de Henares (UAH)

www.uah.es
Dpto. Qumica Analtica e Ingeniera Qumica, Facultad de Ciencias
www2.uah.es/dep_qaiq
Tel. 91 8854941. Fax 91 8854971. Correo electrnico dep428@uah.es
Investigadora: Elena Domnguez (elena.dominguez@uah.es)
Lneas de investigacin: Desarrollo y aplicacin de biosensores para la vigilancia de la
contaminacin por plaguicidas y sus productos de transformacin en aguas subterrneas.
Desarrollo de biosensores enzimticos para el anlisis de azcares en productos alimenticios.
Universidad Autnoma de Madrid (UAM)

www.uam.es
Dpto. Biologa, Facultad de Ciencias
www.uam.es/departamentos/ciencias/biologia/default.html
Tel. 91 4978339/41. Fax 91 4978344. Correo electrnico biologia@uam.es
Investigador: Francisco Legans Nieto (Tel. 91 497 81 76; francisco.leganes@uam.es)
Lneas de investigacin: Construccin de biosensores basados en cianobacterias luminiscentes.
97
Dpto. Qumica Analtica y Anlisis Instrumental, Facultad de Ciencias

www.uam.es/departamentos/ciencias/quimanalitica/default.html
Investigadora: M Encarnacin Lorenzo Abad
(Tel. 91 4974488. Fax 91 4974931; encarnacion.lorenzo@uam.es)
Lneas de investigacin: Biosensores para reconocimiento de ADN.
Universidad Complutense de Madrid (UCM)

www.ucm.es
Grupo de ptica Aplicada, dpto. ptica, Facultad de CC. Fsicas
www.ucm.es/info/optica
Tel. 91 3944555. Fax 91 3944683. Correo electrnico optica@fis.ucm.es
Investigador: Eusebio Bernabeu Martnez (Tel. 91 3944553; ebernabeu@fis.ucm.es)
Lneas de investigacin: Sensores pticos (resonancia de plasmones superficiales).
CAPTULO 9 Anexos
Grupo de Materiales en lmina delgada y nanomateriales, dpto.

Fsica Aplicada, Facultad de Ciencias
www.uam.es/departamentos/ciencias/fisapli
Tel. 91 4978608. Fax 91 4973969
Investigador responsable: Jos Manuel Martnez Duart. (Tel. 91 4974509; martinez.duart@uam.es)
Lneas de investigacin: Nanomateriales para aplicaciones en biosensores.
Dpto. Qumica Analtica, Facultad de CC. Qumicas

www.ucm.es/info/analitic
Tel. 91 3944331. Fax 913944329. Correo electrnico depquian@quim.ucm.es
Investigador responsable: Jos Manuel Pingarrn Carrazn
(Tel. 91 3944315; pingarro@quim.ucm.es)
Lneas de investigacin: Biosensores electroqumicos para deteccin de compuestos orgnicos de
inters en alimentos, especies orgnicas de inters ambiental y toxicolgico. Biosensores para
monitorizacin in situ de contaminantes medioambientales. Desarrollo de PIMs para anlisis de
residuos en alimentos.
Dpto. Qumica Fsica II, Facultad de Farmacia

www.ucm.es/info/QCAFCAII/index.htm
Tel. 91 3941750. Fax 91 3942032
Investigador: Enrique Jos Lpez Cabarcos
Lneas de investigacin: Aplicacin de micro y nanogeles funcionales en biosensores.
98
Dpto. Microbiologa III, Facultad de CC. Biolgicas

www.ucm.es/info/micro3
Tel. y Fax 91 3944964
Investigadora: Josefina Rodrguez de Lecea (Tel. 91 3944965)
Lneas de investigacin: Deteccin de txicos en alimentos mediante biosensor eucariota
Tetrahymena termophila.
Grupo del dpto. Qumica Orgnica I, Facultad de CC. Qumicas
www.ucm.es/info/quimorga
Tel. 91 3944231. Fax 91 3944103. Correo electrnico qorgan1@quim.ucm.es
Investigador responsable: Guillermo Orellana Moraleda (orellana@quim.ucm.es)
Lneas de investigacin: Sensores qumicos y biosensores de fibra ptica.
Consejo Superior de de Investigaciones Cientficas (CSIC)

www.csic.es
Centro Nacional de Investigaciones Metalrgicas (CENIM-CSIC)
www.montejava.es/cenim
Dpto. Ingeniera de Materiales
Investigador: Juan Carlos Galvn Sierra
Lneas de investigacin: Materiales nanocompuestos para sensores electroqumicos.
Instituto de Catlisis y Petroleoqumica (ICP- CSIC)
www.icp.csic.es
Grupo de Electro-biocatlisis y Biosensores, dpto. Biocatlisis
www.icp.csic.es/biocatalisis.html
Investigadores responsables: Vctor M. Fernndez y Antonio Lpez de Lacey
(Tel. 91 5854807/4813)
Lneas de investigacin: Estudio y diseo de nuevos biosensores (enzimas, anticuerpos,
oligonucleticos,...) Inmovilizacin de enzimas sobre electrodos.
Instituto de Ciencia y Tecnologa de Polmeros (ICTP-CSIC)
www.ictp.csic.es
Dpto. Fotoqumica de Polmeros
www.ictp.csic.es/index.php?opc=91
Investigador responsable: Fernando Catalina Lapuente
(Tel. 91 5622900, ext. 314; fcatalina@ictp.csic.es)
Lneas de investigacin: Sensores fluorescentes de inters aplicado.
Instituto de Microelectrnica de Madrid-IMM, Centro Nacional de Microelectrnica, CNM-CSIC

