CONTROL DE CALIDAD

MICROBIOLOGICA DE PLANTAS
MEDICINALES Y PRODUCTOS
FITOFARMACEUTICOS
Armando Cceres
Facultad de CCQQ y Farmacia, Univ. de San Carlos y
Laboratorio de Productos Naturales Farmaya,
Comisin Asesora de Productos Naturales (CAPRONAT)
Guatemala. E-mail: acaceres46@hotmail.com

VIII Curso Iberoamericano sobre Tecnologa Fitofarmacutica

Prof. Nikolai Sharapin Universidad Nacional de Rosario
Rosario, 26 de julio 06 de agosto de 2010

IDENTIDAD
Etnobotnica

PRODUCCION
Agrotecnologa

BP

Articulacin

UTILIZACION
Fitoterapia

VALIDACION
Biomedicina

Regulacin

TRANSFORMACION
Fifofarmacia

FITOTERAPIA:

Cadena de servicios
multidisciplinarios

FACTORES DETERMINANTES DE
CALIDAD DE PLANTAS MEDICINALES
VARIABLE
g
g
g
g

g
g
g

Genotipo
Desarrollo
Morfognesis
Ambiente natural
Ambiente humano
Proceso
Contaminacin

EJEMPLOS DE AGENTES
Especies, cultivar
Crecimiento, floracin
rgano, tejido
Fertilidad del suelo, luz,
temperatura, competencia
poca de corte (fase lunar)
Manejo de desechos, hbitos
Secado, destilado, extraccin
Fsica, biolgica, qumica

A apartir de Mth A & Franz C (1999) J Herbs, Species & Med Plan 6:101-113.

PLANTAS SILVESTRE Y CULTIVADAS

Ventajas y Desventajas
Problema: 80% de plantas compradas en Europa son silvestres.

FACTOR
Disponibilidad
Manipulacin agro
Adulteracin
Identificacin
Aprovicionamiento
Mejoramiento gentico
Control de calidad
Manejo postcosecha

SILVESTRE

CULTIVADA

Disminuyendo
No
Frecuente
Poco confiable
Inestable
No
Pobre
Pobre

Aumentando
Si
Rara
Inquestionable
Constante
Si
Alto
Bueno

Ref.: Capasso et al. (2000) Fitoterapia 71:S58-S65

BUENAS PRACTICAS AGRICOLAS

para las Plantas Medicinales

Identificacin precisa de la materia vegetal.

Cultivo en condiciones ajustada a requerimientos.
Destruccin de plantas enfermas o muertas.
Cosecha en el mximo contenido del ingrediente.
Control de la contaminacin en todo momento.
Procesamiento, lavado y oreado en condicin asptica.
Proceso de secado a la brevedad, rpido y homogneo.
Envase y almacenamiento adecuados.
Personal con capacitacin en las operaciones.
Documentacin rigurosa de los procesos y actividades.

Ref.: Harnischfeger, G. Training Course on Phytomedicines, Panama, CYTED, 1997.

DESHIDRATADO VEGETAL

Parmetros a controlar

z
z
z
z
z
z
z
z

Temperatura del aire de secado.

Velocidad del aire de secado.
Altura de la capa del producto.
Tamao del producto.
Humedad dentro y fuera del sistema.
Temperatura del producto.
Intensidad de luz que entra al sistema.
Contaminacin microbiana.

PROCESO HISTORICO DEL SECADO

DE PLANTAS MEDICINALES
SECADO AL SOL O SOMBRA
Preocupaba nicamente la apariencia

70s
80s

SECADO EN ESTUFA Y CIRCULACION

Lmite de temperatura y
evaluacin de composicin qumica
SECADO EN SECADORES ESPECIALES

Evaluacin de temperatura, velocidad del aire, altura de camada y

consumo energtico (evaluacin qumica e ingeniera de proceso)

PROCESAMIENTO POSTCOSECHA Y
PRDIDA DE PRINCIPIOS ACTIVOS
Los procesamientos poscosecha tienen por objeto la
conservacin de las caractersticas fsicas, qumicas,
organolpticas y farmacolgicas de la droga vegetal.
Los factores que inciden en la prdida son:
Degradacin por procesos metablicos
Hidrlisis de principios activos
Descomposicin por la luz y por enzimas
Degradacin de substancias termolbiles por calor
Volatilizacin de los aceites esenciales
Contaminacin por hongos y bacterias

