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INTRODUCCIN.

Todos los seres vivos tienen como misin reproducirse para preservar sus caractersticas
esenciales de generacin en generacin. Los fenmenos que tienen lugar durante la
reproduccin celular corresponden a una de las etapas del proceso conocido como ciclo
celular. Este ciclo resulta de la coordinacin de una serie de procesos que involucran la
integracin de diferentes seales que
conducen a la duplicacin de DNA, su
condensacin, segregacin y posterior descondensacin, para dar origen a dos clulas
hijas con igual dotacin de cromosomas e informacin gentica.
Aunque la mitosis, de por s es un proceso continuo, para su estudio se divide en
diferentes etapas consecutivas de acuerdo a los cambios morfolgicos que va
experimentando la clula. Durante la elaboracin de esta prctica, el estudiante
identificar las diferentes fases del ciclo celular que se presentan durante la profase,
metafase, anafase, telofase y citocinesis en clulas meristmaticas de races de cebolla.

1. MARCO TEORICO
La mitosis es un proceso de divisin celular. Este este temion introducido por W. flemming
en 1882, el observo por primera vez estructuras filamentosas en celulas en divisin en
1879. En 1884 Stanburge acuo los terminos de de de rofase, metafase, anafase y
telofase para los diferentes estadios de la divisin celular cuya finalidad era generar dos
celulas hijas identicas en terminos geneticos.

Mitosis.
El Ciclo Celular
Cuando una clula se divide en dos, uno ambos productos de la divisin pueden volver a
dividirse, establecindose de esta forma un ciclo de divisin celular, el perodo entre dos
mitosis consecutivas, se denomina interfase. El estado normal de una clula es con los

cromosomas en estado de un cromatidio, es decir en estado de una doble hlice de ADN.


Indudablemente para que una estructura pueda dividirse en dos exactamente iguales,
esta estructura ha de estar duplicada, es decir todos sus componente repetidos y
separados en estructuras diferenciadas. El cromosoma antes de dividirse debe pasar a un
estado en el que posea dos cromatidios, genticamente idnticos. La duplicacin del
materia gentico ha de ser previo a la divisin celular.
En la interfase del ciclo de divisin celular podemos distinguir tres perodos:
G1.- Es un estado que se caracteriza por ser genticamente activo, el ADN se
transcribe y se traduce, dando lugar a protenas necesarias para la vida celular y
sintetizando las enzimas y la maquinaria necesaria para la sntesis del ADN.
Fase S.- Es la fase en la cual se duplica por entero el material hereditarios, el
cromosoma pasa de tener un cromatidio a tener dos, cada uno de ellos compuesto por
una doble hlice de ADN producto de la duplicacin de la original, como la replicacin del
ADN es semiconservativa, las dos dobles hlices hijas sern exactamente iguales, y por
tanto los cromatidios hermanos, genticamente idnticos.
G2.- Durante este perodo se ultima la preparacin de todos los componentes de la
divisin celular, al final de esta fase, se produce una seal que dispara todo el proceso de
la divisin celular.
Fases de la mitosis
De una forma tradicional y basndose en aspectos morfolgicos observados al
microscopio ptico, la mitosis suele dividirse en 4 fases o estados Profase, Metafase,
anafase y Telofase. Aunque esta diferenciacin es correcta, y se corresponde con etapas
concretas de la cariocinesis, no hemos de pensar que ello ocurre en etapas diferenciadas,
sino ms bien en un proceso totalmente continuo, sin pausa en el tiempo, y que todo se
engloba en un ciclo de la clula.
Durante la interfase, el ncleo eucaritico aparece encerrado dentro de la membrana
nuclear, con el nucleolo perfectamente diferenciado y con una fibra de cromatina,
fcilmente observable por su facilidad para teirse.
Interfase Celular antes de la divisin
Al final del perodo G2, empieza la mitosis, y la cromatina sufre una progresiva
condensacin debido al superempaquetamiento y superenrrollamiento de los
cromosomas. Esto es el principio de la profase mittica. Segn avanza la profase, los
cromosomas van individualizndose y van apareciendo como estructuras perfectamente
diferenciadas dentro del ncleo celular. Este empaquetamiento de la cromatina es

