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UNIPAM CENTRO UNIVERSITRIO DE PATOS DE MINAS

Microbiologia Zootcnica
Zootecnia 4 perodo
2 semestre de 2015
Aula 8

Microbiologia ruminal

Caractersticas do sistema digestivo dos ruminantes

RUMINANTE
Caractersticas:
Estmago ocupa maior parte da cavidade abdominal
Dividido em 4 compartimentos:
- rmen: cerca de 80% do estomago, capacidade at mais de 200 litros
milhares de microrganismos
bactrias, protozorios e fungos
ocorre fermentao: capacidade de se alimentar de alimentos ricos em
fibra
-

Retculo: possui microrganismos ocorre fermentao


Omaso: possui microrganismos ocorre fermentao
Abomaso: estomago verdadeiro digesto cida

Ambiente favorvel para o


crescimento bacteriano
Microrganismos se mantm
graas a manuteno do
pH, temperatura e ausncia
de oxignio

Caractersticas do ambiente retculo - rmen


- Milhes de microrganismos (bactrias, protozorios e fungos)
-

Ocorre fermentao: capacidade de se alimentar de alimentos ricos em fibra

Gases: 65% CO2 ; 27% CH4 ; 7% N2 ; 0,6% O2 ; 0,2% H2 ; 0,01% H2S

AGV: Acetato, propionato, butirato, valerato, isovalerato, isobutirato


Amnia: 2 - 42 mg/100 ml necessria para crescimento bacteriano

Rmen - Retculo
30.000.000.000.000.000
microrganismos

Teixeira, 2001

Quais microrganismos?

Habitantes do rmen

Existem em alta densidade populacional


So anaerbicos --- Vivem a 39-40oC e a pH 5,5 - 7,0
Produzem produtos de fermentao similar aos encontrados no rmen
Vivem em ambiente aquoso e custa da ingesta do ruminante

Bactrias --- Protozorios


Bacterifagos (vrus bacteriano)
potencial para modificar espcies presentes
Fungos
importantes em fibra de baixa qualidade
Leveduras (fungo unicelular)
Crescimento timo a 25oC e no a 39oC
Reproduo no rmen limitada (introduzidos com o alimento)

Populao microbiana
Retculo-rmen:
1010 - 1011 bactrias/g de contedo (mais de 200 espcies)
105 - 106 protozorios/g de contedo (25 gneros)
103 - 105 fungos anaerbicos/g de contedo (4 gneros)
107 - 109 Bacterifagos/ml
Proporo varia, mas diversidade no!!!

BACTRIAS DO RMEN
Pelo menos 200 espcies diferentes
Atividade metablica muito intensa

Colonizao do substrato a partir de 1 a 2 min aps entrada no


rmen

Predomnio de espcies de acordo com a dieta

10

BACTRIAS DO RMEN
Aderncia: 1 passo para degradao do substrato
70% so aderentes na fase slida do rmen --- 30% no so aderentes e
esto na fase lquida
Aderem a partculas alimentares, aos protozorios (metanognicas) e ao
epitlio ruminal
posiciona o sistema enzimtico prximo ao substrato

Colonizao no o fator determinante da baixa degradabilidade da fibra no


rmen
Bactrias celulolticas ficam mais aderidas a partculas slidas que
amilolticas
11

Classificao das bactrias ruminais


1.
2.

Bactrias celulolticas
Bactrias hemicelulolticas

3.
4.
5.

Bactrias amilolticas

Bactrias utilizadoras de acares


Bactrias utilizadoras de AGVs
6.

Bactrias proteolticas

7.

Bactrias produtoras de amnia

8.

Bactrias produtoras de metano


9.

Bactrias lipolticas

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Substratos microbianos
Ruminococcus albus

Hidrolisa Fermenta Fermenta Fermenta Fermenta Fermenta


Celulose Maltose Pectina Sacarose Succinato Lactato
X

Ruminococcus flavefaciens

Bacteroides succinogenes

Butyrivibrio fibrisolvens

Bacteroides ruminicola

Bacteroides amylophilus

Selenomonas ruminantium

Streptococcus bovis

Megasphaera elsdenii

Succinomonas amylolytica

Succinivibrio dextrinosolvens

Lachnospira multiparus

13

1. Bactrias Celulolticas
Produzem a enzima extracelular celulase
atualmente acredita-se tratar de um complexo de enzimas com funes
especficas no metabolismo de degradao da celulose at glucose;
Possuem tambm a habilidade de utilizar a celobiose;
Presentes em grande nmero no rmen, principalmente quando a dieta rica
em forragens

As principais espcies so:


Bacterioides succinogenes ---- Ruminicoccus flaverfaciens
Ruminococcus albus ---- Butyrivibrio fibrisolvens
Eubacterium cellulosolvens (em certas condies)
Clostridium lochheadii (de menor importncia)
14

2. Bactrias Hemicelulolticas
Grande parte das bactrias celulolticas tambm capaz de atuar na
degradao da molcula de hemicelulose.

