Micro Ambien FINAL

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Microbiologa Ambiental

ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE
358010 - MICROBIOLOGA AMBIENTAL
Autor:
CARMEN JULIA PEDROZA PADILLA, Microbiol, M.Sc.
VALLEDUPAR
2012
1

NDICE DE CONTENIDO
Pg.
ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO
INTRODUCCIN
UNIDAD 1. PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA Y METABOLISMO

MICROBIANO
CAPTULO 1. MUNDO MICROBIANO
Leccin 1. Etapas histricas de la microbiologa
Leccin 2. Microbiologa
Leccin 3. Microorganismos como clulas
Leccin 4. Importancia de los microorganismos para el hombre
Leccin 5. Los microorganismos y sus ambientes naturales
CAPTULO 2. PERSPECTIVA GENERAL DE LA VIDA MICROBIANA
Leccin 6. Estructura celular en procariotas
Leccin 7. Estructura celular en eucariotas
Leccin 8. Estructura vrica
Leccin 9. Morfologa de bacterias
Leccin 10. Microscopa ptica y electrnica
CAPTULO 3. METABOLISMO MICROBIANO
Leccin 11. Reacciones metablicas y conservacin de la energa
Leccin 12. Gluclisis
Leccin 13. Ciclo del acido ctrico
Leccin 14. Fotosntesis en microorganismos
Leccin 15. Alternativas catablicas
10
11
11
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UNIDAD 2. DIVERSIDAD MICROBIANA

CAPTULO 4. CRECIMIENTO MICROBIANO
Leccin 16. Crecimiento celular y fisin binaria
Leccin 17. Curva de crecimiento
Leccin 18. Medidas directas del crecimiento microbiano
Leccin 19. Factores fsicos en el crecimiento microbiano
Leccin 20. Oxgeno y el crecimiento microbiano
CAPTULO 5. EUCARIOTA Y PROCARIOTA
47
48
48
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54
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58
2

Leccin 21. Archeas

Leccin 22. Hongos
Leccin 23. Hongos mucosos
Leccin 24. Protozoos
Leccin 25. Algas
CAPTULO 6. SISTEMA DE VIDA ANAEROBIO
Leccin 26. Respiracin Anaerobia
Leccin 27. Reduccin del nitrato y proceso de desnitrificacin
Leccin 28. Reduccin de sulfatos
Leccin 29. Metanognesis
Leccin 30. Acetanognesis
58
62
66
67
71
74
74
75
77
79
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UNIDAD 3. ECOLOGA Y MICROBIOLOGA

CAPTULO 7. MTODOS PARA ESTUDIAR MICROORGANISMOS
Leccin 31. Anlisis de las comunidades microbianas basado en
tcnicas de cultivo
Leccin 32. Aislamiento de cultivo axnico
Leccin 33. Anlisis molecular de las comunidades microbianas
Leccin 34. Tcnicas moleculares usadas en la microbiologa y
biotecnologa
Leccin 35. Medicin de la actividad microbiana en la naturaleza
CAPTULO 8. RELACIONES MICROBIANAS, COMUNICACIN
CELULAR Y CICLO DE NUTRIENTES
Leccin 36. Ecosistemas microbianos
Leccin 37. Comunicacin celular
Leccin 38. Ciclo del carbono y del oxgeno
Leccin 39. Ciclo del nitrgeno
Leccin 40. Ciclo del azufre
CAPTULO 9. APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGA
AMBIENTAL
Leccin 41. Tratamiento de residuos slidos
Leccin 42. Tratamiento de agua potable
Leccin 43. Biorremediacin
Leccin 44. Biodegradabilidad y efectos ecolgicos
Leccin 45. Biorremediacin de petrleo y otros contaminantes
84
85
BIBLIOGRAFA
85
88
90
93
97
98
98
101
104
106
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111
111
115
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122
125
130
3

NDICE DE CUADROS
Pg.
Cuadro 1. Comparacin de virus y bacterias

Cuadro 2. Reacciones de oxido reduccin para obtencin de energa
por bacterias
Cuadro 3. Rendimiento energtico por la oxidacin una molcula de
glucosa
Cuadro 4. Comparacin de fotosntesis en clulas eucariotas y
procariotas
Cuadro 5. Comparacin de caractersticas de filos de algas
59
36
43
45
72

NDICE DE FIGURAS
Pg.
Figura 1. Estructuras celulares de una procariota
17
Figura 2. Estructura flagelar en bacterias
18
Figura 3. Pared celular bacteriana
19
Figura 4. Estructura celular eucariota
23
Figura 5. Estructura del retculo endoplasmtico
25
Figura 6. Aparato de golgi
26
Figura 7. Tipos de virus
29
Figura 8. Morfologa de clulas bacterianas
30
Figura 9. Microscopio ptico compuesto
32
Figura 10. Imgenes de Paramecium con microscopa ptica
33
Figura 11. Microscopios electrnicos
34
Figura 12. Microfotografa de Paramecium con microscopa electrnica
35
Figura 13. Oxidacin global de la glucosa
38
Figura 14. Fermentacin para la produccin de etanol y lactato
38
Figura 15. Gluclisis
39
Figura 16. Ciclo de Krebs
41
Figura 17. Cadena transportadora de electrones
42
Figura 18. Fotofosforilacin cclica
44
Figura 19. Fotofosforilacin no cclica
45
Figura 20. Clasificacin nutricional de organismos vivos
46
Figura 21. Fisin binaria
48
Figura 22. Curva de crecimiento microbiano
50
Figura 23. Mtodo de recuento en placa de clulas viables

Figura 24. Mtodo de diluciones seriadas para recuento en placa de
colonias
Figura 25. Efecto de la temperatura en el crecimiento microbiano
52
54
55
5

Figura 26. Efecto del oxgeno en el crecimiento microbiano
57
Figura 27. Dominio Archaea
59
Figura 28. Archaeas halfilas y metangenos
60
Figura 29. Microfotografa de Thermoplasma acidophilum
61
Figura 30. Solfulobus archaea
61
Figura 31. Ejemplo de hongo filamentoso
62
Figura 32. Ejemplo de hongo levaduriforme
63
Figura 33. Ciclo de vida del moho del pan Rhizopus stolonifer
65
Figura 34. Ciclo de vida de Basidiomycota y Ascomycota
65
Figura 35. Ciclo de vida de Dictyostelium discoideum
66
Figura 36. Hongos mucilaginosos
67
Figura 37. Conjugacin del protozoo Paramecium
69
Figura 38. Phylum del reino protista
70
Figura 39. Ejemplo de Ciliophora
69
Figura 40. Ejemplo de Phaeophyta
72
Figura 41. Ejemplos de Clorophyta y Rodophyta
73
Figura 42. Ejemplos de Bacillariophyta y Pyrrophyta
73
Figura 43. Ejemplos de respiracin anaerobia
74
Figura 44. Posible transporte de electrones en Pseudomonas stutzeri

durante la desnitrificacin
76
Figura 45. Reduccin del sulfato
77
Figura 46. Transporte de electrones en bacterias reductoras de sulfato
78
Figura 47. Proceso de metanognesis a partir de dixido de carbono
81
Figura 48. Produccin de acetato a partir de la va acetil coenzima A
82
Figura 49. Medio de enriquecimiento
87
Figura 50. Columna de Winogradsky
87
Figura 51. Mtodo de siembra por estra o agotamiento
89
Figura 52. Pinzas lser
89
Figura 53. Tinciones fluorescentes de clulas
90
Figura 54. Tincin con anticuerpos fluorescentes y con FISH
91
Figura 55. Reaccin en cadena de la polimerasa
94
6

Figura 56. Electroforesis de protenas y gel de corrido
96
Figura 57. Ejemplo de micorriza
101
Figura 58. Biopelcula microbiana
103
Figura 59. Modelo de interferencia de mecanismos de QS

dependiente de AHL
103
Figura 60. Ciclo de xido reduccin del carbono
105
Figura 61. Ciclo del nitrgeno
106
Figura 62. Ciclo del azufre
109
Figura 63. Ciclo de oxido reduccin del azufre
110
Figura 64. Pila de compost
113
Figura 65. Sistema de fitorremediacin
120
Figura 66. Biorremediacin de petrleo en suelos
126

ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO
Este material didctico del mdulo Microbiologa Ambiental fue desarrollado por
Carmen Julia Pedroza Padilla, Microbiloga y Magster en Ciencias Biotecnologa. Tiene un perfil profesional investigativo y docente; con desempeo
laboral como investigadora en la Corporacin para Investigaciones Biolgicas
(CIB) y la Universidad de Santander (UDES), y como docente catedrtica de la
Universidad de Antioquia (UdeA). Tambin tuvo formacin acadmica en el
Instituto de Investigaciones Marinas y Costeras (INVEMAR). Actualmente se
desempea como instructora en el Centro Biotecnolgico del Caribe SENARegional Cesar.
Para citar este documento por favor hacerlo de la siguiente manera:
Pedroza Padilla, C. (2011). Microbiologa ambiental. Mdulo didctico. Valledupar:
Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD.

INTRODUCCIN
En los ltimos aos la microbiologa ambiental se ha convertido en una innovadora

ciencia biolgica, que adems de estudiar la funcin y diversidad de los
microorganismos en sus ambientes naturales y artificiales, se propone como una
alternativa fortalecida con la biotecnologa que puede dar solucin a muchos
problemas ambientales causados por las actividades humanas (agricultura,
minera, industria, deforestacin, urbanizacin, etc.). Gracias al desarrollo de
tcnicas moleculares dej de ser una disciplina dedicada exclusivamente a la
evolucin, ecologa, fisiologa y taxonoma de los microorganismos y se transform
en una ciencia clave para el desarrollo de soluciones limpias y amigables al medio
ambiente ante los crecientes problemas de contaminacin en el planeta.
Este material didctico se desarroll con el fin de proporcionarle a los futuros
profesionales de programas ambientales de la Universidad Nacional Abierta y a
Distancia (UNAD) la informacin bsica, conceptual y actual de la microbiologa
ambiental as como tambin las diferentes aplicaciones que le permitan a los
estudiantes dar posibles soluciones a problemas ambientales usando mecanismos
con participacin microbiana.
Este mdulo consta de tres unidades, nueve captulos y cuarenta y cinco lecciones
y tiene el objetivo que al finalizar el curso el estudiante tenga la capacidad de
conceptualizar, diferenciar tipos de microorganismos, mecanismos microbianos
naturales en sus procesos biolgicos, mtodos de anlisis microbianos y su
aplicabilidad en diferentes reas.
En su orden en la primera unidad, el estudiante tendr la informacin sobre la
historia de la microbiologa, el impacto de los microorganismos en las actividades
humanas, las diferentes estructuras celulares y por ltimo, parte de los procesos
metablicos que realizan los microorganismos para sobrevivir. La segunda unidad,
se enfoca en el estudio de las condiciones para el crecimiento microbiano,
diversidad microbiana y procesos metablicos del sistema de vida anaerobio,
claves para el desarrollo de tcnicas y metodologas que ayuden a la comprensin
y aplicabilidad de estos procesos en el ambiente. Por ltimo en la tercera y ltima
unidad, el estudiante encontrar los elementos y algunos mtodos usados en la
ecologa microbiana as como tambin parte de los procedimientos
biotecnolgicos empleados actualmente para solucionar problemas ambientales a
travs de mecanismos responsables, efectivos, y amigables al medio ambiente
donde participan activamente los microorganismos.
Bienvenidos todos a conocer sobre la microbiologa ambiental!
9

UNIDAD 1. PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA Y METABOLISMO

MICROBIANO
CAPTULO 1. MUNDO MICROBIANO

CAPTULO 2. PERSPECTIVA GENERAL DE LA VIDA MICROBIANA
Leccin 8. Estructura celular vrica
CAPTULO 3. METABOLISMO MICROBIANO
Leccin 11. Reacciones metablicas y conservacin de energa
Leccin 13. Ciclo del acido ctrico
10

UNIDAD 1
PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA Y METABOLISMO
MICROBIANO
CAPTULO 1. Mundo microbiano

Durante muchos siglos el hombre desconoci la existencia de microorganismos,
su ecologa e interacciones con otros seres vivos y mucho menos su relacin con
las enfermedades, la mayora de ellas asociadas a castigos divinos individuales o
colectivos por causa de pecados, crmenes y delitos. La historia de la
microbiologa inici en 1665 cuando Robert Hooke descubri con la ayuda de un
microscopio rudimentario la existencia de pequeas celdas en una rodaja de
corcho celdillas y la presencia de cuerpos fructferos de mohos en un objeto de
cuero. Aunque es posible que el primero en observar bacterias haya sido el
reservado comerciante telas y cientfico aficionado, el holands Anton Van
Leeuwenhoek quien con microscopios fabricados por l pudo observar pequeos
organismos animlculos, obtenidos de heces y raspado de dientes,
espermatozoides y microorganismos que hoy conocemos como algas y protozoos;
todas sus anotaciones y descubrimientos fueron escritas y enviadas a la Royal
Society de Londres la cual tambin recibi varios microscopios fabricados por este
cientfico aficionado.
La teora de la generacin espontnea era la ms aceptada por la mayora de los
cientficos de la poca, muchos crean que sapos podan nacer del suelo hmedo
y gusanos de materia en descomposicin. Pero otros, como los italianos
Francesco Redi (1668) y Lazzaro Spallanzani (1765) respectivamente, afirmaban
que los gusanos aparecan porque eran depositados por moscas y que los caldos
nutritivos se contaminaban por accin de microorganismos presentes en el aire.
Slo hasta 1861 el cientfico francs Louis Pasteur desaprob la generacin
espontnea y demostr a travs de una serie de experimentos empleando
matraces que contenan caldo de carne a los que les dobl el cuello en forma de S
y posteriormente hirvi, prob que al transcurrir del tiempo en la solucin fra y
estril no aparecan microorganismos, mientras que el matraz sin cuello doblado
11

estaba lleno de microorganismos. Con esto demostr que a pesar de tener

contacto con el aire el matraz del cuello doblado los microorganismos quedaban
atrapados en ste y por lo tanto los microorganismos estn presentes en el aire
pero que el aire per se no creaba los microbios. Pasteur tuvo otros
descubrimientos como la fermentacin de levaduras, modo en que actan las
vacunas, la pasteurizacin, proceso muy empleado actualmente para la
esterilizacin o disminucin de carga microbiana en muchos tipos de alimentos y
la relacin de microorganismos en la causa de enfermedades (Tortora, Funke y
Case, 2007).
Aunque en 1796 el fsico ingls Edward Jenner desarroll la primera vacuna
contra la viruela y el mdico ingls Joseph Lister en 1860 practic tcnicas
aspticas en cirugas para contrarrestar las enfermedades causadas por los
microorganismos, slo hasta 1876 el fsico alemn Robert Koch demostr pasos
experimentales que relacionaban enfermedades con microorganismos especficos,
conocidos como postulados de Koch (Tortora et al. 2007). Desde los aos de
observaciones de Hooke y descubrimientos al azar como el de los antibiticos por
el escocs Alexander Fleming en 1928, la microbiologa sigue teniendo
vertiginosos avances para contrarrestar no slo enfermedades en el hombre si no
tambin patgenos en plantas y animales; adems de aprovechar todos aquellos
microorganismos benficos los cuales superan nmero en la poblacin
microbiana.
NOTA:
En los siguientes enlaces encontrar videos sobre historia de la microbiologa:
http://www.youtube.com/watch?v=vPGcszfMZjM&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=GBIw1qAOBjA&feature=related
Es la ciencia que trata el estudio de los microorganismos. La palabra microbiologa
deriva de las voces griegas mikros, pequeo; bios, vida y logos, estudio, es decir
etimolgicamente estudia organismos demasiado pequeos para ser observados
a simple vista. Tambin llamados microbios. El objeto de estudio de la
microbiologa incluye bacterias, hongos, protozoos y virus, estos ltimos a pesar
de no ser entidades celulares definidas pueden afectar a su husped (Llop,
Valds-Dapena y Zuazo, 2001; Tortora et al. 2007)
12

La microbiologa ambiental es una subdisciplina que estudia la funcin, diversidad

de los microorganismos y su papel en la realizacin de procesos tanto en sistemas
naturales como artificiales. Esta rea de la microbiologa es especialmente
interdisciplinaria (Madsen, 2008).
Todos los seres vivos tienen caractersticas estructurales en comn que permite a
los taxnomos agruparlos y clasificarlos para poder asignarles un nombre
cientfico. La sistemtica o filogenia estudia la clasificacin de las especies
considerando su historia evolutiva.
La mayor categora taxonmica que divide a los organismos vivos es el Dominio,
propuesta por el cientfico estadounidense Carl Woese, existen tres dominios:
Eukarya, Bacteria y Archaea. En Eukarya se encuentran los hongos, plantas,
animales y protistas. En Bacteria, las procariotas patgenas y no patgenas
presentes en aire, suelo y agua, las procariotas fotoauttrofos. Y por ltimo en el
dominio Arquea se agrupan todas las clulas procariotas que no tienen
peptidoglicano en su pared celular, las cuales en su mayora viven en ambientes
extremos o tienen actividades metablicas poco comunes (Tortora et al. 2007).
La unidad fundamental de la clasificacin es la especie, son el grupo ms
estrechamente relacionado que tiene la capacidad de reproducirse entre si. Las
especie pueden agruparse y formar gneros, los gneros relacionados forman una
familia y las familias similares un orden y el grupo de rdenes constituyen una
clase y las clases relacionadas forman un filo y stos un reino y los reinos
relacionados se agrupan en dominios (Tortora et al. 2007).
Los virus no estn considerados como seres vivos por lo tanto no se ubican en
ninguno de los dominios descritos anteriormente.
NOTA:
Leer la seccin 1.1 Microbiologa en: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J.
(2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson
Prentice Hall.
Para descargar este libro usar este enlace:
http://www.4shared.com/get/YS071GWm/Biologa_de_los_Microorganismos.html
Dar click en descargar ahora. Esperar el tiempo estipulado en el cronmetro y
dar click en descargar archivo ahora, as obtendr el libro en formato pdf. Debe
guardarlo, se usar con frecuencia en el desarrollo del mdulo. Sera ideal
revisar la tabla del contenido del libro para reforzar todas las lecciones.
13


La clula es la unidad estructural y funcional de todos los seres vivos. Existen
microorganismos unicelulares, es decir, aquellos que constan de una sola clula
como es el caso de las bacterias, levaduras, protozoos y muchas algas; y los
multicelulares, que estn constituidos por muchas clulas como la mayora de los
hongos. Las clulas como entidades estructurales poseen una membrana celular o
plasmtica que las separa del entorno, algunas tambin tienen pared celular, la
cual siempre est al exterior de la membrana celular, un citoplasma que es donde
se realizan la mayora de las actividades funcionales y un ncleo o nucleoide
(procarin), para las que no tienen un ncleo definido que contiene la informacin
gentica.
La clula es un sistema abierto que intercambia materia y energa con el entorno
para realizar todas sus reacciones bioqumicas y fsico-qumicas, es decir, su
metabolismo, ste le permite el crecimiento o reproduccin donde a partir de una
clula se genera otra clula hija gracias a las actividades de sntesis celular, el
movimiento le permite desplazamiento y la comunicacin celular capacidad para
interactuar con otras clulas y activar as ciertos genes indispensables en la
supervivencia de la especie, todos ellos importantes en la continuidad de la misma
(Madigan, Martinko y Parker, 2003).
NOTA:
Leer la seccin 1.2 en: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J. (2003). Brock
biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson Prentice Hall.

Si le diramos la opcin a un grupo de personas para mencionar una palabra que
asocie con microorganismos posiblemente la mayora dira enfermedad, porque
desconocen que slo unos pocos respecto a la poblacin son patgenos
(producen enfermedades); la mayora de los ellos cumplen un papel fundamental e
irremplazable en el ecosistema como veremos en la prxima leccin. Aunque
gracias a la aparicin de enfermedades y pestes en tiempos atrs se desarrollaron
las primeras teoras de la microbiologa, hoy despus de muchos avances
cientficos los microorganismos son utilizados en diferentes reas que benefician
al ser humano. Entre ellas tenemos:
14

La industria alimentaria, no slo se han diseado nuevas estrategias para combatir

a los microorganismos que contaminan los alimentos y causan enfermedades
alimentarias sino que muchos de ellos son bsicos en la produccin de alimentos
como los lcteos (quesos, yogur, mantequilla), carnes (carnes maduradas),
vegetales enlatados o encurtidos (coles, pepinillos, pimentones, cebollas,
zanahorias etc), bebidas alcohlicas (vinos, cerveza, sidra, etc), vinagre, o en la
produccin del pan donde se usan cepas microbianas que ayudan al proceso de
fermentacin, acidificacin y/o maduracin; e incluso el consumo de hongos como
es el caso de los championes que tienen alto valor nutricional.
En la industria farmacutica y biotecnolgica los microorganismos son clave para
la obtencin a bajo costo y en grandes cantidades de metabolitos (aminocidos,
vitaminas, enzimas, antibiticos, compuestos orgnicos, promotores de
crecimiento vegetal), produccin de organismos transgnicos y en el desarrollo de
tcnicas con DNA recombinante e ingeniera gentica.
En la agricultura no slo causan enfermedades en plantas (fitopatgenos) sino que
tambin a travs de las interacciones procariota-eucariota o procariota-procariota
pueden beneficiar a las plantas gracias a procesos simbiticos que le permiten a
stas tomar los nutrientes presentes en el medio con mayor facilidad o el control
de plagas gracias al uso de bacterias. Tambin gracias a los microorganismos se
han desarrollado a travs de ingeniera gentica plantas transgnicas resistentes a
enfermedades y con niveles de produccin elevados respecto a las plantas
silvestres (esto todava requiere muchos estudios de efectos secundarios y tiene
implicaciones ticas).
Con el aumento de la poblacin y el desarrollo tecnolgico tambin se elevan los
niveles de contaminacin en fuentes de aguas y suelos, derrames de crudo y
compuestos recalcitrantes o metales pesados los cuales son muy difciles de
remover y degradar pero gracias a la amplia actividad metablica microbiana
muchos microorganismos usan esos compuestos como sustrato ofrecindole al
hombre otra aplicacin vital para la conservacin y restauracin del medio
ambiente, la biorremediacin.
NOTA:
Por favor leer los siguientes artculos:
http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/volumen1/ciencia2/43/html/sec_8.ht
ml
http://www.musalit.org/pdf/IN060651_es.pdf
15


La ecologa microbiana estudia las relaciones entre el microorganismo y su
ambiente natural. Estos organismos viven en ambientes competitivos y en
ocasiones extremos (agua de termales) pero gracias a las asociaciones de clulas
o individuos se forman conjuntos llamados poblaciones, donde stas a su vez
pueden agruparse para establecer comunidades microbianas e interactuar dentro
de un lugar determinado llamado nicho.
Dentro de un ecosistema se establecen relaciones simbiticas, es decir, las
interacciones entre organismos y poblaciones coexistentes donde se puede o no
obtener beneficios, por ejemplo, las micorrizas (myco = hongo; rhiza = raz)
participan en el desarrollo de las plantas ya que sirven como pelos de las races y
absorben nutrientes que a la planta sola le sera dificultoso y luego los libera de
forma gradual para que los pueda asimilar, otro ejemplo sera la produccin de
vitamina K por bacterias intestinales en los seres humanos.
Adems de este tipo de asociaciones gracias a los microorganismos se puede
mantener el equilibrio entre lo bitico y abitico, por ejemplo, las bacterias que
participan en el ciclo de nitrgeno ayudan a degradar residuos e incorporan el
nitrgeno presente del aire en compuestos orgnicos. Tambin participan en los
ciclos biogeoqumicos del carbono y azufre.
NOTA:
Leer la seccin 1.3 en: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J. (2003). Brock
biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson Prentice Hall.
CAPTULO 2. Perspectiva general de la vida microbiana

Aunque las clulas eucariotas y procariotas tienen una complejidad que les
permite realizar todas las funciones metablicas para su mantenimiento y
supervivencia existen caractersticas estructurales que ayudan a diferenciarlas, a
continuacin describiremos la composicin estructural y funcional de clulas
procariotas, eucariotas y la de los virus.
16

