k

OFICINA ESPANOLA
DE
PATENTES Y MARCAS

19

k
2 104 952
kInt. Cl. : C07C 237/30, A61K 31/165

11 N
umero de publicacion:
6

51

ESPANA

C07C 237/32, C07C 237/34

C07C 237/36, C07C 229/60
A61K 31/195, C07C 255/50

TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA

12

kNumero de solicitud europea: 92923932.5

kFecha de presentacion : 27.11.92
kNumero de publicacion de la solicitud: 0 616 609
kFecha de publicacion de la solicitud: 28.09.94

T3

86
86
87
87

54 Ttulo: Derivados de nitroanilina y su uso como agentes antitumorales.

73 Titular/es: Cancer Research

72 Inventor/es: Denny, William Alexander;

74 Agente: Carpintero L
opez, Francisco

30 Prioridad: 28.11.91 NZ 240785

Campaign Technology Limited

Cambridge House 6-10
Cambridge Terrace Regents Park
London NW1 4JL, GB

45 Fecha de la publicaci
on de la mencion BOPI:

16.10.97

45 Fecha de la publicaci
on del folleto de patente:

ES 2 104 952 T3

16.10.97

Aviso:

k
k

Palmer, Brian Desmond y

Wilson, William Robert

En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicacion en el Boletn europeo de patentes,
de la mencion de concesion de la patente europea, cualquier persona podra oponerse ante la Oficina
Europea de Patentes a la patente concedida. La oposicion debera formularse por escrito y estar
motivada; solo se considerara como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de
oposici
on (art 99.1 del Convenio sobre concesion de Patentes Europeas).
Venta de fasc
culos: Oficina Espa
nola de Patentes y Marcas. C/Panam
a, 1 28036 Madrid

ES 2 104 952 T3
DESCRIPCION

Los agentes alquilantes constituyen una clase importante de f

armacos anticancergenos, que expresan
sus efectos citot
oxicos y antitumorales mediante la formaci
on de aductos con el ADN celular (Garca et
al., Biochem. Pharmacol., 1988, 37, 3189).

10

Chem. Abstr. Vol. 66, Abstract 10687m se refiere a la sntesis de derivados de 2,4-dinitrofenol como
agentes anticancergenos. Se describe la sntesis de 2,4-dinitro-6-[N,N-bis (-hidroxietil)amino]fenol, 2,4dinitro-6-[N,N-bis (-cloroetil)amino]fenol, y O-(-hidroxietil)-2,4-dinitro-6-(N-benzoilamino)fenol y del
correspondiente derivado (-cloroetil).

15

La presente invencion se refiere a nuevos agentes alquilantes a base de nitroanilina que tienen actividad
como citotoxinas hipoxia-selectivas, prof
armacos activados reductivamente por las citotoxinas, radiosensibilizadores celulares hipoxicos y agentes anticancergenos, a los procedimientos para la preparacion de
los nuevos compuestos, y al uso de estos compuestos como agentes antitumorales.
En un aspecto, la presente invenci
on se refiere a la clase de derivados de la nitroanilina representados
por la f
ormula general (I):

20

25

30

35

en la que el grupo nitro est

a sustituido en una cualquiera de las posiciones del benceno disponibles 26; en la que R y A representan separadamente los grupos NO2 , CN, COOR1 , CONR1 R2 , CSNR1 R2 o
SO2 NR1 R2 y A esta sustituida en una de las posiciones disponibles del benceno 2-6; en la que B representa
ogeno)2 o N(CH2 CH2 OSO2 R3 )2 sustituido en una cualquiera de las posiciones disponibles
N(CH2 CH2 hal
del benceno; y en la que R1 , R2 y R3 separadamente representan H, o un alquilo inferior opcionalmente
sustituido con funciones hidroxilo, eter, carboxilo o amino, que incluyen estructuras cclicas, o R1 y R2
junto con el nitr
ogeno al que estan unidos forman una estructura heterocclica.
En la que R1 , R2 y/o R3 representan un alquilo inferior, el grupo contiene de 1 a 6 atomos de carbono.

40

45

50

55

En la que R1 , R2 y/o R3 representan grupos que contienen aminas terciarias, tambien se incluyen los
N-oxidos de aquellos restos de aminas terciarias.
Los compuestos de f
ormula (I) tienen actividad citot
oxica y antitumoral y son u
tiles como citotoxinas
hipoxia-selectivas, prof
armacos reductivamente activados por las citotoxinas, radiosensibilizadores celulares hip
oxicos y agentes anticancergenos.
Algunos de los compuestos de f
ormula (I) forman sales de adicion farmaceuticamente aceptables
tanto con acidos org
anicos como inorg
anicos, y estas sales de adici
on tambien forman parte de la presente
invencion. Entre los ejemplos de acidos adecuados para la formaci
on de sales se encuentran el acido
clorhdrico, el acido sulf
urico, el acido fosf
orico, el acido acetico, el acido ctrico, el acido oxalico, el acido
mal
onico, el acido saliclico, el acido m
alico, el acido fum
arico, el acido succnico, el acido ascorbico,
el acido maleico, el acido metanosulfonico, el acido isetionico y similares. Algunos de los compuestos
de f
ormula (I) forman sales de adicion farmaceuticamente aceptables tanto con bases org
anicas como
inorg
anicas, y estas sales de adici
on tambien forman parte de la presente invenci
on. Entre los ejemplos de bases adecuadas para la formacion de sales se encuentran el carbonato de sodio y de potasio, el
hidr
oxido de sodio y de potasio, el amoniaco, la trietilamina, la trietanolamina y similares.
Los compuestos de f
ormula (I) y las sales de adici
on de acidos o bases y los N-oxidos de los mismos
pueden prepararse mediante los procedimientos esbozados en los siguientes esquemas 1 a 7.

60

De aqu en adelante y en los ejemplos A a G se proporcionan ejemplos especficos pero no limitativos

de los procedimientos esbozados en los esquemas 1 a 7 respectivamente.
2

ES 2 104 952 T3

10

15

Esquema 1
Y = OH, NH2

20

X = OSO2 Me, hal

ogeno
R = CONH2

25

30

35

Esquema 2
ogeno
X = OSO2 Me, hal
40

Y1 = Cl
R = COOR1 , CONR1 R2

45

50

55

Esquema 3

60

X = Cl

ES 2 104 952 T3
R = CN o CSNH2

10

15

Esquema 4
20

ogeno
X = OSO2 Me, hal
R = SO2 NH2

25

30

35

Esquema 5
40

Z = Cl, NH2 , NR1 R2

R = CONH2 , CONR1 R2

45

50

55

Esquema 6
60

X = OH, Cl

ES 2 104 952 T3
Z = OEt, OH, Cl
R = CONR1 R2
5

10

15

Esquema 7
20

X = OH, Cl
Z = OMe, OH, Cl

25

30

35

R = CONR1 R2
La invencion se refiere tambien a la preparaci
on de compuestos de f
ormula general (I), las sales de
adicion de acidos o de bases y a los N-
oxidos de los mismos, mediante un procedimiento tal como se
esboza en uno cualquiera de los esquemas 1 a 7 anteriores o mediante un equivalente qumico evidente
de los mismos. La invenci
on tambien incluye aquellas formas de procedimientos de preparaci
on seg
un
las cuales un compuesto que puede obtenerse como intermedio en cualquier etapa del procedimiento se
utiliza como material de partida y se llevan a cabo las etapas restantes, o un material de partida que
se utilice en la forma de un derivado o una sal o, especialmente, que sea formado en las condiciones de
reaccion.
La siguiente Tabla 1 exhibe los datos fisicoqumicos para 24 compuestos de f
ormula general (I),
representativos de ella, y que pueden prepararse mediante los procedimientos de la invencion.
TABLA 1
Datos analticos y fisicoqumicos de las mostazas de nitroanilina de f
ormula general I

40

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2

NO2 B

pf ( C)

f
ormula

an
alisisa

CONH2
CONH2
CONH2
CONH2
COOMe
COOH
CN
CONHMe
CONMe,
CONXe
CONH(CH2)2 NMe2 .HCl
CONH(CH2)2 NXe .HCl
CSNH2
CONH(CH2)2 N(O)Me2

109-111
126-128
170-172
142-144
136,5-138
125-127
127
180,5
130,5
140-142
85-90
119-120
166-167
165-169

C11 H12 Cl2 N4 O5

C11 H12 Br2 N4 O5
C11 H12 l2 N4 O11 S2
C11 H18 N4 O11 S2
C12 H13 Cl2 N3 O6
C11 H11 Cl2 N3 O6.1/2EtOAc
C11 H10 Cl2 N4 O4
C12 H14 Cl2 N4 O4
C13 H16 Cl2 N4 O5
C15 H18 Cl2 N4 O6
C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl
C17 H23 Cl2 N5 O6 .HCl
C11 H12 Cl2 N4 O4 S
C15 H21 Cl2 N5 O6 .HCl

C,H,N,Cl
C,H,N
C,H,N,I
C,H,N,S
C,H,N,Cl
C,H,N
C,H,N
C,H,N,Cl
C,H,N
C,H,N
C,H,N
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl

45

50

55

60

4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4

5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Br)2
5-N(CH2CH2 I)2
5-N(CH2CH2 OMs)h2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2
5-N(CH2CH2 Cl)2

ES 2 104 952 T3
TABLA 1 (Continuacion)
Datos analticos y fisicoqumicos de las mostazas de nitroanilina de f
ormula general I
5

10

15

15
16
17
18
19
20
21
22
23
24

2-NO2
2-NO2
2-NO2
2-NO2
3-NO3
3-NO3
2-NO2
2-NO2
3-NO3
3-NO3

NO2 B

4
4
4
4
5
5
6
6
5
5

5-N(CH2 CH2 Cl)2

5-N(CH2 CH2 Cl)2
5-N(CH2 CH2 Cl)2
5-N(CH2 CH2 Cl)2
2-N(CH2 CH2 Cl)2
2-N(CH2 CH2 Cl)2
5-N(CH2 CH2 Cl)2
5-N(CH2 CH2 Cl)2
4-N(CH2 CH2 Cl)2
4-N(CH2 CH2 Cl)2

pf ( C)

f
ormula

an
alisisa

CONH(CH2)2 COOH
CONHCH2CH2 OH
CONHCH2CH(OH)CH2OH
SO2 NH2
CONH2
CONH(CH2)2 NMe2
CONH2
CONH(CH2)2 NMe2 .HCl
CONH2
CONH(CH2)2 NMe2 .HCl

150-153
157-158
goma
153-154
123-124
115-118
141-141,5
180-182
113-116
145-148

C14 H16 Cl2 N4 O7

C13 H16 Cl2 N4 O6
C14 H18 Cl2 N4 O7
C10 H12 Cl2 N4 O6 S
C11 H12 Cl2 N4 O5
C15 H21 Cl2 N5 O5
C14 H12 Cl2 N4 O5
C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl
C14 H12 Cl2 N4 O5
C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl.H2O

C,H,N
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N,S
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N,Cl
C,H,N

20

Notas a pie de pagina de la Tabla 1:

25

30

an
alisis de todos los elementos listados en 10,4%.

