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Fundao Universidade Federal do Rio Grande

Departamento de Geocincias
Laboratrio de Oceanografia Geolgica
Curso de Ps-Graduao em Oceanografia Fsica, Qumica e Geolgica

Anlise Qumica da Degradao dos Hidrocarbonetos de leo


Diesel no Esturio da Lagoa dos Patos Rio Grande/RS

Douglas Mayer Bento

Dissertao apresentada na Universidade


Federal do Rio Grande, como parte dos
requisitos para obteno do ttulo de Mestre
em Oceanografia Fsica, Qumica e Geolgica.

Orientador: Prof. Dr. Paulo Baisch


Co-orientadora: Profa. Dra. Isabel Machado

Rio Grande RS
Maro 2005

melhor tentar e falhar do que


preocupar-se e ver a vida passar. melhor tentar, ainda que
em vo, que sentar-se fazendo nada at o final
M. Luther King

Agradecimentos

Ao orientador prof. Dr. Paulo Baisch pela oportunidade e pelos


conhecimentos transferidos durante o curso de ps-graduao.
A co-orientadora profa. Dra. Isabel Machado pelo apoio nas horas difceis e
sempre com alguma soluo aos problemas enfrentados. Na verdade foste mais que uma
co-orientadora s uma verdadeira amiga.
A profa. Dra. Elina Caramo pela sua fundamental cooperao
disponibilidade para realizao das anlises cromatogrficas.

A Agncia Nacional do Petrleo (ANP) pelo financiamento deste trabalho,


pela bolsa de estudos e pelo apoio para complementao curricular.
Ao prof. Gilberto Griep coordenador do PRH-27 da ANP.
Ao prof. Dr. Jorge Costa e Msc. Vilsia Martins pela cooperao na
realizao das anlises microbiolgicas e montagem do experimento.
Ao laboratrio de Oceanografia Geolgica, funcionrios e professores.
Aos colegas de mestrado (Guilherme, Luciano, Marina, Liziara, Salete,
Clarissa, e outros).
Ao Oc. Renato Koike pela amizade e disponibilidade nos momentos mais
inoportunos.
Para um secretrio muito especial, valeu Clabisnei.
Aos amigos que conquistei durante esta jornada, que sempre me apoiaram.
A Hedi, a me da minha esposa, por ter sempre me incentivado.
Ao meu pai e a minha me, pois sem o carinho, amor e a amizade deles, no
estaria aqui.
minha esposa e filha, que sempre tiveram pacincia e compreenso nas
horas em que tive maior dificuldade, obrigado Niege e ndria, eu amo vocs.

Lista de siglas
ANP: Agncia Nacional do Petrleo
B(a)P: Benzo(a)Pireno
COT: carbono orgnico total
CPI: Carbon preference index (ndice preferencial de carbonos)
Eh: potencial de oxirreduo
F1: frao da extrao dos hidrocarbonetos alifticos
F2: frao da extrao dos HPAs
GC-MS: cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas
HPAs: hidrocarbonetos policclicos aromticos
ND: no detectvel
p: nvel de significncia
pH: potencial hidrogeninico
UCM: Unresolved Complex Mixture (mistura complexa no resolvida)
USEPA: United States Environmental Protection Agency (Agncia de Proteo Ambiental
do Estados Unidos)
HPAs: somatrio de hidrocarbonetos policclicos aromticos

Lista de Unidades
%: porcentagem
g/g: micrograma por grama
g/Kg: micrograma por quilograma
g: micrograma
L: microlitro
m: micrometro
cm: centmetro
g: grama
keV: quilo eltron-volts
Kg/m3: kilograma por metro cbico
Kg: quilograma
L: litro
m: metro
m3: metro cbico
mg: miligrama
min: minutos
mL: mililitro
mm: milmetro
mV: milivolts
N: normal (normalidade da soluo)
ng/g: nanogramas por grama
ng/Kg: nanogramas por quilograma
nm: nanometros
o

C: grau Celcius

ppb: partes por bilho


ppm: partes por milho
s: segundos

ndice
Agradecimentos

Lista de siglas

Lista de Unidades

1- Introduo

15

2- Objetivos

19

3- Reviso Bibliogrfica

19

3.1- Histrico de acidentes envolvendo derrame de petrleo e seus derivados

19

3.2- Tempo de residncia relacionados aos processos de intemperizao do petrleo no mar


21
3.3- Caracterizao dos hidrocarbonetos do petrleo

22

3.4- Classificao qumica e fsica dos hidrocarbonetos do petrleo

23

3.5- Biossurfactantes

27

3.5.1 - Processos de biodegradao do petrleo por bactrias e fungos


3.5.2- Biodegradao da frao saturada
3.5.3- Biodegradao da frao aromtica
3.5.4- Microrganismos capazes de degradar hidrocarbonetos
3.5.5- Efeito de fatores fsicos e qumicos na biodegradao

28
29
30
30
31

3.6- Dispersantes Qumicos

32

4- Material e Mtodos

35

4.1- O experimento e stio de estudo

35

4.2- Tipo de leo usado no experimento

37

4.3- Produo do biossurfactante pelo Aspergillus fumigattus

37

4.3.1- Fermentao em Estado Slido

37

4.4- Limpeza dos materiais e preparao dos reagentes

38

4.5- Amostragem de sedimento

38

4.6- Anlise in situ

38

4.7- Anlise granulomtrica e porosidade

39

4.8- Contagem de bactrias e fungos

39

4.9- Anlise dos nutrientes

39

4.9.1- Carbono orgnico total (COT)


4.9.2- Nitrognio total
4.9.3- Fsforo total
4.10- Anlise dos hidrocarbonetos
4.10.1- Esquema das anlises dos hidrocarbonetos

40
40
40
41
44

4.11- Tratamento dos dados

45

5- Resultados e Discusso

47

5.1- Anlise granulomtrica

47

5.2- Potencial hidrogeninico (pH) e potencial redox (Eh)

49

5.3- Monitoramento microbiolgico

51

5.3.1- Experimento com leo diesel


5.3.2- Experimento com o biossurfactante
5.3.3- Experimento com o dispersante qumico
5.4- Anlise dos nutrientes- COT, nitrognio total e fsforo total
5.4.1-Carbono orgnico total
5.4.2- Nitrognio total
5.4.3- Fsforo total
5.5- Anlise dos resultados de hidrocarbonetos alifticos e aromticos
5.5.1- Anlise dos cromatogramas
5.5.1.1- Evoluo da concentrao dos hidrocarbonetos alifticos
5.5.1.2- Evoluo da concentrao dos HPAs
5.5.2- Discusso dos resultados obtidos por meio dos cromatogramas anlise das
concentraes
5.5.2.1- Hidrocarbonetos Alifticos
5.5.2.2- Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPAs)

52
52
53
53
53
56
59
61
63
63
71
77
77
82

6- Concluses

89

7- Recomendaes

91

8- Bibliografia

92

9.- Anexos

103

Anexo .9.1

103

Anexo 9.2

105

Anexo 9.3

107

Anexo 9.4

110

Anexo 9.5

112

ndice de tabelas
Tabela 1 Estruturas qumicas e efeitos txicos dos 16 HPAs considerados como poluentes
de prioridade ambiental pela EPA (Agncia de Proteo Ambiental) norte americana (Sims
et al, 1988).
26
Tabela 2 Taxas de biodegradao de algumas espcies de HPAs (USEPA, 2000)

31

Tabela 3- Composio mdia (%) do solo acondicionado em cada uma das caixas usadas
neste trabalho
47
Tabela 4 Resultado do pH durante o experimento por 180 dias

50

Tabela 5 Resultados Eh (potencial redox) durante o experimento por 180 dias

51

Tabela 6- Contagem de fungos e bactrias em cada um dos ensaios

52

Tabela 7- Resultados de carbono orgnico total, em porcentagem, para cada experimento 55


Tabela 8- Resultados de nitrognio total, em porcentagem, para cada experimento.

58

Tabela 9- Resultados de fsforo total, em porcentagem, para cada experimento.

60

Tabela 11- Comparao da fonte de n-alcanos ao meio ambiente. Fonte adaptada (Bishop,
1983 e Medeiros 2000).
78
Tabela 12- Concentraes de n-alcanos totais em sedimentos. Fonte: adaptado de
Taniguchi, 2001

80

Tabela 13- Mostra a concentrao inicial e final, expressa em ug/kg, dos HPAs.

82

ndice de figuras
Figura 1- Tempo e fatores que agem na intemperizao do leo (Clark, 1989 adaptado) 21
Figura 2- Frmula estrutural plana do metano

24

Figura 3- Frmula estrutural plana do eteno

24

Figura 4- Frmulas estruturais planas, respectivamente, do metil-propano e do fitano

24

Figura 5- Frmula estrutural plana do ciclo hexano

25

Figura 6- Frmula estrutural do benzeno

25

Figura 7- Biodegradao de um n-alcano

29

Figura 8- Biodegradao do fenantreno

30

Figura 9 - Representao da ao do dispersante sobre uma mancha de leo (IPIECA,


1993).

33

Figura 10- Mapa de localizao do esturio da Lagoa dos Patos e localizao da Ilha dos
Cavalos
35
Figura 11- Esquema do experimento.

36

Figura 12- Local das caixas no ambiente em estudo

36

Figura 13 - Diagrama triangular de classificao granulomtrica (Shepard, 1954) dos


valores mdios do sedimento da caixa do leo, dispersante e biossurfactante.

48

Figura 14 - Cromatograma do leo diesel do 1o dia do experimento

64

Figura 15- Cromatograma da caixa do leo diesel aps 30 dias do experimento.

65

Figura 16- Cromatograma do leo diesel aps 180 dias do experimento.

66

Figura 17- Cromatograma do dispersante do 1 dia e do 30 dia do experimento

67

Figura 18- Cromatograma do dispersante aps 180 dias do experimento

68

Figura 19- Cromatograma do biossurfactante do primeiro dia do experimento

69

Figura 20- Cromatograma da caixa do biossurfactante aps 90 dias do experimento.

70

Figura 21- Cromatograma do leo diesel aps 180 dias do experimento.

70

Figura 22- Cromatograma do leo diesel do 15 dia aps o inicio do experimento

71

Figura 23- Cromatograma da caixa do leo diesel 180 dias aps o inicio do experimento. 72
Figura 24- Cromatograma do dispersante do 1o dia do experimento

73

Figura 25- Cromatograma da ao do dispersante aps 30 e 180 dias do inicio do


experimento

74

Figura 26- Cromatograma do biossurfactante do 1 e do 15 dia do experimento

75

Figura 27 - Cromatograma da caixa do biossurfactante aps 90 e 180 dias aps o inicio do


experimento.
76

ndice de grficos
Grfico 1- Comparao da concentrao final do fenantreno nas

84

Grfico 2- Comparao da taxa de degradao HPAs > 4 anis

85

Grfico 3- Comparao da taxa de degradao durante 180 dias

86

Grfico 4- Comparao da taxa de degradao HPAs com 3 anis aromticos

87

10

Resumo
As tcnicas convencionais de limpeza de reas contaminadas com petrleo e seus
derivados podem ser complementadas com a remediao, pelo uso de dispersantes
qumicos ou de biossurfactantes. A biorremediao minimiza o impacto de substncias
recalcitrantes no ambiente. O dispersante qumico pode promover a biodegradao mais
rpida do leo, mas a sua aplicao deve ser sempre avaliada por profissionais
especializados em meio ambiente, j que ela pode ser vista como uma introduo
deliberada de um contaminante. O presente trabalho avaliou a influncia da utilizao de
um dispersante qumico e de um biossurfactante (produzido pelo fungo Aspergillus
fumigattus), em derrame controlado de leo diesel, ocorrido na primavera/2003 na Ilha dos
Cavalos localizada no esturio da Lagoa dos Patos. O ambiente foi monitorado durante seis
meses, selecionando-se um local com leo diesel, outro com leo diesel e dispersante
qumico e outro com leo diesel e biossurfactante. Foram analisados os seguintes
parmetros fsico-qumicos: granulometria, pH, Eh, COT, nitrognio e fsforo total do
sedimento, hidrocarbonetos alifticos e aromticos. O tratamento estatstico consistiu na
anlise de varincia (ANOVA) e no teste de Tukey (p< 0,05), para os nutrientes analisados.
Os hidrocarbonetos aromticos e alifticos provenientes da degradao do leo diesel
foram determinados por CG-MS. Os resultados mostraram que o uso de tcnicas
alternativas, principalmente com a introduo de espcies no nativas, deve ser bem
estudado antes de ser aplicado, pois na caixa onde houve adio do fungo Aspergillus
fumigattus a biota microbiana demorou a se recuperar, e a taxa final de degradao nas trs
caixas foram muito parecidas.

Palavras Chave: hidrocarbonetos, biodegradao, remediao e leo diesel.


11

Abstract
The conventional cleaning techniques of infected areas with petroleum and its
derived products can be complemented by remediation, with the use chemical surfactants or
biosurfactants. Bioremediation minimizes the impact of recalcitrant substances in the
environment. The chemical surfactant can promote fast oil biodegradation, however, its
application should always be evaluated by specialized professionals in environment, in
order do avoid the understanding it is a deliberated introduction of a pollutant. In such case,
this work evaluated the influence of using a chemical surfactant and a biosurfactant
(produced by the fungus Aspergillus fumigattus) in a controlled spill caused by oil diesel,
that happened during the springtime of the year 2003, in the Horses Island, located in the
estuary of the Patos Lagoon. The environment was monitored for six months, and there
were areas with only oil diesel, only oil diesel and chemical surfactant and, finally, areas
with oil diesel and biosurfactant. The following physical-chemical parameters were
analyzed: granulometry, pH, Eh, COT, nitrogen and aliphatic and aromatic hydrocarbons.
The statistics consisted of variance analysis (ANOVA) and Tukey test (p <0,05), related to
the analyzed nutrients. The aliphatic and aromatic hydrocarbons derived from oil diesel
were determined by GC-MS. The results showed that the use of alternative techniques,
mainly with the introduction of non native species, should be meticulous studied before the
application, because in the box where the fungus Aspergillus fumigattus was added there
was an important delay in the recovering of microbial biota, although the degradation final
rate was very similar in the three boxes.

Key Words: hydrocarbons, biodegradation, remediation and oil diesel.


Organizao do trabalho
12

O trabalho est disposto em captulos, com a seguinte ordem: Captulo I- Aspectos


Tericos, Captulo II- Material e Mtodos, Captulo III- Resultados e Discusso e Captulo
IV- Concluses, com o objetivo de facilitar a leitura, interpretao e o entendimento, onde
cada captulo apresenta as seguintes subdivises:
Captulo I- Nesse captulo sero abordados a introduo, objetivos, histrico de casos de
derrame de leo no Brasil, tempo de residncia relacionados aos processos de
intemperizao do petrleo no mar, caracterizao dos hidrocarbonetos do petrleo,
classificao qumica e fsica dos hidrocarbonetos do petrleo, processos de biodegradao
do petrleo por bactrias e fungos, biodegradao da frao saturada e aromtica,
microorganismos capazes de degradar hidrocarbonetos, efeito de fatores fsicos e qumicos
na biodegradao, dispersantes qumicos.
Captulo II- Sero demonstrados os materiais e mtodos, a montagem do experimento, o
tipo de leo, a produo do biossurfactante, a limpeza dos materiais, a amostragem do
sedimento, a anlise in situ, a anlise granulomtrica, a anlise dos nutrientes, a anlise dos
hidrocarbonetos e as condies cromatogrficas.
Captulo III- Neste capitulo ser feita anlise dos resultados e discusses da granulometria,
pH e Eh, nutrientes, hidrocarbonetos alifticos e aromticos.
Captulo IV- Este captulo tem como objetivo apresentar as concluses do trabalho e
sugestes para trabalhos posteriores.