Clulas procariotas
Son organismos unicelulares que carecen de un ncleo definido, su nombre se
deriva del griego pro = antes de; karion = ncleo. El material gentico de estas
clulas, al contrario de las eucariotas se encuentra en el citoplasma y no en el
ncleo. Este es un grupo muy diverso y con diferencias estructurales que nos
permiten su clasificacin. Est conformado por bacterias y archaea, dividas en
base a la composicin de la pared celular (figura 1).
Figura 1. Estructuras celulares de una procariota (tomado de Tortora et al. 2007).
Glicoclix
Es una capa gelatinosa de polisacridos y/o polipptidos secretados por las

clulas al exterior de la pared celular que est relacionada con la virulencia
(capacidad de producir enfermedad), adherencia a superficies, reservas de
energa, proteccin a la deshidratacin, lesiones y salida de nutrientes. Cuando
la capa est firmemente unida y de manera organizada a la pared celular se le
llama cpsula de lo contrario se considera una capa mucilaginosa (Tortora et
al. 2007).
Flagelos
Son apndices largos y finos que se proyectan hacia el exterior y propulsan a

las bacterias permitindoles el movimiento y desplazamiento. El flagelo consta
17

de tres partes: el filamento, que es la parte ms larga y externa compuesto por

una protena globular llamada flagelina, el gancho y por ltimo el cuerpo basal
que est compuesto por anillos que lo fijan a la pared y membrana celular
(figura 2).
No todas las bacterias tienen flagelos (tricas), peros las que los tienen pueden
adoptar diferentes disposiciones alrededor de la clula. Entonces las bacterias
pueden ser monotricas (un solo flagelo polar), lofotricas (dos o ms flagelos en
uno o ambos extremos de la clula), anfitricas (un flagelo en cada extremo de
la clula) y pertricas (muchos falgelos alrededor de la celula). Los flagelos no
pueden verse a simple vista en el microscopio ptico con la ayuda de tinciones
o en el microscopio electrnico.
Figura 2. Estructura flagelar en bacterias. (a) Bacterias gramnegativas, (b) bacterias

grampositivas (tomado de Tortora et al. 2007).
Fimbrias y pili
Son apndices ms cortos, rectos y finos que los flagelos compuestos por
subunidades proteicas de pilina. Las fimbrias pueden estar en los polos o
distribuidas en toda la superficie celular y cumple funciones de fijacin,
mientras que el pili que es ms largo que las fimbrias y slo se encuentran uno
o dos por clula; cumple funciones de transferencia intercelular de ADN en el
proceso de conjugacin, tambin es llamado pili sexual.
18

Pared celular
Es una estructura compleja y rgida que delimita, da forma y brinda proteccin

ante la lisis celular dada la fragilidad de la membrana citoplasmtica y la
presin osmtica a la que est sometida por el entorno extracelular, tambin
juega un papel importante en la divisin celular y en su propia biosntesis. Est
compuesta por peptidoglucano (murena) un heteropolmero constituido por
N-acetilmurmico (NAM) y N-acetilglucosamina (NAG), aminocidos de cadena
lateral y puentes transversales de aminocidos.
Las bacterias se clasifican segn la composicin de la pared celular en
grampositivas y gramnegativas (figura 3); las grampositivas adems de una
capa gruesa de peptidoglucano tienen elevadas concentraciones de cidos
teicoicos mientras que las gramnegativas no, pero stas en cambio estn
formadas por una capa ms delgada de peptidoglucano que a su vez est
cubierta por una membrana externa de lipopolisacridos (LPS), lipoprotenas,
porinas y fosfolpidos (Llop et al. 2001; Madigan et al. 2003; Tortora et al.
2007).
Figura 3. Pared celular bacteriana. Arriba se muestra la estructura de clulas grampositivas y

debajo de clulas gramnegativas (tomado de Tortora et al. 2007).
19

Existen clulas procariotas que no tienen pared celular o algunas son muy
escasas como es el caso del gnero Mycoplasma pero en cambio tienen una
membrana plasmtica con esteroles. Las procariotas del dominio archaea no
constan de pared celular con peptidoglucano, siendo esta la principal
caracterstica de este dominio (Tortora et al 2007).
Membrana plasmtica, citoplasmtica o celular
Es una estructura delgada que rodea al citoplasma y acta como una barrera
semipermeable y selectiva entre el interior y exterior de la clula controlando
as el ingreso y salida de sustancias; tambin gracias a la presencia de
diferentes enzimas participa en la degradacin de nutrientes, la generacin de
energa (ATP) y fotosntesis. Est compuesta por una bicapa lipdica
constituida en su mayora por fosfolpidos y protenas, stas ltimas pueden
ser de superficie (perifricas) o transmembranales (integrales) que facilitan la
catlisis y transporte de sustancias. Los iones divalentes de calcio y magnesio
contribuyen a la estabilidad inica de la membrana celular. A diferencia de las
clulas eucariotas y con excepcin de los Mycoplasmas la membrana de las
procariotas no contiene esteroles (Tortora et al 2007).
Citoplasma
Es la sustancia semifluida (citosol) al interior de la clula donde se encuentra el

cromosoma (material gentico), ribosomas y depsitos de reserva o
inclusiones. Est constituido es su mayora por agua y otras sustancias
(carbohidratos, iones, lpidos, enzimas y compuestos de bajo peso molecular)
A diferencia de las clulas eucariotas no tiene citoesqueleto ni flujo
citoplasmtico (Llop et al. 2001; Tortora et al 2007).
Nucleoide o procarin
Es la zona que contiene el material gentico conformado por un cromosoma

(molcula de ADN bicatenario), unido a la membrana celular pero que a
diferencia de las clulas eucariotas no est delimitado por una envoltura o
membrana nuclear. Muchas bacterias contienen pequeas molculas de ADN
circular que no estn unidas al cromosoma bacteriano y que se replican
independientemente de ste, llamados plsmidos (muy tiles en la
biotecnologa); los cuales le otorgan propiedades especiales como resistencia
a antibiticos, tolerancia a sustancias txicas, entre otras (Llop et al. 2001;
Madigan et al. 2003; Tortora et al. 2007).
Ribosomas
20

Son estructuras celulares que constan de dos subunidades compuestas por

acido ribonucleico ribosomal (ARNr o rRNA por siglas en ingls) y protenas, se
encuentran por millares en el citoplasma dada su funcin vital en la sntesis de
protenas. Cuando se estn agrupados en cadenas se les llama
polirribosomas. Los ribosomas procariotas son ms pequeos que los
eucariotas y se les conoce como ribosomas 70S.
Inclusiones
El citoplasma de las clulas procariotas contiene diversas estructuras de

almacenamiento, reserva o depsito de nutrientes llamadas inclusiones, que
pueden ser utilizados cuando est expuesta a medios adversos o en
condiciones de inanicin. Entre ellas tenemos:
Grnulos metacromticos o volutina
Son estructuras conformadas por reservas de fosfato inorgnico utilizados
para la sntesis de ATP, se les llama as por el color rojo que toman cuando
son expuestos a colorantes azules como es el caso del azul de metileno o
azul de toluidina. Adems de las bacterias, las algas, hongos o protozoos
los pueden tener (Tortora et al. 2007).
Grnulos polisacridos
Son reservas de almidn y glucgeno que la bacteria almacena cuando
crece en un medio pobre en nitrgeno pero rico en carbono; al exponerse al
yoduro de potasio el glucgeno toma un color rojo y el almidn azul.
Inclusiones lipdicas
Son acmulos de poli-beta hidroxibutricos (PHB) que en especies como
Bacillus constituyen reservas de carbono y energa durante la esporulacin.
Tambin hay bacterias que reservan poli-beta-hidroxialcanoatos (PHA), los
cuales hoy son utilizados para fabricar plsticos bacterianos biodegradables
y disminuir a la contaminacin ambiental. Se tien con colorantes como el
Negro-Sudn.
Grnulos de azufre
21

Se forman cuando en el medio hay compuestos de azufre reducido para

usarlos como reservas de energa. Aparece en las bacterias que utilizan
sulfuro de hidrgeno (SH2) como el gnero de Thiobacillus.
Carboxisomas
Son inclusiones compuestas por una monocapa protenica que contiene la
enzima ribulosa-bifosfato carboxilasa; utilizada por las bacterias
fotosintticas y nitrificantes.
Vacuolas de gas
Son vesculas con una monocapa protenica impermeable al agua pero que
acumulan gas dependiendo de la concentracin de ste en el exterior.
Estas estructuras confieren la flotabilidad ptima que les permite alcanzar
luz, oxgeno u otros elementos. Estn presentes en cianobacterias,
halobacterias y anoxignicas.
Magnetosomas
Son partculas cristalinas de hierro magnetita (Fe3O4), sensores del campo
magntico terrestre ya que permiten la orientacin de las bacterias
magnetotcticas (Aquaspirillum magnetotacticum y Magnetospurillum
magnetotacticum); en el campo industrial se desarrollan mtodos para
obtener magnetita para la fabricacin de cintas magnticas para audio y
datos.
Endosporas
Son clulas en reposo que se forman intracelularmente por la carencia de

nutrientes en ciertas bacterias (Bacillus, Clostridium, Sporosarcina). Estas
estructuras pueden vivir en ambientes adversos como calor extremo, falta de
nutrientes, radiaciones, desecacin, presencia de agentes qumicos o
bactericidas etc. El proceso de formacin de endosporas se conoce como
esporulacin o esporognesis e implica la invaginacin de la membrana celular
junto con material gentico en una clula vegetativa o progenitora que despus
de lisarse libera la endospora y puede permanecer en latencia por millones de
aos, hasta que por un estmulo qumico o fsico se desencadena la
germinacin (recuperacin del estado vegetativo). Este no es considerado un
proceso de reproduccin.
22

NOTA:
En este enlace encontrar un video sobre bacterias:
http://www.youtube.com/watch?v=KcFjXYzGh20

Clula eucariota
Est conformada por clulas unicelulares y pluricelulares de mayor tamao y
complejidad que tienen un ncleo definido; comprende algas, protozoos,
plantas y animales. A continuacin se describir de una forma general de las
estructuras en las eucariotas (figura 4).
Figura 4. Estructura celular eucariota (tomado de Tortora et al. 2007).
23

Flagelos y cilios
Al igual que en las procariotas sirven para la locomocin y desplazamiento,

pueden estar recubiertas de citoplasma y membrana plasmtica; estn
conformados por microtbulos compuestos de tubulina y didena. Si son largos
se les llama flagelos y si son escasos y numerosos cilios. Son frecuentes en
protozoos y algas.
Pared celular y glicoclix
Son una estructura ms simple que en las clulas procariotas est compuesta
por celulosa (en plantas y algunos hongos) y quitina, glucano y manano en la
mayora de los hongos. No todas las eucariotas tienen pared, las clulas
animales estn desprovistas de ella pero en cambio constan de una cubierta
de carbohidratos llamada glicoclix.
Membrana celular
Est conformada por una bicapa lipdica, pero a diferencia de las procariotas
contiene carbohidratos (actan como receptores), esteroles (colesterol en
animales) y ergosterol (en hongos).
Citoplasma
Al contrario de las procariotas tiene un citoesqueleto que le da soporte y

contribuye al transporte de las sustancias gracias al flujo citoplasmtico, las
enzimas no estn disueltas en el citosol sino que estn confinadas en las
organelas.
Ribosomas
Son estructuras ms grandes y densas que en procariotas, conocidas como

80S, compuestos por ARNr y protenas, se encuentran en el retculo
endoplasmtico rugoso y libres en el citoplasma. Los cloroplastos y
mitocondrias contienen ribosomas de 70S. Pueden formar polirribosomas y su
funcin es la sntesis de protenas para todas las actividades celulares (Tortora
et al. 2007).
Ncleo
Es el orgnulo ms grande de la clula, con forma esfrica u ovalada rodeado

por una doble membrana nuclear con poros nucleares que controlan el
24

intercambio de sustancias (ARNr, ARNmensajero y enzimas) entre el ncleo y

el citoplasma. El nucleolo est inmerso en la membrana nuclear y se encarga
de sintetizar ARNr. El ncleo contiene el material gentico (ADN y ARN). El
ADN est rodeado por protenas llamadas histonas y contiene mltiples
cromosomas.
Retculo endoplasmtico
Existen dos tipos: el retculo endoplasmtico rugoso que es una red de canales
o sacos membranosos (cisternas) que se extiende desde la membrana nuclear
y estn recubiertos de ribosomas; su funcin es sintetizar protenas y catalizar
las unin entres stas y otros compuestos como carbohidratos o lpidos que
luego son secretados a la membrana.
El retculo endoplasmtico liso, no tiene ribosomas (de all su nombre) pero
tiene enzimas que sintetizan fosfolpidos, grasas, esteroides (estrgenos,
tetosterona y colesterol), adems de fagocitar sustancias txicas como el
alcohol y drogas (figura 5).
Figura 5. Estructura del retculo endoplasmtico. Se observa el retculo endoplasmtico liso

(RE liso) y el retculo endoplasmtico rugoso (RE rugoso) con ribosomas en su interior (tomado
de Tortora et al. 2007).
Aparato de golgi
Es una red de canales o cisternas que recibe vesculas (con protenas) que
vienen del retculo endoplasmtico rugoso y despus de reacciones
enzimticas las proteinas sufren modificaciones para generar glicoprotenas,
25

glucolpidos y lipoprotenas las cuales pueden ser secretadas y transportadas

hasta la membrana celular (figura 6).
Lisosomas
Son estructuras esfricas rodeadas de membrana, formados a partir del

aparato de golgi, contienen enzimas capaces de degradar diversas sustancias
e incluso bacterias.
Vacuolas
Son cavidades derivadas del aparato de golgi rodeadas de una membrana

llamada tonoplasto, presentes en su mayora en clulas vegetales. Sus
funciones estn relacionadas con almacenamiento de nutrientes, desechos y
agua.
Figura 6. Aparato de golgi. Se observan vesculas que llegan desde el RE rugoso (tomado de
Tortora et al. 2007).
Mitocondrias
Son organelas esfricas o bastoniformes compuestas por una doble membrana

(interna y externa) que forma pliegues llamadas crestas y con un interior
semilquido conocido como matriz. Las mitocondrias contienen ADN y
ribosomas 70S indispensables para la produccin de enzimas que participan
en varias actividades metablicas exclusivas de esta organela. Sus funciones
estn relacionadas con la respiracin celular y produccin de ATP. Tambin
pueden dividirse para generar nuevas mitocondrias en la misma clula.
Cloroplastos
26

Son estructuras grandes de doble membrana que contienen la clorofila

necesaria para la fotosntesis. Tambin contienen ADN, ribosomas 70S y
enzimas que participan en la sntesis de protenas; adems de poder
reproducirse dentro de la misma clula. Los cloroplastos contienen granas,
las cuales son agrupaciones de sacos aplanados llamados tilacoides donde
se encuentra el pigmento de la clorofila. Estn presentes en algas y plantas.
Peroxisomas
Son orgnulos pequeos rodeados de membranas con enzimas que oxidan
sustancias orgnicas (aminocidos, cidos grasos) y txicas (alcohol, perxido
de hidrgeno). La catalasa se encuentra en esta organela.
Centrosomas
Est formado por material pericentriolar (zona del densa citosol de fibras
protenicas) y centriolos (nueve tripletes de microtbulos). Sus funciones estn
relacionadas con la divisin celular en la formacin del huso mittico.
NOTA:
En este enlace encontrar un video sobre estructura y funcin celular:
http://www.youtube.com/watch?v=395B4JZg6I0&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=f9TA7-sypXs&feature=related
Leccin 8. Estructura vrica

Los virus (del latn virus = veneno) son entidades infecciosas o elementos
genticos de ADN o ARN que se replican indispensablemente dentro de una
clula husped utilizando su maquinara celular y enzimtica; pero tienen formas
extracelulares que facilitan su transmisin entre clulas. Muchos autores no los
consideran seres vivos porque sin la clula husped que infectan stos no podran
replicarse y por lo tanto no existiran. A diferencia de las clulas eucariotas y
procariotas los virus no tienen estructuras celulares (membrana celular, pared
celular, citoplasma, ncleo) y pocas o ninguna enzima que le permita realizar
actividades metablicas.
27

Los virus son entidades muy pequeas (20 - 1000 nm) que slo pueden
observarse con la ayuda de microscopios electrnicos y tienen la capacidad de
atravesar filtros bacteriolgicos. Su espectro de clulas husped es amplio
(plantas, animales) y los que infectan a bacterias conocidos como bacterifagos.
Cuando los virus estn libres de manera extracelular se le conoce como virin,
estn compuestos por cidos nucleicos (ADN o ARN pero nunca ambos) y una
cubierta o cpside. Los virus no son susceptibles a antibiticos por lo tanto su
empleo en enfermedades virales es inocuo es innecesario, slo aumenta la
posibilidad de resistencia bacteriana (cuadro 1). Entre las partes vricas estn:
Acido nucleico
Est constituido por ADN o RNA y stos pueden ser monocatenario (una
cadena o cadena sencilla) o bicatenario (dos cadenas o cadena doble) o
dividido en varios segmentos. Por lo general el material gentico viral es
mucho ms pequeo que en bacterias (5000 bases 230.000 pared de bases).
Los cidos nucleicos tienen la informacin necesaria para sintetizar protenas y
enzimas virales indispensables para la replicacin viral.
Cpside y envoltura
La cpside es la cubierta protenica que envuelve al material gentico y est

constituido por subunidades estructurales proteicas llamados capsmeros, la
composicin qumica de stos puede ser de una o varias protenas y vara de
acuerdo al virus. La cpside es la que determina la forma del virus.
La envoltura es una membrana constituida por lpidos, protenas y
carbohidratos, se forma durante la maduracin viral mediante un proceso de
gemacin a travs de la membrana celular de la clula husped. Algunos virus
tienen prolongaciones por fuera de la envoltura conocidas como peplmeros;
usualmente estn conformados por glucoprotenas virales. Tambin tienen
protenas no glucosiladas por debajo de la envoltura. Es importante aclarar que
el carbohidrato que se aade a las protenas no es de origen viral si no que es
aportado por la clula husped mientras que la protena si es codificada por el
virus (Llop et al. 2001).
Existen virus sin envoltura o virus desnudos, en este tipo de virus la cpside
protege al material gentico de la degradacin por parte de nucleadas (DNasa
y RNasa).
Los virus se clasifican morfolgicamente con base a la simetra o arquitectura
de su cpside mediante estudios de microscopa electrnica, crioelectrnica y
cristalografa de rayos X. Los principales grupos son: virus helicoidales (virus
28

de la rabia, virus mosaico del tabaco, TMV), virus polidricos (virus del
papiloma humano, HPV), virus con envoltura (virus de la gripe, VIH) y virus
complejos como el caso de los bacterifagos (Fago T4), ver algunos en la
figura 7.
Cuadro 1. Comparacin de virus y bacterias (tomado de Tortora et al. 2007).
29

Figura 7. Tipos de virus (tomado de Tortora et al. 2007).
NOTA:
En este enlace encontrar un video sobre virus :
http://www.youtube.com/watch?v=L9kwsj9h2Hg

Las bacterias tienen diversidad de formas y tamaos y se clasifican de acuerdo a
su forma en varios grupos (figura 8):
30

Figura 8. Morfologa de clulas bacterianas (tomado de www.oocities.org).
Cocos
Bacterias de forma esfrica, redonda u ovalada. Cuando se dividen pueden

agruparse entre si de varias formas: diplococos (cocos en pares), tetracocos
(grupos de cuatro), estreptococos (cocos unidos en forma de cadena) y
estafilococos (en agrupaciones amplias semejantes a racimos).
Bacilos
Bacterias en forma cilndrica o de bastn. Despus de la divisin celular

pueden agruparse de diversas formas: diplobacilos (bacilos unidos en pares),
estreptobacilos (unidos en cadenas) y cocobacilos (bacilos ovalados).
Espirilos
Bacterias en forma helicoidal o de espiral, son relativamente rgidos.
Espiroquetas
Bacterias en forma de espiral, sacacorchos o helicoidal pero flexibles.
Otras formas menos comunes como las bacterias en forma de estrella,

rectangular y triangular.
31

NOTA:
En este enlace un documento para ampliar esta leccin y las anteriores:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

La gran mayora de los microorganismos no se pueden observar a simple vista y
por lo tanto se requiere el uso de un equipo o instrumento muy conocido, el
microscopio (micro = pequeo; scopio = observar) el cual permite visualizar
objetos de estudios que a simple vista sera imposibles de percibir por el ojo
humano.
El primer microscopio simple fue diseado por Anton Van Leeuwenhoek e
inicialmente tena una sola lente; al transcurrir de los aos muchos investigadores
mejoraron las tcnicas hasta llegar a la microscopa moderna.
Microscopa ptica (MO)
Se refiere al uso de microscopios que usen luz visible con el fin de visualizar u
observar muestras. Existen varios tipos de microscopa ptica:
Microscopio ptico compuesto
Tiene varias lentes y usan luz visible como fuente de iluminacin. Con sus
lentes talladas permite aumentar muchas veces el tamao de la muestra real
gracias a los rayos luminosos que vienen de la fuente de luz y pasan por el
condensador hasta llegar a la muestra, luego los rayos pasan a travs de la
lente del objetivo (lentes de 10X, 40 X y 100X) y puede finalmente observarse
la muestra en el ocular (monocular o binocular), mirar la figura 9. Es usado
para observar microorganismos vivos o teidos.
Microscopio de campo oscuro
El condensador tiene un disco que bloquea los rayos de luz directa que llegara
a los objetivos, al no tener una luz de fondo directa, la muestra se observa
iluminada en los bordes pero con un fondo o campo oscuro; es una tcnica
muy usada para observar estructuras muy pequeas como flagelos y
espiroquetas por la alta resolucin (capacidad de distinguir entre dos puntos)
de este tipo de microscopio. Ver figura 10.
32

Figura 9. Microscopio ptico compuesto. A la izquierda partes y funciones del microscopio. A

la derecha trayecto de la luz de abajo hacia arriba hasta el ojo humano.
Microscopio de contraste de fase

Con la ayuda de un diafragma anular los rayos de luz de una fuente se reflejan
o se difractan en la muestra, mientras que otros rayos la atraviesan, cuando
ambos rayos se unen en los oculares se pueden detectar muestras con mayor
diferenciacin de estructuras internas de clulas vivas. (Figura 10)
Microscopio de fluorescencia
Se utilizan en muestras que fluorescen al exponerse a la luz ultravioleta.
Algunas clulas lo hacen de forma natural como las que contienen clorofila; en
las que no fluorescen naturalmente se puede usar fluorocromos (colorantes
fluorescentes que tien las clulas) que absorben la longitud de onda corta (luz
U.V) y emiten luz visible, que es de mayor longitud de onda. Con este tipo de
microscopio la muestra se observa brillante o fluorescente contra un fondo
oscuro (figura 10). Usado para diagnstico de microorganismos, ecologa
microbiana o tcnicas de inmunofluorescencia (se tien anticuerpos para
reaccionar con antgenos).
33

Figura 10. Imgenes de Paramecium por microscopia ptica (MO). A la izquierda fotografa
con microscopio de campo claro, en el centro con MO de campo oscuro y a la derecha con MO
de contraste de fase (Tomado de Tortora et al. 2007).
Microscopa electrnica (ME)
El microscopio electrnico se ha convertido en una valiosa herramienta para el

estudio detallado de estructuras muy pequeas, virus e incluso molculas que
seran imposibles de ver con microscopa ptica. Aunque la finalidad es la
misma existen varias diferencias entre ambos microscopios; los microscopios
electrnicos no usa una fuente de luz o fotones sino un haz de electrones que
viajan en forma ondulatoria en longitudes de onda mucho menores que la luz
blanca lo que aumenta notablemente el poder de resolucin. Tambin se
diferencia en el uso de lentes electromagnticas para enforcar la luz en la
muestra deshidratada en lugar de lentes de vidrio; no se usan portaobjetos de
vidrio sino una rejilla de cobre (Tortora et al. 2007). Las imgenes obtenidas
son a blanco y negro pero se les puede dar color desde el ordenador. No se
puede trabajar con organismos vivos. Hay dos tipos de microscopa
electrnica:
Microscopio electrnico de transmisin (MET)
Un haz o rayo de electrones enfocado por un lente condensador
electromagntico se dirige sobre una muestra ultra delgada que es atravesada
por los electrones dirigidos hacia lentes electromagnticas del objetivo, ste se
encarga de ampliar la imagen y por ltimo enfocarlos en las lentes
electromagnticas proyectoras sobre una pantalla que fluoresce cuando recibe
el impacto de los electrones (figuras 11 y 12). Se pueden usar sales de metales
pesados para teir las muestras (Llop et al. 2001; Tortora et al. 2007). Como
desventajas se destaca que los cortes deben ser ultradelgados, fijados y
deshidratados en vaco. No genera imgenes tridimensionales. Las
microfotografas por ME son a blanco y negro pero son coloreadas desde un
ordenador.
34

Figura 11. Microscopios electrnicos. A la izquierda microscopio electrnico de transmisin

(MET) y a la derecha microscopio electrnico de barrido (MEB) (tomado de Tortora et al. 2007).
Microscopio electrnico de barrido (MEB)

