Master 1

Eaux Sols Environnement

Etude du fonctionnement
d'un pilote exprimental
Systme de boues actives
Par

DAUNIS Mlanie
CHAMPREDONDE Renaud
BLESBOIS Edouard

Unit dEcologie microbienne et traitement biologique des eaux

Responsable : Evelyne BUFFAN-DUBAU

TABLE DES MATIERES

I. Introduction ........................................................................................................... 3
II. Prsentation du pilote............................................................................................ 3
1. Mise en place du pilote.................................................................................. 3
2. Principe de fonctionnement :......................................................................... 5
III. Mesures ................................................................................................................ 6
1. Paramtres de fonctionnement du pilote....................................................... 6
2. Matires en suspension ................................................................................ 6
3. Dosage de l'azote ammoniacal ..................................................................... 6
4. Demande chimique en oxygne.................................................................... 7
5. Dosage du phosphore ractif soluble............................................................ 8
IV. Rsultats ............................................................................................................... 9
1. Matires en suspension ................................................................................ 9
2. L'azote ammoniacal .................................................................................... 10
3. Demande Chimique en Oxygne ................................................................ 10
4. Phosphore soluble ...................................................................................... 11
5. Charge massique ........................................................................................ 12
6. Age des boues ............................................................................................ 13
7. Observation des boues ............................................................................... 13
a. La coloration GRAM............................................................................... 13
b. Observation des boues la cellule de Thoma ....................................... 16
V. Discussion........................................................................................................... 18
VI. Conclusion .......................................................................................................... 20

I. Introduction
Cette tude sinscrit dans le cadre de la formation du Master ESE, et fait partie
intgrante du module dcologie microbienne. La majeure partie de cet
enseignement a consist en une caractrisation et une analyse du traitement de
leau. Cest donc dans le cadre technique de la prsentation des procds rgissant
le contrle et la qualit de leau que nous allons tudier un pilote exprimental
dpuration de leau.
Le but de cette tude est de raliser les mesures et dosages ncessaires la
caractrisation du fonctionnement du pilote.

II. Prsentation du pilote

1.

Mise en place du pilote

Le pilote utilis en travaux pratiques se trouve dans une salle du btiment

4R3. Il est compos d'un conteneur pour l'eau rsiduelle urbaine de synthse, d'un
racteur de 3 Litres, d'un dcanteur boues de 3,8 Litres et d'un rcipient de
rcupration de l'eau pure. Les boues utilises proviennent de la station
dpuration de Ginestous. Chaque lment du montage est reli au suivant par un
systme de tuyaux et de pompes. Il n'y a pas de dbit de purge, celle-ci est ralise
rgulirement de faon manuelle. La veille de notre sance de travaux pratiques le
racteur a dbord ; les rsultats des mesures seront donc prendre avec
prcaution.

ERU
Xe, Se,
Qe

Xs,
S,
Qs

Racteur
Mlange
Homogne

Eau
pure

Xr, S,
Vr
Dcanteur

Xdb,
Vdb

Qr,
Xdb
Remise en circulation
des boues

Qp
Purge

Figure 1 : Schmatisation de pilote

Figure 2 : Systme de stockage et de refroidissement de l'ERU de synthse.

arrive de
l'ERU

Racteur

Dcanteur

Pompes de
recirculation

Figure 3 : Mise en place du pilote en salle de travaux pratiques.

2.

Rcupration
de l'eau
pure

Principe de fonctionnement :
L'eau rsiduelle urbaine est charge en substrat Se, et en matire organique

une concentration Xe. Elle arrive dans le racteur avec un dbit Qe. Le racteur
contient des micro-organismes qui sont utiliss pour rduire le substrat en matire
organique. Le dbit d'eau en sortie du racteur est le mme que celui d'entre. L'eau
contient du substrat S et de la matire organique dont une grande partie est
rcupre dans le dcanteur. Le mlange micro-organismes et matire organique
forme les boues, rintroduite au dbit Qr dans le racteur. L'aration du systme
fournit l'oxygne ncessaire aux organismes pour dgrader le substrat, les boues
sont "actives". Elles sont plus efficaces car elles ont dj t en contact avec le
substrat trait et pourront ainsi dbuter sa dgradation sans priode de latence.