Bactrias hemicelulolticas tambm so capazes de degradar pectinas (da,


serem classificadas tambm como bactrias pectinolticas).

As principais espcies so:


Butyrivibrio fibrisolvens --- Bacterioides ruminicola
Ruminococcus sp. --- lachnospira multiparus (principalmente pectinas)
Succinivibrio dextrinosolvens
Treponema sp. ---- Streptococcus bovis

15

3. Bactrias Amilolticas
Responsveis pela degradao do amido, presente em grande quantidade,
quando se usa rao rica em gros (milho e sorgo).
Certas bactrias celulolticas tambm atuam na degradao do amido (ex.: B.
succinogenes).
Degradao do amido se d pela enzima extracelular amilase,
Pode variar de acordo com a espcie e condies do meio (pH, crescimento
microbiano...)

As principais espcies so:


Bacterioides amylophilus ---- Streptococcus bovis
Succininimonas amylolytica ---- Bacterioides ruminicola
Succinivibrio dextrinosolvens (principalmente dextrina)

16

4. Bactrias utilizadoras de acares


Todas as bactrias que atuam na degradao de polissacardeos so

capazes de utilizar acares simples (mono e dissacardeos - glicose,


celobiose, sacarose e maltose).

Estes acares so encontrados no rmen quando a dieta rica em gros


ou quando as forragens contm alta concentrao de acares solveis
(principalmente forragens novas)

Algumas destas espcies so:


Ruminococcus flavefaciens (celubiose) --- Treponema bryantii
Lactobacillus vitulinus --- lactobacillus ruminus
17

5. Bactrias utilizadoras de AGVs


Utilizam cidos produzidos durante a fermentao (cido ltico, cido
succnico e cido frmico).

As principais espcies so:


Megasphaera elsdenii
Selenomonas ruminantium
Veillonella alcalescens
Anaerovibrio lipolytica
Propioni bacterium
Veillonella gazogenes
Peptostreptococcus elsdenii

18

6. Bactrias proteolticas
Capazes de degradar protena;

Existem, no entanto, bactrias essencialmente proteolticas (utilizam


aminocidos como fonte de energia primria).

As principais espcies so:


Bacteroides amylophilus
Baterioides ruminicola
Butyrivibrio fibrisolvens (alguma linhagens)
Streptococcus bovis (algumas linhagens)

19

7. Bactrias produtoras de amnia


Capazes de produzir amnia de vrias formas:

pela deaminao de aminocidos, pela hidrlise da uria, etc.


A amnia est sempre presente no rmen, indicando que a atividade
dessas bactrias muito importante.

As principais espcies so:


Bacterioides ruminicola
Megasphaera elsdenii
Selenomonas ruminantium
Butyrivibrio spp. (algumas linhagens)

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8. Bactrias produtoras de metano


Produzem metano (CH4)
So especialmente importantes para o ecossistema ruminal:

regulam a fermentao pela remoo das molculas de H2 produzindo CH4.

As principais espcies so:


Methanosarcina barkerii
Methanobrevibacter ruminantium
Methanobacterium formicicum
Methanomicrobium mobile

21

9. Bactrias lipolticas
Sintetizam lipases (enzimas extracelulares normalmente ligadas a

membrana celular) que atuam na hidrlise de triglicerdeos, fosfolipdios e


galactolipdeos

Tambm so responsveis pela hidrogenao de cidos graxos de cadeia


longa e insaturada

As principais espcies so:


Anaerovibrio lipolytica ---- Butyrivibrio sp.
Butyrivibrio fibrisolvens ---- Treponema bryantii
Eubacterium spp. --- Fusocillus spp.
Micrococcus sp. ---- Ruminococcus albus
22

Inter-relao entre microrganismos


Ecossistema ruminal (pH, temperatura, microrganismos)

processo fermentativo

de grande importncia para o animal hospedeiro


Produo de AGVs - energia
RESULTADO DE QUE?

resultado da inter-relao existente entre os microrganismos

23

Inter-relao entre microrganismos


em termos de interdependncia, podemos separar os microrganismos em 2
grandes grupos:

1 : microrganismos que fermentam os nutrientes presentes no alimento


2: microrganismos que utilizam os produtos finais da fermentao do 1 grupo

importante para que ocorra:


-

a fermentao dos nutrientes

renovao e reciclagem dos produtos finais, como succinato, lactato, formato

e hidrognio que so convertidos em AGVs

24

ALIMENTAO CRUZADA (CROSS-FEEDING) ENTRE BACTRIAS RUMINAIS:


Muitas bactrias somente sobrevivem no rmen pelo uso de produtos de
excreo de outras bactrias:
a) Solubilizao de celulose e fermentao:

celulose

celulase

celodextrina + celobiose

*Organismos que produzem celulases:


B. succinogenes, R. albus, R. flavefaciens.
**Organismos que fermentam celobiose:
B. succinogenes, R. albus, R. flavefaciens, B. fibrisolvens, P. ruminicola,
S. ruminantium, S. bovis.
***Organismos que usam celodextrina:
P. ruminicola, S. ruminantium, S. bovis.
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ALIMENTAO CRUZADA (CROSS-FEEDING) ENTRE BACTRIAS RUMINAIS:

b) Solubilizao de hemicelulose e fermentao:


celulases
hemicelulose
xilanas + pentoses + hexoses
hemicelulases

*Organismos que produzem celulases e hemicelulases:


B. succinogenes, R. albus, R. flavefaciens, B. fibrisolvens
**Organismos que fermentam pentoses ou xilanas:
R. albus, R. flavefaciens, B. fibrisolvens, P. ruminicola, E. ruminantium,
S. ruminantium, S. dextrinosolvens.

26

ALIMENTAO CRUZADA (CROSS-FEEDING) ENTRE BACTRIAS RUMINAIS:


c) Solubilizao de amido e fermentao:
amido

amilases

dextrina + maltose

*Organismos que produzem amilases:


B. fibrisolvens, P. ruminicola, B. amylophilus, S. ruminantium, S. bovis,
S. amylolytica, Lactobacillus.
**Organismos que fermentam dextrina ou maltose:
B. fibrisolvens, P. ruminicola, B. amylophilus, S. ruminantium, S. bovis,
S. amylolytica, B. succinogenes, M. elsdenii, E. ruminantium,
S. dextrinosolvens, Lactobacillus

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ALIMENTAO CRUZADA (CROSS-FEEDING) ENTRE BACTRIAS RUMINAIS:

Organismos que utilizam amnia: todos utilizam


Bactrias fermentadoras de CE: s usam NH3 como fonte de N
Bactrias fermentadoras de CNE: usam 1/3 do N requerido na forma de NH3
o restante como aas

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PROTOZOARIOS DO RMEN
Identificados em 1843 (1 microrganismos identificados no rmen)
Inoculao ruminal ocorre por contato (me-filho)

105 a 106 /g contedo ruminal (bactrias: 1010 a 1011 )


predadores de bactrias
cerca de 10 a 100 vezes maiores que bactrias

funes pouco estudadas incluem:


controle do pH (amido, cana-de-acar)
metabolismo do H2

degradao da celulose
degradao de compostos secundrios (?)

31

Protozorios x bactrias
Protozorios

Bactrias

20 a 200 mm

0,5 a 5 mm

Tempo para duplicao

> 18 horas

> 20 minutos

Tipo de clula

Eucaritica

Procaritica

Tamanho

PROTOZORIOS

Representam cerca de 2% do peso do contedo ruminal


40 % do total de N microbiano
Responsveis por 60% dos produtos da fermentao

32

Protozorios
Capazes de fagocitar partculas de amido e acares
Reduzem a taxa de fermentao e a queda no pH aps alimentao
Reduzem o nmero de bactrias no rmen (fagocitose engolfam)
Degradam nitratos e micotoxinas
(Veira, D.M. 1986. J. Anim. Sci. 63: 1547)

Ficam aderidos a partculas slidas no rmen


Taxa de reciclagem superior a 24 horas

33

Protozorios
Protena de protozorio considerada mais digestvel e com a mesma
qualidade que protena bacteriana

no entanto, o fluxo de protozorios para fora do rmen no proporcional


ao seu nmero na biomassa ruminal retidos seletivamente no rmen
Protozorio representa importante fonte de N para bactrias

34

Protozorios
Fagocitam tudo (amido e bactrias, no selecionam)
Alguns utilizam lactato
2 grupos no rmen:
Ciliados: Holotricha e Spirotricha representam a maior parte da
microfauna degradao de celulose, hemicel., amido, lipdeos....
Flagelados: presente em pequeno nmero, menor tamanho, abundante em
animais jovens.