Un haz de electrones (haz primario) producido por un can pasa las lentes
electromagnticas y la muestra que a su vez libera electrones secundarios de
la superficie de sta que pueden ser capturados, detectados y ampliados para
producir una imagen tridimensional en una pantalla. A pesar de tener menor
resolucin que el MET es muy til para producir imgenes tridimensionales de
superficies de clulas o virus (Llop et al. 2001) ver las figuras 11 y 12.
Figura 12. Microfotografas de Paramecium con microscopa electrnica. A la derecha imagen

desde un microscopio electrnico de transmisin (MET) y a la derecha desde un microscopio
electrnico de barrido (MEB).
35

NOTA:
En este enlace encontrar un video de microscopa:
http://www.youtube.com/watch?v=gA3V7N6E6LA&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=fgnkdgHXK_Y&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=9-qps2KU7WM&feature=related
CAPTULO 3. Metabolismo microbiano
Leccin 11. Reacciones metablicas y conservacin de energa
Para que un organismo pueda cumplir con todas las funciones celulares y
crecimiento realiza un conjunto de reacciones y transformaciones bioqumicas
que liberan o consumen energa, proceso conocido como metabolismo.
Cuando la clula degrada compuestos orgnicos en molculas ms simples y
lleva a cabo reacciones qumicas que producen energa (exergnicas) se le
conoce como catabolismo o metabolismo degradativo; un ejemplo de sto es
la gluclisis donde se degrada el azcar para obtener o liberar energa y otros
compuestos. Esta energa liberada se usa en el anabolismo o biosntesis, el
cual tiene como finalidad la construccin de macromolculas a partir de
molculas simples, ste es un proceso endergnico;
por ejemplo la
construccin de protenas a partir de sus monmeros (aminocidos). Todas las
reacciones catablicas y anablicas estn mediadas por enzimas y ambas se
complementan, es decir, para la supervivencia de una clula deben
presentarse ambos procesos acoplados.
La forma qumica ms usual de energa es la molcula de adenosn-trifosfato
(ATP) conocida como la moneda energtica del metabolismo, ste se forma en
procesos de fotosntesis o en la degradacin de compuestos orgnicos o
inorgnicos. Las reacciones catablicas estn acopladas a liberar o sintetizar
ATP mientras que las anablicas lo degradan o consumen. Es importante
mencionar que aunque las clulas mantienen el equilibrio metablico para
todas sus funciones celulares con el ATP, la mayor proporcin de energa
aportada por esa molcula es liberada en forma de calor. Ejemplo, la mayor
cantidad de energa en el ser humano es liberada en forma de calor para
36

mantener la temperatura corporal y la restante para las actividades

metablicas.
Dentro del metabolismo generador de ATP existen dos mecanismos a nivel de
membrana para sintetizarlo, la fosforilacin a nivel de sustrato y el transporte
de electrones (tambin conocido como fosforilacin oxidativa) y dentro de esos
mecanismos hay dos modos para generar ATP: la oxidacin biolgica
(fermentacin o respiracin) y la fotosntesis. La fermentacin y la respiracin
son dos mecanismos para la conservacin de la energa, la cual establece
que la energa no puede crearse ni destruirse, solo se transforma (cuadro 2).
Cuadro 2. Reacciones de oxido reduccin para obtencin de energa por bacterias (tomado de
Llop et al. 2001).
Fermentacin
Es un proceso catablico generador de ATP a partir de compuestos orgnicos
en el que stos sirven como donadores y aceptores de electrones. Aqu no
existe un aceptor final de electrones como lo es el O 2 en la respiracin. Los
microorganismos pueden usar como sustrato en la fermentacin carbohidratos,
cidos orgnicos, aminocidos y nucletidos. La fermentacin es un proceso
anaerbico que slo puede generar ATP a travs de la fosforilacin a nivel
sustrato. Por ejemplo la produccin de cido lctico a partir de glucosa por
Streptococcus. Este proceso es propio de microorganismos anaerobios
estrictos, facultativos y anaerobios aerotolerantes.
37

Respiracin
Es un proceso metablico generador de ATP a travs de la fosforilacin
oxidativa donde el oxgeno u otro aceptor de electrones pueden actuar como
aceptor final de electrones. En la respiracin compuestos orgnicos (en
hetertrofos) e inorgnicos (bacterias littrofas) pueden donar y aceptar
electrones. La respiracin puede ser aerobia, donde el oxgeno es el aceptor
final de electrones y anaerobia, donde el aceptor final de electrones puede ser
sulfatos, nitratos y carbonatos (Llop et al 2001) ver cuadro 2. La respiracin
aerobia produce mucha ms energa que la fermentacin.
La respiracin aerobia consta de tres pasos: formacin de piruvato a partir de
sustancias orgnicas, ciclo de Krebs y cadena de transporte de electrones. La
respiracin aerobia produce mucha ms energa que la anaerobia.
Fotosntesis
Esta actividad metablica la veremos ms adelante en la leccin 14.
Es un proceso metablico catalizado por enzimas que oxidan una molcula de

glucosa en dos molculas de piruvato, produce 2 ATP por fosforilacin a nivel
de sustrato y 2 NADH+. Este proceso de degradacin de azcares se da en el
citosol de las clulas y el destino de los productos finales vara de acuerdo a
las necesidades fisiolgicas del organismo (figura 13).
En presencia de oxgeno el piruvato puede pasar al ciclo de Krebs (ciclo del
cido ctrico o tricarboxlico) en las mitocontrias, el ATP puede usarse como
fuente de energa y el NADH puede pasar a la cadena transportadora de
electrones en las mitocondrias para generar ms ATP (figura 13).
En ausencia de oxgeno el piruvato puede usarse como sustrato para la
fermentacin y producir lactato, etanol y CO2. El NADH se usa en la reduccin
del piruvato en la fermentacin (figura 14).
38

Figura
13.
Oxidacin
global
de
la
glucosa
(tomado
del
enlace:
http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%202/2%2
0-%20Capitulo%208.htm).
Figura 14. Fermentacin para la produccin de etanol y lactato (tomado del

enlace:http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%20
2/2%20-%20Capitulo%208.htm).
En honor a sus descubridores la gluclisis (figura 15) tambin es conocida

como la va de Embden-Meyerhof. La gluclisis se divide en dos etapas,
39

algunos autores la dividen en tres cuando se refieren a la fermentacin del

piruvato en ausencia de oxgeno.
Figura 15. Gluclisis
En la primera etapa preparatoria no se incluyen reacciones de oxido-reduccin,

se invierten dos molculas de ATP pero no se genera energa, al terminar esta
fase a partir de una molcula de glucosa se forman dos molculas de
gliceraldehido 3-fosfato. Una de ellas obtenida por la catlisis de una aldolasa y
la otra para la actividad enzimtica de una triosa fosfato isomerasa. Por lo tanto
en lo sucesivo ocurre el mismo proceso degradativo para ambas molculas de
gliceraldehido 3-fosfato.
La segunda etapa es la fase de oxido reduccin o conversin de energa, en
ella por la accin de la gliceraldehido 3-fosfato deshidrogenasa de forman dos
40

equivalentes reductores (NADH + H+) y por la fosfoglicerato quinasa se

generan las dos primeras molculas de ATP. Luego por la actividad de la
enzima piruvato quinasa sobre el fosfoenolpiruvato se forman los dos ATP
restantes y dos piruvatos.
En la gluclisis se generan 4 molculas de ATP, pero el valor neto es de 2 ATP
dada a inversin de ATP que se hizo en la primera etapa.
La etapa fermentativa de la gluclisis en ausencia de oxgeno no genera
energa, sino etanol, lactato, acetato o CO2 dependiendo de la enzima que
realice la actividad degradativa, aunque estos productos son muy tiles en la
industria alimentaria no se tiene claro la importancia de estos metabolitos en
los microorganismos que los producen (bacterias, levaduras). La fermentacin
que forma el lactato tambin se da en clulas humanas (clulas musculares y
eritrocitos).
NOTA:
Favor ver el siguiente enlace para profundizar en la leccin:
http://comunidad.uach.mx/carzola/apuntesglucolisis.pdf
Leccin 13. Ciclo del cido ctrico
Tambin conocido como ciclo de Krebs o ciclo de cidos tricarboxlicos, es una

serie de reacciones bioqumicas de oxido reduccin de gran energa que hacen
parte de la respiracin de clulas aerobias, en las procariotas este proceso se
realiza en el citosol mientras que en la clulas eucariotas en las mitocondrias.
En este ciclo el piruvato proveniente de la gluclisis sufre una descarboxilacin
por la accin de la enzima piruvato deshidrogenasa para generar aceltil-CoA,
NADH y CO2 antes de ingresar al ciclo de Krebs en la mitocondria. All el
grupo acetilo se integra con el oxalacetato para formar citrato (un compuesto
de 6 carbonos), luego se dan una serie de reacciones qumicas
(deshidratacin, hidratacin, descarboxilacin, fosforilacin, oxido-reduccin,
ect) donde a partir de una molcula de piruvato se forma: 1 molcula
oxalacetato, 2 molculas de CO2, 3 equivalentes reductores de NADH+, 1
FADH y una molcula de GTP (figura 16).
41

Cada equivalente reductor de NADH al ingresar a la cadena de fosforilacin

oxidativa genera 2.5 3 molculas de ATP; cada FADH produce 1.5 2
molculas de ATP. Ambas cantidades son usadas. Si usamos la primera
entonces a partir de una molcula de glucosa en la respiracin aerobia se
pueden generar 38 molculas de ATP o 32 ATP en la segunda (cuadro 3).
Figura
16.
Ciclo
de
Krebs
o
del
cido
ctrico
(tomado
del
enlace:
0-%20Capitulo%208.htm).
En la cadena transportadora de electrones o fosforilacin oxidativa, las

molculas transportadoras (flavoprotenas, citocromos, ubiquinona y coenzima
42

Q) producen reacciones de oxido reduccin que liberan energa para generar

ATP. En las clulas eucariotas la cadena transportadora se encuentra en la
membrana interna mitocondrial mientras que en las procariotas en la
membrana celular (figura 17).
Figura
17.
Cadena
transportadora
de
electrones
en
(tomado
del
enlace:http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%20
2/2%20-%20Capitulo%208.htm).
43

Cuadro 3. Rendimiento energtico por la oxidacin de una molcula de glucosa. Tomado del
enlace:(http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%2
02/2%20-%20Capitulo%208.htm).
NOTA:
Favor ver este video en el siguiente enlace:
http://video.google.com/videoplay?docid=-4979202337380045677#

La fotosntesis es el proceso de conversin de energa lumnica en energa
qumica, donde a partir de sustancias inorgnicas simples (CO2) se pueden
obtener compuestos orgnicos de mayor complejidad (azcares)
indispensables para la vida de los organismos hetertrofos. La molcula de
ATP se produce por transferencia de energa de fotones de luz absorbidos por
pigmentos fotosintticos (clorofilas o bacterioclorofilas) donde los electrones se
transfieren de tomos de hidrgeno a molculas de azcar. Este proceso es
realizados por una diversidad de organismos: plantas, algas, cianobacterias,
bacterias sulfurosas verdes y prpuras.
En la fotosntesis el CO2 sirve como fuente de carbono y el hidrgeno como
aceptor final de electrones, el cual se oxida y forma agua, las bacterias
fotosintticas usan compuestos inorgnicos como el hidrgeno o cido
sulfrico como aceptor final de electrones.
Las plantas, algas y cianobacterias usan el agua como fuente de hidrgeno y
liberan el oxgeno:
44

6CO2 + 12H2O + Luz C6H12O6 + 6H2O + 6O2

Las bacterias rojas, sulfurosas y verdes usan el H2S como fuente de hidrgeno
y producen grnulos de azufre:
6CO2 + 12H2S C6H12O6 + 6H2O + 12S
La fotosntesis se da en dos fases. Fase lumnica (fotofosforilacin) o
reacciones dependientes de luz, donde la energa aportada por fotones es
absorbida por la clorofila y excita sus electrones, stos al excitarse pasan a
una cadena transportadora de electrones donde bombean protones y el ADP
se convierte en ATP, cuando la fotofosforilacin es cclica los electrones
retornan a la clorofila pero cuando no lo es (no cclica) reducen el NADP en
NADPH y los electrones perdidos en este procesos son devueltos a las
fotofosforilacin cclica por molculas de agua (figura 18 y 19). En la fase
lumnica de forma entonces: oxgeno, ATP y NADPH. En la fase oscura (ciclo
de Calvin) o reacciones independientes de luz los electrones derivados de la
fase lumnica, NADPH y el ATP son empleados para la reducir el CO2 a azcar.
Figura 18. Fotofosforilacin cclica (tomado de Tortora et al. 2007).
Cuando las plantas, algas y cianobacterias utilizan protones (tomos de

hidrgeno) provenientes del agua para reducir el CO2 y producir oxgeno
molecular se dice que hay una fotosntesis oxignica, pero existen bacterias
(bacterias verdes y prpuras) que no pueden usar el agua para reducir el
dixido de carbono y al no generar oxgeno se le conoce como fotosntesis
anoxignica. Estas bacterias no utilizan la clorofila a sino bacterioclorofila, un
pigmento que absorbe la luz en longitudes de onda superior a la clorofila a; la
45

localizacin de la bacterioclorofila en los microorganismos es variable (en

clorosomas, en la superficie, inmersas o en invaginaciones de la membrana
celular). El cuadro 4 compara la fotosntesis en procariotas y eucariotas.
Figura 19. Fotofosforilacin no cclica (tomado de Tortora et al. 2007).

Cuadro 4. Comparacin de fotosntesis en clulas eucariotas y procariotas (tomado de Tortora
et al. 2007).
NOTA:
Leer en el siguiente enlace para mayor informacin:
http://web.usal.es/~jmcsil/biblioteca/biofisica/unizar/FOTO.htm
46


As como los microorganismos son diversos, de la misma manera su
comportamiento nutricional donde las fuentes de carbono y energa varan, la
figura 20 sintetiza de forma clara los tipos de nutriciones.
Segn la fuente de energa que usen los microorganismos pueden ser
fottrofos o quimitrofos. Los fottrofos utilizan la luz como fuente de energa
mientras que los otros usan compuestos orgnicos a travs de reacciones de
oxido reduccin. Segn la capacidad para producir alimento pueden ser:
auttrofos, fabrican su propio alimento y usan el CO2 como fuente de carbono,
los hetertrofos requieren una fuente de carbono orgnica. Entonces si
combinamos la fuente de energa y carbono los microorganismos se pueden
clasificar en otras categoras: fotoauttrofos, fotohetertrofos, quimioauttrofos
y quimiohetertrofos.
Figura 20. Clasificacin nutricional de organismos vivos. Se realiza de acuerdo a la fuente de

energa y carbono (tomado de Tortora et al. 2007).
47

UNIDAD 2. DIVERSIDAD MICROBIANA
CAPTULO 4. CRECIMIENTO MICROBIANO

Leccin 17. Curva de crecimiento microbiano
CAPTULO 5. EUCARIOTA Y PROCARIOTA
Leccin 21. Archaea
Leccin 22. Hongos
Leccin 25. Algas
CAPTULO 6. SISTEMA DE VIDA ANAEROBIO
Leccin 26. Respiracin anaerobia
Leccin 27. reduccin del nitrato y proceso de desnitrificacin
Leccin 30. Acetognesis
48

UNIDAD 2
DIVERSIDAD MICROBIANA
CAPITULO 4. Crecimiento microbiano
El crecimiento celular de las bacterias contrario a lo que podemos inferir no
est relacionado con el aumento de tamao de las bacterias si no con
incremento del nmero de clulas, las cuales incluso pueden ser observadas a
simple vista cuando stas se agrupan y forman colonias. Pero para que una
bacteria sea capaz de dividirse tiene requerimientos energticos y nutricionales
(disponibilidad de nutrientes, condiciones ambientales qumicas y fsicas) que
le ayuden a realizar todas las actividades de sntesis que permitirn conformar
su estructura fsica, es decir, pared celular, membrana, material gentico,
cuerpos de inclusin, etc.
La mayora de las bacterias se reproducen asexualmente por fisin binaria
(figura 21), donde una clula se divide para producir dos clulas hijas con la
misma informacin gentica (con altas tasas de mutaciones) que su
progenitora. Durante el crecimiento celular se duplican los componentes que
constituyen a la clula (macromolculas, monmeros, sustancias orgnicas) e
incluso el ADN donde ste en su origen de replicacin (Ori) inicia la sntesis de
una molcula de ADN a partir de una preexistente; permitiendo que la clula
hija reciba todo el componente gentico y estructural de manera que pueda
realizar todas las funciones metablicas.
Figura 21. Fisin binaria. Tomado del enlace: http://elprofedebiolo.blogspot.com/2010/01/lacelula-procariota.html
49

Adems de las bacterias, tambin las levaduras, algas unicelulares, protozoos

y archaeas se reproducen por fisin binaria.
Para el crecimiento celular se necesitan varias condiciones o requerimientos
fsicos (pH, temperatura, presin osmtica) y qumicos (fuentes de carbono,
nitrgeno, azufre, fsforo, elementos traza, oxgeno, vitaminas, etc). En esta
leccin describiremos los requerimientos qumicos o nutricionales y en las
prximas lecciones los fsicos.
Fuente de carbono
Es la principal fuente para la obtencin de energa, y composicin de

elementos o estructuras celulares. Los organismos fotosintticos (auttrofos)
obtienen el carbono a partir del CO2 y lo convierten en glucosa, mientras que
los hetertrofos lo obtienen de fuentes orgnicas como carbohidratos,
protenas, y lpidos. El carbono constituye casi la mitad de peso seco de una
clula.
Fuente de nitrgeno
Sirve para la sntesis de protenas, cidos nucleicos (ADN, ARN) y enzimas.

Los microorganismos lo pueden asimilar a partir de fuentes inorgnicas o de
compuestos que lo contengan como es el caso de las protenas. Unas
bacterias utilizan el nitrgeno en la forma reducida proveniente del amonio
(NH4+), otras a partir de nitratos (NO3-) o nitritos (NO2-) y las fijadoras de
nitrgeno o las simbiticas a parir de nitrgeno molecular o libre (N2).
Fuentes de azufre y fsforo
El azufre es til para la sntesis de ciertos aminocidos, coenzimas y vitaminas

que contienen este elemento es su composicin estructural (indispensable para
la formacin de enlaces disulfuro en protenas). Se puede obtener en la
naturaleza partir del in sulfato (SO4-2), sulfuro de hidrgeno (H2S) y
aminocidos que lo contengan.
El fsforo es un elemento indispensable para la sntesis de ATP, cidos
nucleicos y fosfolpidos y se encuentra principalmente en iones de fosfato
inorgnico (PO43-).
Elementos traza y vitaminas

50

Existen otros elementos que si bien no se requieren en grandes cantidades son

importantes para la actividad metablica o composicin celular, donde alguno
de ellos acta como cofactores o facilita la produccin, degradacin de ciertos
sustratos o sustancias y en la formacin de esporas, entre ellos tenemos al
calcio, hierro, cobre, magnesio, manganeso, potasio, zinc, sodio y cloro. Estos
ltimos se requieren en grandes cantidades (NaCl) para el crecimiento de
bacterias halfilas.
NOTA:
Por favor ver el siguiente enlace las pginas 168 hasta 183 y 188 hasta 208:
Ir al documento
Leccin 17. Curva de crecimiento microbiano

Durante el ciclo de crecimiento el comportamiento de las poblaciones
bacterianas puede estudiarse mediante el crecimiento de las clulas en funcin
del tiempo. Cuando inoculamos bacterias en un medio de cultivo lquido y
fresco se dan cuatro fases en las que se puede dividir el crecimiento
microbiano (figura 22).
Figura 22. Curva de crecimiento microbiano. Ver detalle en el texto.

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/generalidades.html)
(Tomado
Fase de adaptacin, retraso o latencia

51

Es un periodo de adaptacin al medio donde las bacterias comienzan a

prepararse metablicamente sintetizando enzimas y molculas importantes
para la reanimacin del crecimiento. En esta fase la divisin celular es escasa
o nula con velocidad de crecimiento Vc = 0. Este periodo puede durar entre 1
hora o varios das dependiendo del microorganismo, las condiciones de
crecimiento y la edad del cultivo del que se tom el inculo.
Logartmica o exponencial
Es la fase de mximo crecimiento celular y actividad metablica donde las

clulas comienzan a dividirse activamente a velocidad constante Vc =
constante. En este periodo los microorganismos aprovechan al mximo los
nutrientes presentes en el medio de cultivo y cuando se le aportan todas las
condiciones ptimas puede generar productos de inters industrial; aunque es
la fase de mayor sensibilidad a antimicrobianos.
Fase estacionaria
Cuando de agotan los nutrientes, aumentan las toxinas, cambia el pH y

disminuye el oxgeno la velocidad de crecimiento comienza a decrecer hasta
llegar a cero Vc = 0, ya que el nmero de clulas que se dividen es igual al
nmero de clulas que mueren.
Fase de declinacin o muerte
En esta fase el nmero de clulas de clulas que se dividen comienzan a

disminuir notablemente mientras que aumentan de una forma sostenida las
que mueren, Vc = negativa, en esta etapa las clulas pierden casi
completamente toda sus actividad metablica y comienzan a lisarse mientras
que unas pocas, las ms resistentes pueden sobrevivir con los nutrientes de
las que mueren.
NOTA:
Leer en el siguiente enlace para mayor informacin:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/08_Tema
_6_crecimiento.pdf
52


Existen varios mtodos para medir el crecimiento de las poblaciones
microbianas:
Recuentos en placa o de colonias
Es el mtodo ms usado para medir poblaciones bacterianas, ya que a

diferencia de otros permite contabilizar el crecimiento de clulas viables, es
decir clulas que pueden dar una descendencia. Su principal desventaja es
que requiere mnimo 24 horas para conocer los resultados del recuento y en la
industria a veces se requieren resultados ms rpidos. Es muy usado en la
microbiologa de alimentos, pero puede ser impreciso cuando se toman
muestras naturales, como por ejemplo el suelo; donde no todos los
microorganismos a pesar de estar presentes en la misma muestra podrn
crecer en el medio de cultivo seleccionado dado a la diferencia de
requerimientos nutricionales.
Esta tcnica se fundamenta en que cada colonia est compuesta por un solo
tipo de bacteria. Los recuentos se informan en unidades formadoras de
colonias (UFC). Existen dos mtodos para realizar el recuento en placa: el
mtodo de placa vertida o el mtodo de extensin en placa (figura 23). Cuando
el nmero de colonias en placa supera el de 300 UFC es recomendable
realizar diluciones seriadas para diluir el inculo original y facilitar el conteo.
Figura 23. Mtodos de recuento en placa de clulas viables (tomado de Madigan et al. 2003).
53

Mtodo de extensin en placa
Se coloca un volumen de inculo no superior a 0.1 ml (100 l) sobre la

superficie de un medio de cultivo y se extiende uniformemente por toda la
placa con un asa o varilla de vidrio estril hasta que el medio lo absorba por
completo, posteriormente se incuba a una temperatura determinada hasta
que aparezcan las colonias y as realizar el recuento. Ver figura 23.
Mtodo de placa vertida
Sobre una placa estril sin medio de cultivo se agrega cierto volumen del
inculo (0.1 1.0 ml) al que se aade el medio de cultivo con una
temperatura de 45 o 50 C, luego se agita suavemente la placa para
mezclar, despus que el agar se solidifica y se incuba las colonias crecern
y en la superficie del agar. El principal inconveniente de este mtodo es que
ciertos microorganismos sensibles al calor pueden verse daados por la
temperatura del agar fundido. Ver figura 23.
Mtodo de diluciones seriadas
Cuando una muestra contenga muchos microorganismos que superen las

300 UFC se recomienda realizar diluciones seriadas que faciliten el conteo
y permita obtener resultados confiables; luego de las diluciones se
siembran las placas y se procede a hacer el conteo del nmero de colonias
que debe ser multiplicado por el factor de dilucin para obtener las UFC por
mililitro de muestra original (figura 24).
Filtracin
Es un mtodo muy usado en microbiologa de aguas cuando la concentracin
de bacterias presentes en la muestra es muy baja. Para la filtracin por
membranas 100 ml de agua atraviesan un filtro con poros muy pequeos que
no pueden pasar las bacterias, las cuales se quedan en la superficie del filtro,
ste se transfiere a una almohadilla con medio de cultivo donde las colonias
pueden crecer y con una incubacin previa hacer el recuento. Es una tcnica
muy usada para detectar y cuantificar bacterias de contaminacin fecal
(coliformes fecales).
54

NOTA:
Leer las secciones 6.5, 28.1 y 20.3 en: Madigan, M., Martinko, J & Parker,
J. (2003). Biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson
Prentice Hall
Figura 24. Mtodo de diluciones seriadas para recuento en placa de colonias (tomado de
Tortora et al. 2007).
Recuento microscpico directo
En esta tcnica un volumen definido se coloca en un portaobjetos para luego

ser observado al microscopio. El mtodo de recuento de Breed es muy usado
en la industria lctea, en ste se colocan 0.01 ml de muestra sobre un
portaobjetos con un recuadro de 1 cm2 que se tie con un colorante para luego
contar las clulas observadas con el objetivo de 100X, al final el nmero de
bacterias contadas se multiplica por 100. Los recuentos microscpicos tambin
se realizan usando la cmara de Petroff-Hausser; estos mtodos no requieren
tiempo de incubacin (Tortora et al. 2007).
55

Entre las principales desventajas del recuento directo tenemos: se pueden

contar clulas muertas y vivas, dificulta el conteo de bacterias mviles, se
requieren concentraciones de bacterias adecuadas.
Temperatura
Es uno de los aspectos ms importantes en el crecimiento microbiano porque

influencia las reacciones bioqumicas de la clula, donde para muchas enzimas
a medida que aumenta la temperatura se incrementan las reacciones
catalticas y por tanto el crecimiento se acelera, pero aumenta demasiado las
enzimas se desnaturalizan y se inactivan adems de lisarse las membranas; si
son muy bajas las membranas se congelan y las actividades metablicas
prcticamente se anulan.
Los microorganismos pueden crecer a temperaturas mnimas, ptimas y
mxima. La temperatura mnima es la ms baja donde puede crecer la
especie, por debajo de sta no hay crecimiento. La temperatura ptima es la
temperatura donde crece ms rpido y mejor. La temperatura mxima, es la
temperatura ms elevada que puede soportar el microorganismo para crecer.
Los microorganismos tambin se clasifican de acuerdo al rango de su
temperatura ptima (sicrfilos, mesfilas y termfilos) y estn subclasificadas
como obligadas o facultativas. Las obligadas deben tener condiciones
ambientales especficas y las facultativas son capaces de tolerar condiciones
ambientales (figura 25).
Figura 25. Efecto de la temperatura en el crecimiento microbiano. (Tomado de Madigan et al.

