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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARAN

SETOR DE CINCIAS AGRRIAS

CINTICA DA RESPOSTA IMUNE HUMORAL EM CES IMUNIZADOS COM


Leptospira interrogans SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, pomona
E grippotyphosa

CURITIBA
2005

DEISE CRISTIANE FERRONATO DE SOUZA JASZCZERSKI

CINTICA DA RESPOSTA IMUNE HUMORAL EM CES IMUNIZADOS COM


Leptospira interrogans SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, pomona
E grippotyphosa

Dissertao apresentada como requisito parcial


obteno do grau de Mestre. Curso de PsGraduao em Cincias Veterinrias, rea de
Concentrao: Patologia, Setor de Cincias
Agrrias, Universidade Federal do Paran.
Orientador:
Prof. Dr. Jos Francisco Ghignatti Warth

CURITIBA
2005

AOS MEUS PAIS

ii

AGRADECIMENTOS
Ao meu marido MARCO AURLIO e aos meus filhos EMANUELLE e MARCUS
VINCIUS que conseguiram driblar o tempo e a organizao do lar sem a presena
da mame.
Aos professores FOGAA e ROMILDO que confiaram em mim.
Ao professor ALEX que conhece os obstculos da pesquisa cientfica e que
nobremente cedeu os ces para este experimento.
Ao MARCOS VINCIUS que abriu mo do seu sbado e do seu conhecimento em
grficos para enriquecer este trabalho.
minha irm DANIELLE que me ajudou com os ces e no transporte de
documentos e filhos.
Ao meu sogro JOO CARLOS que me deu orientaes.
s mdicas veterinrias NANCY e KARINE e estagiria MARIAN que no mediram
esforos para assistir to bem os ces.
s bibliotecrias SIMONE e VERA que se esforam, e muito, contribuindo com as
informaes necessrias para que este e muitos outros trabalhos cientficos possam
ser concludos.
mdica veterinria MARIA LUZA, do Centro de Diagnstico Marcos Enrietti-SEABPR, que contribuiu com a bibliografia.
MARIA JOS, da Ps-Graduao do Departamento de Medicina Veterinria que
me atendeu prestativamente em relao aos prazos e documentaes exigidos.
Aos meus chefes TCel MELO e Maj STONOGA que me permitiram o tempo-livre.
E principalmente a ELE:
Que me encheu de gs, quando eu s pedi mais um pouquinho de fora;
Que s ps gente amiga no meu caminho;
Que me deu a luz necessria para enxergar alm;
Que me permitiu chegar ao fim;
Que a minha razo para continuar.
AGRADECIMENTO ESPECIAL
Ao meu orientador, Prof. Dr. JOS FRANCISCO, por ter me aceito; pelo constante
otimismo e bom-humor; por ser to incansvel; por no medir esforos; por envolver
a prpria famlia, abrindo mo do tempo e da privacidade; por nunca ter dito no;
pela vontade de descobrir e questionar; pelo envolvimento e disposio; pela
honestidade; e finalmente, por sempre dizer: Fica tranqila, vai dar tudo certo!

iii

SUMRIO

LISTA DE TABELAS ................................................................................................. vi


LISTA DE FIGURAS................................................................................................. vii
RESUMO.................................................................................................................... xi
ABSTRACT............................................................................................................... xii
1 INTRODUO .......................................................................................................1
2 REVISO DE LITERATURA..................................................................................4
2.1 HISTRICO DA LEPTOSPIROSE.......................................................................4
2.2 ETIOLOGIA E CLASSIFICAO.........................................................................5
2.2.1 As Espiroquetas ...............................................................................................5
2.2.2 Leptospira interrogans......................................................................................5
2.3 EPIDEMIOLOGIA.................................................................................................7
2.4 PATOGNESE ..................................................................................................11
2.5 SINAIS CLNICOS .............................................................................................15
2.6 DIAGNSTICO IMUNOLGICO DA LEPTOSPIROSE.....................................17
2.7 DIAGNSTICO DIFERENCIAL .........................................................................23
2.8 VACINAS ...........................................................................................................23
3 MATERIAL E MTODOS.....................................................................................28
3.1 ANIMAIS DO EXPERIMENTO ...........................................................................28
3.2 IMUNGENO UTILIZADO.................................................................................28
3.3 VACINAES ...................................................................................................28
3.4 COLHEITA DE SANGUE E OBTENO DE SOROS.......................................29
3.5 BASE FSICA LABORATORIAL ........................................................................29
3.6 TCNICA SOROLGICA EMPREGADA ..........................................................29
4 RESULTADOS .....................................................................................................31
4.1 TTULOS PR-VACINAIS..................................................................................31
4.2 TTULOS PS-VACINAIS AOS 30 DIAS...........................................................33
4.3 TTULOS PS-VACINAIS AOS 60 DIAS...........................................................36
4.4 TTULOS PS-VACINAIS AOS 90 DIAS...........................................................39
4.5 TTULOS PS-VACINAIS AOS 120 DIAS.........................................................42
4.6 TTULOS PS-VACINAIS AOS 150 DIAS.........................................................45
4.7 TTULOS PS-VACINAIS AOS 180 DIAS.........................................................47
iv

4.8 TTULOS PS-VACINAIS AOS 210 DIAS.........................................................50


5 DISCUSSO ........................................................................................................56
6 CONCLUSES ....................................................................................................64
REFERNCIAS.........................................................................................................65
ANEXOS ...................................................................................................................71

LISTA DE TABELAS

TABELA 1 TTULOS SOROLGICOS, PR-VACINAIS PARA L. interrogans,


SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona
e grippotyphosa, DOS 16 CES, NO DIA CONSIDERADO 0 (zero) ...31
TABELA 2 - TTULOS SOROLGICOS AOS 30 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......33
TABELA 3 TTULOS SOROLGICOS AOS 60 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......37
TABELA 4 TTULOS SOROLGICOS AOS 90 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......40
TABELA 5 TTULOS SOROLGICOS AOS 120 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......43
TABELA 6 TTULOS SOROLGICOS AOS 150 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......45
TABELA 7 TTULOS SOROLGICOS AOS 180 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......48
TABELA 8 TTULOS SOROLGICOS AOS 210 DIAS PS-VACINAIS PARA L.
interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS.......50

vi

LISTA DE FIGURAS

FIGURA 1 - TTULOS

SOROLGICOS

PR-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni..................................................32


FIGURA 2 - TTULOS

SOROLGICOS

PR-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, pomona E


grippotyphosa.......................................................................................32
FIGURA 3 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni aos 30 DIAS...........................34


FIGURA 4 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 30 DIAS ...................................34


FIGURA 5 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR grippotyphosa AOS 30 DIAS ..........................35


FIGURA 6 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 30 DIAS ...................................35


FIGURA 7 - TTULOS

SOROLGICOS

PR

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira interrogans SOROVAR icterohaemorrhagiae DURANTE


OS 210 DIAS DE EXPERIMENTO.......................................................36
FIGURA 8 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 60 DIAS ...........................37


FIGURA 9 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 60 DIAS ...................................38


FIGURA 10 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans sorovar grippotyphosa aos 60, 90, 120, 150, 180 E 210
DIAS.....................................................................................................38
FIGURA 11 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 60 DIAS ...................................39


FIGURA 12 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 90 DIAS .........................40


FIGURA 13 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 90 DIAS ...................................41


FIGURA 14 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 90 DIAS ...................................41


vii

FIGURA 15 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 120 DIAS .......................43


FIGURA 16 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 120 DIAS .................................44


FIGURA 17 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 120 DIAS..................................44


FIGURA 18 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 150 DIAS .......................46


FIGURA 19 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 150 DIAS .................................46


FIGURA 20 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 150 DIAS..................................47


FIGURA 21 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 180 DIAS .......................48


FIGURA 22 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 180 DIAS .................................49


FIGURA 23 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 180 DIAS..................................49


FIGURA 24 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 210 DIAS .......................51


FIGURA 25 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 210 DIAS .................................51


FIGURA 26 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 210 DIAS..................................52


FIGURA 27 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES
DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 01.......................................................53
FIGURA 28 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES
DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 03.......................................................53
FIGURA 29 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES
DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 05.......................................................54
viii

FIGURA 30 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 07.......................................................54
FIGURA 31 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES
DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 09.......................................................55
FIGURA 32 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES
DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO ANIMAL 11.......................................................55

ix

LISTA DAS ABREVIATURAS

ALT

Alanina Aminotransferase

AST

Fosfatase Alcalina

BUN

Nitrognio Sangneo Proveniente da Uria

Clulas Completas

CP

Cilindros Protoplasmticos

DNA

cido Desoxirribonucleico

ELISA Ensaio Imunoenzimatico (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)


IFD

Prova de Imunofluorescncia Direta

Ig

Imunoglobulinas Tipo A, G e M (IgA, IgGe IgM)

IOC

Instituto Osvaldo Cruz

LDH

Desidrogenase Ltica

Mol

MAT

Teste Microscpico de Aglutinao

ME

Membrana Externa

NaCl

Cloreto de Sdio

OMC

Outer Membrane Complex

PCR

Reao em Cadeia Polimerase

RPM

Rotaes Por Minuto

SAM

Teste de Soroaglutinao Microscpica

UFPR

Universidade Federal do Paran

WHO

World Health Organization

RESUMO

Com o objetivo de verificar as respostas imunes humorais para Leptospira


interrogans, 16 ces da raa Beagle foram vacinados com bacterina inativada
comercial contendo como antgenos os sorovares icterohaemorrhagiae, canicola,
pomona e grippotyphosa. As imunizaes, em nmero de duas, foram realizadas no
dia considerado zero e no 90 dia. As sete colheitas de amostras sangneas foram
efetuadas a partir do dia da primo-vacinao com intervalos de 30 dias entre elas,
sendo submetidas a tcnica de Soroaglutinao Microscpica sob microscopia de
Campo Escuro. Verificou-se aos 30 dias ps-vacinais, um aumento, do tipo booster,
nos ttulos direcionados para o sorovar copenhageni, quando comparados com os
pr-vacinais, demonstrando a ntima relao antignica deste, com o sorovar
icterohaemorrhagiae, j relatada anteriormente. Os ttulos aglutinantes ps-vacinais
direcionados para os demais sorovares, mantiveram-se entre 1/25 e 1/100, no
sendo detectados nesta ltima titulao, aps o 90 dia. Neste estudo demonstrouse, diante da literatura pesquisada,

a carncia de parmetros cientficos que

avaliem a eficincia vacinal das bacterinas anti-leptospira, assim como, informaes


a respeito da titulao ideal que seja protetora frente a infeces naturais. A
presente pesquisa alerta para os riscos infeco a que esto submetidos os ces,
mesmo vacinados, devido a efemeridade dos ttulos ps-vacinais alcanados,
devendo ser efetuadas imunizaes com intervalos mais curtos entre elas, com o
emprego de vacinas direcionadas unicamente para sorovares de Leptospira e no
includas em vacinas anti-virais polivalentes, como as atualmente utilizadas .

PALAVRAS-CHAVE: vacinao, ces, bacterinas, microaglutinao, Leptospira

xi

ABSTRACT

Sixteen beagles dogs had been vaccinated against Leptospira (commercial


bacterin with icterohaemorrhagiae, canicola, pomona and grippotyphosa serovars)
the objective was verify the humoral immune response of these animals. Two
vaccinations had been carried, one in the 0 day and another after 90 days. Seven
blood samples had been collected after the first vaccination with a period of thirty
days between them. All samples were submited to serological microscopic
agglutination test in dark camp. After 30 days to vaccination it verified an increase
(booster type) in titters to copenhageni serovar. It demonstrates the close antigenic
relation between this serovar with the serovar icterohaemorrhagiae, according to
literature description. The titters after vaccination to anothers serovars maintain
between 1/25 e 1/100 and do not be detected in the last samples collected. In this
study it was demonstrated the absence of scientific parameters to evaluate the
vaccinal efficiency of bacterins against leptospirosis and informations about the titters
to be effective in a natural infection. This research shows infection risks that the dogs
are submitted, when they are vaccinated, because had the short duration of the after
vaccination titters. Thus, it is suggested to reduce the time between the vaccinations
and use vaccine with Leptospira serovars do not together in multi antiviral vaccines.

Key words: vaccination, dogs, bacterin, microscopic agglutination, Leptospira

xii

INTRODUO

A Leptospirose uma enfermidade cosmopolita grave que acomete


diferentes espcies de animais domsticos, silvestres e o homem. Sua ocorrncia
pode levar a elevados prejuzos econmicos na indstria pecuria e refletir
significativamente na sade pblica (RUSSELL; RUSSELL, 1994; LANGONI et al.,
2002).
Dados da Organizao Mundial de Sade (WHO, 2003) no precisam o
nmero exato de casos no mundo, mas a sua prevalncia estimada em 0.1-1 caso
para cada 100.000 pessoas ao ano nas demais regies do globo, aumentando para
10-100 casos para cada 100.000 pessoas ao ano nas regies de clima tropical
mido.
No Brasil, esta zoonose endmica. De acordo com a Fundao Nacional
de Sade do Brasil (FUNASA, 2001), considerada como uma doena sob
influncia scio-econmica, por possuir relaes estreitas com a falta de
saneamento que ocorre em propores aceleradas nas reas urbanas e rurais,
como o crescimento descontrolado de favelas e a carncia de uma poltica
educacional e de infra-estrutura.
Somente as melhorias nas condies de habitao e saneamento, suprindo
a deficincia de urbanizao e drenagem, paralelamente com investimento em
educao e sade, podero minimizar a sua incidncia em populaes humanas
(LANGONI et al., 2002). Seu controle depender obrigatoriamente das aes
envolvendo

governo,

os

laboratrios

indstrias

farmacuticas

comprometimento social.
Segundo dados do Centro de Informao em Sade para Viajantes (CIVES,
2005), entre 1985 e 1997, foram notificados no Brasil 35.403 casos de leptospirose,
com 3.821 bitos (letalidade mdia de 12,5%). Apenas os casos mais graves
(ictricos) so, geralmente, diagnosticados e, eventualmente notificados, o que
representa apenas uma pequena parcela (provavelmente cerca de 10%) do nmero
real de casos no Brasil (FUNASA, 2001) (ANEXO 10).
A Secretaria de Sade do Paran rene dados que apresentam uma taxa de
letalidade que atinge 17% verificando-se um aumento progressivo desde 1997
(SESA, 2004).

Segundo MASUDA et al. (2003), o nmero de casos entre ces vem


aumentando gradativamente, particularmente na regio metropolitana de Curitiba-Pr,
onde observaram tambm alterao na dinmica da ocorrncia dos sorovares mais
freqentes, o que concluram ser uma conseqncia do crescimento populacional,
bem como, do resultado de uma seleo vacinal. Atravs de inqurito sorolgico
levantaram que 30,27% da populao canina teve contato prvio com o agente
infeccioso.
A epidemiologia e a incidncia desta zoonose urbana favorecida pelas
condies reinantes nas grandes cidades onde so encontradas grandes
populaes caninas e de roedores, bem como, bolses periurbanos de pobreza,
favorecendo a disseminao e a manuteno do agente infeccioso de maneira
permanente.
O rato de esgoto (Rattus novergicus) o principal responsvel pela infeco
humana, em razo de coexistir, em grande nmero, na proximidade de seres
humanos. A Leptospira interrogans

multiplica-se nos rins destes animais sem

causar danos, sendo eliminada pela urina, s vezes por toda a vida do animal, o que
torna estes roedores o seu principal propagador. O homem infectado casual e
transitoriamente, no tendo importncia como transmissor da doena de uma
pessoa para outra (VASCONCELLOS et al., 1997; CIVES, 2005).
O controle da leptospirose urbana s poder ter sucesso atravs de um
programa de sade pblica adequado que vise prticas de higiene, eliminao de
roedores e isolamento de animais infectados, com conseqente tratamento
quimioterpico, aliado ao uso de vacinas na populao canina como medida
profiltica (RUSSELL, RUSSELL, 1994).
A vacinao contra a leptospirose em animais uma prtica comum e um
mtodo eficaz de controle, geralmente adotado por proprietrios que possuem
condies econmicas razoveis. Muitas vacinas esto disponveis comercialmente,
mas existem evidncias conflitantes em se tratando da eficcia das mesmas
(BLOOD, RADOSTITS, 2002). Pesquisas sobre o tempo de manuteno desta
imunidade ps-vacinal, que realmente seja capaz de neutralizar uma possvel
infeco, no so encontradas na literatura cientfica especializada.
A grande quantidade de vacinas sendo oferecida no mercado, a tendncia
ao uso de vacinas polivalentes, a distribuio sazonal da doena em um pas

continental como o Brasil, a diversidade e a dinmica dos sorovares levam a


necessidade de atualizaes constantes no que se refere aos aspectos
imunoprofilticos desta doena, justificando o presente estudo.
Com o objetivo de verificar a resposta sorolgica ps-vacinal e o tempo de
manuteno da mesma, idealizou-se a presente pesquisa.

