Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
MANUAL DE LABORATORIO
MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
Responsable:
Revisado por:
Docentes de ctedra de
Microbiologa y Parasitologa
de IEPROES
NDICE
Pagina
Misin y Visin Institucional
Introduccin
Breve Historia de la Microbiologa y Parasitologa..
Desarrollo Histrico de la Microbiologa y Parasitologa.
Normas de Seguridad y Uso del Laboratorio
Practica N 1 El Microscopio
I.
Objetivo
II.
Generalidades .
III.
Microscopio ptico.
IV. Amplificacin...
V. Poder de Resolucin.
VI.
Apertura Numrica.
VII.
Tipos de Microscopio.
VIII.
Mtodos de
Microscopia
IX. Partes Principales del Microscopio de Luz.............................
X. Uso y cuidado del Microscopio
Practica N 2 Tcnicas para el Estudio de Bacterias
I.
Generalidades
II.
Caractersticas Morfolgicas de las Colonias..
III.
Objetivo..
IV. Material por Lado de Mesa...
V. Procedimiento.
VI.
Uso de Diferentes Muestras.
VII.
Coloracin Simple.
VIII.
Coloracin de Gram..
Practica N 3 Virus..
I.
Generalidades
II.
Sistema Taxonmico Universal de Virus..
III.
Diseminacin Viral.
IV. Material
.
V. Procedimiento.
VI.
Cuestionario
Practica N 4 Estudio de las Estructuras de Hongos
I.
Generalidades de la Micologa.......
II.
Las Principales Micosis y los Hongos que las Causan
III.
Objetivos..
IV. Material
5
6
8
8
11
13
13
13
14
14
15
15
16
17
18
22
24
24
24
25
25
25
26
27
28
29
29
30
31
32
32
32
33
33
34
35
35
3
V.
Procedimiento.
36
37
37
39
40
41
42
42
42
43
43
43
44
44
45
46
46
47
47
49
49
49
50
50
52
53
54
MISIN
Somos una Institucin de Educacin Superior, que
articulando la docencia, la investigacin, la proyeccin
social,
formamos
profesionales
de
la
salud
VISIN
Ser una institucin de Educacin Especializada, lder
en la formacin de profesionales integrales y
competitivos en la prestacin de servicios de salud a
nivel
nacional
internacional,
siempre
la
INTRODUCCIN
El presente Manual de Laboratorio de Microbiologa y Parasitologa ha sido
elaborado, con el objetivo de proporcionar los conocimientos bsicos generales a
los estudiantes de Tcnico en Enfermera, Tecnlogo en Enfermera y Tcnico en
Salud Ambiental, sobre las disciplinas de ms trascendencia en el aparecimiento y
evolucin de enfermedades infecciosas o transmisibles.
Tales disciplinas abarcan la inmunologa, bacteriologa, micologa, virologa y
parasitologa mdica, que constituyen por s solas asignaturas de gran
profundidad cientfica, pero que en el desarrollo de este curso se imparten de
manera elemental y general, de forma integral, para que el estudiante pueda
aplicar los conocimientos adquiridos en su quehacer diario como profesional de
enfermera y de la salud.
La asignatura se desarrollara en dos momentos uno terico, con participacin
activa del estudiante, donde se impartirn las clases tericas segn el grupo
asignado, cumpliendo con los horarios establecidos.
El otro momento ser prctico a travs de. Laboratorios prcticos y escritos, lo que
permitir a los estudiantes aplicar la teora a la prctica, para completar el
aprendizaje.
EVALUACIN
Se realizarn tres exmenes parciales con la siguiente ponderacin:
Primer y Segundo examen parcial con una ponderacin de 10% cada uno,
igual al 20 %, el tercer examen parcial final con una ponderacin de 20%,
sumando un total del 40%, entre los tres parciales.
El 60% comprende tres trabajos exaula con una ponderacin de 10% cada uno,
ms tres laboratorios prcticos y escritos de 10% cada uno.