OMs = OSO2 CH3 .

x = morfolida: (CH2 CH2 )2 O.

Los ejemplos siguientes A a G ilustran la preparacion de compuestos representativos de la f

ormula
general (I), y de forma especfica los compuestos listados en la Tabla 1.
Ejemplo A

35

40

45

50

55

60

Preparaci
on de 5-[N,N-bis (2-metanosulfonoxietil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (4) (Ia: X = OSO2 Me;
alogos mediante el metodo esbozado en el esquema 1.
R = CONH2 ) y an
El tratamiento del acido 5-cloro-2,4-dinitrobenzoico (II: Y = OH) [Goldstein, H.; Stamm, R.
o 5-cloro-2,4Helv. Chim. Acta., 1952, 35, 1330-1332] con SOCl 2 seguido de amoniaco proporcion
dinitrobenzamida (II: Y = NH2 ), pf 210C (dec) [Goldstein, H.; Stamm, R. Helv. Chim. Acta., 1952, 35,
1330-1332] informan de un pf de 212 C]. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,68 (s, 1 H, H-3), 8,02 (s, 1 H, H-6),
7,50 (br, 2 H, CONH2 ). Esta amida se calento con dietanolamina en dioxano para obtener 5-[N,N-bis(2hidroxietil)]amino-2,4-dinitrobenzamida (III) (rendimiento del 45%), pf (EtOAc) 176-178C. 1 H RMN
(CD3 SOCD3 ) 8,47 (s, 1 H, ArH3), 8,07, 7,73 (2 br, 2 H, CONH2 ), 7,35 (s, 1 H, ArH6), 4,80 (m, 2 H,
OH), 3,83-3,20 (m, 8 H, CH2 N, CH2 O). Anal. (C11 H14 N4 O7 ) C, H, N.
Se a
nadi
o cloruro de metanosulfonilo (5,17 ml, 0,067 mol) gota a gota a una solucion de la amida
diol anterior (10,00 g, 0,032 mol) en piridina seca (150 ml) a 0 C. Despues de 10 minutos a 0 C, se
atiles bajo presi
on reagit
o la solucion a 20C durante 30 minutos, y se retiraron los compuestos vol
o entre EtOAc y agua y el residuo org
anico se croducida por debajo de 40C. El residuo se reparti
matografi
o sobre gel de slice. La elucion con EtOAc dio precursores, y sequidamente 5-[N,N-bis(2metanosulfonoxietil)amino]-2,4-dinitrobenzamida (4) (Ia: X = OSO2 Me; R = CONH2 ) (11,05 g, 74%),
pf (tubo sellado: ex EtOAc/eter de petr
oleo) 60C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,54 (s, 1 H, H-3), 7,65 (s, 1
H, H-6), 4,49 (t, J = 5,3 Hz, 4 H, CH2 OSO2 CH3 ), 3,89 (t, J = 5,3 Hz, 4 H, CH2 N), 3,09 (s, 6 H, SO2 CH3 ),
2,90 (br s, NH2 ). 13 C RMN 167,01 (CONH2 ), 148,56 (C-5), 140,45 138,44 (C-2,4), 138,57 (C-1), 124,92,
123,06 (C-3,6), 67,65 (CH2 OSO2 CH3 ), 52,02 (CH2 N), 37,23 (SO2 CH3 ). Anal. (C13 H18 N4 O11 S2 ) C, H,
N, S.
Se disolvi
o el dimesilato anterior (4) (15,0 g, 31,9 mol) en DMF seca (150 ml). La solucion se trat
o
con LiCl solido (20 g), se calento a 100 C con agitacion vigorosa durante una hora, y despues se concentro
hasta sequedad. El residuo se reparti
o entre EtOAc y agua, y la porci
on org
anica se lav
o bien con HCl
3N, se prepar
o para obtener un s
olido cereo, y se cromatografio sobre slice. La elucion con EtOAc/eter de
petr
oleo (1:1) dio precursores, mientras que con EtOAc/eter de petr
oleo (3:2) dio 5-[N,N-bis(2- cloroetil)
6

ES 2 104 952 T3

10

15

20

amino]-2,4-dinitrobenzamida (1)(Ia, X = Cl, R = CONH2 ) (7,51 g, 67%) que cristalizo en EtOAc/eter

de petr
oleo como peque
nas agujas de color naranja, pf 109 - 111C, 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,52 (s, 1
H, H-3), 7,58 (s, 1 H, H-6), 7,10 (br, 2 H, CONH2 ), 3,89-3,81 (m, 8 H, NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 167,10
(CONH2 ), 148,31 (C-5), 140,08 (C-2), 138,84 (C-1), 138,20 (C-4), 124,94, 122,24 (C-3,6), 54,25 (CH2 N),
42,04 (CH2 Cl) M/Z 354,352.350 (M+, 2%), 303,301 (67,24%), 222 (25), 185 (26), 171 (29), 100 (74), 65
(25), 63 (56), 56 (57), 36 (100). Encontrado M+ 354,0124; 352,0123; 350,0189. Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O5 )
C, H, N, I.
Se trat
o una soluci
on del dimesilato anterior (4) (1,00 g, 2,12 mmol) en DMF seca (50 ml) con NaBr
solido (10,0 g), se calent
o a 120C agitando vigorosamente durante 15 minutos, y despues de concentro
hasta sequedad bajo presi
on reducida. El residuo se reparti
o entre EtOAc y agua, y la porci
on org
anica se
lavo bien con HCl 3N y se recogio. La cromatografa del residuo sobre slice y la elucion con EtOAc/eter
de petr
oleo (1:1) proporcion
o 5-[N,N-bis(2- bromoetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (2) (Ia, X = Br, R =
oleo) 126-128C. 1 H RMN (CD3 COCD3 )
CONH2 ) (0,73 g, rendimiento del 78%), pf (EtOAc/eter de petr
8,53 (s, 1 H, H-3), 7,58 (s, 1 H, H-6), 3,89 (t, J = 6,6 Hz, 4 H, CH2 N), 3,73 (t, J = 6,6 Hz, 4 H, CH2 Br),
2,93 (br, 2 H, CONH2 ).13C RMN 167,20 (CONH2 ), 147,89 (C-5), 140,06, 138,26 (C-2,4), 138,75 (C-1),
124,95, 122,30 (C-3,6), 54,11 (CH2 N), 29,89 (CH2 Br). Anal. (C11 H12 Br2 N4 O5 ) C, H, N.
Una reaccion similar utilizando NaI proporcion
o 5-[N,N-bis(2-yodoetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida
oleo) 170-172C. 1 H RMN
(3) (Ia, X = I, R = CONH2 ) rendimiento del 92%. Pf (EtOAc/eter de petr
(CD3 COCD3 ) 8,52 (s, 1 H, H-3), 7,55 (s, 1 H, H-6), 3,84 (t, J = 7,2 Hz, 4 H, CH2 N), 3,50 (t, J =
7,2 Hz, 4 H, CH2 Br), 2,88 (br, 2 H, CONH2 ).13 C RMN 167,09 (CONH2 ), 147,17 (C-5), 140,08, 138,33
(C-2,4), 138,74 (C-1), 124,94, 122,31 (C-3,6), 54,89 (CH2 N), 1,72 (CH2 I). Anal. (C11 H12 I2 N4 O5 ) C, H,
N, I.

25

Ejemplo B
5-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzoato de metilo (5) (VI: X = Cl) y analogos mediante el
metodo esbozado en el esquema 2.
30

