PATOLOGIA I: METODOS DE ESTUDIO EN PATOLOGA

1. Macroscopa
2. Citologa.
3. Histologa bsica.
4. Histoqumica y tcnicas especiales.
5. Inmunohistoqumica
6. Inmunofluorescencia
7. Microscopia electrnica
8. Citofotometra
9. Citometra de flujo
10.Patologa molecular
11.Telepatologa.
1.- MACROSCOPA

La tcnica bsica del examen antomo patolgico es la macroscopa. Permite orientar el diagnstico, la
toma de muestras para el proceso y elegir las tcnicas para el diagnstico

Consisten en un examen visual bsico de las muestras e incluye descripcin de las siguientes
caracteristicas:
Organo
Tamao
Relaciones
Color
Consistencia
Corte
Alteraciones

2.- CITOLOGA
Estudio de la morfologa celular
Permite examinar las caractersticas especialmente nucleares y citoplasmticas que diferencian unas
clulas de otras en especial las de tipo neoplsicas.
TIPOS DE CITOLOGIA
Exfoliativa
Aspirativa o por puncin
Fluidos lquidos o lavados de cavidades
Raspado impronta o aposicin de tejidos

EJ. ESTUDIO
cuello uterino
mama, tiroides
Pleura
lceras

Fijadores utilizados: Spray, alcohol de 96 , Mezcla de alcohol - citrato

Muy importante la fijacin inmediata

3.- HISTOLOGIA BASICA

El conocimiento de la estructura normal de clulas y tejidos es imprescindible para comprender

eficientemente los cambios patolgicos que en ellos ocurren y que representan el fundamento de la
enfermedad

4.- HISTOQUIMICA Y TECNICAS ESPECIALES

HISTOQUIMICA:
Tcnica histolgica y citolgica que a travs de las afinidades tintoriales de los tejidos hacia ciertas
sustancias qumicas (colorantes), denotan o hacen ms evidentes las caractersticas especficas de las
clulas, las cuales pueden observarse a travs del contraste de colores.

TINCION DE RUTINA

Hematoxilina Eosina

La tincin de Hematoxilina Eosina, H/E o tincin corriente, es la tcnica de tincin ms usada.

La hematoxilina es un colorante natural con propiedades similares a las anilinas bsicas. Tie
principalmente el ncleo (histonas).
La eosina es un colorante cido y su accin es la de una anilina, tiendo principalmente el citoplasma
celular.
Tincin HE:
o Ncleos
azules
o Citoplasma rosado
o Colgeno y fibras musculares rosado plido

TINCIONES (Tcnicas) ESPECIALES.

Existen un sinnmero de tinciones especiales, destinadas a certificar la presencia o ausencia de

determinados elementos. Suelen solicitarse una vez que la tcnica de H/E se ha realizado, teniendo ya
un diagnstico presuntivo.

PRINCIPALES TINCIONES ESPECIALES:

TRICRMICO DE MASSON

Principal Uso: Colgeno.

Tie:
o Colgeno Verde.
o Ncleo, msculo y nervios
o Citoplasma amarillo

Rojo oscuro.

VAN GIESON

Principal Uso: Tejido Fibroso

Tambin se considera una tincin tricromica

Tie:
o Colgeno rojo.
o Ncleo azul negro
o Msculos, nervios amarillos
o (+Verhoeff) fibras elsticas negro

FONTANA MASSON

Principal Uso: Melanina

Tie:
o Melanina

Negro.

PLATA METENAMINA (GROCOTT)

Principales Usos: Hongos.

Tie:
o Paredes micticas
Negros.

PAS

Principales Usos: Glucgeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal.

Tie:
o PAS Reaccin positiva para glucgeno y polisacridos neutros.
Glucgeno Diastasa lbil.
o PAS diastasa (PAS D) Reaccin positiva slo para polisacridos neutros.
MPS neutros y Paredes micticas Diastasa resistentes.