2.1

REVISO DE LITERATURA

HISTRICO DA LEPTOSPIROSE

Esta sndrome ictrica com falncia renal foi descrita pela primeira vez em
1880, no Cairo, por Larrey, provavelmente introduzida na Europa pelo Rattus
norvergicus proveniente da sia no sculo XVIII. Os estudos deram seqncia
atravs dos trabalhos de Landouzy, em 1883, mas foi Weil, porm, que em 1886,
descreveu-a minuciosamente, observando quatro casos clnicos em seres humanos.
Posteriormente, a leptospirose foi designada, por Goldschmidt, como Doena de
Weil. A etiologia bacteriana foi estudada concomitantemente, em meados do ano de
1915, por Inada e Ido, no Japo, e por Uhlenhuth e Frommer, na Alemanha. Estes
ltimos detectaram as espiroquetas na corrente sangnea de porcos inoculados
com sangue de soldados infectados pela Doena Francesa. Porm, foram os
estudos de Inada que deram origem as primeiras publicaes de trabalhos sobre
leptospirose (LEVETT, 2001; WHO, 2003).
No Brasil, de acordo com RIQUELME (1985), o interesse pela leptospirose
canina, comeou com os estudos de Dacorso Filho, em 1940. Desde ento,
inmeras pesquisas foram realizadas por diversos autores, entre eles Hagiwara e
Santa Rosa (1975), que detectaram anticorpos contra 18 sorotipos de leptospiras em
7,5% de ces investigados na cidade de So Paulo. De acordo com este mesmo
trabalho, Guida (1949) encontrou, tambm em So Paulo, 31% de casos; Veronesi
et al. (1956) 9,6% e Santa Rosa (1970) 13,8%. Dando seqncia ao levantamento
epidemiolgico, Caldas e Sampaio (1977) investigaram 888 casos em Salvador (BA),
que resultaram em 15% de casos positivos para leptospirose. Yasuda et al. (1980),
em So Paulo, analisaram 1428 soros da espcie canina, detectando 21,6% de
soropositivos.

2.2

ETIOLOGIA E CLASSIFICAO

2.2.1 As Espiroquetas
A ordem Spirochaetales inclui a famlia Spirochaetaceae e Leptospiraceae,
cujos gneros de importncia em animais e humanos so: Serpulina, Treponema e
Borrelia (famlia Spirochaetaceae) e Leptospira (famlia Leptospiraceae) (ANEXO 6).
Como o prprio nome define, as espiroquetas so formas bacterianas gramnegativas que se apresentam como espiras delgadas, mveis, flexveis, unicelulares,
medindo de 0.1 a 0.3m de dimetro e 6 a 20m de comprimento. A parede externa
da clula bacteriana composta por uma membrana completamente coberta de
flagelos periplasmticos que compe o filamento axial ou endoflagelo, o qual permite
movimentos de saca-rolhas (spin) e de flexo-extenso facilitando a mobilidade
bacteriana no ambiente. O cilindro helicoidal (corpo celular) consiste de material
nuclear, citoplasma, membrana citoplasmtica e a poro de peptidioglicano da
parede celular. O flagelo periplasmtico envolvido pelo cilindro e est no espao
periplasmtico celular. A poro final de cada flagelo est inserida prxima a um
plo de cilindro protoplasmtico firmemente aderido por estruturas denominadas
discos de insero. O ponto distal de cada flagelo se estende para o centro da clula
e pode se sobrepor por flagelos originados no plo oposto (QUINN et al., 1994)
(ANEXO 1 e 2).

2.2.2 Leptospira interrogans


No gnero Leptospira esto includas tanto as formas livres (no
patognicas) quanto as formas parasitrias (patognicas) onde as duas espcies
principais deste gnero eram subdivididas em: L. interrogans (parasita) e L. biflexa
(saprfita) (FORBES et al., 1998; ACHA; SZYFRES, 2001).
medida que as tcnicas de diagnstico molecular foram se aperfeioando,
os membros deste gnero passaram a ser classificados atravs de hibridizao do
DNA, por YASUDA et al. (1987) que definiram primeiramente mais de seis espcies
com diferentes genomas. Podem ocorrer sorovares patognicos e no patognicos
pertencendo

mesma

espcie.

Estudos

recentes

demonstraram

tambm

heterogenicidade gentica entre os sorovares (BAROCCHI et al., 2001; OLIVEIRA;


PIRES NETO, 2004).
Atualmente, a diversidade taxonmica da Leptospira est baseada em
anlises de DNA, compreendendo 11 espcies, subdivididas em 31 sorogrupos,
sendo estes compostos de mais de 250 sorovares identificados laboratorialmente
atravs de suas composies antignicas (BAROCCHI et al., 2001) (ANEXO 3, 4 e
5).
microscopia observa-se morfologia em espiral, e freqentemente um
gancho nas extremidades da clula bacteriana e por isto denominada por Stimson,
de Spirochaeta interrogans por assemelhar-se a um ponto de interrogao.
Fisiologicamente as formas saprfitas diferenciam-se das patognicas pela
sua facilidade de crescer a 10C ou at 5C menos que a temperatura requerida
para as patognicas (BARON et al., 1994). As patognicas tambm reagem
positivamente ao teste de converso de clulas espirais em formas esfricas, pela
adio de um molar (1M) de cloreto de sdio (NaCl), temperatura de 20 a 30C em
2 horas (QUINN et al., 1994).
O agente infeccioso sensvel luz solar direta, aos desinfetantes comuns,
dessecao, s variaes de pH (no resistem a pH abaixo de 6 ou acima de 8) e
temperaturas superiores a 40C. Todavia, pode sobreviver por vrios dias em gua
(comprovadamente por at 180 dias) com pH neutro (7,2 a 7,4) e em solos com
grande umidade, demonstrando sua preferncia por estes locais. No entanto, s
resistem a 30 minutos quando o solo est seco. No solo com condies ideais de
umidade, a sobrevivncia da L. interrogans provavelmente de no mnimo 42 dias.
Rios e lagos podem ser fontes de infeco, assim como aerossol de urina em
estbulos, leite e smen de animais infectados. Sobrevivem tambm ao frio e
mesmo ao congelamento (100 dias a 20C negativos), mas a temperatura ideal do
ambiente de 25 a 28 C (DICKESON; LOVE, 1993; QUINN et al., 1994; GARCIA;
MARTINS, 2004).
O co o hospedeiro primrio das espcies L. canicola e L. bataviae,
geralmente associadas aos sinais clnicos mais graves. Apesar de menos freqente,
o co pode tambm ser um hospedeiro acidental das outras espcies de leptospira,
como L. grippotyphosa, L. pomona, L. icterohaemorrhagiae e L. bratislava
(HARTMAN, et al., 1984; CIVES, 2005). Anlises sorolgicas realizadas na Frana,

durante os ltimos anos, tm demonstrado que o sorovar icterohaemorrhagiae o


que mais vem prevalecendo entre os ces, bem como, em seres humanos (ANDRFONTAINE; GANIRE, 19_?).

2.3

EPIDEMIOLOGIA

A Leptospirose uma enfermidade de distribuio mundial. Tem sido


detectada em praticamente todos os pases que realizam investigaes adequadas.
Possui

sorovares

universais,

como

por

exemplo,

L.

interrogans,

sorovar

icterohaemorrhagiae e sorovar canicola, bem como, aqueles que se apresentam


somente em determinadas regies. Cada regio caracteriza-se por manter um
sorotipo determinado pela sua ecologia. de alta prevalncia nos pases tropicais
onde h grandes precipitaes pluviais e onde o solo neutro ou alcalino (ACHA;
SZYFRES, 2001).
Teoricamente, qualquer mamfero pode ser infectado pela L. interrogans. De
uma maneira geral, a L. interrogans pode infectar inclusive rpteis, anfbios, peixes,
pssaros e invertebrados. O homem torna-se infectado atravs de contato direto ou
indireto com a urina ou sangue de animais infectados (FORBES et al., 1998).
A doena mantida na natureza por portadores com infeco crnica e pela
presena bacteriana nos tbulos renais de hospedeiros adaptados. Nestes, a
infeco mantida independentemente das condies ambientais (OLIVEIRA;
PIRES NETO, 2004). O sorovar adaptado determinada regio pode tornar-se apto
a infectar uma ou mais espcies, como tambm pode infectar acidentalmente
(THIERMANN, 1984) (ANEXO 7 e 8).
BLOOD e RADOSTITS (2002), classificam a epidemiologia da leptospirose
de duas formas com relao ao hospedeiro: a forma adaptada ao hospedeiro,
hospedeiro de manuteno ou reservatrio, onde o animal no desenvolve a
doena. E a no adaptada ao hospedeiro, onde este susceptvel a doena,
resultando em doena acidental. No primeiro caso, o hospedeiro passvel de
infeco e de transmissibilidade a outras espcies. A patogenicidade baixa, com
fraca resposta a imunizao e com tendncia a provocar doena crnica. O
hospedeiro acidental caracterizado pela doena aguda, resposta eficiente s

vacinas, alta patogenicidade e alto ttulo de anticorpos facilitando o diagnstico


sorolgico.
considerada como uma doena ocupacional, com grande prevalncia em
pecuaristas. A leptospirose em humanos acomete principalmente trabalhadores
rurais, fazendeiros, magarefes e veterinrios (DICKESON; LOVE, 1993; SNASHALL,
1996; RENDE; VILA, 2003). Em pases desenvolvidos a leptospirose est
associada com atividades recreacionais aquticas (NASCIMENTO et al., 2004).
Segundo VILA et al. (1998), atualmente a leptospirose j no pode mais ser
relacionada apenas com atividades profissionais, mas com o status econmico, haja
vista a situao de misria em que vive grande parte da populao dos pases de
terceiro mundo, aumentando a proliferao de roedores facilitando o convvio destes
com os animais domsticos e com o prprio homem.
TAVARES NETO et al. (1996), registraram a prevalncia de soros reagentes
em 45,3%, das 106 amostras provenientes de pessoas da zona rural. A forma de
contgio humano, provavelmente ocorre pelo contato com a urina ou contedo
uterino dos animais infectados. Apesar das leptospiras poderem estar presentes no
leite por poucos dias durante o pico febril, em caso de infeco aguda, a bactria
no sobrevive muito tempo no leite, no resistindo igualmente pasteurizao.
Entretanto, os trabalhadores das fazendas que realmente ordenham as vacas, so
altamente suscetveis infeco pela L. interrogans sorovares hardjo e pomona.
A apresentao em animais concentra-se primeiramente nos roedores
silvestres e domsticos e em aproximadamente 160 espcies de mamferos. Cada
sorovar possui o seu hospedeiro predileto, mas cada espcie animal pode ser
hospedeira de um ou mais sorovares. Como exemplo, o sorovar pomona que tem
como hospedeiro principal o gado bovino, podendo infectar de forma transitria
outras espcies de animais (ACHA; SZYFRES, 2001)(ANEXO 7e 8).
Reservatrios podem apresentar o fenmeno de leptospirria por toda a
vida, com taxa de portadores chegando a 50% ou mais. Animais domsticos,
geralmente, eliminam leptospiras intermitentemente, por meses, podendo chegar a
um ano, com declnio na intensidade (RUSSELL; RUSSELL, 1994).
A alta incidncia de reagentes a infeco bovina, como relatado por RENDE
e VILA (2003), com taxas cujas freqncias variam de 58,6% e 57,3%,
respectivamente, em bovinos de leite e corte na regio de So Paulo, tambm

mostrou-se alarmante, pois a doena clnica nesses animais compromete o


desempenho reprodutivo por causar abortamento, natimortalidade, nascimento de
crias fracas e inviveis, alm de queda na produo de leite e custos relacionados
assistncia

veterinria,

medicamentos,

vacinas

testes

laboratoriais

para

diagnsticos (VASCONCELLOS et al., 1993; BLOOD; RADOSTITS, 2002).


GENOVEZ et al., (1993), trabalhando com fetos abortados isolaram
bactrias causadoras de aborto bovino tendo identificado a Brucella abortus em
6.4% dos casos, Leptospira interrogans em 6.2% e Staphylococcus aureus em 5.4%
como os principais agentes abortivos.
Sunos, com freqncia, so infectados pelo sorovar L. pomona, mas
recentes estudos indicam a importncia do sorogrupo L. australis causando aborto e
infertilidade. Apesar de mais resistentes, rebanhos de ovinos tambm so
acometidos pela infeco onde se pode relatar agalactia, aborto e distrbios
reprodutivos (THIERMANN, 1984).
Em vrios locais do mundo, investigaes sobre a presena de sorovares de
Leptospira interrogans em animais silvestres tm sido demonstradas em roedores,
edentatas, carnvoros e artiodctilos, os quais podem atuar como fonte de infeco
(MICHNA, 1970). Os mamferos da Ordem Carnvora so espcies importantes na
cadeia epidemiolgica devido as suas funes no equilbrio dos ecossistemas, de
uma maneira geral, onde so o topo da cadeia alimentar. So assim, indicadores de
sade ambiental e por este motivo, no pode ser desconsiderada a sua importncia
na transmisso da leptospirose para o homem (GUERRA NETO et al., 2004).
Estudos revelaram a baixa ocorrncia de infeco por leptospirose em gatos.
A virulncia varia entre as cepas. Evidncias sorolgicas indicam que uma variedade
de cepas pode infectar gatos, mas a doena demonstra ser incomum nestes
animais, nas quais, os microorganismos parecem no tomar parte na infeco renal
nesta espcie.
LANGONI et al. (1998), detectaram a presena de anticorpos aglutinantes
em gatos em nove amostras (4,5%) com ttulos que variaram de 100 a 400, sendo
que 4 (44,4%) reagiram para o sorovar L. icterohaemorrhagiae, 2 (22,2%) para o
sorovar L. patoc, 1 (11,1%) para L. canicola, 1 (11,1%) para L. grippotyphosa e 1
(11,1%) para L. andamana.

10

DICKESON e LOVE (1993), no acharam diferena significativa de


prevalncia de soros reagentes na populao canina em relao felina. Das 107
amostras positivas obtidas dos procedimentos de rotina dos Hospitais Veterinrios
da Austrlia, 16,9% dos soros eram de gatos, 9.8% de ces e 28.6% de cavalos.
Dentre os animais domsticos sujeitos a infeco por Leptospira, os ces
destacam-se como os mais susceptveis a ela. Em filhotes alta a letalidade
exterminando ninhadas inteiras e o seu aparecimento, geralmente sbito, no
permite nem mesmo que se possa tomar alguma medida, quer seja curativa ou
preventiva (GENOVEZ, 1996).
Atualmente, o co tambm desponta como a principal fonte de infeco
humana devido a sua relao e convvio estreitos, que crescem a cada dia. Esta
importncia perde apenas para os roedores, reservatrios naturais da doena, que,
histrica e epidemiologicamente sempre assumiram posio de destaque como fonte
de infeco para os humanos e outros animais. Dentre os roedores domsticos, as
espcies mais comuns so: Rattus norvergicus (ratazana, rato de esgoto ou gabiru),
Rattus rattus (rato de telhado, rato preto) e Mus muscullus (camundongo ou catita).
Nas zonas rurais, embora as trs espcies sejam prevalentes, podemos encontrar
pequenos roedores do campo chamados, genericamente, ratos da lavoura ou ratos
do campo representados, principalmente, pelo Holochillus sp. Os animais de vida
livre que so predadores para estes roedores, no parecem exercer um papel
relevante na rota natural de transmisso da infeco (RENDE; VILA, 2003).
No Brasil, inquritos soro-epidemiolgicos em vrios estados tm revelado
resultados variados quanto ocorrncia dos diferentes sorovares na leptospirose
canina (GENOVEZ, 1996; VILA et al., 1998; ALVES et al., 2000; FAVERO et al.,
2002). Segundo VILA et al. (1998), os principais sorovares encontrados em ces,
no municpio de Pelotas-RS, no ano de 1995 foram: L. canicola (58,1%); L.
icterohaemorrhagiae (20,9%); L. copenhageni (11,4%); L. grippotyphosa e L.
castellonis (2,7%); L. andamana, L. autumnalis e L. pyrogenes com 1,4% dos
reagentes, onde 34,8% foram reagentes positivos com ttulos maiores ou iguais a
1/100. Corroborando com os achados de YASUDA e SANTA ROSA (1981),
notificando prevalncia do sorovar canicola como sendo o melhor adaptado aos
ces depois de ter isolado 91,4% deste sorovar, seguido dos sorovares copenhageni

11

(5,7%) e pomona (2,8%), durante os anos de 1976 e 1977, na cidade de So PauloSP.