ECOLOGIA MICROBIANA
Efecto en la industria farmacutica

9
9
9
9
9
z

9
9
9
9
9
9

Atmsfera
Recuentos microbianos
Reduccin del recuento
Desinfeccin qumica
Irradiacin UV
Aire comprimido
Agua
Fuentes de agua
Calidad del agua usada
Desages y aguas negras
Ablandamiento de agua
Sistema de distribucin
Almacenaje de agua

9
9
z
z
z

9
z

9
9
9
z

Flora respiratoria/drmica
Transferencia de operarios
Diseo de reas
Materias primas
Empacado
Edificios
Paredes y cielos
Equipos
Material de colecta
Lavado y desinfeccin
Chequeo microbiano
Equipos de limpieza

Hugo & Russell - Pharmaceutical Microbiology, pp. 253-265.1981.

MATERIA MEDICA/
DROGA VEGETAL

Caractersticas de la materia prima

g
g
g
g

g
g

Completamente seca (<10% humedad)

Con su color natural
Con su olor caracterstico
Libre de material indeseable
n Otros rganos de la planta
n Otros materiales y contaminantes
Tamao lo ms entero posible (2-6 cm)
Libre de contaminacin fecal
4
n Coliformes totales 10 NMP/g
1
n Coliformes fecales 10 (sin Salmonella)
5
n Bacterias aerbicas 10
5
n Mohos y levaduras 10

CALIDAD MICROBIOLOGICA

Riesgos de contaminacin durante el proceso

ETAPA
Precultivo
Cultivo en el campo
Cosecha
Almacenaje intermedio
Transporte
Tratamientos
Producto final

NIVEL DE RIESGO
Ninguno a bajo
Alto
Alto
Bajo a mediano
Ninguno a bajo
Bajo a mediano
Generalmente ninguno

Kneifel W et al. Planta Med. 2002; 68:5-15.

CALIDAD MICROBIOLOGICA
Factores determinantes
INTRINSECOS
z

Naturaleza de la planta
y barreras naturales.

Estructura de la planta

Composicin de la
planta (compuestos
antimicrobianos)

Contaminacin
intracelular microbiana

EXTRINSECOS
z Clima
z Humedad
z Ubicacin/Posicin
z Mtodo de cosecha
z Poscosecha
z Estado fsico
z Tratamiento tecnolgico
z Empaque/almacenaje
z Contaminacin
bacteriana exgena

Kneifel W et al. Planta Med. 2002; 68:5-15.

VALIDACION DE METODOLOGIA
Cepas y medios selectivos recomendados
Para validar el mtodo, cultive las cepas de referencia en los
medios de cultivo sugeridos a 30-35C durante 18-24 horas
(Candida spp. 20-25C por 48 horas), diluya en solucin salina
amortiguada a una suspensin de 103 microorganismos/ml.

MICROORGANISMO

Bacillus subtilis
Candida albicans
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella abony
Staphylococcus aureus

CEPA

ATCC 6633
ATCC 2091
ATCC 8739
ATCC 9027
NCTC 6017
ATCC 6538

MEDIO

Soya-Caseina
Caldo Sabouraud
Caldo lactosado
Soya-Caseina
Caldo lactosado
Soya-Caseina

WHO, 2005. Quality Control Methods Rev., pp. 31.

CUANTIFICACION DE
MICROORGANISMOS
TECNICA

CARACTERISTICAS

Recuento en cmara
Citometra de flujo
Nmero ms probable
Siembra cuantitativa
Filtracin por membrana
Fluorometra
Fluorocult/cromocult

esporas, protozoos
equipo sofisticado
determinacin en tubo
en tubo o en placa
proceso en serie
equipo sofisticado
rapidez, alto costo