13

Captulo - I
Aspectos Tericos

14

1- Introduo
Os combustveis fsseis so as principais fontes de obteno de energia para
a civilizao atual e o crescente aumento do consumo mundial tem acarretado a sua
introduo no ambiente marinho (Marques Jr., 2002). Nesse ambiente, processa-se a maior
parte do transporte e o desembarque do petrleo do mundo, atividades essas que aumentam
a probabilidade de serem verificados acidentes com tais produtos. Esses acidentes causam
diferentes tipos de impacto em vrios ecossistemas marinhos mundiais atravs de eventos
crnicos ou crticos de contaminao, da a necessidade de um estudo constante desse
ambiente.
Os acidentes ambientais relacionados com petrleo so eventos considerados
comuns em todo mundo. Como exemplo recente cita-se o acidente com o petroleiro
Prestige, que afundou na costa da Espanha, em dezembro de 2003, levando grande parte do
combustvel de seus tanques para o fundo do Atlntico, local que uma das reas mais
ricas para pesca da Espanha (Martins, 2005). No caso do Brasil, pode-se citar o navio
Vicua de bandeira chilena carregado de metano e leo, que explodiu em novembro de
2004 no porto de Paranagu/PR (SEMA, 2005). Este e outros acidentes esto diretamente
associados crescente atividade econmica ligada ao setor de petrleo.
A composio qumica do petrleo, conforme Freedman (1995) e Marques
Jr. (2002), complexa, varivel e extremamente influenciada por condies fsicoqumicas, biolgicas e geolgicas do ambiente de formao. O petrleo natural ocorre
como uma mistura de compostos orgnicos, principalmente hidrocarbonetos que so,
quantitativamente, os mais importantes constituintes do petrleo, podendo ser divididos em
trs partes: alifticos, alicclicos e aromticos.
Os leos crus contm muitas substncias txicas como benzeno, tolueno,
xileno alm de outras substncias de baixo peso molecular (Kennish, 1996). No petrleo
tambm so encontrados cidos, fenis, compostos com enxofre (sulfetos, tiis e tiofenis)
e hidrocarbonetos policclicos aromticos. Da srie das parafinas, das olefinas at os
aromticos verifica-se que a toxidade aumenta (Kennish, 1996). Durante um derrame de
petrleo, as molculas de menor peso molecular sofrem, durante as primeiras 24 e 48 horas,
um forte processo de evaporao e dissoluo. Esse fato produz uma importante mudana

15

na composio do leo, reduzindo o impacto na comunidade de organismos e no ambiente


aqutico.
A Agncia de Proteo Ambiental (Environmental Protection Agency
EPA) dos Estados Unidos lista vrios hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPAs)
como compostos poluentes de prioridade ambiental e que devem ser freqentemente
monitorados em efluentes industriais, devido ao fato de serem considerados como
carcinognicos, mutagnicos, teratognicos, alm de possurem efeitos txicos aos seres
vivos (Keith & Tellierd, 1979; Eilser, 1987; Odum, 1988; Lijinsky, 1991; Kennish, 1992) e
terem a capacidade de se bioacumularem nas diferentes cadeias alimentares (Godsy, 1983;
Marques Jr., 2002). Por isso existe um interesse crescente de se entender o destino e as
formas de desaparecimento dos hidrocarbonetos para que haja o desenvolvimento de
mtodos mais eficientes de remoo dos mesmos do meio ambiente.
Os constituintes do petrleo so molculas hidrofbicas, apresentando baixa
solubilidade em gua, o que contribui para sua persistncia no meio ambiente. Os
hidrocarbonetos sofrem uma adsoro nas partculas do material em suspenso, o que
provoca forte tendncia a acumularem-se nos sedimentos (Ehrlich, 1982; Bcego, 1988;
Kennish, 1996).
Bcego (1988) afirma que, aps o derrame no mar, o petrleo fica sujeito a
uma srie de processos fsicos, qumicos e biolgicos, acarretando a sua disperso no meio,
e alteraes em suas caractersticas fsicas e qumicas, sendo que a degradao pode
apresentar-se muito diferente conforme a proximidade da linha da costa.
Estudos realizados pelo UNEP (1991) demonstram que a velocidade de
degradao do petrleo depende das caractersticas fsicas e qumicas do leo, das
condies do tempo e do clima. Nos sedimentos aquticos, os hidrocarbonetos so
degradados muito lentamente na ausncia de luz e oxignio. A degradao microbiolgica
possui uma seqncia preferencial de compostos a serem degradados. Os hidrocarbonetos
alifticos (alcanos e alcenos) so mais rapidamente e facilmente degradados, seguidos pelos
hidrocarbonetos aromticos e finalmente cicloalcanos. Segundo Bcego (1988) a
degradao do leo bem mais lenta no sedimento do que na gua, inclusive os compostos
mais leves persistem mais tempo no sedimento.

16

Dentre os ecossistemas marinhos-transacionais, situa-se o esturio da Lagoa


dos Patos. Este apresenta caractersticas morfolgicas, geolgicas e hidrofsicas que o
diferem de outros esturios. A regio estuarina classificada como um sistema microtidal,
pois as mars astronmicas apresentam mdia de 0,45 m de amplitude em mdia (Mller,
1996). Esse ambiente local de desenvolvimento e de captura de espcies de importncia
econmica, e, alm disso, integra um dos maiores complexos lacunares do mundo, o
sistema Patos-Mirim.
O esturio da Lagoa dos Patos est inserido na plancie costeira do Rio
Grande do Sul, que constituda de uma costa arenosa baixa e uma das mais amplas
plancies costeiras do Brasil. Estudos realizados por Calliari (1998), demonstram que o
esturio predominantemente composto por grandes bancos de areia e sua profundidade
pode variar entre 1 e 5 m. A maior profundidade observada alcana 18 m no canal que liga
a laguna com o Oceano Atlntico. As enseadas associadas s margens do esturio so
definidas por um nmero elevado de bancos e espores arenosos recurvados, que formam
uma feio tpica das reas rasas, com profundidades menores que 1 m.
Nos esturios, em geral, so desenvolvidas importantes atividades do setor
da pesca, constituindo-se assim em importante fonte de renda da comunidade. Tal
afirmativa confirmada por pesquisas realizadas em torno da atividade pesqueira na costa
do Rio Grande do Sul, onde a pesca oficialmente classificada como pesca artesanal,
costeira e industrial. Os dados obtidos por Reis (1999) indicam que mais de 90% do total
capturado pela pesca artesanal no Rio Grande do Sul originado do esturio da Lagoa dos
Patos e costa adjacente.
Na regio estuarina encontra-se instalado o Porto da cidade do Rio Grande e
duas empresas especficas na rea do petrleo, uma no refino Refinaria de Petrleo
Ipiranga S/A e outra no armazenamento e transporte do petrleo Terminal da Petrobras.
Os terminais martimos da Petrobrs integram-se ao sistema de transporte de petrleo e
derivados, quer para suprir as refinarias de leo cru importado como para escoar parte da
produo de derivados das refinarias. Alm destas empresas ocorre abastecimento de
navios na zona porturia, o que aumenta a probabilidade de ocorrncia de poluio por
hidrocarbonetos do petrleo.

17

Existem ainda outros agentes possveis de causarem poluio que passam


pelo terminal da Petrobras. Griep et al (2001) apresenta o terminal como responsvel pela
importao e exportao de diversos produtos, como leo diesel, petrleo, estireno, cido
fosfrico, cido sulfrico, metanol, hexano, propano (GLP) e amnia. No ano de 1998
verificou-se um montante de 1.531.725,52 toneladas, fator que o torna um ambiente de
caractersticas mltiplas e facilmente impactveis, o que significa afirmar que qualquer
agente de poluio pode acarretar inmeras mudanas na estrutura ecolgica do local.
Existem estudos cientficos acerca da degradao do petrleo em ambientes
marinhos, como as pesquisas realizadas por Bcego (1988), Kennish (1992), Ferreira
(1995), Zanardi (1996), e Nishigima (1999), contudo no h trabalhos especficos a esse
respeito para as condies do esturio da Lagoa dos Patos.
At a presente data no so verificados estudos envolvendo a degradao do
petrleo ou de leo diesel com vistas a analisar a evoluo e a persistncia de
hidrocarbonetos nos sedimentos do Esturio da Lagoa dos Patos. As pesquisas que podem
apresentar afinidades a este estudo tinham como objetivo a verificao dos nveis de
contaminao dos hidrocarbonetos alifticos e dos aromticos policclicos nos sedimentos
marginais do esturio. Trabalhos de Baisch et al (2000), Zamboni (2000), Cordeiro (2003)
e Garcia (2004) mostram que h uma importante contaminao nas zonas estuarinas
marginais, mas, em geral, os canais de navegao esto livres desse processo.
O presente trabalho tem por objetivo suprir a falta de conhecimento sobre o
processo de degradao do petrleo no ambiente estuarino da Lagoa dos Patos. Atravs de
um derrame induzido onde foram examinados a evoluo e os constituintes remanescentes
no sedimento como meio de estabelecer de forma mais exata o impacto ambiental.

18

2- Objetivos
Objetivo Geral:
- Estudar a degradao e o tempo de permanncia dos produtos de degradao em um
derrame de leo diesel, em sedimento do Esturio da Lagoa dos Patos.
Objetivos Especficos:
- Verificar a concentrao final da frao aliftica dos hidrocarbonetos do leo diesel no
sedimento;
- Verificar a concentrao final da frao aromtica dos hidrocarbonetos do leo diesel no
sedimento;
- Fazer uma comparao no ambiente onde foi utilizado dispersante qumico, com ambiente
onde foi utilizado biossurfactante e o meio ambiente onde no foi empregada a remediao;
- Gerar dados de controle de possveis impactos no Esturio da Lagoa dos Patos, a fim de
ser utilizado no Programa de Recursos Humanos da ANP para o setor do petrleo e gs.

3- Reviso Bibliogrfica
3.1- Histrico de acidentes envolvendo derrame de petrleo e seus
derivados
A contaminao de solos e do ambiente hdrico por hidrocarbonetos,
geralmente por perdas ou rompimentos de dutos, ou por acidentes ocorridos no seu
transporte, tem um efeito pronunciado sobre as propriedades do ambiente contaminado,
com processos de toxidade sobre os microorganismos e mortandade dos organismos.
Um dos ltimos acidentes de grandes propores ocorrido foi o do petroleiro
Prestige, com bandeira de Bahamas. O navio carregava 77 mil toneladas de petrleo e se
partiu na costa da Espanha, porm inicialmente vazaram 40 mil toneladas atingindo
centenas de quilmetros de costa e matando peixes e aves, havendo o risco de ser uma das
piores catstrofes ecolgicas j vistas, atingindo a economia do local. As propores deste
acidente foram to grandes que o leo atingiu as costas portuguesas e francesas,
prejudicando as atividades pesqueiras e tursticas da regio (Martins, 2005).
No Brasil um dos primeiros casos de vazamento de petrleo registrado o
ocorrido no Canal de So Sebastio, litoral norte de So Paulo, em 1955, quando era feito o
transbordo de petrleo de navios maiores para menores, pois estes tinham melhores

19

condies de calado para entrarem no Porto de Santos. Porm, o primeiro grande derrame
registrado ocorreu em 1974 (anexo 1), quando o petroleiro Takimyia Maru chocou-se
contra uma rocha no Canal de So Sebastio, causando vazamento aproximado de 6.000
ton. de petrleo (Poffo, 2000).
Atualmente um dos acidentes que tomou propores enormes foi da
plataforma P-36 na Bacia de Campos em 2001, que culminou em uma lista de desastres. No
perodo que antecedeu o desastre da plataforma P-36, de 1998 a 2001, ocorreram 99
acidentes com 32 mortes e aproximadamente um milho de litros de leo foram derramados
na Baa de Guanabara-RJ.
Na cidade do Rio Grande-RS o problema com vazamentos de petrleo e seus
derivados tambm acontece, porm em menor escala, tais como:

Maro de 2000- Cerca de 18 mil litros de leo cru vazaram em Tramanda, no


litoral gacho, quando eram transferidos de um navio petroleiro para o Terminal
Almirante

Soares

Dutra

(Tedut),

da

Petrobras,

na

cidade.

(http://www1.folha.uol.com.br/folha/cotidiano - acesso dia 15/12/2004)

Maro de 2001- No Porto de Rio Grande (RS), uma barcaa derramou 430
litros de leo combustvel, contaminando as guas do canal e provocando a
morte de peixes. (http://www1.folha.uol.com.br/folha/cotidiano - acesso dia
15/12/2004).

Junho de 2004- Especialistas do Laboratrio de Oceanografia Geolgica


emitiram parecer tcnico sobre pequeno derrame de leo OCMAR, da
embarcao Guarapuava, ocorrido em maio de 2004, quando em operao de
descarga, no terminal da TRANSPETRO Rio Grande.

Setembro de 2004- leo queimado foi derramado no Arroio Carah, afluente


da Lagoa dos Patos. O volume derramado no foi informado. (Jornal Zero Hora,
13 de setembro de 2004).

Dezembro de 2004- Uma mancha de leo foi detectada no canal de navegao


do porto de Rio Grande (RS). A fonte no foi identificada e esta mancha pode
ter sido provocada por um vazamento de 1000 L de leo. (Jornal Agora, 7 de
dezembro de 2004).

20

3.2- Tempo de residncia relacionados aos processos de intemperizao


do petrleo no mar
Quando o petrleo entra em contato com gua do mar, vrios processos
fsico-qumicos e biolgicos so passveis de ocorrer e a intensidade de cada um deles
varia ao longo do tempo. De acordo com Clark (1989) e Marques Jr. (2002), existem
alguns processos que ocorrem com o petrleo, tais como: espalhamento, evaporao,
dissoluo, disperso, emulsificao, fotoxidao, sedimentao e biodegradao do
petrleo.
Todos os processos de intemperizao dependem das condies climticas e
do tipo de petrleo. A Figura 1 demonstra esquematicamente cada um dos processos
mencionados, o tempo de durao de cada um e sua intensidade.

Figura 1- Tempo e fatores que agem na intemperizao do leo (Clark, 1989 adaptado)

O espalhamento o processo fsico que ocorre na interface gua-ar e


caracterizado pela formao de um filme superficial. Quanto mais leve for o leo melhor
ser seu espalhamento, os fatores que influenciam o espalhamento em derrame de leo so
tenso superficial, peso especifico e viscosidade (USEPA, 2001).

21

A evaporao a transferncia dos hidrocarbonetos da forma lquida para a


gasosa, sendo este um dos primeiros processos de remoo que ocorre quando o leo
derramado. Existem alguns fatores que interferem na velocidade da taxa de evaporao:
temperatura da gua e do ar, intensidade de radiao solar, viscosidade do leo e velocidade
do vento. solubilizao ou dissoluo como nos dois processos anteriores, ocorre com
maior intensidade nas primeiras horas aps o derramamento e tende a ser mais efetiva para
compostos com menor peso molecular, pois so mais solveis do que as fraes mais
pesadas.
A emulsificao caracterizada pela agregao e pelo aumento de peso e
volume de partculas, formando o chamado mousse de chocolate. A sedimentao do
leo pode ocorrer pela adsoro ao material em suspenso, e com isso induz o aumento da
densidade especfica, atravs da evaporao e dissoluo. Enquanto que a biodegradao
consiste na degradao do petrleo por ao de microrganismos.
Entre os processos citados acima, os mais importantes durante o perodo
inicial de um derrame de petrleo no mar so o espalhamento, a evaporao, a disperso, a
emulsificao e a dissoluo. Estes processos juntos so responsveis por at 50% da taxa
de decaimento da concentrao inicial de leo no mar nas primeiras 24 h (ITOPF, 1987;
Milanelli, 1994).
Em geral, quanto maior o nmero de tomos de carbono do composto
presente no petrleo, maior ser sua persistncia no ambiente, mais lenta ser sua
evaporao e a sua solubilidade e menor ser a sua susceptibilidade biodegradao
(Marques Jr., 2002).

3.3- Caracterizao dos hidrocarbonetos do petrleo


O petrleo consiste em uma mistura complexa de milhares de componentes,
no estado gasoso, lquido e slido (Kennish, 1992). Uma definio precisa da composio
do petrleo impossvel, uma vez que no existem dois leos exatamente iguais (Tissot e
Welt, 1984).
A palavra petrleo refere-se aos derivados de matria orgnica,
principalmente de origem biolgica, que foram produzidos atravs de processos geolgicos
e biolgicos resultando na produo e acumulao de milhares de diferentes tipos de

22

molculas orgnicas em sedimentos antigos. O leo cru e o gs natural (metano) juntos so


denominados petrleo (UNEP, 1991).
Entre os constituintes do petrleo, os hidrocarbonetos, so compostos
orgnicos formados por carbono e hidrognio, estes hidrocarbonetos apresentam
caractersticas apolares (hidrfobos), ou seja, no apresentam atrao pela gua (polar).
Desse modo, eles tm uma maior tendncia de associao s fases slidas, tais como as
partculas em suspenso, os tecidos biolgicos e os sedimentos.
Em alguns tipos de leos, os hidrocarbonetos chegam a atingir at 98 % da
composio total (Clark e Brown, 1977; Bcego, 1988). Alm dos hidrocarbonetos existem
outros componentes em menor quantidade, tais como, enxofre, nitrognio e oxignio. H
ainda metais trao como vandio, nquel, sdio, clcio, cobre e urnio.

3.4- Classificao qumica e fsica dos hidrocarbonetos do petrleo


As principais classes de hidrocarbonetos constituintes do petrleo so os alifticos e
os cclicos. Os hidrocarbonetos alifticos se dividem em: n-alcanos ou parafinas, alcanos
ramificados ou isoprenides e alcenos. Os hidrocarbonetos cclicos so divididos em ciclos
alcanos ou naftenos e aromticos. Em mdia, o petrleo apresenta cerca de 30 % de
alcanos, 50 % de ciclo alcanos e 15 % de aromticos (UNEP, 1991).
Hidrocarbonetos

Alifticos

Alcanos

Alcenos

Cclicos

Isoprenides

Naftenos

Aromticos

23

Hidrocarbonetos alifticos compreendem cadeias carbnicas com pelo menos duas


extremidades, sem nenhum ciclo ou anel.
I- Alcanos so hidrocarbonetos de cadeia aberta e saturada que apresenta somente ligao
simples entre os tomos de carbono. O termo parafinas vem do latim parum = pequena +
affinis = afinidade, e significa pouco reativas. O menor dos alcanos metano (Figura 2).
Algumas das propriedades fsicas dos alcanos que a temperatura ambiente (25 0C) at 4
tomos de carbono em cadeia linear esto na forma de gases, o n-alcanos de C5 at C17 so
lquidos e os n-alcanos de com mais de 18 tomos de carbono so slidos.
H
H

Figura 2- Frmula estrutural plana do metano

II- Alcenos so hidrocarbonetos de cadeia aberta que apresenta uma ligao dupla entre os
tomos de carbono. Os alcenos no esto presentes no petrleo bruto, mas so encontrados
nos produtos refinados do petrleo. O alceno mais simples o etileno ou eteno (Figura 3).

Figura 3- Frmula estrutural plana do eteno

III- Isoprenides so hidrocarbonetos parafnicos que apresentam ramificao em um ou


mais tomos de carbono. Esse grupo apresenta uma grande importncia nos estudos
geoqumicos, tais como o isobutano e o fitano (Figura 4) e na produo da gasolina.

Figura 4- Frmulas estruturais planas, respectivamente, do metil-propano e do fitano

24

Hidrocarbonetos cclicos compreendem cadeias carbnicas fechadas.