2003).
56

Sicrfilos
Son aquellos microorganismos afines al fro o con temperaturas de

crecimiento bajas (0 20 C). Existen sicrfilos estrictos que crecen a 0 C
pero con una T ptima de 15C; mientras que los sicrotrofos o sicrofilos
facultativos pueden crecer a 0 C pero tienen temperaturas ptimas entre
20 y 30C. Este grupo se encuentran en ocanos, zonas polares y
contaminando alimentos refrigerados.
Las algas (Chlamydomonas Nivalis) estn dentro de los sicrfilos ms
estudiados las cuales crecen en zonas nevadas dando tonalidad roja o
verde a la superficie (Madigan et al. 2003).
Mesfilos
Aquellos microorganismos con afinidad a temperaturas moderadas y con
temperatura ptima de crecimiento entre 25 y 40 C. En este grupo
encontramos a la mayora de los microorganismos ambientales y
patgenos.
Termfilos
La mayora de las eucariotas estn por fuera de este grupo, son aquellos
microorganismos capaces de crecer a temperaturas elevadas y con afinidad
por el calor. Tienen temperaturas ptimas entre 50 y 60 C. Los
hipertermfilos o termfilos extremos tienen temperaturas ptimas de
crecimiento de 80 C o ms, cierto miembros del dominio Archaea hacen
parte de este grupo. La mayora se encuentran en compost, aguas termales
y fumarolas hidrotermales de volcanes.
pH
Los microorganismos se clasifican segn su tolerancia al pH en acidfilos, con
rangos de pH desde 0 hasta 5.4 (hongos levaduras, ciertas bacterias
quimioautotrofas); neutrfilos, con pH ptimo de crecimiento de 6.5 a 7.5 (la
mayora de bacterias ambientales y patgenas) y alcalfilos, con pH ptimo de 9
y 10 (microorganismos productores de lipasas, Archaea).
NOTA:
Ver en el siguiente enlace para mayor informacin (desde la pgina 8):
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf
57


Los microorganismos tienen diferentes exigencias respecto a la concentracin o
disponibilidad de oxgeno para cumplir con todas sus funciones metablicas
(figura 26). Los microorganismos aerobios producen ms energa a partir del
nutriente respecto a los que no usan el oxgeno. Se clasifican en relacin al
oxgeno como:
Aerobios estrictos
Son aquellos que necesariamente requieren el oxgeno para vivir, su

metabolismo es de respiracin aerobia es decir que el oxgeno es el aceptor
final de electrones. La enzima catalasa y superxido dismutasa (SOD) permite
que contrarreste las formas txicas del oxgeno como es el caso de los
radicales libres, anin perxido, radical hidroxilo, etc. Existen aerobios
facultativos, los cuales pueden crecer en presencia o ausencia de oxgeno.
Anaerobios facultativos
Utilizan el oxgeno cuando est presente pero cuando no hay pueden continuar
su crecimiento a travs de la fermentacin o respiracin anaerobia. Aunque su
crecimiento es mayor en presencia de oxgeno as como su produccin de
energa. Ejemplo, Escherichia coli.
Figura 26. Efecto del oxgeno en el crecimiento microbiano. (a) Microorganismos aerobios; (b)
anaerobios estrictos; (c) anaerobios o aerobios facultativos (c); (d) microaerfilos y (e) anaerobios
aerotolerantes. (Tomado de Madigan et al. 2003).
58

Anaerobios estrictos
No pueden usar el oxgeno molecular (O2) como aceptor de electrones para la

produccin de energa ni para su crecimiento. No tienen enzimas para
neutralizar las formas txicas del oxgeno y por esto dada su extrema
sensibilidad pueden morir cuando este elemento est presente en el medio.
Ejemplo, especies de Clostridium.
Anaerobios aerotolerantes
Toleran el oxgeno porque tiene una enzima (SOD), que neutraliza las formas
txicas del oxgeno pero no lo usan para su crecimiento ni para la obtencin de
energa. Los de este grupo fermentan los carbohidratos para formar cido
lctico. Ejemplo, los lactobacilos usados en la produccin de quesos, yogures y
alimentos fermentados.
Microaerfilos
Son aerobios que requieren oxgeno pero no en concentraciones elevadas.

Son sensibles a radicales libres y perxidos. Su tipo de respiracin es aerobia.
Ejemplo, bacterias de aguas negras, Methanobacterium formicicum.
NOTA:
Leer la seccin 6.13 oxgeno y crecimiento microbiano en: Madigan, M.,
Martinko, J & Parker, J. (2003). Brock biologa de los microorganismos. (10
Ed). Madrid: Pearson Prentice Hall.
CAPITULO 5. Eucariota y procariota
Leccin 21. Archaea

Son microorganismos procariotas unicelulares con morfologa similar a las
bacterias (cocos, bacilos) y con otras formas diferentes (clulas rectangulares,
cuadradas y planas). Una caracterstica importante es que la pared celular no
contiene peptidoglucano como las bacterias sino protenas, los lpidos de la
membrana celular se unen mediante enlaces ter los cuales le dan una mayor
resistencia para sobrevivir en ambientes extremos (salinidad, acidez, alcalinidad),
utilizan isoprenoides para sintetizar fosfolpidos de membrana que impidan la
59

fusin de stas a altas temperaturas, en algunas archaeas la membrana celular

est constituida por una monocapa lipdica.
Su locomocin o desplazamiento se da con la ayuda de flagelo, a diferencia de
otras clulas no forman esporas, se reproducen asexualmente y se dividen por
fisin binaria, fragmentacin o brotacin. Viven en ambientes extremos como
aguas termales, lagos salados, alta presin, bajas temperaturas y en ambientes
habituales: ocanos, suelos, humedales. Aunque pueden establecer relaciones
simbiticas con otros organismos (comensalismo y mutualismo) todava no se
conocen archaeas patgenas humanas.
Nutricin
Su metabolismo es muy diverso; algunos son fottrofos (usan la luz como fuente
de energa) pero no producen oxgeno como las plantas o las cianobacterias, otras
archaeas son littrofas (compuestos inorgnicos como fuente de energa y
carbono) y tambin pueden tener una nutricin organotrfa (compuestos orgnicos
como fuente de energa y carbono). Aunque tambin existen especies que fijan el
CO2 (auttrofos). Sus necesidades fisiolgicas de oxgeno varan entre aerobios,
anaerobios facultativos o aerobios estrictos. La figura 27 muestra algunas
divisiones del dominio Archaea.
Figura 27. Dominio Archaea. (Tomado del enlace: http://universe-review.ca/F10-multicell.htm).
Algunos grupos fisiolgicos
Halfilos extremos
60

Viven en ambientes de elevada salinidad (incluso cercanos a la saturacin)

como lagos salados y salinas. Cuando un ambiente salino se acerca a una
concentracin mnima de sales las archaeas comienzan a crecer y forman una
tonalidad rojiza producida por carotenoides y otros pigmentos. Algunos
gneros crecen en ambientes muy alcalinos (pH de 9 11) pero la mayora,
entre ellos el gnero Holobacterium lo hace en medios cidos, pueden ser
gramnegativos, inmviles aunque algunas tienes flagelos, tienen una gran
proporcin de plsmidos y casi todas son aerobias estrictas. Una caracterstica
particular de este grupo frente a otras archaeas es que los ribosomas requieren
altas concentraciones de potasio (Madigan et al 2003) (figura 28).
Metangenos
Estos microorganismos producen metano como producto de desecho a partir

de la respiracin (metanognesis). Son anaerobios estrictos, existen algunos
termfilos aunque la mayora son mesfilas. Los sustratos utilizados para la
produccin de metanol son diversos (CO2, CO, formato, metlicos y
acetotrficos). Su hbitat est en ambientes anxicos (fangos pantanosos,
sedimentos de lagos, tracto digestivo de mamferos e insectos, fuentes
hidrotermales, etc. En este grupo est el gnero Methanobacterium y
Methanococcus (Madigan et al 2003) (figura 28).
Figura 28. Archaeas halfilas y metangenas. A la izquierda Halococcus archaea y a la

derecha
Methanobacterium
formicicum.
Imgenes
tomadas
de
los
enlaces:
http://www.sciencephoto.com/images/download_lo_res.html?id=662440039
y
http://www.lookfordiagnosis.com/mesh_info.php?term=Methanobacterium&lang=2
Thermoplasmatales
Contiene tres gneros que adems de ser termfilos son acidfilos extremos.
El gnero Thermoplasma, es aerobio facultativo, crece a pH 2.0, no tienen
pared celular pero si flagelos, es quimioorganotrofo; se pueden encontrar en
restos orgnicos del carbn. El gnero Ferroplasma, es quimiolittrofo y
auttrofo, obtiene la energa a partir del in frrico y usa el CO2, crece a 35 C,
61

tampoco tiene pared celular. Por ltimo el gnero Picrophilus, puede crecer en
pH de 0.06, tiene pared celular a pH moderados de 4.0 las clulas se
desintegran (Madigan et al 2003) (figura 29).
Figura 29. Microfotografa de Thermoplasma acidophilum.

http://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Thermoplasma
Tomado
del
enlace:
Hipertermfilos de volcanes terrestres
Pueden vivir a temperaturas de 100 C, en este grupo est el gnero

Sulfolobus, que crece en manantiales ricos en azufre y a pH cidos, es
quimiolitotrfico aerbico, este microorganismo se adhiere a los cristales de
azufre pero tambin puede usar iones de hierro y cobre (Madigan et al 2003)
(figura 30).
Figura
30.
Solfulobus
archaea.
Microfotografa
http://www.sciencephoto.com/media/13222/enlarge
tomada
del
enlace:
NOTA:
Leer el captulo 13 Diversidad procariota Archaea en: Madigan, M., Martinko, J
& Parker, J. (2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid:
Pearson Prentice Hall.
62

Leccin 22. Hongos

Son microorganismos eucariotas pertenecientes al reino Fungi, pueden ser
unicelulares (levaduras) o pluricelulares (setas). Es uno de los grupos ms
heterogneos. A diferencia de las plantas la pared celular est compuesta en su
mayora por quitina. Su hbitat es muy diverso, pueden estar presentes en la
materia orgnica en descomposicin del suelo, en ambientes acuticos (agua
dulce o salada), en desiertos, sedimentos marinos, o infectando otros organismos
como las plantas y animales (incluido el hombre). No poseen cloroplastos por lo
tanto son hetertrofos, incapaces de fabricar su alimento, a diferencia de clulas
animales vierten enzimas hidrolticas al medio extracelular para facilitar la
absorcin de nutrientes. Su reproduccin puede ser sexual o asexual. De acuerdo
a su morfologa macroscpica y microscpica se dividen en hongos filamentosos,
levaduriformes y carnosos.
Hongos filamentosos (mohos) y carnosos
Estn compuestos por hifas o filamentos que se pueden unir y entrelazar de

forma abundante hasta formar el micelio que puede verse a simple vista. Las
hifas pueden estar divididas por tabiques llamados septos, con la presencia de
un ncleo o tambin pueden ser aseptadas o cenocticas (con muchos
ncleos). Tienen pequeos poros que permiten el intercambio.
El micelio se clasifica en areo (o reproductivo), ste crece en la superficie del
medio de cultivo y contiene las estructuras reproductivas (conidias o esporas) y
el micelio vegetativo, que est dentro del medio de cultivo para absorber y
obtener los nutrientes (figura 31).
Figura 31. Ejemplos de hongos filamentosos. A la derecha Aspergillus sp. (Tomado del enlace:
http://www.emlab.com/s/sampling/env-report-09-2006.html) y a la izquierda cultivo en agar de
Aspergillus fumigatus tomado del enlace: http://es.wikipedia.org/wiki/Aspergillus_fumigatus.
63

Hongos levaduriformes
Son microorganismos unicelulares, de forma ovalada ms grandes que las

bacterias, se dividen por gemacin o brotacin (figura 32), su hbitat es
generalmente en ambientes con azcares: frutos, cortezas, flores; tambin
pueden infectar insectos o animales. Es importante aclarar que no todas son
patgenas, por ejemplo, Saccharomyces es muy usada en procesos
fermentativos en la industria alimentaria.
Figura 32. Ejemplo de hongo levaduriforme. Microfotografa de Saccharomyces cerevisiae.

Tomado de http://www.microbiologyonline.org.uk/about-microbiology/introducing-microbes/fungi
Reproduccin
Los hongos tienen reproduccin sexual y asexual a travs de esporas, las cuales
no podemos confundir con las endosporas de las bacterias que son estructuras de
resistencia y no reproductiva. Son dos los tipos de esporas (esporas sexuales y
conidias o esporas asexuales). Las esporas asexuales (conidias) se desprenden
de una hifa, y cuando germinan se convierten en un individuo idntico al parental;
mientras que, las esporas sexuales fusionan ncleos e intercambian material
gentico de tal manera que la clula hija tendr caractersticas de ambas cepas
parentales (Tortora et al. 2007).
Nutricin y aplicaciones ambientales
Los hongos son hetertrofos (quimioorganotrofos que necesitan compuestos
orgnicos como fuente de energa y carbono), crecen en ambientes con pH cidos
(alrededor de 4 y 5) y altas concentraciones de azcares porque su requerimiento
de carbohidratos es ms alto que el de las bacterias, mientras que el del nitrgeno
es menor, los hongos filamentosos son aerobios entretanto las levaduras son
anaerobias facultativas, no existen hongos anaerobios estrictos.
64

Los hongos tienen la capacidad de degradar carbohidratos complejos como la

lignina y celulosa en sus actividades metablicas, compuestos que se encuentra
en grandes cantidades en las plantas, por lo tanto tienen un papel beneficioso en
la descomposicin de material vegetal muerto, leoso o de desecho en los
bosques. Tambin establecen relaciones simbiticas con las plantas (micorrizas) y
le ayudan a la absorcin y asimilacin de minerales que seran muy difciles de
captar por la planta individualmente. Los hongos tambin producen sustancias de
inters industrial y farmacolgico (etanol, bebidas, antibiticos, etc), adems de
utilizarse como fuente de alimentos ya que mucho de ellos son comestibles
(championes) y tienen importantes calidades nutricionales de carbohidratos,
protenas y vitaminas.
Algunos filos de importancia
Zygomycota
Son hongos filamentosos que crecen en materia orgnica en descomposicin

(saprofitos), tambin infectando insectos, tienen hifas cenocticas. Sus esporas
sexuales (zigosporas), son grandes y cubiertas por una pared gruesa, se que
se producen por meiosis; las esporas asexuales se conocen como
esporangiosporas. Entre los hongos ms conocidos tenemos al moho de pan,
Rhizopus stonolifer y el Mucor sp. Ver la figura 33.
Basidiomycota
Tienen hifas septadas, se encuentran en el suelo o material vegetal, las

basidiosporas son sus esporas sexuales que se forman por meiosis, y las
conidias sus esporas asexuales. Dentro de este grupo encontramos a las setas
u hongos macroscpicos. Ver figura 34.
Ascomycota
Es el grupo ms grande, tambin llamados hongos en sacos, crecen en

diversos ambientes (suelos, vegetales, cuero, tela, vidrios, madera, etc). Sus
esporas asexuales son los conidios y la sexuales las ascosporas. Tambin hay
levaduriformes entre ellos Saccharomyces cerevisiae (ampliamente usada en
procesos fermentativos), la mayora de los lquenes, muchos actan como
micorrizas u hongos endfitos. Ver figura 34.
65

Figura 33. Ciclo de vida del moho del pan Rhizopus stolonifer. (a) Reproduccin asexual y (b)
reproduccin
sexual
del
hongo
Rhizopus
stolonifer.
Tomado
del
enlace:
0-%20Capitulo%2029.htm
Figura 34. Ciclo de vida de Basidiomycota y Ascomycota. A la izquierda y derecha

respectivamente.http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccio
n%205/5%20-%20Capitulo%2029.htm
66

NOTA:
Leer la seccin 14.9 sobre hongos en: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J.
(2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson
Prentice Hall.

Son organismos eucariotas, que producen esporas y tienen movimientos
ameboides, se encuentran en material vegetal en descomposicin, suelo, en
ambientes hmedos o acuticos y se alimentan de principalmente de bacterias
que ingieren por fagocitosis. Existen dos grupos:
Hongos mucosos celulares
Se originan de la germinacin de una espora en condiciones favorables que

genera amebas individuales que pueden agregarse gracias a la seal de
adenosinmonofosfato cclico (cAMP) para posteriormente formar otro cuerpo
fructfero que produzca esporas. Son conocidos como hongos acelulares.
Pueden tener reproduccin sexual o asexual. Ejemplo, el gnero Dictyostelium
(figura 35).
Figura 35. Ciclo de vida de Dictyostelium discoideum. (Tomado de Kessin, 2000).
67

Hongos mucosos plasmodiales
Son una masa protoplasmtica multinucleada llamada plasmodio, con

movilidad ameboide, tienen microfilamentos debajo de la membrana plasmtica
que favorecen el desplazamiento. Pueden tener reproduccin sexual u asexual.
Ejemplo el gnero Physarum (figura 36).
Figura 36. Hongos mucilaginosos. A la izquierda imagen de un plasmodio reticulado y a la

derecha
imagen
de
cuerpos
fructferos.
Tomado
del
enlace:
http://cnho.wordpress.com/2010/05/28/%C2%ABhongos-mucilaginosos%C2%BB
%C2%BFreinventando-la-pluricelularidad/
NOTA:
Leer la seccin 14.10 sobre hongos mucosos en: Madigan, M., Martinko, J &
Parker, J. (2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid:
Son organismos unicelulares eucariotas, sin pared celular, se mueven a travs de
flagelos, cilios o seudpodos (pies falsos), son mucho ms grandes que las
bacterias, algunos tienen cloroplastos (dinoflagelados y euglenoides), presentes
en ambientes acuticos (agua dulce o salada), suelo, rboles, ambientes
hmedos, viven como entidades libres o como parsitos. Pueden reproducirse
sexual (conjugacin) o asexualmente (fisin). Forman estructuras en medios
adversos llamados quistes.
Nutricin
Son quimiohetertrofos, principalmente aerobios, saprofitos (alimentacin de
materia orgnica en descomposicin), los ciliados se nutren por fagocitosis donde
68

el alimento (bacterias, resto de clulas, pequeas clulas eucariotas) entra por

una abertura semejante a una boca llamada (citostoma) hacen la digestin en las
vacuolas y los desechos salen por un poro anal. Al estadio de alimentacin o
crecimiento se le conoce como trofozoito.
Al ser depredadores que cazan bacterias, hongos pequeos y algas juegan un
papel muy importante en la cadena alimentaria y en el equilibrio de la biomasa y
poblaciones de la microbiota. Unos pocos son patgenos humanos pero lo que
estn en este grupo tienen una gran repercusin en la salud pblica.
Reproduccin
Su reproduccin en forma asexual es por fisin o esquizogonia (el ncleo sufre
mltiples divisiones para formar varios ncleos que luego son rodeados por
citoplasma para formar nuevas clulas hijas). En la reproduccin sexual
(conjugacin) de algunos ciliados como el Paramecium como lo muestra la figura
37, dos clulas con ncleos haploides se fusionan donde un ncleo migra hacia el
otro y al separarse las dos clulas cada una queda fecundada donde luego de la
divisin producirn clulas hijas con ADN recombinante (Tortora et al 2007).
Clasificacin
Basados en el tipo de locomocin o movimiento podemos clasificarlos en varios
grupos:
Mastigophora: flagelados
Son protozoos flagelados (uno o ms flagelos) de vida libre, estn presentes

en ambientes acuticos y pueden ser patgenos de animales (incluido el
hombre). En este grupo encontramos a los euglenoides los cuales tienen
cloroplastos que le permiten tener un tipo de nutricin fotoauttrofa, pero
cuando no tiene luz disponible puede crecer como un quimioorganotrofo (figura
38). Dentro de los flagelados se encuentran los hemoflagelados (parsitos de
la sangre) como el gnero Trypanosoma que son transmitidos por insectos
hematfagos.
Ciliophora
Poseen filamentos cortos y numerosos (cilios) alrededor de la clula que le

permiten el desplazamiento, el ciliado ms conocido es Paramecium (figura
39). Pueden estar presentes en agua dulce o salada adems de infectar
animales.
69

Figura
37.
Conjugacin
del
protozoo
Paramecium.
http://www.geocities.ws/batxillerat_biologia/reprosex.htm
Tomado
del
enlace:
Sarcodina
Se desplazan por medio de proyecciones o extensiones del citoplasma

llamadas seudpodos, pueden estar presentes en ambientes acuticos y
parasitar animales. En este grupo se encuentra las amebas como Entamoeba
histolytica que causa enfermedades como la disentera. (Figura 38)
Esporozoos
Son parsitos obligados e inmviles en estado adulto. El ejemplo ms

importante es el gnero Plasmodium causante de la malaria (figura 38).
Figura 39. Ejemplo de ciliophora. Paramecium y sus partes. Tomado del enlace:
http://www.geocities.ws/batxillerat_biologia/reprosex.htm
70

Figura 38. Phylum del reino protista. Este reino incluye hongos mucosos, protozoos y algas.
En el cuadro se describen algunas caractersticas y ejemplos. (Tomado del enlace:
http://cnho.wordpress.com/2010/05/28/%C2%ABhongos-mucilaginosos%C2%BB%C2%BFreinventando-la-pluricelularidad/).
71

NOTA:
Leer por favor las pginas 8 hasta la 11 del siguiente enlace:
http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_7.
pdf
Leccin 25. Algas
Son organismos eucariotas, unicelulares o pluricelulares, forman agregados,

tienen cloroplastos que le permiten realizar procesos de fotosntesis, la mayora
son verdes pero pueden presentar coloraciones rojizas o marrones gracias a las
xantofilas, viven en ambientes acuticos y en el suelo. Cuentan con varios tipos de
clorofila y polmeros de reserva que incluso sirven para su identificacin, existen
formas microscpicas y macroscpicas. Las algas multicelulares tienen un cuerpo
conocido como tallo. Tienen reproduccin sexual y asexual.
La composicin qumica de sus paredes celulares es variable en algunas est
formada por celulosa modificada por polisacridos (xilano, peptina, cido algnico,
etc), en otras por carbonato de calcio, quitina o silicio (diatomeas). Las paredes
celulares tienen poros que le permiten el ingreso de molculas pequeas, iones y
sustancias nutritivas para su metabolismo (Madigan et al 2003).
Son habitantes cosmopolitas de la tierra, productores de oxgeno, la mayora se
encuentran en aguas ocenicas pero es muy comn observarlas en ros, rocas,
vegetales, plancton, cortezas, paredes y formando asociaciones simbiticas
mutualistas con hongos (lquenes), animales y helechos. Aunque tambin existen
algas parsitas.
Tienen una gran importancia ecolgica porque fijan el dixido de carbono en
molculas orgnicas que puedan ser asimiladas por organismos
quimiohetertrofos, convierten el CO2 en carbohidratos y producen oxgeno. Son
indicadores de contaminacin y equilibrio ambiental (Tortora et al 2007).
La ficologa es la ciencia que estudia las algas. Las figuras 38, 40, 41 y 42
muestran ejemplos de los grupos de algas. Las figuras 40 y 41 fueron tomadas del
enlace virtual: http://www.tutorvista.com/content/biology/biology-iii/kingdoms-livingworld/algae.php
72

Cuadro 5. Comparacin de caractersticas de filos de algas.