35

40

45

50

55

60

Se trat
o 5-cloro-2,4-dinitrobenzoato de metilo (IV) (1,24 g, 4,76 mmol) con dietanolamina (1,00 g,
9,52 mmol) en dioxano (50 ml) a 50 C durante 3 horas, y el residuo tras recogerlo se cromatografio sobre
gel de slice. La elucion con EtOAc proporcion
o 5-[N,N-bis(2-hidroxietil)amino]- 2,4-dinitrobenzoato de
metilo (V) (1,52 g, 97%), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 104-106C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,48 (s, 1 H, H-3),
7,45 (s, 1 H, H-6), 3,95 (s, 3 H, OCH3 ), 3,81 (t, J = 5,0 Hz, 4 H, CH2 OH), 3,60 (t, J = 5,0 Hz, 4 H,
CH2 N), 2,20 (br, 2 H, OH). 13 C RMN 165,89 (COOMe), 147,53 (C-5), 138,67, 136,21 (C-2,4), 133,30
(C-1), 124,22, 121,65 (C-3,6), 59,34 (CH2 OH), 54,59 (CH2 N), 53,74 (OCH3 ). Anal. (C12 H15 N3 O8 ) C,
H, N.
Se trat
o una soluci
on de este diol (1,50 g, 4,56 mmol) y Et3 N (1,33 ml, 9,57 mmol) en CH2 Cl2 seco (60
ml) con MsCl (0,73 ml, 9,34 mmol) a 0 C y se vertio en NaHCO3 acuoso saturado despues de 15 minutos.
El dimesilato bruto (VI: X = OSO2 Me) recogido se trato directamente con exceso de LiCl en DMF a
120C durante 30 minutos. La mezcla se vertio en salmuera, se extrajo con EtOAc, se recogio, y se cromatografi
o sobre gel de slice. La elucion con EtOAc/eter de petr
oleo proporcion
o 5-[N,N-bis(2-cloroetil)
amino]-2,4-dinitrobenzoato de metilo (5) (VI: X = Cl; Y1 = OMe) (1,34 g, 80%), pf (EtOAc/eter de
petr
oleo) 136,5-138C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,54 (s, 1 H, H-3), 7,34 (s, 1 H, H-6), 3,97 (s, 3 H, OCH3 ),
3,68 (br s, 8 H, NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 165,30 (COOCH3 ), 147,22 (C5), 139,81, 137,82 (C-2,4), 133,39
(C-1), 124,33, 121,77 (C-3,6), 53,86 (OCH3 ), 53,78 (CH2 N), 40,69 (CH2 Cl). Anal. (C12 H13 Cl2 N3 O6 ) C,
H, N, Cl.
o un rendimiento
La hidr
olisis de (5) con KOH 4N en p-dioxano a 20 C durante 15 minutos proporcion
cuantitativo de acido 5-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzoico (6) (Ib: X = Cl, R = COOH), pf
(EtOAc/eter de petr
oleo) 125-127C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,56 (s, 1 H, H-3), 7,72 (s, 1 H, H-6), 3,89
- 3,86 (br, 8 H, NCH2 CH2 Cl), 3,78 (br, COOH). 13 C RMN 166,02 (COOH), 148,52 (C-5), 140,25, 138,09
(C-2,4), 134,72 (C-1), 124,87, 122,58 (C-3,6), 54,12 (CH2 N), 42,12 (CH2 Cl). Anal. (C11 H11 Cl2 N3 O6 .
1/2EtOAc) C, H, N, Cl.
El tratamiento de (6) con exceso de SOCl2 que contiene una gota de DNF bajo reflujo durante 20
minutos, seguido de una concentraci
on hasta sequedad y la formaci
on de un azeotropo con benceno, proporcion
o cloruro de 5-[N,N-bis(2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzolo bruto (VI: X = Cl; Y1 = Cl). Este
o a 0 C, se trat
o con exceso de metilamina acuosa al
compuesto se disolvio en Me2 CO (20 ml), se enfri
7

ES 2 104 952 T3

40%. El producto se purific

o por cromatografa sobre gel de slice, la elucion con EtOAc/eter de petr
oleo
(1:1) proporcion
o [N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida de N-metilo (8) (Ib: X = Cl, R =
CONHMe), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 180,5C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,53 (s, 1 H, ArH3), 7,75
(br, 1 H, CONH), 7,56 (s, 1 H, H-6), 3,88-3,80 (m, 8 H, NCH2 CH2 Cl), 2,90, 2,89 (2 s, 3 H, CONHMe).
13
C RMN 165,89 (CONH), 148,43 (C-5), 140,05, 138,26 (C-2,4),138,94 (C-1), 125,05, 122,45 (C-3,6),
54,20 (CH2 N), 42,10 (CH2 Cl), 26,69 (CONHCH3 ). Anal. (C12 H14 Cl2 N4 O5 ) C, H, N, Cl.
El tratamiento similar de acido clorhdrico (VI: X = Cl; Y1 = Cl) con amoniaco o aminas adecuadas
proporcion
o:

10

15

20

25

30

5-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida (4) (Ib: X = Cl, R = CONH2 ) (rendimiento del

67%), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 109-111C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,52 (s, 1 H, H-3), 7,58 (s, 1 H,
H-6), 7,10 (br, 2 H, CONH2 ), 3,89 - 3,81 (m, 8 H, NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 167,10 (CONH2 ), 148,31
(C-5), 140,08 (C-2), 138,84 (C-1), 138,20 (C-4), 124,94, 122,24 (C-3,6), 54,25 (CH2 N), 42,04 (CH2 Cl)
M/Z
354, 352,350 (M+, 2%), 303,301 (67,24%), 222 (25), 185 (26), 171 (29), 100 (74), 65 (25), 63 (56),
56 (57), 36 (100). Encontrado M+ 354,0124; 352,0123; 350,0189. C11 H12 Cl2 N4 O5 requiere 354,0126;
352,0155; 350,0185. Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O5 ) C, H, N, Cl.

N,N-dimetil [N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida (9) (Ib: X = Cl, R = CONMe2 ) (renoleo) 130,5C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,61 (s, 1 H, H-3), 7,07 (s, 1
dimiento del 65%), pf (CHCl3 /eter de petr
H, H-6), 3,62 (s, 8 H, NCH2 CH2 Cl), 3,07, 2,78 (2 x 3 H, CON(CH3 )2 )). 13 C RMN 166,12 (CON(CH3 )2 ))
148,33 (C-5), 138,88, 135,75 (C-2,4), 137,82 (C-1), 124,92, 120,00 (C-3,6), 53,55 (CH2 N), 40,98 (CH2 Cl),
38,06, 34,85 (CON(CH3 )2 )). Anal. (C13 H16 Cl2 N4 O5 ) C, H, N.

N - morfolino [N,N - bis(2 - cloroetil)amino] - 2,4 - dinitrobenzamida (10) (Ib: X = Cl, R =

CON(CH2 CH2 )2 O), pf (CHCl3 /hexano) 140 - 142C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,66 (s, 1 H, ArH - 3), 7,55 (s,
1 H, ArH - 6), 3,68 (br, 10 H, NCH2 CH2 Cl y CH2 O), 3,60 & 3,34 (2 x m, 2 x 2 H, CH2 NCO). 13 C RMN
165,22 (CON), 149,34 (C - 5), 139,88, 137,00 (C - 2,4), 138,26 (C - 1), 125,59, 121,17 (C - 3,6), 66,92,
66,79 (CH2 O), 54,22 (CH2 N, 47,88, 42,80 (CONHCH2 ), 42,26 (CH2 Cl). Anal. (C15 H18 Cl2 N4 O6 ) C, H,
N.

35

40

45

50

55

60

N-[2-(dimetilamino)etil] [N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (11) (Ib: X = Cl, R =

CONHCH2 CH2 NMe2 ), pf (sal en forma de clorhidrato de MeOH/EtOAc) 85-90C. 1 H RMN (D2 O)
8,76 (s, 1 H, ArH-3), 7,59 (s, 1 H, ArH-6), 3,86-3,80 (m, 10 H, NCH2 CH2 Cl y CH2 NH+ Me2 ), 3,53 t,
J = 6,1 Hz, 2 H, CONCH2 ), 3,06 (s, 6 H, NMe2 ). 13 C RMN 170,77 (CONH), 166,12, 1451,39 (C-5),
140,53, 137,51 (C-2,4), 138,18 (C-1), 128,25, 123,39 (C-3,6), 58,46 (CH2 N+ HMe2 ), 55,49 (CH2 N), 45,67
(N+ HMe2 ), 43,97 (CH2 Cl), 38,54 (CONHCH2 ). Anal. (C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl) C, H, N.
on de
Se trat
o una soluci
on de base libre de (11) (0,50 g, 1,18 mmol) en CH2 Cl2 (15 ml) con una soluci
2-bencenosulfonil-3-feniloxaciridina [Davis, F.: Stringer, C.D. J. Org. Chem., 1982, 47, 1775-1777]. Se
nadi
o eter de
a
nadieron gota a gota (0,32 g, 1,24 mmol) en CH2 Cl2 (3 ml). Despues de 10 minutos, se a
olido resultante se seco bajo
petr
oleo (10 ml), la solucion se enfri
o a - 30 C durante toda la noche, y el s
alto vaco para obtener N-(N1 , N1 -dimetilaminoetil) [N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida
N1 -oxido (14) ((Ib: X = Cl, R = CONHCH2 CH2 N(O)Me2 ) como una espuma higroscopica. El tratamiento con MeOH/HCl proporcion
o la sal clorhidrato (0,36 g, 64%), pf (MeOH/1 Pr2 O) 165-169C. 1 H
RMN (D2 O/(CD3 )2 SO) 8,82 (s, 1 H, H-3), 7,46 (s, 1 H, H-6), 3,98, 3,93 (2xt, J = 5,1 Hz, 2x2 H,
CH2 CH2 ), 3,82 (t, J = 4,7 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,77 (t, J = 4,7 Hz, 4 H, CH2 N), 3,57 (s, 6 H, N(CH3 )2 .
13
C RMN (D2 O/(CD3 )2 SO) 170,71 (CONH), 151,63 (C-5), 140,68, 137,31 (C-3,6), 69,20 (CH2 NOMe2 ),
59,03 (NOMe2 ), 55,40 (CH2 N), 44,06 (CH2 Cl), 36,45 (CONHCH2 ). Anal. (C15 H21 Cl2 N5 O6 .HCl) C, H,
N, Cl.

N-[2-(morfolino)etil] [N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (12) (Ib: X = Cl, R

= CONHCH2 CH2 N(CH2 CH2 )2 O) como una goma. La sal en forma de clorhidrato cristalizo en
MeOH/1 Pr2 O, pf 119-120C. 1 H RMN (D2 O) 8,81 (s, 1 H, H-3), 7,59 (s, 1 H, H-6), 4,07 (br, NH y
HCl), 3,91 (t, J = 6,0 Hz, 4 H, N+ CH2 CH2 O), 3,86 - 3,81 (m, 10 H, NCH2 CH2 Cl y CH2 CH2 N+ ), 3,56 (t,
J = 6,0 Hz, 6 H, N+ CH2 CH2 O y CONHCH2 ). 13 C RMN 171,17 (CONH), 151,69 (C-5), 140,61, 137,28
(C-2,4), 138,12 (C-1), 128,53, 123,48 (C-3,6), 66,30 (N+ CH2 CH2 O), 58,07 (CH2 N+ ), 55,48 (CH2 N), 54,65
(N+ CH2 CH2 O), 44,09 (CH2 Cl), 36,84 (CONHCH2 ). Anal. (C17 H23 Cl2 N5 O6 .HCl.1/2H2O) C, H, N, Cl.