www.imm.cnm.csic.es/principa.htm
Grupo de biosensores
www.imm.cnm.csic.es/biosensores/home.html
Investigadora responsable: Laura M. Lechuga (laura@imm.cnm.csic.es)
Lneas de investigacin: Transductores (SPR, optoelectrnicos, nanomecnicos, micropalancas de
silicio). Tcnicas de inmovilizacin de receptores biolgicos. Biosensores aplicados al campo
medioambiental, qumico, biomdico.
Centro Nacional de Biotecnologa (CNB-CSIC)
www.cnb.uam.es
Grupo de Microbiologa Medioambiental, dpto. Biotecnologa Microbiana
www.cnb.uam.es/personal/VDP92456.html
Investigador responsable: Vctor de Lorenzo Prieto (Tel. 91 5854500, ext. 4536)
Lneas de investigacin: Multisensores para la deteccin de metales pesados.
2.2 Otras Comunidades Autnomas
Universidad Autnoma de Barcelona (UAB)

www.uab.es
99
Grupo de sensores y biosensores, Dpto. Qumica

http://einstein.uab.es/_c_gr_gsb
Tel. 93 5811976/1836. Fax 93 5812379
Investigador responsable: Salvador Alegret Sanrom (salegret@gsb.uab.es)
Lneas de investigacin: Nuevos sistemas de transduccin y de reconocimiento biolgico y qumico.
Desarrollo de transductores y tecnologas asociadas de inmovilizacin de materiales biolgicos.
Universidad de Barcelona (UB)

www.ub.es
Grupo de Electroqumica de Materiales y Nanotecnologas, dpto. Qumica Fsica
www.qf.ub.es/a2/gra2.html
Tel. 93 4021240. Fax 93 4021231
Investigador responsable: Fausto Sanz Carrasco (sanz@qf.ub.es)
Lneas de investigacin: Funcionalizacin de superficies para el desarrollo de sensores de masa/
biosensores.
CAPTULO 9 Anexos
Escuela Universitaria Politcnica del Medio Ambiente (EUPMA)

www.eupma.edu
Tel. 93 5796780. Fax 93 5796785. Correo electrnico info@eupma.edu
Investigador responsable: Francisco Cspedes Mulero (Tel. 93 5796783; fcespedes@eupma.uab.es)
Lneas de investigacin: Sensores y biosensores biomimticos aplicados al medio ambiente y al
sector agroalimentario.
Universidad de Burgos (UBU)

www.ubu.es
Dpto. Qumica, Facultad de Ciencias
www.ubu.es/investig/mem-inve/meminv97/14quim.htm
Tel. 947 258854. Fax 947 258831. Correo electrnico quim@ubu.es
Investigadora: M. Julia Arcos Mtnez (jarcos@ubu.es)
Lneas de investigacin: Biosensores en electroanlisis.
Universidad de Cdiz (UCA)

www.uca.es
Dpto. Qumica Analtica
Tel. 956 016361/6355. Fax 956 016460
Investigador responsable: Jos Luis Hidalgo-Hidalgo de Cisneros (jluis.hidalgo@uca.es)
Lneas de investigacin: Desarrollo y caracterizacin de nuevos sensores electroqumicos basados
en la tecnologa sol-gel.
Universidad de Crdoba (UCO)

www.uco.es
Dpto. Qumica Analtica, Facultad de Ciencias
Investigadora responsable: M Dolores Luque de Castro (qa1lucam@uco.es)
100
Universidad de Granada (UGR)

www.ugr.es
Grupo de Control Analtico Ambiental, Bioqumico y Alimentario, dpto. Qumica Analtica
www.ugr.es/~ansegura
Tel 958 243326. Fax 958 243328. Correo electrnico qanaliti@azahar.ugr.es
Investigador responsable: Alberto Fernndez Gutirrez (Tel. 958 243297; albertof@goliat.ugr.es)
Lneas de investigacin: Nuevas fases sensoras (tecnologa sol-gel, PIMs) para el diseo de
sensores luminiscentes.
Universidad de Mlaga (UMA)

www.uma.es
Dpto. Qumica Analtica, Facultad de Ciencias
Tel. 95 2131953
Investigadora responsable: Aurora Navas Daz (Tel. 95 2131880; a_navas@uma.es)
Lneas de investigacin: Enzimas inmovilizadas sobre geles mediante atrapamiento para
biosensores fluorescentes o quimioluminiscentes destinados al anlisis agroalimentario.
Universidad Miguel Hernndez (UMH)