I- Naftenos so hidrocarbonetos de cadeia fechada e saturada, so geralmente estveis e
no so solveis em gua, um exemplo o ciclo hexano (Figura 5).

Figura 5- Frmula estrutural plana do ciclo hexano

II- Aromticos so hidrocarbonetos de cadeia fechada que apresentam na sua estrutura


bsico um anel com seis tomos de carbono com ligaes duplas alternadas entre eles, esta
unidade bsica chamada de benzeno (Figura 6).

ou

Figura 6- Frmula estrutural do benzeno

Os hidrocarbonetos que possuem dois ou mais anis so denominados


hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA), estes hidrocarbonetos so considerados os
mais txicos componentes do petrleo e esto associados a efeitos carcinognicos (Tabela
1). Muitos dos HPAs de baixo peso molecular so solveis em gua, aumentando o risco de
contaminao.

25

Tabela 1 Estruturas qumicas e efeitos txicos dos 16 HPAs considerados como poluentes de
prioridade ambiental pela EPA (Agncia de Proteo Ambiental) norte americana (Sims et al, 1988).

Nomenclatura (IUPAC)

Estrutura

Naftaleno

Efeito

txico

Nomenclatura (IUPAC)

Acenaftileno

Acenafteno

mutagnico

Fluoreno

Antraceno

mutagnico

Fenantreno

Fluoranteno

carcinognico

carcinognico

Pireno

Benzo(b)

benzo(a)pireno

Benzo(a)antraceno

txico e mutagnico

carcinognico

carcinognico
e mutagnico

carcinognico
e mutagnico

carcinognico

Benzo(k)
fluoranteno

Dibenzo(a,h)antraceno

e mutagnico

benzo(g,h,i)perileno

mutagnico

e mutagnico

e mutagnico

fluoranteno

Efeito

mutagnico

e mutagnico

Criseno

Estrutura

carcinognico

carcinognico
e mutagnico

carcinognico
e mutagnico

Indeno

carcinognico

26

(1,2,3-cd)pireno

3.5- Biossurfactantes
Os surfactantes so molculas que apresentam uma parte hidroflica e outra
hidrofbica, podendo ser sintticos, quando obtidos a partir de snteses qumicas, ou
biossurfactantes, quando produzidos por microrganismos (Cassidy & Hudak, 2001;
CETESB, 2003).
Os biossurfactantes so produzidos principalmente por microrganismos
aerbicos a partir de uma fonte de carbono. Uma variedade de microrganismos produz
potentes agentes de superfcie ativa, os biossurfactantes, os quais variam nas propriedades
qumicas e no tamanho molecular.
A

capacidade

do

biossurfactante

emulsificar

misturas

de

hidrocarboneto/gua tem sido muito bem documentada. Esta propriedade demonstrada


pelo aumento significativo de degradao de hidrocarbonetos e por isso utilizado na
biorremediao de solos e mananciais contaminados (Lobato, 2000; Crapez et al, 2002). De
acordo com Cameotra & Bollag (2003) os biossurfactantes podem ser utilizados in situ
para emulsificar e aumentar a solubilidade de contaminantes hidrofbicos e desta maneira,
facilitam o acesso dos microrganismos naturalmente presentes no ambiente para que ocorra
a degradao dos compostos hidrofbicos.
Segundo Ascon-Cabrera & Lebeault (1995), citado por Martins (2005), o
crescimento de microorganismos em uma interface de gua e leo favorece o aparecimento
de um biofilme, cuja formao envolve as seguintes etapas, primeiramente os
microrganismos aderem superfcie de grandes gotas de leo devido a hidrofobicidade das
clulas, em seguida as clulas aderidas formam uma camada delgada na interface
leo/gua, extraindo os compostos insolveis em gua da fase oleosa e utilizando os sais
minerais da fase aquosa. Quando as clulas revestem as gotas de leo produzindo
biossurfactantes, a tenso interfacial disponvel reduzida para o crescimento microbiano.
Quando o composto oleoso contido nas gotas desaparece, os microorganismos colonizam
outras gotas.

27

3.5.1 - Processos de biodegradao do petrleo por bactrias e fungos


A biodegradao do petrleo envolve todos os fenmenos de quebra de seus
componentes do petrleo para componentes de menor peso molecular ou mais polares. A
biodegradao completa dos hidrocarbonetos resulta como membros finais o dixido de
carbono e a gua. A biodegradao do petrleo por populaes naturais de
microorganismos representa um dos mecanismos primrios pelo qual os compostos
poluentes so eliminados do meio ambiente. Alguns compostos do petrleo so facilmente
evaporados ou biodegradados, enquanto outros persistem recalcitrantes na natureza.
Existem algumas revises que tratam da degradao de hidrocarbonetos por
microrganismos que incluem os fatores, as vias metablicas, os principais tipos de
microrganismos e os efeitos da contaminao em comunidades microbianas (Atlas, 1977,
1981, 1984; Colwell & Walker 1977; Leahy & Colwell, 1990; Baird, 2002).
Baird (2002) definiu a biorremediao como o uso de microrganismos
vivos para degradar ou eliminar resduos ambientais. A capacidade de certos
microrganismos serem capazes de utilizar hidrocarbonetos como fonte de carbono foi
apresentada por Zobell em 1946. Tambm verificou que estes organismos esto
amplamente difundidos na natureza e que a natureza do leo e as condies ambientais
eram altamente importantes no seu comportamento.
A utilizao dos hidrocarbonetos pelas bactrias constitui um processo em
que esses compostos so paulatinamente oxidados por reaes padronizadas, catalisados
por enzimas (Rodrigues, 1984).
Os microrganismos necessitam de condies ambientais de crescimento. Por
sua vez, a velocidade e a extenso com que os componentes do petrleo so degradados
dependem da existncia de, pelo menos, quatro fatores principais (Rodrigues, 1984, Baird,
2002).
I- Umidade, para facilitar as reaes;
II- Oxignio, para rpida oxidao dos hidrocarbonetos e outros compostos do petrleo, sob
condies anaerbicas, a biodegradao mais lenta e normalmente efetuada por bactrias
sulfato-redutoras;
III- Contato leo-gua, devido relativa insolubilidade do leo na gua, tal contato controla
a velocidade de oxidao e da degradao;

28

IV- Presena de nutrientes (fosfatos, sulfatos, nitratos, etc) para o desenvolvimento


microbiano.
Apesar das bactrias serem provavelmente as maiores responsveis pela
biodegradao de hidrocarbonetos no ambiente, os fungos e as leveduras (Cerniglia et al,
1977; Oudot et al, 1987; Macgillivary & Shiaris, 1993), as cianobactrias, as algas e
mesmo os protozorios apresentam capacidade de degradao (Cerniglia et al, 1979).
Como a degradao de hidrocarbonetos para CO2 envolve uma reao de
oxidao, os organismos, em sua maioria, so aerbios. O destino dos hidrocarbonetos,
alm da produo de CO2 na degradao total, pode tambm oferecer caminhos
alternativos. Eles podem ser armazenados como glbulos e alguns podem ser incorporados
como biomassa (Bertrand et al, 1983; Dumenil et al, 1988), porm os produtos
parcialmente oxidados podem ser mais txicos e mutagnicos que o hidrocarboneto
original. Portanto existe a preocupao que ocorra um aumento temporrio na toxidade e
mutagenicidade durante o processo de biodegradao (Wang et al, 1990).
3.5.2- Biodegradao da frao saturada
Os n-alcanos so considerados os mais facilmente degradveis e j foi
comprovada a biodegradao de at C44 (Haines & Alexander, 1974). A biodegradao dos
n-alcanos procede normalmente por um ataque monoterminal: h formao de um lcool
primrio, seguido de um aldedo e um cido carboxlico (Mackenna & Kallio, 1964; Van
Eyk & Bartels, 1968), conforme mostrado na Figura 7. O cido carboxlico degradado via
-oxidao com a formao de cidos graxos com dois carbonos a menos e a formao de
acetil-coenzima A, com liberao eventual de CO2. Alguns cidos graxos txicos, podem se
acumular durante o processo de biodegradao (Atlas & Bartha, 1973)
O

+ O2

n-alcano

OH

lcool primrio

aldedo

OH

cido carboxlico

Figura 7- Biodegradao de um n-alcano

Os alcanos ramificados sobrem -oxidao, como via degradativa mais


comum, com formao de cidos dicarboxlicos (Fall et al, 1979). Os grupos metil
aumentam a resistncia dos hidrocarbonetos ao ataque microbiano.

O ciclo alcano

particularmente resistente a biodegradao (Chosson et al, 1991), porm h estudos


29

mostrando que hidrocarbonetos cclicos, at seis anis condensados, podem ser degradados
(Walker et al, 1975).
3.5.3- Biodegradao da frao aromtica
Os compostos aromticos de at trs anis so degradados mais facilmente.
Tipicamente a degradao bacteriana envolve a ao de uma dioxigenase que gera a
formao de um diol, com subseqente clivagem e formao de um dicido. Os compostos
aromticos mais leves esto sujeitos evaporao e degradao microbiana no estado
dissolvido. O ataque enzimtico pode ser no substituinte alquil ou diretamente no anel
(Gibson, 1971; Rosato, 1997). H linhagens de microrganismos capazes de degradar
compostos com cinco ou mais anis aromticos. Geralmente a oxidao dos
hidrocarbonetos aromticos se processa produzindo principalmente fenis, conforme o
descrito na Figura 8.
O
CH 2OH

C
H

OH
fenantreno

saligeno

OH

OH

OH
salicilaldedo

cido
saliclico

OH

OH
1,2-dihidrxi
benzeno

Figura 8- Biodegradao do fenantreno

3.5.4- Microrganismos capazes de degradar hidrocarbonetos


A capacidade de degradar hidrocarbonetos do petrleo formada por
diversos gneros microbianos, mas os principais so as bactrias e os fungos. Eles so
encontrados em ambientes marinhos, de gua doce e no solo. Os organismos podem
metabolizar somente um nmero limitado de hidrocarbonetos isoladamente, de forma que
requerida uma mistura de populaes com capacidade enzimtica para degradar todos os
hidrocarbonetos encontrados no petrleo.
So conhecidos 25 gneros de bactrias e 27 de fungos, que fazem a
degradao dos hidrocarbonetos no ambiente marinho (Floodgate, 1984), enquanto que nos
solos so registrados 22 gneros de bactrias e 31 de fungos (Bossert & Bartha, 1984;
Rosato, 1997). Os fungos parecem ser mais importantes na biodegradao de
hidrocarbonetos presentes em solos (Jones & Eddington, 1968; Rosato, 1997). Em geral, as

30

bactrias e leveduras apresentam capacidade decrescente de degradao de acordo com o


aumento da cadeia carbnica ao passo que os fungos no exibem degradao preferencial
de tamanho (Walker et al, 1975).
3.5.5- Efeito de fatores fsicos e qumicos na biodegradao
As taxas de biodegradao do leo so influenciadas principalmente pela
temperatura, disponibilidade de nutrientes, pH e nveis de oxignio (Kennish, 1996). De
acordo com Kennish, 1997, os alcanos de baixo peso molecular degradam-se rapidamente
(em at uma semana), enquanto que os hidrocarbonetos de alto peso molecular (alifticos e
aromticos) sofrem lenta degradao (Tabela 2).
Tabela 2 Taxas de biodegradao de algumas espcies de HPAs (USEPA, 2000)

Espcies
Naftaleno
Antraceno
Fluoreno
Benzo(a)antraceno
Pireno
Criseno
Benzo(a)pireno

Nmero de
anis
2
3
3
4
4
4
5

Meia Vida
(dias)
14 320
~ 130
37
1100
238
510
1400

I- Temperatura a temperatura influencia a biodegradao pelo efeito na natureza fsica e


qumica do petrleo e tambm pela alterao na populao microbiana. A biodegradao
dos hidrocarbonetos pode ocorrer numa faixa de temperatura relativamente grande, de 00 a
700C (Sorkhoh et al, 1993). De modo geral, baixa temperatura, a viscosidade do leo
aumenta, a volatilizao dos alcanos de cadeia curta reduzido, o que leva a um processo
de biodegradao mais lento. A atividade enzimtica apresenta um melhor metabolismo
para os hidrocarbonetos a uma temperatura mxima de 30-400C.
II- Nutrientes o petrleo composto principalmente de hidrocarbonetos, que podem
servir como fonte de carbono para o desenvolvimento de microorganismos. Porm, para
que se processe a biodegradao h necessidade de outros nutrientes como o nitrognio e o
fsforo, os quais so requeridos em maior quantidade. H tambm a necessidade de
micronutrientes tais como enxofre, ferro, magnsio, clcio e sdio. A disponibilidade
desses elementos varia em diferentes ambientes e eles podem ser adicionados para
estimular a biodegradao.
31

III- Outro fator a ser considerado no solo a variao do pH com valores de 2,5 a 11 para
diferentes tipos de solos. A maioria das bactrias e fungos apresentam uma melhor taxa de
desenvolvimento em pH neutro, podendo ocorrer o dobro da taxa de biodegradao com a
correo do pH do solo (Verstraete et al, 1976; Bosset & Bartha, 1984; Rosato, 1997).

3.6- Dispersantes Qumicos


Os dispersantes so formulaes qumicas de natureza orgnica, destinadas a
reduzir a tenso superficial entre o leo e a gua, auxiliando a disperso do leo em
gotculas no meio aquoso. So constitudos por ingredientes ativos, denominados
surfactantes, cuja molcula composta por uma cadeia orgnica, basicamente apolar, com
afinidade por leos e graxas (oleoflica) e uma extremidade de forte polaridade,
com afinidade pela gua (hidroflica). Alm dos surfactantes, os dispersantes tambm so
constitudos por solventes da parte ativa que permitem a sua difuso no leo (CETESB,
2003). No Brasil existe uma regulamentao para o uso dos dispersantes qumicos que a
resoluo do CONAMA no 269 de 14 de setembro de 2000. Os dispersantes so,
potencialmente, aplicveis em situaes de derrames de leo, visando proteo de
recursos naturais e scio-econmicos sensveis como os ecossistemas costeiros e marinhos.
Sua aplicabilidade, entretanto, deve ser criteriosamente estabelecida e aceita somente se
resultar em menor prejuzo ambiental, quando comparado ao efeito causado por um
derrame sem qualquer tratamento, ou empregado como opo alternativa ou, ainda,
adicional conteno e recolhimento mecnico no caso de ineficcia desses procedimentos
de resposta. A eficincia do dispersante, entre outras consideraes, est relacionada aos
processos de intemperizao do leo no mar. leos intemperizados tornam-se mais
viscosos e podem tambm sofrer emulsificao, o que diminui a eficincia desses agentes
qumicos. Dessa forma, caso seja pertinente utilizao do dispersante e considerando o
cenrio do derrame, sua aplicao, tanto quanto possvel, deve ser realizada durante as
operaes iniciais do atendimento, criteriosa e preferencialmente nas primeiras 24 horas.
Quando um dispersante aplicado sobre uma mancha, as gotculas de leo presentes so
circundadas pelas substncias surfactantes, estabilizando a disperso (Figura 9), o que ajuda
a promover uma rpida diluio pelo movimento da gua. O dispersante reduz a tenso
superficial entre a gua e o leo, auxiliando a formao de gotculas menores (Figura 9), as
quais tendem tanto a se movimentar na coluna dgua, como permanecer em suspenso na
32

superfcie, acelerando o processo natural de degradao e de disperso, favorecendo desta


forma a biodegradao.

Figura 9 - Representao da ao do dispersante sobre uma mancha de leo (IPIECA, 1993).

Os dispersantes, quando aplicados apropriadamente, podem ajudar a


transferir para a coluna dgua um grande volume de leo que estava na superfcie,
obtendo-se resultados com maior rapidez do que os mtodos mecnicos de remoo. Os
dispersantes, em geral, tm pouco efeito sobre leos viscosos, pois h uma tendncia do
leo se espalhar na gua antes que os solventes e agentes surfactantes, componentes dos
dispersantes, possam penetrar na mancha. A maioria dos produtos atualmente disponveis
possui efeito reduzido se aplicados quando o processo de intemperizao j tiver sido
iniciado e se a mancha estiver sob o aspecto de emulso viscosa (mousse de chocolate).

33

Captulo II
Material e Mtodos

34

4- Material e Mtodos
4.1- O experimento e stio de estudo
Para a realizao desse estudo foi realizada uma simulao de derrame de
leo diesel, em um stio localizado na Ilha dos Cavalos (Figura 10), a qual integra o
Esturio da Lagoa dos Patos. Esse stio foi escolhido devido ser uma regio protegida de
efeitos externos e segura para a execuo de um derrame controlado de leo diesel. Alm
disso, o stio apresenta-se como um segmento ambiental representativo de toda a regio
estuarina da Lagoa dos Patos. Essa regio possui vegetao do tipo Marisma que, de acordo
com a classificao para diferentes ambientes costeiros, apresenta o maior ndice de
sensibilidade a derramamento de leo e portanto estes ambientes so reas de prioridade
mxima de proteo (Gundlach & Hayes, 1987).

Figura 10- Mapa de localizao do esturio da Lagoa dos Patos e localizao da Ilha dos Cavalos

Foram construdas quatro caixas de um metro quadrado cada, de lminas de


ao inox de 60 centmetros de altura, sendo que 20 centmetros foram enterrados (Figuras
11 e 12). Logo aps, foi efetuado um derrame de leo diesel em cada uma das trs caixas.

35

Em uma delas foi colocado um biossurfactante produzido pelo fungo Aspergillus


fumigattus, em outra caixa foi adicionado um dispersante qumico da marca X, enquanto a
outra foi mantida apenas com o leo para ser utilizada como controle.

leo e
dispersante
leo diesel

Branco

leo e
Biossurfactante

Figura 11- Esquema do experimento.