N-(2-hidroxietil) 5-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (16) (Ib: X = Cl, R =

ES 2 104 952 T3

CONHCH2 CH2 OH) (1,24 g, 85%), pf (EtOAc/eter de petr

oleo) 157-158C. 1 H RMN ((CD3 )2 SO)
8,73 t, J = 5,5 Hz, 1 H, CONH), 8,53 (s, 1 H, H-3), 7,45 (s, 1 H, H-6), 4,76 (t, J = 5,5 Hz, 1 H, OH), 3,82
(t, J = 6,0 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,68 (t, J = 6,0 Hz, 4 H, CH2 N), 3,54 (dt, J = 6,1, 5,5 Hz, 2 H, CH2 OH),
3,31 dt, J = 6,1, 5,5 Hz, 2 H, CONHCH2 ). 13 C RMN ((CD3 )SO) 164,44 (CONH), 147,11 (C-5), 137,87,
136,27 (C-2,4), 137,32 (C-1), 124,24, 121,01 (C-3,6), 59,32 (CH2 OH), 52,44 (CH2 N), 41,93 (CONHCH2 ),
41,65 (CH2 Cl). Anal. (C13 H16 Cl2 N2 O6 ) C, H, N, Cl.

10

15

N-(2,3-dihidroxipropil) 5-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (17) (Ib: X = Cl, R =

opica. 1 H RMN (CD3 )2 SO)
CONHCH2 CH(OH)CH2 OH) (0,96 g, 59%), como una espuma amarilla higrosc
8,70 (t, J = 5,7 Hz, 1 H, CONH), 8,53 (s, 1 H, H-3), 7,44 (s, 1 H, H-6), 4,83 (d, J = 4,9 Hz, 1 H,
CHOH), 4,56 (t, J = 5,7 Hz, 1 H, CH2 OH), 3,83 (t, J = 5,9 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,68 (t, J = 5,9 Hz, 4 H,
CH2 N), 3,50-3,06 (m, 5 H, CONH CH2 CHOHCH2 OH). 13 C RMN ((CD3 )2 SO) 164,61 (CONH), 147,12
(C-5), 37,94, 136,40 (C-2,4), 137,40 (C-1), 124,29, 121,18 (C-3,6), 70,08 (CHOH), 63,77 (CH2 OH), 52,55
(CH2 N), 42,79 (CONHCH2 ), 41,72 (CH2 Cl). Anal. (C14 H18 Cl2 N4 O7 ). C, H, N, Cl.

20

25

N-(2-metoxicarboniletil) 5-[N,N-bis(2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida bruta [del tratamiento

con el clorhidrato del ester metlico de -alanina] (Ib: X = Cl, R = CONHCH2 CH2 COOMe) como un
aceite amarillo. Esta se disolvi
o inmediatamente en THF (25 ml) y se trat
o con KOH acuoso (10 ml
de 2N) a 20C durante tres horas. Despues se acidifico la solucion con HCl concentrado, se extrajo con
ETOAc, y se recogi
o de la forma habitual. La cromatografa sobre gel de slice y la elucion con EtOAc,
proporcion
o N-(2-carboxietil) 5-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzamida (15) (Ib: X = Cl, R =
oleo) 150-153C. 1 H RMN (CD3 )2 SO)
CONHCH2 CH2 COOH) (0,72 g, 68%), pf (EtOAc/eter de petr
12,27 (br, 1 H, COOH), 8,79 (t, J = 5,6 Hz, 1 H, CONH), 8,54 (s, 1 H, H-3), 7,42 (s, 1 H, H-6), 3,83 (t,
J = 6,0 Hz, 2 H, CH2 Cl), 3,68 (t, J = 6,0 Hz, 4 H, CH2 N), 3,44 (dxt, J = 6,9, 2 H, 5,6 Hz, CONHCH2 ),
2,53 (t, J = 6,9 Hz, 2 H, CH2 , COOH). 13 C RMN ((CD3 )2 SO) 172,74 (COOH), 164,53 (CONH), 147,21
(C-5), 137,94, 136,13 (C-2,4), 137,29, (C-1), 124,37, 120,93 (C-3,6), 52,58 (CH2 N), 41,72 (CH2 Cl), 35,24,
33,19 (CONHCH2 CH2 ). Anal. (C14 H16 Cl2 N4 O7 ) C, H, N, Cl.
Ejemplo C

30

Preparaci
on de 5-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrobenzonitrilo (7) (Ic: X = Cl, R = CN) y 5-[N,Nbis (2-cloroetil) amino]- 2,4-dinitrotiobenzamida (13) (Ic: X = Cl, R = CSNH2 ) mediante el metodo
esbozado en el esquema 3.
35

40

45

50

Se calento una soluci

on de 5-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzamida (1) (VII) (0,20 g, 0,57
o el exceso de SOCl2 bajo presi
on
mmol) en SOCl2 (5 ml) bajo reflujo en N2 durante 84 horas. Se elimin
reducida, y se cromatografi
o el residuo sobre gel de slice. La elucion con EtOAc/eter de petr
oleo (3:7)
proporcion
o 5-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobenzonitrilo (7) (Ic: X = Cl, R = CN) (0,16 g,
87%), pf (CHCl3 ) 127C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,79 (s, 1 H, H-3), 8,19 (s, 1 H, H-6), 3,93 (s, 8
H, NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 148,55 (C-5), 140,98, 139,07 (C-2,4), 129,50, 126,10 (C-3,6), 115,05 (C-1),
112,84 (CN), 54,18 (CH2 N), 42,20 (CH2 Cl). Anal. (C11 H10 Cl2 N4 O4 ) C, H, N.
Se trat
o una soluci
on de (1) (VII) (0,50 g, 1,42 mmol) en p-dioxano (20 ml) con P2 S5 (0,63 g, 2,84
on durante tres horas. El residuo despues
mmol) y NaHCO3 (0,24 g, 2,84 mmol) bajo reflujo y con agitaci
de ser recogido se cromatografi
o sobre gel de slice, y la elucion con EtOAc/eter de petr
oleo (1:4) proporcion
o 5-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-2,4-dinitrotiobenzamida (13) (Ic: X = Cl, R = CSNH2 ) (0,48 g,
92%), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 166-167C. 1 H RMN (CD3 SOCD3 ) 9,50, 9,34 (2xbr, 2 H, CSNH2 ),
8,50 (s, 1 H, H-3), 7,45 (s, 1 H, H-6), 3,87, 3,82 (2xm, 8 H, NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 199,46 (CS),
148,08 (C-5), 143,87 (C-1), 139,51, 136,99 (C-2,4), 125,23, 121,36 (C-3,6), 54,23 (CH2 N), 42,02 (CH2 Cl).
Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O4 S) C, H, N, S.
Ejemplo D

55

60

Preparaci
on de 5-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-2,4-dinitrobencenosulfonamida (18) (Id: X = Cl, R =
SO2 NH2 ) mediante el metodo esbozado en el esquema 4.
Se mantuvo una soluci
on de 5-cloro-2,4-dinitrobencenosulfonamida (VIII) [Herbert, R.B. y Hollman,
R. G.Tetrahedron, 1965, 21, 663-675] (1,55 g, 5,5 mmol) y dietanolamina (1,16 g, 11 mmol) en dioxano
(100 ml) a 60 C durante 1,5 horas, despues se adsorbio directamente en gel de slice. El exceso de solvente se evaporo bajo presi
on reducida, y el residuo se cromatografio sobre gel de slice, eluyendo con
EtOAc/MeOH (19:1), para obtener 5-[N,N-bis(2-hidroxietil)amino]-2,4-dinitrobencenosulfonamida (IX)

ES 2 104 952 T3
(1,91 g, 99%), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 138-139C. 1 H RMN ((CD3 )2 SO) 8,53, (s, 1 H, H-3), 7,97
(s, 1 H, H-6), 7,93 (br s, 2 H, SO2 NH2 ), 4,88 (t, J = 5,1 Hz, 2 H, OH), 3,65 (dt, J = 5,2, 5,1 Hz, 4
H, CH2 OH), 3,49 (t, J = 5,1 Hz, 4 H, NCH2 ). 13 C RMN 146,84 (C-5), 140,53 (C-1), 136,84, 134,39
(C-2,4), 125,70 (C-3), 54,27 (NCH2 ). Anal. (C10 H14 N4 O8 S) C, H, N.
5

10

Se trat
o una soluci
on agitada del diol anterior (IX) (1,90 g, 5,43 mmol) y Et3 N (1,90 ml, 14 mmol)
en THF seco (60 ml) gota a gota a 0 C con cloruro de metanosulfonilo (0,89 ml, 11 mmol). Despues de
15 minutos adicionales se diluyo la solucion con EtOAc, se lav
o bien con agua, y se recogio para obtener
o inmediatamente en DMF (50 ml)
dimesilato bruto (Id: X = OSO2 Me, R = SO2 NH2 ). Este se disolvi
que contena LiCl (20 g), y se agit
o la mezcla a 130C durante 15 minutos antes de retirar el solvente
bajo presion reducida. El residuo se reparti
o entre EtOAc y agua, y la fase org
anica se recogio y se
cromatografio sobre gel de slice. La elucion con EtOAc proporcion
o 5-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-2,4dinitrobencenosulfonamida (18) (Id: X = Cl, R = SO2 NH2 ) (1,47 g, 64%), pf 153-154C. (EtOAc/eter
de petr
oleo).