2.4

PATOGNESE

As portas de entrada para estas delgadas bactrias so as mucosas oral,


nasal, conjuntival e genital, alm de pele e tecidos lesados. Tambm podem
penetrar atravs da pele ntegra aps esta ter ficado por longa exposio na gua,
permitindo a dilatao dos poros. A transmisso se d atravs de contato direto ou
indireto com solo mido, gua, tecidos, urina e sangue contaminados. A via oral
pouco eficiente por serem as bactrias sensveis ao pH cido do estmago dos
animais e seres humanos. O perodo de incubao de uma a duas semanas
(GARCIA; MARTINS, 2004).
Raramente a doena transmissvel atravs de mordidas de animais, assim
como a transmisso direta entre seres humanos (LEVETT, 2001).
A patognese, de modo geral, semelhante em ces e seres humanos.
Uma infeco generalizada inicia-se com o desenvolvimento da leso ocorrendo
quando uma concentrao crtica de bactria alcanada. Como se desenvolve
uma

resposta

imune

mediada

por

anticorpos

ao

sorovar

infectante,

os

microorganismos so eliminados pelo sistema imune do hospedeiro, exceto aqueles


stios seqestrados, como globo ocular, crebro e rins, onde persistem por vrios
meses. Nos rins, multiplicam-se nos tbulos coletores sendo eliminados pela urina.
Infeces nos reservatrios so, usualmente, de inaparentes ou moderadas e o
fenmeno de leptospirria persiste por tempo prolongado (RUSSELL; RUSSELL,
1994).
A L. interrogans pode causar infeces subclnicas, como sintomatologia
gripal branda, bem como, provocar doenas sistmicas graves que podem levar a
morte. A severidade da doena influenciada pelo nmero de microorganismos
presentes no hospedeiro, pela virulncia do sorovar e pelo status imunolgico do
infectado. Desta forma, espalham-se no hospedeiro pela corrente sangunea, tecidos
e sistema nervoso central. Multiplicam-se rapidamente e causam leses nos
endotlios de pequenos vasos causando hemorragias, sendo ento, responsveis

12

pelas manifestaes clnicas de doenas como meningites e disfunes hepticas e


renais (MURRAY et al., 1998).
A fase de localizao heptica e renal , provavelmente, resultado da
capacidade de aderncia das leptospiras virulentas s diferentes clulas, alm da
capacidade de penetrao atravs das clulas endoteliais e da dissociao dos
hepatcitos. esta interao celular que d origem s coagulopatias, hipxia
tecidual e agregao plaquetria com ativao do sistema de coagulao e
fibrinlise (ANDR-FONTAINE; GANIRE., 19_?).
Tambm penetram no tero gravdico e multiplicam-se nos fetos, podendo
levar a morte e reabsoro fetal, aborto ou prole fraca. No feto bovino, se a infeco
acontecer durante o terceiro trimestre, pode ocorrer produo de anticorpos
especficos que, ocasionalmente, superam a manifestao da doena (QUINN et al.,
1994).
Algumas cepas produzem hemolisina que , provavelmente, a responsvel
pela hemoglobinria em animais infectados. Protenas citotxicas tambm so
produzidas por cepas virulentas, mas a funo destas toxinas ainda desconhecida
(QUINN et al., 1994).
A ao txica bacteriana ainda no est bem compreendida. Sabe-se que, a
atividade hemoltica dependente dos fosfolipdios da membrana dos glbulos
vermelhos que podem ser sensveis, ou no a fosfolipase produzida pelas
leptospiras (ANDR-FONTAINE; GANIRE., 19_?).
A hemolisina produzida na fase septicmica pode estar em quantidade
suficiente

para

provocar

extensa

hemoglobinria,

resultante

de

hemlise

intravascular intensa. Essa hemlise depender da capacidade de um sorotipo em


produzir hemolisinas como ocorre com o sorovar ballom, em hamsters e o sorovar
pomona, em bovinos (BLOOD; RADOSTITS, 2002).
Os sorovares pomona e copenhageni elaboram uma protena citotxica cuja
atividade detectada no plasma dos animais infectados que provoca infiltraes de
macrfagos e outras clulas polimorfonucleares em rgos afetados (LEVETT,
2001).
Entre o 4 e 11 dia de infeco, a bactria invade a corrente sangnea
multiplicando-se rapidamente, dando origem a leptospiremia. No incio desta fase
observam-se febre, leucocitose e albuminria. Em animais susceptveis, pode

13

ocorrer a septicemia ao dar-se a invaso nos rgos pelos quais a bactria tem
maior tropismo, como fgado, rins, bao, sistema nervoso central e globo ocular,
podendo ocasionar grandes danos teciduais. A Leptospira pode provocar petquias
ou equimoses, ictercia, infiltrado inflamatrio difuso de clulas plasmticas nos rins,
necrose focal de parnquima heptico, colestase intra-heptica com leso heptica
severa. Neste estgio da doena o animal poder sucumbir devido insuficincia
renal ou heptica. Ao final da bacteremia (sete a dez dias aps a infeco),
geralmente a febre diminui e a bactria eliminada da circulao sangnea devido
presena de anticorpos, o que possibilita a recuperao. Esta mais rpida
quanto menor forem as leses orgnicas. No entanto, as bactrias que se alojaram
em locais onde os anticorpos no tm acesso, como crneas e tbulos renais,
podem levar uvetes e leptospirria. O fenmeno de leptospirria ocorre em uma
fase mais tardia da enfermidade. Ela pode permanecer por meses, at mesmo anos,
constituindo-se uma fonte de contaminao ambiental e de infeco para os outros
animais. Nesses animais portadores e eliminadores da bactria, a concentrao de
anticorpos decai, j que o microorganismo se encontra situado nos tbulos renais,
no estimulando o sistema imune podendo apresentar-se soronegativos quando
testados (CIVES, 2005).
ACHA e SZYFRES (2001) descrevem a doena no homem e nos animais,
particularmente bovinos e ces, da seguinte maneira:
-

Em seres humanos em geral, distinguem-se dois tipos clnicos: o anictrico, que pode
ser discreto, sendo freqentemente rotulado de sndrome gripal ou virose; e o ictrico
ou hepatonefrtico (Doena de Weil) tipo clnico mais grave, com disfuno renal,
fenmenos hemorrgicos, alteraes hemodinmicas, cardacas, pulmonares e de
conscincia, associadas a taxas de letalidade que variam de 5% a 20% nas diversas
casusticas. Na forma clssica da Doena de Weil os sintomas se instalam bruscamente
com febre, dores de cabea, mialgias, conjuntivites, nuseas, vmitos, diarrias e
constipao. A prostrao marcante. Petquias na pele, hemorragias gastrointestinais
e proteinria so comuns.Se o paciente evolui at a cura, a diurese se restabelece e
diminui a ictercia. Qualquer sorovar pode determinar as diversas formas de
apresentao clnica, sendo que alguns esto mais comumente relacionados a casos
mais graves, como o sorovar icterohaemorragiae. Na forma anictrica muitas vezes o
curso benigno e o paciente se recupera dentro de um ms.
Em bovinos tm-se isolado mais de 13 sorovares onde os universais so pomona e
hardjo, este ltimo vem se comprovando com cada vez mais freqncia. A infeco
pode se dar na forma aguda, subaguda ou permanecer clinicamente inaparente. A
enfermidade se manifesta por uma febre de quatro a cinco dias, anorexia, conjuntivite e
diarria. A leptospiremia comea a desaparecer quando se formam os anticorpos,
desaparecendo as leptospiras da corrente sangnea em uma semana devido a
imunidade humoral. As leptospiras sobreviventes alojam-se nos tbulos convolutos dos
rins e a infeco passa a uma fase crnica. Nos primeiros meses a leptospirria elimina
grandes quantidades de leptospiras diminuindo ou cessando com o tempo. O sorovar

14

hardjo, cuja leptospirria mais prolongada que o pomona, caracteriza-se por causar
agalactia, ou reduo de leite e abortos ou crias fracas. Infeces por hardjo podem
residir nos rgos genitais o que pode indicar transmisso venrea. A infertilidade pode
ser seqela da infeco. Em casos graves h ictercia. So susceptveis animais de
todas as idades, sendo mais severa em bezerros.
Nos ces os sorovares predominantes no mundo so canicola e icterohaemorrhagiae. A
infeco pode variar desde uma forma assintomtica at quadros clnicos mais graves.
A hemorrgica a forma mais grave, instalando-se repentinamente em trs a quatro
dias com sinais de febre seguida por rigidez e mialgias dos membros posteriores,
hemorragias na cavidade bucal podendo levar a necrose e faringite, seguidas
posteriormente de hemorragias gastrointestinais, nefrite aguda e ictercia.

A ictercia ocorre principalmente devido leso heptica e no hemlise


intravascular. Os rins comeam a ter problemas de filtrao ocorrendo a seguir
quadro de uremia onde o animal apresenta hlito de amnia. Este o quadro agudo
da doena no homem e no co com durao de quatro a sete dias (GARCIA;
MARTINS, 2004).
Alm da ocorrncia de hemorragia difusa, de anemia e ictercia, os animais
tambm apresentam na leptospirose aguda, edema pulmonar, fgado plido, frivel e
corado por bile. Os rins aparecem tumefeitos e escuros devido impregnao
hemoglobnica. Mais tarde, no curso da doena, os rins apresentam focos plidos
causados por infiltrados de clulas inflamatrias no interstcio. As hemorragias so
numerosas e disseminadas. Diante do envolvimento heptico notvel em ces a
hepatomegalia, onde o fgado tambm se apresenta frivel e com colorao
amarelo-acastanhado. Freqentemente os tecidos esto ictricos. O fgado pode
no exibir alteraes notveis, presumivelmente porque a disfuno heptica pode
ser causada por toxina que produz, basicamente, leso subcelular. A infeco
crnica com o sorogrupo grippotyphosa tem-se caracterizado por hepatite crnica,
fibrose heptica e a presena do microorganismo no fgado. A infeco persistente e
a hepatite crnica parecem ser raras com este sorovar, porque apenas poucos
artigos documentaram este desfecho. Ces que morrem de leptospirose aguda
representam hemorragias disseminadas e necrose heptica focal. Os rins
consistentemente apresentam leses e, na forma aguda da doena, esto
tumefeitos e apresentando hemorragias equimticas subcapsulares e corticais. Mais
tarde, no curso da doena crnica, tornam-se diminudos de tamanho com
aderncias capsulares superfcie cortical e vrios graus de fibrose cortical
(GREENE, 1998).

15

O sorogrupo icterohaemorragiae est associado leso heptica, enquanto


o sorogrupo canicola est associado insuficincia renal, com rins hipertrofiados e
plidos. Acredita-se que a infeco por outros sorotipos seja, na maioria das vezes
inaparente, embora a infeco persistente com o L. interrogans, sorogrupo
grippotyphosa tenha sido associada hepatite crnica em ces (GREENE, 1998).

2.5

SINAIS CLNICOS

A severidade dos sinais clnicos em ces depende da idade, status vacinal,


virulncia do sorovar, da rota de infeco e do grau de exposio. As formas clnicas
podem variar de hiperaguda, aguda, subaguda, crnica e assintomtica. Raas de
ces acima de 15 kg, agravados pelo fato de viverem ao ar livre, so mais afetadas.
Uma infeco hiperaguda decorrente de uma leptospiremia massiva pode levar a
morte e ocorrer sem o aparecimento de sinais prvios (GREENE, 1998).
A leptospirose canina afeta animais de diferentes raas ou idades e de
ambos os sexos. A doena possui um espectro extremamente amplo, indo de uma
infeco subclnica a uma sndrome severa de vrios rgos com alta mortalidade.
Pode manifestar-se inicialmente com sinais de letargia, febre, vmito, diarria,
mialgia evoluindo para petquias e sufuses em mucosas, ictercia e dores
abdominal e lombar (GREENE, 1998; ACHA; SZYFRES, 2001; LEVETT, 2001).
Segundo GENOVEZ (1996), os sorovares icterohaemorrhagiae e canicola,
prevalentes em ces, determinam aspectos clnicos distintos. Em ambos verifica-se
infeco aguda com febre de 39.5 a 40 C, calafrios, conjuntivite e fraqueza como os
primeiros sinais. Aps, surgem os vmitos, a desidratao e o colapso perifrico
vascular.
No caso do sorovar canicola comum a evoluo para as formas aguda ou
subaguda, onde no primeiro caso tambm conhecida como Doena de
STUTTGART, atingindo nveis crticos de desidratao (10 a 15%), melena, devido
as hemorragias intestinais; odor oral ftido, devido s estomatites e glossites, que
evoluem para necrose da mucosa e perda do bordo anterior da lngua. A taxa de
letalidade elevada, com bitos ocorrendo entre 36 horas e quatro dias. Sinais de

16

nefrite, sbitos de febre, edema renal sensvel palpao e morte so freqentes na


forma subaguda deste sorovar.
O sorovar icterohaemorrhagiae tambm responsvel pela forma hiperaguda da doena, denominada Sndrome de Weil canina. de evoluo mais
fulminante que a precedente e em cerca de dois dias aps o aparecimento dos
primeiros sinais, ocorre visvel piora do estado geral do animal. As dores musculares
ou a hiperestesia paraespinhal limitam o animal em seus movimentos, o que
GREENE (1998) atribui como uma conseqncia da inflamao muscular, meningeal
ou renal.
A temperatura corporal pode cair abaixo da normalidade (36 C) e so
visualizadas hemorragias por leso vascular, principalmente das mucosas oral e
conjuntival, bastante ictricas, com saliva espessa e sanguinolenta (GENOVEZ,
1996). A leso renal severa evolui para insuficincia renal aguda com poliria,
oligria ou anria e conseqente uremia. A ictercia responsvel pela eliminao
da urina rica em bilirrubina e albumina (ANDR-FONTAINE; GANIRE., 19_?).
A morte ocorre em 85% dos casos no tratados e pode ser abrupta dentro
de algumas horas ou dias (GENOVEZ, 1996).
A ictercia ocorre mais freqentemente na fase aguda da doena,
relacionada s infeces pelo sorovar icterohaemorrhagiae. Nesta fase podem ser
observadas fezes de colorao acinzentada, em virtude da colestase heptica
resultante de uma inflamao no fgado. Os ces com hepatite ativa crnica
manifestam sinais de inapetncia, perda de peso, ascite e, em casos crnicos,
hepatoencefalopatia. As manifestaes pulmonares, como a pneumonia intersticial,
so menos freqentes em ces do que em seres humanos, sendo acompanhadas
de respirao difcil e tosse. J, as intussuscepes ocorrem mais vezes nestes
animais associadas com inflamaes gastrointestinais (RIBEIRO et al., 2003).
SHCREIBER

et

al.

(2005),

inocularam

cepas

virulentas

de

L.

icterohaemorrhagiae e de L. canicola em ces do grupo controle, que no


receberam a pr-imunizao com bacterinas comerciais destes sorovares.
Observaram os seguintes sinais clnicos: hipotermia (35.6 C), depresso, anorexia,
dor abdominal, desidratao, ictercia e perda de peso. Na hematologia, foram
verificadas leucocitose e trombocitopenia, enquanto na anlise bioqumica, aumento

17

nas taxas de uria, creatinina e bilirrubina total, alm de leses como petquias e
nefrite subaguda.
Em gatos os sinais clnicos so raros e variam de suaves a inaparentes
mesmo na presena de leptospiremia e leptospirria e inflamaes renais e
hepticas (GREENE, 1998; ACHA; SZYFRES, 2001).
LARSSON et al. (1985), com o objetivo de verificar a susceptibilidade dos
felinos infeco por leptospirose constataram que, dos dez gatos inoculados com
os sorovares icterohaemorrhagiae e canicola nenhum deles apresentou sinais
clnicos nem laboratoriais e, 90 % apresentaram aglutininas antileptospricas aps a
inoculao bacteriana, que ainda eram detectveis na urina por at 12 semanas.
Trabalho de NAVARRO et al. (1981) ao inocularem Leptospira interrogans
sorovar icterohaemorrhagiae em cinco ces, observaram sinais clnicos diferentes
que variavam de febre, como nica manifestao inicial detectvel, at severa
ictercia, uremia e morte. necropsia, foram detectadas petquias na mucosa
intestinal e hemorragia subpleural nos pulmes.
NAVARRO e KOCIBA (1982) dando seqncia a estes estudos verificaram
entre

os

dez

ces

inoculados

com

Leptospira

interrogans

sorovar

icterohaemorrhagiae, que trs desenvolveram a forma subclnica com febre


persistente de 39,4 a 40.5 C, durante trs dias. Quatro animais desenvolveram a
forma branda, com febre mais persistente, suave ictercia, esclera congesta e incio
de desidratao. E os trs ltimos animais fizeram a forma severa da doena com
sintomas de febre alta, anorexia, ictercia, diarria, depresso at a morte no stimo
dia ps-inoculao.