PRUEBA DE PUREZA
Recuento total de aerbicos viables en placa
g
g

Pretratar el material con amortiguador y diluir

adecuadamente.
Filtracin: Esterilizar el equipo con filtro <0.45 m, transferir
10 ml de la dilucin y filtrar; lavar cada membrana y colocar
una en placa de agar caseina-soya (ACS) y otra en agar
Sabouraud (AS). Incubar 5 das a 30-35C y a 20-25C.
Recuento en placa (bacterias): En placas de Petri agregar 1 ml
de material pretratado a 15 ml de ACS lquido o repartirlo en
su superficie. Incubar a 30-35C por 5 das.
Recuento en placa (hongos): En placas de Petri agregar 1 ml
de material pretratado a 15 ml de AS o repartirlo en su
superficie. Incubar a 20-25C por 5 das
Contar y calcular el nmero de colonias.

TUBOS MULTIPLES
Equipo y materiales

EQUIPOS Y MATERIALES

FUNGIBLES

9
9
9
9
9
9
9
9

9 Pipetas estriles de 1

Incubadora a 35oC
Incubadora a 44oC
Campana bacteriolgica
Mechero
Autoclave
Gradillas
Asas bacteriolgicas
Campanas de Durham

ml en 0.1 ml

9 Agua peptonada 0.1%

en frascos de 9 a 90 ml

9 Tubos con 9 ml de

caldos: Lactosado,
Caldo Bilis Verde
Brillante y EC

9 Agar MacConkey

TUBOS MULTIPLES DE FERMENTACIN

Fundamentos y Prueba Presuntiva

Fundamento: Se basa en la observacin de la

produccin de gas a partir de la fermentacin de
lactosa por bacterias viables y la estimacin de la
densidad de coliformes empleando tablas del NMP.
Procedimiento: Homogenizar y diluir el material (1:10)
Prueba presuntiva:
Inocular una serie de tubos con caldo lactosado,
con cantidades decimales (1, 0.1, 0.01 ml).
Incubar a 35oC durante 24 hrs.
Examinar la presencia o ausencia de gas.
Reincubar si no hay gas y examinar a las 48 hrs.
9 Presencia de gas = Prueba Presuntiva Positiva
9 Ausencia de gas = Prueba Presuntiva Negativa

TUBOS MULTIPLES DE FERMENTACIN

Pruebas Confirmativa y Complementaria
PRUEBA CONFIRMATIVA
Sembrar una asada de los tubos positivos en la prueba
presuntiva en tubos con caldo Bilis Verde Brillante e incubar a
35oC por 24 hrs para coliformes totales.
Sembrar otra asada
a tubos con caldo Bilis Verde Brillante o
EC e incubar a 44oC por 24 hrs para colifromes fecales.
Interpretacin: La presencia de gas se interpreta como
prueba confirmativa positiva.
PRUEBA COMPLEMENTARIA
Sembrar en estras una asada del 10% de tubos positivos en
agar MacConkey e identificar.
Interpretacin: La combinacin de tubos positivos se busca
en las tablas de Nmero Ms Probable (NMP) para obtener el
NMP por 100 ml de muestras analizada.

RECUENTO MICROBIANO
Clculo del nmero ms probable (NMP)
0.1 ml/ 0.01 ml/ 0.001 NMP/g
tubo
tubo ml/tubo o ml
3*
3
3
>1,100
3
3
2
1,100
3
3
1
500
3
3
0
200
3
2
3
290
3
2
2
210
3
2
1
150
3
2
0
90

0.1 ml/
tubo
3
3
3
3
3
3
3
3

0.01 ml/ 0.001

tubo
ml/tubo
1
3
1
2
1
1
1
0
0
3
0
2
0
1
0
0

NMP/g
o ml
160
120
70
40
95
60
40
23

* Nmero de tubos con crecimiento microbiano; los caldos pueden variar de

acuerdo con el microorganismo cuyo crecimiento queremos cuantificar.
WHO. Quality Control Methods Rev, pp. 31. Geneva, 2005.