Figura 12- Local das caixas no ambiente em estudo

36

4.2- Tipo de leo usado no experimento


Para este experimento, foram utilizados 4 litros de leo diesel interior B (1
litro para cada caixa). O produto foi fornecido pela Refinaria de Petrleo Ipiranga S.A.
(anexo 2) e apresentava as seguintes caractersticas bsicas:
Massa especfica a 20 C, Kg/m3: 825,4
Enxofre (%): 0,036
gua e sedimentos: traos
Aspecto: lmpido e isento de impurezas
Cinzas (%): 0,0020
De acordo com a USEPA (2001) este leo classificado como classe A,
caracterizado por ser altamente fluido composto predominantemente de hidrocarbonetos de
baixo peso molecular, que se espalham pela superfcie da gua. Este leo o mais utilizado
como leo combustvel e transportado por trfego rodovirio (caminhes), ferrovirio e
hidrovirio (menor escala).

4.3- Produo do biossurfactante pelo Aspergillus fumigattus


4.3.1- Fermentao em Estado Slido
As fermentaes foram realizadas em erlenmeyers de 1000 mL, utilizando o
microrganismo Aspergillus fumigattus. O meio fermentativo foi composto por casca e
farelo de arroz desengordurado, que foram cedidos pela IRGOVEL Indstria
Riograndense de leos Vegetais. O farelo foi modo e peneirado, de onde foram recolhidas
as partculas menores que 500 mm e maiores que 420 mm, Tyler 32 e 35, respectivamente.
Alm da casca e do farelo de arroz, tambm fizeram parte do meio fermentativo uma
soluo de nutrientes composta por MgSO4.7H2O, NaNO3, KH2PO4, extrato de levedura e
peptona, como fonte de carbono tambm foi utilizado 1% de leo diesel, fornecido pela
Refinaria de Petrleo Ipiranga. A fermentao foi realizada por um perodo de 144 horas.
As condies fsico-qumicas utilizadas nas fermentaes foram, umidade de 50%,
temperatura de 30 oC, pH 4,5 e concentrao inicial de esporos de 4 x 106 esporos/ g de
meio.

37

4.4- Limpeza dos materiais e preparao dos reagentes


A vidraria utilizada foi previamente lavada com detergente especial (nextran alcalino da Merck), gua destilada e a cetona P. A. e com n-hexano imediatamente
antes do uso.
Para a montagem da coluna cromatogrfica para realizar o cleun up, os
reagentes inorgnicos, tais como sulfato de sdio (Na2SO4) e slica (SiO2), foram
previamente calcinados em mufla a 400C, por 6 horas, para a eliminao de resduos
orgnicos que pudessem interferir na realizao dos testes.
Utilizou-se fragmentos de cobre metlico para eliminar o excesso de enxofre
das amostras. O cobre foi limpo e ativado com uma soluo de cido clordrico 3 N,
posteriormente lavada com gua destilada, lcool 99,6% e n-hexano, sendo armazenados
at o momento da sua utilizao imersos em n-hexano (Lima, 2004).
Foram realizados brancos de amostras para se verificar a pureza dos
solventes orgnicos (diclorometano e n-hexano) e reagentes inorgnicos (Na2SO4, cobre
ativado e slica), bem como a limpeza da vidraria.

4.5- Amostragem de sedimento


O derrame do leo diesel foi monitorado durante um perodo de seis meses.
As amostras foram coletadas em intervalos crescentes de tempo: 1dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias,
15 dias, 30 dias, 60 dias, 90 dias, 120 dias, 150 dias e 180 dias aps o incio do
experimento em 08 de outubro de 2003. As coletas para as anlises microbiolgicas foram
avaliadas por um perodo de 90 dias, com datas de coletas 1 dia , 2 dias, 7 dias, 14 dias, 21
dias, 28 dias, 60 dias e 90 dias aps o incio do experimento.
Na amostragem dos sedimentos foi coletada, sempre de forma aleatria, a
parte superior da estrutura sedimentar (2-3 cm), a qual foi imediatamente acondicionada
em recipientes especficos (vidro para os hidrocarbonetos e em saco plsticos para os
nutrientes) e congeladas, conforme mtodo descrito em Zanardi (1996).

4.6- Anlise in situ


Durante as coletas foram feitas medidas de pH e Eh (potencial redox) no
segmento superior do sedimento ( 2-3 cm). Para realizar as medidas do pH foi utilizado
um eletrodo combinado de vidro tipo baioneta com um pHmetro digital marca Oakton
38

(modelo pH6/00702-75, Acorn Series) e com leituras expressas em escala 0,01. O


potencial redox (Eh) eletrodo combinado de platina com leituras expressas em escala de
1 mV, previamente calibrado com padres de pH 4 e 7.

4.7- Anlise granulomtrica e porosidade


A classificao granulomtrica do sedimento foi efetuada atravs dos
mtodos tradicionais de peneiramento da frao grosseira e pipetagem da frao fina (<
0,063 mm) segundo procedimento descrito em Suguio (1973). Para as anlises
granulomtricas as amostras foram inicialmente lavadas, para retirada dos sais, secas em
estufa a 60 0 C e quarteadas. Os resultados obtidos da classificao granulomtrica foram
classificados em cascalho, areia, silte e argila atravs do software SISGRAN. A
porosidade foi feita no laboratrio de sedimentologia da FURG, seguindo o mtodo
descrito por Hardisty (1990).

4.8- Contagem de bactrias e fungos


As bactrias foram inoculadas em profundidade, em placas de petri com
Agar Plate Count, nas diluies 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 e 10-5 em duplicata. Estas foram
incubadas por 48 h e ento realizada a contagem nas placas que continham entre 20 e 250
colnias. Os clculos da contagem das bactrias foram realizadas segundo ABNT (1997).
Os fungos inoculados por espalhamento em superfcie, em placas de petri
com Agar DRBC, nas diluies 10-1, 10-2, 10-3, 10-4 e 10-5 em duplicata. Estes foram
incubados entre 96 e 120 h e a contagem foi realizada a partir das 48 h nas placas que
continham entre 10 e 100 colnias. Os clculos da contagem dos fungos realizados segundo
a ABNT (1997).

4.9- Anlise dos nutrientes


Para a anlise dos nutrientes: carbono orgnico total, nitrognio total e
fsforo total, depois de realizada a coleta, o sedimento foi seco a uma temperatura 80 0C,
quarteado e macerado com o uso de um pistilo e graal de gata.

39

4.9.1- Carbono orgnico total (COT)


O carbono orgnico total dos sedimentos foi analisado de acordo com o
mtodo de Strickland & Parsons (1972) e modificado por Gaudette et al. (1974).
Pesa-se 0,1 g de sedimento e adiciona-se cido fosfrico e a soluo
aquecida em chapa por 30 min, depois adicionada uma soluo oxidante (dicromato de
potssio e cido sulfrico). Sendo novamente aquecida por mais 60 min. Aps resfriar a
soluo diluda com 50 mL de gua destilada, adiciona-se o indicador (ferrona) e a
soluo titulada com sulfato ferroso amoniacal. A quantidade de Cr no reduzida pela
matria orgnica medida pela titulao. A padronizao da soluo titulante feita com
glicose e o carbono orgnico dosado como carbono de glicose (C6H12O6).
Para saber a preciso do mtodo, as anlises foram feitas em triplicata e
encontrou-se uma preciso mdia de valores para as anlises de COT. Os resultados so
apresentados na forma de mg.kg-1 ou % de carbono orgnico por peso seco da amostra de
sedimento.
4.9.2- Nitrognio total
Para a determinao do nitrognio total foi usado o mtodo Micro-Kjeldhal,
segundo os procedimentos descritos em Bremner (1965). O conceito bsico do mtodo o
da digesto da matria orgnica pelo cido sulfrico e um catalisador, a fim de converter
todo o nitrognio orgnico a sulfato de amnio em soluo. Alcalinizando-se a mistura,
toda a amnia pode ser destilada com vapor dgua e o destilado alcalino que se obtm,
recebido por uma soluo de cido brico, o qual pode ser titulado por cido sulfrico
diludo. Os resultados so apresentados na forma de mg.kg-1 ou % de nitrognio total por
peso seco da amostra de sedimento.
4.9.3- Fsforo total
Para o fsforo total as amostras de sedimento foram calcinadas a uma
temperatura de 500 0C por 1 h e posteriormente digeridas com soluo diluda de cido
clordrico, segundo Ruttenberg (1992). A soluo fica em constante agitao temperatura
ambiente. Depois de 16 horas de agitao so transferidos 5 mL para uma proveta e
adicionados cido ascrbico e molibdato de amnio. A determinao da concentrao

40

feita por colorimetria com a formao do complexo de fosfo-molibdato, com sua leitura em
um espectrofotmetro no comprimento de onda de 885 nm, usando gua como branco.
A preciso do mtodo de P-total foi calculada atravs da reprodutibilidade,
sendo as amostra feitas em trplicas. Os resultados so apresentados na forma de mg.kg-1
ou % de fsforo total por peso seco da amostra de sedimento.

4.10- Anlise dos hidrocarbonetos


As anlises dos hidrocarbonetos alifticos e aromticos foram feitas no
laboratrio de geoqumica da Fundao Universidade do Rio Grande (FURG) e no
laboratrio de qumica analtica ambiental e oleoqumica da Universidade Federal do Rio
Grande do Sul (UFRGS).
As amostras foram descongeladas temperatura ambiente e secas
temperatura mxima de 40 0C em placas de Petri, previamente lavadas. Uma parte da
amostra foi separada e analisada a granulometria.
Os procedimentos utilizados nas anlises dos hidrocarbonetos alifticos e
HPAs, neste trabalho, seguiram as recomendaes do Reference methods for pollution
estudies, no 20: determinations of petroleum hydrocarbons in sediment (UNEP, 1991).
Para a extrao as amostras foram desagregadas em graal de gata. Para
realizar a extrao foi utilizado 25 g de sedimento que foi levado a um extrator soxhlet e
procedeu-se a extrao com uma mistura de solventes n-hexano e diclorometano, ambos da
marca Malinkrodt - grau pesticida, por 8 horas. No balo foi adicionado pedaos de cobre
metlico ativado at no se verificar mais oxidao do mesmo.
O extrato foi ento concentrado em evaporador rotativo a vcuo at
aproximadamente 2 mL. Para a separao dos hidrocarbonetos alifticos (F1) e
hidrocarbonetos policclicos aromticos (F2) foi usado uma coluna cromatogrfica que foi
feita em coluna de vidro, a qual foi preenchida com l de vidro, 2 g de sulfato de sdio, 3,2
g de slica desativada (ativao foi feita com gua, 5% do peso da slica) e no topo mais 2 g
de sulfato de sdio, com a finalidade de filtrar e reter a umidade do extrato.
Feita a separao dos extratos, cada frao foi novamente concentrada no
evaporador rotativo a vcuo at 1 mL e o solvente foi seco, lentamente, em gs nitrognio

41

(N2). Junto com as extraes foi feita uma anlise em branco dos reagentes para verificar a
pureza dos solventes orgnicos e reagentes inorgnicos, assim como a limpeza da vidraria.
A determinao dos hidrocarbonetos alifticos dos sedimentos foi efetuada
por cromatografia gasosa (ionizao de chama) em um equipamento com coluna OV-5
(60m x 0.25 mm x 0.25 m). A temperatura inicial foi de 40 0C, com uma isoterma de 5
minutos, com aumento de 6 0C/min at 280 0C, permanecendo isotrmica por 25 minutos.
A temperatura do injetor e do detector foi de 280 0C. O volume injetado foi de 1 L, com
split de 1:32 e fluxo de 1 mL/min de gs hlio. A energia do detector foi de 1,5 keV. O
limite de deteco do mtodo foi estabelecido em 0,50 ng.g-1 por composto.
A determinao dos hidrocarbonetos policclicos aromticos dos sedimentos
foi efetuada por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa modelo
QP5050A, marca Shimadzu, com coluna OV-5 (60m x 0.25 mm x 0.25 m). A
temperatura inicial foi de 120 0C, com aumento de 10 0C/min at 260 0C, em seguida com
aumento de 3 0C/min at 280 0C, permanecendo isotrmica por 10 minutos. A temperatura
do injetor e do detector foi de 280 0C. O volume injetado foi de 1 L, com split de 1:32 e
fluxo de 1 mL/min de gs hlio. A energia do detector foi de 1,5 a 2 kev. O limite de
deteco do mtodo foi estabelecido em 0,50 ng.g-1 por composto.
Na identificao dos hidrocarbonetos alifticos foi realizada atravs de
injeo de padres e comparao dos espectros de massas dos compostos com os espectros
dos compostos padres ou por comparao com os espectros da biblioteca de dados do
equipamento. Os hidrocarbonetos alifticos analisados foram de C7 a C34, ou seja, desde o
hidrocarboneto com 7 tomos de carbono at hidrocarbonetos com 34 tomos de carbono.
A identificao dos hidrocarbonetos aromticos foi realizada atravs de
injeo de padres e comparao dos espectros de massas dos compostos com os espectros
dos compostos padres ou por comparao com os espectros da biblioteca de dados do
equipamento. A quantificao foi feita pela tcnica de padronizao interna, usando uma
mistura de hidrocarbonetos aromticos deuterados. Os extratos foram diludos em 300 a
5000 L de diclorometano p.a. que continha padro interno cromatogrfico (bifenila) a 10
mg.L-1. A quantificao foi realizada por clculos de comparao de reas de picos do
analito com picos da bifenila e de padres autnticos (bifenila marca Aldrich e mistura
dos 16 PAHs marca Sulpeco). Os Hidrocarbonetos Aromticos Policclicos (HPAs)

42

investigados foram as 16 espcies classificadas como poluentes prioritrios segundo a


USEPA (Environmental Protection Agence of United States): Acenafteno, Acenaftleno,
Antraceno,

Benzo(a)antraceno,

Benzo(a)pireno,

Benzo(b)fluorantreno,

Benzo(g,h,i)perileno, Indeno (1,2,3-cd) pireno, Benzo(k) fluorantreno, Criseno, Dibenzo


(a,h)antraceno, Fenantreno, Fluorantreno, Fluoreno, Naftaleno, Pireno.
Os resultados dos hidrocarbonetos alifticos e dos HPAs foram expressos
em g do composto por kg de sedimento (g.kg-1 ou ppb).

43

4.10.1- Esquema das anlises dos hidrocarbonetos

Coleta do sedimento

Secagem, macerao, quarteamento e pesagem

Extrao soxhlet (n-hexano/DCM) por 8 horas

Concentrao da amostra Evaporador rotativo

Coluna cromatogrfica de adsoro

Concentrao da amostra Evaporador rotativo

F1 GC-FID

F2 GC-MS
44

4.11- Tratamento dos dados


Os parmetros estatsticos foram calculados atravs de softwares (Excel,
Statistica, usando ANOVA e teste Tukey), de acordo com os procedimentos
convencionais.

45

Captulo - III
Resultados e Discusso

46

5- Resultados e Discusso
Neste captulo so apresentados os resultados obtidos a partir do
experimento realizado, o que inclui a anlise da granulometria e porosidade do sedimento,
dos parmetros fsico-qumicos: pH, Eh, carbono orgnico total, nitrognio total e fsforo
total, nmero de microrganismos, assim como dos hidrocarbonetos alifticos e dos
hidrocarbonetos aromticos.

5.1- Anlise granulomtrica


A anlise dos resultados da granulometria so apresentados na forma de
valores mdios de areia, silte e argila para cada caixa do experimento, sendo apresentados
na Tabela 3 no tempo zero.
Tabela 3- Composio mdia (%) do solo acondicionado em cada uma das caixas usadas neste trabalho

Caixas
Dispersante
leo
Biossurfactante

Areia
72,50
66,67
62,74

silte
15,94
17,69
21,82

argila
11,56
15,64
15,44

Total
100
100
100

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 efetuando-se a classificao


granulometria dos sedimentos com emprego do diagrama textural de Shepard (1954),
conforme mostrado na Figura 13. Observa-se que as granulometrias das trs caixas
apresentam caractersticas muito semelhantes com uma predominncia da fcie areia sltica
nas trs caixas. Como as trs caixas apresentam o mesmo tipo de granulometria considerase que esse fator no produza, para fins desse trabalho, diferenas notveis em relao a
taxa de degradao dos hidrocarbonetos entre as diferentes caixas do experimento.

47

Figura 13 - Diagrama triangular de classificao granulomtrica (Shepard, 1954) dos valores mdios do
sedimento da caixa do leo, dispersante e biossurfactante.

Os solos de natureza arenosa so incorrentes, brandos e no so plsticos


nem adesivos, enquanto que os solos argilosos so adesivos, plsticos e firmes. Os solos
arenosos so pouco compressveis, mas a maior porosidade dos solos argilosos torna-os
mais susceptveis compresso. A estrutura do solo descreve o arranjo tridimensional de
suas partculas, usualmente unidas em agregados. Os solos argilosos e orgnicos bem
agregados e ricos em matria orgnica apresentam maior porosidade e menor densidade
aparente.
A porosidade representa a proporo de espaos vazios presente nos
sedimentos, e a porosidade de sedimentos de praia esto na faixa de 0,36 a 0,40 (Hardisty,
1990). A porosidade deve ser levada em conta em questes que envolvam a infiltrao e a
compactao (Cabral, 2000). Estudos de predio de migrao de leo em solos arenosos
salientam que a permeabilidade depende principalmente de propriedades geomtricas do
espao do poro do solo (Kessler & Rubin,1987).
A determinao da porosidade do solo das trs caixas, ao final do
experimento, apontou os valores de 0,46 para a caixa com leo diesel, 0,43 para a caixa
com dispersante qumico e 0,88 para a caixa com o biossurfactante, enquanto a caixa
branco apresentou porosidade 0,45. Os maiores valores de porosidade encontrados para a

48

caixa do biossurfactante, demonstram que o microrganismo do biossurfactante influenciou


na estrutura do solo, aumentando seus poros e conseqentemente diminuindo a densidade
do solo e isso promoveu um comportamento diferente em relao migrao do leo que
porventura no tenha sido degradado.