15
1

H RMN ((CD3 )2 CO) 8,54, (S, 1 H, H-3), 7,99 (br, 2 H, SO2 NH2 ), 7,91 (S, 1 H, H-6), 3,84 (t, J = 5,6
Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,67 (t, J = 5,6 Hz, 4 H, CH2 N). 13 C RMN ((CD3 )2 CO) 146,13 (C-5), 140,64 (C-1),
138,86, 136,93 (C-2,4), 124,95, 121,77 (C-3,6), 52,47 (CH2 N), 41,62 (CH2 Cl). Anal. (C10 H12 ClN4 O6 S)
C, H, N, S.
20

Ejemplo E

25

30

35

40

45

50

55

Preparaci
on de 2-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (19) (Ie:R=CONH2) y N-(N,N,
dimetilaminoetil)2-[N,N-bis(2-cloroetil)amino] 3,5-dinitrobenzamida (20) (Ie: R = CONHCH2CH2 NMe2 )
mediante el metodo esbozado en el esquema 5.
La reaccion de acido 2-cloro-3,5-dinitrobenzoico (X), disponible comercialmente, con SOCl2 proporciono cloruro de 2-cloro-3,5-dinitrobenzolo (XI: z = Cl), que fue extinguida con amoniaco para obtener
o una soluci
on de esta amida (1,00 g, 4,07 mmol)
2-cloro-3,5-dinitrobenzamida (XI: Z = NH2 ). Se trat
y Et3 N (1,42 g, 10 mmol) en p-dioxano (30 ml) con clorhidrato de N,N-bis (2-cloroetil) amina (1,45 g,
8,14 mmol) a 50 C durante 18 horas. Despues se vertio la mezcla en agua y se extrajo con EtOAc para
obtener un aceite, que se cromatografio sobre gel de slice. La elucion con EtOAc/eter de petr
oleo (1:1)
proporcion
o 2-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (19) (Ie: R = CONH2 ) (1,15 g, 80%), pf
oleo) 123-124C. 1 H RMN (CD3 SOCD3 ) 8,70, (d, J = 2,7 Hz, 1 H, H-4), 8,49 (d,
(CHCl3 /eter de petr
J = 2,7 Hz, 1 H, H-6), 7,68, 7,35 (2xbr, 2 H, CONH2 ), 3,80, 3,61 (2xt, J = 6,9 Hz, 8 H, NCH2 CH2 Cl).
13
C RMN 167,94 (CONH2 ), 147,27 (C-2), 147,20, 142,84 (C-3,5), 137,70 (C-1), 128,40, 123,24 (C-4,6),
55,84 (CH2 N), 42,28 (CH2 Cl). Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O5 ) C, H, N, Cl.
El tratamiento similar de acido clorhdrico (XI: Z = Cl) con N,N-dimetiletilendiamina en agua a 0o C
dio N-(N,N-dimetilaminoetil 2-cloro-3,5-dinitrobenzamida (XI: Z = NHCH2 CH2 NMe2 ) como un aceite
viscoso (5,6 g, 59%). La sal en forma de clorhidrato cristalizo en MeOH/eter isoproplico, pf 220-222C.
1
H RMN (D2 O) 8,99, (d, J = 2,3 Hz, 1 H, ArH4), 8,74 (d, J = 2,3 Hz, 1 H, ArH6), 3,89 (t, J = 6,3
Hz, 2 H, CH2 N+ Me2 ), 3,51 (t, J = 6,3 Hz, 2 H, CONHCH2 ), 3,04 (s, 6 H, NMe2 ). 13 C RMN 169,32
(CONH), 150,88 (C-2), 148,70, 141,02 (C-3,5), 133,23 (C-1), 129,45, 125,27 (C-4,6), 58,64 (CH2 N+ Me2 ),
45,88 (N+ Me2 ), 37,94 (CONHCH2 ). Anal. (C11 H13 ClN4 O5 .HCl) C, H, N, Cl.
La reaccion de esta amida (XI: Z = NHCH2 CH2 NMe2 ) con clorhidrato de bis (2-cloroetil)-amina y
on con EtOAc/MeOH
Et3 N como arriba, seguida de una cromatografa sobre gel de slice y de una eluci
(9:1) proporcion
o N-(N,N-dimetilaminoetil)2-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (20) (Ie:
oleo) 115-118C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,63, (s, 2 H,
R = CONHCH2 CH2 NMe2 ), pf (EtOAc/eter de petr
ArH4), 7,41 (br, 1 H, CONH), 3,74 (t, J = 6,3 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,59 (t, J = 5,8 Hz, 2 H, CONHCH2 ),
3,55 (t, J = 6,3 Hz, 4 H, NCH2 CH2 Cl), 2,56 (t, J = 5,8 Hz, 2 H, CH2 NMe2 ), 2,27 (s, 6 H, NMe2 ).
13
C RMN 164,70 (CO), 145,93 (C-2), 144,86, 141,94 (C-3,5), 135,68 (C-1), 129,63 (C-4), 123,16 (C6), 57,51 (CONHCH2 ), 54,82 (NCH2 CH2 Cl), 45,12 (NMe2 ), 41,39 (NCH2 CH2 Cl), 37,67 (CONHCH2 ).
opica para
Anal. (C15 H21 Cl2 N5 O5 ) C, H, N, Cl. (La sal en forma de clorhidrato era demasiado higrosc
manejarla).
Ejemplo F

60

Preparaci
on de 3 - [N,N - bis (2 - cloroetil) amino] - 2,6 - dinitrobenzamida (21) (If: R = CONH2) y
N - (N,N - dimetilaminoetil) 3 - [N,N - bis (2 - cloroetil) amino] - 2,6 - dinitrobenzamida (22) (If: R =

10

ES 2 104 952 T3
CONHCH2CH2 NMe2 ) mediante el metodo esbozado en el esquema 6.

10

Se trat
o una soluci
on de acido 3-clorobenzoico (60 g, 0,38 mol) en H2 SO4 concentrado (600 ml) en
porciones con acido ntrico fumante (d 1,42) (150 ml), y la solucion se calento gradualmente agitando
a 140 C en un matraz abierto, y se mantuvo a esta temperatura durante seis horas. Despues de dejar
que se enfriara durante toda la noche, se a
nadi
o con cuidado agua helada, y despues de refrigerar a
o el producto precipitado mediante filtracion y se lav
o bien con agua. La
5C durante tres horas se retir
cristalizacion en EtOH acuoso proporcion
o acido 5-cloro-2,4-dinitrobenzoico (II: Y = OH) (62 g, 66%)
pf 180-183C [Goldstein, H.; Stamm, R. Helv. Chim. Acta., 1952, 35, 1330-1332 informa un pf de 182o que reposaran durante varias horas,
183C]. Se combinaron el filtrado original y los lavados y se dej
depositando cristales de acido 3-cloro-2,6-dinitrobenz
oico puro (XII) (8,4 g, 9%), pf(H2 O) 162-163,5C.
1
H RMN (CD3 SOCD3 ) 10,50, (br, 1 H, COOH), 8,82 (d, J = 8,8 Hz, 1 H, H-5), 8,62 (d, J = 8,8 Hz,
1 H, H-4). 13 C RMN 162,03 (COOH), 146,34 (C-2), 145,57 (C-6), 133,69 (C-5), 130,01 (C-1), 128,26
(C-4), 125,19 (C-3). Anal. (C7 H3 ClN2 O6 ) C, H, N, Cl.

15

20

25

30

35

40

45

El acido 3-cloro-2,6-dinitrobenzoico) (XII) fue convertido a ester etlico, el cual se hizo reaccionar como
se ha indicado antes con dietanolamina para obtener 3-[N,N-bis (2-hidroxietil)amino]-2,6-dinitrobenzoato
de etilo bruto (XIII: X = OH, Z = OEt). La reacci
on de este con MsCl/LiCl proporcion
o 3-[N,N-bis(2hidroxietil)amino]-2,6-dinitrobenzoato (XIII: X = Cl, Z = OEt), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 84-87C.
1
H RMN (CD3 COCD3 ) 8,32, (d, J = 9,4 Hz, 1 H, H-5), 7,79 (d, J = 9,4 Hz, 1 H, H-4), 4,39 (q, J =
7,1 Hz, 2 H, OCH2 CH3 ), 3,85-3,77 (M, 8 H, NCH2 CH2 Cl), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3 H, OCH2 CH3 ). 13 C
RMN 163,24 (COOEt), 148,30 (C-3), 141,04, 138,80 (C-2,6), 128,84, 124,65 (C-4,5), 127,39 (C-1), 63,94
(OCH2 CH3 ), 54,39 (NCH2 ), 42,00 (CH2 Cl) 13,89 (OCH2 CH3 ). Anal. (C13 H15 Cl2 N3 O6 ) C, H, N, Cl.
Para confirmar la estructura, se llev
o a cabo sobre este compuesto una cristalografa por rayos X.
La hidr
olisis de este ester (XIII: X = Cl, Z = OEt) con KOH acuoso/p-dioxano (30 ml) a 20 C durante
18 horas proporcion
o acido 3-[N,N-bis (2-hidroxietil)amino]-2,6-dinitrobenzoico (XIII: X = Cl, Z = OH),
que fue convertido en el correspondiente cloruro acido (XIII: X = Cl, Z = Cl). Se trat
o una soluci
on de
este compuesto en Me2 CO a 0 C con exceso de amoniaco acuoso y se cromatografio el producto sobre gel
de slice, eluyendo con EtOAc/eter de petr
oleo (1:1) 3-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,6-dinitrobenzamida
oleo) 140-141,5C. 1 H RMN (CD3 COCD3 ) 8,26,
(21) (If: R = CONH2 ) (0,93 g), pf (EtOAc/eter de petr
(d, J = 9,3 Hz, 1 H, H-5), 7,71 (d, J = 9,3 Hz, 1 H, H-4), 7,63, 7,23 (2xbr, 2 H, CONH2 ), 3,75 (s, 8 H,
NCH2 CH2 Cl). 13 C RMN 163,99 (CONH2 ), 147,38 (C-3), 142,92, 139,76 (C-2,6), 130,48 (C-1), 128,22,
124,23 (C-4,5), 54,74 (NCH2 ), 42,00 (CH2 Cl). Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O5 ) C, H, N, Cl.
El tratamiento similar de cloruro acido (XIII: X = Cl, Z = Cl) con N,N-dimetiletilendiamina
proporcion
o N-(N,N-dimetilaminoetil) 3-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-2,6-dinitrobenzamida (22) (If: R =
o en MeOH/eter isoproplico, pf 180CONHCH2 CH2 NMe2 ). La sal en forma de clorhidrato cristaliz
182C. 1 H RMN (D2 O) 8,37, (d, J = 9,6 Hz, 1 H, ArH5), 7,63 (d, J = 9,6 Hz, 1 H, ArH4), 3,80-3,71 (m,
10 H, NCH2 CH2 Cl y CH2 NMe2 ), 3,44 (t, J = 6,4 Hz, 2 H, CONHCH2 ), 3,00 (s, 6 H, NMe2 ). 13 C RMN
168,75 (CONH), 150,91 (C-3), 141,55, 138,72 (C-2,6), 131,61 (C-4), 130,45 (C-1), 125,85 (C-5), 58,31
(CH2 N+ Me2 ), 55,74 (NCH2 CH2 Cl), 45,97 (N+ Me2 ), 44,16 (NCH2 CH2 Cl), 37,91 (CONHCH2 ). Anal.
(C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl) C, H, N, Cl.
Ejemplo G