Phylum
Nombre
Pared
Celular
Morfologa
Pigmentos
Reserva
Aplicacin/caracterstica
Phaeophyta
Algas pardas
Celulosa
o
alginato
Multicelulares
con filamentos
o
ramificaciones
semejantes a
plantas
Clorofilas a
c y
xantfilas
Carbohidratos
(laminaria)
El alginato se usa en la
industria de alimentos
(helados,
repostera),
neumticos,
lociones.
viven
en
ambientes
marinos
Rhodophyta
Algas rojas
Celulosa
Unicelulares y
multicelulares,
filamentosas
con
ramificaciones
Clorofilas a
y d,
ficocianina
y ficoeritrina
Polmeros de
glucosa,
floridean
Obtencin de agar y
carragenina / algunas
algas producen toxinas
mortales.
Viven
en
ambientes marinos
Chlorophyta
Algas verdes
Celulosa
Unicelular y
multicelular
Clorofilas a
yb
Almidn
Forman el verde en
estanques. Viven en agua
dulce y suelo
Bacillariophyta
Diatomeas
Pectina
y slice
Unicelulares
Clorofilas a
y c,
carotenos y
xantfila
Lpidos o
aceite
Algunas pueden causar

intoxicaciones por el cido
domoico. Presentes en
agua dulce y marina
Pyrrophyta
Dinoflagelados
o plancton
Celulosa
Unicelulares
Clorofila a y
ce,
carotenos y
xantinas
Almidn
Algunas algas producen

neurotoxinas, producen la
marea roja. Viven en
ambientes marinos.
Figura 40. Ejemplos de Phaeophyta.
73

Figura 41. Ejemplos de Clorophyta y Rodophyta. A, algas pertenecientes Clorophyta y B

pertenecientes a Rodophyta.
Figura 42. Ejemplos de Bacillariophyta y Pyrrophyta. Izquierda, varios tipos de diatomeas. A la

derecha Gonyaulax verior (A) una clula viva; (b) tecas en vista dorsal y ventral; (C) un quiste.
Tomadas
de
http://www.flickr.com/photos/52345239@N05/sets/72157625392836753/detail/
http://www.nordicmicroalgae.org/taxon/Gonyaulax
NOTA:
Leer por favor el siguiente enlace para mayor informacin:
http://docencia.udea.edu.co/bacteriologia/MicrobiologiaAmbiental/microbiologia_7.
pdf
74

CAPTULO 6. Sistema de vida anaerobio

Leccin 26. Respiracin anaerobia
Es un proceso de generacin de energa (ATP) a travs de reacciones de oxido
reduccin similar a la respiracin aerobia pero se caracteriza porque el aceptor
final de electrones no es el oxgeno molecular (O2) sino sustancias inorgnicas
como nitratos (NO3-), iones de hierro (Fe3+), sulfatos (SO42-), carbonatos y en
algunas o pocas ocasiones compuestos orgnicos (figura 43). En este tipo de
respiracin se obtiene menos energa que en la respiracin aerobia pero es vital
para la supervivencia y metabolismo de microorganismos anaerobios estrictos,
aunque tambin puede presentarse en anaerobios facultativos los cuales en
ausencia de oxgeno recurren a esta va.
Figura 43. Ejemplos de respiracin anaerobia. (Tomado de Madigan et al. 2003).
75

Al igual que en la respiracin aerobia tambin hay una cadena transportadora de

electrones anloga (con citocromos, quinonas, ferrosulfoprotenas y otras
protenas transportadoras de electrones), presentes en la membrana celular. Entre
los microorganismos que utilizan esta va tenemos: Pseudomonas, Bacillus,
Desulfovibrio, Thermoplasma, Methanococcus, etc.
La fermentacin y la respiracin anaerobia son dos procesos diferentes, porque
aunque la fermentacin es anaerbica en sta no participa una cadena
transportadora de electrones y el aceptor final es una sustancia orgnica.
Es importante resaltar que los microorganismos que emplean este tipo de
respiracin tienen un crecimiento ms lento respecto a los que usan la respiracin
aerobia.
Metabolismo asimilador y desasimilador
Muchos microorganismos usan compuestos inorgnicos como fuentes de
nitrgeno, carbono, hierro, azufre, etc donde estos grupos se reducen, pero no
podemos confundir la asimilacin con el uso de iones inorgnicos como aceptores
finales de electrones. Para esto se emplean dos trminos: asimilacin y
desasimilacin. En la asimilacin slo se reducen los compuestos suficientes para
cumplir las necesidades nutritivas del microorganismo y formar macromolculas
(frecuente en bacterias, hongos, plantas superiores, etc), mientras que, en el
metabolismo desasimilador se reduce una cantidad mayor de compuestos
orgnicos para ser aceptores de electrones, esto slo ocurre en ciertas procariotas
(Madigan et al 2003).
NOTA:
Leer la seccin 17.13 sobre respiracin anaerobia en: Madigan, M., Martinko, J
& Parker, J. (2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid:
Leccin 27. Reduccin del nitrato y proceso de desnitrificacin

El nitrato (NO3-) y el amoniaco (NH3) son fuentes de nitrgeno inorgnico que
pueden usarse como aceptores de electrones en la cadena respiratoria anaerobia.
Uno de los ms comunes y estudiados es el NO3-, el cual puede ser reducido con
la participacin de enzimas (nitrato reductasa, nitrito reductasa, xido ntrico
reductasa, y xido nitroso reductasa) todas ellas presentes en la membrana
celular, las dos primeras se encuentran inmersas en la membrana mientras que
76

las restantes slo en la superficie. Ellas slo se activan en ausencia de oxgeno y

cuando el nitrato est presente antes de expresarse completamente las enzimas.
Cuando el aceptor de electrones nitrato es reducido a productos gaseosos que
pasan a las atmsfera se le conoce como desnitrificacin.
NO3- NO2- NO N2O N2
Cada reaccin es catalizada por las cuatro enzimas descritas arriba en su orden.
La nitrato reductasa (que contiene molibdeno) inicia la reduccin del nitrato a
nitrito y la nitrito reductasa lo reduce a xido ntrico y as sucesivamente hasta
obtener nitrgeno gaseoso. Al ser el nitrato una forma de nitrgeno accesible para
las plantas las desnitrificacin es considerada una prdida para la agricultura
porque este pasa a la atmsfera como N2. Este proceso puede presentarse
cuando los suelos estn anegados y la concentracin de oxgeno disminuye. Pero
puede convertirse en un beneficio para le tratamiento de aguas residuales porque
la reduccin de nitrato desfavorece el crecimiento de algas.
En bacterias como Escherichia coli el nitrato slo se reduce a nitrito mientras que
el las bacterias Paracoccus denitrificans y Pseudomonas stutzeri es reducido
hasta nitrgeno molecular adems durante el transporte de electrones en la
cadena respiratoria anaerobia se genera un fuerza motriz protnica que produce
ATP (figura 44).
Figura 44. Posible transporte de electrones en Pseudomonas stutzeri durante la desnitrificacin.

Note que hay enzimas inmersas en la membrana celular y periplsmicas. Fp = flavoproteinas, Q=
ubiquinona y Cyt= citocromos. (Tomado de Madigan et al. 2003).
Es importante mencionar que la mayora de las procariotas desnitrificantes en

presencia de oxgeno realizan respiracin aerobia ya que ella les proporciona ms
energa aunque est presente el nitrato (Madigan et al 2003).
77

NOTA:
Leer por favor el siguiente artculo para mayor informacin:
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/NOVA6_ARTORIG4.pdf

En los sistemas anaerbicos el sulfato (SO4-), la forma ms oxidada del azufre, se
usa como aceptor de electrones para generar energa y reducirlo finalmente a
sulfuro (H2S) para luego excretarlo. El sulfuro de hidrgeno es un compuesto
importante en procesos biogeoqumicos. El proceso ms favorable
energticamente es la respiracin aerbica, pero entre la reduccin de nitrato y
sulfato esta ltima es menos favorable. Entre los compuestos donadores de
electrones ms usados por las bacterias sulfato reductoras para reducir el sulfato
estn el acetato, lactato, piruvato, etanol, fumarato, fosfitos, etc.
Para que el sulfato se reduzca a sulfuro deben ocurrir varias etapas. Primero la
activacin del sulfato, como el sulfato es una sustancia estable ste debe
activarse con ATP por medio de la enzima ATP sulfurilasa la cual une el sulfato a
un fosfato del ATP para formar adenosina fosfosulfato (APS), el APS puede
reducirse a sulfito (SO3-2 + AMP) por la actividad de la enzima APS reductasa y
por ltimo el sulfito se reduce al sulfuro (H2S) por la accin de la sulfito reductasa
(figura 45).
Figura 45. Reduccin del sulfato. Esquema de reduccin asimiladora y desasimiladora del sulfato
(tomado de Madigan et al. 2003).
78

Durante la reduccin del sulfato el transporte de electrones genera una fuerza

motriz protnica til para la produccin de ATP por la accin de una enzima APT
asa. En este transporte de electrones participan varias protenas periplsmicas
(enzima hidrogenasa, citocromo c3, complejo de citocromo Hmc). Primero los
electrones donados por el sustrato citoplasmtico son recibidos por la enzima
hidrogenasa las cual los transfiere al citocromo c3 y ste a su vez al complejo Hmc
el cual finalmente los transporta por la membrana celular hasta el citoplasma
donde los recibe la molcula de APS que finalmente puede reducirse por la accin
de la sulfato reductasa hasta formar sulfuro. Entonces finalmente, un sulfato
reducido a sulfuro genera fuerza motriz protnica que produce una molcula de
ATP. Pero cuando el lactato o piruvato es el donador de electrones se genera otra
molcula de ATP producida por la oxidacin del piruvato a acetato (Madigan et al
2003) ver figura 46. Este es un proceso tpico en Desulfovibrio desulfuricans.
Figura 46. Transporte de electrones en bacterias reductoras de sulfato. Para mayor detalle leer el
texto (tomado de Madigan et al. 2003).
En el metabolismo asimilador del sulfato, es decir el que tiene como finalidad la

formacin de compuestos orgnicos de azufre o biosntesis, la enzima APS
quinasa aade otro grupo fosfato a la molcula de APS para formar
fosfoadenosina fosfosulfato (PAPS) el cual puede continuar sus etapas hasta la
formacin de sulfuro.
79

Todos los microorganismos reductores de sulfato son anaerobios obligados. El

acetato tambin es usado por muchas bacterias como donador de electrones para
la reduccin del sulfato. Otras bacterias sulfato reductoras usan compuestos de
azufre en estado de oxidacin intermedio para reducir desproporcionadamente
compuestos de azufre. Tambin se ha aislado una bacteria auttrofa y anaerobia
estricta (Desulfotignum phosphitoxidans) que acopla la reduccin del sulfato a la
oxidacin del fosfito (HPO3-) obteniendo como productos fosfatos y sulfuro. Como
el fosfito se oxida espontneamente en el aire todava no se conoce el sustrato
que usa para obtenerlo pero se asume que puede estar presente en ambientes
anaerbicos (Madigan et al 2003).
NOTA:
Leer por favor el siguiente artculo para mayor informacin:
http://www.scielo.org.bo/pdf/rbfb/v17n1/v17n1a02.pdf

Es un proceso que realizan microorganismos conocidos como metangenos
(archaeas anaerobias estrictas) que usan el carbono (dixido de carbono) como
aceptor final de electrones para producir metano.
CO2 + 4 H2 CH4 + 2H2O
Coenzimas que participan en la metanognesis

Segn Madigan et al. (2003) pueden dividirse en las transportadoras de carbono y
en las que suministran electrones en la reacciones de xido reduccin:
Coenzima metanofurano (MF)
Transportan la unidad de carbono desde el sustrato inicial que puede ser CO2
hasta el sustrato final CH4. Participa en la primera etapa de la metanognesis.
Coenzima metanopterina (MP)
80

Porta la unidad de carbono en las etapas intermedias de la conversin del

dixido de carbono a metano.
Coenzima M (CoM)
Participa en la etapa final de la metanognesis, convierte el metilo (CH3) a

metano (CH4). Es la coenzima ms pequea de todas.
Coenzima F430
Su estructura est formada con un tetrapirrol con nquel, participa en el paso

final de la metanognesis como un complejo enzimtico de metilreductasa. A
diferencia de las anteriores no porta la unidad de carbono.
Coenzima F420
Es un derivado de flavina que participa como donador de electrones en la

reduccin del dixido de carbono. Esta coenzima fluoresce a 420 nm y puede
se usada para identificar metangenos.
Coenzima B (CoB)
Participa al finalizar la metanognesis con el complejo enzimtico de la

metilreductasa.
Proceso de metanognesis
Aunque la reduccin del dixido de carbono a metano usualmente depende del
hidrgeno molecular (H2), otros compuestos (acetato, formiato, monxido de
carbono, alcoholes, etc) tambin pueden actuar como donadores de electrones
para la reduccin del CO2.
En la metanognesis el CO2 es activado por la enzima que contiene metanofurano
(MF) y reducido a formilo, luego ste se transfiere a la enzima que tiene
metanopterina (MP), aqu se produce una molcula de agua y lo reduce a
metileno, posteriormente lo vuelve a reducir a metilo. El grupo metilo es transferido
a la enzima CoM para formar metil-CoM y reducirse finalmente a metano por la
accin del complejo enzimtico metil reductasa donde participan activamente F430
y CoB. La F430 quita el CH3 del CH3-CoM y forma el complejo Ni2+-CH3 que es
reducido por los electrones aportados por el complejo unido por puentes disulfuro
CoM-S-S-CoB; para mayor ilustracin ver la figura 47. (Madigan et al 2003).
81

La enzima que contiene F430 genera una fuerza motriz protnica capaz de generar
ATP, adems de las reducciones asociadas a la enzima heterodisulfuro reductasa
que generan reacciones exergnicas y extrusiones a travs de la membrana
celular (Madigan et al 2003).
Los microorganismos metangenos (Methanosarcina barkeri, Methanobacterim
formicicum, Methanopyurus, etc) pueden encontrarse en materias orgnica en
descomposicin, zonas pantanosos, sedimentos, hidrotermales, reservas de
petrleo y ambientes anoxignicos con materias orgnica, aunque tambin
pueden estar presentes en el trato digestivo de animales.
Figura 47. Proceso de metanognesis a partir de dixido de carbono. El tomo de carbono

aparece en amarillo y la fuente de electrones en marrn. Los electrones para la reduccin del CO 2
provienen del H2. Para mayor detalle leer el texto. (Tomado de Madigan et al. 2003).
NOTA:
Por favor leer el siguiente artculo:
http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/2311/231116434001.pdf
82

Leccin 30. Acetognesis

La Acetognesis es un proceso que realizan microorganismos conocidos como
homoacetgenos (son anaerobios estrictos), que usan el CO2 (compuesto
abundante en la naturaleza y ambientes anoxignicos) como aceptor de
electrones para la generacin de energa y al hidrgeno (H2) u otras sustancias
(azcares, aminocidos, cidos orgnicos, alcoholes, etc) como donadores de
electrones para produccin de acetato:
4H2 + H+ + 2HCO3C6H12O6
2 piruvato + 4H
CH3COO2 + 4H2O
3CH3COO- + 3H+
3CH3COO- + H+
Los homoacetgenos convierten el dixido de carbono en acetato a travs de la

va acetil-CoA o va Ljungdahl-Wood en honor a sus descubridores (figura 48).
Figura 48. Produccin de acetato a travs de la va acetil coenzima A. (Tomado de Madigan et al.
2003).
83

La mayora de homoacetgenos que excretan el acetato como producto del

metabolismo energtico son bacterias Gram positivas (Clostridium,
Acetobacterium, etc).
Va de la acetil-CoA
La va de la acetil-Coenzima-A no es un ciclo, sino que reduce el dixido de
carbono y produce el acetato por medio de dos vas lineales. En la primera una
molcula de CO2 se reduce al grupo metilo que har parte del acetato y en la
segunda otra molcula de dixido de carbono se reduce para formar el grupo
carbonilo, ambos se ensamblan y forman la coenzima A, precursor del acetato
(figura 48).
Entonces en mayor detalle, para obtener el acetato participa una enzima que usa
como cofactores iones de nquel, zinc e hierro, conocida como la monxido de
carbono deshidrogenasa (CO deshidrogenasa), la cual cataliza la formacin de
CO que terminar en la posicin carbonilo del acetato (-COO-). El grupo metilo se
forma porque una segunda molcula de CO2 se reduce por la coenzima
tetrahidrofolato donde sta lo transfiere a una enzima que contiene B12; finalmente
por accin de la CO deshidrogenasa se combina el grupo metil y CO, donde el Ni
de la enzima interacciona con el grupo metilo y el Fe de la enzima con el CO,
adems de la coenzima A para formar acetil coenzima A; en este paso se genera
una fuerza motriz protnica que sirve para la sntesis de ATP. Posteriormente el
acetil coenzima A se convierte a acetato y se genera otro ATP. Por lo tanto un
ATP se forma por la fuerza motriz protnica mientras que el otro por fosforilacin a
nivel de sustrato.
NOTA:
Por favor leer el siguiente texto:
http://www.ingenieroambiental.com/4014/tratamiento545.pdf
84

UNIDAD 3. ECOLOGA Y MICROBIOLOGA
CAPTULO 7. METODOS PARA ESTUDIAR MICROORGANISMOS

Leccin 31. Anlisis de comunidades microbianas basado en tcnicas de
cultivo
Leccin 33. Anlisis molecular de comunidades microbianas
Leccin 34. Tcnicas moleculares usadas en la microbiologa y biotecnologa
CAPTULO 8. RELACIONES MICROBIANAS, COMUNICACIN CELULAR Y
CICLO DE NUTRIENTES
Leccin 38. Ciclo del carbono y oxgeno
CAPTULO 9. APLICACIONES DE LA MICROBIOLOGA AMBIENTAL
85

UNIDAD 3
ECOLOGA Y MICROBIOLOGA
CAPTULO 7. Mtodos para estudiar microorganismos
Leccin 31. Anlisis de comunidades microbianas basado en tcnicas de

cultivo
En las muestras ambientales es casi imposible encontrar un solo tipo de
microorganismo, pero cuando queremos aislar o conocer la microbiota de
determinada muestra es muy importante darles las condiciones que reflejen el
medio en el que los microorganismos deseados se encuentran, es decir, se debe
tener en cuenta la temperatura, humedad, pH, tipo de nutrientes, consistencia
adecuada del medio, presencia o ausencia de gases, luz, etc., de tal manera que
las condiciones de laboratorio imiten el estado ideal del microorganismo en la
naturaleza y limite el crecimiento de aquellas especies que no queremos estudiar.
Uno de los mtodos ms usados para aislar microorganismos ambientales son los
medios de cultivo, stos pueden ser slidos, semi-slidos o lquidos y deben
otorgarle todas las condiciones nutricionales y ambientales para que se de el
crecimiento microbiano. Es importante resaltar que no todos los microorganismos
pueden cultivarse en el laboratorio, por ejemplo, archaeas presentes en ambientes
con temperaturas extremas. En estos casos los conocimientos de la biologa
molecular y la biotecnologa han sido clave para poder conocer parte de este tipo
de organismos extremfilos.
Existen varios tipos de medios de cultivo, entre ellos tenemos:
Medios definidos
Son aquellos medios de cultivo a los que se les conoce la composicin qumica
y concentracin de todos sus componentes, es decir fuente de carbono,
nitrgeno, sales, etc., o sustancias particulares como vitaminas, factores de
crecimiento. Estos medios suelen usarse para trabajos experimentales o para
cultivar microorganismos quimiohetertrofos o auttrofos.
86

Medios complejos
Son aquellos medios a los que no se les conoce la composicin qumica exacta
de sus componentes, como los que contienen extracto de levadura, peptona,
extracto de carne, etc. Son muy usados en el laboratorio para microorganismos
ambientales y patgenos.
Medios selectivos
Contiene sustancias que favorecen el desarrollo y crecimiento de

microorganismos deseados pero inhiben el crecimiento de los indeseados.
Suele usarse tanto para hongos como para bacterias. Es muy til cuando se
parte de inculos con poblaciones microbianas heterogneas o mixtas.
Medios diferenciales
Permiten diferenciar microorganismos de acuerdo a sus propiedades y

reacciones de crecimiento en el medio. Ejemplo, en el agar sangre se
diferencian microorganismos hemolticos y no hemolticos. Tambin se usan
para aislar microorganismos dentro de una mezcla.
Cultivo de enriquecimiento
Se usa cuando el/los microorganismo (s) deseado est en pequeas

cantidades mientras que los indeseados estn presentes en altas proporciones
de tal manera que con los sustratos selectivos aportados se promueva el
crecimiento de los microorganismos de inters hasta obtener concentraciones
detectables. Por ejemplo, si queremos aislar de una muestra de sedimento
bacterias que degraden o metabolicen lpidos a travs de lipasas, lo ideal es
sembrar el inculo directamente en un medio enriquecimiento lquido que
contenga lpidos (como el aceite de oliva) como nica fuente de carbono y
energa, de tal manera que slo los microorganismos que tengan estas
enzimas puedan crecer en l. Es muy prctico realizar pases sucesivos a
medios enriquecidos frescos con el sustrato limitante para asegurar que toda la
poblacin que se obtuvo tiene lipasas (figura 49). Pero si en el estudio
queremos no slo detectar y aislar cepas lipolticas sino tambin termoflicas lo
indicado sera adems de usar aceite de oliva como fuente de carbono y
energa usar condiciones de incubacin a altas temperaturas; de esta manera
slo lo lipolticos termoflicos podran sobrevivir en estas condiciones.
Otro ejemplo de cultivo de enriquecimiento es la columna de Winogradsky, en
honor al investigador que la dise. Esta columna es un sistema anaerobio
para el enriquecimiento y aislamiento de bacterias fototrficas (rojas y verdes),
87

sulfato reductoras, anaerobias, algas o cianobacterias; la columna de

Winogradsky se realiza en un cilindro que contiene material orgnico, lodo y
agua de lagos, charchos o acequia; donde los microorganismos se van
desarrollando estratificadamente de acuerdo a sus actividades metablicas y
requerimientos ambientales (figura 50).
Figura 49. Medio de enriquecimiento. Medio de enriquecimiento FAM + aceite de oliva al 1%

(izquierda) para aislar microorganismos lipolticos a partir de muestras de sedimentos (a la
derecha). Fuente Carmen Julia Pedroza.
Figura
50.
Columna
de
Winogradsky.
Imgenes
tomadas
del
http://biosonia.blogspot.com/2008/12/webquest-la-columna-de-winogradsky.html
enlace:
88

NOTA:
En el siguiente enlace encontrar mayor informacin:
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

Consiste en la obtencin de colonias puras, es decir, grupo o aglomeracin de
microorganismos de la misma especie originados a partir de una espora o
clula vegetativa; esta colonias tienes caractersticas distintivas que les permite
diferenciarlas de otras.
Si consideramos el ejemplo anterior de enriquecimiento de bacterias lipolticas,
pero ahora con el objetivo de aislar por aparte cada especie de bacterias
(clones), es decir, obtener un cultivo puro, existen varias tcnicas que puede
ser muy tiles, entre ellas: diluciones seriadas, siembre en superficie, siembra
en profundidad (vistas en la leccin 18), siembra por estras o agotamiento y
pinzas pticas de lser.
Siembra por estras
Se toma el inculo de un cultivo mixto con un asa y se extiende sobre la

superficie del medio de cultivo slido contenido en una caja de petri, luego se
hacen estras en forma de zigzag, posteriormente debe esterilizarse el asa con
calor, girar la caja e iniciar en la ltima lnea que se sembr para trazar de
nuevo la lneas en formar de zigzag, se esteriliza de nuevo el asa y se repite el
procedimiento de tal manera que el inculo se va agotando y las colonias que
crecern despus del periodo y temperatura de incubacin tendrn una
distribucin aislada unas de otras, de tal manera que cada colonia pueda
aislarse de nuevo por agotamiento y comprobar por medio de otras tcnicas
que el microorganismo est puro (figura 51).
Las colonias tienen caractersticas especficas que ayuda a diferenciarlas
(color, borde, elevacin, brillo, etc); pero adems de estos detalles es muy
importante apoyarse con tinciones y observaciones microscpicas para
determinar morfologas o estructuras.
89