PRACTICAS DE LABORATORIO
Habr un examen corto (EXAMEN PRE-LABORATORIO) al inicio del laboratorio
programado, que servir para evaluar lo aprendido en las clases tericas, y lo que
se realizar en el laboratorio prctico. La temtica a evaluar ser proporcionada
con anterioridad, de acuerdo a la prctica que se desarrollar ese da.
La nota del examen pre-laboratorio, se promediar con la nota de laboratorio,
cuyo valor es del 10%.
El alumno que no asista a la prctica de laboratorio, perder automticamente
dicha prctica, y no se podr incorporar con otro grupo en otra fecha u horario.
bios: vida y logos: estudio; por lo que etimolgicamente en ella se estudian los
organismos demasiado pequeos para ser percibidos a simple vista
La palabra Parasitologa proviene de las voces griegas Para: junto a; sit:
comida y logos: estudio, significa que trata del estudio los seres vivos que
habitan en otro organismo viviente (hospedero) del cual obtienen su alimento.
Por lo que en el sentido estricto de los trminos la Parasitologa comprende el
estudio de todo agente biolgico que vive en el hombre y lo enferman; sin
embargo, clsicamente se considera a la microbiologa como el estudio de los
virus, bacterias y hongos patgenos de los seres humanos; y a la parasitologa
como el conocimiento de los protozoos, helmintos y artrpodos.
DESARROLLO HISTRICO DE LA MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA.
Cuando aun el hombre no haba alcanzado el desarrollo tcnico suficiente para
poder observar y estudiar los microorganismos y considerarlos como causa de las
enfermedades infecciosas, relaciono estas con un origen mstico o religioso. No
faltaron sin embargo, quienes no aceptaron estas ideas y emitieron pareceres que
llevaron al inicio del pensamiento cientfico en la medicina y al concepto de la
infeccin.
En la antigedad, las grandes civilizaciones como
Egipto y Mesopotamia desarrollaron los primeros
productos derivados del proceso de fermentacin de
los microorganismos, como son la cerveza y el pan.
Sin embargo los hombres an desconocan el
principio y la razn del proceso de los fermentos.
fabricaba
lentes.
Su
padre
fue Hans
El
reconocimiento
por
dicho
invento
de la produccin.
Los
primeros
microscopios
compuestos
del
tamao
de
la
abertura
del diafragma.
Louis Jean Pasteur naci en 1822 en Dole, Francia. Era hijo de una familia muy
humilde: su padre era un curtidor sin estudios que haba luchado en las guerras
napolenicas. Es una clara demostracin de la eficacia del sistema educativo francs
de la poca el que el joven Pasteur llegara tan lejos como lo hizo, gracias a su
capacidad e independientemente de su origen y recursos: tras pasar por la cole
Normale Suprieure, se convirti en profesor de Fsica en el Liceo de Dijon, aunque su
verdadero inters era ya la qumica.
Louis Pasteur (1822-1895).
Aunque
la
teora
microbiana
fue
muy
importantes
como
el
desarrollo
de
para
hallar
un
modo
de
combatirlo.
10
11
12
PRACTICA No 1: EL MICROSCOPIO
I.
OBJETIVO.
GENERALIDADES.
13
IV.AMPLIFICACIN
La capacidad amplificadora de un microscopio compuesto es el producto del
aumento individual de los oculares y los lentes objetivos.
Un microscopio tpico que se usa en bacteriologa tiene objetivos con poder de
resolucin de 10X, 40X y 100X y oculares de 10X, por lo cual es capaz de
amplificar la imagen de la muestra 100, 400 y 1000 veces.
En un aumento de 1000X, las bacterias y microorganismos grandes se pueden
visualizar muy bien, pero los virus y muchos de los detalles finos de las estructuras
bacterianas no se pueden ver.
