Cocultivo de neuronas motoras primarias y las clulas de Schwann como Modelo para

mielinizacin In Vitro
Adriana Acosta Lpez
Nos ayudar a entender mejor el mecanismo de la mielinizacin y la desmielinizacin, adems
podremos averiguar las posibles intervenciones teraputicas para el tratamiento de enfermedades
desmielinizantes. Introducimos una sencilla y reproducible cultivo de mielinizacin mediante
neuronas motoras de ratn (MNs) y clulas de Schwann (SCS). Desvinculado las neuronas
motoras estn sembradas en una capa alimentadora de castas, que interactan y se envuelven
alrededor de los axones de MNs como se diferencian. En el cocultivo MN-SC, el MN sobrevivieron
ms de 3 semanas y extendieron axones largos. Tanto viabilidad y el crecimiento del axn de los
MNs en el cocultivo se mejoraron rpidamente en comparacin con los de MN
monocultivo. Adems, utilizando el sistema cocultivo encontramos que en el tratamiento de una
sustancia antioxidante de la coenzima Q10 (co-Q10) notablemente facilito la mielinizacin.
La mielina proporciona un material elctricamente aislante que forma una vaina de mltiples capas
alrededor de un axn de una neurona. En el sistema nervioso perifrico (SNP), vaina de mielina
es generada por las clulas de Schwann (SCS), mientras que en el sistema nervioso central
(CNS), la mielina es producida por los oligodendrocitos. La envoltura de mielina de los axones de
las SC y oligodendrocitos no slo facilita la conduccin de los potenciales de accin en el sistema
nervioso, sino que tambin protege a los axones y proporciona apoyo nutricional a los axones
asociados. Como diversos defectos de la mielinizacin, tales como hipomielinizacin, retraso en la
mielinizacin, o desmielinizacin, se sabe que causan trastornos graves en el sistema nervioso,
En muchos casos de reparacin del nervio despus de la lesin fsica, una mielinizacin
incompleta de las fibras nerviosas regeneradas provoca el mal funcionamiento de los nervios
reparados.
Para investigar si SCs se diferencia y ms importantemente mieliniza MN axones en el cocultivo
MN-SC, los cultivos fueron examinados para la expresin de marcadores de diferenciacin SC y
mielinizacin, como protena bsica de la mielina (MBP), SRY-relacionadas HMGbox-10 (SOX10)
y Krox20. Hemos encontrado que la expresin de Sox10, un factor de transcripcin que controla la
mielinizacin en el PNS12, fue detectado en el soma de SCs en Div 7 y aument despus.
Expresin de MBP fue detectado el DIV 10, y con el tiempo lleg a ser muy localizada a lo largo de
la fibra axn por DIV 14. Western blot confirm la expresin de MBP y Krox20, un factor de
transcripcin inducida por la activacin de Sox10. Krox20 es conocido para suprimir el estado
inmaduro y promover la mielinizacin. Se observ un aumento de ambos niveles de protena MBP
y Krox20 largo del tiempo. A continuacin, se examin la formacin de la vaina de mielina en DIV
21 en detalle por microscopa de microscopa electrnica de transmisin y confocal
(TEM). Imgenes Z-pila de microscopa confocal confirmaron la amplio interaccin entre MBP y
axones de las MN , Al tomar imgenes de TEM, confirmamos que las SC form vainas sueltas por
DIV 14, lo que podra ser la etapa premielinizacion y que las SC bien envueltas en la fibra
nerviosa por DIV21, lo que podra ser la etapa mielinizacin completado. Co-Q10 facilit la
expresin de MBP y aument el nmero de SCs formadoras de mielina en comparacin con el
control.
De acuerdo con nuestros resultados, varios grupos han informado de que SCs mejora la
viabilidad a largo plazo de las neuronas perifricas y proteger la integridad axonal.
En conclusin, se presenta un sistema de cocultivo MN-SC simple y reproducible derivado de
neuronas de ratn y clulas gliales. En el cocultivo, SCS mejora la viabilidad celular y promueve
crecimiento axonal de las MN. Por otra parte, SCS diferenciadas y transformado de
premielinizacion a mielinizacion como se evidencia por el aumento gradual en la expresin de

MBP y la localizacin de las seales de MBP largo de las fibras de axones. Por otra parte,
mediante el cocultivo MN-SC, mostramos que Co-Q10 acelera la mielinizacin.