III. Mesures
1.

Paramtres de fonctionnement du pilote

On mesure la temprature du systme, les divers volumes de boues

ainsi que les dbits ncessaires la caractrisation du pilote. Le pH n'est pas

mesur car la sonde utilise est neuve et non adapte au racteur.

2.

Matires en suspension

Les matires en suspension sont mesures par filtration et par centrifugation

d'aprs la norme NF T 90-105.

Par filtration pour l'ERU et l'eau pure : on pse un filtre en fibre de verre
(Whatmann GF/C) pralablement sch au dessicateur, not P1 (mg). On
filtre sur ce dernier un volume connu V d'chantillon. Le tout est sch 3h
l'tuve 100C, avant d'tre pes, la masse obtenu e est note P2 (mg). Ainsi
on en dduit la quantit de MES qui est gale : (P2-P1)/V (mg/L). On
recueille le filtrat pour le dosage des orthophosphates.

Par centrifugation pour les prlvements dans le racteur et le culot du

dcanteur : on prlve un volume V d'chantillon, que l'on centrifuge 5000g
pendant 20 minutes. Soit P1 la masse d'une coupelle de pese,
pralablement sche 10 minutes au dessicateur. On rcupre le culot dans
cette coupelle, puis on sche le tout durant 3h 100C l'tuve. On note P2
la masse de la coupelle + le culot. On en dduit la masse de MES qui est
gale (P2-P1)/V (mg/L)

La quantit de matires volatiles en suspension est calcule avec l'approximation :

MVS = MES/1,2.

3.

Dosage de l'azote ammoniacal

En milieu alcalin et tamponn, l'ammoniaque libre est entran par la vapeur.

NH4+ + OH-

NH3 + H2O

NH4OH entraine

Ces vapeurs sont ensuite condenses puis neutralisent une solution d'acide
sulfurique titre.
NH4OH + H+

NH4+ + H2O

On ralise alors le dosage en retour de l'acide en excs. La neutralisation de l'acide

se fait par la soude. Le protocole est indiqu en salle de travaux pratiques et
correspond la norme AFNOR NF T 90-110.

4.

Demande chimique en oxygne

Ce dosage se fait d'aprs la norme AFNOR NF T 90-101. Son but est de mesurer la
quantit d'agent oxydant consomm par la matire organique de l'chantillon. La
mesure est aussi ralise sur une solution standard d'hydrognophtalate de
potassium dit KHP.

Le dosage de la DCO de cette solution se fait selon la raction suivante :

KO8H5O4 + 15/2 O2

8CO2 + 5/2 H2O + 1/2 K2O

L'oxydation complte d'une mole de KHP est ralise avec 15/2 O2 .

340,36 mg/L de KHP correspondent 1,67 10-3 mol/L de KHP et 0,0125 mol/L d' O2
D'o la DCO Thorique de 400,23 mg d' O2 /L.
Pour les calculs, on utilise les normalits, en moles d'quivalents par litre de solution.
Calcul de la normalit du sel de Mohr :

Nsel de Mohr = Vdichromate x Ndichromate / Vsel de Mohr

Calcul de la normalit du dichromate :

Ndichromate = Nsel de Mohr x Vburette / (Vdichromate x 2 pour la dilution, ERU uniquement)

Calcul de la DCO :

DCO = 8000 (Ndichromate blanc - Ndichromate chantillon) en mg/L

Les mesures sont effectues sur un blanc (eau dminralise), la solution de KHP,
l'eau pure et l'ERU. Les deux premires solutions sont utilises pour dterminer
les erreurs sur les mesures des deux dernires, et vrifier nos rsultats.