5.2- Potencial hidrogeninico (pH) e potencial redox (Eh)


Os dados relativos ao pH e potencial redox (Eh) so parmetros muito
importantes para o monitoramento dos sistemas marinhos, pois fornecem dados sobre as
variaes globais das condies ambientais geoqumicas e sobre a tendncia da degradao
dos componentes dos hidrocarbonetos do leo.
Os valores das mdias aritmticas de pH e do Eh dos sedimentos das trs
caixas (leo, leo + biossurfactante e leo + dispersante) e no sedimento branco,
juntamente com os desvios-padro, valores mnimos e mximos so apresentados na Tabela
4 e 5.
Os resultados mostram que os sedimentos apresentam caractersticas cidas,
acentuando-se ao final do experimento. Esse fato foi verificado com mais intensidade para
as caixas com dispersante qumico e somente com leo diesel. De acordo com Dibble &
Bartha, 1979 a biodegradao ocorre com maior eficincia na faixa de pH 7,5 a 7,8.
Delaune (1981) e Hambrick (1980) verificaram que o pH afeta a degradao,
principalmente dos HPAs. As taxas de biodegradao de HPAs diminuram quando o pH
original (8,0) foi alterado para 5,0; 6,5; 9,0.
A manuteno do pH dos sedimentos com carter cido, verificado durante
todo o perodo do experimento, provavelmente tenha sido um fator de grande influncia no
pouco desenvolvimento das bactrias e na proliferao do fungo inoculado na caixa do
biossurfactante, onde os fungos apresentam seu melhor desenvolvimento em faixas cidas
de pH. Verstraete et al (1976) recomenda uma correo do pH do solo, que poderia
ocasionar o dobro da taxa de biodegradao.

49

Tabela 4 Resultado do pH durante o experimento por 180 dias

pH
dias

1o
2o
3o
4o
15o
30o
60o
90o
150o
180o
Mnimo
Mximo

Branco

leo

Dispersante

Biossurfactante

5,5
5,4
5,5
5,3
5,3
5,2
5,3
5,3
5,1
5,1
5,1
5,5

5,6
5,6
5,7
5,9
4,9
5,4
5,5
5,5
5,0
3,4
3,4
5,9

5,4
5,3
5,3
5,2
4,8
5,2
5,3
5,2
4,9
3,4
3,4
5,4

5,3
5,3
5,4
5,4
5,2
5,3
5,2
5,3
5,3
4,0
4,0
5,4

O potencial de oxidao-reduo (potencial redox) dos solos mede o seu


estado de oxidao. Nos solos bem arejados os microrganismos oxidam a matria orgnica.
Os parmetros estatsticos de Eh apresentados na Tabela 5 mostram que os sedimentos
apresentam condies fortemente oxidantes. Isto um fator que influencia a taxa de
degradao do leo diesel, pois quanto mais oxidante o sedimento mais rpido a sua
degradao do leo.
Por exemplo, cerca de 85 mil toneladas de solo contaminado com gasolina,
petrleo e graxa proveniente de uma planta de combustvel de Toronto foram
descontaminadas envolvendo o solo em plstico e em seguida bombeando ar, gua e
fertilizante, com o objetivo de promover a multiplicao da populao de bactrias
aerbicas e conseqentemente eliminar os hidrocarbonetos, este processo durou apenas trs
meses (Baird, 2002).

50

Tabela 5 Resultados Eh (potencial redox) durante o experimento por 180 dias

Eh

Branco

leo

Dispersante

Biossurfactante

74
73
73
75
76
71
77
80
121
120
71
121

68
65
65
44
103
67
88
85
108
199
44
199

77
78
79
86
110
84
89
91
116
199
77
199

74
75
75
75
77
80
77
81
90
167
74
167

Dias

1o
2o
3o
4o
15o
30o
60o
90o
150o
180o
Mnimo
Mximo

5.3- Monitoramento microbiolgico


O acompanhamento microbiolgico foi desenvolvido pelo laboratrio de
Engenharia Bioqumica da FURG num perodo de 90 dias, com o objetivo de observar o
impacto do derrame sobre a microbiota e sua eventual contribuio na degradao dos
hidrocarbonetos. O procedimento foi realizado neste intervalo de tempo porque ao final
deste perodo foi atingida a estabilizao da microbiota do ambiente estudado.
Os dados quantitativos mostram como ocorreu a distribuio dos fungos
(bolores e leveduras) e bactrias durante o experimento, porm muitas vezes foram
utilizados dados qualitativos para uma melhor caracterizao da situao da microbiota
nativa do sedimento. Em alguns casos a contagem de fungos permanecia constante, porm
apenas uma determinada espcie predominava. A Tabela 6 apresenta os resultados
quantitativos das contagens de fungos e bactrias durante os 90 dias de coleta, em cada um
dos experimentos.

51

Tabela 6- Contagem de fungos e bactrias em cada um dos ensaios

Experimento

Microrganismo
(ufc/g)
Branco
Bolores
Leveduras
Bactrias
Diesel
Fungos
Bactrias
Biossurfactante
Fungos
Bactrias
Dispersante
Bolores
Leveduras
Bactrias

1 dia

28 dias

90 dias

2,5 x 104
1,3 x 104
5,6 x 105
6,0 x 104
1,0 x 105
4,5 x 106
2,2 x 106
2,2 x 104
6,6 x 104
4,2 x 104

3,0 x 104
9,5 x 103
1,6 x 105
1,2 x 104
1,2 x 105
3,1 x 106
1,4 x 106
3,7 x 104
8,7 x 104
8,9 x 104

1,0 x 105
1,4 x 104
8,4 x 104
9,0 x 104
1,9 x 105
3,5 x 106
1,2 x 106
1,9 x 104
8,6 x 104
1,1 x 105

5.3.1- Experimento com leo diesel


Observa-se que a quantidade de bactrias foi afetada nos primeiros 30 dias
de experimento, provavelmente este impacto foi ocasionado pela toxicidade que o leo
diesel representada a estes microrganismos Martins (2005).
Avaliando os dados somente de forma quantitativa observa-se que o leo
diesel no teve um impacto grande sobre a microbiota fngica, porm ao fazer uma anlise
qualitativa, observou-se que uma determinada espcie de fungo filamentoso branco
predominou durante os primeiros 30 dias do experimento, perodo que o solo esteve mais
impactado com o derrame. Aps este tempo, o solo comeou a regenerar e a microbiota
passou a se assemelhar a existente na caixa controle
5.3.2- Experimento com o biossurfactante
Neste experimento foi utilizado o farelo fngico juntamente com o
biossurfactante. Durante a contagem observou-se o domnio quase que total do Aspergillus
fumigattus sobre outros fungos, os demais fungos da microbiota local foram inibidos pela
grande concentrao deste microrganismo. Mesmo depois de 90 dias, a concentrao de A.
fumigattus continuou expressiva, demonstrando que esta cepa resistente a hidrocarbonetos
e s oscilaes das condies ambientais (Martins, 2005).

52

5.3.3- Experimento com o dispersante qumico


Esse experimento mostrou que os bolores foram inibidos pelo leo diesel e o
dispersante qumico apenas do perodo inicial at 30 dias. Aps este perodo a microbiota
natural comeou a se regenerar e ultrapassou a contagem da caixa controle. Segundo
Providenti et al (1993) os derivados do petrleo so deficientes em nitrognio e fsforo e
desta forma prejudicam o crescimento de microrganismos.

5.4- Anlise dos nutrientes- COT, nitrognio total e fsforo total


Os

solos

possuem

naturalmente

uma

grande

quantidade

de

microorganismos: bactrias, fungos, protozorios entre outros. Estes microrganismos


precisam de uma fonte de carbono para o crescimento celular, assim como de uma fonte de
energia alm de nitrognio e fsforo para a manuteno das funes metablicas
necessrias para o crescimento.
A anlise dos nutrientes mostra-se extremamente relevante porque determina
se existe a necessidade de suprir a sua falta e, caso deficientes, a correo dos nveis
possibilita a criao de ambiente ideal biodegradao.
Deve-se ressaltar a importncia inicial do ambiente onde ocorre o
desenvolvimento dos microrganismos, em virtude das foras que atuam na dinmica da
populao e a influncia destas sobre o ambiente dependerem das propriedades qumicas e
fsicas do solo.
Embora o leo diesel seja uma fonte de carbono para os microrganismos,
no fornece outros nutrientes como nitrognio e fsforo, que tambm so necessrios. A
falta destes nutrientes determina que a taxa de degradao biolgica pode ser severamente
afetada (NAS, 1985).
5.4.1-Carbono orgnico total
O carbono orgnico constitui o elemento fundamental da matria orgnica
dos solos uma vez que composta por cerca de 60 % desse elemento, enquanto os demais
elementos perfazem o restante. O atributo matria orgnica nas anlises de solo, na verdade
o resultado de uma anlise de carbono orgnico multiplicada por aproximadamente 1,72,
ou seja, o carbono orgnico e a matria orgnica so, para a maioria dos casos considerados
termos de mesmo significado.

53

Quando uma molcula do leo chega ao solo, ela pode sofrer os processos
de degradao e soro, e os resultados destes dois processos podem ser: a absoro da
molcula pelas plantas, a lixiviao da molcula para camadas subsuperficiais do solo,
podendo atingir os cursos de gua subterrneos.
Inicialmente os

solos

contaminados no

experimento

apresentaram

concentrao de matria orgnica mais alta, em relao ao solo no contaminado (Tabela


7). As amostras com os mais altos nveis de carbono orgnico foram aquelas que
apresentaram os maiores teores dos hidrocarbonetos alifticos em estudo.
A adio de leo diesel ao ambiente em estudo, acarretou claramente um
aumento no teor de carbono (Tabela 7), conforme comparao com os resultados dos
tratamentos com o ensaio em branco. Os teores de carbono obtidos da caixa que continha o
leo diesel apresentaram quedas significativas nos dois primeiros dias e depois de 30 dias
do incio do experimento.
A diminuio da taxa de carbono atribuda a perda por evaporao que se
constitui em um dos processos de intemperizao mais importantes na reduo do volume
do leo derramado durante as primeiras 24-48 horas. Esse processo responsvel por cerca
de 75 a 100% da remoo de muitos componentes leves, como por exemplo, a frao
gasolina e a querosene. A radiao solar, quanto maior a incidncia, maior o aumento do
processo evaporativo, pois aumenta a temperatura ambiente (CETESB, 2003).
Durante o perodo do experimento as precipitaes pluviomtricas
apresentaram-se muito abaixo dos nveis normais (anexo 5),o que contribuiu para o
aumento da temperatura ambiente e, por conseqncia, a elevao da taxa de evaporao e
na diminuio do carbono no experimento com leo.

54

Tabela 7- Resultados de carbono orgnico total, em porcentagem, para cada experimento

Tratamentos
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo

Dias
0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

p (<0,05)

Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

1,0000
1,0000
1,0000
0,9999
0,1785
0,0125
0,0864
0,0024
0,0001
0,0291

Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Branco
Branco
Branco
Branco
Branco

0
15
30
60
90

0,0179
0,2912
0,9902
0,9990
0,0192
0,0125
0,0311
0,0002
0,0527
0,8646

0,1879
0,9952
0,9996
1,0000
0,9211
0,1156
0,0766
0,7311
0,0030
1,0000

Teor de Carbono (%)


3,08 0,07
1,60 0,09
2,00 0,10
3,74 0,10
2,76 0,01
1,92 0,10
1,88 0,04
1,80 0,10
1,48 0,03
2,00 0,01
2,40 0,04
3,18 0,10
3,02 0,10
3,10 0,08
3,22 0,03
2,90 0,08
2,18 0,05
1,90 0,01
2,08 0,04
1,74 0,003
1,68 0,003
1,96 0,003
3,20 0,10
2,00 0,02
2,50 0,02
2,60 0,02
2,80 0,003
2,20 0,09
2,00 0,03
2,80 0,03
2,20 0,03
1,60 0,003
2,60 0,07
2,32
1,76
1,84
1,94
1,90

55

Em relao ao experimento realizado na caixa que continha o leo diesel


com o dispersante, o carbono apresentou queda significativa somente a partir do primeiro
ms. Verificou-se no ambiente com presena do dispersante, que este afetou de forma
significativa o desenvolvimento dos fungos, formando-se no local grande quantidade de
leveduras, que influenciaram no teor de carbono orgnico inicial e no processo de
biodegradao (Martins et al, 2004).
No que refere ao carbono do experimento realizado na caixa com o
biossurfactante, verificou-se que no houve queda significativa ao longo do tempo do
experimento, somente no 5 ms, ou seja, 150 dias aps o incio das coletas. O
biossurfactante foi produzido em escala de laboratrio pelo fungo Aspergilus fumigatus e
foi introduzido na caixa. Na tentativa de criar um meio ideal para que este microrganismo
aumentasse a produo do biossurfactante, foi colocado um substrato (casca de arroz) e isto
no permitiu a diminuio do teor de carbono em comparao com os outros experimentos.
Comparando os trs experimentos entre si, verifica-se que o teor de carbono
orgnico do experimento onde s foi adicionado leo diesel, foi significativamente menor
que os demais, nos trs primeiros dias iniciais de coleta. Esse fato mostra uma influncia da
adio do dispersante e do biossurfactante nas taxas de carbono orgnico no experimento,
provavelmente pela soro das molculas do solo a estes compostos adicionados. No
decorrer do experimento as diferenas entre os tratamentos no so significativas.
5.4.2- Nitrognio total
O solo uma estrutura complexa formada por elementos slidos (argila,
areia, fragmentos de rocha, restos orgnicos e entre outros) lquidos (gua) e gasosos
(nitrognio, oxignio e outros).
Sob condies favorveis de temperatura e nutrientes, a biodegradao pode
recuperar o solo contaminado por derrames de petrleo. Os nutrientes nitrognio e fsforo
so necessrios para o bom desenvolvimento dos microrganismos do solo, e seus teores
devem ser suficientes para que possam desempenhar sua funo na recuperao de reas
degradadas.
Os resultados de nitrognio orgnico total da caixa com leo e da caixa com
dispersante qumico apresentaram um aumento significativo nos trs primeiros dias do
experimento (Tabela 8). Porm depois de 30 dias do experimento a micro biota comeou a

56

se regenerar, com isso contribuiu para o consumo de nitrognio, conforme Martins et al,
2004.
O nitrognio da caixa do biossurfactante apresentou queda significativa no
1o dia do experimento e depois de 150 dias. Mas no restante do experimento no apresentou
diferena significativa. Observa-se que a partir do 15o dia houve um crescimento muito
grande do fungo Aspergillus fumigattus, ocasionando uma inibio no crescimento de
outros fungos e bactrias neste local. Depois de trs meses, a flora bacteriana ainda no
estava restabelecida, pois o fungo Aspergillus fumigattus ainda predominava.

57

Tabela 8- Resultados de nitrognio total, em porcentagem, para cada experimento.

Tratamentos
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo

dias
0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Branco
Branco
Branco
Branco
Branco

0
15
30
60
90

p (<0,05)
0,3038
0,0002
0,0001
0,7863
1,0000
1,0000
1,0000
0,9999
0,9690
0,8359

Teor de Nitrognio (%)


0,10 0,007
0,16 0,001
0,21 0,000
0,23 0,002
0,14 0,070
0,12 0,000
0,10 0,030
0,11 0,005
0,08 0,004
0,13 0,003
0,19 0,000

0,0322
1,0000
0,0277
0,9999
0,9999
0,9634
0,1936
0,1168
1,0000
1,0000

0,14 0,002
0,21 0,001
0,12 0,000
0,21 0,010
0,12 0,001
0,12 0,001
0,11 0,003
0,09 0,005
0,08 0,001
0,13 0,005
0,14 0,000

0,0031
1,0000
1,0000
0,9962
0,1247
0,3898
0,9983
0,9782
0,0160
1,0000

0,19 0,001
0,11 0,002
0,18 0,001
0,18 0,000
0,17 0,003
0,13 0,001
0,14 0,008
0,22 0,002
0,16 0,002
0,12 0,002
0,21 0,002
0,23
0,16
0,19
0,15
0,17

58

5.4.3- Fsforo total


Como os microrganismos requerem nitrognio e fsforo para incorporar na
biomassa, o aproveitamento destes nutrientes do solo com derrame um fator crtico para
sua possvel degradao. Quando necessrio possvel a acelerao deste processo pela
adio de uria, fosfatos, fertilizantes do tipo NPK. Portanto, por isso importante o
conhecimento desta necessidade no meio degradado.
Em relao ao ensaio em branco os teores de fsforo total no experimento da
caixa do leo tiveram variaes significativas, diminuindo inicialmente para depois
aumentar e manter-se sempre com teores menores do que os do solo sem derrame (Tabela
9). O fsforo total do experimento da caixa do dispersante qumico teve um aumento
significativo no 1 dia, mantendo-se semelhante ao ensaio em branco, durante o
experimento, com mdias de 0,28 e 0,31, respectivamente.
J a mdia do teor de fsforo total na caixa com biossurfactante foi maior do
que na caixa do branco. Esse fato pode ser explicado, visto que tanto o biossurfactante,
quando o substrato adicionado apresenta fsforo na sua formulao. Comparando os trs
experimentos, verifica-se que os ambientes analisados tiveram comportamento diferente
entre si. O maior teor de fsforo total verifica-se na caixa com biossurfactante e o menor na
caixa com leo diesel.