14
V. PODER DE RESOLUCIN
La resolucin se define como el espacio de mxima aproximacin entre dos
puntos en el que an se pueden observar claramente como dos entidades
independientes, es decir, es la distancia entre dos entidades estructurales de un
objeto en la cual todava se pueden observar como estructuras separadas en la
imagen amplificada.
El poder de resolucin de un microscopio est sujeto a la longitud de onda de la
luz y a la propiedad de las lentes conocidas como la apertura numrica (AN).
El lmite del poder de resolucin de un microscopio es aproximadamente igual a
0.61/AN que para un microscopio ptico es de alrededor de 200 nm (nanmetros).
A menor longitud de onda de la luz y AN de las lentes, ser mejor el poder de
resolucin del microscopio. Por lo tanto, queda claro que el poder de resolucin de
los microscopios pticos se encuentra restringido por AN que se obtenga de los
sistemas de lentes y las longitudes de onda del espectro de luz visible.
VI.
APERTURA NUMRICA
Esta expresin, que suele abreviarse AN, indica la cantidad de luz que entra en un
objetivo desde un punto del campo del microscopio.
Tal valor es de suma importancia, ya que, como se dijo anteriormente, de l
depende el Poder de Resolucin, la propiedad ms importante de un objetivo.
obtener, pero se puede incrementar la AN poniendo aceite de inmersin entre el
espcimen y el objetivo, aumentando as el poder de resolucin del microscopio.
El aceite de inmersin tiene un ndice de refraccin de 1.5, lo que aumenta
considerablemente la AN y esto mejora el poder de resolucin del microscopio.
15
VII.
TIPOS DE MICROSCOPIO
SIMPLE:
Los primeros microscopios, construidos por Leeuwenhoek alrededor de 1675, eran
simples, es decir, contenan slo una lente o lupa.
COMPUESTO:
Tiene varias lentes combinadas, capaces de producir gran aumento.
Existe adems el Microscopio electrnico, que debido a sus posibilidades para
obtener imgenes claras de los objetos ms diminutos, ha hecho contribuciones
de la mayor importancia, sobre todo en el estudio de la constitucin y ciclos vitales
de los virus filtrables.
El poder de resolucin del microscopio electrnico es mucho mayor que el del
Microscopio ptico pudindose incluso observar estructuras moleculares como
protenas y cidos nucleicos, pero debido a que los haces electrnicos poseen
bajo poder de penetracin, es necesario emplear tcnicas especiales para la
obtencin de cortes ultra finos que permitan la observacin de las muestras.
Todos los microscopios electrnicos tienen cmaras incorporadas que permiten
fotografiar las muestras denominndose microfotografas electrnicas.
16
VIII.
MTODOS DE MICROSCOPIA
17
IX.
6. Lmpara
2. Objetivos
7. Base
3. Platina
8. Brazo
4. Condensador
9. Tornillo Macromtrico
18
OCULARES
Estn colocados en la parte superior del tubo. Se denominan as, porque estn
muy cercanos al ojo.
Su funcin es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. En los
modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que estn
unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar.
En general los ms utilizados son los de 10X (producen un aumento de 10 veces).
Cuando se utiliza el ocular 10X con el objetivo de pequeo aumento da una
amplificacin final de 100 veces.
El de 50X dar una amplificacin final de 500 veces.
El de 100X una amplificacin final de 1000 veces.
OBJETIVOS
Estn colocados en la parte inferior del tubo insertado en una pieza metlica,
denominada revolver, que permite cambiarlos fcilmente. Generan una imagen
real, invertida y aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100
aumentos.La funcin de stos es delimitar el tamao de la imagen. El microscopio
cuenta con tres tipos de objetivos:
Objetivo de pequeo aumento "Seco dbil".
til para observar microorganismos grandes, por ejemplo: Protozoarios. Este
objetivo est marcado con un 3 2/3, que significa 2/3 de pulgada 16 mm.
Tambin est marcado como 10X. Tiene una lente en el extremo mucho, ms
grande que cualquiera de los otros objetivos.