FILTRACIN POR MEMBRANA

Materiales necesarios
EQUIPO Y MATERIALES

9 Incubadora a 35oC
9 Contador de colonias
9 Campana bacteriolgica
9 Filtro para membrana
9
9
9

(acero o vidrio)
Bomba de vaco
Mechero
Pinzas planas

FUNGIBLES Y
REACTIVOS

9 Membrana de <0.45 mm

de nitrato o acetato de
celulosa
9 Cajas de petri estriles
9 Agar Plate Count o Agar
Casena-Soya
9 Agar Endo C

FILTRACIN POR MEMBRANA

Principio y procedimiento

PRINCIPIO. Es la estimacin del nmero de bacterias viables en

muestras lquidas de baja turbidez. Se basa en la suposicin que
las clulas microbianas presentes forman colonias separadas en
membranas colocadas sobre medios de cultivo que pueden ser:
PCA: Para recuentos totales de bacterias.
Endo: Para recuento de coliformes totales y fecales.
Saboraud: Para recuento de hongos.
PROCEDIMIENTO
Esterilizar el aparato de filtracin flameando el interior.
Dejar que se enfre el aparato y colocar la membrana (0.45 ).
Agregar el material de la muestra y filtrar.
Colocar la membrana con la parte inferior hacia abajo sobre la
superficie del Agar PCA, Endo o Sabouraud en cajas de Petri.
Incubar a 35oC por 24 hrs.

FILTRACIN POR MEMBRANA

Clculo del recuento de enterobacterias
1.0g
o ml

0.1g
o ml

0.01g
o ml

Nmero ms probable por

gramo (NMP/g)

> 102

< 102 pero ms de 10

< 10 pero ms de 1

Menos de 1

WHO. Quality Control Methods Rev., pp. 33. Geneva, 2005.

PRUEBA DE PUREZA
Confirmacin del Control Sanitario
g

Cuantificacin. Inocular en caldo Mossel el material

homogenizado, diluir (1, 0.1 y 0.01 g/ml), sembrar en
Agar bilis violeta con glucosa/lactosa. Incubar a 35C
por 18-24 h. Estimar recuento de colonias bien
desarrolladas color rojizo (Gramnegativo).

E. coli. Transferir material homogenizado en caldo

lactosado a 100 ml de caldo MacConkey (MC), incubar
a 44C por 24 h, inocular subcultivos a placas de Agar
MC y reincubar. Estimar la colonias rojas, no
mucoides, rodeada de zona rojiza. Confirmar por
formacin de indol a 44C.

PRUEBA DE PUREZA
Demostracin de Salmonella
g

Incubar material pretratado a 36C por 5-24 h.

Prueba primaria. Transferir 10 ml a 100 ml de caldo

tetrationato-bilis verde brillante, incubar a 42C por
18-24 h. Subcultivar en dos de cualquier Agar:
desoxicolato citrato, xilosa, lisina o verde brillante.
Incubar a 36C por 24 h.

Prueba secundaria. Subcultivar colonias en TSI en

siembra profunda. La prueba es positiva si se
presenta cambio de color en profundidad con
formacin de gas y cido sulfhdrico. Confirmar por
bioqumica o serologa.

PRUEBA DE PUREZA
Pseudomonas y Staphylococcus
g
g
n
n
n
n

g
n
n
n

Pretratar material en amortiguador peptonado.

Pseudomonas aeruginosa
Inocular 100 ml de Medio Soya-Caseina.
Incubar a 35C por 24-48 h.
Subcultivar en Agar Cetrimida e incubar.
Si no hay crecimiento la prueba es negativa.
Staphylococcus aureus
Inocular Agar Blair-Parker
Incubar a 35C, por 24-48 h.
Si no hay crecimiento la prueba es negativa.

PRUEBA DE PUREZA
Shigella y Clostridia
Shigella
n Pretratar material en amortiguador peptonado.
n Inocular Medio MacConkey+1 g de telurito de potasio.
n Incubar a 35C, 18-24 h. Confirmar XLD o desoxicolato,
seguido de inoculacin en TSI o KIA
n Si no hay crecimiento la prueba es negativa.
g Clostridia
n Inocular 2x100 ml de Medio de Carne Cocida con 10 g
n Sellar uno con una capa de parafina estril
n Calentar el otro a 65C por 30 min y sellar.
n Incubar a 37C, examinar cada 24 h/4 das
n Sin crecimiento en ninguno, la prueba es negativa.
n Identificar los esporoformadores
g