Figura 51. Mtodo de siembra por estras o agotamiento. (Tomado de Tortora et al. 2007).
Pinzar de lser
En esta tcnica se usa un microscopio ptico invertido, con un lser infrarrojo y

un instrumento de micromanipulacin, donde un rayo lser se enfoca sobre
una clula (puede ser una bacteria, espora, etc) de forma individual y crea
fuerzas de radiacin sobre ella que permite su desplazamiento controlado en
cualquier direccin mientras est sometida a la fuerza por el haz del lser.
Este experimento se realiza en un tubo capilar donde est contenida la
muestra mixta o poblacin, de tal manera que cuando el lser separe la clula
o bacteria de inters de la mezcla o cultivo, se corte el capilar y quede
completamente aislada del resto. Luego puede transferirse a un cultivo fresco
para obtener el cultivo puro o clones (figura 52) (Madigan et al 2003).
Figura 52. Pinzas lser. Tambin conocidas como pinzas pticas lser (tomado de Madigan et
al. 2003).
NOTA:
Para mayor ilustracin por favor ver este enlace:
http://129.215.156.68/tweezermovies/tweezermovies.htm
http://www.science.oas.org/Simbio/mbio_ind/cap3_mi.pdf
90

Leccin 33. Anlisis molecular de comunidades microbianas

Existen varias tcnicas que permiten cuantificar, detectar y conocer los
microorganismos presentes en determinado hbitat microbiano, Madigan et al.
(2003) expone varias de ellas como se describirn a continuacin:
Tincin fluorescente con DAPI
Es empleado para teir microorganismos de ambientes opacos, la tincin se
realizan con el colorante fluorescente 4,6-diamino-2-fenilindol, el cual se une a
los pares de bases adenina: timina (A:T) del ADN (o tambin al ARN) del
microorganismo . Las clulas teidas con DAPI muestran una fluorescencia
azul brillante que facilita su deteccin y conteo con un microscopio de
fluorescencia con luz ultravioleta. Esta es una tincin que es muy especfica
porque se une al ADN y no a material inerte pero no discrimina clulas muertas
ni microorganismos especficos, de tal manera que permite la cuantificacin
total de la poblacin. Se usa para cuantificar microorganismos de muestras
clnicas y alimentos (figura 53).
Figura 53. Tinciones fluorescentes de clulas. (A) Tincin con DAPI, los ncleos de las clulas
se ve en azul. (B) Tincin de clulas viables, las clulas vivas se observan verdes mientras que
las muertas rojas.
Tincin de viables
A diferencia de la anterior esta tcnica permite diferenciar y contabilizar
clulas vivas y muertas. En este mtodo se usan dos colorantes fluorescentes,
verde y rojo, el verde puede penetrar todas las clulas muertas o vivas
(viables); mientras que el rojo (yoduro de propidio) slo penetra las clulas
cuya membrana est daada, es decir clulas muertas. Por lo tanto las clulas
91

viables al teirse de verde pueden cuantificarse. Esta tcnica puede ser

inespecfica con materiales inertes por lo tanto no se recomienda su uso en
ambientes naturales si no en cultivos de laboratorio (figura 53).
Anticuerpos fluorescentes
Esta tincin no se realiza sobre los microorganismos sino en anticuerpos; entre
los colorantes tiles para teir anticuerpos est la Rodamina B y el
isotiocianato de fluorescencia, los cuales emiten una fluorescencia roja o
amarillo verdosa respectivamente. Esta tcnica es muy especfica porque
permite la deteccin de anticuerpos unidos a la clula o antgenos de la
superficie celular, por la emisin de fluorescencia del colorante que puede ser
detectada con un microscopio. Es muy til en estudios de ecologa microbiana
porque permite identificar microorganismos en ambientes naturales sin tener
que aislarlos o cultivarlos adems de rastrearlos en hbitats complejos. Su
desventaja radica en que la preparacin de anticuerpos especficos para
microorganismos puede ser larga y laboriosa. Para diagnsticos clnicos es
una tcnica muy comn por la mayor disponibilidad comercial (figura 54).
Figura 54. Tincin con anticuerpos fluorescentes y con FISH. A la izquierda identificacin de
Yersinia pestis con anticuerpos fluorescentes CDC y a la derecha FISH mltiple para identificar
bacterias nitrificantes de aguas residuales. En rojo oxidadotas de amoniaco y en verde
oxidadotas de nitritos. (Tomado de Brock et al. 2003)
Protena fluorescente verde

Por medio de la tecnologa del DNA recombinante se puede insertar un gen
que codifica una protena fluorescente verde (GFP siglas en ingls) en el
genoma de una clula, de tal manera que cuando la protena se exprese en la
clula pueda observarse la coloracin verde con la ayuda de un microscopio de
de luz ultravioleta. Cmo slo las clulas recombinantes pueden emitir el color
verde no es adecuada para el estudio de poblaciones naturales (las clulas
nativas en ambientes naturales no emiten color) pero si para observar el
92

comportamiento in situ de la clula modificada genticamente frente a las

cepas nativas.
Todas la tcnicas descritas anteriormente requieren el uso de un microscopio
para poder observar a los microorganismos, pero no representa una ayuda
para estudiar la diversidad gentica en los ambientes naturales porque es muy
difcil diferenciar clulas con morfologas o tamao, por lo tanto el uso de
tcnicas moleculares permite estudiar la informacin gentica y as dilucidar
funciones de genes, interacciones de microorganismos y funciones dentro de
un ecosistema.
Tinciones genticas
Es un mtodo muy til para identificar y cuantificar microorganismos en la
naturaleza, se realiza con la ayuda de fragmentos u oligonucletidos de ADN o
ARN complementario a una secuencia del gen diana (blanco o de estudio)
llamada sonda, donde sta puede teirse con colorantes fluorescentes; esta
tcnica se conoce como hibridacin fluorescente in situ (FISH por sus siglas en
ingls).
Tincin filogentica con FISH
Para esta tcnica se usan colorantes filogenticos, llamados as porque la soda

empleada es complementaria a una regin del rRNA 16S (en procariotas) o al
rRNA 18S (en eucariotas); se caracteriza porque el colorante penetra la clula
directamente hasta llegar al ribosoma donde la sonda hibrida con su secuencia
complementaria. Se han diseado sondas filogenticas para especies e incluso
dominios de tal manera que se puede estudiar, identificar o rastrear
organismos particulares o relacionados.
La muestras naturales pueden analizarse con sondas filogenticas mltiples
por FISH donde cada sonda tendra un colorante que emita un color diferente,
as se puede estudiar un hbitat completo y adems de buscar organismos
especficos permite establecer relaciones filogenticas (figura 54).
Tincin de cromosomas y transcripcin inversa in situ
La tincin de cromosomas se usa para identificar genes especficos de

ambientes naturales, por ejemplo el gen de la nitrogenasa. En este mtodo se
pueden usar varios tipos de sonda (oligonucletidos, genes completos,
conjunto de genes o incluso genomas completos fragmentados) donde la
sonda marcada se unir a la secuencia complementaria del gen o genes de
93

inters y as se conoce que microorganismo presente en la muestra contiene el

gen de inters.
En la transcripcin inversa in situ (ISRT siglas en ingls) la sonda hibrida con
molculas de mRNA, luego se da la transcripcin inversa para originar ADN
complementaria (cDNA) que es amplificado por la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR siglas en ingls) donde finalmente el ADN amplificado hibrida
con una sonda fluorescente. Esta tcnica permite explorar los factores que
afectan la expresin gnica y transcripcin de genes especficos.
NOTA:
Leer la seccin 18.3 y 18.4 en: Madigan, M., Martinko, J &
Parker, J. (2003). Brock biologa de los microorganismos. (10
Ed). Madrid: Pearson Prentice Hall.
Leccin 34. Tcnicas moleculares usadas en la Microbiologa y
Biotecnologa
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)
La PCR fue desarrollada en 1986 por el cientfico Kary Mullis, es una de las
tcnicas ms importantes de la biologa molecular y gracias a ella se han
obtenido muchos avances en la biotecnologa (entre ellos secuenciacin y
clonacin). Este mtodo amplifica una regin selectiva del ADN, es decir,
permite obtener muchas copias de ese fragmento simulando el proceso de
replicacin que se da en las clulas naturalmente. La tcnica depende de la
capacidad del ADN para desnaturalizarse e hibridar con alineadores o primers
que sirven como cebadores para que la enzima Taq polimerasa (una enzima
termoestable aislada del microorganismo Termus aquaticus) sintetice una
nueva hebra de ADN usando una cadena de ADN como molde. Para realizar la
PCR no se necesita conocer la secuencia del ADN a amplificar pero si los
bordes que flanquean el ADN de inters, indispensable sto para el diseo de
los primers o cebadores (figura 55).
La reaccin en cadena de la polimerasa tiene varios componentes que
permiten obtener muchas copias de una regin del ADN, todos ellos deben
estar presentes en el tubo de reaccin para que tener una amplificacin
exitosa. Se realiza en un equipo llamado termociclador. Los componentes son:
ADN molde
94

Contiene la regin del ADN que se quiere amplificar, se puede usar segmentos
de ADN o incluso genomas completos.
Figura 55. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Tomado

http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_en_cadena_de_la_polimerasa.
del
enlace:
Desoxirribonucleosidos-trifosfato (dNTP)
Son los nucletidos que componen el ADN (adenina, timina, guanina y citosina)
y los que la enzima DNA polimerasa (taq polimerasa) usar para polimerizar y
sintetizar nuevas copias de ADN.
Cebadores o iniciadores (primers en ingls)
Son fragmentos u oligonucletidos complementarios a cada cadena del ADN

molde, los cuales apuntan entre si en direcciones opuestas. Flanquean la
regin a amplificar. Usualmente se usan primers de 17-20 nucletidos (merts).
El uso de primers muy pequeos o grandes genera limitantes para la PCR.
Iones
Usualmente se usan el in de magnesio divalente (MgCl2) ya que este acta

como cofactor de la enzima DNA polimerasa (taq polimerasa) para aumentar
su procesividad.
Buffer
95

Es una solucin que mantiene el pH adecuado para la actividad de la enzima y

amplificacin del ADN.
DNA polimerasa
Usualmente se emplea la taq polimerasa, es la enzima que se encarga de unir

los dNTPs al ADN molde para sintetizar una nueva cadena de ADN que a su
vez servir como molde.
La PCR se desarrolla bsicamente en tres etapas que se repiten

aproximadamente 30 veces, llamados ciclos. Estas son:
Desnaturalizacin
La molcula de ADN molde se desnaturaliza (separacin de las cadenas) a

altas temperaturas (usualmente a 94- 95 C). Ver crculo 1 de la figura 55.
Alineacin
La mezcla de reaccin se enfra a 50-60 C para que se de la hibridacin o

unin de los cebadores o primers a su secuencia complementaria (alineacin).
Crculo 2 de la figura 55.
Extensin
De nuevo se aumenta la temperatura (usualmente a 47 C) para que la enzima

Taq polimerasa sintetice una nueva cadena de ADN usando los dNTP. Crculo
3 de la figura 55.
Luego de la primera extensin o elongacin se vuelve al repetir de nuevo el
ciclo de desnaturalizacin de tal manera que la cadenas de DNA nuevas
puedan servir como molde para generar nuevo ADN (crculo 4 de la figura 55).
Los tres ciclos se repiten aproximadamente 30 veces as que se obtienen
millones de fragmentos del ADN que se quera amplificar.
Los productos de PCR pueden tener varias finalidades: gel de electroforesis,
clonacin o secuenciacin. Todas estas tcnicas son indispensables para el
desarrollo de microorganismos recombinantes que tengan caractersticas
especiales como degradacin de contaminantes ambientales, transgnicos,
resistentes, etc.
96

Electroforesis en gel
Permite separar molculas a travs de una matriz porosa (gel de agarosa o
poliacrilamida) donde la muestra (cidos nucleicos o protenas) migra por un
campo elctrico con base a su carga, forma, masa o tamao. Despus de
terminado el corrido las muestras menos pesadas migrarn ms rpido y
quedarn en la parte de abajo del gel mientras que las ms grandes en la parte
superior. Para conocer el tamao se usan marcadores de peso molecular
conocido y programas informticos. Comnmente los fragmentos se pueden
observar con tinciones del ADN (bromuro de etidio, con la ayuda de una
cmara de luz U.V) o protenas (con colorantes como el azul de Coomassie)
(figura 56).
Figura 56. Electroforesis de protenas y gel de corrido. A la izquierda electroforesis en gel de

poliacrilamida de protenas (lipasas) y a la derecha corrido electrofortico de producto de PCR.
Fuente Carmen Julia Pedroza.
Secuenciacin de ADN
Es una tcnica que permite conocer el orden exacto de los nucletidos en una
muestra de ADN (ADN genmico, mitocondrial o de cloroplastos, producto de
PCR, plsmidos, etc); existen varios mtodos para la secuenciacin, entre ellos
el mtodo de terminacin en cadena o el de degradacin qumica.
Clonacin
La clonacin permite obtener muchas copias de un gen determinado, por
ejemplo, se quiere estudiar un producto de PCR ste se puede introducir con la
ayuda de enzimas de restriccin a un vector (plsmido o fago) para obtener
muchas copias del gen de inters el cual puede tener alguna caracterstica
especial (como la produccin de protenas o resistencia). Esta informacin
gentica puede llevarse hasta organismos vivos pero son varios los
97

procedimientos que se realizan para lograr transformaciones o expresiones

gnicas.
NOTA:
Leer la seccin 10.14 en el libro: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J. (2003).
Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid: Pearson Prentice
Hall.
Los fundamentos de tcnicas como Southern
aparecen en este enlace:
y Northern blot y RFLP
http://seqcore.brcf.med.umich.edu/doc/educ/dnapr/mbglossary/mbgloss.html
Leer temas relacionados en los libros de Lodish o Brown (ver la bibliografa del
mdulo para mayor detalle).
En muchos casos se estudia la actividad microbiana in situ para observar la

actividad metablica y biodiversidad en el hbitat. Madigan et al. (2003)
describen varios mtodos, entre ellos:
Radioistopos
Se usan las transformaciones qumicas que sufren los compuestos por la

actividad metablica de los microorganismos para evaluar lo que se da en el
ambiente, marcando los productos de esas transformaciones con
radioistopos, stos son istopos radiactivos.
Microelectrodos
Son pequeos electrodos (dispositivos de oro, vidrio y platino) de cristal para

medir pH, oxgeno, NO2, CO2, H2, H2S o salinidad. Son muy tiles para
cuantificar la actividad de los microorganismos en la naturaleza y se puede
usar para estudiar diversos microorganismos en muchos ambientes, zonas
intermareales, fuentes termales, suelos, etc.
Istopos estables
98

Son istopos que no se destruyen como resultado de la degradacin radiactiva,

los ms usados en la ecologa microbiana son los istopos de carbono ( 12C) y
azufre (32S) y los menos abundantes en la naturaleza son el carbono 13 y el
azufre 34. Cuando el carbono y el azufre son metabolizados en las actividades
celulares las reacciones bioqumicas favorecen al istopo ms liviano es decir
al 12 y al 13. De tal manera que cuando el dixido de carbono es usado por un
microorganismo fottrofo el carbono celular se enriquece en 12C y se
empobrece en 13C, esto se conoce como fraccionamiento isotpico (Madigan et
al 2003).
NOTA:
Leer la seccin 18.6 y 18.7 en: Madigan, M., Martinko, J & Parker, J.
(2003). Brock biologa de los microorganismos. (10 Ed). Madrid:
CAPTULO 8. Relaciones microbianas, comunicacin celular y ciclo de

nutrientes

Los microorganismos estn presentes en todas partes e interactan constante
mente con otros organismos estableciendo incluso relaciones intraespecficas
(dentro de la misma especie) o interespecficas (entre diferentes especies),
pero no slo la relacin con otros organismos es importante en la ecologa
microbiana sino tambin su interaccin con el medio abitico en el que estn
contenidos.
Dado el tamao microscpico de los microorganismos y su incapacidad para
recorrer largas distancias stos han desarrollado la capacidad de establecer
su hbitat en muchos ambientes y para facilitar el estudio de ellos los eclogos
microbianos han definido como microambiente al lugar del hbitat en el que el
microorganismo vive y desarrolla todas sus actividades metablicas; de tal
manera que un entorno tan pequeo para nosotros como una matera y tan
grande para una bacteria representa millones de microambientes donde
pueden desarrollarse microorganismos diferentes gentica y metabolitamente,
por ejemplo, los microorganismos aerobios siempre estarn en superficie
mientras que los anaerobios en lo ms profundo.
99

A continuacin se definirn una serie de trminos importantes en la ecologa

microbiana, el orden y algunas definiciones fueron descritas por Llop et al.
(2001).
Biomasa
Es el conjunto de seres vivos u organismos que viven en un lugar determinado.
Biotopo
Es el lugar o sitio donde se encuentra la biomasa, se caracteriza por tener

condiciones ambientales uniformes.
Biocenosis
Es el conjunto de seres vivos de todas las especies que coexisten en un

biotopo.
Ecosistema
Es una biocenosis en un biotopo determinado. En el ecosistema hay flujo de

materia y energa entre sus componentes. Existen varios tipos de ecosistemas:
terrestre, acuticos y areos
Biosfera
Es el conjunto de ecosistemas de la tierra. Se puede decir que la biosfera es el

ecosistema global del planeta.
Hbitat
Es el sitio o ambiente donde vive una especie o poblacin. Debe tener las
condiciones adecuadas para que los organismos que la conforman realicen
todas sus actividades celulares y reproductivas que permita la supervivencia de
la especie.
Nicho
Es la funcin que realiza un organismo o poblacin dentro de un ecosistema e

incluye a los factores biticos y abiticos con los cuales el organismo se
relaciona. No debe confundirse con hbitat.
100

Relaciones entre seres vivos
Neutralismo
Es una relacin en la que dos microorganismos tienen un comportamiento

completamente independiente del otro donde ningn organismo afecta al otro;
usualmente no hay interaccin directa por separacin fsica o temporal. Se
relaciona ms con la baja densidad celular que con la alta densidad celular.
Comensalismo
Es una relacin donde un solo microorganismo recibe beneficios de la

interaccin, sin que el otro se vea afectado. Por ejemplo, las algas
fotosintticas producen el oxgeno que puede ser usado por bacterias u
organismos aerobios. Ciertos microorganismos excretan componentes que
ayudan al crecimiento de otro. Otros disuelven minerales y liberan nutrientes
que pueden ser usados por otros.
Amensalismo
Es una relacin opuesta al comensalismo donde una especie es perjudicada

mientras que la otra no se afecta. Por ejemplo los antibiticos producidos por
hongos matan a las bacterias presentes en el medio.
Mutualismo
Implica una relacin entre microorganismos que reciben beneficios mutuos;

esta relacin puede ser o no obligada. Ejemplo, los lquenes que estn
conformados por hongos y algas donde el alga proporciona nutrientes mientras
que el hongo anclaje y proteccin.
El sinergismo, simbiosis y protocooperacin hacen parte del mutualismo
En el sinergismo la cooperacin de mutuo beneficio no es obligatoria; por
ejemplo la degradacin de herbicidas, un microorganismo degrada una parte
del herbicida mientras que el otro degrada lo restante. La simbiosis es una
relacin estrecha, persistente y obligada. Por ejemplo las micorrizas (figura 57)
o los protozoos con las termitas. En la protocooperacin los dos
microorganismos o poblaciones se benefician mutuamente pero no son
necesarios para la vida de ambos ya que pueden vivir separados.
101

Figura 57. Ejemplo de micorriza. Relacin simbitica entre hongo y planta.

Enlaces:http://www.forestales.net/archivos/forestal/pdfs%2024/ecologia_hongos_2.html
y
http://greis-micorrizas.blogspot.com/
Competencia
Es una relacin en la que ambos organismos se ven perjudicados donde uno

suprime al otro, usualmente compiten nutrientes, territorio, etc. Puede ser intra
o interespecfica.
Parasitismo
Una especie se beneficia mientras perjudica a otra. Se presente entre especies

diferentes. Por ejemplo, virus que infectan a bacterias u hongos que enferman
a nemtodos.
NOTA:
http://www.revistaecosistemas.net/pdfs/109.pdf

En los ltimos aos se han iniciado investigaciones que permitan conocer los
diferentes mecanismos que usan los microorganismos para comunicarse, stos
para colonizar o infectar su husped, dependen y usan el sistema de qurum
sensing (QS) o sensacin de qurum, descubierto inicialmente en la bacteria
marina Vibrio fischeri en 1970, quien lo utiliza para regular la expresin de
102

bioluminiscencia (Nealson et al. 1970). El QS bacteriano es una estrategia de

comunicacin clular que permite liberar y detectar pequeas molculas de
seal que se acumulan a medida que aumenta la densidad poblacional y as,
poder responder de forma individual y colectiva a cambios ambientales,
adems de coordinar sincronizadamente la expresin de algunos genes; por
ejemplo, aparte de de la regulacin de la bioluminiscencia en V. fisheri y V.
harvey, se ha descubierto que este tipo de molculas intervienen en la
regulacin de otros procesos biolgicos en muchos organismos, entre ellos, el
intercambio gentico en la conjugacin de Enterobacter faecalis, expresin de
factores de virulencia y formacin de biopelculas en Pseudomonas
aeruginosa, produccin de antibiticos por Streptommyces sp. etc (Oh et al.
2001; Hornby et al. 2001; Dong y Zhang, 2005) Pedroza, 2010.
Este mecanismo de regulacin celular es el mismo que coordina la formacin
de biopelculas o biofilms, sistemas biolgicos o microlonias de clulas
bacterianas que excretan polisacridos en la superficie conde se desarrollan y
estn adheridas; las biopelculas forman capas de microorganismos que
facilitan la obtencin de nutrientes y proteccin. Pseudomonas aeruginosa es
una bacteria gramnegativa que tiene la capacidad de secretar pequeas
molculas de seal conocidas como acilhomoserina lactonas (AHL) las cuales
favorecen el aumento de la densidad poblacional y por lo tanto la formacin del
biofilm. Existen muchos tipos de molculas autoinductores adems de las AHL
entre ellas: derivados de cidos grasos, oligopptidos, furanonas, tiolactona
cclica (AIP), ster metlico del cido palmtico (PAME), furanosylborato (AI-2),
methyl dodecenoic acid (DSF), muchas de ellas vinculadas en la regulacin de
la virulencia bacteriana (Dong y Zhang, 2005; Dong et al., 2007); estas seales
son producidas por microorganismos ambientales no patgenos, fitopatgenos,
patgenos humanos y de animales, es decir estn ampliamente extendidas en
los microorganismos.
La formacin de biopelculas puede darse en el ser humano, por ejemplo, la
placa dental o causando enfermedades de importancia como la fibrosis qustica
entre otras; en la medicina representan un problema porque los
microorganismos son ms difciles de combatir y desarrollan resistencia ante
los tratamientos con antibiticos siendo un problema mayor en pacientes
inmunocomprometidos (como aquellos que tienen SIDA). Los fitopatgenos
usan este mecanismo para activar la expresin de genes de virulencia y causar
enfermedades en plantas como es el caso de la pudricin de la papa por
Pectobacteium carotovorum, sto representa millones en la economa agrcola.
En la industria las biopelculas reducen el flujo de agua, aceite, petrleo u otras
sustancias lquidas que se muevan por tuberas donde los microorganismos
crecen y adems de contaminar pueden corroer la superficie y deteriorar las
tuberas (figura 58). La calidad del agua potable tambin puede verse muy
103

afectada porque a pesar que muchas de las bacterias que se desarrollan en las
tuberas no son patgenas algunas como la Vibrion cholera pueden causar
graves enfermedades en la poblacin cuando parte de la biopelcula de
microorganismo se desprenden de las tuberas y llegan hasta los
consumidores. En las aguas residuales tambin se forman biopelculas o floc.
Figura 58. Biopelcula microbiana. A la izquierda flujo de la corriente de agua a travs de la

Biopelcula y a la derecha Biopelcula bacteriana sobre una superficie de acero de un sistema de
provisin de agua vista desde MEB. Los valos grandes son diatomeas. (Tomado de Tortora et al.
2007).
Para el control de biofilm se han propuesto investigaciones en nuevos

antibiticos pero esta sera una solucin costosa y quiz despus de un tiempo
los microorganismos desarrollaran resistencia teniendo al final cepas
poderosamente patgenas y multiresistentes. Por eso se han comenzado a
dilucidar mecanismos para poder contrarrestar las biopelculas interrumpiendo
la comunicacin celular, es decir, no matar a los microorganismos sino impedir
que lleguen las rdenes que promuevan la formacin de la biopelcula, por
ejemplo hidrolizando los autoinduntores de las AHL con enzimas; este
mecanismo es conocido como Quorum quenching (Q-Q) o inhibicin de la
comunicacin celular (figura 59).
Figura 59. Modelo de interferencia de mecanismo de QS dependiente de AHL, (tomado de

