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UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS

INSTITUTO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE


SETOR DE BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR

Morte Celular Programada


(Apoptose)

Profa. Dra. Nvea Macedo

APOPTOSE
A morte celular desempenha um papel crucial no desenvolvimento de animais e plantas
(senescncia de folhas e flores, resposta a injrias e infeces);
A morte celular programada tambm ocorre em organismos unicelulares (leveduras e
bactrias);
Bilhes de clulas morrem na medula ssea e intestino;
Apoptose a forma de morte celular programada mais comum e melhor entendida;
Modificaes morfolgicas em clulas apoptticas: Elas se encolhem e condensam, o
citoesqueleto colapsa, o envelope nuclear se desfaz e a cromatina nuclear se condensa e
se quebra em fragmentos, a superfcie celular forma bolhas, e, se a clula for grande, ela
quebra em fragmentos envolvidos por membranas chamados de corpos apoptticos.
Alm disso, a superfcie da clula ou dos corpos apoptticos torna-se quimicamente
modificada para que seja engolfada por clulas vizinhas ou macrfagos.

Clulas necrosadas se expandem e explodem, liberando seus contedos sobre os vizinhos


e provocando uma resposta inflamatria;

Reutilizao do material celular

A morte celular programada elimina clulas desnecessrias


A morte celular programada atua na formao e manuteno tecidual durante toda a vida
do indivduo;

A morte celular programada elimina clulas desnecessrias


Alta taxa de morte celular programada no sistema nervoso de vertebrados em
desenvolvimento (ajuste do nmero de clulas nervosas para o nmero clulas-alvo que se
conectam com o nervo);
As clulas competem por quantidades limitadas de fatores de sobrevivncia que so
secretados pelas clulas-alvo as quais eles se conectam;

A morte celular programada elimina clulas desnecessrias


No desenvolvimento animal, a apoptose elimina clulas desnecessrias (ex. Protenas
morfogenticas do osso - BMPs - estimulam clulas em desenvolvimento de dedos em ps
e mos a se matarem; Um aumento no hormnio da tireide na corrente sangunea
sinaliza para morte de clulas da cauda de um girino durante a metamorfose;

Funciona como um processo de controle de qualidade no desenvolvimento, eliminando


clulas que so anormais, no-funcionais ou potencialmente perigosas ao animal (sistema
imune dos vertebrados eliminao de linfcitos T e B no-funcionais ou potencialmente
perigosos);

A morte celular programada elimina clulas desnecessrias


Em tecidos adultos, que no esto crescendo nem condensando, a morte celular e a
diviso celular devem ser finamente reguladas para assegurar que estejam em exato
equilbrio;

Clulas apoptticas so bioquimicamente reconhecveis


Durante a apoptose, uma endonuclease cliva o DNA cromossomal em fragmentos de
diferentes tamanhos, que podem ser observados por gel de eletroforese ou por TUNEL
(marcao de extremidades de dUTP mediada por um TdT);

Clulas apoptticas so bioquimicamente reconhecveis


O fosfolipdeo fosfatidilserina (-) se desloca para a face externa da membrana plasmtica,
onde pode servir como marcador;
Fosfatidilserina tambm sinaliza para as clulas vizinhas e macrfagos fagocitarem a clula
e bloqueia a inflamao frequentemente associada fagocitose, pois inibem a produo
de citocinas que induzem inflamao;
Clulas tambm devem perder suas molculas na membrana que funcionam como sinais
de sobrevivncia;
Clulas que entram em apoptose normalmente perdem o potencial eltrico que
normalmente existe atravs interna de suas mitocndrias;
Protenas como o citocromo c so liberadas do espao intermembranar para o citosol;

A apoptose depende de uma cascata proteoltica intracelular


mediada por caspases

A maquinaria celular responsvel pela apoptose similar em todas as clulas animais;

Proteases-cistenicas (caspases) clivam suas protenas-alvo em cidos sparticos


especficos;

Caspases so sintetizadas como precursores inativos (procaspases) que so ativados por


clivagem proteoltica em um ou dois Asp especficos e catalisada por outras caspases;

Procaspase: uma subunidade grande e uma pequena (heterodmero) e dois dmeros se


juntam para formar um tetrmero ativo;

Caspases esto envolvidas no s com a apoptose, mas tambm com a resposta imune e
inflamatria. A primeira caspase descoberta foi a enzima conversora de interleucina-1
(ICE) que induz inflamao;