FLUOROCULT/CROMOCULT
Equipo y materiales
9 Mechero Gas propano
9 Campana bacteriolgica LUV
9 Pipetas estriles de 1 ml en 0.1 ml Autoclave
9 Agua peptonada 0.1% en recipientes de 9 a 90 ml
CALDO FLUOROCULT
Tubos con 9 ml de
Caldo Fluorocult

AGAR CROMOCULT
Cajas de petri estriles
Agar para Coliformes

9Incubadora a 35C
9Reactivo de Kovacs

MONOTUBO PARA COLIFORMES

Caldo Fluorocult LMX

Combina dos tcnicas, una cromognica y otra fluorognica, en la

que se requiere un solo medio de cultivo.
Permite la deteccin rpida de E. coli y coliformes usando el
compuesto cromognico 5-bromo-4-cloro-3-indolil--Dgalactopiranosido (XGal) y el compuesto fluorognico 4metilumbeliferil--D-glucoronido (MUG).
Este medio contiene una enzima que detecta la -D-galactosidasa
(BGal) y la -D-glucoronidasa (BGud).
Cuando XGal es roto por BGal, el caldo se torna verde azulado por
la conversin de las agliconas liberadas a indigo. En presencia de
BGud el compuesto fluorescente 4 metil-umberilferona se rompe del
MUG. La luz azul fluorece en el caldo bajo luz UV (365 nm), la cual
indica la presencia de E. coli.
Para confirmar la presencia de E. coli, se demuestra la produccin
de indol usando el reactivo de Kovack. La formacin de un anillo
rojo en la superficie indica la prueba positiva.

MONOTUBO PARA COLIFORMES

Procedimiento e interpretacin

PROCEDIMIENTO
Homogenizar y diluir la muestra
Inocular 9 tubos con caldo Fluorocult: los primeros 3 con 1 ml de la
dilucin, los siguientes 3 con 0.1 ml y los ltimos 3 con 0.01 ml.
Incubar a 35-37oC por 24 hrs.
INTERPRETACIN
Negativo: No existe cambio de color en el tubo de ensayo
Positivo: Viraje de coloracin de amarillo a verde-azulado confirma
la presencia de CT, segn tabla de NMP.
CF y E. coli: Exponer los tubos positivos a LUV de longitud de onda
larga para fluorescencia. Una fluorescencia azul indica la presencia
de E. coli y por lo tanto de CF.
Confirmar la presencia de E. coli en los tubos con fluorescencia
positiva, agregar dos gotas de reactivo de Kovac, un cambio de
coloracin a rojo confirma la presencia de E. coli.

LMX FLUOROCULT

AGAR CROMOCULT

Fundamento y Procedimiento

Agar selectivo para la deteccin simultanea de CT y E. coli en

muestras de agua y comida.
La interaccin de peptonas seleccionadas, piruvato, sorbitol y
amortiguador de fosfato garantizan el rpido crecimiento de
colonias, incluso de coliformes subletalmente daadas.
Las bacterias G+ y algunas G son inhibidas por el contenido
de Tergitol-7 que no tiene efecto negativo sobre el crecimiento
de coliformes.
Una combinacin de dos sustratos cromognicos permite la
deteccin simultanea de CT y E. coli.
PROCEDIMIENTO
Inocular el medio por el mtodo de vertido en placa o por
esparcido de la muestra en la superficie de la placa. La tcnica
de filtracin por membrana tambin puede usarse.
Incubar a 35-37oC por 24 hrs.

AGAR CROMOCULT

Identificacin e interpretacin
IDENTIFICACIN DE COLIFORMES
9 La enzima caracterstica de coliformes, BGal se adhiere al
sustrato GAL-Salmn y causa una coloracin de salmn a roja
de las colonias de coliformes.
IDENTIFICACIN DE E. coli
9 El sustrato X-glucurnido es usado para la identificacin de D-glucoronidasa, que es una enzima caracterstica de E. coli.
9 E. coli se adhiere a GAL-Salmn y X-glucornido tomando las
colonias positivas una coloracin de azul oscuro a violeta.
9 Para la confirmacin de E. coli, demostrar la produccin de
indol con reactivo de Kovac.
INTERPRETACIN
9 E. coli: colonias azul oscuro a violetas
9 Coliformes totales: Colonias salmn a rojas y colonias de
color azul oscuro a violetas.