AZUL ALCIN

Principal Uso: Mucopolisacridos cidos

Uso en deteccin presencia clulas caliciformes

Tie
o Mucopolisacridos cidos (mucina) Azul.

AZUL DE TOLUIDINA

Principal Uso: Mucopolisacridos cidos

Tie
o Mucopolisacridos cidos Prpura metacrmico

GIEMSA

Principales usos: Grnulos mastocitarios, MPS cidos, eosinfilos, leishmanias, mdula sea

Tie:
o Grnulos mastocitarios, Mucopolisacaridos cidos
Prpura.
o Eosinfilos, leishmanias
Rojo.

FERROCIANURO DE POTASIO DE PERLS (AZUL DE PRUSIA)

Principal Uso: Hemosiderina

Tie:
o Hemosiderina

Azul

ROJO CONGO

Principal Uso: Amiloide.

Tie
o Sustancia amiloide

Roja con luz, Verde con luz polarizada

VON KOSSA

Principal Uso: Calcio

Tie:
o Calcio Negro.

ORCENA

Principal Uso: Fibras elsticas.

Tie:
o Fibras elsticas

Pardo oscuro.

(*) VISUALIZACION PIGMENTOS

Dentro de los pigmentos endgenos destacan:

Lipofucsina: corresponde polmeros de lpidos, fosfolpidos y protenas que se acumulan en los citoplasmas de
las clulas, presenta color amarillo-pardo y se asocia generalmente al envejecimiento de los tejidos.

La melanina es el nico pigmento endgeno de color negro, en granular fino y se produce en los melanocitos.
Se puede acumular en melanocitos, queratinocitos y macrfagos.

La hemosiderina corresponde a la forma de almacenamiento del fierro en el organismo. Puede aumentar en

trastornos primarios de su metabolismo (hemocromatosis) o en condiciones de sobrecarga como
politransfundidos , anemias hemolticas o inflamacin con hemorragia intensa. Se acumula en macrfagos, u
otras clulas parenquimatosas, presenta color amarillo-pardo, de grnulos gruesos, birrefringentes con luz
polarizada. Se puede teir con tcnica de Azul de Prusia.

5.- INMUNOHISTOQUIMICA

Tecnologa inmunolgica ha permitido producir anticuerpos monoclonales especficos contra antgenos o

sustancias tisulares determinadas.

Se requiere tejido muy bien conservado.

El diagnstico siempre es basado en la morfologa evaluada con tcnicas de rutina (HE), ya que la
inmunohistoqumica y la patologa molecular solo sirven para confirmar un diagnstico.
Lo ms importante en este estudio es la seleccin apropiada de los anticuerpos utilizados, su correcta
interpretacin y la calidad tcnica.
Existen cientos de anticuerpos disponibles que reconocen marcadores tumorales, sustancias tejido
especfica, diferentes componentes celulares epiteliales, estromales etc.
Los grupos de marcadores ms comnmente usados son:
- Marcadores epiteliales: queratinas de bajo peso molecular, AE1-AE3 coctl de citoqueratinas,
CK7, CK20, CEA, EMA.
- Marcadores melanocticos: S100 (tambin es un marcador mesenquimal), HMB45,
MelanA/Mart1.

Marcadores mesenquimales: vimentina, Factor XIIIa, Factor VIII, CD31, CD34, HHF35,
Actina Msculo Especfica, desmina.
Marcadores linfoides: CD3, CD20, CD15, CD30.
Marcadores histiocticos: CD68, lisozima, CD1a (clulas de Langerhans).
Marcadores neuroendocrinos: Enolasa Neuroespecfica, sinaptofisina.
Marcadores de proliferacin celular: Ki-67, bcl2.