19
PLATINA
20
CONDENSADOR
BASE O PIE
Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al
aparato. En los microscopios antiguos tena forma de herradura o de trpode pero
en la actualidad suele ser una plataforma rectangular. En l se integra la fuente
luminosa
BRAZO
Es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie
con el tubo
21
22
7. Platino
2. Tubo
8. Tornillo micromtrico
3. Revolver
9. Condensador
4. Objetivo
5. Brazo
11. Base
6. Pinzas
PRACTICA N 2
TECNICAS PARA EL ESTUDIO DE BACTERIAS
23
I. GENERALIDADES.
Las bacterias pueden observarse por medio del microscopio de luz; si se desea
definir la morfologa u otros detalles de las bacterias, ello puede lograrse a travs
de la tincin. Existen grupos de bacterias patgenas en seres humanos. (Anexo N 1)
Estas pueden ser desde muy simples como la de Azul de metileno hasta las muy
especializadas como para colorear flagelos o esporas. Tambin se puede utilizar
medios de cultivo para observar el crecimiento bacteriano. Cuando se usan
medios slidos el crecimiento puede observarse a travs de la formacin de
colonias. Estas varan de una especie a otra en cuanto a superficie, color, borde,
consistencia, dimensiones, etc. Ello nos permite valorar la orientacin diagnstica
de laboratorio y a continuacin se presentan las caractersticas de las colonias.
II. CARACTERSTICAS MORFOLGICAS DE LA COLONIAS
FORMA
ELEVACIN
BORDE
24
III. OBJETIVO
Al finalizar el procedimiento el estudiante deber:
1) Aprender a esterilizar el asa bacteriolgica adecuadamente.
2) Aprender a hacer un frotis de bacterias
3) Hacer e interpretar la coloracin de bacterias por medio del mtodo de Gram
4) Observar algunas caractersticas de las colonias o Bacterias proporcionadas.
5) Observar otros microorganismos presentes en el frotis.
IV. MATERIAL POR LADO DE MESA
1) Portaobjetos 2x1 pulgadas
2) Azul de metileno (de ser posible)
3) Reactivos para coloracin de Gram
4) Papel toalla
5) Fsforos
6) Microscopio de Luz
7) Goteros
V. PROCEDIMIENTO:
A. COLORACION DE GRAM
1) Coloque un frotis fijado en la bandeja para coloracin y cbralo con el
colorante cristal violeta por un minuto.
2) Lvese con agua corriente y escurra
3) Cbralo con solucin de Lugol para Gram por un Minuto.
4) Lvese con agua corriente y escurra
5) Decolore con Alcohol Acetona goteando el reactivo sobre la preparacin
Inclinada hasta que ya no escurra el colorante.
6) Lave con agua y escurra
7) Cubra la preparacin con solucin de Safranina por 30 segundos.
8) Lvese con agua corriente y escurra
25
26
1.
4.
6.
5.
3. Seque al aire.
Coloque el colorante
mantenindolo el tiempo sealado.
escogido,
7.
27
3. Lugol 1 minuto.
8. Sacar cuidadosamente.
28
PRACTICA N 3 VIRUS
I. GENERALIDADES:
Los virus son los agentes infecciosos ms pequeos (con tamaos que van de
casi 20nm a 300 nm de dimetro) y contienen solo un tipo de acido nucleco (RNA
o DNA) en su genoma.
El acido nucledo est rodeado por una cubierta protenica, que puede estar
rodeada por una membrana que contiene lpidos. La totalidad de la unidad
infecciosa se denomina virion. Los virus son inertes en el entorno extracelular; se
replican solo en clulas vivas donde actan como parsitos al nivel gentico. El
acido nucledo viral contiene la informacin necesaria para la programacin de la
clula hospedadora infectada para sintetizar macromolculas virales especificas
necesarias en la produccin de la progenie viral.