50

55

60

Preparaci
on de 4-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-3,5-dinitrobenzamida (23) (Ig: X = Cl, R = CONH2 )
y N-(N,N-dimetilaminoetil) 4-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (24) (Ig: X = Cl, R =
CONHCH2CH2 Me2 ) mediante el metodo esbozado en el esquema 7.
Se agit
o una soluci
on de 4-cloro-3,5-dinitrobenzoato de metilo (XIV) (10,0 g, 0,036 mol) y dietanolamina (7,66 g, 0,073 mol) en p-dioxano (60 ml) a 50C durante 5 horas. Los compuestos volatiles se
retiraron bajo presi
on reducida, y el residuo se adsorbi
o directamente sobre gel de slice y se cromatografi
o. La elucion con EtOAc/eter de petr
oleo (1:10) proporcion
o precursores y la elucion subsiguiente con
EtOAc/eter de petr
oleo (3:2) proporcion
o 4-[N,N-bis (2-hidroxietil)amino]-3,5-dinitrobenzoato de metilo
oleo) 101-103C. 1 H RMN (CDCl3 )
(XV: X = OH, Z = OMe) (9,61 g, 80%), pf (CHCl3 /eter de petr
8,52, (s, 2 H, ArH-2,6), 3,97 (s, 3 H, COOCH3 ), 3,76 (dxt, J = 6,5, 4,7 Hz, 4 H, CH2 OH), 3,26 (t, J = 4,7
Hz, 4 H, NCH2 ), 2,76 (t, J = 6,5 Hz, 2 H, OH). 13 C RMN 163,14 (COOCH3 ), 145,50 (C-4), 142,54 (C3,5), 131,19 (C-2,6), 123,59 (C-1), 59,16 (CH2 OH)1, 54,58 (CH2 N), 53,14 (OCH3 ). Anal. (C12 H15 N3 O8 )
C, H, N.
11

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10

15

20

25

30

35

40

Se a
nadi
o MsCl (3,93 ml, 0,049 mol) gota a gota a 0 C a una soluci
on del diol de arriba (XV: X = OH,
Z = Me) (7,30 g, 0,022 mol) y Et3 N (7,72 ml, 0,055 mol) en CH2 Cl2 (100 ml). Despues de 15 minutos,
se lavo la solucion varias veces con agua y recogio para obtener el dimesilato bruto, que se trato con
LiCl en DMF a 120 C durante 5 minutos. La recogida y la cromatografa sobre gel de slice (elucion con
EtOAc/eter de petr
oleo (1:4)) proporcion
o 4-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]- 3,5-dinitrobenzoato de metilo
oleo) 93-95C. 1 H RMN (CDCl3 ) 8,54,
(XV: X = Cl, Z = OMe) (6,21 g, 77%), pf (CHCl3 /eter de petr
(s, 2 H, H-2,6), 3,99 (s, 3 H, COOCH3 ), 3,63 (t, J = 6,9 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,43 (t, J = 6,9 Hz, 4 H,
CH2 N). 13 C RMN 162,90 (COOCH3 ), 147,83 (C-4), 140,53 (C-3,5), 129,85 (C-2,6), 126,70 (C-1), 55,47
(CH2 N), 53,23 (OCH3 ), 41,18 (CH2 Cl). Anal. (C12 H13 Cl2 N3 O6 ) C, H, N, Cl.
La hidr
olisis de este ester (XV: X = Cl, Z = OMe) con KOH acuoso/p-dioxano a 20C durante 3 horas proporcion
o un rendimiento cuantitativo de acido 4-[N,N-bis (2-cloroetil) amino]-3,5-dinitrobenzoico
(XV: X = Cl, Z = OH), pf (EtOAc/eter de petr
oleo) 164-166C. 1 RMN ((CD3 )2 SO) 8,61, (s, 2 H,
H-2,6), 3,78 (t, J = 6,9 Hz, 4 H, CH2 Cl), 3,52 (t, J = 6,9 Hz, 4 H, CH2 N), (COOH no visible). 13 C
RMN 164,12 (COOH), 149,12 (C-4), 141,40 (C-3,5), 130,70 (C-2,6), 128,19 (C-1), 56,14 (CH2 N), 42,46
(CH2 Cl). Anal. (C11 H11 Cl2 N3 O6 ) C, H, N, Cl.
El acido anterior (XV: X = Cl, Z = OH) fue convertido al cloruro acido bruto (XV: X = Cl, Z = Cl),
o a 5 C, y se trat
o gota a gota con NH3 acuoso (20 ml
el cual se disolvi
o en Et2 O seco (100 ml), se enfri
de una soluci
on 3N, 60 mmol). Despues de 10 minutos la solucion se recogio y el residuo se cromatografio
sobre gel de slice. La elucion con EtOAc/eter de petr
oleo (3:7) proporcion
o precursores mientras que
con EtOAc/eter de petr
oleo (7:3) proporcion
o 4-[N,N-bis (2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (23)
oleo) 113-116C. 1 H RMN
Ig: X = Cl, R = CONH2 ) (rendimiento del 80%), pf (EtOAc/eter de petr
(CD3 COCD3 ) 8,61, (s, 2 H, H-2,6), 7,98, 7,24 (2xbr, 2 H, CONH2 ), 3,75 (t, J = 7,0 Hz, 4 H, CH2 Cl),
3,50 (t, 4 H, CH2 N). 13 C RMN 164,91 (CONH2 ), 149,32 (C-4), 140,07, (C-3,5), 132,18 (C-1), 128,91
(C-2,6), 56,37 (CH2 N), 42,55 (CH2 Cl). Anal. (C11 H12 Cl2 N4 O5 ) C, H, N, Cl.
El tratamiento similar de cloruro acido (XV: X = Cl, Z = Cl) con N,N-dimetiletilendiamina proporciono N-(N,N-dimetilaminoetil) 4-[N,N-bis(2-cloroetil)amino]-3,5-dinitrobenzamida (24) (Ig: X = Cl, R
o en MeOH/eter isoproplico, pf 145= CONHCH2 CH2 NMe2 ). La sal en forma de clorhidrato cristaliz
148C. 1 H RMN (CD3 SOCD3 ) 10,65, (br, 1 H, HCl), 9,49 (t, J = 5,4 Hz, 1 H, CONH), 8,75 (s, 2 H,
ArH2,6), 3,71 (t, J = 6,9 Hz, 4 H, NCH2 CH2 Cl), 3,44-3,28 (m, 8 H, NCH2 CH2 Cl y CH2 CH2 N+ Me2 ), 2,83
(s, 6 H, N+ Me2 ). 13 C RMN 162,63 (CO), 147,43 (C-3,5), 138,75 (C-4), 130,22 (C-1), 128,31 (C-2,6),
55,44 (CH2 N+ Me2 ), 54,75 (NCH2 CH2 Cl), 42,22 (N+ Me2 ), 42,18 (NCH2 CH2 Cl), 34,75 (CONHCH2 ).
Anal. (C15 H21 Cl2 N5 O5 .HCl) C, H, N, Cl.
La siguiente Tabla 2 proporciona los datos biologicos correspondientes a los ejemplos seleccionados de
los compuestos de la Tabla 1. Las abreviaturas utilizadas en la Tabla 2 son las siguientes:
umero dado al compuesto correspondiente en la Tabla 1.
N : El n

45

50

55

60

on del crecimiento como se describe con detalle en otra

CI50 : Se llevaron a cabo estudios de inhibici
parte (W.R. Wilson, R. F. Anderson y W.A. Denny. J. Med. Chem., 1989, 32, 23; G. J. Finlay,
B.C. Baguley y W.R. Wilson. Anl. Biochem., 1984, 139, 172.), utilizando 200 celulas AA8 viables
o 300 celulas UV4 viables mas 5000 celulas AA8 irradiadas letalmente por pocillo en placas de
cultivo de tejidos de 96 pocillos. Las celulas AA8 y UV4 se mantuvieron en crecimiento en fase
logartmica en matraces de cultivo de tejidos de 25 cm3 con subcultivo de dos veces por semana
mediante tripsinizaci
on. El medio de crecimiento fue -MEM sin antibi
otico con suero fetal de
on fueron
ternera 10% v/v inactivado por calor (56C, 40 minutos). Los tiempos de duplicaci
aproximadamente 14 horas para las celulas AA8 y 15 horas para las celulas UV4. Los cultivos
se analizaron con frecuencia para determinar posibles contaminaciones de micoplasma, utilizando
un metodo de tinci
on citoqumico (I.R. Chen, Exp. Cell Res., 1977, 104, 255. Los f
armacos
se a
nadieron 24 horas despues del inicio de los cultivos en placas de 96 pocillos, y se incubaron
las celulas bajo condiciones hip
oxicas o aer
obicas durante 18 horas antes del lavado con medio
armaco necesaria para reducir la
recien preparado. Se determin
o la CI50 como la concentracion de f
masa celular (contenido en protenas, medido despues de 72-78 horas mediante tincion con azul de
metileno y mediante la determinacion de la absorbancia en un fot
ometro de microplaca) al 50% del
valor medio para 8 cultivos de control sobre la misma placa de 96 pocillos.
HF

aire :

La relacion de valores CI50 para un compuesto despues de una exposicion como se ha detallado
anteriormente frente a las lneas celulares AA8 y UV4 (HF = CI50 (AA8)/CI50 (UV4)).
12

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CT10 : El producto (en M-Hora) de la concentracion del f
armaco regula el tiempo de exposicion para
reducir la supervivencia celular al 10% de los valores de control en el ensayo clonogenico.

