FOSFATASA ACIDA

TECNICA DE ORIENTACION
SEMEN
El primer antecedente que se tiene de la existencia de clulas espermticas data
del siglo XVII, cuando Luis de Hamm, tuvo la idea de coloca al microscopio una
gota de semen en la que pudo observar a una multitud de espermatozoides.
Comunico su descubrimiento a su maestro Anton Van Leeuwenhok, quien se
encargara de estudiarlos de una manera sistemtica.
El francs Albert Florence descubri una de las primeras tcnicas para reconocer
las huellas de lquido seminal, a travs de un tratamiento de este con una
concentracin de yodo alcalino, producindose cristales rmbicos.
Al descubrir los rayos ultravioleta por Kirchhoff y Busen se observo que las
manchas de semen adquiran bajo esta radiacin una fluorescencia azulada.
En 1953 Fishman y Lerner dan a conocer su mtodo para estimar fosfatasa cida
de origen prosttico.
CARACTERSTICAS
El semen total es un lquido muy viscoso y opalescente, de color blanco grisceo.
El volumen promedio normal por eyaculacin es de 2.5 a 3.5 ml.
Contiene hormonas, fructosa, fosfatasa cida y alcalina, espermita, colina,
ergotionena, cido ctrico, lpidos, protenas, hilauronidasa, prostglandina, ribosa,
inositol, sorbitol, flavinas, aminas, albmina, alfa, gamma y beta globulinas,
lecitina, cidos grasos, fosforilcolina, zinc, calcio y antgeno soluble de grupo
sanguneo.
La fosfatasa cida esta presente tanto en vegetales como animales; comprende
un conjunto de enzimas ampliamente repartidas en el organismo: eritrocitos,
suero, plaquetas, leucocitos, bazo, hgado, osteoclastos y en epitelios glandulares
de prstata, mama, estmago y colon.
Se ha demostrado que en el semen la fosfatasa cida se encuentra en
concentraciones de 20 a 400 veces mas que en otros fluidos.
Por lo anterior, es necesario ajustar los reactivos para que slo detecten
concentraciones mayores a 20 unidades.
Su deteccin se basa en una reaccin cromtica de la multicitada enzima, la cual
reacciona con el reactivo 1-naftilfosfato de calcio y queda libre de alfa naftol; este
reacciona con sulfato de dianisiltetrazonio y forma un colorante azoico violeta
intenso.

PREPARACION DEL REACTIVO

Solucin 1:
23 g de NaCl + 2 g de Acetato de Na H2O + 0.5 ml de cido actico glacial + 90 ml
de agua destilada.
Solucin 2:
50 g de 1-naftil fosfato de calcio + 30 g de sulfato de dianisil tetrasonio + 1 ml de
solucin acuosa al 10% de laurel sulfato de sodio.
Mezclar ambas soluciones, filtrar y envasar en frasco mbar refrigerado a 4 C.
esta solucin se conserva durante un ao. Debido a que actualmente ya no se
fabrica el sulfato
Debido a que actualmente ya no se fabrica el sulfato de dianisiltetrazonio, se ha
sustituido por:
Solucin 1:
1 g de orto dianilsidina tetrazotizada + 20 g de acetato de sodio + 10 ml de cido
actico + 100 ml de agua destilada.
Solucin 2:
0.8 g de alfa naftil fosfato de sodio + 10 ml de agua destilada.
Mezclar 10 ml de solucin 1, 89 ml de agua destilada y 1 ml de solucin 2.
Refrigerar en frasco mbar.
PROCEDIMIENTO

Se tiene la mancha problema o el hisopo con el cual se tom la muestra se

colocan entre dos hojas de papel filtro.

Lo mismo se hace con material igual no manchado para prueba en blanco y

con otro que est maculado con semen, como control.

Se colocan sobre una lmina de vidrio en la que previamente se habr

rotulado. (1:CONTROL, 2:BLANCO).

Inmediatamente, con una pipeta, se agregan 10 gotas de reactivo a cada

una de las muestras.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS

La aparicin de un color violeta intenso en la muestra problema dentro de un

tiempo no mayor a 5 minutos, indicar la presencia de fosfatasa cida en
cantidades mayores a 20, y por lo tanto, la muy probable presencia de semen.
En el control siempre aparecer el color sealado, tonalidad que no debe aparecer
en el blanco.

TCNICA POR INHIBICIN DE LA FOSFATASA CIDA SEMINAL Y

VAGINAL, CON EL CIDO TARTRICO.
Este procedimiento seala que tanto las fosfatasas seminales como las
vaginales son inhibidoras por el cido tartrico. La formacin de un precipitado
violeta intenso con tamao de partcula grande, procedente de la fosfatasa
cida seminal, es diferente al precipitado caf rojizo con menor tamao de
partculas no prosttico. El principio es similar al sealado en la tcnica de
orientacin de la fosfatasa cida. El alfa naftil se incuba con la muestra
problema y con un testigo de semen, ambos a un pH de 4.9; la enzima
fosfatasa en caso de estar presente, rompe el radical fosfato liberando el grupo
alfa naftol, el cual reacciona con el azul diazo formando un complejo de color
violeta.22 El procedimiento para esta tcnica se aplica en seis pasos, tomando
cuatro muestras de la siguiente manera:
El procedimiento para esta tcnica se aplica en seis pasos, tomando cuatro
muestras de la siguiente manera:23 1. Cortar un trozo de 1x1 centmetros del
material que contenga la mancha seminal sospechosa, colorarla en un tubo de
ensaye con tapn de rosca, de 15 ml de capacidad y aadir 3.0 m de agua
desionizada. Marcar el tubo con la letra P para el problema.
2. Cortar un trozo de 1x1 centmetros de un rea que no presente manchas,
colocarlo en un tubo igual al de la muestra problema con 3.0 ml de agua.
Marcar el tubo con la letra C para control.
3. Despus de 15 minutos preparar cuatro tubos de siete mililitros como sigue:
Tubo P con tres gotas de sustrato. Tubo Pi (problema inhibidor) con tres
gotas de sustrato y tres gotas de inhibidor. Tubo C con tres gotas de
sustrato. Tubo Ci (control inhibidor) con tres gotas de sustrato y tres gotas
de inhibidor.
4. Agitar cada tubo mezclando bien.
5. Poner 0.3 ml (aproximadamente diez gotas) del tubo P a cada uno de los
tubos P y Pi y mezclar.
6. Pasar 0.3 ml del tubo C a los tubos marcados C y Ci y mezclar.
7. Agregar tres gotas de la solucin de naftil diazo azul B, a cada tubo de los
cuatro.

La interpretacin del resultado es: si el tubo P cambia de color caf

marrn a violeta intenso en 30 segundos o menos, mientras que el Pi, en el
mismo tiempo, toma un color amarillo plido el resultado es positivo. Los tubos
C y Ci deben tambin de permanecer de color amarillo claro; si esto no sucede
indicar que el reactivo se ha deteriorado.