Procaspases iniciadoras agem no incio da cascata proteoltica e, quando ativadas,


clivam e ativam; procaspases executoras, assim como protenas-alvo na clula;

Maquinaria da morte celular e sua regulao

Ativao da procaspase durante a apoptose

Caspases iniciadoras possuem um pr-domnio longo que contm


um domnio de recrutamento de caspases (CARD) Ligao a
protenas adaptadoras em complexos de ativao quando a clula
recebe um sinal para entrar em apoptose Ativao das caspases
iniciadoras por proximidade

A apoptose depende de uma cascata proteoltica intracelular


mediada por caspases

Laminas nucleares, outros componentes do citoesqueleto, protenas de adeso celular e


inibidores de endonucleases so alguns dos alvos de procaspases executoras;

A cascata de caspase destrutiva, autoamplificadora e irreversvel (aps alcanar um


ponto crtico na via de destruio, ela no pode voltar atrs);

As caspases requeridas para a apoptose variam de acordo com o tipo celular e o estmulo;

As duas vias de sinalizao melhor entendidas que podem ativar a cascata de caspases
levando apoptose so chamadas de via extrnseca e via intrnseca;

Receptores de superfcie celular ativam a via extrnseca da


apoptose

Protenas de sinalizao extracelular ligam-se a receptores de morte na superfcie celular, o qual


possuem um domnio de morte intracelular que dispara a via extrnseca da apoptose;

Os receptores de morte so homotrmeros que pertencem Famlia de receptores do fator de


necrose tumoral (ex. receptor para TNF e receptor de morte Fas);

Complexo de sinalizao indutor de morte (DISC);

Muitas clulas produzem protenas inibidoras capazes de controlar a via extrnseca: Inibidores de
ativao da via extrnseca (receptores armadilhas - no possuem o domnio de morte; FLIPs protenas bloqueadoras que parecem caspases iniciadoras mas no possuem o domnio proteoltico;

Via
extrnseca
da
apoptose ativada por
meio de receptores de
morte Fas
ativados
por
linfcitos
(citotxico) killer

Receptores de superfcie celular ativam a via extrnseca da


apoptose
Em algumas circunstncias, receptores de morte ativam outras vias de sinalizao que
no levam apoptose (ex. receptores TNF podem ativar a via NFB a qual pode
promover a sobrevivncia celular e ativar genes envolvidos em respostas inflamatrias);

A via intrnseca da apoptose depende da mitocndria

O programa de apoptose pode ser ativado de dentro da clula, geralmente em resposta a injrias ou
outros estresses, como quebra de DNA ou falta de oxignio, nutrientes, ou de sinais de
sobrevivncias extracelulares;
Liberao no citosol de protenas mitocondriais (ex. citocromo c) que ativam a cascata proteoltica
das caspases;
Procaspases iniciadoras (procaspase-9) so ativadas por proximidade ao apoptossomo;
Em algumas clulas a via extrnseca ativa a via intrnseca para amplificar o sinal apopttico, via um
membro da famlia de protenas Bcl2 (regulador intracelular da apoptose) a protena BH3-apenas
Bid;

Protenas Bcl2 regulam a via intrnseca da apoptose

A famlia de protenas Bcl2 de mamferos controla a via intrnseca principalmente pelo


controle da liberao do citocromo c e de outras protenas mitocondriais no citosol;
Algumas protenas Bcl2 so proapoptticas e outras so antiapoptticas e estas se
combinam formando heterodmeros, nos quais ocorre a inibio da atividade de ambas
as protenas;
O balano entre as atividades dessas duas classes funcionais de protenas Bcl2
determinam se as clulas vivem ou morrem pela via intrnseca da apoptose;
Protenas Bcl2 antiapoptticas Bcl2 e Bcl-XL (compartilha 4 domnios de homologia com
Bcl2 BH1-4)
Protenas Bcl2 proapoptticas Subfamlia das protenas BH123, as principais so Bax e
Bak (no possuem domnio BH4) e subfamlia das protenas BH3-apenas (Bad, Bid, Bim,
Puma e Noxa) compartilham somente o domnio BH3;
Bax
Bak

Protenas Bcl2 regulam a via intrnseca da apoptose

Bak e Bax so as principais BH123 para que a via intrnseca em clulas de mamferos.