fcilmente entendible desde un punto de vista funcional del proceso. Pensemos en esa
madeja de la que hablbamos al principio de la profase, separar todo ese material sera
muy difcil, es ms sencillo si todo esta condensado, individualizado, y las dos partes a
separar (en este caso los cromatidios) perfectamente diferenciadas. Mientras los
cromosomas continan condensndose y hacindose visible su estructura de dos
cromatidios, en el citoplasma y ms concretamente en dos polos opuestas del mismo, se
van organizando unos centros emisores de microtbulos. El nucleolo desaparece y la
membrana nuclear se rompe y disgrega. De esta forma esos microtbulos puenden entrar
en contacto con las regiones centromricas de los cromosomas y unirse a los cinetocoros.
Este haz de microtbulos es lo que se denomina huso mittico o huso acromtico debido
a su forma fusiforme.
Cada uno de los cinetocoros de cada cromatidio empieza a captar estos microtbulos,
como consecuencia de ello el cromosoma se mueve por el citoplasma en movimientos de
polarizacin u orientacin (cada cromatidio se orienta hacia un polo celular).
Esta congresin de todos los cromosmas en la placa ecuatorial de la clula es lo que
denominamos metafase, los cromosomas adems de estar en el centro, estan orientados
anfitlicamente, esto es, los dos cromatidios orientados hacia polos opuestos de la clula.
Algunos autores distinguen una fase intermedia de la mitosis, entre la profase y la
metafase. Dicha fase se denomina prometafase y estara comprendida desde que los
microtbulos entran en contacto con los cinetocoros hasta que se forma la placa
ecuatorial con los cromosomas dispuestos en ella.
Cuando todos los cromosomas estn dispuestos en la placa ecuatorial, se produce una
nueva seal en la clula, que produce que cada cinetocoro hermano sea arrastrado hacia
un polo distinto de la clula. Esta separacin de cinetocoros conlleva la separacin de los
cromatidios hermanos, con lo cual el cromosoma se escinde en sus dos cromatidios y
cada uno de ellos migra hacia un polo celular distinto. Como cada cromatido es
genticamente igual a su hermano a cada polo celular se dirige una idntica informacin
gentica. Esta es la fase que denominados Anafase, y que se caracteriza por la
separacin y migracin de cromatidios hermanos a polos opuestos celulares.
Cuando este viaje anafsico se culmina, tenemos dos ncleos opuestos e idnticos, que
empiezan a ir adoptando la situacin primigenia de la interfase. La cromatina empieza a
descondensarse, el nucleolo y la membrana nuclear vuelven a recontruirse, se forman dos
ncleos hijos. Esto es lo que denominamos Telofase y con ella termina propiamente la
cariocinesis (figura 2).

Figura 2. Fases de la mitosis

El tejido ms comnmente utilizado para el estudio de la mitosis es el meristema de las


races nuevas. En esta prctica se utilizarn races de cebolla, (Allium cepa). Hay que
tener en cuenta la actividad mittica, ya que esto permite determinar el momento en el
que el meristema muestra el mayor nmero de divisiones (figura 3).

Figura 3. Tejido de la raiz de cebolla

MATERIALES
Materiales entregados en la practica
Microscopio
Pinzas
Orceina
Acido clorhdrico al 10%
Aceto-orceina

Materiales traidos por el estudiante


Portaobjetos y Cubre objetos
Bistur o cuchilla
Papel absorbente
2 Cebolla con raices por estudiante

METODOLOGA
1. Obtencin de celulas en procesos de mitosis.
Cinco dias y tres das antes de comenzar los experimentos, seleccione dos cebollas
cabezonas frescas, elimiando previamente mediante un raspado con una cuchilla
(precaucin: no cortar solo raspar para eliminar el exceso de residuos), las races secas
que se hallan en la base del bulbo. En un frasco boca ancha o un vaso desechable
coloque la cebolla como aparece en la figura 4. Para ello, vertir agua en el un frasco o
vaso, hasta tocar la base de la cebolla. Mantenga la base de la cebolla hmeda,
realizando el cambio del agua diariamente. Para el transporte de la cebolla en la
realizacin de la practica esta no debe ser colocada en bolsa se debe mantener en un
recipiente con agua para peservar las celulas en crecimiento

Figura 4. Montaje para obtencin de races de cebolla

Las races deben alcanzar de 1 a 2 cm. de longitud aproximadamente. Una vez se tenga
esta longitud en el laboratorio con la tijeta cortamos 1cm de las raiz y las adicionamos en
la solucin fijadora Carnoy durante 20 minutos. Una vez cumplido el tiempo se hace el
raslado las races a un recipiente que contiene el cido clorhdrico al 10% durante 10
minutos. Este tiempo vara segn el tipo de clula.

Pasado el tiempo coloque las races en un recipiente con agua y enjuaguelas 2 veces por
cinco minutos.
Pase la raiz a una lamina portaobjetos, corte con la ayuda del bisturi la raz, dejando 3
mm del extremo inferior (pice) y deseche el otro, Adicone 2 gotas del colorante teniendo
la precaucin de que este debe cubrir totalmente la punta de la raiz durante 20 minutos.
Una vez ya se encuentre la estructura completamente teida coloque el portaobjetos
sobre un papel absorvente, la lamina debe colocarse en ngulo recto sobre el el cubre
objeto, bajandolo lentamente hasta que se pose en el preparado, presionar con la yema
del dedo pulgar firmemente contra la superficie plana y uniforme de una mesa, pero con
cuidado de no romper la lmina, y sobre todo, de no mover lateralmente el cubreobjetos
mientras se ejerce la presin; el movimiento lateral del cubreobjetos genera el
enrollamiento de las clulas meristemticas disgregadas sobre el portaobjeto, generando
la prdida de la preparacin
Observe con el objetivo de menor aumento para localizar las celulas mitticas, y
posteriormente con el objetivo de mayor aumento para discriminar detalles.

2. Indice mitotico de un tejido


Una vez realizada las respectivas identificaciones de las celulas en cada una de las
placas preparadas calcule el ndice mittico (IM) utilizando los datos visto en el campo
visual, de acuerdo a la siguiente frmula:
IM= Nmero total de clulas en mitosis x 100 / Nmero total de clulas
El ndice mittico da una idea de la velocidad de divisin de un tejido
Preguntas antes de la prctica
1. Cul es la funcin de la solucin fijadora?
2. Cul es la funcin del cido clorhdrico?
3. Cuntos cromosomas tienen las clulas de cebolla?
Preguntas despus de la prctica
1. En qu fase de la mitosis, los cromosomas llegan a su mxima
condensacin?
2. En la metafase de la mitosis, como se llama la parte de la clula donde se
localizan los cromosomas?
3. En qu fase de la mitosis se separan las cromtidas hermanas?
4. Dibuja las fases de la mitosis