A continuacin se muestran esquemas de virus con simetra icosaedrica y
helicoidal, y los componentes virales indicados
El esquema ilustra los componentes de la partcula viral completa (vibrin).
A. Virus envuelto con simetra icosaedrica.
29
30
31
IV. MATERIAL:
Microscopio
Laminas(montadas) o Carteles de virus
Manual de Procedimientos.
V. PROCEDIMIENTO:
Observe el virus en el microscopio
Haga esquema del virus identificado
VI. CUESTIONARIO:
1. Que son los virus:
2. Los virus son inertes en el________________se replican solo en___________
donde actan como _______________________________________________
3. Las vas de entradas de los virus son:
4. Los virus que penetran a travs de inyeccin son:
5. La viremia se define como:
6. Complete el siguiente esquema:
PRACTICA N 4
32
33
34
a la
Penicillium sp.
Aspergillus sp
Cephalosporium sp.
35
Otros Hongos
Paletas
V. PROCEDIMIENTO
1. Observe las capas de hongos suministrados, observe el tipo de colonias,
forma, tamao, coloracin, bordes, altura, etc.
2. Identifique las colonias de tipo levadura y micelial.
3. Coloque una gota de Lactofenol Azul Algodn en una lmina de vidrio.
Utilizando una aguja bacteriolgica en L , remueva un fragmento pequeo
de la colonia o de la lmina de muestra de uno de los hongos.
4. El fragmento depostelo sobre la gota de Lactofenol de Azul de Algodn.
5. Con agujas extienda el fragmento y cbralo con una laminilla.
6. Examine la preparacin con el objetivo seco dbil y luego con el objetivo
seco fuerte.
7. Con la ayuda de su docente, identifique hifas y esporas; diferencie las hifas
septadas de las cenocticas. Reconozca levaduras, conidias, artrosporas,
clamidiosporas, etc.
8. Haga esquemas de cada uno de lo hongos que has observados y dibuja
sus estructuras.
Nota: el docente decidir se hace laboratorio escrito
36
hasta
37
38
39
40
41
II. OBJETIVOS:
Finalizado el laboratorio el estudiante deber:
Definir que son los parsitos.
Identificar la clasificacin de los parsitos.
Explicar el ciclo biolgico de la Entamoeba Histiolitica.
Explicar la fusin binaria longitudinal de la Giardia.
III. MATERIAL:
Microscopio
Laminas (montadas)
Manual de procedimientos.
Carteles de parsitos.
IV. PROCEDIMIENTO:
Observe el parasito en el microscopio
Identifique su estructura
Haga esquema del parasito identificado.
42
PRACTICA N 6 ARTRPODOS.
I. GENERALIDADES:
El termino Arthropoda se origina del Griego Arthron y Podus que significa
articulacin y patas, respectivamente; por lo tanto Artropodo es el que
tiene patas segmentadas articuladas, presenta simetra bilateral, estn
formados por anillos o segmentos y el tegumento anterior es quitinoso y
endurecido lo que se conoce como exoesqueleto.
La entomologa mdica se dedica al estudio de los insectos de importancia
medica, ya sea por que actan como transmisores de agentes biolgicos
causantes de enfermedades, por ser causantes directos de enfermedad,
por ocasionar molestias cutneas o por ser objeto de alteraciones psquicas
como la entomofobia o lesiones o enfermedades imaginarias producidas
por insectos. De los artrpodos, las clases que tienen ms importancia en
entomologa medica son: arachnia, myriapoda, crustacea e insecta.