AGAR CHROMOCULT

LIMITES MICROBIANOS
Contaminacin mxima aceptada

Material vegetal crudo colectado en condiciones higinicas que

tendr un procesamiento posterior (fsico o qumico):
9 Propgulos de mohos, 105/g
9 Escherichia coli, 104/g
Materiales que han sido pretratados o para uso tpico:
9 Levaduras y mohos, 104/g
9 Bacterias aerbicas, 107/g
9 Escherichia coli, 10/g
9 Otras enterobacterias, 103/g
9 Salmonella, Shigella y Clostridia, ausente/1g
Otros materiales para uso interno (tisanas):
9 Bacterias aerbicas, 105(107)/g 9 Levaduras y mohos, 103(104)/g
9 Escherichia coli, 100(101)/g
9 Otras enterobacterias, 103/g
9 Salmonella y Shigella, ausente
WHO. Quality Control Methods Rev., p. 37. Geneva, 2005.

CALIDAD MICROBIOLOGICA
de las preparaciones farmacuticas

g
g

g
g

g
g

Categoria 1. Preparaciones que requieren esterilidad

9 Prueba de esterilidad
Categora 2. Preparaciones para uso tpico y transdrmico
9 Bacterias aerbicas, 102/g
9 Enterobacterias, 101/g
9 Pseudomonas, ausente
9 Staphylococcus, ausente
Categora 3A. Preparaciones para uso oral/rectal
9 Enterobacterias, 101/g
9 Bacterias aerbicas, 102/g
Categora 3B. Preparaciones para administracin oral sin tratamiento.
9 Bacterias aerbicas, 104/g
9 Enterobacterias, 102/g
9 Escherichia coli, Salmonella y Staphylococcus, ausentes
Categora 4A. Preparaciones a las que se les agregar agua hirviendo.
9 Bacterias aerbicas, 107/g
9 Escherichia coli, 102/g
Categora 4B. Preparaciones a las que no se les agregar agua hirviendo.
9 Bacterias aerbicas, 105/g
9 Enterobacterias, 103/g
9 Escherichia coli, Salmonella y Staphylococcus, ausentes
Gaedcke & Steinhoff. Herbal Medicinal Products, p. 105, 2003.

CALIDAD MICROBIOLOGICA
Evaluacin de 10 especies de uso medicinal

z
z
z
z

Estudio: Control de calidad y sanitario en muestras de plantas

medicinales distribuidas en la ciudad de Guatemala.
Muestra: 13 muestras de las plantas de mayor frecuencia de uso
compradas en 8 centros naturistas y 6 de infusiones comerciales.
Mtodos: Observacin macroscpica y fsico-organolptica y
recuento de CT y CF por la tcnica del NMP.
Resultados:
Organolptico: Solamente 3 segn norma (<10% materia extraa).
CT y CF: 5 (38.5%) de las hierbas de centros naturistas y 2 (40%) de
las infusiones comerciales con recuentos >102 NMP/g.
Discusin: Los resultados evidencian deficiencias en la calidad
fsico-organolptica y microbiolgica de las infusiones de hierbas
medicinales.
Girn LM et al. (1986) Simposio sobre Biologa de Salud Tropical. Guatemala, 7 p.

CALIDAD MICROBIOLOGICA

Anlisis de 10 especies medicinales en Guatemala

Especie/rgano
Prove. %MV
Albahaca/hoja
A
65
Hierbabuena/hoja
A
100
Hierba del gato/hoja
A
53
Hierba del gato/hoja
H
100
Ajenjo/hoja
B
29
Ans/fruto
B
0
Verbena/hoja
B
11
Verbena/hoja
C
1
T de limn/hoja
D
55
Llantn/hoja
E
41
Manzanilla/flor
F
5
Manzanilla/flor
H
100
Pericn/hoja
G
73

Q/g til Calidad NMP/g

0.038
7
93
0.022
12
460
0.069
9
<3
0.012
18
<3
0.032
11
<3
0
1 1,100
0.149
6
4
1.000
7
15
0.026
11 2,400
0.041
6
240
0.400
6 1,100
0.016
15
23
0.039
15
<3

