Grupo 5

QUMICA
DE
INFORME N9
RECURSOS
EXTRACCION Y PURIFICACION
DE LIPIDOS TOLALES
HIDROBIOLGICOS
/2014

FAPE

Universidad Nacional Agraria

la Molina

Facultad de pesquera
Departamento de Acuicultura e Industrias Pesquera

Curso:
Ttulo:

Qumica de recursos hidrobiolgicos

Extraccin y purificacin de grasas totales

Integrantes:

Aquice Ccasani Miguel ngel

Isla Torres Edgar Daniel
Segundo Crdenas Patricia Stephany
Soto Lpez Wilfredo Arnol

Da de prctica:
04/11/2014
Da de entrega del informe:
11/0920/14

1) Introduccin:
Los lpidos se incluyen entre los componentes principales de los
organismos marinos. Aunque estn presentes en todo el tejido, se
concentrar mayormente en la capa subcutnea de los mamferos
marinos y peces grasos, en el hgado de los peces magros, en el
tejido muscular y en las gnadas maduras. Los lpidos marinos estn
compuestos por fosfolpidos, esteroles, triglicridos, esteres creos y
pequeas cantidades de productos metablicos de stos, as como
por reducidas tasas de lpidos no habituales, como steres de la
glicerina, glucolpidos, sulfolpidos e hidrocarburos.
Fosfolpidos y esteroles estn presentes en los tejidos en pequeas
pero constantes cuantas del 0,2 al 0,3% del peso hmedo. Los lpidos
restantes son esencialmente depsitos de energa, resultando
importante para la flotacin. Una fraccin media de fosfolpidos de
pescado contiene alrededor de 60% de fosfatidil-colina, 20% de
fosfatidil-etanolamina, y algunos tantos por ciento de fosfatidil-serina
y esfingomielina, mientras que el resto est constituido por otros
fosfolpidos.
La composicin que exhiben los lpidos marinos en cidos grasos es
mucho ms compleja que la de los lpidos en los animales y plantas
terrestres. Los cidos grasos marinos estn en particular muy
insaturados. Incluso los cidos de C 14 y C16 cuentan con enlaces
insaturados, mientras que os cidos C 20 y C22 contienen cuatro, cinco y
seis dobles enlaces. La mayora de los cidos grasos poliinsaturados
(AGPI) de los lpidos del pescado son del tipo 3n. Los cidos 6n son
escasos.
La distribucin de los cidos grasos en los lpidos dista mucho de ser
uniforme. Los cidos polinicos se encuentran principalmente en
fosfolpidos, mientras que los cidos monoinsaturados estn
presentes en los triacil-gliceroles.
Los cidos polinicos estn considerados como importantes
componentes de la dieta. Los cidos 3n y 6n son esenciales, ya que
los dobles enlaces ubicados en los enlaces tercero y sexto a partir del
grupo metilo no pueden sintetizarse en el cuerpo animal y deben ser
aportados por los alimentos. Los cidos 6n son esenciales para el
hombre, puesto que nos sirven para generar eicosanoides, rectores
de importantes funciones metablicas. E cido araquidnico est
presente en los lpidos de membrana de todas las clulas humanas.

2) Objetivos:
Extraer los lpidos intersticiales del musculo de pescado
utilizando un mtodo en frio y rpido.
3) Materiales y Mtodos:

Muestra de pescado
Papel de filtro Whatman N2
Mortero
Matraz kitazato
Balones Soxhlet
Embudo Buchner de cuello corto.
Bomba de vaco.
Embudo de separacin de 125 ml
Balanza analtica
Probetas de 100ml, baguetas, bickers, placas Petri, embudos de
cuello corto.
Paos, detergente jabn desinfectante, bolsas plsticas.
Reactivos:
-Metanol
-Cloroformo
-Sulfato de sodio anhidro

Figura 1: materiales usados en laboratorio

Mtodo de Bligh y Dyer

Este mtodo nos permite la extraccin y purificacin de lpidos totales
de una sola operacin, el cual es un procedimiento rpido que
minimiza la descomposicin oxidativa y la formacin de nuevos
compuestos a partir de ella
Mtodo de Bligh y Byer
Pescado
Anlisis sensorial y
Madures sexual

Muestra homognea

10gr de la muestra
10ml de cloroformo
20 ml metanol
10

Extraccin lpidos I

10ml de cloroformo
10ml de agua

Extraccin lpidos II

Embudo de buchner
Matraz kitazato

Filtracin vaco

Pera de decantacin

Separacin de fases

Fase inferior
Cloroformo + lpido

Fase superior
Metanol +agua

Recuperacin

Sulfato de sodio anhidro

Filtrado
Evaporacin Solvente

Pesado

4.1) Clculos:
Calculo

Estufa a 30C por 2 horas

En la prctica realizada usamos el mtodo de Bligh y Dyer para la

cuantificacin y calificacin de lpidos, obteniendo los siguientes
resultados.
Para calcular el porcentaje de lpidos en la muestra se utiliza la
siguiente ecuacin:

L pidos=

( Peso bal n y l pidos (g)Peso bal n vacio(g))

x 100
Peso Muestra (g)

Entonces aplicando en cada especie tendramos:

Grupo 1: Pmpano
%L pidos=

(99.2587 g98.6049 g)
x 100 =6.538
10 g

Grupo 2: Bonito
%L pidos=

(103.3031 g103.0970 g)
x 100 =2.061
10 g

Grupo 3: Bonito
%L pidos=

(99.2587 g98.6049 g)
x 100 =0.808
10 g

Grupo 4: Pmpano
%L pidos=

(98.8560 g98.6366 g)
x 100 =2.194
10 g

Grupo 5 :Bonito
%L pidos=

(108.1602 g108.3566 g)
x 100 =1.964
10 g

Aclaraciones: El mtodo empleado se realiz con la muestra que

contena un 80% de humedad, se pueden hacer modificaciones en los
volmenes y porcentajes pero siempre se debe respetar la proporcin
1:2:0.8 antes de la dilucin y luego 2:2:1,8, de cloroformo, metanol y
agua respectivamente.

4.2) Resultados:
Cuadro 1. Resultados de la prueba.
Mes
a

Especi
e

Anlisi
s
sensori
al

Pmpan
o

10

M-IV

10

98.6049

99.2587

0.6538

Bonito

11

H-VII

10

103.0970

103.3031

0.2061

Bonito

12

H-VIII

10

98.2461

98.3269

0.0808

H-VI

10

98.6366

98.8560

0.2194

11

H-VI

10

108.1602

108.3566

0.1964

4
5

Pmpan
o
Bonito
(cabeza
)

Madurez
sexual

Peso
muestr
a (g)

Peso
baln
vaco (g)

Peso baln
y lpidos (g)

Lpidos
(g)

5) Discusin:
En los peces el porcentaje de lpidos o grasas puede tener grandes
rangos de diferencia ya sea por la especie, madures sexual, poca del
ao, alimentacin, parte del cuerpo, calidad del individuo, tipo de
musculo, parte del cuerpo, sexo, etc.
Cuadro 2 .Principales constituyentes (porcentaje) del msculo de
pescado
Constituyente

Protenas
Lpidos

Pescado (filete)
Mnimo

Variacin normal

Mximo

16-21

28

0,1

0,2 - 25

67

Carbohidratos
Cenizas

< 0,5
0,4

1,2-1,5

1,5

Agua

28

66-81

96

Fuentes: Stansby, 1962; Love, 1970

Asi tambin los peces pueden ser clasificadas en magras o grasas eso
depende del almacenamiento de las grasas.

Cuadro 3. Variacin de la composicin qumica segn la especie

Categor % Agua %
%Lpido
a
Protena s
pez
68.6
20
10
graso
Pez
77.2
19
2.5
semigra
so
Pez
81.2
16.4
0.5
magro
Crustce
76
17.8
2.1
o
Molusco
81
13
1.5
Fuente: Mgs. Porturas

%
Ceniza
1.4
1.5

1.3
2.1
1.6

La concentracin de clulas grasas parece ser ms elevada cerca de

las miocomatas y en las regiones entre el msculo blanco y el oscuro
(Kiessling et al., 1991).

Cuadro 4. Composicin qumica del musculo oscuro y ordinario de

pescado
Tipo de
musculo
Musculo
ordinario
Musculo
oscuro

%
Humeda
d
77.4
69.9

%
%
%
Proten Grasa Ceniz
a
a
20.4
2.1
1.1
17.5

12.5

1.2

Fuente: Mgs. Porturas

Cuadro 5. Variacin de la composicin qumica segn la regin del

cuerpo
Porci %
%
%
%
n
Humeda
Proten
Grasa Ceniza
muscul d
a
ar
Caudal
75.9
19.8
4.8
1.1
Centra
76.2
18.8
3.5
1.2
l
Cabeza
77.2
18.9
2.6
1.2
Fuente: Mgs. Porturas
El porcentaje total de cidos grasos poliinsaturados con cuatro, cinco
o seis dobles enlaces es levemente menor en los lpidos de peces de
agua dulce (aproximadamente 70 por ciento) que en los lpidos de
peces de agua de mar (aproximadamente 88 por ciento) (Stansby y
Hall, 1967). Sin embargo, la composicin de lpidos no es
completamente fija sino que puede variar un poco con la alimentacin
del animal y la estacin del ao.
Otras razones por la cual tambin puede variar el porcentaje de grasa
pueden ser las siguientes:
1. Hidrlisis del TG (Rancidez hidroltica)
2. Oxidacin de los cidos grasos insaturados constituyentes del
TG.
3. Alteracin trmica. Deterioro por altas temperaturas.
4. Deterioro por contaminacin microbiolgica, metales pesados,
compuestos txicos orgnicos, etc.

Grafica 1. Relacin entre madurez sexual y % de lpidos.