Zhang y Dong (2004).
104

Leccin 38. Ciclo del carbono y oxgeno
Son una serie de transformaciones qumicas de sustancias que contienen

carbono, realizada por macroorganismos y microorganismos el cual se puede
dar en dos fases: aerobia y anaerobia (figura 60). El carbono est presente
como constituyente de material abitico y en organismos vivos, siendo las
rocas y sedimentos marinos los mayores reservorios de carbono; otro gran
portador del carbono es el humus, una mezcla compleja de materia orgnica
que resulta de los organismos vivos, los mayores contenedores de carbono
son las plantas terrestres las cuales a su vez juegan un papel clave en el ciclo
del carbono y oxgeno, ambos muy relacionados e indispensables para el
equilibro ambiental y la vida aerobia sobre la tierra.
El dixido de carbono (CO2) es el medio ms rpido de transferencia del
carbono de la tierra presente en un 0.03% (Seonez, 2002) pero en los ltimos
aos a aumentado como resultado de las actividades antrpicas segn
Madigan et al. (2001) a niveles del 12%.
El CO2 es el sustrato indispensable para la fotosntesis, en este primer paso
del ciclo del carbono los organismos fotoauttrofos (plantas, cianobacterias,
algas y bacterias sulfurosas verdes y prpuras) fijan o integran el CO 2 en
sustancias orgnicas en presencia de luz solar. De la misma manera los
microorganismos quimioauttrofos fijan el dixido de carbono en sustancias
orgnicas como producto de sus actividades metablicas para la obtencin de
energa pero no requieren la luz solar.
El material orgnico, polisacridos o carbohidratos formados en la fotosntesis
se usan a su vez como sustrato durante el proceso de respiracin para
obtener energa y producir nuevamente CO2, esta es una actividad propia de
de fototrficos y quimiohetertrofos como animales, protozoos y algunos
microorganismos de tal manera que el CO2 se transfiere de diversas maneras
de un organismo a otro en la cadena alimentaria.
CO2 + H2O (CH2O) + O2
CH2O + O2 CO2 + 2H2O
(luz)
(luz u oscuridad)
El carbono tambin retorna a la atmsfera cuando los organismos mueren y

bacterias y hongos descomponedores oxidan los compuestos orgnicos
retornando el CO2 al ciclo. Durante esta descomposicin se observan dos
estados de oxidacin del carbono (CH4 y CO2) donde el metano lo producen
las bacterias metanognicas y el dixido de carbono quimioorganotrofos en los
105

procesos metablicos de fermentacin o respiracin aerobia y anaerobia. En

ambientes anaerobios el metano puede ser sintetizado por metangenos
usando como sustrato el CO2 y a su vez sirve como alimento para
microorganismos metanotrofos que lo oxidan nuevamente a CO 2; de tal
manera que todo el carbono orgnico se convierte nuevamente en dixido de
carbono que retorna a la atmsfera para que inicie el ciclo.
Figura 60. Ciclo de oxido reduccin del carbono. Las flecha amarillas indican oxidaciones y las
rojas reducciones. Tomado de Madigan et al. 2003.
El ciclo del carbono es un equilibrio entre la fotosntesis y la respiracin y est

estrechamente ligado al ciclo del oxgeno, porque este elemento indispensable
para el metabolismo aerobio es producido durante la fotosntesis de
microorganismos fotoauttrofos.
Con la extensin masiva de las actividades humanas y explotaciones mineras
todo el equilibrio ecolgico del ciclo del carbono puede verse gravemente
afectado con el uso de combustibles, emisiones de CO2 y deforestacin
indiscriminada de bosques que trae como consecuencia menos fotoauttrofos
que usen el dixido de carbono y produzcan oxgeno de tal manera que en su
conjunto todos llevan a la misma consecuencia negativa: el aumento de CO 2
en la atmsfera terrestre que provoca el efecto invernadero y el calentamiento
global.
106

NOTA:
Por favor leer el artculo del siguiente enlace:
http://www.scielo.org.bo/pdf/reb/v41n3/v41n3a06.pdf

El nitrgeno (N) es un elemento indispensable para la vida celular y las
actividades metablicas, hace parte de los componentes de protenas, cidos
nucleicos y otras sustancias orgnicas. A continuacin veremos las etapas que
sufre este elemento en la naturaleza durante su ciclo (figura 61).
Figura 61. Ciclo del nitrgeno (tomado de Tortora et al. 2007).
Fijacin del nitrgeno
Termodinmicamente el nitrgeno gaseoso o molecular (N2) es el ms estable

en la naturaleza pero a pesar que constituye un 79 % del aire que respiramos
no podemos asimilarlo directamente en esa forma para que haga parte de
nuestros componentes celulares sino que slo unos microorganismos
especficos tienen la capacidad de tomarlo y transformarlo.
107

La fijacin del nitrgeno es un proceso que requiere gran cantidad de energa

mediante el cual algunas especies de bacterias o cianobacterias fijadoras de
nitrgeno convierten el nitrgeno gaseoso en amoniaco (NH3), usando una
enzima inestable a la presencia de oxgeno conocida como nitrogenasa.
N2 + 8H+ + 8e + 16 ATP 2NH3 + H2 + 16ADP + 16 Pi
Los microorganismos fijadores de nitrgeno (N2) pueden ser de vida libre o
simbitica.
Las bacterias de vida libre fijadoras de nitrgeno estn en altas
concentraciones en la rizsfera, entre ellas la bacteria aerobia Azotobacter,
este gnero que tiene gran demanda de oxgeno disminuye la difusin de este
elemento al interior de la clula puesto que la nitrogenasa es anaerobia.
Beijerinckia es otra bacteria aerobia de vida libre fijadora de nitrgeno. Las
cianobacterias aerobias fotosintticas tambin fijan el nitrgeno con la ayuda
de estructuras especializadas llamadas heteroquistes donde se encuentra
contenida la enzima nitrogenasa en condiciones anaerobias.
El nitrgeno molecular tambin puede ser fijado a amoniaco por bacterias
anaerobias de vida libre como Clostridium pasteurianum y bacterias fototrficas
rojas y verdes.
Las bacterias simbiticas fijadoras de nitrgeno tienen un papel vital en los
cultivos donde especies como Rhizobium, Bradyrhizobium y Frankia
establecen relaciones con leguminosas otorgndole el nitrgeno para que las
plantas puedan asimilarlo e incorporarlo a protenas, cidos nucleicos y dems
necesidades celulares.
Amonificacin
Es la actividad hidroltica de microorganismos descomponedores (bacterias y

hongos) que permite degradar protenas (a travs de proteasas) en
aminocidos para eliminar el grupo amino presente en los monmeros de las
protenas y convertirlos en amoniaco (NH3).
Protenas de clulas muertas aminocidos
Aminocidos NH3
(descomposicin microbiana)
(Amonificacin microbiana)
El amoniaco es un gas que en suelos secos se evapora y desaparece pero en

ambientes hmedos es soluble y forma iones de amonio (NH4+) el cual puede
ser usado por otras bacterias y plantas para sintetizar aminocidos.
108

NH3 + H2O NH4+ OH NH4+ + OH
Nitrificacin
Es la oxidacin del amonio a nitrato (NO3-) por bacterias nitrificantes del suelo.
Se realiza en dos etapas, en la primera fase especies de Nitrosomonas oxidan
el nitrato y lo convierten a nitrito (NO2-).
NH4+ NO2Luego en la segunda etapa bacterias de Nitrobacter oxidan el nitrito a nitrato,
una fuente de nitrgeno mvil y asimilable para la sntesis de protenas. El
amonio es un in que requiere menos energa para hacer parte de la
constitucin de las protenas pero al tener una carga positiva es atrapado por
las partculas de arcilla con carga negativa, mientras que los iones de nitrato
estn libres en el suelo y dispuestos para ser asimilados.
NO2- NO3
Desnitrificacin
Como vimos en lecciones anteriores ciertos microorganismos (Pseudomonas,

Bacillus) usan el nitrato (NO3-) como aceptor final de electrones en su
metabolismo o respiracin anaerobia, stos tienen la capacidad de revertir el
proceso de nitrificacin, es decir reducen el nitrato a nitrgeno molecular o
gaseoso que se libera a la atmosfera.
NO3- NO2- N2O N2
A pesar que para la agricultura no representa un beneficio cuando los campos
fertilizados con nitratos son inundados por las lluvias, porque el agua crea
ambientes anxicos que favorece la desnitrificacin; sino existiera este proceso
biolgico todo el nitrgeno gaseoso de la tierra se habra disuelto en los
ocanos dejando sin fuente de N a la vida continental.
Las desnitrificacin es un proceso biolgico til para el tratamiento de aguas
residuales porque la reduccin del nitrato desfavorece en crecimiento de algas
cuando el agua se descarga en otras fuentes de agua y la eutrofizacin.
NOTA:
http://www.elementos.buap.mx/num38/pdf/43.pdf
109


Es un proceso donde el azufre (S) sufre una serie de conversiones en su
estado de oxidacin, permitindole a ciertos microorganismos obtener energa
de sustancias inorgnicas, es similar al del nitrgeno porque tambin pasa por
varios estados de oxidacin. La forma ms reducida del azufre es sulfuro de
hidrgeno (H2S), una fuente de energa para bacterias anaerobias auttrofas
que lo convierten en azufre elemental (S0) o en sulfatos (SO4-2), ver la figura
62. El azufre presente mayoritariamente en los mares est en forma de sulfato
inorgnico, en sedimentos y rocas (como el yeso, CaSO 4 .2H2O) o en
minerales de sulfuro (como la pirita FeS2).
Figura 62. Ciclo del azufre. Tomado del enlace: http://microgaia.blogspot.com/2009/11/microcazadores-segunda-parte.html
El ciclo del azufre se presenta en condiciones aerobias y anaerobias. Primero

el sulfuro de hidrgeno (H2S) un gas muy voltil es reducido a sulfato por
bacterias reductoras de sulfato (Beggiatoa, Thiobacillus). Las bacterias
reductoras usan compuestos con azufre o el azufre elemental como aceptor
final de electrones en la cadena transportadora durante el proceso de
respiracin anaerobia para la obtencin de ATP. Muchas de estas bacterias
viven en ambientes anaerbicos como los lodos, donde el H2S produce el color
oscuro y el olor a huevo podrido.
H2S S0 SO4-2
110

La conversin del H2S a SO4-2 est mediada por dos tipos de bacterias. Las
quimioauttrofas, generan ATP oxidando los compuestos que contienen azufre
para obtener como producto final el sulfato pero tambin un intermediario
conocido como azufre elemental. Las bacterias fottrofas realizan las mismas
reacciones anaerbicamente e incluso pueden oxidar tambin el azufre
elemental.
Beggiatoa usa el sulfuro de hidrgeno para reducir el dixido de carbono,
mientras que Thiobacillus lo usa como fuente de energa para producir sulfato y
cido sulfrico.
En condiciones anaerobias y preferiblemente en materia orgnica se produce
la misma reaccin pero por bacterias fototrficas rojas y verdes. La forma en la
que est presente el sulfuro en la naturaleza depende del pH, es decir, en pH =
7.0 predomina H2S, mientras a pH > 7.0 predominan las formas HS- y S2-.
Estas reacciones estn implicadas cuando se vierten al mar lodos, basuras y
aguas residuales los cuales aumentan la cantidad de materia orgnica de los
sedimentos favoreciendo la contaminacin (Madigan et al. 2001).
El sulfato (SO4-2) puede ser utilizado por plantas y bacterias para incorporarlo a
los aminocidos o protenas que tienen los puentes disulfuro (asimilacin),
luego tras la muerte celular microorganismos descomponedores degradan las
protenas y permiten que el azufre se libere como H2S (desasimilacin o
desulfurilacin) para volver de nuevo al ciclo (figura 63). Estos procesos
pueden darse en condiciones aerobias o anaerobias.
Figura 63. Ciclo de oxido reduccin del azufre. Flechas amarillas reacciones de oxidacin y
rojas de reduccin. DMSO: dimetilsulfxido y DMS: dimetilsulfuro. (Tomado de Madigan et al.
2003).
111

Luego el sulfato tambin puede reducirse por la accin de bacterias

(Desulfovibrio o Desulfobacter) en condiciones anoxignicas a sulfuro de
hidrgeno. El azufre elemental se reduce u oxida por Desulfuromonas o
archaeas en condiciones anaerobias o se usa como fuente de energa
inorgnica por bacterias como Beggiatoa.
SO4-2 H2S
S0 H2S
Todas las reacciones del ciclo del azufre son aprovechadas para el tratamiento
de aguas residuales, lodos o incluso cultivos donde a suelos muy alcalinos se
les aade azufre de tal manera que las bacterias puedan bajar el pH mediante
la oxidacin del azufre que genera cido sulfrico (H2SO4).
S + 11/2 O + H2O H2SO4
El azufre elemental tambin es un producto con valor comercial usado como
materia prima en la industria qumica para la produccin de H2SO4.
NOTA:
http://b-dig.iie.org.mx/BibDig/P04-0721/D/D-03.pdf
CAPTULO 9. Aplicaciones de la microbiologa ambiental

Como resultado de las actividades antrpicas en distintas reas (industria,
agricultura, domstica, etc) se generan una serie de excedentes no tiles
conocidos como residuos, los cuales segn el estado de agregacin de la
materia o estado predominante pueden dividirse en aguas residuales,
emisiones a la atmsfera y residuos slidos. Los residuos slidos pueden tener
varios estados de agregacin, es decir, pueden contener gases o lquidos
contenidos en ellos (Rodrguez y Crdova, 2006). Segn Campos, (2000) los
residuos slidos pueden clasificarse en municipales o urbanos, industriales y
peligrosos.
Residuos slidos municipales

112

Su composicin vara de acuerdo a la zona, poca del ao, poblacin, etc.

Entre este tipo de residuos podemos encontrar: residuos de construccin y
demoliciones, residuos especiales (de calles, jardines, etc), desperdicios
(papel, cartn, plstico, vidrio, etc) y residuos orgnicos (provenientes de
comida como frutas, verduras, cereales, etc), cenizas y residuos (material
sobrante de quema de combustibles).
Residuos Industriales
Son aquellos que generan las actividades industriales y pueden incluir las
clasificaciones descritas arriba.
Residuos peligrosos
Son aquellos que por su naturaleza producen dao a seres humanos, animales
o plantas. Este tipo de residuos pueden ser corrosivos, reactivos, txicos o
incandescentes.
Para minimizar el impacto de este los residuos en el ecosistema y en la salud
pblica los desechos slidos son tratados con un conjunto de operaciones
fsicas, qumicas, biolgicas o trmicas que tienen como finalidad disminuir o
eliminar su potencial peligroso, reutilizar desechos o adaptar sus propiedades
fsicas, qumicas o biolgicas a los requerimientos de su disposicin final
(Campos, 2000).
La disposicin de residuos slidos tiene varias alternativas, entre ellas el
relleno sanitario, el compostaje y la incineracin. En este mdulo nos
enfocaremos en el proceso de compostaje donde los microorganismos tienen
un papel protagnico e indispensable.
Compostaje o compost
Los residuos slidos usualmente se disponen en grandes terrenos donde se

forman montaas de basura generando condiciones anaerobias que afectan
la biodegradacin de compuestos orgnicos, sin embargo en estas condiciones
se pueden desarrollar microorganismos metangenos que producen metano
(este compuesto puede utilizarse como fuente de energa para industrias y
hogares); los metangenos tambin descomponen el lodo de aguas residuales.
Pero, aunque produce ciertos beneficios el objetivo primordial es disminuir la
cantidad de residuos slidos, en este sentido y para lograr un mejor manejo la
113

cantidad de compuestos orgnicos pueden disminuir si se separan de la

sustancias biodegradables para formar composta o composta (figura 64).
Mark Coyne (1999), propone varias definiciones para compostaje: Es una
aceleracin de los procesos de mineralizacin de la materia orgnica. Desde
un punto de vista prctico es un proceso que convierte los residuos orgnicos
en formas adecuadas para aplicaciones al suelo. O una ltima definicin
relacionada directamente con la microbiologa donde dice que es un proceso
microbiano en el cual el residuo orgnico nocivo se convierte en un compuesto
estable similar al humus.
El compostaje tiene varias ventajas, entre ellas:
Reduce el volumen de los residuos.

Disminuye la demanda biolgica de oxgeno (DBO).
Mejora las caractersticas fsicas y hace ms fcil el manejo.
Reduce los patgenos de humanos, animales y plantas adems de eliminar
semillas de malas hiervas
Reduce el uso de la tierra para rellenos sanitarios y para la aplicacin
superficial de residuos.
Figura 64. Pila de compost. Formada a partir de residuos municipales (tomado de Tortora et al.
2007).
Para realizar el compostaje primero hay que separar la materia orgnica de la

inorgnica y se forman pilas de compostaje para facilitar el proceso biolgico
de los organismos presentes en ella.
El proceso de compostaje se inicia con quimiohetertrofos mesfilos (bacterias
y hongos) que oxidan aerbicamente los residuos y como resultado de este
114

metabolismo aumentan la temperatura en pila, permitiendo entonces el

desarrollo de microorganismos termofilicos (actinomicetos); eventualmente la
temperatura del compost disminuye de tal manera que se reestablecen los
mesfilos (hongos y actinomicetos) para que consuman los sustratos
disponibles. La temperatura de una pila puede subir de 76-80 C, este
incremento permite la muerte de muchos microorganismos patgenos pero
usualmente se trabaja con temperaturas de 60 y 65 C, por sto para prevenir
el exceso de calor se emplea la aireacin o el riego.
Dentro de las bacterias importantes del compostaje estn, Bacillus
stearothermophilus,
Clostridium
thermocellum,
Thermomonospora
y
Thermoactinomyces. Entre los hongos, Geotrichum, Aspergillus y Mucur.
Coyne, (1999) menciona que para un proceso de compostaje ptimo es
importante que se tengan las siguientes consideraciones:
Tipo y composicin de materia orgnica
En este aspecto se considera el tamao de la partcula, hidrofobicidad y tipos
de enlaces qumicos. La descomposicin en el compostaje es proporcional al
rea de superficie e inversamente proporcional al tamao de la partcula, de tal
manera que en partculas ms pequeas se incrementa la tasa de
descomposicin; el tamao ptimo est entre 0.65-2.54 cm, porque partculas
ms pequeas intervienen con la aireacin y ms grandes no son reactivas.
Los compuestos insolubles e hidrofbicos son ms resistentes a la
descomposicin que los solubles e hidroflicos. Otros elementos como los
metales pesados o txicos tambin pueden afectar el compostaje.
Disponibilidad de microorganismos
El proceso de compostaje puede beneficiarse si el compost se inocula con una
mezcla de microorganismos (bacterias, hongos y actinomicetos mesfilos y
termfilos) y con esto se garantiza una mezcla o cantidad representativa.
Aireacin
La descomposicin de compuestos orgnicos se facilita en condiciones
aerobias.
La proporcin de carbono, nitrgeno y fsforo
La proporcin adecuada de C:N para iniciar el material de compostaje es de
30:1 40:1, aunque tambin se usan proporciones bajas 20:1. Proporciones
115

muy altas pueden inmovilizar el nitrgeno mientras que ms bajas causan una
prdida del nitrgeno por volatilizacin. La proporcin recomendada de C:P es
de 100:1 a 150:1.
Temperatura
El proceso de compostaje se da en dos rangos de temperatura, un rango
mesfilo desde 10 a 45C y un rango termfilo de 55 60C. La temperatura
es un aspecto crtico durante el compostaje ya que ella regula el crecimiento y
metabolismo de microorganismos benficos y no benficos. El aumento de
temperatura es muy til para matar a microorganismos patgenos, con este fin
usualmente se pueden trabajar a 70 C por 2 horas. La temperatura ptima
para mantener el equilibrio de la microbiota termoflica es de 60 a 65 C. La
aireacin y el riego ayudan a mantener la temperatura ptima.
pH
El pH ideal es de 6.5 -7.2 para el desarrollo y metabolismo de la mayora de los
microorganismos benficos para el compostaje.
NOTA:
Por favor leer los siguientes artculos:
http://ojs.uo.edu.cu/index.php/cq/article/viewFile/2648/2178
http://www.scielo.cl/pdf/infotec/v18n6/art10.pdf
El agua es vital para la sostenibilidad en todos los seres vivos y puede

constituirse en una fuente de enfermedades para plantas, animales y el
hombre; por sto se constituye en un objetivo importante de la salud pblica.
En la actualidad para lograr la potabilizacin del agua se han desarrollado
varios mtodos o tratamientos microbiolgicos, qumicos y fsicos que eviten al
mximo muchas enfermedades.
Para determinar la pureza del agua no es prctica la bsqueda de
microorganismos patgenos porque si estos estn presentes en pequeas
cantidades es posible que no sean detectados en las muestras analizadas. Por
este motivo los estudios de microbiologa de aguas estn concentrados en la
116

deteccin de microorganismos indicadores, especialmente de aquellos

presentes en grandes cantidades en las heces humanas, de tal manera que
puedan sobrevivir del mismo modo que los patgenos y se relacione su
deteccin en la muestra con la presencia de patgenos humanos que ponen en
riesgo la salud pblica. Los microorganismos indicadores asociados al tracto
gastrointestinal son los coliformes.
Los coliformes son bacterias gramnegativas, bacilares, no esporuladas,
muchas de ellas entricas, aerobias o anaerobias facultativas capaces de
fermentar la lactosa con la produccin de gas (CO2) a 35 C. Para evitar la
confusin con coliformes no entricas, en las pruebas de potabilizacin del
agua se buscan las coliformes fecales. Entre estos microorganismos se
destaca uno de los ms estudiados, la bacteria Escherichia coli (bacteria
intestinal frecuente) y Klebsiella pneumoniae (patgenos intestinal), entre otras.
En general cuando en una muestra se detectan coliformes esto indica que hay
contaminacin fecal y por lo tanto no es acta para el consumo humano, de tal
manera que el agua requiere un tratamiento para su consumo.
Mtodos para la deteccin de coliformes
Los mtodos ms usados para detectar la presencia de coliformes fecales en
el agua se basa en la capacidad de este tipo de bacterias para fermentar la
lactosa.
El mtodo de filtracin por membrana (descrito en lecciones anteriores) es un
mtodo directo y seguro donde el agua (unos 100 ml de muestra) se hace
pasar a travs de un filtro o membrana estril que tienen el tamao de poro
indicado para retener bacterias. Luego la membrana se coloca sobre la
superficie de un medio de cultivo (eosina-azul de metileno, por las siglas en
ingls EMB) que es selectivo para coliformes, terminado el periodo de
incubacin se cuentan las colonias y se calculan el nmero de coliformes
presentes en el agua. En los sistemas de abastecimiento de agua esta prueba
debe ser negativa pero cuando se detectan indica que hubo una falla en el
sistema de filtracin, cloracin, o en las tuberas de distribucin (Madigan
2003).
En el mtodo del nmero ms probable (NMP, siglas en ingls) se emplean
tubos de ensayo con medios de cultivo lquido al que se le aade la muestra de
agua. Si despus del tiempo de incubacin del cultivo se observa turbidez
indica que hay contaminacin fecal en el agua.
Actualmente se han propuesto otros mtodos para detectar la presencia de
coliformes o E. coli utilizando medios de cultivo con o-nitrofenil--D117

galactopiranosida (ONPG, siglas en ingls) y 4-metilumbeliferil--D-glucoronida

(MUG), estos son mtodos muy tiles porque las bacterias coliformes producen
la enzima -galactosidasa capaz de hidrolizar el ONPG y producir un color
amarillo que indica la presencia de coliformes en la muestra. La prueba con el
MUG se basa en la actividad que tiene la enzima -glucuronidasa de E. coli
sobre este sustrato para formar un compuesto fluorescente de color azul
cuando se expone a la luz ultravioleta (Tortora et al. 2007).
Potabilizacin del agua
Por todas las implicaciones que tiene en la salud pblica la calidad del agua, se
han desarrollado varias estrategias en los procesos de potabilizacin. El tipo de
proceso depende de la fuente de abastecimiento de agua es decir, arroyos
montaosos, ros cristalinos, pozos, o ros que reciben residuos municipales o
industriales como es el caso del ro Magdalena en Barranquilla.
La potabilizacin del agua no busca obtener agua estril sino agua libre de
microorganismos patgenos, adems con parmetros fsicos y qumicos
establecidos por cada legislacin como aceptables o tolerables.
Acosta, (2008) propone varias etapas o pasos para el tratamiento de agua,
entre ellos estn:
Captacin
Aunque es preferible elegir una fuente de agua que requiera un mnimo
tratamiento, la captacin del agua se escoge de acuerdo a las fuentes
disponibles (metericas, superficiales o subterrneas).
Sedimentacin
Consiste en la precipitacin de partculas slidas o suspendidas por la accin
de gravedad despus de un tiempo determinado. La sedimentacin ayuda a
reducir la turbiedad, el contenido bacteriano, el color y la produccin de algas
(para este fin se usa el sulfato de cobre).
Coagulacin y floculacin
Consiste en la aglutinacin de partculas no eliminadas en la sedimentacin
con la ayuda de sustancias qumicas floculantes (sulfato de potasio, cloruro
frrico y sulfato de aluminio o alumbre) que forma agregados conocidos como
floc. Durante este proceso se realiza una agitacin lenta por medios mecnicos
y adems acidifica el agua.
118