35

Atividade metablica dos protozorios ruminais:


a) Holotricha:
-

encontrado de 103 a 104/ml em ruminantes alimentados com forragens.

Nadam mais rpido que os entodinomorfos e so mais visveis no lquido


de rmen.

Utilizam acar. (Isotricha no utiliza maltose, mas utiliza amido)

Engolfam bactrias e possuem enzimas proteolticas.

Produzem CO2, acetato, butirato, lactato, amnia e pouco propionato.

37

Atividade metablica dos protozorios ruminais:


b) Subclasse Spirotricha - ordem Entodinomorfos:

encontrado de 105 a 106/ml em ruminantes alimentados com moderada a


grande quantidade de gros.

Encontrados associados com partculas alimentares.

Utilizam pouco CHOs solveis; engolfam amido e partculas alimentares;


utilizam celulose.

Engolfam bactrias e pequenos protozorios e usam protena como fonte de


energia.

Produzem CO2, H2, acetato, butirato, NH3 e algum formato, propionato e


lactato.
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Classificao e caractersticas dos protozorios ruminais


(Van Soest, Nutritional Ecology of the Ruminant, 1994, p. 262):
Gnero

Substrato

Digesto de
celulose

Produtos

Intervalo de
geraes

Isotricha

Amido, acar

Acet, prop, lact, H2

48 h

Dasytricha

Amido, acar

Acet, prop, lact, H2

24 h

Entodinia

Amido

Formato, ace, pr, but

6-15

Epidinium

Amido, hemicel.

Acet, prop, H2

Holotricha

Entodinomorfos

Diplodinium

Eudiplodinium

Polyplastron

cidos graxos, H2
48 h

39

Substrato utilizado e produto final obtido por protozorios encontrados no rmen.


PROOZORIO
(Gnero)
Isotricha
Intestinais
Prostoma

SUBSTRATO FERMENTADO

Amido, Glu, Pec, Sacarose


Amido, Glu, Pec, Sacarose

PRODUTO FINAL

Ac, Pr, Bu, La, H2 , Lip


Ac, Pr, Bu, La, H2 , CO2 ,
Lip

Dasytricha
ruminantium

Amido,Maltose, Glu, Cel

Ac, Bu, H2 , CO2 , Lip

Entodinium
bursa
caudatum
simplex

Amido, Hemicelulose
Amido, Glu, Cel, Maltose
Amido

Ac, Pr, Bu, H 2, CO2, Lip


Lipdeos

Diplodinium
Polyplastron
Diplodinium
Diploplastron
Eudiplodinium
Ostracodinium
Eremoplastron

Amido, Glu, Ccelu, Sacarose


Amido, Celu, Hemicelulose
Amido, Celu, Hemicelulose
Amido, Celu, Hemicelulose
Amido, Celu, Hemicelulose
Amido, Celu, Hemicelulose

Ac, Pr, Bu, La, H2 , CO2


Ac, Pr, Bu, La, H2 , CO2 , Fo
-

Amido, Celu, Hemicelulose


Maltose e Sacarose

Ac, Pr, Bu, H 2, Lip, La, Fo

Amido, Celu, Hemicelulose

Ac, Pr, Bu, H 2

Epidinium
escaudatum
Ophryoscolex
caudatus

(**) As abreviaturas mostradas no quadro, significam: Ac- cido actico, Pr proplnioco, La


lactato, Lip lipdeo, Fo frmico, Glu glucose, Cel celobiose, Celu celulose e Pec
pectina.

Bactria x protozorio
Bactria

Protozorio

% N microbiano

60-90

10-40

% alimento fermentado

40-70

30-60

mg MS/ml

9-20

5-6

g MS microb/vaca

1463

455

g ptn microb/vaca

797

348

41

Efeitos gerais dos protozorios nos ruminantes:


ruminantes sobrevivem sem protozorios (defaunao)
amido rapidamente engolfado pelo protozorio:
reduz a taxa de fermentao pela bactria (uniformiza a fermentao)

diminui a acidose ruminal e aumenta a relao acetato:propionato


engolfam at 50% das bactrias produzidas no rmen
(12.000 bactrias/protozorio/hora)

controle da populao e fermentao


42

Efeitos gerais dos protozorios nos ruminantes:


fluxo de protozorios para o intestino delgado muito baixo (26% dos
protozorios), porque:
agregam s partculas maiores e parede ruminal evita o
desaparecimento do meio ruminal
Aumentam sua densidade pelo engolfamento de amido
Concentram na parte ventral do rmen (pela densidade e
movimentao)
Sofrem autlise ruminal (N reaproveitado por bactrias)