5.

Dosage du phosphore ractif soluble

La dernire dtermination effectue sintresse la quantit de phosphore soluble

que contient leffluent du rseau urbain, ainsi que celle de leau pure. Pour ce
faire, nous allons nous intresser la dtermination de la concentration en
orthophosphates par le procd de rduction. Cette raction est initie par lacide
ascorbique du complexe phosphomolybdique form en milieu acide avec de
lamonium heptamolybdate et du tartrate double dantimoine et de potassium (ractif
combin).
La mthode utilise pour valuer ces concentrations est celle de la
spectrophotomtrie, qui consiste en une mthode de caractrisation ou de mesure
base sur la mesure de labsorbance, ou la transmission, dune solution une
longueur donde donne. A laide de la droite dtalonnage D.O.= f [ PO43- / P- PO43- ]
(Densit Optique) nous dterminerons la concentration en orthophosphates de la
solution.

IV. Rsultats
Dans cette partie, nous allons prsenter les rsultats obtenus lors de
lexprimentation. Les quatre paramtres tudis et prsents ci-dessous sont les
plus reprsentatifs de ltude de la qualit dune eau.

1.

Matires en suspension

Les dosages effectus lors de la sance de manipulation ont conduis aux rsultats
suivants (tableau 1) :

MES
V (mL)

P1 (g)

P2 (g)

MES (mg/L)

MVS (mg/L)

racteur

10

2.3512

2.3631

1190

991.7

culot

10

2.3430

2.3615

1850

1541.7

ERU

50

0.0890

0.1160

540

450

EE

50

0.0900

0.1060

320

266.7

Tableau 1 : Rsultats des Matires En Suspension (MES)

Ces rsultats montrent une trs forte concentration en MES dans le culot, ce qui
sexplique par la dcantation qui est le processus privilgi dans cette partie du
dispositif. Ensuite, notre attention se porte sur les diffrences entre lEau du Rseau
Urbain (not ERU dans tableau) et lEau Epure (not EE dans le tableau). Nous
constatons une baisse significative de la teneur en MES. De mme, les Matires
Volatiles Sches (MVS) baissent fortement entre leau traiter et leau pure. Nous
pouvons calculer lefficacit du systme sur le traitement des MES et des MVS :

EMVS =

450 266.7
= 40.7 %
450

EMES =

540 320
= 40.7 %
540

Nous obtenons donc une efficacit de 40 % sur les deux procds.

2.

L'azote ammoniacal

Les dosages concernant lazote ammoniacal sont regroups dans le tableau suivant
(tableau 2) :
NH4+
-

V OH (ml)

[NH4+] (mg/L)

blanc

11.6

0.0205

EE

11.8

0.0205

ERU

12.8

0.0223

talon

11.8

0.0205

Tableau 2 : Rsultats de NH4+

Les quantits dazotes contenus dans notre milieu sont en proportions faibles. Ces
concentrations ne permettent donc pas une mesure fiable aux vues des conditions
techniques employes. Nous constatons que le blanc, la solution talon et leau
prsentent une concentration identique en NH4+.
Nous pouvons effectus le calcul de lefficacit du systme concernant lpuration de
leau du point de vue de lazote. Nous obtenons :

ENH + =
4

0.02230.0205
= 8%
0.0223

Ce rendement correspond une efficacit peu leve.

3.

Demande Chimique en Oxygne

Aprs une manipulation minutieuse du fait du caractre dangereux des ractifs, nous
avons obtenus les valeurs concernant la Demande Chimique en Oxygne qui sont
regroupes dans le tableau suivant (tableau 3) :

DCO
V sdm

N dichromate

DCO (mg/L)

DBO5

eau dminralise

20.12

0.239

ERU

12.39

0.079

1277

510.8

eau pure

13.94

0.166

584

233.6

KHP

13.34

0.159

640

Tableau 3 : Rsultats de la DCO pour les chantillons tests

10

Nous observons une teneur importante en DCO dans leffluent. Ceci est du lorigine
des boues (station dpuration de Ginestous). Nous pouvons galement calculer le
rendement du pilote concernant lpuration de leau en termes de DCO :

EDCO =
EDBO5 =

1277 584
= 54.3%
1277

510.8 233.8
= 54.3%
510.8

Nous constatons que la moiti de la concentration en DCO et en DBO5 est limine.