2.6

DIAGNSTICO IMUNOLGICO DA LEPTOSPIROSE

Segundo TIZARD (1998), as respostas imunolgicas podem auxiliar na


obteno do diagnstico da doena de duas formas. Primeiramente, de forma direta,
atravs de anticorpos especficos que identificam ou detectam o antgeno em
tecidos, lquidos ou rgos do animal infectado. Ou ento, de forma indireta,
detectando-se o anticorpo especfico no soro que acusar se houve ou no
exposio do animal ao agente infeccioso. A presena de anticorpos no soro de um

18

animal indica a exposio prvia a um determinante antignico. Entretanto, esta


forma indireta de diagnstico, no propicia automaticamente uma prova de que
existe infeco ativa. Em geral, testes imunolgicos utilizados em diagnstico de
infeces bacterianas ou virais, variam em sensibilidade, especificidade, e
complexidade de execuo, muitas vezes exigindo alto grau de destreza tcnica e
sofisticados equipamentos necessrios para a sua realizao.
De acordo com a Organizao Mundial de Sade (WHO, 2003), os mtodos
laboratoriais atualmente em uso para o diagnstico da leptospirose incluem: provas
sorolgicas de detectao de anticorpos (ELISA, Fixao de Complemento,
Soroaglutinao Microscpica), Cultura da bactria, visualizao atravs de
Microscopia de Campo Escuro, Microscopia de Imunofluorescncia, e mais
recentemente, mtodos genticos utilizados somente em grandes centros que
dominem as tcnicas de Hibridizao de DNA, Endonucleases de Restrio e a
Reao em Cadeia pela Polimerase (PCR).
Os resultados de testes sorolgicos aplicados ao diagnstico da leptospirose
dependem da tcnica empregada, da coleo de antgenos utilizada, do ponto de
corte da reao e tambm de variveis relacionadas localizao das propriedades,
perodo do ano em que as colheitas foram efetuadas e da movimentao dos
animais (FAINE et al., 1999).
Quando ocorre o fenmeno da leptospiremia a bactria comumente
encontrada no sangue perifrico, fluido cerebroespinhal, urina e tecidos podendo ser
colhidos em diferentes fases da infeco. Estas clulas bacterianas apresentam
movimentos serpentiformes e so melhor visualizadas pelo exame de lquidos em
microscopia

de

campo

escuro,

onde

aparecem

como

espirilos

delgados

apresentando extrema mobilidade. Este tipo de pesquisa pode ser realizado a partir
de uma gota de sangue, at o quarto dia de infeco, ou de uma amostra de urina,
entre a primeira e segunda semana. A demonstrao de microorganismos atravs
de microscopia de campo escuro em lquidos orgnicos e emulses teciduais,
colhidos necropsia, requer que os tecidos estejam frescos. A Leptospira pode ser
excretada na urina intermitentemente e ttulos de anticorpos, nesses animais
portadores podem variar consideravelmente, dificultando o diagnstico correto
(MURRAY et al., 1998).

19

BLOOD e RADOSTITS (2002) defendem que o exame de amostra urinria


representa a melhor oportunidade para a demonstrao da infeco. Aps a
infeco inicial, um grande nmero de leptospiras eliminado na urina por diversas
semanas, com declnio progressivo em seguida, que pode estar associado com um
aumento considervel dos ttulos de anticorpos antileptospiras, das classes IgG e
IgA, na urina.
A tcnica de isolamento do microrganismo por cultivo ou inoculao de
material suspeito em animais de laboratrios requer a presena de organismos vivos
e a sua multiplicao pode levar semanas at que se chegue a um resultado
conclusivo. Esta dificuldade de ordem prtica desestimula a utilizao deste tipo de
diagnstico, principalmente se o objetivo for verificar o estado de portador renal de
leptospiras (YASUDA; SANTA ROSA, 1981; RIQUELME, 1985; RENDE; VILA,
2003)
Por se tratar de uma doena que no apresenta sinais patognomnicos, fazse necessrio aliar os exames laboratoriais ao diagnstico clnico a fim de serem
tomadas medidas que possam evitar uma epidemia, j que a eficcia do tratamento
vai depender do diagnstico precoce da doena (RIBEIRO et al., 2003).
Em relao aos mtodos de diagnstico laboratorial destacam-se: os geneespecficos e os sorogrupo-especficos (LEVETT, 2001).
O teste de Soroaglutinao Microscpica (SAM) ou teste Microscpico de
Aglutinao (MAT), sorovar-especfico sendo a tcnica de referncia padro mais
utilizada por pesquisadores de todo o mundo para o diagnstico da leptospirose
devido a sua praticidade, rapidez de execuo, baixo custo e baixo risco de infeco
para o operador (SANTA ROSA, 1970).
O teste Microscpico de Aglutinao (MAT) realizado colocando-se frente
a frente microorganismos vivos, juntamente com o soro teste. Caso haja anticorpos
no soro, ocorre a aglutinao que poder ser visualizada pelo aglomerado de
leptospiras. uma tcnica excelente para detectar preferencialmente anticorpo IgM
conseqentemente, detectar surtos recentes e distinguir animais infectados de
vacinados (TIZARD, 1998).
Esta tcnica indicada pela Organizao Mundial de Sade (WHO, 2003),
por apresentar elevada sensibilidade e especificidade.

20

Seu principal inconveniente a necessidade de infra-estrutura laboratorial


com o emprego de mltiplos antgenos vivos e a necessidade de se manter um
grande nmero de culturas em constante renovao para obteno de antgenos
novos. A demora em at dez dias para que o limiar de aglutininas sricas atinja nvel
detectvel pode implicar no retardo do tratamento, o que pode ser fatal (YASUDA;
SANTA ROSA, 1981; RIQUELME, 1985). Para COLE et al. (1973) a principal
desvantagem desta tcnica que somente leptospiras aglutinantes so observadas.
Apesar de ser uma tcnica de uso universal, difcil obter resultados
consistentes e idnticos entre os laboratrios. Anticorpos resultantes do uso de
bacterinas multivalentes podem interferir no diagnstico, que depende de anlise
subjetiva no diferenciando entre doena e imunizao (THIERMANN, 1984).
Para melhor aproveitamento desta tcnica, so utilizados pools contendo
vrios sorotipos de Leptospira em cada pool. Os resultados positivos so
visualizados em campo escuro onde se verificam as aglutinaes das mesmas.
Caso se verifiquem microaglutinaes, procede-se a microaglutinao em separado
para cada sorovar contido no pool. As disponibilidades de reagentes comerciais para
a confeco dos meios de cultura facilitam o emprego desta tcnica (FORBES et al.,
1998).
Para RIBEIRO et al. (2003), esta prova requer cuidados em sua
interpretao para a obteno de um diagnstico definitivo. Como no caso dos
animais que apresentarem reaes positivas onde pelo menos 50% de Leptospiras
encontrar-se-o aglutinadas. Estes soros so testados novamente em diluies ao
dobro, at verificar-se ausncia da aglutinao para o respectivo sorovar. No
entanto, alguns animais podem reagir para vrios sorovares ou podem apresentar
reaes cruzadas com sorovares do mesmo grupo (co-aglutinao), dificultando a
interpretao de uma nica amostra sorolgica. Nestes casos e, sempre que
possvel, recomenda-se a realizao da sorologia pareada, que consiste na
execuo de duas provas sorolgicas intercaladas de duas a quatro semanas. Ttulo
maior ou igual a 100, na primeira tomada de sangue, seguido da quadruplicao
deste ttulo numa segunda tomada, uma prova de soroconverso, confirmando
assim, a infeco. Ttulos elevados da ordem de 1600 ou maiores so considerados
significantes, juntamente com dados clnicos compatveis. Um nico exame com
ttulo maior ou igual a 100 pode ser interpretado como residual de infeco

21

pregressa, resposta inicial a uma infeco corrente ou vacinao. Mesmo ttulos


elevados so questionveis se a amostra testada advm de animais sujeitos a
sucessivas vacinaes, pois, ttulos vacinais podem ser detectados at trs meses
aps a vacinao. Na avaliao sorolgica dos animais importante questionar o
histrico vacinal contra leptospirose. Ces vacinados recentemente podem
apresentar resultados falso-positivos, j que anticorpos vacinais no so
diferenciados daqueles provenientes de infeco.
O MAT um teste especfico para um sorogrupo e todos os sorogrupos
suspeitos devem ser testados. O teste detecta o anticorpo da classe IgM com mais
facilidade que o da classe IgG. Na leptospirose crnica, o teste apresenta pouca
sensibilidade em detectar hospedeiros de manuteno. Ele tambm no determina o
grau de imunidade infeco, pois a vacinao promove a elevao de IgG com
ttulos baixos (100 a 400) e transitrios (um a quatro meses). A imunidade
normalmente persiste em animais vacinados por um longo tempo, mesmo aps os
ttulos, obtidos atravs do MAT, tornarem-se negativos (BLOOD; RADOSTITS,
2002).
Tambm como diagnstico, faz-se mister ressaltar o mtodo da Reao em
Cadeia Polimerase (PCR), do Centro Nacional de Referncia para Leptospirose do
Instituto Oswaldo Cruz (IOC), da FIOCRUZ (2005 in: FAPESP) onde, segundo
aqueles pesquisadores, o principal problema das tcnicas utilizadas a demora nos
resultados. O exame sorolgico s consegue identificar a infeco uma semana
aps o incio dos sintomas da doena, enquanto a cultura das bactrias pode levar
at dois meses. O PCR amplifica em escala potencial o DNA bacteriano permitindo o
diagnstico em poucas horas. capaz ainda de identificar a presena deste DNA
mesmo em pessoas ou animais que apresentem poucas bactrias na corrente
sangnea.
O teste de PCR identifica geno-espcies, mas no o sorovar. Tem sido
usado para diferenciar sorovares patognicos dos no patognicos (SMYTHE et al.,
2002; OLIVEIRA; PIRES NETO, 2004).
Mtodos

sorolgicos

possuem

limitaes

por

isto,

devem

ser

complementados com o isolamento do agente causal (THIERMANN, 1984;


RIQUELME, 1985; WHO, 2003;).

22

A prova de Imunofluorescncia Direta (IFD) valendo-se de rins, trato genital


e urina, tem se mostrado uma tcnica diagnstica alternativa mais rpida que as
demais. Comparada tcnica de Isolamento, a Imunofluorescncia Direta, segundo
RIQUELME (1985), detectou maior nmero de casos positivos recomendando o seu
uso como prova complementar ao diagnstico da leptospirose.
THIERMANN (1983) comparou as sensibilidades apresentadas atravs das
tcnicas de MAT e ELISA onde obteve os seguintes resultados: dos 200 soros de
bovinos colhidos, observou a presena de reagentes em 29 (14.5%) soros pela
tcnica de MAT contra 79 (39.5%) pela tcnica de ELISA. Ambas as tcnicas
indicaram hardjo como sorovar predominante.
No diagnstico bioqumico pode-se verificar na hematologia: petquias e
trombocitopenia (em ces severamente afetados), leucocitose com desvio
esquerda (>20.000 leuccitos/dl) e um aumento no fibrinognio plasmtico, alm de
graus variveis de anemia. Nas provas bioqumicas podem estar aumentados:
nitrognio sangneo proveniente da uria (BUN), alanina aminotransferase srica
(ALT), desidrogenase ltica srica (LDH), aspartato aminotransferase srica (AST),
fosfatase alcalina srica (FA) e bilirrubina srica. Estes se constituem nos principais
exames de monitoramento da evoluo do quadro clnico e, conseqentemente, do
prognstico de animais com leptospirose. A urinlise revela piria, proteinria, e/ou
bilirrubinria, densidade baixa e glicosria, acompanhadas de elevao de cilindros
granulosos, leuccitos e eritrcitos no sedimento urinrio (NAVARRO et al., 1981).
No pos-mortem verificam-se hepatomegalia, degenerao e fibrose heptica,
congesto pulmonar, petquias e sufuses pleurais, lceras na lngua, edema,
congesto e necrose renal, hemorragias e aderncia de cpsula renal, congesto,
edema e hemorragias gastrintestinais. Os rins esto aumentados em animais que
morrem durante a fase aguda. A necropsia de grande valia para o diagnstico. O
sorovar icterohaemorrhagiae pode provocar pronunciada ictercia de serosas e
conjuntivas. O diagnstico histopatolgico realizado principalmente com base em
fragmentos renais ou hepticos, corados por tcnicas de impregnao pela prata
(coloraes de Gomori, Warthin-Starry ou Levaditti). Rins e fgado constituem-se nos
rgos de eleio para que o agente seja isolado (GREENE, 1998; RIBEIRO et al.,
2003).

23

A histopatologia melhor visualizada em rgos como rins, fgado, corao


e pulmes, porm outros rgos podem ser afetados de acordo com severidade da
infeco (LEVETT, 2001).

2.7

DIAGNSTICO DIFERENCIAL

Em ces, o diagnstico diferencial inclui (GREENE, 1998):


Erliquiose e Riquetsiose
Anemia Hemoltica Auto-Imune
Hepatite Canina (Doena de Rubarth)
Brucelose
Cinomose
Herpes Vrus
Piroplasmose

2.8

VACINAS

O controle ambiental do agente da leptospirose mostra-se extremamente


dificultado pelas caractersticas especficas desta bactria sendo capaz de
sobreviver por muito tempo nos solos midos, esgotos, banhados e reservatrios de
gua (NASCIMENTO et al., 2004).
Em razo de ser uma enfermidade que abrange uma ampla variedade de
hospedeiros, sua transmissibilidade e as conseqncias que pode gerar, medidas
como: vigilncia, higiene e, especialmente, a imunoprofilaxia atravs da vacinao,
so as armas mais eficazes utilizadas nos procedimentos de controle da leptospirose
(MURRAY et al., 1998). Considerando atualmente em nossa sociedade, a estreita
relao do homem com o co e, a fim de prevenir danos causados por esta doena
zoontica, a imunizao ainda a forma mais contundente de se evitar a infeco
humana frente facilidade de contato direto ou indireto com o animal infectado
(THIERMANN, 1983; LEVETT, 2001).

24

A vacinao humana contra leptospirose no confere imunidade permanente


aos imunizados, no sendo ainda praticada ou disponvel no Brasil. Em alguns
pases utilizada em pessoas sob exposio ocupacional, em reas de alto risco. A
vacinao canina disponvel evita a doena clnica mas no impede a infeco nem
a transmisso para seres humanos, principalmente atravs da urina (CIVES, 2005).
Segundo HARTMAN et al. (1984), os primeiros experimentos vacinais com
ces resultando em sucesso, deram-se em 1926 por Dalling e Okell com cepas
inativadas de icterohaemorrhagiae, seguidos por Ottosen, em 1946, com o sorotipo
canicola.
De uma maneira geral, a alta capacidade de proteo e antigenicidade
conferida pelas vacinas atenuadas tornaram-nas preferidas quando comparadas
com vacinas inativadas, consideradas agentes imunognicos pobres. Porm, a
inocuidade e a ausncia de riscos de reverso no seu uso mantm as vacinas
mortas como uma opo segura e preferida em muitos casos, sendo esta a razo
de sua utilizao na leptospirose animal (TIZARD, 1998).
No entanto, a exposio de ces vacinados com leptospiras vivas resulta em
rpida elevao de ttulos de anticorpos ps-vacinais, que atingem os seus picos
com duas semanas aps a primeira dose imunoprofiltica, dando boa proteo
contra o desenvolvimento da doena, apesar dos baixos ttulos e da curta durao
da resposta imune humoral (KRAMER, 1978; GREENE, 1998).
Diante disto, vacinas com cepas de leptospiras vivas e atenuadas, apesar de
serem capazes de induzir a ttulos de anticorpos mais elevados do que os induzidos
pelas bacterinas quimicamente inativadas, ainda no conseguiram aceitao dos
laboratrios farmacuticos devido aos riscos inerentes ao seu uso (RUSSELL;
RUSSELL, 1994).
De acordo com APPEL (1999), embora a maioria das vacinas comerciais
confira segurana e eficcia, existem as excees onde a doena induzida pela
prpria vacina ou no traz a proteo adequada para o animal.
Atualmente, a preveno da leptospirose em ces se d atravs de vacinas
provenientes de bacterinas quimicamente inativadas contendo vrios sorotipos e seu
uso amplamente disseminado (HARTMAN et al., 1984).
Vacinas contra leptospirose so inativadas em grande parte, por formalina
produzidas a partir de leptospiras patognicas, contendo um ou mais sorotipos, que

25

apresentam a desvantagem de induzirem respostas sorolgicas baixas e por apenas


um curto perodo de tempo (BLOOD; RADOSTITS, 2002; NASCIMENTO et al.,
2004).
BEY e JOHNSON (1982), estudando a imunogenicidade humoral em
resposta a vacinas produzidas somente com a membrana externa (ME) da clula
bacteriana, cilindros protoplasmticos (CP) ou clulas completas (C) de Leptospira
interrogans, verificaram que as primeiras (ME) produziram melhor resposta humoral
sorovar-especfica.
Vacinas contra leptospirose com adjuvante completo de Freund induzem a
uma maior resposta humoral, no significando necessariamente maior proteo,
alm de ser um complemento que apresenta caractersticas carcinognicas
(TIZARD, 1998; BLOOD; RADOSTITS, 2002;).
O crescimento bacteriano de leptospiras em meios de cultura sintticos, sem
a utilizao de soros de animais como forma de enriquecimento nutritivo, tem levado
produo de vacinas sem os riscos usuais, como a ocorrncia de reaes de
hipersensibilidade soro-mediadas que podem levar a um quadro de choque
anafiltico (BEY; JOHNSON, 1982; BROUGTON; SCARNELL, 1985).
Na profilaxia das doenas infecciosas caninas, de uma maneira geral, temse levado ao uso de vacinas mistas polivalentes, cujo emprego ganhou notoriedade
graas a considervel economia de tempo e esforo despendida por parte do
veterinrio aplicador e do cliente. No entanto, a sua utilizao, que na grande
maioria abrange antgenos virais atenuados e bactrias mortas, relativamente
complexa, onde muitas de suas vantagens podem ser perdidas no que tange a
imunidade conferida, na qual os ttulos sorolgicos ps-vacinais no so
obrigatoriamente homogneos e igualmente protetores contra todas as doenas a
que se prope o imungeno (TIZARD, 1998).
Com relao s vacinas empregadas no controle da leptospirose animal, a
imunidade conferida a um sorovar extremamente restrita aos sorovares homlogos
ou muito prximos, portanto so sorovares-especficos, no permitindo proteo
cruzada, perdendo sua eficcia em relao a outros sorovares (FAINE et al., 1999;
LEVETT, 2001). Da, a necessidade de vacinas polivalentes para a leptospirose.
Vacinas comerciais para ces incluem geralmente os sorovares canicola e
icterohaemorrhagiae (GREENE, 1998). Onde o sorovar icterohaemorrhagiae,

26

segundo BROUGTON e SCARNELL (1985), apresenta maior antigenicidade.