Aire/N2 : Relacion de los valores CT10 despues de la exposicion de las celulas UV4 como se ha detallado
anteriormente bien bajo condiciones aerobicas (aire) o hip
oxicas (N2 ) (= CT10 aerobico/CT10
hip
oxico).
HFNR2 : Relacion de los valores CI50 para un compuesto despues de la exposicion de la lnea celular
UV4 en presencia y ausencia de la enzima nitroreductasa NR-2 de E. coli.
TABLA 2

10

Actividad biol
ogica de los compuestos seleccionados de la Tabla 1

15

20

25

30

35

40

IC50 (AA8)
(aire:M)

HF
(aire)

CT10 (UV4)
(aire:M-h)

Proporcion CT10
(aire/N2 )

IC50 (UV4)
(aire:M)

HF (NR-2)
(aire)

1
2
3
4
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
17
18
19
20
21
22
23
24

468
57
34
>200
10600
24
>100
310
264
230
920
>25
7300
6100
1790
3
>100
150
>240
426
97
62

6,8
7,5
2,6
1,5
6,8
1,4
23
4,2
3,0
>2
1,7
1,1
3,2
ca.3
14
>2
3,2
1,4
2,0

2925
160
170
1200
>30000
86
>360
>3500
156
1130
3700
>60
<14400
14000
3340
>300
1200
>300
3600
>450
>273

58
20
42
17
>2
8,5
>20
1,6
60
45
>3
<10
2
14
>5
36
>3
130
>1
>1

109
10,9
15
99
317
2,3

73,5
32,3
73,8
10,0
0,76
9,2

45

Los siguientes ejemplos 1 a 3 muestran que el compuesto 1 (denominado aqu como SN23862) se activa
reductivamente mediante enzimas nitroreductasas bacterianas.
50

El agente alquilante 5-(aziridin-1-il)-2,4-dinitrobenzamida (de aqu en adelante designado como CB

1954) es conocido, desde hace casi 20 a
nos, como un compuesto de selectividad u
nica de gran interes experimental. Aunque CB 1954 estructuralmente es bastante parecido a otros numerosos agentes alquilantes
que tienen un intervalo de actividad relativamente amplio, CB 1954 muestra una actividad considerable
o que sera virtualmente inactivo
frente a las celulas del tumor Walker in vivo o in vitro pero se pens
frente a otros tumores.

55

60

Recientemente se ha descubierto que la selectividad de CB 1954 se puso de manifiesto por el hecho

de que no era un agente antitunoral per se sino un precursor farmacologico de un agente antitumoral
generado a partir de CB 1954 mediante una enzima nitroreductasa encontrada en la celula Walker. Esta
nitroreductasa de la celula Walker demostro ser una enzima conocida procedente de otras fuentes que
eran una NAD(P)H deshidrogenasa (quinona) clasificada como EC.1.6.99.2, vease Robertson et al, J.
Biol. Chem. 261, 15794-15799 (1986).

13

ES 2 104 952 T3
En el curso de las investigaciones previas con CB 1954, se descubrio que la enzima EC.1.6.99.2 celular
Walker tena la capacidad de reducir el grupo 4-nitro de CB 1954 a la hidroxilamina correspondiente y
que era la 5-(aziridin-1-il)-2-nitro-4-hidroxilamino-benzamida resultante la que era el agente antitumoral
activo.
5

10

15

La solicitud PCT/GB92/01947/(Publicaci
on n : WO 93/08288) de Cancer Research Campaign Technology Limited describe nuevas nitroreductasas, obtenibles de fuentes bacterianas, por ejemplo de
Escherichia coli y de Bacillus amyloliquifaciens, que son de interes porque no solo son capaces de convertir CB 1954 en un agente antitumoral activo, sino tambien, a diferencia de EC.1.6.99.2, capaces de
convertir analogos de CB 1954 que tambien son prof
armacos en agentes antitumorales activos.
Como se describe de una forma m
as concreta en la solicitud PCT/GB92/01947 (publicacion N : WO
93/08288), el uso de prof
armacos representa un concepto muy valorable clnicamente en la terapia del
cancer puesto que, concretamente donde el prof
armaco se convierte en un agente antitumoral bajo la
influencia de una enzima que se puede unir a un anticuerpo monoclonal que se unir
a a un antgeno asociado a un tumor, la combinaci
on de este prof
armaco con este conjugado enzima monoclonal/anticuerpo
representa un agente clnico muy poderoso.
Ejemplo 1

20

El efecto de SN23862 en la supervivencia de celulas V79 en presencia de nitroreductasa E. coli. Todos

los tratamientos tuvieron una duracion de 2 horas a 37C y las celulas se plaquearon despues para
determinar la capacidad de formaci
on de colonias resultante. La concentraci
on de nitroreductasa fue de
2 g/ml y se utilizo NADH como un co-factor. La densidad celular inicial fue 2 x 105 /ml.
25

Tratamiento

% Supervivencia

% Reducci
on de f
armaco

100
100
100
100
94
99
0,007

< 1,0
< 1,0

< 1,0
95

30

Control
+ 500 M NADH
+ 50 M SN23862
+ NADH + SN23862
+ Nitroreductasa
+ NR + 50 M SN23862
+ NR + SN23862 + 500 M NADH

35

40

Ejemplo 2

45

El efecto de SN23862 en la supervivencia de celulas V79 en presencia de nitroreductasa B. amyloliquifaciens. Todos los tratamientos tuvieron una duracion de 2 horas a 37 C y las celulas se plaquearon
despues para determinar la capacidad de formaci
on de colonias resultante. La concentraci
on de nitroreductasa fue de 7,45 g/ml y se utilizo NADH como un co-factor. La densidad celular inicial fue 2 x
105 /ml.

50

Tratamiento

55

60

% Supervivencia

% Reducci
on de f
armaco

100
120
110
115
96,8
110
6,0

< 1,0
< 1,0

< 1,0
> 95

Control
+ 500 M NADH
+ 50 M SN23862
+ NADH + SN23862
+ Nitroreductasa (BA)
+ BA + 50 M SN23862
+ BA + SN23862 + 500 M NADH

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Ejemplo 3

10

El efecto de SN23862 en la supervivencia de celulas Mawi o V79 en presencia de nitroreductasa E. coli:

on de 2 horas a 37 C y las celulas se
A5B7 F (ab)2 conjugado. Todos los tratamientos tuvieron una duraci
plaquearon despues para determinar la capacidad de formacion de colonias resultante. La concentraci
on
de conjugado fue de 81 g/ml (equivalente a 5,2 g/ml de nitroreductasa) y se utiliz
o NADH como un
co-factor. La densidad celular inicial fue 2 x 105 /ml. No se hicieron intentos para retirar el conjugado no
ligado.
Tratamiento

15

20

Control
+ 500 M NADH
+ 50 M SN23862
+ NADH + SN23862
+ Conjugado (CG)
+ CG + 50 M SN23862
+ CG + SN23862 + 500 M NADH

% Supervivencia

Celulas Mawi
Mawi
100
104,6
90,9
93,1
85,5
94,6
0,014

% Reducci
on de f
armaco

Celulas
V79
100
94,6
94,3
80,4
85,8
73,5
0,003

< 1,0
< 1,0

< 1,0
> 99

25

La Figura 1 muestra las propiedades radiosensibilizadoras del compuesto I.

30

35

40

45

La eficiencia radiosensibilizadora del compuesto I se ha evaluado en suspensiones agitadas de celulas

AA8 (bajo condiciones hip
oxicas utilizando radiaci
on gamma (cobalto 60) a una tasa de dosis de 2,2
armaco y las celulas bajo condiciones hip
oxicas 30 minutos antes
Gy/minuto a 37 C. Se mezclaron el f
de la irradiaci
on. Se observ
o la radiosensibilizacion de las celulas hip
oxicas (Figura 1). La concentraci
on
para una proporci
on incrementada (proporci
on de dosis de radiaci
on para una supervivencia del 10% con
o este grado de sensibilizacion
y sin f
armaco) de 1,6 (C1,6 ) fue aproximadamente 100 M, y se observ
en ausencia de toxicidad del f
armaco (Figura 1). El compuesto 1 es por lo tanto un radiosensibilizador
celular hip
oxico as como una citotoxina hipoxia-selectiva.
A partir de los datos de la Tabla 2, los ejemplos 1 a 3 y la Figura 1, est
a claro que los ejemplos
de los derivados de nitroanilina de f
ormula general (I) listados en la Tabla 2 incluyen compuestos que
son activos como agentes citotoxicos, y que tienen la capacidad adicional de ser activados reductivamente
tanto por celulas tumorales mamferas y enzimas nitroreductasa bacterianas y por lo tanto son adecuados
como prof
armacos. Los compuestos son selectivamente toxicos para las celulas tumorales hip
oxicas, y
por lo tanto u
tiles como f
armacos anticancergenos. Los compuestos son capaces de sensibilizar celulas
on ionizante, y de esta forma son adecuados como radiosensibilizadores
hip
oxicas in vitro a la radiaci
celulares hipoxicos.
La presente invencion por tanto tambien proporciona composiciones farmaceuticas que tienen actividad antitumoral y radiosensibilizante y que comprenden al menos un compuesto representado por la
f
ormula general (I) y uno o m
as vehculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables.

50

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60

La presente invencion proporciona adem

as el uso de al menos un compuesto representado por la
f
ormula general (I) para la fabricaci
on de composiciones farmaceuticas para el tratamiento de tumores,
en concreto canceres.
Cuando se utilizan los compuestos de formula (I) como prof
armacos reductivamente activados por
citotoxinas, pueden ser utilizados en asociacion con enzimas nitroreductasas, que incluyen la nitroreductasa descrita en la solicitud PCT/GB92/01947/(publicacion N WO 93/08288), y as proporcionar un
sistema de quimioterapia del c
ancer donde el grado de la exposici
on del paciente al agente citot
oxico est
a
limitada, lo maximo posible, a aquellas zonas donde hay interacci
on entre el prof
armaco y la nitroreductasa.
La mas o una de las mas convenientes vas de utilizaci
on de este sistema de quimioterapia del cancer
es conjugar la nitroreductasa a un agente objetivo tal como un anticuerpo monoclonal que se unir
aa
15

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un antgeno asociado con el tumor.