59

Tabela 9- Resultados de fsforo total, em porcentagem, para cada experimento.

Tratamentos
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo
leo

dias
0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante
Dispersante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante
Biossurfactante

0
1
2
3
15
30
60
90
120
150
180

Branco
Branco
Branco
Branco
Branco

0
15
30
60
90

P (<0,050)
0,0025
0,0001
0,0001
0,0013
0,0813
0,3650
0,0001
1,0000
0,1787
0,0001

Teor de Fsforo (%)


0,11 0,00
0,21 0,01
0,34 0,05
0,27 0,01
0,21 0,01
0,19 0,01
0,17 0,003
0,24 0,005
0,12 0,005
0,18 0,001
0,26 0,01

1,0000
0,0037
0,9978
1,0000
0,9728
1,0000
0,9881
0,9999
1,0000
0,9776

0,27 0,01
0,33 0,05
0,36 0,01
0,23 0,01
0,26 0,001
0,31 0,002
0,26 0,002
0,31 0,005
0,25 0,001
0,25 0,003
0,31 0,005

0,0001
0,2784
1,0000
0,0575
0,0002
0,1600
0,2209
0,1661
0,0001
0,1541

0,44 0,01
0,31 0,02
0,37 0,02
0,43 0,005
0,350,002
0,310,002
0,36 0,005
0,35 0,01
0,32 0,03
0,30 0,02
0,36 0,01
0,36
0,26
0,25
0,34
0,35

60

O estudo da variao da concentrao dos nutrientes no experimento desse


trabalho permitiu verificar alguns aspectos que sero sintetizados a seguir.
O derrame de leo diesel no local estudado, produziu um aumento no teor de
carbono orgnico, com menores teores para o experimento em que tinha apenas leo. Em
relao ao nitrognio houve uma diminuio para os trs experimentos, j para o fsforo
houve uma diminuio para o experimento na caixa com leo diesel e na caixa com
dispersante qumico. No ambiente onde foi adicionado o biossurfactante, o teor de fsforo
aumentou, devido sua suplementao atravs de biossurfactante + substrato (farelo de
arroz).

5.5- Anlise dos resultados de hidrocarbonetos alifticos e aromticos


Os hidrocarbonetos alifticos e os hidrocarbonetos aromticos tem sido
motivo de importantes estudos ambientais em todo mundo. No Brasil os estudos de
natureza ambiental dos hidrocarbonetos esto concentrados especialmente na regio sudeste
do pas (Weber & Bcego, 1987; Bcego, 1988; Zamboni, 1993; Reynier et al., 1993;
Milanelli, 1994; Zanardi, 1996; Lopes et al, 1997; Badar-Pedroso, 1999; Mariuzzo, 1999;
Loureno, 2003), ou algumas pesquisas no estado do Paran (Nicodem et al, 1997;
Nicodem, 1998; Nicodem, 2001; Guedes et al, 2003).
Porm, nos ltimos anos, a FURG tem desenvolvido trabalhos na rea
ambiental a respeito dos hidrocarbonetos alifticos e dos HPAs na regio sul do Rio Grande
do Sul, tais como, Zamboni, 2000; Baisch et al, 2000; Lima, 2003; Cordeiro, 2003; Garcia,
2004; Bento et al, 2004.
Estes trabalhos mostram grande importncia, pois apresentam o background
do ambiente e os comparam com outros lugares do mundo. Este estudo est na Tabela 10,
que indica o local pesquisado, o ano da coleta dos sedimentos, a concentrao mnima e
mxima de HPAs totais com o nmero de HPAs utilizados no somatrio entre parnteses e
a fonte bibliogrfica dos dados (Mora & Sheikholeslami, 2002, Fillmann, 2001).

61

Tabela 10 : Comparao dos dados mundiais de HPAs totais expressos em ng/g de peso seco
rea

Ano

Concentraes mn - mx
(ng.g-1 de peso seco)

Referncias

Frana, Mar Mediterrneo

1996

36 - 6900 (18 HPAs)

Baumart et al., 1998

Espanha, Mar Mediterrneo

1996

1.2 - 8400 (18 HPAs)

Baumart et al., 1998

Baia de Guanabara, Rio de Janeiro

1995

1570 - 18440 (23 HPAs)

Lima, 1997

North-West Coast, Mar Mediterrneo

1991

86.5 - 48090 (14 HPAs)

Benlahcen et al., 1997

North Western, Golfo

1991-93

< 20 - 4740 (13 HPAs)

Readman et al., 1996

Baa San Quintin, Mxico

1992

N.D - < 50 (44 HPAs)

Galindo et al., 1996

Porto de Xiamen, China

1993

70 - 33000 (9 HPAs)

Hong et al., 1995

Victoria Harbour, Hong Kong

1992

350 - 3450 (9 HPAs)

Hong et al., 1995

Mar Bltico

1993

9.5 - 1871 (15 HPAs)

Witt, 1995

Baa Saratosa, Florida, USA

17 - 26771 (11 HPAs)

Sherblom et al., 1995

Western Coast, Austrlia

1991

1.0 - 3200 (11 HPAs)

Burt and Ebell, 1995

Costa da Itlia, Mar Adritico

1990

27 - 527 (9 HPAs)

Guzzella and DePaolis, 1994

Rio Reno, France, Mar Mediterrneo

1985-86

1070 - 6330 (15 HPAs)

Bouloubassi and Saliot, 1993

Lago Burley Griffin, Australia

1989

80 - 538 (8 HPAs)

Leeming and Maher, 1992

454 - 3120 (15 HPAs)

Botello et al., 1991

Plataforma Continental, Tabasco, Mexico 1989


Rio Danbio

1992

< 10 - 3700 (4 HPAs)

Equipe Cousteau, 1993

Coastline, Mar Negro, Ucrnia

1995

7.2 - 126 (17 HPAs)

Readman et al., 1999

Danube Coastline, Mar Negro, Ucrnia

1995

30.3 - 604 (17 HPAs)

Readman et al., 1999

Golfo de Trieste, Italia

1996

30 - 600 (22 HPAs)

Notar et al., 2001

Mar Negro

1988

12 - 2400 (28 HPAs)

Wakeham, 1996

Mar Branco, Russia

1994

13 - 208 (27 HPAs)

Savinov et al., 2000

Mar Caspio, Azerbaijo

2000

320 - 3109 (37 HPAs)

Mora & Sheikholeslami 2002

Mar Caspio, Russia

2000

1339 - 7714 (37 HPAs)

Mora & Sheikholeslami 2002

Mar Caspio, Ir

2001

72 - 954 (37 HPAs)

Mora & Sheikholeslami 2002

Mar Caspio, Kazakhstan

2001

35 - 681 (37 HPAs)

Mora & Sheikholeslami 2002

Esturio da Laguna dos Patos, Brasil

1998-00

50 - 11720 (23 HPAs)

Zamboni, 2000

Esturio da Laguna dos Patos, Brasil

1999-00

49 - 72 (15 HPAs)

Baisch, 2000

Esturio da Laguna dos Patos, Brasil

2001-02

ND - 631 (16 HPAs)

Cordeiro, 2003

Esturio da Lagoa dos Patos, Brasil

2003

ND - 10451 (16 HPAs)

Garcia, 2004

-1

Presente trabalho

Concentraes g.Kg

Esturio da Laguna dos Patos, Brasil

2005

422,39 (16 HPAs)

Caixa com leo diesel

Esturio da Laguna dos Patos, Brasil

2005

Caixa com dispersante

Esturio da Lagoa dos Patos, Brasil

2005

489,76 (16 HPAs)


1224,76 (16 HPAs)

Caixa com biossurfactante

62

Analisando os resultados da concentrao do 16 HPAs depois de 180 dias


da simulao do derrame, pode-se observar que

nas caixas com leo diesel e com

dispersante qumico a concentrao final mostrou-se baixa frente aos outros ambientes.
No que se refere caixa do biossurfactante, a concentrao final do 16
HPAs encontrada aps 180 dias maior do que os valores apresentados, por exemplo, por
Baisch et al (2000) e Cordeiro (2003) para sedimentos do esturio da Lagoa dos Patos.
5.5.1- Anlise dos cromatogramas
A anlise dos cromatogramas obtidos permitiu realizar a anlise das
diferentes mudanas ocorridas nos cromatogramas ao longo do tempo. Assim, este item
destina-se a comparar os cromatogramas ao longo do tempo verificando qualitativamente
os hidrocarbonetos alifticos e dos hidrocarbonetos policclicos aromticos.
5.5.1.1- Evoluo da concentrao dos hidrocarbonetos alifticos
A identificao dos hidrocarbonetos alifticos ao longo do tempo foi
realizada de forma individualizada, observando a evoluo dos cromatogramas em cada
uma das caixas utilizadas no experimento.
a) Caixa do leo diesel
Os cromatogramas do 1o dia do experimento (Figura 14) demonstram que
ocorreu alta concentrao dos hidrocarbonetos alifticos com picos bem resolvidos, no
sendo ainda verificada a formao de UCM - mistura complexa no resolvida. A ocorrncia
da mistura complexa no resolvida fator indicativo da existncia efetiva da degradao,
fato este que no ocorreu na primeira coleta feita logo depois da simulao do derrame.
Alm disso, neste primeiro momento foi possvel observar a presena de
hidrocarbonetos de cadeia longa (> C25) e nmero de carbonos mpares, atribudos a
compostos que se originam de plantas terrestres, tais como, C27, C29 e C31 (Volkman et al,
1992; Medeiros, 2000). Esses compostos j faziam parte do ambiente natural em que foram
colocadas s caixas. A presena destes hidrocarbonetos observada nas trs caixas durante
todo o perodo do experimento.

63

Figura 14 - Cromatograma do leo diesel do 1o dia do experimento

Quando se observa o cromatograma aps 30 dias do experimento j existe a


formao de UCM, mostrando um ntido inicio da degradao dos hidrocarbonetos
alifticos e conseqentemente a formao de metablicos conforme Figura 15.

64

Figura 15- Cromatograma da caixa do leo diesel aps 30 dias do experimento.

O cromatograma do leo diesel 180 dias aps o inicio do experimento,


mostra uma quase total degradao dos hidrocarbonetos alifticos (C13 ao C24), porm os nalcanos com cadeias maiores que C25 permanecem com concentrao praticamente
constante desde o incio do experimento (Figura 16). Ainda apresenta uma pequena UCM.

65

Figura 16- Cromatograma do leo diesel aps 180 dias do experimento.

b) Caixa do dispersante
Observando os cromatogramas do 1o dia e do 30o dia do experimento,
conforme a Figura 17, nota-se que a concentrao dos hidrocarbonetos praticamente
permanece a mesma, apenas com uma pequena formao de UCM no 30o dia. Durante este
perodo do experimento, foi observado que o nmero de bactrias e fungos diminuiu
drasticamente, conforme resultados confirmados pelo estudo realizado no mesmo ambiente
por Martins et al (2004). A diminuio foi ocasionada pelas conseqncias do derrame do
leo e do dispersante, uma vez que as bactrias e fungos so suscetveis ocorrncia de
graves danos pela presena de tais compostos orgnicos. Este dado ainda confirmado por
outros trabalhos, que mostram que o nmero de bactrias sofre uma reduo, pois a maioria
dos microrganismos sensvel ao derrame de leo (Odu, 1972; El-Nawawy, 1992; Amund
et al, 1993; Ijah & Antai, 2003)
66

Figura 17- Cromatograma do dispersante do 1o dia e do 30o dia do experimento

67

O cromatograma do dispersante obtido a 180 dias do incio do experimento,


permite verificar uma quase total degradao dos hidrocarbonetos alifticos (Figura 18),
apresentando uma grande UCM. De acordo com Martins et al, 2004, flora microbiana do
local da caixa do dispersante se restabeleceu trs meses aps o inicio do experimento.

Figura 18- Cromatograma do dispersante aps 180 dias do experimento

c) Caixa do biossurfactante
Observando os cromatogramas do primeiro dia do experimento (Figura 19)
possvel constatar a alta concentrao dos hidrocarbonetos alifticos com picos bem
resolvidos.

68

Figura 19- Cromatograma do biossurfactante do primeiro dia do experimento

Quando se observa o cromatograma aps 90 dias do incio do experimento


h quase degradao total dos hidrocarbonetos alifticos (Figura 20), enquanto o
cromatograma obtido aps 180 dias, apresenta formao de UCM e uma menor
concentrao dos hidrocarbonetos alifticos, conforme Figura 21.

69

Figura 20- Cromatograma da caixa do biossurfactante aps 90 dias do experimento.

Figura 21- Cromatograma do leo diesel aps 180 dias do experimento.

70

5.5.1.2- Evoluo da concentrao dos HPAs


A identificao dos hidrocarbonetos aromticos, da mesma forma que os
hidrocarbonetos alifticos, foi realizada individualmente em cada uma das caixas utilizadas
no experimento.
a) Caixa do leo diesel
Observando o cromatograma do 15o dia visvel a degradao dos HPAs
pela formao da UCM no decorrer do perodo (Figura 22). Nesta caixa foi verificada a
melhor taxa de degradao depois de 180 dias de experimento, mostrando que o ambiente
onde no foi adicionado nenhum produto qumico ou biolgico os resultados foram
satisfatrio para o 16 HPAs. Depois de 180 dias, v-se que a formao da UCM grande
(Figura 23) e houve uma queda de mais de 75 % da concentrao inicial.

Figura 22- Cromatograma do leo diesel do 15o dia aps o inicio do experimento

71

Figura 23- Cromatograma da caixa do leo diesel 180 dias aps o inicio do experimento.

b) Caixa do dispersante
Observando o cromatograma do 1o dia do experimento (Figura 24),
possvel verificar que os picos dos HPAs esto bem definidos apresentando uma grande
concentrao inicial.

72

Figura 24- Cromatograma do dispersante do 1o dia do experimento

O cromatograma do dispersante para o 30o dia apresenta uma concentrao


menor que a inicial e formao de UCM que caracteriza a ocorrncia de degradao. No
180o dia, a formao da UCM maior, mostrando a ocorrncia de vrios metablicos no
identificados na mistura complexa no resolvida (Figura 25).

73

Figura 25- Cromatograma da ao do dispersante aps 30 e 180 dias do inicio do experimento

c) Caixa do biossurfactante
Os cromatogramas do 1o e 15o dia do experimento (Figura 26), mostram
uma alta concentrao dos HPAs nos dois cromatogramas, com picos bem resolvidos.

74

Nesta caixa houve uma queda de apenas 2,8% da concentrao inicial 16 HPAs, tendo
apresentado uma pequena formao de UCM 15 dias aps o incio do experimento.

Figura 26- Cromatograma do biossurfactante do 1o e do 15o dia do experimento

Quando se observa o cromatograma aps 90 dias do experimento, a concentrao


dos HPAs praticamente a mesma, porm h um aumento da UCM. J o cromatograma

75

de 180 dias (Figura 27) a formao da UCM aumenta um pouco, porm a concentrao do
HPAs diminui pouco.

Figura 27 - Cromatograma da caixa do biossurfactante aps 90 e 180 dias aps o inicio do experimento.

76

5.5.2- Discusso dos resultados obtidos por meio dos cromatogramas anlise das
concentraes
Os resultados obtidos por meio dos cromatogramas apresentam valores
especficos

referentes

concentraes

dos

hidrocarbonetos

alifticos

dos

hidrocarbonetos aromticos. Tais valores foram alvo de anlise com o fim de verificar o
decaimento da concentrao inicial at a concentrao final dos hidrocarbonetos.
5.5.2.1- Hidrocarbonetos Alifticos
Os hidrocarbonetos alifticos (n-alcanos) podem ser utilizados como
marcadores ou traadores geoqumicos. A noo deste marcador compreende no
somente um critrio de especificidade, mas tambm uma estrutura molecular estvel que
sofra pouca ou nenhuma alterao em uma determinada escala de tempo (Hostettler et al,
1999).
As principais fontes naturais de n-alcanos so de plantas terrestres,
fitoplncton, zooplncton e as bactrias (Medeiros, 2000). Os aportes naturais de origem
continental so constitudos, na maioria, por n-alcanos derivados de ceras cuticulares de
plantas vasculares, que apresentam cadeias longas com nmero de carbonos mpares (C23 a
C25), predominando os compostos C27, C29 ou C31, conforme as caractersticas da vegetao
local (Eglinton & Hamilton, 1967; Medeiros, 2000).
Os n-alcanos com cadeias moleculares mpares tambm predominam na
biota marinha, com destaque para os compostos entre C15 e C21. Os n-alcanos de origem
fssil apresentam uma composio variada conforme sua fonte especfica: petrleo bruto e
derivados do petrleo, podendo apresentar cadeia carbnica de 1 a 40 tomos de carbono,
sem a predominncia de cadeias carbnicas mpares ou pares (Simoneit, 1993). Os produtos
derivados do petrleo caracterizam-se pela presena de n-alcanos dentro de uma faixa mais
restrita de peso molecular, em decorrncia dos processos de refino (Tabela 11), onde faz
uma comparao das diferentes origens dos n-alcanos.

77

Tabela 11- Comparao da fonte de n-alcanos ao meio ambiente. Fonte adaptada (Bishop, 1983 e
Medeiros 2000).