A continuacin se presentan algunos ejemplos:
II. DPTEROS.
La orden dptera, insectos de dos alas, distribuidos en 138 familias, 85,000
especies.
hematfagas,
pican
al
atardecer
III. PEDCULOS.
43
IV. TUNGA
Las pulgas de la familia Tungidae, pertenecen al orden Siphonaptera, son
conocidas como niguas y se caracterizan por tener un trax pequeo, con patas
cortas. Adems las hembras desarrollan un abdomen voluminoso que les da un
aspecto de pelota con apndices salientes cuando desarrollan sus huevos. Estos
artrpodos son ectoparasitarios
V. HEMPTEROS.
44
El orden Siphonaptera, cuenta con 1,100 especies que se caracterizan por tener
un cuerpo comprimido lateralmente. Son pequeos, de 2 a 2.5 milmetros, con
cabeza muy pequea, con y sin ojos y antenas con tres segmentos, el aparato
bucal es de tipo chupador y picador. En el trax se observan patas largas y fuertes
que les dan la capacidad de saltar. LAS PULGAS, como popularmente se
conocen a estos organismos, son artrpodos de metamorfosis completa, las
hembras depositan sus huevos en la basura, eclosionan y liberan larvas que se
alimentan de detritus orgnicos, evolucionan a pupas y adultos, completando su
ciclo biolgico en 40 das. Son organismos de vida larga, de uno a dos aos, y son
ms frecuentes en climas fros y hmedos.
La agresin cutnea de las pulgas a la piel del humano ocasiona irritacin
causada por las secreciones salivares, lo cual se observa con la aparicin de
ligero edema, macula rosada, erupcin papular y prurito. Las pulgas tienen mucha
importancia medica por la transmisin de agentes patgenos, ya que pueden ser
los vectores de Yersinia pestis, Rickettsia tipie Hymemolepis, agentes de la
peste bubnica, el tifus endmico y la himenolepiasis.
Dermatobia
Luscilla,
Calliphora
conocer
que
genero
corresponden
VIII. ALACRANISMO
46
generales
lagrimeo,
son:
escalofros,
estornudos,
salivacin,
abdominales,
convulsiones,
hipertensin
arterial,
hiperestesias,
el
sitio
de
innoculacion,
sudoracin,
vomito
anorexia.
47
inofensivas,
aunque
suelen
que
se
le
conoce
como
aracnoidismo
X. OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el estudiante deber:
48
XI. MATERIAL:
Manual de procedimientos.
Carteles de artrpodos.
Artrpodos vivos o disecados en frascos de vidrio.
XII. PROCEDIMIENTO:
Observe el artrpodo
Identifique su estructura
Haga esquema del artrpodo identificado
Responda el cuestionario segn los objetivos de la prctica.
I. GENERALIDADES:
El organismo cuenta con barreras fsicas como piel y mucosas, las cuales
disponen de auxiliares qumicos y algunas mucosas, mas la flora microbiana
normal. Los agentes patgenos deben franquear estas estructuras para establecer
la infeccin. A continuacin la defensa depende de molculas y clulas, que se
activan por diversos caminos. La filogenia de la respuesta inmune es la historia
evolutiva del desarrollo de un grupo de animales; la ontogenia es la historia del
desarrollo de un organismo individual.
La respuesta inmune se da tanto en un organismo de una sola clula como en uno
pluricelular. Filogenticamente, la respuesta inmune se origina en las clulas
eucariotas. Cuando aparece una clula con ncleo verdadero, tambin aparece la
respuesta inmune, los protozoos ya tienen la capacidad de diferenciar lo propio de
lo extrao.
La inmunidad puede estar mediada por clulas especializadas en defensa o por
molculas. Primero aparece la inmunidad mediada `por clulas y mas adelante en
el desarrollo evolutivo de las especies, surge la inmunidad mediada por
anticuerpos. Los anticuerpos aparecen en peces sin mandbulas llamados Agnata.
A partir
50
51
ii. CUESTIONARIO:
1. Que es la respuesta inmune:
Referencias bibliogrficas.
52
f.
g. Sitio
web
de
la
Organizacin
Mundial
para
la
Salud.
http://www.paho.org/hq/index.php?
option=com_docman&task=doc_view&gid=19765&Itemid=
53
Anexo N 1
54
Anexo N 2
55
56