www.umh.es
Instituto de Biologa Molecular y Celular. Dpto. Agroqumica y Medio Ambiente
http://cbmc.umh.es
Investigadora: Carmen Reyes Mateo Martnez (Tel 96 6658469. Fax 96 6658758. rmateo@umh.es)
Lneas de investigacin: Diseo y caracterizacin de nuevos biosensores fluorescentes.
Universidad de Oviedo (UNIOVI)

www.uniovi.es
Dpto. Qumica Analtica y Fsica, Facultad de Qumica
www.uniovi.es/QFAnalitica
Tel. 98 5103480. Fax 98 5103125. Correo electrnico quifisan@correo.uniovi.es
Investigador responsable: Paulino Tun Blanco (ptb@fluor.quimica.uniovi.es)
Lneas de investigacin: Biosensores (enzimticos, PIMs, inmunosensores). Sntesis de PIMs.
Sensores basados en tcnicas de luminiscencia y fibra ptica.
Grupo de Materiales Magnticos Amorfos y Nanocristalinos, dpto. Fsica, Facultad de Ciencias

Tel. 98 5102897. Fax 98 5103324
Investigadora responsable: Blanca Hernando Grande
(Tel. 98 5103317/3323 grande@pinon.ccu.uniovi.es)
Lneas de investigacin: Materiales magnticos con aplicaciones en microsensores.
101
Universidad Politcnica de Valencia (UPV)

www.upv.es
Centro de Investigacin e Innovacin en Bioingeniera

www.ci2b.upv.es
Grupo de Inmunotecnologa
Investigador responsable: ngel Montoya Baides
(Tel. 96 3878356. Fax 96 3877093; amontoya@eln.upv.es)
Lneas de investigacin: Desarrollo de biosensores para analitos de inters en biomedicina,
industrias agroalimentarias y el medio ambiente. Inmunosensores.
Grupo de Bioelectrnica
Investigador responsable: Jos Mara Ferrero Corral
(Tel. 96 3876066. Fax 96 3877609; jmferrer@eln.upv.es)
Lneas de investigacin: Biosensores enzimticos aplicables en la industria del tabaco e
inmunnosensores para la industria alimentaria.
CAPTULO 9 Anexos
Dpto. Qumica
www.upv.es/informa/info/DQ/index_2f200c.html
Tel. 96 3877340. Fax 96 3877349. Correo electrnico depquim@upvnet.upv.es
Investigador: Juan Soto Camino (Tel. 96 3873431; juansoto@qim.upv.es)
Lneas de investigacin: Desarrollo de sensores electroqumicos u pticos para la determinacin de
contaminantes en aguas.
Universidad Rovira i Virgili

www.urv.es
Centro de Innovacin en Biotecnologa Aplicada DINAMIC
Escuela Tcnica Superior de Ingeniera
www.etseq.urv.es/dinamic
Investigador responsable: Ioanis Katakis (Tel. 977 559655. Fax 977559667; ikatakis@etseq.urv.es)
Lneas de investigacin: Biosensores. Transduccin, immunosensores, sensores de ADN, sensores de
deshidrogenasa.
Universidad de Sevilla (US)

www.us.es
Grupo de Cintica Electrdica e Instrumentacin, dpto. Qumica Fsica
www.quimfis.us.es
Tel. 95 4557175. Fax 95 4557174
Investigador responsable: Manuel M Domnguez Prez (domingue@us.es)
Lneas de investigacin: Desarrollo de monocapas autoensambladas para su aplicacin en
biosensores electroqumicos.
Universidad de Zaragoza (UNIZAR)

www.unizar.es
102
Grupo de Espectroscopa Analtica y Sensores, dpto. Qumica Analtica

www.unizar.es/geas
Tel. 976 761290. Fax 976 761292
Investigador responsable: Juan Ramn Castillo Surez (jcastilo@posta.unizar.es)
Lneas de investigacin: Sensores electroqumicos y optoenzimticos.
Grupo de Tecnologa de las Comunicaciones, dpto. Ingeniera Electrnica y Comunicaciones
http://diec.unizar.es
Tel. 976 761948. Fax 976 762111. Correo electrnico sed5008@unizar.es
Investigador responsable: Juan Ignacio Garcs Gregorio
(Tel. 976 761964, ext. 841964; ngarces@unizar.es)
Lneas de investigacin: Sensores pticos para la medida de parmetros de inters medioambiental.
Fundacin CIDETEC
www.cidetec.es/home.htm
Investigadora responsable: Estbalitz Ochoteco Vaquero (eochoteco@cidetec.es)
Lneas de investigacin: Micro y nanogeles funcionales aplicados al diseo de biosensores.
Consejo Superior de Investigaciones Ciencficas (CSIC)