Organismo
Bactrias fotossintticas
Bactrias no fotossintticas
Cianobactrias
Fitoplncton
Zooplncton
Plantas vasculares
Derivados do petrleo
Gasolina
Nafta
Diesel
leo lubrificante

Cadeia
Carbnica
C14 a C29
C15 a C29
C14 a C19
C13 a C21
C18 a C34
C15 a C37
Temperatura de
destilao 0C
40 a 150
150 a 200
250 a 300
300 a 400

Composto Dominante
C17, C26
C17-C19, C25
C17
C17
C18, C24
C27, C29, C31
Cadeia carbnica
predominante
C4 a C10
C10 a C12
C16 a C20
C20 a C26

A predominncia de cadeias carbnicas mpares sobre as pares nos n-alcanos


pode ser determinada atravs de ndices especficos, como o CPI (ndice Preferencial de
Carbono), calculado atravs da seguinte equao (Aboul-Kassim & Simoneit, 1996):
CPI = [(C25+C27+C29+C31+C33/C24+C26+C28+C30+C32)+
(C25+C27+C29+C31+C33/C26+C28+C30+C32+C34)
Se os valores encontrados ficarem entre 4 e 7 refletem uma presena
dominante de n-alcanos biognicos, isto , sua origem continental ou marinha. Quando os
valores giram em torno de 1 indicam a presena de n-alcanos de contaminao petrognica
(Bouloubassi, 1990).
Para a realizao do experimento foi utilizado um derivado do petrleo, leo
diesel, onde foram analisados os n-alcanos de C7 a C34. Na discusso dos resultados, dado
maior enfoque a C13 a C27, pois de acordo com a UNEP, 1991, o intemperismo natural
provoca modificaes progressivas na composio original do leo, destacando-se a
volatilizao dos n-alcanos de baixo peso molecular (< C14).
Na anlise dos hidrocarbonetos alifticos ficou muito evidente a ocorrncia
de degradao nas trs caixas. Um dos principais fatores fsicos que influenciaram este
processo foi a temperatura, cuja elevao determina o aumento da taxa de evaporao das
cadeias carbnicas mais leves, conforme CETESB, 2003 e Kennish, 1997. Estima-se que

78

durante as primeiras 24-48 horas, 50 a 60% do volume derramado pode ser perdido pela
evaporao (CETESB, 2003). De acordo com Lee, 1980; ITOPF, 1987, a evaporao
responsvel por uma reduo de 75% dos componentes mais leves presentes na frao
gasolina e querosene.
Os n-alcanos C7 a C11, praticamente no foram detectados durante todo o
experimento, pois o produto usado foi leo diesel, cuja cadeia carbnica predominante
C16 a C20 (Bishop, 1983).
Depois de 180 dias do inicio do experimento, a concentrao dos
hidrocarbonetos alifticos nas caixas do leo diesel, do dispersante e do biossurfactante,
ficaram, respectivamente, 14,37 g/g, 54,79 g/g e 6,25 g/g, o valor encontrado na caixa
do dispersante ficou acima do considerado normal para um ambiente estuarino, pois
geralmente as concentraes de hidrocarbonetos nos sedimentos costeiros podem variar de
5 a 10 g/g, sem que isto represente contaminao (Snedaker et al, 1995, Volkman et al,
1992 e UNEP, 1991). Nos sedimentos de sistemas aquticos submetidos a significativos
aportes de n-alcanos de plantas terrestres, esses valores podem ser duas ou trs vezes
maiores que os citados (Volkman et al, 1992).
Comparando os resultados das trs caixas depois de 180 dias do experimento
(tabela 10), observa-se que os valores esto inferiores aos encontrados por Zamboni (2000),
por exemplo, na Coroa do Boi no esturio da Lagoa dos Patos (129,57 g/g).
Dessa forma, aps o transcurso do tempo total do experimento, pode-se
concluir que o impacto ambiental causado pelo derrame simulado de um litro de leo diesel
por m2 no causou graves conseqncias biota microbiana no que refere aos
hidrocarbonetos alifticos. Isto porque, em comparao com resultados de amostras
extradas de outros locais (Tabela 12), a concentrao dos n-alcanos foi consideravelmente
inferior, demonstrando que em alguns ambientes subsistem altas concentraes de
hidrocarbonetos alifticos independentemente de ter havido qualquer acidente ambiental
envolvendo derivados do petrleo.
Os valores encontrados no presente experimento (anexo 3) se aproximam
das concentraes existentes em ambientes no impactados, demonstrando que em casos de
acidentes com mesmas propores, a recuperao do ambiente se processa naturalmente e
se completa em pelo menos 180 dias nas condies do esturio da Lagoa dos Patos.

79

Tabela 12- Concentraes de n-alcanos totais em sedimentos. Fonte: adaptado de Taniguchi, 2001

Local
Exterior
Mar de Beaufort
Baa do Almirantado,
Antrtica
Brasil
Baa da Guanabara, RJ
So Sebastio, SP
Salvador, BA ao Cabo S.
Tom, RJ
Santos, SP
Sepetiba a Paraty, RJ
Rio Grande, RS
Esturio da Lagoa dos Patos,
RS
Presente Trabalho
Caixa leo
Caixa dispersante
Caixa biossurfactante

Intervalo
Encontrado
Concentrao
ug/g
0,74 a 5,1
0,27 a 2,89

Referncia

Steinhauer e Boehm, 1992


Bcego, 1996

1,495 a 11,425
0,049 a 4,766
4,96 a 42,23

Freixa,1995
Medeiros, 2000
Pessoa Neto, 2000

0,096 a 14,559
< 0,07

Medeiros, 2000
Taniguchi, 2001

0,667 a 129,57

Zamboni, 2000

Concentrao
ug/g
14,37
54,79
6,25

Presente trabalho
Presente trabalho
Presente trabalho

Na caixa do leo diesel e na caixa do biossurfactante, a degradao dos


hidrocarbonetos alifticos C13-C27 aps 180 dias do experimento apresentou um
decrscimo de 94 % e 98 %, respectivamente, da concentrao inicial.
Na caixa referente ao leo diesel, a concentrao inicial era de 233,81 ug/g,
sendo ao final do perodo encontrado o valor de 14,37 ug/g, o que demonstra a reduo de
aproximadamente 94 %. Um percentual prximo foi constatado na caixa do biossurfactante,
uma vez que a concentrao inicial encontrada foi de 457,59 ug/g e a final de 6,25 ug/g,
sendo de aproximadamente 98 %.
No que refere caixa do dispersante, o percentual de reduo no foi to
intenso, apresentando uma reduo de aproximadamente 78 %, pois a concentrao inicial
de 250,95 ug/g depois de 180 dias passou para 54,79 ug/g. Os resultados demonstraram que
quanto maior o nmero de carbonos na cadeia dos n-alcanos, menor foi a sua reduo,
podendo ser mencionado o exemplo do C25 que apresentou reduo de apenas 48,2% da
concentrao inicial.

80

Um dado bastante relevante foi observado na caixa do biossurfactante que,


nos primeiros 15 dias, apresentou um decrscimo de aproximadamente 77 % da
concentrao inicial de n-alcanos. Esse fato mostra o alto desempenho desta substncia na
reduo da concentrao dos hidrocarbonetos alifticos em reduzido espao de tempo.
Segundo Cameotra & Bollag (2003), os biossurfactantes so utilizados in situ para
emulsificar e aumentar a solubilidade de contaminantes hidrofbicos e, agindo desta
maneira, facilitam o acesso dos microrganismos presentes no ambiente para que acelerem a
degradao dos hidrocarbonetos.
O mesmo, porm, no foi verificado nos 30 dias iniciais do experimento
realizado na caixa do leo diesel, pois nesta etapa inicial o decrscimo no foi to intenso,
apresentando uma diminuio de apenas 27,44 % da concentrao inicial. Ao final do
tempo total, a taxa de degradao dos n-alcanos foi aproximada em ambas as caixas, sendo
semelhantes s concentraes finais em relao ao biossurfactante e ao leo diesel.
Assim, aps os 180 dias as taxas de degradao do biossurfactante e do leo
foram praticamente iguais enquanto a concentrao de n-alcanos no dispersante manteve-se
em patamar mais elevado.
A diferena verificada no perodo inicial do experimento do biossurfactante
em relao ao leo diesel, assim como no que refere ao resultado final do dispersante em
comparao ao biossurfactante pode ser explicada pelo fato de que tanto o leo,
inicialmente, e o dispersante, durante todo o processo, afetaram de forma bastante
prejudicial os fungos e bactrias responsveis pela biodegradao. Contrariamente o
biossurfactante inseriu no ambiente fungo que produziu a substncia responsvel
justamente pela quebra das cadeias carbnicas dos n-alcanos provocando maior facilidade
da sua absoro pelos microrganismos ou mesmo da evaporao.
O comportamento diferente entre o leo e o dispersante pode ser atribudo
ao fato de que a biodegradao foi restabelecida na caixa do leo diesel, enquanto que na
caixa do dispersante os fungos e bactrias no alcanaram recuperao eficiente, com isso
diminuiu a atividade microbiana e a biodegradao mantendo os valores de n-alcanos
elevados.

81

5.5.2.2- Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPAs)


A anlise dos resultados das concentraes dos hidrocarbonetos polciclos
aromticos ser feita em duas etapas, a primeira envolve a anlise individual dos HPAs ao
longo do tempo, dando nfase a trs grupos de HPAs, de acordo com o nmero de anis,
onde no primeiro grupo esto HPAs com 2 ou 3 anis aromticos, o segundo grupo HPAs
com 4 e 5 anis aromticos e no terceiro grupo HPAs com 6 anis aromticos. E a segunda
etapa aborda a anlise do somatrio dos hidrocarbonetos policclicos aromticos ( HPAs)
ao longo do tempo.
Anlise individual dos HPAs
Nesta fase so apresentadas as anlises de alguns dos 16 HPAs encontrados
nas amostras coletadas durante o experimento. Na Tabela 13 so apresentados os principais
resultados dos HPAs obtidos no presente estudo, sendo possvel observar os valores
referentes s concentraes iniciais e finais. Os dados completos dos HPAs so
apresentados em anexo (Anexo 4).
Tabela 13- Mostra a concentrao inicial e final, expressa em ug/kg, dos HPAs.

Caixa
Amostra
Incio
Naftaleno
0,77
Acenaftileno
<LD
Acenafteno
<LD
fluoreno
74,34
fenantreno
323,06
antraceno
<LD
fluoranteno
66,72
pireno
98,12
benzo(a)antraceno
11,79
criseno
44,68
benzo(b)fluoranteno
11,59
benzo(k)fluoranteno
6,59
benzo(a)pireno
6,73
dibenzo(a,h)antraceno 3,76
benzo(ghi)perileno
<LD
indeno(1,2,3cd)pireno 1,26
16 HPAs
649,41

leo
Caixa
Dispersante Caixa
Biossurfactante
Final
Incio
Final
incio
Final
0,53
<LD
<LD
0,56
<LD
<LD
4,17
2,80
<LD
1,42
<LD
<LD
1,77
<LD
<LD
<LD
57,93
48,34
116,83
1,04
33,45 438,04
15,18
502,28
45,82
13,67
56,19
82,65
94,86
14,99
<LD
377,70
95,45
156,75
224,51
<LD
584,47
44,51
<LD
251,49
91,01
94,79
88,11
116,98
133,26
169,12 177,34
37,43
184,54
237,42
21,22 109,21
23,24
76,43
127,43
15,41
66,16
35,38
7,04
<LD
36,45
69,08
33,82
25,07
68,98
15,77
72,65
6,94
17,41
56,52
1,93
7,31
24,57
3,03
11,10
23,83
66,59
2,48
16,48
53,24
422,39 2181,63
542,67
1318,26
1227,22

82

Dentro do primeiro grupo de HPAs com 2 ou 3 anis um dos que foi alvo de
exame o naftaleno que apresenta dois anis aromticos. Este HPA apresenta menor ponto
de ebulio, atingindo o estado gasoso somente a 218 0C, conforme Morrison & Boyd
(2000). Alm disso, encontra-se mais sujeito a sofrer efeitos de processos fsico-quimicos,
tais como a temperatura (evaporao) e a foto-oxidao, do que de processos biolgicos.
Diante de tais caractersticas, era esperado que ao final do experimento no houvesse
concentrao relevante de naftaleno, pois o tempo de meia vida deste composto em
condies desfavorveis degradao de cerca de 129 dias (Herbes e Schwall, 1978;
IPCS, 1998). Destaca-se tambm que o naftaleno est associado contaminao por
petrleo no intemperizado, ou seja, a derrames recentes e raramente detectvel em
sedimentos livre de contaminao (Robertson, 1998; Dahle et al, 2003), o que explica a sua
presena na fase inicial do experimento. Na etapa final do estudo, as caixas do dispersante e
do biossurfactante apresentaram concentrao mnima no detectvel (ND).
Outro HPA investigado dentro do primeiro grupo foi o fenantreno que
possui trs anis aromticos, apresentando ponto de ebulio de 340 oC. Tal caracterstica
determina o tempo de meia vida em perodo superior ao do naftaleno, podendo permanecer
presente no ambiente de 16 a 126 dias em condies desfavorveis, de acordo com Kanaly
& Harayama, 2000. Na caixa do leo diesel, a concentrao inicial de fenantreno foi de
323,06 g/Kg e aps 180 dias sua concentrao atingiu 33,45 g/Kg, apresentando uma
reduo de 89,6%. Porm os melhores resultados foram verificados nas caixas do
dispersante e do biossurfactante, onde ocorreu uma reduo, respectivamente, 96,5% e
90,8% depois de 180 dias do experimento.
Assim os resultados finais obtidos no ambiente que no sofreu qualquer
interferncia de outros compostos para acelerar a biodegradao mostraram-se bastante
prximos queles alcanados na caixa do biossurfactante, o que demonstra que o
fenantreno no depende de fatores diversos daqueles existentes no meio para a sua
degradao. A comparao entre as caixas do leo diesel e do biossurfactante permite
visualizar a proximidade das concentraes finais, conforme Grfico 1.

83

fenantreno

600
500

leo
biossurfactante

[g/Kg]

400
300
200
100
0
0

50

100

150

200

dias

Grfico 1- Comparao da concentrao final do fenantreno nas


caixas com leo e o biossurfactante.

Dentro do segundo grupo de HPAs com 4 ou 5 anis aromticos o


benzo(a)pireno (BaP) uma espcie de HPA que merece ateno especial. Esse HPA
apresenta cinco anis aromticos, e se constitui em um dos HPAs mais estudados devido a
sua elevada toxidade e do seu estreito contato com o homem j que ocorre em alimentos. A
meia vida deste HPA nos sedimentos varia entre 0,3 e 58 anos (Herbes e Schwall, 1978;
Nielsen & Christensen, 1994). H outros autores que afirmam que a degradao do BaP
pode variar de 229 a mais de 1400 dias (Kanaly e Harayama, 2000). Muito embora exista
divergncia acerca deste dado, h consenso no que refere a outras caractersticas deste
composto que cancergeno, genotxico, teratognico e embriotxico.
Na caixa do dispersante foi verificado o resultado mais significativo no que
se refere degradao do benzo(a)pireno. Comparando-se os dados relativos ao tempo total
do experimento, constata-se que houve um decrscimo de 51,04% entre a concentrao
inicial (69,08 g/Kg) e final (33,82 g/Kg). Considerando que este composto apresenta
cadeia carbnica com grande nmero de anis e alto peso molecular, possvel concluir
pela eficcia do dispersante na degradao desta espcie de composto.
Dentro do terceiro grupo onde esto os HPAs com seis anis aromticos,
sendo os mais difceis de serem degradados, est o Indeno [1,2,3-cd] pireno, para este HPA
foi verificado que o dispersante qumico mostrou-se mais eficaz em relao ao

84

biossurfactante. Tal fato confirmado porque na caixa do dispersante, o Indeno, no


primeiro dia, apresentava uma concentrao de 66,59 g/Kg e no ltimo dia atingiu 2,48
g/Kg.
A eficcia do dispersante na degradao dos compostos aromticos com
grande nmero de anis e que apresentam maior dificuldade no que refere ao processo de
degradao, demonstrada no Grfico 2.
Caixa do dispersante
700
600
fluoranteno

[g/Kg]

500

Indeno

400

Criseno

300

benzo(b)fluorantreno

200
100
0
0

50

100

150

200

dias

Grfico 2- Comparao da taxa de degradao HPAs > 4 anis

Anlise do somatrio dos HPAs ( HPAs)


Nesta fase discutida a soma dos 16 HPAs encontrados em cada caixa do
experimento, sendo comparados os resultados obtidos no incio e no final do processo de
degradao.
Na caixa do leo diesel o HPAs durante o perodo de 180 dias do
experimento, apresentou um decrscimo da concentrao inicial de 35 %. No experimento
referente caixa do dispersante, o percentual de diminuio foi de 75 %. Em relao ao
HPAs nestas duas caixas, houve diferena na taxa de decaimento da concentrao inicial
at a final, porm o menor percentual de decaimento do HPAs foi na caixa do
biossurfactante.
A caixa do biossurfactante foi a que apresentou a menor percentual de
decaimento durante o experimento, sendo verificado um decrscimo de apenas 7 % da

85

concentrao inicial do HPAs. A comparao entre as trs caixas do experimento


apresentada no Grfico 3.

Somatrio de HPAs
2500
[g /K g ]

2000

leo
dispersante

1500
1000

biossurfactane

500
0
0

100

200

dias
Grfico 3- Comparao da taxa de degradao durante 180 dias

At o 300 dia, no foi verificada uma degradao efetiva nas caixas do leo e
do dispersante porque a adio de tais compostos ocasionou diminuio na microbiota, o
que dificultou o processo de biodegradao. Aps o perodo dos trinta dias iniciais, houve a
recuperao da microbiota, conforme confirmou Martins et al (2004). Esse fator foi
determinante para o decrscimo da concentrao do HPAs. Analisando a concentrao do
HPAs depois de 30 dias na caixa do leo diesel e do dispersante qumico, no final do
estudo, houve uma diminuio em mdia de 75,5 %.
O mesmo no aconteceu no experimento com a caixa do biossurfactante,
pois as espcies de fungos e bactrias que predominaram nesta caixa, demonstraram no
serem capazes de degradar HPAs de alto peso molecular (> 4 anis). A degradao de
compostos contendo at trs anis aromticos relativamente rpida e amplamente descrita
na literatura (Barbieri, 1997). Microrganismos capazes de utilizar compostos aromticos de
alto peso molecular, tais como benzo(a)antraceno, fluoranteno e pireno, j foram isolados e
caracterizados (Mahaffey et al, 1988; Heitkamp et al, 1988; Boldrin et al 1993).
Os resultados mostram que houve uma degradao mais efetiva das fraes
aromticas com o menor nmero de anis (at trs anis), conforme o Grfico 4. A reduo
foi aproximadamente de 99 % para o fluoreno, 91 % para o fenantreno e 84 % para o
antraceno depois de 180 dias do experimento.