4.

Phosphore soluble

Dtermination de la droite dtalonnage :

Nous avons procd quatre solutions dilues de PO43- dont nous avons dtermin
labsorbance. Les rsultats sont indiqus dans le tableau suivant :

Concentration

Densit optique

en mg/l
0.2

0.085

0.4

0.17

0.6

0.258

0.8

0.34

Tableau 4 : Rsultats de la mesure de la densit optique pour les quatre concentrations

La droite dtalonnage ainsi obtenue nous permet de calculer les concentrations en

orthophosphates de la solution. En effet, pour chaque point de cette droite, la
connaissance de la densit optique (D.O.) correspondra la concentration
recherche.

11

D.O

Droite d'talonnage du P-(PO4)30.4

0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0

y = 0.4265x
R2 = 0.9998

0.2

0.4

0.6

0.8

Concentration (mg/L)

Figure 5 : Droite dtalonnage du P-PO43-

Nous procdons ainsi la mesure de la densit optique 700 nanomtres des trois
chantillons qui sont : un test sur un blanc partir dune solution deau
dminralise, puis sur les solutions provenant de leau rsiduaire urbaine et de leau
pure. Les rsultats sont regroups dans le tableau suivant (tableau 6) :

Phosphore ractif soluble

3-

[PO4 ] (mg/L)
ERU

0.4174

EE

0.4056

Tableau 5 : Rsultats des concentrations en Phosphore

Nous pouvons calculer lefficacit de ce pilote en ce qui concerne le phosphore :

EPPO 3 =
4

0.4174 0.4056
= 2.8%
0.4174

Nous constatons que lefficacit de ce pilote concernant lpuration en termes de

phosphore est trs faible.

5.

Charge massique

Les concentrations en DBO obtenus plus haut, vont nous permettre de calculer la
charge massique. La charge massique se dfinie ainsi :

charge massique applique =

Qe * DBO
Xracteur *Vracteur
12

Applique notre systme, nous obtenons :

charge massique applique = 3.21 kg DBO / kg MVS / j

Ce qui correspond un procd de type forte charge massique.

6.

Age des boues

Cette notion renseigne sur le temps de sjour des boues dans le pilote et sur le type
de biomasse prsente. Ce paramtre influe sur la qualit du traitement biologique,
plus les boues sont ges et plus le degr de minralisation des boues est lev et
meilleurs sont les rendements puratoires.

Nous allons dterminer lge des boues par la formule suivante :

Exprimons tout dabord le stock des boues :

Stock des boues = MESracteur * Vracteur +MESculot *(Vculot + Vtuyau )+MESeau_pure *(Vdcanteur -Vculot )
Stock des boues = 5124 mg

Or nous avons la raction suivante entre le dbit dentre et le dbit de sortie :

Dbit d'entre = dbit de sortie = 18,7 L/j

De plus, nous avons :
Flux de sortie = MESeau pure * Qsortie = 5984 mg/j
Nous obtenons donc :

Age des boues =

7.

Stock de boues
5124
=
= 0,86 j
Flux de boues sortant 5984

Observation des boues

a. La coloration GRAM
Culture des bactries :
Aprs filtration de l'eau rsiduelle urbaine, on ralise une culture spcifique
des bactries qui nous intressent, en particulier les coliformes. On favorise le
dveloppement des bactries Gram- en ralisant la culture avec du tergitol TTC. En
effet, les bactries coliformes fermentent le lactose et sont incapables de rduire le
13

TTC. Elles se dveloppent 44C. On utilise aussi un indicateur color : le bleu de

bromophnol. Lors de la fermentation du lactose, le pH diminue, l'indicateur color
passe du bleu au jaune. Les bactries qui rduisent le TTC sont entoures d'un halo
rouge caractristique.