www.cisic.es
Instituto de Investigaciones Qumicas y Ambientales (IIQA-CSIC). Dpto. Qumica Ambiental
www.iiqab.csic.es
Tel. 93 4006100. Fax 93 2045404
Investigador responsable: Dami Barcel Cullers (dbcqam@iiqab.csic.es)
Lneas de investigacin: Biosensores para la monitorizacin de contaminantes ambientales.
Instituto de Tecnologa Qumica (CSIC-UPV).
Unidad Estructural de Productos y Procesos en Qumica Fina
www.upv.es/itq/index.htm
Investigador responsable: Hermenegildo Garca Gmez (hgarcia@qim.upv.es)
Lneas de investigacin: Materiales funcionales en slidos porosos con aplicacin en sensores.
Instituto de Microelectrnica de Barcelona, Centro Nacional de Microelectrnica (CNM-CSIC)
www.cnm.es
Tel. 93 5947700. Fax 93 5801496. Correo electrnico info@cnm.es
Investigadores: Francisco J. Muoz Pascual (Tel. 93 5941305; francescxavier.munoz@cnm.es),
Jaume Esteve Tinto (Tel. 93 5941104; jaume.esteve@cnm.es)
Lneas de investigacin: Microelectrnica para el desarrollo de nuevos sensores. Transductores.
103
CAPTULO 9 Anexos
Anexo 3
Proyectos de Investigacin
A continuacin se detallan los proyectos de investigacin referidos a biosensores y

tecnologas relacionadas (inmovilizacin de elementos biolgicos, nanotecnologa,
microelectrnica) englobados en el V Programa Marco, de Cooperacin Internacional y
aquellos que han recibido ayudas del Ministerio de Ciencia y Tecnologa dentro del Plan
Nacional (PN) de I+D+I 2000-2003. (www.mcyt.es/proyectosID/)
Seguridad alimentaria
Xenobiticos
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Pgina web
Ttulo
104
Referencia
Duracin
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Development and field validation of biosensor methods

for the assessment of the effects of pollution
and solar UV radiation on marine invertebrates.
EVK3-CT-1999-00005 (V Programa Marco).
Desde 01-02-2000 hasta 31-01-2003.
1.239.477 .
Estudio del impacto ambiental de compuestos xenobiticos sobre especies
marinas de inters comercial (bivalvos).
www.uni-mainz.de
Simple methods for determining potent xenobiotics
in water and foodstuffs.
INTAS-2000-00870 (Cooperacin International).
Desde 01-08-2001 hasta 31-07-2004 .
Anlisis de diversos compuestos contaminantes (esteroides de accin
estrognica, antibiticos) en muestras de alimentos y agua.
Intelligent signal processing of biosensor arrays using pattern
recognition for characterisation of wastewater:
aiming towards alarm systems.
QLK3-CT-2000-01481 (V Programa Marco).
Desde 01-10-2000 hasta 30-09-2003.
1.387.822 .
Estudio de la calidad del agua mediante la deteccin de diversos
contaminantes txicos como compuestos fenlicos, metales pesados, etc.
Development and risk assessment of a field-based portable biosensor
using genetically-modified bioluminescent bacteria.
Desde 01-02-2003 hasta 31-01-2006.
1.564.004 .
Estudio de los contaminantes presentes en suelo y agua a travs de un
biosensor que contiene un microorganismo modificado genticamente.
Ttulo
Referencia
Duracin
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Achievement of high standards of wine quality

using novel chemical and biological sensors.
INTAS-2000-00273 (Cooperacin Internacional).
Desde 01-08-2001 hasta 31-07-2004.
Deteccin de plaguicidas en matrices alimentarias mediante biosensores
enzimticos.
CE based instrument using Microsystem and Biosensor technologies
for bioremediation monitoring Applications.
Desde 01-03-2000 hasta 28-02-2003.
1.936.430 .
Combinacin de distintas tcnicas (electroforesis capilar o CE) con la
tecnologa de los biosensores para la monitorizacin de metales pesados y
compuestos orgnicos (PCBs y HAPs) en muestras de suelo, vegetales y
agua.
Automated water analyser computer supported system.
Desde 01-03-2001 hasta 29-02-2004.
2.555.995 .
Desarrollo de un biosensor para realizar estudios de campo sobre la
contaminacin del agua.
105
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Tissue engineering of living biosensors to evaluate risks for health by

neurotoxic pesticides.
Desde 01-01-2003 hasta 31-12-2005.
1.607.136 .
Determinacin de plaguicidas.
Development of single and multi-analyte affinity sensors for rapid
detection of adrogen residues in live and post-mortem animals.
Desde 01-10-2001 hasta 30-09-2004.
1.710.152 .
Diseo de biosensores para detectar residuos de anabolizantes en productos
crnicos.
Analysis of pesticide residuals in foods by immunochemical assay based
on surface plasmon resonance.
Desde 01-09-2000 hasta 31-08-2002.
142.484 .
Imunosensor de SPR diseado para el anlisis de un amplio grupo de
plaguicidas.
CAPTULO 9 Anexos
Ttulo
Assembly and application of photosystem II-based biosensors for large

scale environmental screening of specific herbicides and heavy metals.
Desde 01-08-2001 hasta 31-07-2004.
1.598.135 .
Anlisis de cribado de contaminantes del medio, en concreto, de herbicidas
y metales pesados.
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Pgina web
Sensors for monitoring water pollution from contaminated land,

landfills and sediments.
Desde 01-08-2000 hasta 31-01-2004.
766.800 .
Deteccin de compuestos contaminantes en aguas y suelos.
www.cranfield.ac.uk/biotech/senspol.htm.
Biotoxinas
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
106
Development of a test kit for the determination

of pesticides in foodstuffs.
Desde 06-07-2000 hasta 05-07-2001.
30.000 .
Desarrollo de un kit para la deteccin de plaguicidas mediante un
inmunosensor.
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Prevention of ochratoxin A in cereals.