CALIDAD MICROBIOLOGICA

Evaluacin de dos especies de uso medicinal

z
z
z
z

Estudio: Anlisis microbiolgico de dos infusiones de hierbas medicinales

en Costa Rica.
Muestra: 24 muestras de materia vegetal de menta y de ans estrella.
Mtodos: Recuento total aerbico, CT, CF y P. aeruginosa, por la tcnica
de recuento en placa.
Resultados:
Recuento Total: El 85.7% de las muestras de menta y 8.3% de las de ans
presentaron recuentos totales que sobrepasan la norma internacional.
CT y CF: El 100% de las muestras de menta incumplieron la norma para
CT y el 41.7% para CF; en el ans estrella, el 100% cumple con la norma
internacional.
Discusin: Los resultados evidencian serias deficiencias en la calidad
microbiolgica de las infusiones de hierbas medicinales, aunque es de
considerar que la menta es cultivada en Costa Rica y el ans importado.
Arias ML et al. (2003) Anlisis microbiolgico de algunas infusiones de
hierbas medicinales. Rev. Biomed. 10:1-10.

Contaminacin fngica en Portugal

z
z

Se colectaron 62 muestras de 7 plantas medicinales (manzanilla,

naranja, tilo, estigmas de maz, algas marinas, menta y salvia
Prcticamente todas las muestras (96.8%) estaban contaminadas
con Bacillus cereus; 19.2% con lmites mayores de 103 esporas/g.
Los niveles mas altos se encontraron en estigmas de maz (>107
esporas/g). Se detectaron esporas de Clostridium perfringens
(83.9%), pero solo19.2% con niveles >103/g.
La media de poblaciones fngicas fue de 105.5 ufc/g. Los estigmas
de maz fueron los mas contaminados (>106 ufc/g). Fusarium spp.,
Penicillium spp., Aspergillus flavus y A. niger fueron predominantes
en todas las muestras con excepcin de salvia.
Varias levaduras se encontraron en manzanilla, tilo, estigmas de
maz, menta y salvia, predominando especies de Cryptococcus
laurentii (28.1%) y Rhodotorula mucilaginosa (22.8% ). Los niveles
medio de C. laurentii en estigmas de maz fue >104ufc/g.
Martins HM et al. (2001) Internat J Food Microbiol 68:149-153.

CALIDAD MICROBIOLOGICA
Tamizaje en drogas vegetales

z Universo y muestra:
138 muestras escogidas al azar de 31 drogas vegetales,
provenientes de 9 proveedores de Austria y Alemania.
z Metodologa:
9 Parmetros estndar: Recuento aerbico mesoflico,
enterobacterias, coliformes, esporoformadores aerbicos,
levaduras y mohos, enterococos, lactobacilus y pseudomonadales
y aeromonades.
9 Selectivos: E.coli EH, Salmonella, Campylobacter jejuni,
Pseudomonas aeruginosa, Bacillus cereus, Clostridium
perfringens, Listeria monocytogenes, Estafilococo coagulasa +,
Candida albicans, mohos potencialmente aflatoxignicos.
Czech E et al. Planta Med. 2001; 67:263-269.

CALIDAD MICROBIOLOGICA
Resultados en drogas vegetales

z
z
z
z
z
z

Recuento aerbico mesoflico: El grado de contaminacin varia

considerablemente, de 100 UFC/g (semilla de Linum) hasta >108
UFC/g (hierba Passiflora).
Coliforme y enterobacterias: No se detectaron en varios casos, se
detect en algunos (mo > de 6.5 log UFC/g).
Levaduras y mohos: valores menores de <102-106 UFC/g. En 12
(8.7%) hubo sobrecrecimiento de mohos.
Bacterias esporoformadoras: Detectadas en todas las muestras con
rangos muy variables (102-107 log UFC/g).
Estafilocos y enterococos: Recuentos de fueron <102
Pseudomonas-Aeromonas: 30% de recuentos entre 104-106.
Patgenos: E. coli 4 (2.3%), C. jejuni 2 (1.4%), estafilococo
coagulasa + 1 (0.7%), ninguno otro patgeno fue demostrado.
Czech E et al. Planta Med. 2001; 67:263-269.