Principe de la coloration GRAM :

On fait une suspension cellulaire des bactries de culture. Il faut taler une
goutte de cette suspension peu dense sur une lame de verre, puis la scher
dlicatement la flamme. On fixe alors les cellules en crasant la lame sur la
flamme.
La premire tape de coloration se fait avec du violet de Gentiane. Aprs
une minute, toutes les cellules sont colores en mauve. On rince l'eau distille.
Puis on utilise le lugol comme agent mordant durant une minute, avant de
rincer dlicatement l'eau et d'ponger avec du papier.
L'thanol dcolore spcifiquement les cellules enveloppe pauvre en
polymres hydrophiles. On arrte son action aprs 30 secondes par un rinage
l'eau.
Enfin, la safranine contre colore en rouge les "fausses" Gram-, on l'applique
durant 30 secondes.
On rince bien la lame ainsi prpare, on la sche avec du papier, puis avec la
flamme.

On peut prsent observer les bactries au microscope. A faible

grossissement, on repre d'abord l'emplacement de la prparation, puis on ajoute
quelques gouttes d'huile immersion avant de passer l'objectif x100.

14

Figure 6 : Les diffrentes tapes de la coloration Gram.

Figure 7 : Visualisation aprs coloration Gram.

15

b. Observation des boues la cellule de Thoma

La Cellule de Thoma :
Il sagit dune lame spcifique dont voici la schmatisation :
Cellule de Thoma

Figure 6 : Vue de profil

Figure 7 : Vue de dessus

La cellule de Thoma (0,1 mm) est forme de 16 grand carres (0,004mm),

composs chacun de 16 petits carrs

Figure 8 : Cellule de Thoma en entier.

Figure 9 : Agrandissement de la cellule

de Thoma

Le principe de ce comptage est le suivant : on compte tous les lments situs

lintrieur des lignes dlimitant cette surface. Pour les lments situs sur les lignes,
on compte soit ceux qui sont sur la ligne de gauche et pas ceux qui sont sur la ligne
de droite (soit l'inverse), et soit ceux qui sont sur la ligne du haut et pas ceux qui sont
sur la ligne du bas (ou linverse).
Le but nest pas de compter la totalit des micro-organismes sur lintgralit de la
cellule de Thoma, mais de les compter sur une surface dont il faut noter la valeur afin
dobtenir ensuite le nombre d'organismes par unit de volume.

Lors de notre sance, nous n'avions pas pu raliser ce comptage. Nous avons
simplement observ les organismes prsents dans les boues de la station de
Ginestous.

16

Nous avons observ quelques organismes diffrents. La prsence de cilis, fixs et

libres, a t remarque dans toutes les prparations, avec prdominance de
Pritriches Carchesium. Ces espces taient majoritairement des organismes fixs,
montrant que les boues taient issues d'un procd de faible ou de moyenne charge,
et d'ge moyen.

Nos prparations taient assez pauvres en micro-organismes, nous aurions du

observer des rotifres, indicateurs d'une bonne aration, d'une puration pousse et
du fonctionnement stable du systme.

17

V. Discussion
La premire remarque concerne les conditions dutilisation du pilote. En effet, un
dbordement du racteur la veille a engendr une perte importante de boues, leur
ge est donc trs faible.
Ensuite, concernant le racteur, nous avons constat une accumulation de boues
dans le racteur. Ce qui implique :

( flux entre = QeXe ) > ( flux sortie = QsXs )

car : Q e = Q s
Concernant les MES, le taux defficacit du pilote nest que de 40.7 %, ce qui peut
galement sexpliquer par le dbordement du pilote.