Desde 01-02-2000 hasta 31-10-2003.
2.532.239 .
Determinacin de la presencia de toxinas de origen fngico (ocratoxina A)
en cereales.
Construction of miniaturised free flow electrophoresis (mFFE)
incorporating dedicated sensors for real-time analysis of food
contaminants.
Desde 01-02-2000 hasta 31-01-2003.
1.192.111 .
Deteccin de diversos analitos (toxinas, microorganismos) a partir de un
sistema de electroforesis miniaturizado en combinacin con un biosensor
ptico.
Detection of algal toxins using piezoelectric crystal biosensor.
Desde 03-03-2000 hasta 02-03-2002.
112.988 .
Determinacin de toxinas marinas.
Microorganismos Patgenos
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Rapid detection of food-borne pathogens

y optical biosensors using lectins.
Desde 17-12-2002 hasta 16-12-2004.
150.404 .
Deteccin de los principales microorganismos patgenos
(Listeria monocytogenes, Salmonella sp., Campylobacter sp.,
Escherichia coli) en alimentos.
Desarrollo de un microsistema biosensor ptico
para la medida de toxicidad en agua.
Mauricio Moreno Sereno.
Universidad Autnoma de Barcelona.
DPI2003-08060-C03-03 (PN Diseo y produccin industrial).
Desarrollo de nuevos sensores y biosensores pticos
para la medida de parmetros de inters medioambiental:
Dispositivos, tcnicas e integracin.
Juan Ignacio Garcs Gregorio.
Universidad de Zaragoza.
Micro-biosensores electroqumicos de bajo coste conteniendo
microorganismos para la determinacin del grado de toxicidad en aguas.
Francisco Javier Muoz Pascual.
Consejo Superior de Investigaciones Cientficas.
Referencia
Duracin
Descripcin
Development of novel electrochemical biosensors for glycoalkaloids

determination in foodstuffs and biological samples.
Desde 01-09-2001 hasta 31-08-2003.
Deteccin de compuestos antinutritivos (glucoalcaloides) a partir de un
biosensor enzimtico.
Calidad Alimentaria
Ttulo
Referencia
Duracin
Descripcin
Monitoring of total antioxidant activity in different beverages using

biosensors technology.
INTAS-2000-00809 (Cooperacin internacional).
Desde 01-08-2001 hasta 31-01-2004.
Determinacin de la capacidad antioxidante de ciertas bebidas mediante la
cuantificacin de flavonoides polifenlicos.
CAPTULO 9 Anexos
Componentes del Alimento

Ttulo
107
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Enzyme-based detection biosensor.

Desde 15-05-2000 hasta 14-05-2001.
30.000 .
Deteccin de mltiples componentes del alimento
(azcares, alcoholes, cidos orgnicos) en distintas matrices
(zumos de fruta, productos lcteos, vino).
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Nanodimensional alcohol biosensor.

HPMF-CT-1999-00237 (V Programa Marco).
Desde 01-02-2000 hasta 31-01-2001.
85.500 .
Determinacin de alcohol mediante la tecnologa de biosensores.
Control de Procesos
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Biosensor based device for on line control of wine making.

Desde 20-11-2000 hasta 19-11-2001.
30.000 .
Control on line de la fermentacin en la elaboracin del vino a partir de las
medidas de varios compuestos (etanol, glucosa).
Ttulo
Novel technology for fermentation process monitoring and quality

control of alcoholic beverages based on enzyme electrodes and kits.
Desde 01-07-2001 hasta 30-06-2004.
Control de calidad del producto y monitorizacin en tiempo real del proceso
fermentativo en industrias de bebidas alcohlicas.
Referencia
Duracin
Descripcin
108
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Biosensor based device for on line control of wine making.

Desde 01-09-2002 hasta 31-08-2004.
1.087.620 .
Monitorizacin en tiempo real del proceso fermentativo
para la obtencin de vino.
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Novel technology for controlling wine production and quality.

HPRN-CT-2002-00186 (V Programa Marco).
Desde 01-09-2002 hasta 31-08-2006.
1.499.883 .
Empleo de biosensores para el control de la produccin del vino.
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Desarrollo de microsensores e instrumentacin avanzada

en la monitorizacin de procesos de compostaje.
Francisco Cspedes Mulero.
Fundacin de Estudios del Medioambiente de Mollet del Valls.
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Rapid assessemnt of food safety via novel at-line measurements.