CONTROL MICROBIOLOGICO
Valor indicativo de grupos de MOs
GRUPO
Recuento total mesoflico
Enterobacterias
Coliformes
Enterococos
Pseudo- y aeromonadas
Estafilococos coagulasa +
Bacterias esporoformadoras
Lactobacilos
Levaduras y mohos
Microorganismos patgenos

SIGNIFICADO
Parmetro general de higiene
Indica contaminacin fecal
Indica contaminacin fecal
Indica contaminacin fecal
Presagia descomposicin
Patgeno de origen humano
Microflora del suelo
Indica plantas descompuestas
Micotoxigenicidad potencial
Alto riesgo

Kneifel W et al. Planta Med. 2002; 68:5-15.

CONTROL MATERIA VEGETAL

Fisicoqumico-Sanitario

g
n
n
n
n
n
n
n

FISICOQUMICAS
Color
Sabor
Olor
Aspecto
Forma
Humedad (%)
Aceite esencial (%)

CONTROL SANITARIO

9Recuento aerbico en placa

9Mohos y levaduras
9Coliformes (totales y
fecales), ausencia de
Salmonella, Shigella y
Clostridia

CONTROL PRODUCTO: LIQUIDO

Fisicoqumico-Sanitario

FISICOQUIMICO
n Color
n Sabor, olor
n Aspecto y forma
n Densidad
n pH
n Viscosidad
n Alcohol (%)
g

CONTROL SANITARIO
n Recuento en placa
n Mohos y levaduras
n Coliformes (totales y fecales),
ausencia de Salmonella,
Shigella y Clostridia
g

CONTROL QUIMICO
n Capilografa
n TLC/HPLC
g

CONTROL PRODUCTO: SEMISOLIDO

Fisicoqumico-Sanitario

g
n
n
n
n
n

FISICOQUIMICO
Color,
Sabor, olor
Densidad
pH y viscosidad
Humedad (%)

SENSIBILIDAD

FUNDICION

g
n
n
n

CONTROL SANITARIO
Recuento en placa
Mohos y levaduras
Coliformes (totales,
fecales), ausencia de E.
coli, Salmonella y Shigella
Ausencia de Pseudomonas
ni Staphylococcus
FITOQUIMICA

CONTROL DE ACTIVIDAD
Bioensayos farmacolgicos
g
n
n
n
g
g
n
n
n
n
g
n
n

Problemas de los ensayos qumicos

Desconocimiento de los constituyentes activos
Correlacin con la actividad biolgica
Equipamiento necesario (excesivo uso de HPLC)
Bioensayos como estndares
Problemas de los bioensayos como estndares
Falta de reproducibilidad en sistemas automatizados
Falta de modelos para ciertas enfermedades
Actividad consecuencia de una mezcla de efectos
Correlacin in vitro in vivo
Algunos ejemplos de bioensayos como estndares
Actividad antimicrobiana Actividad antiinflamatoria
Citototoxicidad Inmunomoduladores Antioxidantes

CONTROL DE CALIDAD
Textos de apoyo
1991 WHO. Guidelines for the assessment of herbal medicines.
1998 WHO. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. Geneva.
2000 Martnez et al. Fundamentos de Agrotecnologa de Cultivo de Plantas
Medicinales Iberoamericanas. Bogot, SECAB-CYTED.
Sharapin. Fundamentos de Tecnologa de Productos
Fitoteraputicos. Bogot, SECAB-CYTED.
Mazza & Oomah. Herbs, Botanical & Teas. Lancaster
2002 Mukherjee. Quality Control of Herbal Drugs. New Dehli.
Rajpal. Standardization of Botanicals. Neh Dehli, Eastern Pub.
2003 Gaedcke & Steinhoff. Herbal Medicinal Products. Stuttgart.
Verpoorte & Mukherjee. GMP for Botanicals. New Dehli.
2004 WHO. Directrices de la OMS sobre buenas prcticas agrcolas y de
recoleccin (BPAR) de plantas medicinales, Ginebra
2005 WHO. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials. Revised
Update, QAS/05.131.Rev. 1