43

FUNGOS DO RMEN
0 a 103 - 105 /g contedo ruminal
forragens de baixa qualidade
capacidade de romper estruturas foliares (cutina)
capacidade de romper estrutura molecular (celulose cristalina)
podem degradar compostos secundrios
Exemplos de compostos secundrios de forragens tropicais e seus grupamentos
qumicos
Composto secundrio

Grupamento qumico

Precursores de lignina
Taninos condensados

cidos fenlicos (cinmicos)


Polmeros de hidroxi-flavanides

Alcalides

Derivados
bsicos
nitrogenados

Saponinas
Gossipol

Glicosdeos emulsificantes
Polifenol com ramificaes metil

Mimosina

Aminocido modificado

de

aromticos

44

Atkin, 1986

46

Bactrias e fungos aderidos a fibra alimentar


Qual a importncia disso??

Maior contato enzimas


extracelulares com o alimento
Rompimento de estruturas
moleculares da planta - fibra

47

Caractersticas de consumo, digestibilidade, nmero de bactrias e protozorios


em animais sem fungos e aps inoculao de fungos (GORDON et al., 1993)

Consumo (g/d)

Sem fungos

Aps inculo

MO

628

877

FDA

264

373

MO

50,3

57,3

FDA

46,5

55,0

Bactrias totais x 109

1,4

1,6

Protozorios x 105

3,0

4,8

Digestibilidade (%)

Demonstra a importncia no processo digestivo dos ruminantes


48

50

DESENVOLVIMENTO DA POPULAO MICROBIANA DO TRATO


GASTROINTESTINAL
Comea a se desenvolver logo aps o nascimento
depende do contato do recm-nascido com a me atravs de:
- secreo salivar, secreo vaginal, ruminao, fezes,
- outros animais, bere, leite e outras fontes de alimentos.
A populao microbiana desenvolve-se principalmente pelo contato com
outros animais e pelas diferentes fontes de alimentos.

Inicialmente encontrado um grande nmero de bactrias aerbicas

desaparecem medida que o animal vai ingerindo forragens, predominando, a


partir da, bactrias anaerbicas
51

DESENVOLVIMENTO DA POPULAO MICROBIANA DO TRATO


GASTROINTESTINAL
Estudos tm mostrado que:
bezerros alimentados com dietas contendo leite, feno e concentrado
comeam a desenvolver a flora a partir da 1 semana,
a partir da 9a semana, a populao bastante semelhante populao de

animais adultos, com relao s espcies predominantes.

O estabelecimento dos protozorios no rmen bastante difcil e depende do


contato com outros animais que tenham protozorios no ecossistema ruminal.

normalmente, o estabelecimento se d pela secreo salivar e ruminao


52

DESENVOLVIMENTO DA POPULAO MICROBIANA DO TRATO


GASTROINTESTINAL
Em bezerros lactantes, o pH ruminal baixo devido presena de cido ltico

no rmen (produto da fermentao do leite)

dificultando o estabelecimento de protozorios (so sensveis a pH baixo)


A alimentao com feno e concentrado e o contato com outros animais fazem
com que ocorra o estabelecimento
Protozorios so encontrados no rmen, em condies normais, a partir da 3

semana de vida, aumentando medida em que aumenta o pH ruminal, podendo


atingir a populao de animais adultos com 9 semanas.
53

54

Nmero mdio de protozorios/ml de lquido ruminal (LR) em bezerros,


em funo da idade e pH:
Idade (meses)
pH rmen
Protoz/ml LR

7-9

4,13

4,22

4,69

5,75

5,98

6,46

6,47

3727

26832

416386

673496

683019

489821

Demonstra claramente que a medida em que se aumenta o pH ruminal,


ocorre aumento na populao de protozorios

55

FUNES DA MICROBIOTA RUMINAL ??


Digesto da fibra
Fornecer energia para o hospedeiro
cidos graxos volteis (AGVs) --- 60 a 80% da energia disponvel ao animal
Sntese de aminocidos (AAs) a partir de nitrognio no proteico (NNP) e
vitaminas do complexo B e K

Fonte de protena
60 a 90% da protena que chega no intestino delgado de origem microbiana
(depende da dieta)
Eliminar compostos txicos
compostos secundrios das plantas

56

FINALIZANDO...
Caractersticas dos ruminantes?
-

Estomago dividido em 4 compartimentos


rmen, retculo, omaso e abomaso

Ocorrncia de milhes de microrganismos


bactrias, protozorios e fungos

Ocorre fermentao
fermentao causada por microrganismos
Em funo dessas caractersticas os ruminantes so capazes de utilizar
alimentos fibrosos na sua alimentao

57

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