Atualmente, os laboratrios que a produzem j trabalham com a adio dos
sorovares grippotyphosa e pomona.
A utilizao de imungenos para esta enfermidade visa apenas o seu
controle. Segundo THIERMANN (1983), nenhum pas erradicou a enfermidade. A
eliminao completa do patgeno atravs de vacinas muito pouco provvel, o que
se deve no somente ao estado de portador renal, mas tambm pelas prticas
descontinuadas dos esquemas de vacinao, alm do envolvimento de animais de
vida livre que contribuem na transmisso.
Em muitos casos o sorovar enzotico predominante em um pas, no
conhecido e a ausncia do sorovar problema torna a vacinao uma medida ineficaz
j que, os anticorpos especficos para cada sorovar no oferecem a proteo
adequada e ainda confundem os exames sorolgicos (THIERMANN, 1984).
No Brasil, o sequenciamento dos genomas dos sorovares iniciado pelo
copenhageni realizado pelo Instituto Osvaldo Cruz (RJ), abre a possibilidade de
utilizao de 23 protenas na produo de uma nova vacina para leptospirose. Hoje,
o sorovar copenhageni o principal responsvel pela prevalncia da leptospirose no
Brasil (2005 in: FAPESP).
BLOOD e RADOSTITS (2002) apresentam como uma desvantagem terica
da vacinao o fato desta proteger contra uma invaso sistmica, mas no contra a
colonizao renal, permitindo a ocorrncia de uma leptospirria transitria, fenmeno
este que no invalida a vacinao. BOLIN (1991) afirma que a vacinao em
bovinos, depois de ocorrida a infeco, no reduz a colonizao renal dos
infectados. Em contrapartida, especificamente em relao vacinao canina, nos
trabalhos de HUHN et al. (1975) e SCHREIBER et al. (2005) a sua utilizao
conferiu boa proteo contra a leptospiremia, leptospirria e infeco renal.
MARSHALL e KERR (1974) verificaram ausncia de leptospiremias e de
portadores renais em ces previamente vacinados e posteriormente desafiados com
inculos contendo altas concentraes de icterohaemorrhagiae. No entanto, os
autores admitem que os resultados obtidos neste aspecto, podem ser diferentes
devido a muitas variveis como no caso de uma infeco prvia na qual j se
estabeleceu o status de portador renal tendo como conseqncia a manuteno
permanente da colonizao renal e do estado de portador.

27

Nos trabalhos de HUHN et al. (1975), BEY e JOHNSON (1982),


BROUGTON e SCARNELL (1985) e SCHREIBER et al. (2005) nenhum dos ces
inoculados ps-imunizao, indiferentemente do tipo de vacina ou dosagem,
apresentaram sinais clnicos de leptospirose, confirmando a boa proteo vacinal.
Assim, proteger contra a infeco renal um importante critrio de qualidade
imunognica a ser alcanado para uma vacina contra a leptospirose ser considerada
eficiente (BEY e JOHNSON, 1982).
O esquema de vacinaes caninas, de um modo geral, um tema polmico,
que causa profundas divergncias (APPEL, 1999). Considerando apenas as vacinas
inativadas, o intervalo entre as doses de reforo exige reforos freqentes. Por outro
lado, vacinas vivas ao produzirem imunidade mais duradoura podem requerer
reforos apenas anuais. Clnicos veterinrios recomendam a revacinao anual
contra as diversas doenas. Outros recomendam a dose reforo a cada trs anos,
quando se tratando de vrus. Os fatores que causam tal discusso vo desde a
primeira imunizao, em detrimento aos nveis de anticorpos maternos, vacinas
vivas atenuadas ou vacinas inativadas, at o uso de vacinas polivalentes ou
monovalentes (AVMA, 1989; PHILLIPS et al. 1989; TIZARD, 1998; APPEL,1999).
RUSSELL e RUSSELL (1994) sugerem um calendrio de imunizao onde a
vacina contra leptospirose deve ser realizada a cada seis meses. Este procedimento
no usado na prtica, visto que, as vacinas comerciais polivalentes associadas
com vrus preconizam a revacinao anual. LEWIS et al. (1988) recomendam trs a
quatro doses com intervalo de duas a trs semanas, com proteo assegurada por
seis a oito meses. FORD (1992), recomenda uma revacinao aps duas a trs
semanas em animais adultos vacinados pela primeira vez.
Com os 23 sorogrupos sorologicamente classificados para L. interrogans e
divididos em mais de 250 sorovares ainda h muito que ser pesquisado entre as
caractersticas moleculares desta espcie, pois pouco se sabe a respeito dos seus
antgenos protetores (GITTON et al., 1992).
Para RIBEIRO et al. (2003), o levantamento da ocorrncia de diferentes
sorovares como pomona, hardjo, grippotyphosa e bratislava induz a relevncia da
pesquisa continuada no desenvolvimento de novas vacinas contra leptospirose
canina e a necessidade de incluso de novos sorovares, visando a elaborao de
vacinas mais eficazes e de respostas mais prolongadas.

28

3.1

MATERIAL E MTODOS

ANIMAIS DO EXPERIMENTO

experimento

contou

com

animais

provenientes

do

Laboratrio

Experimental da BASF-UFPR, Curitiba-Pr, constitudo de 16 ces da raa Beagle


sendo 06 machos e 10 fmeas, todos com idades entre dois e trs anos,
alimentados com a mesma rao comercial balanceada para manuteno de ces
adultos, oferecida duas vezes ao dia e gua ad libitum, em regime semi-aberto de
confinamento.

3.2

IMUNGENO UTILIZADO

Foi utilizado como imungeno bacterina produzida pelo Laboratrio Fort


Dodge

(Duramune

Max5-CvK/4L)

contendo

os

seguintes

sorovares:

L.

icterohaemorrhagiae, L. canicola, L. pomona e L. grippotyphosa.


Esta vacina comercial liofilizada polivalente, constituda de cepas virais
atenuadas contra as seguintes doenas caninas: Cinomose, Hepatite Infecciosa
Canina, Adenovrus Canino Tipo 2, Parainfluenza, Parvovirose e Coronavirose.
As fraes Leptospira da vacina so preparadas a partir de componentes de
membrana externa, atravs da tecnologia usada para extrair os antgenos altamente
imunognicos das clulas desta bactria, designados de O.M.C. (Outer Membrane
Complex).

3.3

VACINAES

O protocolo utilizado consistiu na vacinao de todos os animais no dia


considerado zero, realizando-se um reforo vacinal (booster) 90 dias aps a primo-

29

vacinao, aplicando-se a dose de um mililitro, por via subcutnea, recomendada


pelo fabricante.

3.4

COLHEITA DE SANGUE E OBTENO DE SOROS

No dia considerado zero, foram colhidas amostras de sangue obtidas por


puno da veia ceflica utilizando-se seringas descartveis e agulhas calibre 25/7,
no volume de cinco mililitros, sendo alocados em tubos previamente esterilizados.
Uma vez obtido o cogulo, o soro foi centrifugado a 2.000 r.p.m. durante
quatro minutos, de modo a obter soros lmpidos. O mesmo procedimento foi
realizado aos 30, 60, 90, 120, 150, 180 e 210 dias ps-vacinais perfazendo um total
de sete colheitas ps-vacinais.

3.5

BASE FSICA LABORATORIAL

As amostras de soro foram processadas no Laboratrio Veterinria


Preventiva, em Curitiba-Pr.

3.6

TCNICA SOROLGICA EMPREGADA

As amostras de soro foram submetidas ao Teste de Soroaglutinao


Microscpica (SAM) preconizado por COLE et al. (1973), padronizado pelo Ministrio
da Sade (2001), utilizando-se antgenos vivos cedidos pelo Centro de Diagnstico
Marcos Enrietti-SEAB-PR, em Curitiba, onde as reaes aglutinantes foram testadas
frente a cinco sorovares: canicola, icterohaemorrhagiae, copenhageni, pomona e
grippotyphosa utilizando-se as diluies de 1/25, 1/50/, 1/100, 1/200 e 1/400.
Consideraram-se como soros reagentes aqueles que apresentaram qualquer reao
ao teste. Os ttulos obtidos foram anotados e comparados com objetivo de
elaborao de grficos das flutuaes observadas. Quanto a utilizao do sorovar

30

copenhageni, foi devido a literatura, no decorrer do trabalho, ter apresentado um


grande aumento da presena deste sorovar na regio de Curitiba.

31

RESULTADOS

As

tabelas

seguir

apresentam

os

resultados

dos

exames

de

Soroaglutinao Microscpica realizados nos 16 animais do estudo.


Os ttulos de anticorpos aglutinantes foram obtidos nas sete colheitas
distintas.

4.1

TTULOS PR-VACINAIS

Os valores descriminados na Tabela 1 apresentam os ttulos de anticorpos


pr-vacinais, considerados, ento, a partir desta primeira titulao, como dia 0
(zero). Somente as amostras 05, 08, 09, e 11 mostraram-se no reagentes para o
sorovar copenhageni. No se obteve reao aglutinante para os sorovares canicola,
grippotyphosa, icterohaemorrhagiae e pomona.

TABELA 1

TTULOS SOROLGICOS, PR-VACINAIS PARA L. interrogans,

SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e


grippotyphosa, DOS 16 CES, NO DIA CONSIDERADO 0 (zero)
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/25
1/25
1/25
1/25
1/50
1/50
1/25
1/100
1/25
1/25
1/25
1/25

32

FIGURA 1 - TTULOS

SOROLGICOS

PR-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni


Sorovar copenhageni Pr-vacinal

13%

0% 0%

6%

25%

56%
No reagente - 4 (1/25) - 9

(1/50) - 2

(1/100) - 1

(1/400) - 0

FIGURA 2 - TTULOS

(1/200) - 0

SOROLGICOS

PR-VACINAIS

interrogans SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, pomona E


grippotyphosa
Pr-vacinais para os sorovares
icterohaemorrhagiae, canicola, pomona e
grippothyphosa
0%

100%
No reagente - 16 (1/25) - 0

(1/50) - 0

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

33

4.2

TTULOS PS-VACINAIS AOS 30 DIAS

Aps 30 dias da administrao da vacina comercial os resultados psvacinais obtidos para os sorovares copenhageni, canicola, pomona e grippotyphosa
esto descritos na Tabela 2; Figuras 3, 4, 5 e 6.
No se observou ttulo aglutinante para o sorovar icterohaemorrhagiae
(Tabela 2; Figura 7).
As amostras sorolgicas pertencentes aos animais nmeros 01, 02, 03, 13 e
16, que no exame pr-vacinal apresentaram ttulos 1/25, frente ao sorovar
copenhageni, tiveram os mesmos aumentados para 1/400. Nas amostras 04 e 10
observou-se uma alterao na titulao ps-vacinal de 1/25 para 1/200. A amostra
nmero 06 evoluiu de 1/50 para 1/200 no ps-vacinal e a amostra nmero 07 de
1/50 para 1/400. As amostras 05 e 08, inicialmente no reagentes, evoluram, para
1/200, e as amostras 09 e 11, igualmente no reagentes, aumentaram para 1/400. A
amostra 12, com ttulo inicial de 1/100, passou para 1/200. A amostra 14 de 1/25
aumentou para 1/100 e a amostra 15 de 1/25 para no reagente.

TABELA 2 - TTULOS SOROLGICOS AOS 30 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS
Animais
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

L.icterohae
morrhagiae
-

L.canicola
1/100
1/50
1/50
1/50
1/25
1/50
1/100

L.copenhagen
i
1/400
1/400
1/400
1/200
1/200
1/200
1/400
1/200
1/400
1/200
1/400
1/200
1/400
1/100
1/400

L.pomona
1/25
1/25
1/25
1/25
1/25
-

L.grippoty
phosa
1/25
1/25
1/25
1/25
1/50
1/25
1/25
1/25
1/50

34

FIGURA 3 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni aos 30 DIAS


Sorovar copenhageni aos 30 dias
0% 0% 0%
7%

53%

40%

No reagente - 0 (1/25) - 0

(1/50) - 0

(1/100) - 1

(1/400) - 8

FIGURA 4 - TTULOS

(1/200) - 6

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR canicola AOS 30 DIAS


Sorovar canicola aos 30 dias
13%

0%

25%

0%

56%
6%

No reagente - 9 (1/25) - 1

(1/50) - 4

(1/100) - 2

(1/400) - 0

(1/200) - 0

35

FIGURA 5 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR grippotyphosa AOS 30 DIAS


Sorovar grippothyphosa aos 30 dias
0% 0%
0%

13%

43%

44%

No reagente -7 (1/25) - 7

FIGURA 6 - TTULOS

(1/50) - 2

SOROLGICOS

(1/100) - 0

(1/200) - 0

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR pomona AOS 30 DIAS


Sorovar pomona aos 30 dias

0%
31%

69%

No reagente - 11 (1/25) - 5

(1/50) - 0

(1/100) -0

(1/400) - 0

(1/200) -0

(1/400) - 0

PARA

Leptospira

36

FIGURA 7 - TTULOS SOROLGICOS PR E PS-VACINAIS PARA Leptospira


interrogans SOROVAR icterohaemorrhagiae DURANTE OS 210 DIAS
DE EXPERIMENTO
Sorovar icterohaemorrhagiae durante os 210 dias
de experimento
0%

100%
No reagente -16
(1/100) - 0

4.3

(1/25) - 0

(1/50) - 0

(1/200) - 0

(1/400) - 0

TTULOS PS-VACINAIS AOS 60 DIAS

Observou-se aos 60 dias uma queda dos ttulos sorolgicos, principalmente


naqueles obtidos para o sorovar copenhageni. Quatro amostras que apresentavam
ttulos de 1/400 baixaram para 1/200 (amostras 01, 03, 07 e 16); trs amostras com
mesmo ttulo de 1/400 baixaram para 1/100 (amostras 02, 09 e 11) e uma amostra
de mesmo ttulo (1/400) baixou para 1/50 (amostra 13). Cinco amostras com ttulos
de 1/200 baixaram para 1/100 (amostras 05, 06, 08, 10 e 12); uma amostra com
ttulo de 1/200 manteve o mesmo ttulo (amostra 04). Somente duas amostras no
reagiram: uma amostra j anteriormente no reagente (amostra 15) e outra que
apresentou anteriormente ttulo de 1/100 (amostra 14) (Tabela 3; Figura 8).

37

TABELA 3 TTULOS SOROLGICOS AOS 60 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans,

SOROVARES

copenhageni,

pomona

icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,

DOS

canicola,
16

CES

EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/25
1/50
1/25
1/50
1/25
1/50

1/200
1/100
1/200
1/200
1/100
1/100
1/200
1/100
1/100
1/100
1/100
1/100
1/50
1/200

1/25
-

FIGURA 8 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 60 DIAS


Sorovar copenhageni aos 60 dias
0%

0%

13%

31%

6%

50%
No reagente

(1/25)-0

(1/50) - 1

(1/100) - 8

(1/200) - 5

(1/400) - 0

PARA

Leptospira

38

FIGURA 9 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 60 DIAS


Sorovar canicola aos 60 dias
0%
19%

0%

0%

19%

62%

No reagente - 2 (1/25) - 0

(1/50) - 1

(1/100) - 8

(1/400) - 0

FIGURA 10 - TTULOS

(1/200) - 5

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR grippotyphosa AOS 60, 90, 120, 150, 180 E 210
DIAS
Sorovar grippotyphosa aos 60, 90, 120, 150, 180
e 210 dias
0%

100%
No reagente -16
(1/100) - 0

(1/25) - 0
(1/200) - 0

(1/50) - 0
(1/400) - 0

39

FIGURA 11 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 60 DIAS


Sorovar pomona aos 60 dias

6% 0%

94%
No reagente -15
(1/100) - 0

4.4

(1/25) - 1
(1/200) - 0

(1/50) - 0
(1/400) - 0

TTULOS PS-VACINAIS AOS 90 DIAS

Aos 90 dias ps-vacinais, foram observadas reaes aglutinantes somente


para o sorovar copenhageni na titulao de 1/25 nas amostras 01, 04, 06 e 07
(Tabela 4; Figura 12).
No foram observadas reaes frente aos demais antgenos utilizados
(Tabela 4; Figuras 13, 14, 15 e 16).