Indicaciones de IHQ:
Tipificacin de estirpe celular
Dg. Diferencial de neoplasias de clulas grandes o pequeas.
Tipificacin de neoplasias hematolgicas
Factores pronsticos

Tipos de tecnicas inmumohistoquimicas:

Tecnicas inmunoenzimaticas

Tecnicas de inmunofluorescencia

Tcnicas inmunoenzimticas utilizan como marcadores enzimas capaces de hacer cambiar de color un
sustrato incoloro. Por ejemplo, las enzimas ms frecuentemente utilizadas son peroxidasa y fosfatasa alcalina
y los sustratos diaminobenzidina (color pardo), aminoetilcarbazol (color rojo) y nitroazul de tetrazolio (color
azul). Estos marcadores pueden unirse (conjugarse) directamente al anticuerpo primario o bien indirectamente
mediante otros anticuerpos (secundarios) o sustancias como biotina o protena A.

6.- INMUNOFLUORESCENCIA
Se considera como un tipo de tecnica inmunohistoquimica
Utiliza como marcadores compuestos de fluorescena que bajo luz ultravioleta emiten luz de longitud de onda
visible, que depende de la naturaleza del compuesto. El isotiocianato de fluorescena emite luz verde
amarillenta intensa. Estas tcnicas necesitan muestras en fresco y congeladas, sin fijacin convencional, pues
los antgenos estn presentes en superficies celulares o son muy lbiles a la fijacin en formalina. La
inmunofluorescencia directa, es decir con anticuerpos conjugados con fluorescena, se aplica corrientemente
en el diagnstico de las enfermedades cutneas en donde tiene indicacin y utilidad muy precisas como en
enfermedades ampollares, vasculitis y mesenquimopatas . Esta tcnica pese a ser muy sensible, presenta
inconvenientes como la falta de permanencia de la fluorescencia, requiere de microscopa especializada y el
detalle morfolgico es pobre. Para documentar cada caso, es necesario fotografiar la reaccin.

7.- MICROSCOPIA ELECTRONICA:

-

Tcnica de gran costo y sofisticacin, Actualmente restringida al estudio renal y de algunos tumores

La Fijacin se realiza en glutaraldehido, los cortes son semifinos, se montan en grillas metlicas y se
somete a un haz de rayos catdicos

Los aumentos utilizados son:

M corriente: 4x 10x 40x 1000x

Melectronica: 10000x 40000x

Se pueden observar: Grnulos de neurosecrecin, Grnulos de Birbeck, Cuerpos de Weibel Paladem

Melanosomas

8.- CITOFOTOMETRIA
o Es la combinacin de la microscopa ptica y la tecnologa computacional.
o La imagen de un corte histolgico en el microscopio es captada por una cmara de video que entrega
informacin a un computador, que mediante un programa determinado analiza los diferentes
componentes que existen en imagen, pudiendo con esta tcnica contar ncleos, medir tamaos de
diferentes estructuras, analizar densidad de tincin, lo que nos permite indirectamente cuantificar
diferentes componentes

9.- CITOMETRIA DE FLUJO

Las clulas en suspensin en un flujo de hileras de una sola clula que han sido previamente marcadas
con sustancias fluorescentes son estimuladas con un rayo lser y diferentes detectores que captan la
reflexin o intensidad de la fluorescencia, permitiendo as medir o cuantificar las clulas que han sido
marcadas. Esta tecnologa tiene dos grandes aplicaciones:

Se analizan 5000 a 10000 clulas por seg. Pasando por haces de luz en dos direcciones

Un computador hace un histograma integrando la informacin

10.- PATOLOGIA MOLECULAR

Hibridacin in situ: complementacin de pares de bases entre dos hebras sencillas mediante sondas (DNA
RNA) reveladas con cromgeno

FISH es una tcnica de hibridacin con sonda fluorescente

PCR: (1984) Mtodo de amplificacin de DNA usando una DNA polimerasa altas concentraciones de
desoxirribonucletidos

11.- TELEPATOLOGIA

Permite el anlisis de lminas histolgicas a distancia gracias al procesamiento de imgenes

microscpicas por un ordenador.