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Determinao dos compostos fenlicos

Bibliografia: WETTASINGHE, M.; SHAHIDI, F. Evening primrose meal: a


source of natural antioxidants and scavenger of hydrogen peroxide and oxygenderived free radicals. J. Food Chemistry, v. 47, p.1801-1812, 1999.
ZHAO, B.; HALL, C.A. Composition and antioxidant activity of raisin extracts
obtained from various solvents. Food Chemistry, v.108, p. 511-51, 2008.
1- Mtodo: espectofometrico (Folin-Ciocauteau ).

2-Princpio: Mtodo TBARS utilizado para medir a capacidade antioxidante


de extratos utilizando o reagente Folin-ciocauteau.

3.Equipamentos (vidrarias e outros):


Balana analtica;
Centrifuga;
Tubos de ensaio forrados com
papel aluminio;
provetas e pipetas;
espectro;
bales 10ml,25ml,50ml,1000ml;
erlenmeyer;
ultrassom;
agitador de tubos;
rotaevaporador.

4.Reagentes
Alcool etilico (80%), agua destilada, Folin-ciocauteau, soluo saturada de
bicarbonato de sdio.
5. Metodologia
Fenlicos totais (CFT)

Os (CFT) foram determinados de acordo com o procedimento proposto


por WETTASINGHE & SHAHIDI (1999), utilizando o reagente de FolinCiocauteau (RFC). O ensaio fundamenta-se na reduo do complexo
fosfotungstato-fosfomolibdato por compostos fenlicos resultando em produtos
de colorao azul com absoro mxima a 773 nm. Para quantificao dos
(CFT), curvas analticas sero construdas variando a concentrao de xxx a
xxx mg.mL-1 de cido glico, obtendo-se R2 no inferiores a 0,995. Os
resultados sero expressos em mg GAE.100g-1 de amostra.

6. Preparo da amostra
Para obteno do extrato etanlico , em um elernmeyer pesa-se 3
gramas da amostra e adiciona 15 ml de soluo hidroetanlica (etanol 80%),
coloca

em banho ultrassom durante 25 minutos temperatura ambiente.,

retira-se o sobrenadante armazenando em um tubo falcon, o processo


repetido por mais duas vezes. Os sobrenadantes em seguida so centrifugados
a 9000 rpm por 20 minutos e depois concentrado em rotaevaporador a 50 C.
O extrato pode ser armazenado sob refrigerao a -4C (2).

7. Analisecompostos fenolicos
7.1. Procedimento
Foram homogeneizados em tubos de ensaio 0,5 mL do RFC, 0,5 mL de extrato
e 1,0 mL de soluo saturada de bicarbonato de sdio (NaHCO 3), sendo esta
mistura ajustada para 10 mL com gua destilada e submetidos agitao
vigorosa em agitador de tubos. A mistura foi mantida em repouso temperatura
ambiente (25 2C) por 25 minutos, sendo em seguida centrifugada (9000g
por 15 minutos temperatura de 25 oC). O branco foi realizado nas mesmas
condies, excluindo-se a amostra. As leituras das absorbncias foram
medidas em espectrofotmetro a 773 nm. A anlise feita em triplicata.
7.5 Curva cido glico
So feitas diferentes concentraes da soluo de cido glico (1:1), a
depender das concentraes do extrato.

0,5 ml das diferentes concentraes da soluo de cido glico so


adicionados 0,5ml de RFC, e 1,0 ml da soluo saturada de bicarbonato de
sdio, sendo a mistura ajustada para 10 ml e depois agitada. A mistura foi
mantida em repouso por 15 min. E feita a leitura a 773 nm

8. Resultados e clculos
a) Resultados: So expressos atravs da curva de disperso pela equao da
reta.
Y=ax+b, sendo y as leituras das absorbancias e x a concentrao de
antioxidante presente nos extratos.

concentra

AB

Media

Valor Volr de x Valor de x Medi

Desvio

ABS(y

de x (mg/45ml

(mg/100g

padrao

(mg)

geral

0,9

1.
1
1.
2
1.

1,8

3
1.
1
1.
2
1.

3,6

3
1.
1
1.

2
1.
5,4

3
1.
1
1.
2
1.

7,2

3
1.
1
1.
2
1.
3