40

TABELA 4 TTULOS SOROLGICOS AOS 90 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/25
1/25
1/25
1/25
-

FIGURA 12 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 90 DIAS


Sorovar copenhageni aos 90 dias
0%
25%

0% 0%

0%

75%

No reagente - 12
(1/100) - 0

(1/25) - 4
(1/200) - 0

(1/50) - 0
(1/400) - 0

Leptospira

41

FIGURA 13 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 90 DIAS


Sorovar canicola aos 90 dias

0%

100%
No reagente - 2 (1/25) - 0

(1/50) - 1

(1/100) - 8

(1/400) - 0

FIGURA 14 - TTULOS

(1/200) - 5

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR pomona AOS 90 DIAS


Sorovar pomona aos 90 dias

0%

100%
No reagente -16
(1/100) - 0

(1/25) - 0

(1/50) - 0

(1/200) - 0

(1/400) - 0

42

4.5

TTULOS PS-VACINAIS AOS 120 DIAS

Aos 90 dias da vacinao, realizou-se uma revacinao (booster) com o


objetivo de verificar as alteraes nos ttulos aglutinantes proporcionadas pelo
reforo vacinal.
Das nicas quatro amostras que eram reagentes aos 90 dias para o sorovar
copenhageni, com ttulo de 1/25, trs delas (amostras 01, 04 e 07) mantiveram os
mesmos ttulos e apenas uma (amostra 06), no se apresentou reagente.
As demais amostras no reagentes aos 90 dias (amostras 02, 03, 05, 08, 09,
10, 11, 12, 13, 14, 15 e 16) aos 120 dias apresentaram reaes aglutinantes com
ttulos que variaram de 1/25 (amostras 10 e 12) e 1/50 (amostras 03, 08, 09 e 16).
As demais amostras (02, 05, 11, 13, 14 e 15) no apresentaram aglutinao.
Para o sorovar canicola houve titulao de 1/25 em duas amostras
(amostras 09 e 15) e titulao de 1/50 nas amostras 06 e 16. No houve reagentes
para as demais amostras (Tabela 5; Figuras 15, 16, 17, 18 e 19).
O sorovar pomona, apesar da baixa titulao, teve o maior nmero de
reagentes (94%), com ttulos variando de 1/25 (amostras 06, 07 e 13) e 1/50
(amostras 01, 02, 03, 04, 05, 08, 09, 10, 11, 12, 14 e 15) e a amostra 16 como no
reagente.
Frente aos sorovares icterohaemorrhagiae e grippotyphosa no foram
observadas reaes sorolgicas aglutinantes (Figuras 7 e 10).

43

TABELA 5 TTULOS SOROLGICOS AOS 120 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans,

SOROVARES

copenhageni,

pomona

icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,

DOS

cani-cola,
16

CES

EXPERIMENTAIS
Animais
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

L.icterohae
morrhagiae
-

FIGURA 15 - TTULOS

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

1/50
1/25
1/25
1/50

1/25
1/50
1/25
1/25
1/50
1/50
1/25
1/25
1/50

1/50
1/50
1/50
1/50
1/50
1/25
1/25
1/50
1/50
1/50
1/50
1/50
1/25
1/50
1/50
-

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 120 DIAS


Sorovar copenhageni aos 120 dias
0%
25%

0%

0%
44%

31%
No reagente - 7 (1/25) - 5

(1/50) - 4

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

L.grippoty
phosa
-

Leptospira

44

FIGURA 16 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 120 DIAS


Sorovar canicola aos 120 dias
0% 0%
0%

13%
13%

74%

No reagente - 12 (1/25) - 2

(1/50) - 2

(1/100) - 0

(1/400) - 0

FIGURA 17 - TTULOS

(1/200) - 0

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR pomona AOS 120 DIAS


Sorovar pomona aos 120 dias

0% 6%
19%

75%

No reagente - 1 (1/25) - 3

(1/50) - 12

(1/100) - 2

(1/400) - 0

(1/200) - 0

45

4.6

TTULOS PS-VACINAIS AOS 150 DIAS

Aos 150 dias os ttulos sorolgicos para o sorovar copenhageni aumentaram


para 1/100 (amostras 08, 09, 10 e 16) e 1/200 na amostra 03. As amostras 02, 04,
05, 06, 07, 11, 14 e 15 no reagiram. As amostras 01 e 12 e a amostra 13
mantiveram-se com os ttulos 1/50 e 1/25 respectivamente (Tabela 6; Figura 18)
Para o sorovar canicola observou-se apenas uma amostra reagente (06)
(1/25) (Figura 19).
Para o sorovar pomona os ttulos se mantiveram em 1/50 em quatro
amostras (amostras 02, 03, 09 e 15), 1/25 em cinco amostras (amostras 01, 08, 10,
13 e 16) e no reagentes em sete amostras (amostras 04, 05, 06, 07, 11, 12 e 14).
(Figura 20)
Frente aos sorovares icterohaemorrhagiae e grippotyphosa no se obteve
reao aglutinante (Figuras 7 e 10).

TABELA 6 TTULOS SOROLGICOS AOS 150 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans,

SOROVARES

copenhageni,

pomona

icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,

DOS

canicola,
16

CES

EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/25
-

1/50
1/200
1/100
1/100
1/100
1/50
1/25
1/100

1/25
1/50
1/50
1/25
1/50
1/25
1/25
1/50
1/25

46

FIGURA 18 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 150 DIAS


Sorovar copenhageni aos 150 dias

6% 0%
25%
50%
13%

6%

No reagente - 8 (1/25) - 1

(1/50) - 2

(1/100) - 4

(1/400) - 0

FIGURA 19 - TTULOS

(1/200) - 1

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR canicola AOS 150 DIAS

Sorovar canicola aos 150 dias


6% 0%

94%
No reagente - 15 (1/25) - 1

(1/50) - 0

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

PARA

Leptospira

47

FIGURA 20 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR pomona AOS 150 DIAS


Sorovar pomona aos 150 dias
0%

0%

0%

25%

44%

31%

4.7

No reagente - 7 (1/25) - 5

(1/50) - 4

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

TTULOS PS-VACINAIS AOS 180 DIAS

Frente ao sorovar copenhageni, aos 180 dias, as amostras 03, 04, 05, 06,
08, 09, 10, 14, 15 e 16 foram no reagentes. As amostras 12 e a 13 apresentaram
ttulos de 1/25. A amostra 07 apresentou ttulo de 1/50. As amostras 01 e 11
apresentaram titulao de 1/100 e a amostra 02, ttulo de 1/200 (Figura 21).
Aos 180 dias no se obteve alterao de ttulo para o sorovar canicola nas
amostras 01, 02, 04, 07, 08, 11, 12, 14 e 15. As amostras 06, 09 e 10 apresentaram
titulao de 1/25 e as amostras 03, 05, 13 e 16 a titulao de 1/50 (Tabela 7; Figura
22).
Observou-se reao aglutinante para o sorovar pomona com os seguintes
resultados: no-reagentes (amostras: 04, 05, 06, 08, 10, 13 e 14), 1/25 (amostras:
01, 07, 11, 12, 15 e 16) e 1/50 (amostras: 02,03 e 09) (Figura 23).
Frente aos sorovares icterohaemorrhagiae e grippotyphosa no se obtiveram
amostras reagentes (Figuras 7 e 10).

48

TABELA 7 TTULOS SOROLGICOS AOS 180 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans,

SOROVARES

copenhageni,

pomona

icterohaemorrhagiae,
grippotyphosa,

DOS

canicola,
16

CES

EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/50
1/50
1/25
1/25
1/25
1/50
1/50

1/100
1/200
1/50
1/100
1/25
1/25
-

1/25
1/50
1/50
1/25
1/50
1/25
1/25
1/25
1/25

FIGURA 21 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 180 DIAS


Sorovar copenhageni aos 180 dias

13%

6% 0%

6%

13%

62%

No reagente - 10 (1/25) - 2

(1/50) - 1

(1/100) - 2

(1/400) - 0

(1/200) - 1

Leptospira

49

FIGURA 22 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR canicola AOS 180 DIAS


Sorovar canicola aos 180 dias
0% 0%
0%

25%

56%
19%

No reagente - 9 (1/25) - 3

(1/50) - 4

(1/100) - 0

(1/400) - 0

FIGURA 23 - TTULOS

(1/200) - 0

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR pomona AOS 180 DIAS


Sorovar pomona aos 180 dias
0%
19%

0%

0%
43%

38%

No reagente - 7 (1/25) - 6

(1/50) - 3

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

50

4.8

TTULOS PS-VACINAIS AOS 210 DIAS

Frente ao sorovar copenhageni a amostra 13 apresentou titulao de 1/25.


Apresentaram titulao de 1/50 as amostras 02, 03, 12, 14 e 16. As amostras 01, 07,
09, 10 e 11 apresentaram titulao de 1/100. As amostras 04, 05, 06, 08 e 15 foram
no-reagentes (Figura 24).
Frente ao sorovar canicola somente as amostras 05, 06 e 13 reagiram com
ttulos aglutinantes de 1/25. As demais amostras foram no-reagentes (Tabela 8;
Figura 25).
Aos 210 dias no foram observadas reaes sorolgicas detectveis para os
sorovares restantes (Figuras 7, 10 e 26).

TABELA 8 TTULOS SOROLGICOS AOS 210 DIAS PS-VACINAIS PARA L.


interrogans, SOROVARES icterohaemorrhagiae, canicola, copenhageni, pomona e grippotyphosa, DOS 16 CES EXPERIMENTAIS
L.icterohae
morrhagiae

L.canicola

L.copenhageni

L.pomona

Animais

L.grippoty
phosa

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16

1/25
1/25
1/25
1/25

1/100
1/50
1/50
1/100
1/100
1/100
1/100
1/50
1/25
1/50
1/50

51

FIGURA 24 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

PARA

Leptospira

interrogans SOROVAR copenhageni AOS 210 DIAS


Sorovar copenhageni aos 210 dias
0%
31%

0%
32%

6%
31%
No reagente - 5 (1/25) - 1

(1/50) - 5

(1/100) - 5

(1/400) - 0

FIGURA 25 - TTULOS

(1/200) - 0

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR canicola AOS 210 DIAS


Sorovar canicola aos 210 dias

25%

0%

75%

No reagente -12 (1/25) - 4

(1/50) - 0

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

PARA

Leptospira

52

FIGURA 26 - TTULOS

SOROLGICOS

PS-VACINAIS

interrogans SOROVAR pomona AOS 210 DIAS


Sorovar pomona aos 210 dias

0%

100%
No reagente -16 (1/25) - 0

(1/50) - 0

(1/100) - 0

(1/400) - 0

(1/200) - 0

PARA

Leptospira

53

FIGURA 27 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 01
Ttulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni - (Animal 1)
400

400

350
300
250
200

200

150
100

100
0

50

100
0 25 0
100
0
0
0
50
0
25 0 25 0
0
0
0
0
dia 0
0
60 dias
120 dias
180 dias
* - Reforo ps-vacinal
25 0

copenhageni
canicola
icterohaemorrhagiae

FIGURA 28 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 03
Titulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
icterohaemorrhagiae , canicola e copenhageni - (Animal 3)
400

400

350
300
250
200

200
200

150
100
50

0
25 0

0
dia 0

0
0

0
0

050

0
30
dias

60
90
120
dias dias *
dias

* - Reforo ps-vacinal

0
0

50
0

0
0
0

150
dias

180
dias

50 0
0

copenhageni
210
dias

canicola
icterohaemorrhagiae

54

FIGURA 29 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 05
Ttulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
(Animal 5)

icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni 400


350
300
250
200

200

150
100
50

50

100
50
0
0

dia 0

0
30
dias

60
90
120
dias dias *
dias

50

0
0
150
dias

250

180
dias

210
dias

copenhageni
canicola

* - Reforo ps-vacinal

icterohemorrhagiae

FIGURA 30 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 07
Titulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni - (Animal 7)
400

400

350
300
250
200

200

150
100
50

50

0
0

0
dia 0

30
dias

0
0

0
60
dias

* - Reforo ps-vacinal

100

0
0
0
25 0 25 0
90
dias *

0
0

150
dias

0
120
dias

50

180
dias

0
210
dias

copenhageni
canicola
icterohaemorrhagiae

55

FIGURA 31 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 09
Titulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni - (Animal 9)

400

400

350
300
250
200
150
100

100
0

50
0

0
0

100

0
0

30
dias

60
dias

25 0

dia 0

100

050 25 0

0
0

90
120
dias * dias

150
dias

copenhageni

180
dias

* - Reforo ps-vacinal

210
dias

canicola
icterohaemorrhagiae

FIGURA 32 - GRFICO COMPARATIVO ENTRE OS TTULOS AGLUTINANTES


DOS TRS PRINCIPAIS SOROVARES DURANTE OS 210 DIAS DE
EXPERIMENTO ANIMAL 11
Titulos aglutinantes pr e ps-vacinais aos sorovares
icterohaemorrhagiae, canicola e copenhageni - (Animal 11)
400

400

350
300
250
200
150
100

100
0

50
0

0
0
dia 0

0
0

60
dias

* - Reforo ps-vacinal

0
0

30
dias

100

90
dias *

120
dias

150
dias

0
180
dias

100
0

0
0
copanhageni
210
dias

canicola
icterohaemorrhagiae

56

DISCUSSO

Conforme pde ser observado na Tabela 1, das 16 amostras colhidas no


presente estudo, 12 delas (75%) apresentaram reaes sorolgicas pr-vacinais
com ttulos que variaram de 1/25 (57%), 1/50 (12%) e 1/100 (6%), frente ao sorovar
copenhageni, tendo sido o nico sorovar para o qual os soros mostraram reao de
microaglutinao. Dados referentes aos protocolos vacinais a que foram submetidos
estes animais, mostraram que, a ltima vacinao contra a leptospirose, havia
ocorrido 12 meses antes da colheita destas amostras. A vacina utilizada nesta
ocasio no continha o sorovar em questo. A indagao sobre este resultado
levanta a seguinte hiptese: estes animais sofreram infeco sub-clnica prvia pelo
sorovar identificado, j que, no h relato dos mesmos terem sofrido qualquer tipo
de enfermidade infecciosa.
A presena do sorovar copenhageni na regio de Curitiba, j havia sido
relatada por MASUDA et al. (2003), cujo inqurito sorolgico retrospectivo
abrangendo os anos de 2001 a 2003, demonstrou a prevalncia do mesmo sobre os
sorovares, at ento mais prevalentes, como o icterohaemorrhagiae e o canicola.
Estes pesquisadores concluram que, apesar das vacinas disponveis no momento
apresentarem vrios sorovares da Leptospira interrogans em sua formulao, ainda
no incluem nelas este sorovar identificado como de alta incidncia, o copenhageni.
Concluram ainda que, essa alterao na dinmica dos sorovares mais prevalentes,
pode ser reflexo da ao selecionadora das vacinas nos ces, aliada ao grande
crescimento populacional, acompanhada pela proliferao da fauna murina
sinantrpica. Esta hiptese se fragiliza quando se sabe que, o mesmo sorovar
apresenta, igualmente, alta prevalncia entre as pessoas da mesma regio de
acordo com os dados da Secretaria da Sade (SESA, 2002), no tendo,
obrigatoriamente, a participao do co na cadeia epidemiolgica. Caso as pessoas
se infectassem somente atravs dos ces, esta possibilidade se reforaria, porm,
sabe-se que a grande maioria das infeces humanas em razo das
contaminaes do homem atravs de excrees murinas no meio ambiente (ACHA;
SZYFRES, 2001).
Este mesmo sorovar foi o mais freqentemente implicado no estado de So
Paulo, onde, das 18 amostras de Leptospira interrogans isoladas de seres humanos,

57

14 (78%) foram classificadas como copenhageni, 2 (12%) como canicola, 1 (5%)


como pomona e 1 (5%) como castellonis (SAKATA et al., 1992). Dados semelhantes
foram verificados por FAVERO et al. (2002) confirmando aumento do sorovar
copenhageni em pesquisa realizada em ces nos estados de So Paulo, Piau,
Paran e Rio Grande do Sul, durante os anos de 1984 e 1997, onde encontraram
24% das amostras sorolgicas reagentes frente ao sorovar copenhageni enquanto
que, 10,9% ao sorovar icterohaemorrhagiae .
Portanto, no resta dvida, de que o sorovar copenhageni est presente
infectando tanto populaes humanas quanto caninas. Tambm fica evidente a
perda do status do sorovar icterohaemorrhagiae a partir do ano de 2001, como o
mais comumente encontrado causando infeces na regio em estudo (MASUDA et
al., 2003). A preocupao da incluso deste sorovar nas vacinas caninas parece ser
uma necessidade premente, tendo em vista as especificidades antignicas
peculiares que cada sorovar apresenta. O que causou, inicialmente, maior
perplexidade no presente estudo, foi constatar que, um ms aps a primeira
vacinao, os ttulos aglutinantes para o sorovar copenhageni apresentaram uma
vertiginosa alta, alternando-se em patamares de 1/25 e 1/50 para 1/200 e 1/400.
Embora os ttulos iniciais, anteriores a vacinao, tenham sido considerados baixos,
no sendo interpretados como infeco, a constatao ps-vacinal desta sbita
alterao para ttulos considerados como, indicativos de infeco prvia pelo sorovar
copenhageni, refora a idia de que este sorovar , atualmente, aquele que se
encontra mais presentemente causando infeces clnicas ou sub-clnicas na regio.
O que mais chama a ateno na Tabela 2 a total ausncia de reaes aglutinantes
frente ao sorovar icterohaemorrhagiae, mesmo este estando includo como antgeno
vacinal, no acontecendo o mesmo frente aos sorovares canicola, pomona e
grippotyphosa, tambm includos na vacina, cujas reaes de aglutinao variaram
de 1/25 a 1/100.
Segundo ANDR-FONTAINE e GANIRE, (19_?) o sorovar copenhageni
pertence ao sorogrupo Icterohaemorrhagiae e devido a isto, compartilham antgenos
somticos comuns. ARIMITSU et al. (1980) verificaram que falta uma parte

de

componentes antignicos presentes em copenhageni, ausentes no sorovar


icterohaemorrhagiae, mas constataram que o anti-soro contra icterohaemorrhagiae
demonstrou atividade leptospiricida potente contra a amostra de copenhageni.