Desde 01-10-2000 hasta 30-09-2003.
1.542.418 .
Tecnologa de biosensores aplicada al control de procesos como herramienta
para mejorar la trazabilidad de los compuestos txicos e integrarse en el
sistema APPCC. .
Otras Aplicaciones en Agroalimentacin

Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
DNA biosensor for analytical investigation and labelling in food.

Desde 01-08-2001 hasta 31-07-2004.
1.729.312 .
Identificacin de material gentico de plantas modificadas genticamente
en matrices alimentarias.
Otros proyectos de Investigacin

Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Micro-inductive based biosensor arrays

for very high sensitivity detection.
IST-2001-33011 (V Programa Marco).
Desde 01-10-2001 hasta 30-09-2002.
133.000 .
Diseo de un biosensor de alta sensibilidad destinado a diversos campos de
aplicacin, entre ellos, el agroalimentario.
Towards increased diagnostic sensitivity by assay miniaturisation.
HPMI-CT-2002-00214 (V Programa Marco).
Desde 02-04-2003 hasta 01-04-2007.
333.000 .
Desarrollo de un biosensor de alta sensibilidad y de pequeo tamao.
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
A bioanalytical microsystem based on an optical microchip.

IST-2000-28214 (V Programa Marco).
Desde 01-06-2001 hasta 31-05-2004.
2.330.000 .
Diseo de un prototipo basado en la tecnologa de biosensores
(inmunosensor ptico) para aplicaciones biolgicas y clnicas.
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Development of strain and torque sensors based upon surface acoustic

waves technology.
G6ST-CT-2000-00209 (V Programa Marco).
Desde 20-09-2000 hasta 19-09-2001.
30.000 .
Desarrollo de la tecnologa de ondas acsticas de superficie (SAWs) aplicable
a biosensores.
CAPTULO 9 Anexos
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
109
Ttulo
Referencia
Duracin
Coste del proyecto
Descripcin
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
110
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Evaluation/validation of novel biosensors in real environmental

and food samples.
QLK3-CT-2000-01311.
Desde 01-10-2001 hasta 31-01-2005.
650.000 .
Evaluacin del empleo de nuevos biosensores en muestras reales, efectos de
las matrices sobre estos dispositivos, estudio de las tcnicas de fabricacin y
diseo de equipos porttiles.
Sistemas complejos y sensores fluorescentes. Estudios de estabilidad.
Fernando Catalina Lapuente.
MAT2003-00119 (PN Materiales).
Aplicacin de nuevos materiales compuestos a la construccin
de biosensores electroqumicos compactos.
Esteve Fbregas Martnez.
Desarrollo de nanoestructuras de sol-geles hbridos y de polmeros
impresos para la construccin de fases sensoras luminiscentes
implementables en nanosensores de aplicacin ambiental.
Alberto Fernndez Gutirrez.
Universidad de Granada.
MAT2003-09074-C02-01 (PN Materiales).
De microgeles a nanogeles funcionales: aplicaciones en biosensores
y estructuras coloidales conductoras.
Enrique Jos Lpez Cabarcos.
Universidad Complutense de Madrid.
Nuevos materiales nanocomposites con propiedades
bioelectrocatalticas obtenidos mediante qumica
combinatoria para aplicaciones en el campo de biosensores.
Dimitri Muraviev Muraviev.
BIO2003-06087 (PN Biotecnologa).
Generacin y ensayo de distintas formas de anticuerpos en el desarrollo
de inmunosensores voltamtricos uni y bianalticos.
Francisco Mndez Garca.
Universidad de Oviedo.
BIO2003-06008-C03-02 (PN Biotecnologa).
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Ttulo
Investigador
responsable
Institucin
Referencia
Ttulo
Investigadora
responsable
Institucin
Referencia
Juan Carlos Galvn Sierra.

Diseo y desarrollo de biosensores basados en monocapas
autoensambladas y de sensores biomimticos basados en polmeros
formados por impresin molecular.
Jos M Pingarrn Carrazn.
Universidad Complutense de Madrid.
BIO2000-0928 (PN Biotecnologa).
Desarrollo de analizadores miniaturizados para el control in situ
de parmetros de inters medioambiental basados en la integracin
de microsensores pticos y electrnicos y microsistemas de gestin.
Julin Alonso Chamorro.
Materiales funcionales conteniendo huspedes orgnicos incorporados
en slidos porosos con aplicacin en fotnica, celdas fotovolticas,
mquinas moleculares y sensores.
111
Hermenegildo Garca Gmez.