Bak e Bax tambm atuam na superfcie no RE e na membrana nuclear. Quando ativadas


em resposta ao estresse de RE, elas liberam Ca2+ no citosol, o que ajuda a ativar a via
intrnseca dependente de mitocndria da apoptose por um mecanismo ainda pouco
entendido;

As protenas Bcl2 antiapoptticas tambm esto presentes na superfcie citoslica da


membrana mitocondrial externa, do RE e do envelope nuclear, inibindo a apoptose por
meio de ligao s proapoptticas;

Protenas BH3-apenas so a maior subclasse de protenas da famlia Bcl2, elas promovem


apoptose por meio da inibio de protenas antiapoptticas;

Por um mecanismo pouco entendido, protenas BH3-apenas promovem o agregamento de


Bak e Bax na superfcie mitocondrial, o qual induz a apoptose;

Protenas Bcl2 regulam a via intrnseca da apoptose

Quando uma clula privada de sinais de sobrevivncia, uma via de sinalizao leva a
codificao da protena BH-apenas Bim, a qual dispara a via intrnseca;

Em resposta ao dano no DNA, a protena supressora de tumor p53 promove a codificao


das protenas BH3-apenas Puma e Noxa, que disparam a via intrnseca;

Quando receptores de morte ativam


a via extrnseca, a caspase-8 cliva
Bid, produzindo a forma truncada
tBid, que se transloca para a
mitocndria onde inibe protenas
Bcl2 antiapoptticas e causa a
agregao
de
BH123
proapoptticas;

Bid, Bim e Puma so os ativadores


mais potentes da apoptose da
subfamlia das protenas BH3apenas, pois podem inibir todas as
protenas Bcl2 antiapoptticas;

Protenas Bcl2 no so os nicos


reguladores
intracelulares
de
apoptose. Inibidores de apoptose
(IAPs) atuam na supresso da
apoptose via inibio da atividade
das caspases;

Caspases inibem IAPs

IAPs foram inicialmente identificadas em vrus de insetos (baculovrus), que as codificam


para evitar que a clula hospedeira infectada pelo vrus se mate por apoptose;

Sabe-se que IAPs possuem um ou mais domnios BIR (repetio IAP de baculovrus), que
permitem a elas se ligarem e inibirem caspases ativadas;

Algumas IAPs marcam caspases por poliubiquitao para destruio pelos proteossomos;

Em Drosophila a inibio proporcionada por IAPs pode ser neutralizada por protenas
antiIAPs;

Existem 5 antiIAPS em Drosophila, dentre elas Reaper, Grim e Hid;

O balano entre IAPs e antiIAPs firmemente regulado, sendo crucial para o controle da
apoptose em moscas;

O papel de protenas antiIAPs na apoptose em mamferos mais controverso;

AntiIAPs so liberadas do espao intermembranar mitocondrial para o citosol quando a


via intrnseca ativada, bloqueando IAPs no citosol e promovendo a apoptose. No entanto
quando genes que codificam as antiIAPs Smac (DIABLO) e Omi so inativados, a
apoptose no afetada.

Na ausncia de estmulos
apoptticos, as IAPs evitam
apoptoses
acidentais
causadas por ativao
espontnea de procaspases

Fatores de sobrevivncia extracelulares inibem a


apoptose em vrias vias

Fatores de sobrevivncia geralmente se ligam a receptores de superfcie celular, que


ativam vias de sinalizao intracelulares que suprimem a apoptose;

Alguns fatores de sobrevivncia estimulam um aumento na produo de protenas Bcl2


antiapoptticas, como Bcl2 e Bcl-XL;

Outros inibem a funo de protenas proapoptticas BH3-apenas, como Bad;

Em Drosophila, alguns fatores de sobrevivncia agem fosforilando e inativando protenas


antiIAP, permitindo que IAPs inibam a apoptose;

Apoptose excessiva ou insuficiente pode contribuir


para doenas

Em muitas doenas humanas o nmero excessivo de clulas que entram em apoptose pode
causar dano tecidual (ex.: ataque cardaco, derrame);

Acmulo excessivo de clulas levam ao desenvolvimento de doenas (ex.: doenas


autoimune e cncer)

Maquinaria da morte celular e sua regulao


Conceito chave
A apoptose o destino automtico de uma clula em um organismo
multicelular...
...a menos que a clula receba sinalizao
por fatores trficos (ou de sobrevivncia)
Em outras palavras: Todas as clulas necessitam de ESTMULOS
TRFICOS para sobreviverem, na ausncia desses fatores cometem
suicdio.

Interaes diretas entre protenas pr-apoptticas e


anti-apoptticas desencadeiam a apoptose na ausncia
de fatores de sobrevivncia.
A ligao desses fatores na superfcie celular altera tais
interaes resultando em sobrevivncia celular.