58

De acordo com o Ministrio da Sade (FUNASA, 2001) o fenmeno da coaglutinao entre sorovares de ocorrncia comum dentro de um mesmo
sorogrupo. Tcnicas avanadas demonstraram que as espiroquetas s podem ser
verdadeiramente classificadas taxonomicamente atravs de tcnicas genticas
acuradas como a de Hibridizao de DNA, de modo que, diagnsticos e
classificaes taxonmicas baseados apenas em mtodos sorolgicos e antignicos,
como a que utiliza a Microaglutinao Microscpica, podem no ser confiveis o
suficiente

para

distinguir

icterohaemorrhagiae

sorovares

to

semelhantes

como

sorovares

e copenhageni (BAROCCHI et al., 2001; FUNASA, 2001).

BAROCCHI et al. (2001), utilizando a tcnica do PCR, identificaram uma seqncia


repetitiva de DNA no sorovar copenhageni isolada de casos humanos, porm o
sorovar icterohaemorrhagiae, amostra RGA e o sorovar copenhageni, amostra
Winjberg, apresentaram padres idnticos, concluindo no ser possvel distingui-los
atravs desta tcnica. Qual seria ento a explicao mais provvel para a sbita
alterao de ttulos verificada na Tabela 2?
Devido s similaridades antignicas entre os sorovares copenhageni e
icterohaemorrhagiae, o que foi observado no ps-vacinal, foi uma reativao da
resposta imune direcionada para o sorovar copenhageni e no para o sorovar
icterohaemorrhagiae, corroborando com ARIMITSU et al. (1980), de que,
determinados componentes antignicos presentes no sorovar copenhageni no so
encontrados no sorovar icterohaemorrhagiae, no entanto, os antgenos comuns
entre estes dois sorovares e presentes no antgeno vacinal composto pelo sorovar
icterohaemorrhagiae foram suficientes para a reativao do clone pr-existente
induzido pela infeco pr-vacinal provocada pelo sorovar copenhageni.
O contato prvio com o sorovar copenhageni, provavelmente de origem
infecciosa, demonstrado nos ttulos pr-vacinais observados no dia 0, promoveu a
formao de um clone de memria para protenas de parede reconhecidas como
protenas comuns. Tcnicas extremamente sensveis, como Western Blotting,
demonstraram que o sistema imune de ces vacinados com determinados
sorogrupos, respondem a infeces provocadas por outros sorovares similares ou
distintos, promovendo uma rpida e intensa resposta secundria do tipo booster ao
antgeno comum predominante de ambas as cepas, tendo o clone de memria
maior avidez s protenas antignicas da cepa que provocou infeco e no quelas

59

que compem a cepa vacinal inativada. Constataes semelhantes foram


observadas por GITTON et al., (1994), cujo experimento demonstrou que, em um
co imunizado contra um determinado sorogrupo, se for infectado naturalmente por
outro sorogrupo, poder desenvolver anticorpos contra o sorogrupo virulento que o
est infectando em detrimento a cepa vacinal. Segundo MAILLOUX (1982) e
LEVETT (2001) denomina-se este fenmeno de Reao Paradoxal e se deve a
composio antignica comum entre sorovares relacionados e tambm a uma
suposta reao cruzada entre os sorovares de um mesmo sorogrupo ou mesmo
entre sorogrupos distintos, que mesmo distantes compartilham antgenos comuns.
Segundo os autores citados, este fenmeno de reaes cruzadas na fase aguda
tambm se deve prpria tcnica de microaglutinao que se baseia nos complexos
imunes promovidos pela imunoglobulina IgM que se sabe, carece de especificidade.
Passada esta fase aguda, naturalmente ocorre o predomnio da imunoglobulina IgG
mais especfica, perodo em que o fenmeno paradoxal deixa de existir.
Perante o impasse verificado com relao s reaes de aglutinao
induzidas pelo antgeno vacinal de icterohaemorrhagiae, cuja resposta imunolgica
foi direcionada para o sorovar copenhageni, um experimento foi realizado,
inoculando-se dois coelhos adultos, da raa Nova Zelndia, com cepas
consideradas antgeno padro em reaes de microaglutinao. Um animal recebeu
por via endovenosa, na veia marginal da orelha, inculos contendo uma suspenso,
inativada pelo calor (56C /10 minutos), de copenhageni e o outro,

cepa de

icterohaemorrhagiae, segundo a tcnica descrita pelo Manual de Leptospirose do


Ministrio da Sade (FUNASA, 2001). Aps 21 dias da primeira de uma srie de
trs inoculaes, foram colhidos cinco mililitros, por puno cardaca, e verificados
os ttulos obtidos frente aos antgenos em questo. Tambm foi verificado se
ocorreria o fenmeno de co-aglutinao. O soro do animal inoculado com o antgeno
inativado de icterohaemorrhagiae apresentou ttulo de 1/1600 direcionado para os
dois antgenos (icterohaemorrhagiae e

copenhageni), enquanto que, o animal

inoculado com o antgeno de copenhageni apresentou ttulo aglutinante de 1/1600


para o antgeno de icterohaemorrhagiae e 1/6400 para o antgeno de copenhageni.
A diferena de ttulos encontrada no animal inoculado com o antgeno copenhageni
refora novamente os achados de ARIMITSU et al. (1980), de que apesar destes
sorovares compartilharem uma gama de antgenos comuns existem tambm aqueles

60

que s esto presentes no sorovar copenhageni . No entanto, os anticorpos comuns


e direcionados para Leptospira copenhageni apresentaram atividade leptospiricida
direcionada para ambos os sorovares com atividade maior para o antgeno indutor.
Com relao ao animal inoculado com o antgeno icterohaemorrhagiae, tambm foi
verificada atividade leptospiricida para ambos os antgenos em igual ttulo. Em vista
destes resultados, cai novamente por terra, a hiptese levantada por MASUDA et al
(2003) de que houve uma seleo vacinal induzida pelas vacinaes contendo
antgeno icterohaemorrhagiae, possibilitando assim, as infeces pelo sorovar
copenhageni. A sugesto de incluso do sorovar copenhageni na composio das
vacinas, vlida. Contudo, uma vez que este sorovar seja introduzido na
composio

vacinal

no

haveria

necessidade

de

incluir

sorovar

icterohaemorrhagiae, j que a gama de antgenos do sorovar copenhageni mais


ampla e incluiria os antgenos do sorovar icterohaemorrhagiae, porm o inverso no
verdadeiro. Segundo LEVETT (2001), a imunidade relativamente sorovarespecfica e fortemente restrita ao sorovar homlogo ou queles intimamente
relacionados. Parece ser esta a situao verificada no presente trabalho.
Confirmando estes achados de co-aglutinao entre sorovares de mesmo
sorogrupo, HERRMANN et al., (1991) verificaram que cada um dos 14 sorovares
pertencentes ao sorogrupo icterohaemorrhagiae possui sua prpria caracterstica
genmica, com exceo dos sorovares icterohaemorrhagiae e copenhageni que so
muito difceis de ser distinguidos por mtodos sorolgicos, devendo possuir relao
gentica extremamente prxima. No presente experimento, as reaes de microaglutinao pr-vacinais direcionadas para o sorovar copenhageni (Tabela 1)
sofreram um incremento em seus ttulos (Tabela 2) porque, como j foi dito,
provavelmente tenha ocorrido uma infeco clnica que passou desapercebida ou
mesmo uma infeco sub-clnica. Ao serem vacinados com uma cepa vacinal de um
sorovar de idntico sorogrupo, houve uma reativao do clone de clulas de
memria j presentes, e por isso, foi direcionado para o sorovar copenhageni, no
induzindo a formao para o clone semelhante, especificamente, para a cepa
vacinal. Parece claro que, o clone induzido por infeco natural, respondeu melhor
ao ser provocado pelo sorovar relacionado, mesmo este sendo vacinal. O mesmo
no pode se dizer das respostas vacinais obtidas por antgenos inativados, que
utilizam cepas mortas de Leptospira interrogans. Caso isto no fosse verdade,

61

haveria uma resposta ps-vacinal igualmente intensa para os antgenos contidos na


vacina. Na Tabela 2, os ttulos direcionados para o sorovar canicola, situaram-se
entre 1/25 e 1/100, sendo que, nove amostras (56%) mostraram-se anrgicas. Por
outro lado, no foram igualmente verificadas reaes aglutinantes direcionadas para
o sorovar icterohaemorrhagiae, permanecendo assim, at o trmino do experimento.
Com a revacinao ocorrida aos 90 dias, no foram mais observadas, aos
30 dias aps o booster, a abrupta elevao dos ttulos direcionados para o sorovar
copenhageni, permanecendo os ttulos aglutinantes situados entre 1/25 (31,25%) e
1/50 (25%) e (43,75%) permanecendo anrgicos (Tabela 4). Estes dados esto de
acordo com aqueles obtidos por LANGONI et al. (2002), que ao revacinarem 23 ces
no observaram alteraes nos ttulos j anteriormente verificados. Porm, 60 dias
aps a revacinao (Tabela 4), alguns soros apresentaram ttulos mais elevados que
os anteriormente citados, situando-se entre 1/25 (6%), 1/50 (13%), 1/100 (25%) e
1/200(6%); enquanto (50%) mostraram-se anrgicos. Esta aparente reativao, com
ttulos mais altos aos 60 dias ps-revacinao, com queda aos 90 dias e reativao
aos 120 dias (Tabela 5), pode ser em virtude do contato dos ces com o sorovar
copenhageni, endemicamente, presente em roedores que habitam as cercanias do
canil contaminando o ambiente e infectando os ces durante o experimento.
Com relao aos ttulos aglutinantes ps-vacinais obtidos com os demais
antgenos vacinais, todos se mostraram baixos. nfase deve ser dada para as
respostas ps-vacinais direcionadas para o segundo sorovar mais importante
afetando a espcie canina, o sorovar canicola, com ttulos variando entre 1/25 e 1/50
em sua maioria, sendo que, apenas duas amostras reagiram com ttulos de 1/100 e
somente aos 30 dias ps-vacinais. Em se tratando revacinao ou booster de
reforo, verificou-se uma resposta mais efetiva para o sorovar pomona aos 30 dias
ps-vacinais, com ttulos variando entre 1/25 (19%) a 1/50 (75%), com apenas uma
(6%) amostra anrgica (Tabela 4). Este sorovar, embora no tenha a importncia
dos anteriores considerados urbanos e endmicos destes centros, no meio rural
ele igualmente afeta uma grande gama de animais domsticos podendo inclusive
infectar o homem (ACHA; SZYFRES, 2001). A escassa literatura especializada
sobre reaes ps-vacinais com imungenos inativados de Leptospira interrogans
em nosso pas limita a discusso deste trabalho. Segundo DIESCH (1980) o ttulo
ps-vacinal considerado protetor para ces aquele igual ou superior a 1/100 em

62

caso de sofrerem acidentalmente infeces ambientais. Tambm no h consenso


sobre em que mdia situam-se os ttulos ps-vacinais aps imunizao com
inculo bacteriano inativado contendo X UFC (unidades formadoras de colnias)
contendo sorovares distintos (LANGONI et al. 2002). Igualmente so pobres as
informaes a respeito do perodo de permanncia, ou das flutuaes, para cima ou
para baixo, destes ttulos aglutinantes ps-vacinais (LANGONI et al. 2002). Tendo
em vista que os ttulos obtidos na presente pesquisa raramente ultrapassaram
quele preconizado por DIESCH (1980), este experimento serve como um alerta e
tenta mostrar que vacinao no significa proteo. A melhor maneira de se obter
uma imunizao mais efetiva contra esta doena em ces, seria desvincular os
antgenos inativados de Leptospira interrogans do pool de antgenos virais
atenuados, que compem normalmente as vacinas conhecidas e comercializadas
com denominaes de Sxtupla, ctupla e Dctupla, que seguramente,
conferem uma imunidade mais duradoura por conterem vrus atenuados que,
replicaro nos animais vacinados e conferiro uma resposta imune efetiva. Segundo
APPEL (1999), vacinas polivalentes contendo vrus atenuados no exigem
revacinaes

anuais

desnecessrias.

Este

contra

as

infeces

procedimento

sendo

desvinculatrio

na

maioria

baratearia

das

vezes

os

custos

relacionados com as vacinas anti-virais liofilizadas, geralmente mais caras.


Igualmente diminuiria os custos de produo com a bacterina especfica antileptospira contendo os sorovares mais prevalentes em uma dada regio. Poder-se-ia
comercializar vacinas urbanas contendo os sorovares mais incidentes nas cidades
e vacinas rurais contendo os sorovares mais prevalentes nessas reas. Teria como
desvantagem a necessidade de se efetuar revacinaes com perodos mais curtos,
do que as hoje prescritas. Esta prtica, uma vez adotada e aceita do ponto de vista
cientfico, independentemente dos ttulos ps-vacinais alcanados, promoveria uma
ativao freqente de clones especficos, que responderiam rapidamente aos
estmulos antignicos proporcionados por uma infeco natural ou mesmo por uma
revacinao. Esta proposta refora a idia de APPEL (1999) e RUSSELL e
RUSSELL, (1994) de que as vacinaes contra Leptospira deveriam ser realizadas
num perodo mais curto de modo a reativar de maneira mais efetiva o clone de
memria. E se contrape ao programa de vacinao recomendado pela AMERICAN
VETERINARY MEDICAL ASSOCIATION (AVMA,1989) o qual afirma que a vacina

63

contra leptospirose canina confere imunidade por um ano, devendo os animais ser
imunizados com vacinas inativadas, com a primeira dose entre 10 a 12 semanas de
idade, e a segunda, duas a trs semanas aps, com reforos anuais.
Parece evidente que, o procedimento proposto pela presente pesquisa trar
aos clnicos veterinrios e aos proprietrios um maior grau de segurana para os
seus animais e familiares, e de uma forma indireta, para a sociedade em geral.

64

CONCLUSES

1. O Sistema Imunolgico de ces previamente infectados pelo sorovar


copenhageni responde a vacinao pelo sorovar icterohaemorrhagiae
com um efeito do tipo booster.

2. Anticorpos pr-formados contra Leptospira copenhageni no permitiram


uma efetiva imunizao com o sorovar icterohaemorrhagiae intimamente
relacionado.

3. Os ttulos aglutinantes obtidos com a vacina comercial contra a


leptospirose, independentemente do sorovar, tornam-se indetectveis
pela tcnica de Microaglutinao Microscpica, a partir dos 90 dias psvacinais, principalmente considerando-se diluies de 1/100.

4. A avaliao da ativao clonal ps-vacinal deve ser realizada utilizandose titulaes mais baixas daquelas preconizadas para avaliao de
infeco.

5. Novos protocolos vacinais recomendando imunizaes mais freqentes


devero ser estabelecidos a fim de se obter uma proteo mais efetiva.

6. H necessidade de maior fiscalizao dos laboratrios produtores de


vacinas contra a leptospirose canina, por parte do Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento, bem como de determinao de
critrios padronizados capazes de avaliar a eficincia vacinal, dando
assim, segurana aos consumidores.