Madurez sexual - % Lipidos

9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
1

En el grafico podemos observar la variacin en el porcentaje de grasa,

en este caso las 5 especies utilizadas son grasas es decir poseen un
alto nivel de grasa.
En la mesa 1 tenemos un 6.54 % y se encuentra en el estadio IV, el
nivel de grasa es aceptable debido a que en la etapa de madures el
% de grasa aumenta y el nivel de humedad disminuye; en la mesa 2 y
3 las dos especies se encontraban en post-desove y en este intervalo
el % de grasa disminuye as que los niveles de grasa tambin son
aceptables.
En las mesas 4 y 5 el % de grasa es de 2.19 y 1,96 respectivamente y
ambos individuos se encuentran en el estadio VI, siendo muy bajo la
cantidad de grasa con respecto a los valores establecidos, una de las
explicaciones para la especie de la mesa 4 (pampanito) es debido a la
alimentacin, su habito alimenticio es omnvoro y en la costa peruana
suele comer desechos y no satisface todas sus requerimientos
alimenticios; en la mesa 5 la zona estudiada fue la cabeza y el %
promedio de grasa es de 2.6 y en los resultados sale un valor
promedio de 2 estando en el rango del % de grasa.
6) Conclusiones:
Mediante el mtodo de Bligh y Dyer se obtuvo
satisfactoriamente el porcentaje de lpidos en las muestras.

10

6) Cuestionario:
1.- Cules son las ventajas de la extraccin por solventes en
relacin al mtodo Soxhelt? Justifique su respuesta.
Para conocer las ventajas y desventajas en general que presentan
estos mtodos citaremos la siguiente tabla (Lilia Masson, 1997):
Cuadro 5. Diferencias entre Soxhelt y Bligh.
Mtodo

Limitaciones

Ventajas y
aplicaciones
Extraccin con un solvente
Extraccin
incompleta, usa alta
Soxhelt
Algunos tipos de
temperatura, no
ter etlico, ter
derivados crneos,
puede usarse para
de petrleo,
frutas y verduras,
estudio de cidos
alcoholes
grasos. No se puede algunos productos
azucarados.
aplicar a alimentos
sometidos a algn
tratamiento trmico
ni a leche y
derivados lcteos.
Extraccin con mezcla de solventes

Mtodo de Folch,
Bligh y Dyer
CloroformoMetanol

Costo en solventes.
Re-extraccin para
purificacin, debe
conocerse el % de
humedad del
alimento para
ajustarla al 80%.

Extraccin en frio,
aplicable casi a
todo alimento. El
extracto se puede
usar para
determinacin de
cidos grasos,
esteroles, etc. Son
mtodos rpidos.

Estas son las principales diferencias entre los mtodos, y concluimos

que la principal diferencia entre el Mtodo Soxhelt y el Mtodo Bligh y
Dyer es que en el mtodo Bligh y Dyer podemos cuantificar y calificar
los lpidos obtenidos.
2.- Por qu los lpidos se encuentran contenidos en la capa
de cloroformo y nos no lpidos en la capa de metanol y agua?
Fundamente su respuesta.
Cuando el metanol, cloroformo y agua son aadidos a la muestra, los
lpidos se disuelven instantneamente y el metabolismo de los lpidos
se detiene.

11

Una vez obtenido dos fases, el lpido se dirige hacia la capa del
cloroformo debido a que es una molcula orgnica soluble en gran
proporcin en disolventes no polares como en este caso es el
cloroformo. El cloroformo se utiliz para extraer lpidos de sus vecinos
ms polares: sales, protenas, carbohidratos, y cidos nucleicos.

7) Bibliografa:

Bligh, E.G. and Dyer, W.J. 1959. A rapid method of total lipid
extraction and purification. (Can. J. Biochem. and Physiol. 37:
917- 917).

Folch, J.; Lees, M. and Stanley, G.H.S. 1957. A simple method for
the isolation and purification of total lipids from animal tissues.
(J. Biol. Chem. 226: 497-509).

Gonzlez, A., Viatcheslav Kafarov, and A. Monsalve. "Desarrollo

de mtodos de extraccin de aceite en la cadena de produccin
de biodiesel a partir de microalgas." (2009): 53-60.
Kiessling, A., T. Aasgaard, T. Storebakken, L. Johansson and K.H.
Kiessling (1991). Changes in the structure and function of the
epaxial muscle of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) in
relation to ration and age. III. Chemical
composition. Aquaculture. 93, 373-387.
Lilia, Masson; Hctor, Araya; Gary R. Beecher; et al, (Fao, 1997)
Quimica orgnica: conceptos y aplicaciones. Philip S. Bailey,
Christina A. Bailey 1998. Pag. 476.
Stansby, M.E. (1962). Proximate composition of fish. In: E. Heen
and R. Kreuzer (ed.) Fish in nutrition, Fishing News Books Ltd.,
London, 55-60.
Stansby, M.E. and A.S. Hall (1967). Chemical composition of
commercially important fish of the USA. Fish Ind Res., 3, 29-34.
TECNOLOGIAS DE LOS PRODUCTOS DEL MAR: recursos,
composicin nutritiva y conservacin. Zdsislaw E. Sikorski,
1990. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza (Espaa). Cap. 55-57