Decantacin
Los floc se precipitan en el fondo o base del recipiente decantador eliminando
as un gran nmero de virus y bacterias.
Alcalinizacin
Busca disminuir la acidez (aumentar el pH) lograda en la floculacin, para sto
se usa la cal, el carbonato o hidrxido de sodio.
Filtracin
Consiste en el flujo del agua a travs de lechos constituidos por arena fina o
carbn de antracita triturado, de tal manera que muchos microorganismos
quedan atrapados en la arena por adsorcin superficial. Este proceso ayuda a
disminuir la turbiedad, los microorganismos, quistes u ovoquistes de protozoos.
Algunos sistemas tambin usan carbn activado para eliminar sustancias
qumicas txicas disueltas.
Desinfeccin
Consiste en la eliminacin o reduccin de bacterias patgenas. Para este fin
existen varios mtodos: entre los fsicos tenemos al calor, la radiacin con luz
ultra violeta, ultrafiltrado con membranas; entre los qumicos, la cloracin, el
ozono, el permanganato de potasio, el exceso de cal, y la oligodinamia.
NOTA:
Por favor leer desde la pgina 55 hasta la 66 en el siguiente enlace:
Ir al texto
El desarrollo industrial y las actividades humanas (como las agrcolas,

mineras, petroleras, manufactureras, qumicas, etc) han aumentado
considerablemente la contaminacin en el planeta poniendo en grave riesgo la
vida de muchas especies en los ecosistemas afectados por los contaminantes;
con los avances de la biotecnologa microbiana existen nuevos procesos que
ayuden a restaurar los ambientes y minimizar en muchos casos los daos
causados, uno de ellos es la biorremediacin. En esta leccin nos enfocaremos
119

en las definiciones de los diferentes procesos que hacen parte de este

mecanismo de recuperacin ambiental.
Biodegradacin
En estudios de microbiologa ambiental se propone varias definiciones que
profundizan en este proceso:
Madsen, (2008), asocia el trmino biodegradacin como un sinnimo del
metabolismo microbiano sobre compuestos orgnicos en el que se rompen los
enlaces intramoleculares o de carbono en molculas contaminantes orgnicas
para simplificarlas y generar compuestos inofensivos al ambiente, este proceso
microbiano est gobernado por principios termodinmicos y bioqumicos.
Como lo notar Madsen, (2008) no incluye molculas o sustancias inorgnicas
como sustrato para los microorganismos, para sto incluye el termino
biotransformacin, definindolo como la alteracin de la estructura molecular
de una sustancia qumica (puede ser de compuestos orgnicos o inorgnicos)
usualmente por la catlisis enzimtica microbiana. Las reacciones incluyen
aquellas que aumentan (condensacin) o disminuyen (mineralizacin) el
nmero o complejidad de enlaces intramoleculares. Estas reacciones pueden
darse de manera intracelular o extracelularmente.
Coyne, (1998), considera que la biodegradacin se refiere a el proceso de la
biorremediacin en el cual los xenobiticos (compuestos qumicos sintticos
que no existen de manera natural, ejemplo, plaguicidas, plsticos, etc) son
transformados a sustancias menos txicas, porque el hecho que un compuesto
sea biodegradable no significada que los productos de degradacin son menos
txicos o indeseables; por sto lo ms deseado es la mineralizacin donde los
compuestos txicos u orgnicos contaminantes se descomponen en iones
orgnicos y CO2.
Como se describi arriba y aunque algunos autores establezcan diferencia en
este tipo de terminologa ambos son aceptables por la comunidad cientfica y la
seleccin de uno u otro en realidad dependen del rea de estudio del
investigador.
Biorremediacin
La biorremediacin es el proceso de limpieza de ambientes contaminados
(Coyne, 1998) o tambin, es el proceso de biodegradacin y biotransformacin
controlado o espontneo que busca eliminar o atenuar los contaminantes
ambientales a travs de la actividad biolgica en los sitios afectados (Madsen,
120

2008); de acuerdo al tipo de organismo que realiza la biorremediacin esta

puede llamarse:
Fitorremediacin
Es la descontaminacin de suelos, agua o aire de sustancias orgnicas o

inorgnicas con la actividad biolgica/metablica de plantas (arbreas,
arbustivas, herbceas, etc) actuando solas o en simbiosis con algas
(ficorremediacin) u hongos (micorremediacin) para almacenar, absorber,
reducir movilidad, modificar, degradar o eliminar las sustancias txicas.
Entre los elementos contaminantes ms utilizados con este conjunto de
tecnologas estn los metales pesados, hidrocarburos, pesticidas y
herbicidas (figura 65).
Figura 65. Sistema de fitorremediacin. Para este sistema se usan 75 hectreas de

sauces en Suecia Central: en primer plano planta de tratamiento de aguas residuales, al
fondo las albercas para aguas en invierno y campos de sauces regados con efluentes de
fangos. Tomado del enlace: http://www.fao.org/docrep/008/a0026s/a0026s11.htm
Remediacin microbiana
Es la limpieza de sitios contaminados utilizando microorganismos que a

travs de actividades metablicas degradar, eliminan, acumulan o atenan
sustancias orgnicas o inorgnicas. Para este tipo de biorremediacin
Gmez, (2004) describe dos enfoques, la bioestimulacin o la
bioaumentacin.
En la bioestimulacin se emplean microorganismos nativos (es decir,
cepas propias del sitio contaminado) a las que se les estimula el
crecimiento y actividad metablica con la adicin de nutrientes (como el
121

nitrgeno, fsforo o materia orgnica) o mejora de condiciones ambientales

como la circulacin de oxgeno a travs del bioventeo. Este enfoque es muy
til porque por un proceso de seleccin natural las cepas nativas ya estn
adaptadas a las condiciones ambientales. Pero en algunas situaciones las
poblaciones de cepas nativas son escasas o no realizan actividades
metablicas que puedan actuar sobre el contaminante, como es el caso de
los suelos pobres en nutrientes, desiertos o terrenos muy contaminados; en
estas condiciones tambin puede biorremediarse el ambiente contaminado
con la bioaumentacin.
La bioaumentacin es la inoculacin o adicin de cepas alctonas
(forneas) que tengan la capacidad comprobada de degradar el
contaminante. Estas pueden ser cepas naturales o modificadas
genticamente para tal fin. Este tipo de microorganismos deben tener
caractersticas especficas que aseguren la descontaminacin y minimicen
el impacto negativo en el ecosistema contaminado, entre ellas tenemos: no
puede ser patgeno, estabilidad gentica, crecimiento rpido, alta
produccin de enzimas, capacidad de competencia frente a las cepas
nativas y no generar sustancias txicas como producto de su metabolismo.
En la actualidad es muy comn el uso de bacterias y hongos para degradar
compuestos como petrleo y sus derivados, sustancias qumicas (benceno,
acetona, teres, alcoholes, etc), xenobiticos (pesticidas, herbicidas, etc);
otros compuestos qumicos como el PBC, cromo, pueden ser parcialmente
degradados y algunos como el uranio, mercurio o cadmio no pueden ser
biodegradados pero si almacenados y concentrados por los
microorganismos de tal manera que se puedan aislar fcilmente del
ambiente contaminado.
Respecto al sitio, la biorremediacin se puede realizar in situ, es decir en el
lugar contaminado o ex situ fuera de sitio contaminado.
En la biorremediacin in situ, se usan bacterias nativas o forneas que
degraden o minimicen el potencial txico del contaminante en el lugar afectado.
Cuando se emplean cepas nativas se realiza un tipo de biorremediacin
intrinseca o pasiva, porque depende de la capacidad de los microorganismos
para responder y metabolizar los contaminantes. Por sto para fomentar y
mejorar la capacidad del microorganismo para transformar o biodegradar el
contaminante se usan estrategias de ingeniera que ayudan a hacer ms
eficiente el proceso de biorremediacin, como el control del flujo de agua,
aireacin, modificaciones qumicas y fsicas que influyan en las poblaciones
microbianas y en el contaminante. Es importante medir la eficiencia del
proceso con el anlisis qumico del agua, aire o suelo contaminado. El lugar
contaminado tambin puede ser modificado por excavaciones, manipulaciones
122

hidrolgicas, instalacin de biorreactores o materiales que apresuren la

biorremediacin (Madsen, 2008).
En la biorremediacin ex situ, el contaminante debe almacenarse y trasladarse
del lugar contaminado para ser tratado. Un ejemplo de sto es el sistema de
tratamiento de aguas municipales donde se dirigen a travs de una serie de
ambientes controlados que estimulan el crecimiento y actividad metablica
microbiana sobre los contaminantes en filtros, tanques, digestores o
biorreactores, de tal manera que las descargas a los ros, lagos u ocanos
tengan los controles fsicos, qumicos y microbiolgicos (Madsen, 2008).
NOTA:
http://www.scielo.org.mx/pdf/rica/v23n3/v23n3a4.pdf

La biodegradacin de compuestos contaminantes ha sido posible gracias a la
diversidad metablica de plantas y en especial la de microorganismos; pero
este proceso de descontaminacin debe hacerse de manera responsable y
minimizar en todo lo posible los riesgos. Existen varios aspectos que deben
considerarse antes de iniciar un proceso de biorremediacin, Madsen, (2008)
propone los siguientes:
Caractersticas del contaminante
Estructura molecular, toxicidad, solubilidad, volatilidad y susceptibilidad al

ataque microbiano.
El sitio contaminado
Geologa, hidrologa, tipo de suelo, clima y presiones econmicas y

polticas del propietario o causante de la contaminacin.
Microorganismos
Cultivos puros, mezcla de cultivos, cepas nativas o modificadas

genticamente, condiciones para su crecimiento y actividad metablica.
Suplementos.
Seleccin de estrategia
123

Bioestimulacin, bioaumentacin o ambas. Biorremediacin in situ o ex situ.
Procedimientos de ingeniera
Control del flujo de agua, aireacin, sistema de biorreactores, etc.
Modificaciones qumicas, fsicas que influyen en la poblacin microbiana

y en el contaminante.
Fernndez, (1996) y Gmez, (2004) plantean que tambin se deben considerar

varios aspectos que influyen en el proceso de biodegradacin:
Biodegradabilidad del contaminante
Depende de la estructura molecular, si tiene halogenacin, ramificaciones

en sus cadenas moleculares, solubilidad en agua lo cual determina la
disponibilidad del contaminante, concentracin y toxicidad. Estos aspectos
son importantes porque prcticamente determinan el tiempo del proceso de
limpieza en el lugar afectado.
Presencia de componente inhibidores
Se deben considerar los inhibidores que puedan afectar el crecimiento de

los microorganismos y las actividades enzimticas o metablicas de los
mismos.
Poblaciones microbianas
Aunque se realice un proceso de bioaumentacin tambin es importante

contar con poblaciones microbianas nativas que ayuden el proceso de
recuperacin usando los contaminantes como fuentes nutricionales y de
energa.
Concentracin de nutrientes
Nutrientes inorgnicos entre ellos el nitrgeno y fsforo influyen

notablemente en el crecimiento microbiano y esto a su vez favorece una
mayor velocidad de biodegradacin y detoxificacin del medio. Para cumplir
esta necesidad usualmente se emplean fertilizantes agrcolas.
Aceptores finales de electrones

124

Cantidades suficientes en el medio de aceptores de electrones (oxgeno,

nitratos, sulfatos, etc.) garantizan la oxidacin enzimtica del carbono
proveniente de los contaminantes.
Temperatura
Se debe considerar la temperatura ptima para el crecimiento de los

microorganismos presentes en el medio contaminado, de las cepas
forneas y la de la actividad enzimtica durante procesos metablicos; de
tal manera que la poblacin aumente con rapidez y las enzimas no se
desnaturalicen. Temperaturas lejanas a la temperatura ptima afecta el
proceso de biorremediacin.
pH
Al igual que la temperatura afecta el crecimiento de los microorganismos,

las enzimas y tambin la solubilidad del fsforo o metales pesados.
Usualmente se trabaja en rangos de pH de 6 8. Es importante mencionar
que el uso de cepas nativas es una ventaja porque ellas estn adaptadas a
las condiciones en las que est presente el contaminante, mientras que las
cepas modificadas genticamente deben alcanzar esta adaptacin despus
de ser inoculadas en el medio.
Concentracin de oxgeno
La biorremediacin se puede dar en condiciones aerobias o anaerobias

dependiendo del tipo de microorganismo biorremediador. Pero es
importante mencionar que la tasa de biodegradacin en condiciones
aerobias es mucho ms eficiente, 50 a 100 veces mayor que la degradacin
anaerobia. Recuerde que en lecciones anteriores se estudi que el
metabolismo aerbico es ms eficiente y produce ms energa.
Humedad
En el caso de los suelos es determinante en la movilidad de los nutrientes.

Poca humedad afecta la biodegradacin y demasiada humedad reduce la
concentracin de oxgeno y por lo tanto el crecimiento microbiano y las
actividades enzimticas sobre del contaminante. Es importante contar con
un sistema de drenaje y aireacin.
Textura y estructura del suelo
Esta relacionada con el contenido de materia orgnica y las caractersticas

fsicas del suelo. Suelos de estructura franca mejoran la degradacin
125

mientras que los arcillosos la dificultan. Para solucionar problemas de

humedad, drenaje y propiedades fsicas del suelo se pueden usar
materiales como la arena, cscara de arroz o nuez, entre otros.
Respecto a los mtodos qumicos donde se aprovechan las caractersticas

fsicas y qumicas de los contaminantes para destruirlos o aislarlos del entorno
(procesos costosos y no siempre efectivos), la biorremediacin es una
excelente alternativa para recuperar ambientes contaminados. Coyne, (1998)
plantea ventajas y desventajas de la biorremediacin. Entre las ventajas estn:
los productos finales generalmente no son txicos si ocurre una mineralizacin
completa, la actividad biolgica en los sitios contaminados se hace sin muchas
perturbaciones, es un proceso expansivo comparado con los mtodos fsicos
adems es menos costosa y requiere menos equipos.
La biorremediacin tambin tiene desventajas, la mayora de ellas manejables
y controladas. En altas concentraciones de contaminantes es necesario
estimular el crecimiento de microorganismos biorremediadores, hay
limitaciones a los materiales que pueden ser tratados porque algunos son
inherentemente recalcitrantes o txicos, el destino de los compuestos
xenobiticos depende de las propiedades intrnsecas del contaminante, de las
poblaciones microbianas y condiciones ambientales, la biorremediacin puede
afectarse es condiciones extremas, est limitada por el tiempo disponible para
el tratamiento y por ltimo algunas veces se necesita ms tiempo para
biorremediar un sitio contaminado que para tratarlo con mtodo fsicos o
qumicos.
NOTA:
http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/ingeinv/article/viewFile/15211/16006
Biodegradacin del petrleo

El petrleo es un lquido negro viscoso de composicin qumica diversa,
mayoritariamente de la familia de los hidrocarburos. Este compuesto de gran
utilidad para las actividades humanas, en los ltimos aos se ha convertido en
uno de los contaminantes ambientales que impactan gravemente a los
126

ecosistemas; actualmente son frecuentes los vertimientos accidentales en

tierra y agua que se extienden rpidamente de manera casi incontrolable como
es el caso de los ocanos. Ante esta grave situacin los microorganismos son
una herramienta valiosa e indispensable para la descontaminacin de sitios
afectados por este combustible (figura 66).
La biodegradacin del petrleo, desechos petrolizados y sus derivados ha sido
posible gracias a la actividad metablica enzimtica de una diversidad de
bacterias, hongos, levaduras, cianobacterias y algas que tienen la capacidad
de oxidarlo a CO2. Esta accin de los microorganismos adems de
descomponerlo dispersa o desaparece la mancha sobre el sitio contaminado.
Es importante mencionar que para este tipo de contaminaciones es comn
usar varias estrategias a la vez como la bioestimulacin, bioaumentacin o
fitorremediacin.
Figura 66. Biorremediacin de petrleo en suelos. Imagen de la izquierda en enero del 2008,
imagen central en junio del 2008 e imagen de la derecha en septiembre de 2008. Tomado del
siguiente enlace: http://eninteriores.com/2010/05/27/biorremediacion-opcion-contra-derramesde-petroleo/
El petrleo es una fuente orgnica muy rica que puede ser usada como
sustrato por muchos microorganismos en condiciones aerobias. Su
biodegradacin tiene lugar en la interfase petrleo agua donde ste compuesto
est mezclado con el sustrato hmedo que facilita la accin microbiana. Para
hacer ms eficiente el proceso de biorremediacin es importante fertilizar la
zona afectada con compuestos inorgnicos como el nitrgeno, fsforo y
potasio. La eficiencia de la biodegradacin tambin depende de la
disponibilidad de oxgeno y de la temperatura.
Entre los factores que afectan la biodegradacin del petrleo tenemos:
127

Temperatura
El rango de temperatura puede variar de -2 a 35 C, donde la velocidad de

degradacin y volatilidad disminuye a medida que baja la temperatura y se
incrementa la viscosidad.
Oxgeno
La biodegradacin del petrleo es mayor en condiciones aerobias que

anaerbias. En el caso de los vertimientos marinos usualmente no es un
limitante pero cuando el petrleo alcanza los sedimentos marinos la
biodegradacin disminuye. Cuando la permeabilidad se reduce y se
obstruyen los espacios intersticiales de los sedimentos se deben recurrir a
tcnicas que ayuden la aireacin como la labranza, rastrillado o arado en
forma peridica.
Nutrientes
En muchos ambientes contaminados los nutrientes esenciales como el

nitrgeno, fsforo, hierro o potasio puede ser deficientes para el proceso
degradativo porque sus concentraciones no favorecen el crecimiento y el
metabolismo microbiano. En estos casos es usual agregarlos al ambiente,
como fertilizantes lquidos y agrcolas, o en forma de liberacin lenta,
briquetas, grnulos o con aspersores.
Usualmente se usa una proporcin de C:N:P de 120:10:1. Es importante
aclarar que la fuente de carbono es el petrleo.
En la naturaleza se pueden encontrar muchos microorganismos degradadores

de petrleo y su diversidad y efectividad dependen de la exposicin a este tipo
de hidrocarburos adems de la complejidad de los componentes del petrleo,
donde los ms complejos demorarn ms en degradarse respecto a los ms
simples. Es importante mencionar que hay fracciones de hidrocarburos
voltiles que se evaporan rpidamente y no necesitan la participacin de
microorganismos, slo los componentes de mayor complejidad son tratados
con la remediacin microbiana.
La biorremediacin del petrleo como cualquier otro proceso de limpieza tiene
sus ventajas y desventajas, entre las ventajas tenemos:
Los cambios fsicos que origina sobre el sitio afectado son menores.
Si se usa correctamente no produce efectos adversos significativos.
128

Es til para retirar compuestos txicos del petrleo

Se usan tecnologa ms simples y menos costosas
Entre las desventajas de la biorremediacin del petrleo estn:
Para muchos tipos de vertimientos su efectividad todava es

indeterminada.
Es un proceso largo.
Su implementacin es nica y especfica para cada lugar contaminado.
Se requiere informacin sustancial del lugar contaminado y de las
caractersticas del vertido.
NOTA:
http://www.unicolmayor.edu.co/invest_nova/NOVA/ARTREVIS1_5.pdf
Biodegradacin de xenobiticos
Los xenobiticos son compuestos desarrollados por sntesis qumica por el
hombre y no existen en la naturaleza. Como resultado de las actividades
industriales, agrcolas y mineras se han desarrollado una gran variedad de
estos componentes de difcil degradacin o tratamiento, los cuales son
persistentes en los ambientes contaminados (recalcitrantes). Entre ellos estn:
insecticidas clorados (DDT, lindano, clordano), insecticidas organofosforados
(palatin, malatin), herbicidas, PCB, etc.
Entre los procesos ms usados para degradar estos compuestos esta la
fotodegradacin por radiaciones solares, los procesos de oxidacin y reduccin
qumica y la biorremediacin o biodegradacin microbiana; nos enfocaremos
en esta ltima.
Aunque no existen en la naturaleza, la estructura de los plaguicidas o
xenobiticos puede estar sujeta a la actividad microbiana donde algunas
sustancias sirven como fuentes de carbono y energa o como donadores de
electrones. La degradacin de estos compuestos puede ser total o incompleta
dependiendo de la toxicidad y complejidad del contaminante. Muchos de ellos
no llegan hasta los procesos de mineralizacin e incluso se pueden generar
sustancias recalcitrantes an ms txicas que las originales.
129

De la misma manera que con otros contaminantes la degradacin depende de

factores como temperatura, pH, aireacin, contenido de materia orgnica,
biodisponibilidad de oxgeno, solubilidad (muchos son insolubles en agua),
entre otros.
Muchas bacterias y hongos en la naturaleza tienen la capacidad de degradar
xenobiticos, pero con los avances biotecnolgicos la manipulacin gentica
de microorganismos se ha convertido en una herramienta clave y muchas
veces ms eficiente para biorremediar ambientes contaminados con
xenobiticos, petrleo, metales pesados y casi todos los contaminantes.
Para el tratamiento de sitios contaminados con metales pesados (plomo,
mercurio, selenio, etc) tambin es muy til la fitorremediacin.
NOTA:
Para mayor informacin sobre biorremediacin de metales pesados
por accin microbiana ver este enlace:
http://binational.pharmacy.arizona.edu/documents/Biorem-HM-esJAF.pdf
130

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ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

UNIDAD 1. PRINCIPIOS DE LA MICROBIOLOGA Y METABOLISMO

UNIDAD 2. DIVERSIDAD MICROBIANA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Leccin 21. Archeas

UNIDAD 3. ECOLOGA Y MICROBIOLOGA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Cuadro 1. Comparacin de virus y bacterias

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Figura 1. Estructuras celulares de una procariota

Figura 2. Estructura flagelar en bacterias

Figura 3. Pared celular bacteriana

Figura 4. Estructura celular eucariota

Figura 5. Estructura del retculo endoplasmtico

Figura 6. Aparato de golgi

Figura 7. Tipos de virus

Figura 8. Morfologa de clulas bacterianas

Figura 9. Microscopio ptico compuesto

Figura 10. Imgenes de Paramecium con microscopa ptica

Figura 11. Microscopios electrnicos

Figura 12. Microfotografa de Paramecium con microscopa electrnica

Figura 13. Oxidacin global de la glucosa

Figura 14. Fermentacin para la produccin de etanol y lactato

Figura 15. Gluclisis

Figura 16. Ciclo de Krebs

Figura 17. Cadena transportadora de electrones

Figura 18. Fotofosforilacin cclica

Figura 19. Fotofosforilacin no cclica

Figura 20. Clasificacin nutricional de organismos vivos

Figura 21. Fisin binaria

Figura 22. Curva de crecimiento microbiano

Figura 23. Mtodo de recuento en placa de clulas viables

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

Figura 26. Efecto del oxgeno en el crecimiento microbiano

Figura 27. Dominio Archaea

Figura 28. Archaeas halfilas y metangenos

Figura 29. Microfotografa de Thermoplasma acidophilum

Figura 30. Solfulobus archaea

Figura 31. Ejemplo de hongo filamentoso

Figura 32. Ejemplo de hongo levaduriforme

Figura 34. Ciclo de vida de Basidiomycota y Ascomycota

Figura 35. Ciclo de vida de Dictyostelium discoideum

Figura 36. Hongos mucilaginosos

Figura 37. Conjugacin del protozoo Paramecium

Figura 38. Phylum del reino protista

Figura 39. Ejemplo de Ciliophora

Figura 40. Ejemplo de Phaeophyta

Figura 41. Ejemplos de Clorophyta y Rodophyta

Figura 42. Ejemplos de Bacillariophyta y Pyrrophyta

Figura 43. Ejemplos de respiracin anaerobia

Figura 44. Posible transporte de electrones en Pseudomonas stutzeri

Figura 45. Reduccin del sulfato

Figura 46. Transporte de electrones en bacterias reductoras de sulfato

Figura 47. Proceso de metanognesis a partir de dixido de carbono

Figura 48. Produccin de acetato a partir de la va acetil coenzima A

Figura 49. Medio de enriquecimiento

Figura 50. Columna de Winogradsky

Figura 51. Mtodo de siembra por estra o agotamiento

Figura 52. Pinzas lser