65

REFERNCIAS

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71

ANEXOS

ANEXO 1 - ESQUEMA MORFOLGICO DA Leptospira interrogans......................72


ANEXO 2 - ESQUEMA MORFOLGICO DA Leptospira interrogans......................72
ANEXO 3 - SOROGRUPO

ALGUNS

SOROVARES

DA

Leptospira

interrogans SENSU LATO.....................................................................73


ANEXO 4 - GENO ESPCIES DE Leptospira E SEUS SOROGRUPOS ................74
ANEXO 5 - SOROVARES PERTENCENTES A MAIS DE UMA ESPCIE .............75
ANEXO 6 - PRINCIPAIS DIFERENAS ENTRE OS GNEROS Leptospira,
Serpulina,Treponema E Borrelia ...........................................................76
ANEXO 7 - Leptospira interrogans, SEUS SOROVARES E HOSPEDEIROS.........77
ANEXO 8 - PRINCIPAIS HOSPEDEIROS DAS LEPTOSPIRAS PATOGNICAS.......................................................................................................78
ANEXO 9 - SINAIS CLNICOS OBSERVADOS EM ANIMAIS DOMSTICOS
COM LEPTOSPIROSE. ........................................................................79
ANEXO 10 - LEPTOSPIROSE NO BRASIL: CASOS CONFIRMADOS EM
HUMANOS, POR LOCAL DE TRANSMISSO: 1989 1996...............80
ANEXO 11 - PRINCIPAIS

SOROVARES

DO

GNERO

Leptospira

ENCONTRADOS EM CES EM DIFERENTES MUNICPIOS DO


BRASIL .................................................................................................81
ANEXO 12 - APRESENTAO DAS VACINAS COMERCIAIS NA INDSTRIA
BRASILEIRA

CONTENDO

AS

BACTERINAS

PARA

LEPTOSPIROSE...................................................................................82

72

ANEXO 1 - ESQUEMA MORFOLGICO DA Leptospira interrogans

FONTE: QUINN, 1994

ANEXO 2 - ESQUEMA MORFOLGICO DA Leptospira interrogans

FONTE: QUINN, 1994

73

ANEXO 3 - SOROGRUPO E ALGUNS SOROVARES DA Leptospira interrogans


sensu lato
SOROGRUPOS

SOROVARES

Icterohaemorrhagiae

icterohaemorrhagiae, copenhageni, lai, zimbabwe

Hebdomadis

hebdomadis, jules, kremastos

Autumnalis

autumnalis, fortbragg, bim, weerasinghe

Pyrogenes

pyrogenes

Bataviae

Bataviae

Grippotyphosa

grippotyphosa, canalzonae, ratnapura

Canicola

canicola

Australis

australis, bratislava, lora

Pomona

pomona

Javanica

javanica

Sejroe

sejroe, saxkoebing, hardjo

Panama

panama, mangus

Cynopteri

cynopteri

Djasiman

djasiman

Sarmin

sarmin

Mini

mini, georgia

Tarassovi

tarassovi

Ballum

ballum, aroborea

Celledoni

celledoni

Louisiana

louisiana, lanka

Ranarum

ranarum

Manhao

manhao

Shermani

shermani

Hurstbridge

hurstbridge

FONTE: LEVETT, 2001

74

ANEXO 4 - GENO ESPCIES DE Leptospira E SEUS SOROGRUPOS


ESPCIES

SOROGRUPOS

L. interrogans

Icterohaemorrhagiae, Canicola, Pomona, Australis, Autumnalis, Pyrogenes,


Grippotyphosa, Djasiman, Hebdomadis, Sejroe, Bataviae, Ranarum, Louisiana,
Mini, Sarmin

L. noguchii

Panama, Autumnalis, Pyrogenes, Louisiana, Bataviae, Tarassovi, Australis,


Shermani, Djasiman, Pomona

L. santarosai

Shermani, Hebdomadis, Tarassovi, Pyrogenes, Autumnalis, Bataviae, Mini,


Grippotyphosa, Sejroe, Pomona, Javanica, Sarmin, Cynopteri

L. meyeri

Ranarum, Semaranga, Sejroe, Mini, Javanica

L. wolbachiic

Codice

L. biflexa

Semaranga, Andamana

L. fainei

Hurstbridge

L. borgpetersenii

Javanica, Ballum, Hebdomadis, Sejroe, Tarassovi, Mini, Celledoni, Pyrogenes,


Bataviae, Australis, Autumnalis

L. kirschneri

Grippotyphosa,

Autumnalis,

Cynopteri,

Hebdomadis,

Australis,

Pomona,

Djasiman, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Bataviae


Celledoni, Icterohaemorrhagiae, Sarmin, Javanica, Mini, Tarassovi, Hebdomadis,

L. weilii

Pyrogenes, Manhao, Sejroe


L. inadai

Lyme, Shermani, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi, Manhao, Canicola, Panama,


Javanica

L. parva

L. alexanderi

Turneria
Manhao, Hebdomadis, Javanica, Mini

FONTE: LEVETT, 2001

75

ANEXO 5 - SOROVARES PERTENCENTES A MAIS DE UMA ESPCIE


SOROVARES

ESPCIES

Bataviae

L. interrogans, L. santarosai

Bulgarica

L. interrogans, L. kirschneri

Grippotyphosa

L. kirschneri, L. interrogans

Hardjo

L. borgpetersenii, L. interrogans, L.meyeri

Icterohaemorrhagiae

L. interrogans, L. inadai

Kremastos

L. interrogans, L. santarosai

Mwogolo

L. kirschneri, L. interrogans

Paidjan

L. kirschneri, L. interrogans

Pomona

L. interrogans, L. noguchii

Pyrogenes

L. interrogans, L. santarosai

Szwajizak

L. interrogans, L. santarosai

Valbuzzi

L. interrogans, L. kirschneri

FONTE: LEVETT, 2001

76

ANEXO 6 - PRINCIPAIS DIFERENAS

ENTRE

OS

GNEROS

Leptospira,

Serpulina/Treponema E Borrelia
Leptospira
Morfologia

Muitos espirais finos


e firmes

Serpulina/Treponema
6-14 espirais regulares

Borrelia
4-8

espirais

frouxos

Comprimento

6-20 m

5-20m

3-20m

Dimetro celular

0.1-0.2m

0.1-0.5m

0.2-0.5m

Flagelo periplasmtico

6-10

15-20

Discos de insero

3-5

Aa do peptidioglicano

c. diaminopimlico

ornitina

ornitina

Respirao

aerbio

microaerbio ou anaerbio microaerbio

Produo de catalase

presente

ausente

Fonte de energia
Transmisso por artrpodes

c. graxo de cadeia carboidrato


longa

aminocido

no

no

Ausente
e/ou

carboidrato
sim
febre recidivante,

Enfermidade causada

leptospirose

sfilis, pinta, borreliose

enfermidade
Lymne

FONTE: QUINN, 1994

de

77

ANEXO 7 - Leptospira interrogans, SEUS SOROVARES E HOSPEDEIROS

SOROGRUPO

SOROVAR

Australis

australis

bratislava

BOVINOS

SUNOS

CANINOS

EQUINOS

OVINOS

ROEDORES

SELVAGENS
+

Autumnalis

autumnalis

Ballum

ballum

Bataviae

bataviae

Canicola

canicola

Grippotyphosa grippotyphosa

Hebdomadis

hebdomadis
szwajizak

Ictero-

ictero-

haemorrhagia

haemorrhagiae

copenhageni

Pomona

pomona

Sejroe

balcanica

hardjo

saxkoebing

sejroe

Tarassovi

tarassovi

FONTE: QUINN, 1994

+
+

78

ANEXO 8 - PRINCIPAIS HOSPEDEIROS DAS LEPTOSPIRAS PATOGNICAS

L. interrogans / SOROVARES

PRINCIPAIS HOSPEDEIROS

HOSPEDEIROS ACIDENTAIS

autumnalis

animais silvestres

ballum

animais silvestres

bratislava

sunos/ eqinos/ bovinos

canicola

caninos

sunos/ bovinos/ roedores

grippotyphosa

animais silvestres

sunos/ bovinos

hardjo

bovinos

ovinos

icterohaemorrhagiae

roedores

sunos/ bovinos/ caninos

pomona

sunos/ bovinos

caninos / animais silvestres

FONTE: QUINN, 1994

79

ANEXO 9 - SINAIS CLNICOS OBSERVADOS EM ANIMAIS DOMSTICOS COM


LEPTOSPIROSE.
HOSPEDEIRO
Bovinos

SINAIS CLNICOS
Subclnica com ou sem leptospirria;
Sndrome da queda do leite com ou sem outros sintomas

(hardjo);

Abortos seguidos (pomona) ou espordicos (hardjo) e mortalidade


neonatal;
Infertilidade (hardjo);
Hemoglobinria, ictercia e febre em bezerros, e menos comumente em
adultos (pomona, grippotyphosa e icterohaemorragiae). Ocasionalmente
muitos animais mostram sinais de meningite.
Sunos

Subclnica, muitas vezes com leptospirria (especialmente com


pomona). Sunos so considerados hospedeiros de manuteno;
Febre e mastite focal no-supurativa e leptospirria;
Infertilidade,

abortos

natimortos

(canicola,

pomona

icterohaemorragiae);
Febre, anorexia, ictercia, hemoglobinria e alta mortalidade de jovens
animais ( icterohaemorragiae).
Ces

Subclnica com leptospirria (canicola);


Doena da hemorragia aguda: febre, vmito, prostrao e morte rpida
(usualmente icterohaemorragiae);
Tipo de ictercia aguda: intenso prurido, depresso, febre, hemorragias
na urina e fezes (canicola e icterohaemorragiae);
Tipo de uremia: uremia associada com extensa leso renal, estomatite
ulcerativa. Alta letalidade. Os sinais clnicos severos podem ocorrer entre 1-3
anos aps infeco inicial (canicola);
Alterao da atividade heptica, raramente crnica (grippotyphosa).

Eqinos

Uvete recorrente crnica, podendo causar cegueira;


Ocasionalmente causa aborto;
Raramente causa febre, anorexia, depresso e ictercia.

Ovelhas

Principalmente infeces subclnicas com leptospirria (hardjo);


Ocasionalmente ocorre casos agudos com depresso, dispnia,
hemoglobinria, anemia e alta mortalidade cordeiros.

FONTE: QUINN, 1994

80

ANEXO 10 - LEPTOSPIROSE

NO

BRASIL:

CASOS

CONFIRMADOS

HUMANOS, POR LOCAL DE TRANSMISSO: 1989 1996

Regio/Ano

1989

1990

1991

1992

1993

1994

1995

1996

Norte

314

399

477

422

376

634

841

684

Nordeste

1483

1034

856

606

467

1026

1467

987

Sudeste

622

727

1356

728

621

747

1202

3065

Sul

87

241

312

308

255

427

679

509

Centro-Oeste

16

32

10

60

71

36

Total

2508

2409

3017

2096

1729

2894

4260

5281

FONTE: Ministrio da Sade (FUNASA), 2001

EM

81

ANEXO 11 - PRINCIPAis SOROVARES DO GNERO Leptospira ENCONTRADOS


EM CES EM DIFERENTES MUNICPIOS DO BRASIL
AUTORES

LOCAL

et

N DE
AMOSTRAS
REAGENTES
(%)

136

8 (5.9)

1428

308 (21.6)

425

143 (34.8)

114

23 (20)

185

34 (18.4)

775

119 (15.4)

120

102 (85.0)

410

61 (15.0)

1000

179 (17.9)

et Belo Horizonte-MG

Santa Rosa
al.,1974

Yasuda
1980

N DE
AMOSTRAS
EXAMINADAS

al., So Paulo -SP

vila et al., 1998

Alves et al., 2000

Pelotas - RS

Patos - PB

Lilenbaum et al., Oriximina - PA


2000

Modolo et al.,2000 Botucatu - SP

Viegas et al., 2001 Salvador - BA

Mascolli
2002
Silva, 2003

et

de
al., Santana
Parnaba SP
Botucatu - SP

FONTE: RIBEIRO, 2003

PRINCIPAIS
SOROVARES

icterohaemorrhagiae (2.9)
tarassovi (1.5)
pomona (0.7)
pyrogenes (0.7)
canicola (50.7)
icterohaemorrhagiae
(25.5)
grippotyphosa (7.8)
pomona (6.7)
canicola (58.1)
icterohaemorrhagiae
(20.9)
copenhageni (11.4)
grippotyphosa (2.7)
autumnalis (34.8)
grippotyphosa (13.0)
icterohaemorrhagiae
(10.3)
canicola (6.0)
copenhageni (4.9)
canicola (64.7)
pyrogenes (50.4)
icterohaemorrhagiae
(14.3)
copenhageni (14.3)
pomona (4.2)
grippotyphosa (1.6)
canicola (25.0)
icterohaemorrhagiae
(23.3)
autumnalis (35.0)
grippotyphosa (10.0)
pyrogenes (12.5)
pomona (1.6)
copenhageni (24.4)
canicola (16.0)
hardjo (16.0)
castellonis (28.7)
autumnalis (19.1)
pyrogenes (17.7)
icterohaemorrhagiae
(11.0)
canicola (9.6)

82

ANEXO 12 - APRESENTAO DAS VACINAS COMERCIAIS NA INDSTRIA


BRASILEIRA CONTENDO AS BACTERINAS PARA LEPTOSPIROSE.
Vacina
Fabricante
Canigen CH(A2)PL* e Virbac
PPi/LR *
CanigenCHa2
Virbac
PPi/LCV*
Canigen L
Virbac
Cattle Master 4+L5*
Pfizer
Eurican CHPL*
Merial
Eurican CHPLR*
Merial
Farrowsure B*
Pfizer

Espcies
C

SOROTIPOS/SOROVARES
canicola e icterohaemorrhagiae

canicola e icterohaemorrhagiae

C
B
C
C
S

canicola e icterohaemorrhagiae
canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae e pomona.
canicola e icterohaemorrhagiae
canicola e icterohaemorrhagiae
canicola,grippotyphosa, hardjo,icterohaemorrhagiae, pomona
bratislava.
canicola e icterohaemorrhagiae
canicola e icterohaemorrhagiae

Galaxy DA2 P+L*


Galaxy DA2 PPV L*

Fort Dodge
Fort Dodge

C
C

Lepto 5 Tipos
Lepto Bac
Lepto Bac 6

Merial
Fort Dodge
Fort Dodge

B
C
BES

Lepto-Bov-6

Valle

Leptoferm 5/2ml
Leptospirovac-B
Leptospirovac-C
Leptospirovac-S
Leptovac 6
Leptovacin

Pfizer
IRFA
IRFA
IRFA
Hertape
Bio-vet

Multi-Dog*

Hertape

canicola, grippotyphosa, icterohaemorrhagiae, hardjo, pomona.


canicola e icterohaemorrhagiae
canicola, grippotyphosa, icterohaemorrhagiae, pomona, wolfii e
hardjo.
B
hardjo; pomona; wolffi; canicola; grippotyphosa; icterohaemorrhagiae
.
BS
canicola, grippotyphosa, harjo, icterohaemorrhagiae e pomona.
B
hardjo, icterohaemorrhagiae , bratislava, pomona.
C
canicola e icterohaemorrhagiae
S
canicola, icterohaemorrhagiae, pomona,bratislava, hardjo.
B O Cp S
canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae, pomona, wolffi,
B O Cp E C canicola, icterohaemorrhagiae, copenhageni, pomona, grippotyphosa
G
e bratislava.
C
canicola, icterohaemorrhagiae, pomona e grippotyphosa

Nobivac L
Octa-Cino-Vacin*
Parvo Lepto 6*

Intervet
Bio-vet
Fort Dogde

C
C
S

Poli-Cino-Vacin*
Six-Dog*
Suvaxyn L6

Bio-vet
Hertape
Fort Dogde

C
C
S

Tandem 9K*

Merial

Tissuvax 3*

Coopers

Tissuvax Max*
Tri-Cino-Vacin*
Tri-Dog*
Tridog*
Vacina Quadrivac*

canicola e icterohaemorrhagiae
canicola e icterohaemorrhagiae
pomona, grippotyphosa, canicola, icterohaemorrhagiae, wolffi e
hardjo.
canicola e icterohaemorrhagiae
canicola e icterohaemorrhagiae
pomona, grippotyphosa, canicola, icterohaemorrhagiae , bratislava,
hardjo .
canicola, grippotyphosa, hardjo, icterohaemorrhagiae e pomona.

canicola e icterohaemorrhagiae

Coopers

canicola e icterohaemorrhagiae

Bio-Vet

canicola e icterohaemorrhagiae

Hertape

canicola e icterohaemorrhagiae

Valle

canicola e icterohaemorrhagiae

Leivas

canicola e icterohaemorrhagiae

Vanguard 5/CV-L*

Pfizer

canicola e icterohaemorrhagiae

Vanguard DA2PL*

Pfizer

canicola e icterohaemorrhagiae

HTLP Pfizer

canicola e icterohaemorrhagiae

Vanguard
5/CV-L*
Vencosix-Plus*

Vencofarma

canicola e icterohaemorrhagiae

Vencothree*

Vencofarma

canicola e icterohaemorrhagiae

Vencothree-Plus*

Vencofarma

canicola e icterohaemorrhagiae

* vacinas associadas B: bovinos; C: ces, Cp: caprinos, E: eqinos, G: gatos, O: ovinos, S: sunos
FONTE: GARCIA, 2005