Universidad Politcnica de Valencia.
Magnetoimpedancia y propiedades de magnetotransporte en materiales
nanoestructurados y en nanomateriales con aplicaciones en
microsensores magnticos y magnetoelsticos.
Blanca Hernando Grande.
Universidad de Oviedo.
Preparacin y caracterizacin de materiales nanoestructurados
para aplicaciones en biosensores e ingeniera de tejidos (I).
Jos Manuel Martnez Duart.
Universidad Autnoma de Madrid.
Sntesis de microgeles y nanogeles funcionales: Aplicaciones en
biosensores y estructuras coloidales conductoras.
Estbalitz Ochoteco Vaquero.
Fundacin CIDETEC-Centro de Investigacin en Electroqumica.
CAPTULO 9 Anexos
Investigadora
responsable
Institucin
Referencia
Diseo de materiales nanocompuestos multifuncionales para sensores

electroqumicos y recubrimientos anticorrosivos.
CAPTULO 10
Referencias, abreviaturas y glosario
10
Referencias
(1) MAPA (2002). Hechos y cifras del sector agroalimentario y del medio rural espaol.
6 edicin. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentacin. Secretara General Tcnica.
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Educacin. Comunidad Autnoma de Madrid.
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(16) Bada, R. y Daz, M.E. (2002). Nota tcnica: Polmeros Impresos molecularmente.
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Acta. Vol 483, 187-191.
CAPTULO 10 Referencias, abreviaturas y glosario
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Bioelectronics 18, 129-140.
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(64) Niculescua, M,; Mieliauskiene, R.; Laurinavicius, V. y Csregi, E. (2003) Simultaneous

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(71) Yu, J.; Liu, S y Ju, H. (2003) Mediator-free phenol sensor based on titania sol-gel
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(73) Faver, G.; DAnnibale, A.; Campanella, L.; Santicci, R y Ferri, T. (2002) Membrane supported
bilayer lipid membranes array: preparation, stability and ion-channel insertion. Analytica
Chimia Acta, 460, 23-34.
(74) Observatorio de Prospectiva Tecnolgica Industrial (OPTI). Sector agroalimentario: la

biotecnologa aplicada al sector alimentario. Segundo informe de prospectiva tecnolgica
industrial. Futuro tecnolgico en el horizonte del 2015.
118
(75) Biosensor market, R&D and commercial implication. Fuji Keizai Group. Abril 2004. www.fujikeizai.com/e/report/biosensor2004_e.html
Abreviaturas
ADN
cido desoxirribonucleico
ARN
cido ribonucleico
BETX
Benceno, tolueno, xileno
BHA
Butil hidroxianisol
BLM
Membrana de bicapa lipdica
BMP
Partcula magntica bacteriana
ELISA
Ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzima
EW
Onda evanescente
HAP
Hidrocarburo aromtico policclico
LAPS
Light-addressable potentiometric sensor
ISFET
Transistor de efecto de campo ion selectivo
NAD
Nicotn-adenn-dinucletido
OMG
Organismo modificado genticamente
PCB
Bifenilo policlorado
PCR
Reaccin en cadena de la polimerasa
PIM
Polmero de impresin molecular
PNA
cidos nucleicos peptdicos
PPF
Pelcula polimerizada por plasma
QCM
Microbalanza de cristales de cuarzo
SAM
Monocapa autoensamblada
SAW
Onda acstica de superficie
SPR
Resonancia de plasmones superficiales
Glosario
Alrgeno: sustancia que desencadena una respuesta inmune en el organismo.
Amina bigena: molcula obtenida por la transformacin qumica de un aminocido que puede
tener efectos adversos sobre la salud. Su presencia se utiliza como indicador de la calidad
de ciertos alimentos, principalmente carnes y pescados.
Analito: compuesto de inters cuya presencia se desea detectar y/o cuantificar en la muestra sometida a estudio.
Anticuerpo: protena sintetizada por el sistema inmunolgico como respuesta a la presencia de una
sustancia extraa denominada antgeno a la que se une de manera selectiva.
Antgeno: molcula que desencadena la sntesis de anticuerpos por parte del sistema inmunolgico que interaccionan de forma especfica con ella.
Bifenilos policlorados (PCBs): conjunto de compuestos peligrosos para la salud sintetizados artificialmente que se han utilizado como agentes dielctricos, fluidos hidrulicos y componentes de plsticos y pinturas.
Biosensor: dispositivo compacto de anlisis que se compone de un elemento capaz de reconocer e
interaccionar con la sustancia o microorganismo de inters y de un sistema electrnico que
permite procesar la seal producida por esta interaccin.
Biotoxina: sustancia txica que ha sido sintetizada por un ser vivo.
Cofactor: tomo, molcula o elemento de naturaleza no proteica necesario para que se produzca
una reaccin qumica catalizada por enzimas.
119
Compuesto xenobitico: cualquier sustancia que no ha sido sintetizada por los seres vivos. En
general, este trmino se aplica a compuestos como aditivos, frmacos, plaguicidas, fertilizantes, etc.
Dioxinas: conjunto de sustancias de carcter txico originadas como subproductos de diversos procesos industriales (incineraciones, sntesis de plaguicidas, blanqueo de papel, etc).
Ensayo de inmunoabsorcin ligado a enzima (ELISA): tcnica de anlisis que permite detectar
determinadas molculas a partir de su interaccin con anticuerpos especficos. Dichos anticuerpos tienen asociada una enzima gracias a la cual puede registrarse su unin con la sustancia sometida a estudio.
Enzima: protena que cataliza o incrementa la velocidad de las reacciones qumicas en los seres
vivos.
Hidrocarburos aromticos policclicos (HAPs): conjunto de sustancias formadas a partir de la
combustin incompleta de materia orgnica (carbn, petrleo, madera, restos animales y
vegetales). Estos contaminantes ambientales son potencialmente txicos para los seres
vivos.
Micotoxina: sustancia txica que ha sido sintetizada por un hongo.
Monitorizacin: seguimiento de uno o varios parmetros en un proceso mediante diversos dispositivos y sistemas con el fin de detectar posibles anomalas.
Organismo modificado genticamente (OMG) u organismo transgnico: organismo en cuyo
material gentico se ha introducido una fraccin de ADN procedente de otro organismo. Esta
manipulacin permite obtener un ser vivo con determinadas caractersticas de inters
comercial, por ejemplo, un cultivo resistente a ciertos insectos.
Transductor o sistema de transduccin: componente de un biosensor que detecta la seal producida por la interaccin del analito o microorganismo de inters y la transforma en una seal
elctrica que puede amplificarse, almacenarse y registrarse.
Elemento de reconocimiento: componente de un biosensor con capacidad para reconocer e interaccionar con el analito o microorganismo de inters.