86

Caixa do biossurfactante

600
500

fenantreno

[g/Kg]

400

fluoreno

300

antraceno

200
100
0
0

50

100

150

200

dias

Grfico 4- Comparao da taxa de degradao HPAs com 3 anis aromticos

Diante dos resultados obtidos ao final do experimento, foi possvel verificar


a eficcia especfica do biossurfactante para a degradao dos HPAs de baixo peso
molecular e do dispersante para os de alto peso molecular, o que demonstra a possibilidade
do uso de tcnicas de remediao para auxiliar a depurao do meio ambiente.
Porm as tcnicas alternativas devem ser bem estudadas antes de aplic-las,
pois ao mesmo tempo em que apresentam resultados eficazes na degradao dos
hidrocarbonetos tambm podem representar grave risco de prejuzo aos outros organismos,
devido possibilidade de produo de metablicos mais txicos que os prprios
contaminantes.
Os resultados mostraram que deve haver maior preocupao principalmente
com a introduo de espcies no nativas, pois na caixa onde houve adio do fungo
Aspergillus fumigattus a biota microbiana demorou a se recuperar, demonstrando que o
sistema do biossurfactante deve ser adequado s condies fsicas e qumicas da rea
afetada pelo contaminante.

87

Captulo - IV
Concluses

88

6- Concluses
A partir dos resultados apresentados e discutidos no captulo anterior, pode-se
elaborar as concluses que seguem.
I- As trs caixas do experimento possuam o mesmo tipo de sedimento (areia sltica)
no constituindo fator relevante para justificar a maior ou menor concentrao de
hidrocarbonetos nas diferentes caixas ou diferente processos de fixao fsica dos
hidrocarbonetos nos sedimentos;
II- O sedimento analisado apresentou carter levemente cido nas trs caixas do
experimento, sendo um fator que provavelmente influenciou na diminuio da taxa de
biodegradao;
III- O potencial redox encontrado no sedimento das trs caixas mostrou-se oxidante,
favorecendo a degradao;
IV- O derrame de leo diesel produziu um aumento no teor de carbono orgnico,
com menores teores para o ambiente em que s tinha leo diesel;

V- Houve diminuio no teor de nitrognio para os 3 ambientes e de fsforo para a


caixa com leo diesel e para a caixa com dispersante qumico;

VI- O biossurfactante aumentou o teor de fsforo devido sua suplementao


atravs de biossurfactante mais substrato;

VII- Houve degradao nas trs caixas no que se refere aos hidrocarbonetos
alifticos, porm a degradao no foi igual para todas as caixas;

89

VIII- O decrscimo da concentrao dos hidrocarbonetos alifticos ( C13-C27) na


caixa do leo diesel e do biossurfactante depois de 180 dias de experimento foi,
respectivamente, de 94% e 98%, porm a caixa do dispersante qumico o percentual de
reduo foi de 78%, nesta caixa foi observado que quanto maior o nmero de carbonos
menor era sua degradao;

IX- At o 300 dia, no foi verificada efetiva degradao nas caixas do leo e do
dispersante porque a adio de tais compostos ocasionou diminuio na microbiota, o que
dificultou o processo de biodegradao. Somente aps o perodo dos trinta dias iniciais,
houve a recuperao da microbiota, sendo este um fator determinante para o decrscimo da
concentrao do HPAs;
X- Nos primeiros 15 dias a caixa do biossurfactante apresentou um decrscimo de
aproximadamente 76 % da concentrao inicial de n-alcanos, mostrando o alto desempenho
desta substncia na reduo da concentrao dos hidrocarbonetos alifticos em reduzido
tempo;

XI- Na caixa do dispersante houve uma queda de 75 % HPAs ao longo do


experimento, porm na caixa do biossurfactante o decrscimo foi aproximadamente de 7%;
XII- Nas condies em que foi implementado o experimento, no foi conveniente
nem o uso de dispersante, nem o uso de biossurfactante, pois eles no se diferenciaram
significativamente, de modo que justificassem seu uso para um derrame nas condies
efetuadas;

90

7- Recomendaes
I-

Para a realizao de um novo experimento, poder ser feita a simulao de


derrame mediante o uso do petrleo e seus outros derivados;

II-

A simulao poder ainda ser feita em vrios tipos de sedimentos, sendo


efetuadas coletas de testemunho em paralelo para verificar a penetrao vertical
do petrleo;

III-

Fazer a correo do pH para avaliar se h melhor rendimento na taxa de


degradao por parte dos microrganismos;

IV-

Fazer, em paralelo simulao do derrame, um acompanhamento em


laboratrio da degradao dos hidrocarbonetos e dos produtos que so obtidos
do leo diesel e/ou do petrleo;

V-

Estudar os metablicos dos HPAs formados da degradao microbiana, visto


que eles podem ser mais txicos que os aqueles encontrados no leo diesel;

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ZOBELL, C. E. 1946. Action of microorganisms on hidrocarbons. Bacteriological
Reviews, V.10, p. 1-49.

102

9.- Anexos

Anexo .9.1
Os principais casos de vazamentos de leo registrados no Brasil
Fonte

Data

Local

Vol. Vazado de leo (m3)

N/T Takimuia Maru

Agosto/74

So Sebastio/SP

6.000

N/T Tarik Ibn Zyiad

Maro/75

Baa de Guanabara/RJ

6.000

N/T Brazilian Marina

Janeiro/78

So Sebastio/SP

6.000

Oleoduto S. Sebastio Cubato

Maro/83

Bertioga/SP

2.500

Barcaa abastecedora

Setembro/84

Santos/SP

450

N/T Marina

Maro/85

So Sebastio/SP

2.000

Oleoduto S. Sebastio Cubato

Maio/88

So Sebastio/SP

100

Oleoduto S. Sebastio Cubato

Agosto/89

So Sebastio/SP

350

N/T Penelope

Maio/91

So Sebastio/SP

280

N/T Themona

Setembro/91

Bacia de Campos/RJ

2.150

Duto

Julho/92

Cubato/SP

10.000

Oleoduto S. Sebastio Cubato

Maio/94

So Sebastio/SP

2.700

Duto/petrobras

Maro/97

Baa de Guanabara/RJ

2.800

N/M Smyrni

Julho/98

Santos/SP

40

N/T Maruim

Agosto/98

So Sebastio/SP

15

Duto/Petrobras

Agosto/99

Igarap do Cururu (AM) e


Rio Negro

3.000

Duto/Petrobras

Janeiro/00

Baa de Guanabara/RJ

1.292

Duto/Petrobras

Janeiro/00

Entre Cubato e So
Bernardo do Campo (SP)

200

Transbordamento

Fevereiro/00

Refinaria So Jos dos


Campos/SP

500

Navio Mafra

Maro/00

Canal de So Sebastio/SP

7250

103

Duto

Julho/00

Refinaria Presidente
Getlio Vargas/PR

4.000.000

Trem da Companhia ALL

Julho/00

Ponta Grossa

60.000

Trem da Companhia ALL

Julho/00

Ponta Grossa

20.000

N/T Vergina II

Novembro/00

So Sebastio/SP

91,57

Duto/Petrobrs

Fevereiro/01

Crrego Caninana do Rio


Nhundiaquara

4.000

Plataforma P-36

Maro/01

Bacia de Campos

1.500

Caminho

Abril/01

BR-277 entre Curitiba Paranagu

30.000

Trem de carga Ferrovia


Novoeste

Maio/01

rea de preservao de
Campo Grande/MS

35.000

Oleoduto/Petrobras

Maio/01

Barueri/SP

200.000

Navio Princess Marino

Agosto/01

Ilha Grande/RJ

715

Monobia

Outubro/01

So Francisco do Sul/SC

150

Navio Norma

Outubro/01

Paranagu/PR

392.000 (Nafta)

Transatlntico Coronia

Fevereiro/02

Baa de Guanabara/RJ

50.000

Navio Brotas

Maio/02

Baa de Ilha Grande/RJ

16.000 (petrleo leve)

Tanque de leo

Junho/02

Pinhais/02

15.000

Vazamento Per Sul do


Term. M. A. Barroso

Junho/02

So Sebastio/SP

25.000

Navio (desativado)
Meganar

Maro/04

Baa de Guanabara/RJ

2.000

Navio Vicua

Novembro/04

Baa de Paranagu/PR

3 a 4 milhes de litros de
leo

104

Anexo 9.2
Dados completos sobre o leo diesel usado no experimento

105

106

Anexo 9.3
Cromatograma do padro e dados completos dos hidrocarbonetos alifticos durante
os seis meses de coleta.

107

ANLISES DE SEDIMENTOS

OLEO1F1
HIDROCARBONETOS TOTAIS
DO PETRLEO (HTP) (mg/kg)
Cromatogrfico (mg/kg)
1820,04
HIDROCARBONETOS ALIFTICOS (ug/kg)
C07
<LD
C08
<LD
C09
<LD
C10
<LD
C11
<LD
C12
<LD
C13
348,13
C14
4802,23
C15
14829,36
C16
848,69
C17
27134,47
C18
26383,87
C19
46090,70
C20
24958,50
C21
21113,19
C22
17429,42
C23
26109,43
C24
10133,59
C25
7676,25
C26
3651,44
C27
2305,19
C28
927,45
C29
2326,07
C30
327,16
C31
928,89
C32
<LD
C33
<LD
C34
<LD

OLEO2F1

OLEO3F1

OLEO4F1

OLEO5F1

4621,75

7277,01

66,43

77,58

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
308,61
6002,15
20101,17
37678,73
2699,92
55916,44
56218,35
60555,34
58648,69
50513,06
59182,00
67372,02
28879,02
19767,50
9453,45
5529,04
2607,61
3499,22
932,39
1396,91
224,91
<LD
<LD

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
295,44
3416,79
11263,91
22839,64
2219,40
41518,29
42549,07
47148,55
48019,28
52385,42
34461,41
30027,34
20310,02
22453,55
7658,86
4716,34
2771,57
3607,71
1007,51
1655,46
322,31
<LD
<LD

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
442,82
1668,99
2476,12
24,27
1940,37
1689,53
1728,01
2665,62
2074,17
1616,58
1227,37
999,38
2277,46
468,56
1100,18
384,50
3414,37
215,36
1318,45
<LD
<LD
<LD

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
141,49
373,07
<LD
1649,97
1149,19
1063,03
1527,13
1326,47
1003,61
798,28
836,64
1756,40
726,07
2025,34
1168,94
13496,56
1050,30
6249,76
<LD
<LD
<LD

108

DIS1F1

DIS2F1

DIS3F1

DIS4F1

DIS5F1

473,81

7,45

1698,52

209,24

653,06

37,99
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
318,42
3569,94
10866,03
17426,86
22406,29
23622,85
41338,87
40469,15
21390,13
18544,45
23936,79
11908,14
9400,04
3677,62
2081,45
1123,91
1005,51
375,84
394,98
117,57
<LD
<LD

77,24
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
29,86
232,12
662,47
664,30
623,85
571,58
602,89
521,99
438,78
345,52
295,67
243,71
149,39
108,65
69,18
50,03
21,50
<LD
<LD
<LD
<LD

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
452,15
5289,40
14093,76
23195,12
29857,00
34449,96
33235,86
34782,33
33285,02
29010,07
26292,80
43849,54
16183,58
17632,11
6948,88
4346,31
2600,04
2014,11
870,16
795,27
291,76
<LD
<LD

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
3,36
168,17
933,10
2233,80
3167,03
3128,58
3710,66
3695,88
4361,19
4011,42
3881,33
3278,00
2609,03
2717,25
1891,93
1163,73
872,49
709,55
339,01
375,24
121,69
87,20
16,25

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
10,02
206,49
980,92
2387,09
2712,29
4980,09
3932,41
5341,66
5824,75
4656,30
5255,62
3976,38
4866,04
5899,40
3765,10
2396,40
3375,13
1325,95
2184,27
492,79
658,04
150,17

BIOS1F1 BIOS2F1 BIOS3F1 BIOS4F1 BIOS5F1


508,35

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
26,60
<LD
6180,76
19056,84
28365,25
36965,73
37711,96
42239,03
67705,40
68733,71
36739,29
47387,22
26352,77
24123,40
10459,09
5570,91
3433,47
2904,04
1198,52
1257,74
382,85
<LD
<LD

438,20

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
106,69
842,48
2403,12
4662,49
6784,22
9274,66
9468,10
12484,00
12890,36
11127,30
9187,25
7274,99
7287,36
7824,67
2595,21
1787,03
616,58
1521,60
308,34
846,90
108,48
<LD
<LD

10,32

16,15
11,71
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
22,28
48,38
<LD
234,77
312,74
405,59
484,57
376,80
286,27
234,56
226,82
418,71
109,66
93,31
47,90
143,30
<LD
79,21
<LD
<LD
<LD

163,48

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
62,68
541,84
1286,34
1412,48
2358,31
1910,78
2610,92
3435,17
3141,36
2874,55
2189,91
2377,68
2745,83
872,27
894,07
482,21
2851,25
400,56
1674,37
124,03
<LD
<LD

191,63

<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
14,38
53,99
67,09
148,97
197,08
314,20
591,81
794,81
697,13
824,78
429,90
1078,63
567,15
472,34
64,01
1261,28
328,51
947,25
30,98
144,23
12,08

109

LD
(ug/kg)
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01
0,01

Anexo 9.4
Cromatograma do padro e dados completos dos hidrocarbonetos policclicos
aromticos durante os seis meses de coleta.

110

ANLISES DE SEDIMENTOS
OLEO1F2 OLEO2F2 OLEO3F2 OLEO4F2 OLEO5F2
HPAs (ug/kg)
naftaleno
acenaftileno
acenafteno
fluoreno
fenantreno
antraceno
fluoranteno
pireno
benzo(a)antraceno
criseno
benzo(b)fluoranteno
benzo(k)fluoranteno
benzo(a)pireno
dibenzo(a,h)antraceno
benzo(ghi)perileno
indeno(1,2,3cd)pireno

DIS1F2 DIS2F2 DIS3F2 DIS4F2 DIS5F2

0,77
<LD
<LD
74,34
323,06
<LD
66,72
98,12
11,79
44,68
11,59
6,59
6,73
3,76
<LD

<LD
<LD
<LD
165,22
488,81
<LD
205,17
348,00
148,83
295,19
31,55
18,37
22,09
17,40
2,21

<LD
<LD
<LD
64,26
206,81
<LD
229,85
289,93
199,20
357,03
89,77
49,45
47,00
29,31
7,05

<LD
1,38
<LD
<LD
56,91
<LD
105,61
131,88
44,90
105,46
24,35
14,91
14,50
7,36
0,50

0,53
<LD
<LD
<LD
33,45
13,67
<LD
<LD
91,01
169,12
21,22
15,41
36,45
15,77
1,93

<LD
4,17
<LD
57,93
438,04
56,19
377,70
584,47
94,79
177,34
109,21
66,16
69,08
72,65
7,31

<LD
<LD
<LD
<LD
7,86
0,79
1,42
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD
<LD

1,99
<LD
<LD
115,93
355,79
<LD
160,82
181,49
85,01
146,11
25,43
16,70
16,21
4,42
1,46

0,74
31,93
9,18
39,32
421,94
78,41
494,11
454,23
168,66
178,56
188,86
96,31
187,46
154,82
26,34

<LD
2,80
1,77
48,34
15,18
82,65
95,45
44,51
88,11
37,43
23,24
35,38
33,82
6,94
24,57

1,26

16,09

10,54

14,40

23,83

66,59

<LD

6,96

133,42

2,48

BIOS1F2
HPAs (ug/kg)
naftaleno
acenaftileno
acenafteno
fluoreno
fenantreno
antraceno
fluoranteno
pireno
benzo(a)antraceno
criseno
benzo(b)fluoranteno
benzo(k)fluoranteno
benzo(a)pireno
dibenzo(a,h)antraceno
benzo(ghi)perileno
indeno(1,2,3cd)pireno

BIOS2F2

BIOS3F2 BIOS4F2 BIOS5F2

0,56
<LD
<LD
116,83
502,28
94,86
156,75
<LD
116,98
184,54
76,43
7,04
25,07
17,41
3,03

<LD
<LD
<LD
90,57
408,79
<LD
306,93
210,51
78,07
134,31
25,39
11,32
<LD
12,04
<LD

<LD
<LD
<LD
57,48
197,33
<LD
318,63
273,09
174,71
229,93
56,29
21,92
40,53
53,32
8,59

2,79
3,52
<LD
<LD
85,79
65,28
208,48
317,71
129,91
237,32
56,16
30,27
58,18
48,09
6,92

<LD
1,42
<LD
1,04
45,82
14,99
224,51
251,49
133,26
237,42
127,43
<LD
68,98
56,52
11,10

16,48

3,32

40,16

47,71

53,24

LD
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50
0,50

111

Anexo 9.5
Dados sobre precipitao pluviomtrica na cidade do Rio Grande

180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
out/03

ppt (mm)
normal (mm)

dez/03

fev/04

abr/04

Fonte: FURG

112