Pour l'ammoniac, nous constatons des concentrations identiques pour le blanc, pour
leau pur, ainsi que pour ltalon. Nous supposons un problme de manipulation,
notamment avec le borate de soude (borax).

En ce qui concerne la DCO du KHP, nous constatons une augmentation importante

par rapport aux annes prcdentes. Deux hypothses sont mises en avant : la
premire concerne le sel de Mohr qui pourrait ne pas avoir t utilis dans de bonnes
conditions (erreur de concentration), dans ce cas tous nos rsultats sont surestims.
La seconde met en doute lefficacit du KHP (par exemple problme de date limite
dutilisation, de stockage). Dans ce cas l les autres concentrations sont
considrs comme valables, lerreur ne provenant que du KHP.

Lpuration concernant le phosphore soluble se rvle trs faible. Lefficacit du

pilote est quasi nulle, ce qui signifie que lon se retrouve avec une concentration
identique celle prsente en entre. Cependant, les rsultats obtenus lors des
travaux pratiques effectus par les autres groupes, ont montrs des rendements
ngatifs. Cette prcision replace la valeur trouve dans son contexte.

18

La valeur de la charge massique applique est trs leve. Cette forte concentration
est due des valeurs leves de DBO obtenues.

Lge des boues calcul est faible par rapport au systme tudi. Cette dure est
due au problme du dbordement du pilote. Dans labsolu, un ge de boues lev
est synonyme dune bonne efficacit du systme. Nous obtenons ici un age des
boues trs faible ce qui ne garantie pas un systme efficace. Cependant, on note
toutefois une puration de lordre de 50% sur la DCO. Les autres paramtres
prsentent en revanche des rendements plus faibles.

Dans le rservoir de lEau du Rseau Urbain, il devrait rgner une temprature de

9C, pour viter le dveloppement bactrien. Or lor s de notre sance il faisait la
temprature tait de 20C. Il y a donc augmentation de la biomasse dans le pilote.

Lincident provoqu la veille, savoir le dbordement du racteur, engendre la

production de boues trs jeunes et stock de boues trs faible cause de l'incident de
la veille.

19

VI. Conclusion
A lissue de cette tude, le pilote montre donc une efficacit maximale en ce qui
concerne la D.C.O ( E(%)= 54.3% ), ainsi quune efficacit relativement bonne en ce
qui concerne les M.E.S ( E(%)= 40.7% ) ; En revanche, lefficacit de ce pilote est
bien moins bonne en ce qui concerne lazote ammoniacal et le phosphate : en effet,
ce pilote exprimental ne dispose pas de dispositif dlimination de lazote
(nitrification puis dnitrification) et du phosphore.
En ce qui concerne llimination de lazote : la nitrification requiert un long temps de
sjour de la biomasse bactrienne dans le racteur. En thorie un ge des boues
lev correspond une charge massique faible, cest dire un faible apport de
pollution traiter par rapport la masse de boues actives. Seules les stations
dpuration dimensionnes en faible charge ou en aration prolonge sont
susceptibles de nitrifier. La dnitrification, quand elle, confre la boue une
meilleure dcantabilit ; ainsi, la mise en place dun procd de dnitrification aurait
sans doute permis au pilote davoir une meilleure efficacit en termes de MES et de
MVS.
En ce qui concerne llimination du phosphore, lefficacit de notre pilote serait
comparable celle dune station dpuration biologique classique , si celle-ci tait
comprise entre 18% et 30%, hors ici elle est de 2,8%. En station de traitement
chimique, le traitement du phosphore par voie physico-chimique consiste piger
le phosphore dissous sous forme particulaire. Ce changement de phase a lieu
au contact de cations (ions calcium, magnsium ou ferriques) apports soit par les
eaux uses (prcipitation naturelle), soit par ajout de ractifs base de fer,
daluminium ou de chaux (prcipitation force).
Lajout des diffrents procds noncs ci-dessus, permettrait daugmenter
lefficacit de notre pilote.

20