Aplicaciones de Biosensores en La Industria Agroalimentaria - Gonzales Rumayor, Victor - 113 Pag

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Vctor Gonzlez Rumayor

informe de vigilancia tecnolgica

Lara Gago Cabezas

informe de vigilancia tecnolgica

Coleccin coordinada por:

Fundacin para el conocimiento madri+d

Este informe de Vigilancia Tecnolgica se ha realizado

Dra. Elena Domnguez Caas

Dr. Fernando Martn Gordillo

As como la colaboracin de la Dra. Encarnacin Lorenzo

Tecnologas de los biosensores

Aplicaciones de los biosensores en agroalimentacin

Tipo de interaccin (PG. 20)

Clasificacin de los biosensores (PG. 16)

Seguridad alimentaria (PG. 43)

Retos y tendencias en tecnologas de biosensores

Miniaturizacin (PG. 61)

Patentes (PG. 94)

La Vigilancia Tecnolgica incluye una serie de procedimientos, no

Es en estos aspectos en los que las Organizaciones Empresariales

importantes recursos cientficos y tecnolgicos de la

Gerardo Daz Ferrn

En el desarrollo de la Coleccin se prev una estrecha cooperacin

La industria productora de alimentos y bebidas en la Unin Europea (an antes de la

mercado. Estas tecnologas en avanzado estado de madurez han ido transfirindose

CAPTULO 1 Resumen ejecutivo

Un biosensor se define como un dispositivo compacto de anlisis que incorpora un

El principio de deteccin de un biosensor se

existe un inters ms reciente en los campos medioambiental, qumico, farmacutico y

FIGURA 1. Funcionamiento general de biosensores. En una muestra compleja, el elemento de

TABLA 1. Criterios de clasificacin de los biosensores

Existen mltiples elementos de reconocimiento y sistemas de transduccin.

En las mltiples aplicaciones de los biosensores dentro de la industria agroalimentaria

Alta fiabilidad. Los sistemas de transduccin se disean de manera que no puedan

Bajo coste de produccin. En general, estos sistemas pueden fabricarse a escala

Pretratamiento de la muestra innecesario lo que supone un ahorro de tiempo,

Capaces de realizar anlisis en tiempo real. Esta caracterstica es especialmente

Porttiles para que sea posible realizar anlisis in situ.

3.1.1 Sensores Biocatalticos

Son los biosensores mejor conocidos y los ms aplicados. Se basan en la utilizacin de

Estos biocatalizadores pueden ser sistemas que contienen enzimas o sistemas

En algunas ocasiones se utilizan cascadas multienzimticas, en las que la enzima que

3.1.1.2 Clulas Completas

CAPTULO 3 Tecnologas de Biosensores

ser monitorizados mediante distintos transductores. Se pueden utilizar para detectar la

La mayor limitacin a la hora de utilizar clulas completas es la difusin de sustratos y

Esta limitacin se puede paliar mediante la permeabilizacin de la membrana por medio

3.1.1.3 Orgnulos Subcelulares

VENTAJAS E INCONVENIENTES DE TEJIDOS COMO ELEMENTOS DE RECONOCIMIENTO

3.1.2 Sensores de Bioafinidad

CAPTULO 3 Tecnologas de Biosensores

Para medir la interaccin, ya que no existe consumo de sustratos ni generacin de

Puede utilizarse tambin un sistema de deteccin directa de la interaccin entre el

especificidad que los monoclonales, de modo que en funcin de qu caracterstica se

3.1.2.3 Clulas Completas

CAPTULO 3 Tecnologas de Biosensores

Existen protenas transportadoras que forman canales que pueden acoplarse a

secundarios y la activacin de enzimas, que pueden ser monitorizados por

Determinados compuestos txicos ejercen su accin bloqueando los sistemas de seales

3.1.2.5 cidos Nucleicos

3.1.2.6 Polmeros de Impresin Molecular

Los principales mecanismos de preparacin de los PIMs se dividen en covalentes y no

CAPTULO 3 Tecnologas de Biosensores