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25

30

El termino anticuerpo monoclonal sera entendido por aquellos experimentados en la tecnica no simplemente para hacer referencia a los anticuerpos producidos mediante las tecnicas hibridoma tradicionales,
sino tambien para abarcar a anticuerpos y variantes de los mismos producidos por medios recombinantes.
Estos incluyen, por ejemplo, anticuerpos humanizados tales como aquellos con una regi
on constante de
un anticuerpo humano transplantado sobre una regi
on variable de un anticuerpo no humano (vease por
ejemplo el documento EP-A-0 120 694), anticuerpos quimericos tales como aquellos con regiones determinantes de complementariedad no humana (CDRs) transplantadas en un marco de regi
on variable humana
(vease por ejemplo el documento EP-A-0 239 400) y anticuerpos de cadena simple. Tambien se incluyen
en el termino general anticuerpo monoclonal los fragmentos de estos anticuerpos monoclonales que
retienen su actividad ligante. Esto incluye los fragmentos Faby los fragmentos F(ab)2 .
La seleccion de los anticuerpos monoclonales estar
a claramente influenciada por la naturaleza del
tumor-objetivo aunque con fines ilustrativos, puede hacerse referencia al anticuerpo anti-CEA A5 B7 .
Con este sistema, es posible, en el curso de la quimioterapia del c
ancer, administrar al paciente
que requiere el tratamiento el compuesto de nitroanilina que es el prof
armaco de un compuesto citot
oxico y el conjugado enzima/agente objetivo. El prof
armaco y el conjugado pueden administrarse
simultaneamente pero con frecuencia resulta preferible, en la practica clnica, administrar el conjugado
enzima/agente antes del precursor farmacologico; por ejemplo, hasta 72 horas antes, con el fin de dar al
conjugado enzima/agente una oportunidad para localizarse en la regi
on del tumor-objetivo. Operando
de esta manera, cuando se administra el profarmaco, la conversion del prof
armaco en el agente citotoxico
tiende a llevarse a cabo en las regiones en las que el conjugado enzima/agente esta localizado, esto es, en
la regi
on donde el tumor-objetivo y el da
no causado a las celulas sanas por la liberacion prematura del
agente citotoxico est
a minimizada.
El grado de localizacion del conjugado enzima/agente (en terminos de proporci
on entre el conjugado
activo que circula libremente y el localizado) puede ser mejorada ademas utilizando los sistemas de aclaramiento y/o inactivaci
on descritos en el documento WO89/10140. Esto implica, normalmente despues
de la administracion del conjugado y antes de la administraci
on del prof
armaco, la administraci
on de un
componente (un segundo componente) que es capaz de unirse a tal parte del conjugado de forma que
inactiva la enzima y/o acelera el aclaramiento del conjugado en la sangre. Este componente puede incluir
un anticuerpo a la nitroreductasa que sea capaz de inactivar la enzima.

35

40

El segundo componente puede unirse a una macromolecula tal como dextrano, un liposoma, alb
umina,
macroglobulina o a un grupo sanguneo de eritrocitos O siempre que el segundo componente sea refrenado
en el sentido de abandonar el compartimento vascular. Ademas, o como una alternativa, el segundo componente puede incluir un n
umero suficiente de residuos de galactosa unidos mediante enlace covalente, o
residuos de otros az
ucares tales como lactosa o manosa, con el fin de que pueda unirse el conjugado en
plasma pero sea eliminado junto con el conjugado en plasma mediante receptores de galactosa u otros
az
ucares en el hgado. El segundo componente debe ser administrado y dise
nado para ser usado de forma
que no entrar
a, a cualquier grado apreciable, al espacio extravascular del tumor en el que podra inactivar
el conjugado localizado antes de y durante la administraci
on del prof
armaco.

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60

El regimen de dosificacion exacto, por supuesto, necesita ser determinado por los facultativos individuales a los pacientes individuales y esto, a su vez, sera controlado por la naturaleza exacta del prof
armaco
y del agente citotoxico que sea liberado del prof
armaco, aunque no obstante puede darse alguna directriz
general. Las quimioterapias de este tipo implicar
an normalmente una administraci
on parenteral tanto
del prof
armaco como del conjugado enzima/agente siendo la administraci
on por va intravenosa la forma
de administracion m
as com
unmente encontrada en la pr
actica.
Los compuestos activos pueden administrarse oralmente, por ejemplo, con un diluyente inerte o con
un vehculo comestible asimilable, o pueden ser introducidos en capsulas de gelatina duras o blandas,
o pueden ser comprimidos en comprimidos, o pueden ser incorporados directamente a los alimentos de
la dieta. Para la administraci
on terapeutica oral, los compuestos activos pueden ser incorporados con
excipientes y utilizados en forma de comprimidos ingeribles, comprimidos bucales, pastillas, c
apsulas,
elixires, suspensiones, jarabes, hostias y similares. Estas composiciones y preparaciones deben contener al menos un 0,1% de compuesto activo. El porcentaje de las composiciones y preparaciones puede,
por supuesto, variarse y puede estar desde aproximadamente 2 y aproximadamente un 60% del peso de
la unidad. La cantidad de compuesto activo en estas composiciones u
tiles terapeuticamente es tal que
pueda obtenerse una dosificaci
on adecuada. Las composiciones o preparaciones preferidas de acuerdo con
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la presente invencion se preparan de forma que una forma unitaria de dosificaci
on oral contenga entre
aproximadamente 5 y aproximadamente 200 mg de compuesto activo.

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20

Los comprimidos, pastillas, pldoras, capsulas y similares tambien pueden contener los siguientes
agentes ligantes: goma de tragacanto, acacia, almidon de maz o gelatina; excipientes tales como fosfato dic
alcico; un agente desintegrante tal como almidon de maz, almid
on de patata, acido algnico y
similares; un lubricante tal como estearato magnesico; y puede a
nadirse un agente dulcificante tal como
sacarosa, lactosa o sacarina o un agente saborizante tal como menta, aceite de gaulteria o saborizante
de cereza. Cuando la forma unitaria de dosificacion es una capsula, puede contener, adem
as del tipo de
materiales de arriba, un vehculo lquido. Pueden estar presentes otros materiales como recubrimientos
o de lo contrario modificar la forma fsica de la unidad de dosificaci
on. Por ejemplo, los comprimidos,
las capsulas o las pldoras pueden ser recubiertas con laca, az
ucar o con ambos. Un jarabe o un elixir
pueden contener el compuesto activo, sacarosa como agente endulzante, metil y propil parabenos como
conservantes, un colorante y un saborizante tal como saborizante de cereza o de naranja. Por supuesto,
cualquier material utilizado para la preparaci
on de cualquier forma unitaria de dosificaci
on debe ser farmaceuticamente puro y sustancialmente no t
oxico en las cantidades empleadas. Ademas, los compuestos
activos pueden incorporarse como preparaciones de liberaci
on sostenida y formulaciones.
Los compuestos activos tambien pueden administrarse parenteralmente o intraperitonealmente. Pueden prepararse soluciones de compuesto activo como una base libre o una sal farmaceuticamente aceptable
en agua mezclada adecuadamente con un agente tensoactivo tal como hidroxipropilcelulosa. Tambien pueden prepararse dispersiones en glicerol, polietilenglicoles lquidos, y mezclas de los mismos en aceites. En
condiciones normales de almacenaje y uso, estas preparaciones contienen un conservante para evitar el
crecimiento de microorganismos.

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Las formas farmaceuticas adecuadas para un uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas esteriles y polvos esteriles para la preparaci
on extemporanea de soluciones o dispersiones inyectable
esteriles. En todos los casos la formulacion debe ser esteril y fluida en tal grado que facilite la inyectabilidad de la misma. Debe ser estable en las condiciones de fabricacion y de almacenaje y debe ser conservada
frente a la accion contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos. El vehculo puede
ser un solvente o un medio de dispersion que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo,
glicerol, propilenglicol y polietilenglicol lquido y similares), mezclas adecuadas de los mismos y aceites
vegetales. La fluidez apropiada puede ser mantenida, por ejemplo, mediante el uso de un recubrimiento
tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tama
no de partcula requerido en el caso de dispersiones
y mediante el empleo de agentes tensoactivos. La prevencion de la accion de los microorganismos puede
estar causada por diversos agentes antibacterianos y antif
ungicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol,
fenol, acido s
orbico, timerosal y similares. En muchos casos, sera preferible incluir agentes isotonicos,
por ejemplo, az
ucares o cloruro de sodio. La absorcion prolongada de las composiciones inyectables puede
estar originada por el uso en las formulaciones de agentes que retrasan la absorci
on, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.
Las soluciones inyectables esteriles se preparan mediante la incorporacion del compuesto activo en la
cantidad requerida en el solvente adecuado con varios de los otros ingredientes enumerados anteriormente,
seg
un se requiera, seguido de una esterilizaci
on por filtrado. Las dispersiones generalmente se preparan
mediante la incorporaci
on de varios de los ingredientes activos esterilizados en un vehculo esteril que
contiene el medio de dispersi
on b
asico y los otros ingredientes requeridos de entre los enumerados anteriormente. En el caso de polvos esteriles para la preparaci
on de soluciones inyectables esteriles, los
metodos preferidos de preparaci
on son el secado a vaco y la tecnica de liofilizacion que da como resultado el principio activo como un polvo y cualquier ingrediente adicional deseado a partir de una soluci
on
del mismo previamente esterilizada por filtracion.
El termino vehculo farmaceuticamente aceptable, tal como se usa aqu, incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersion, recubrimientos, agentes antif
ungicos y antibacterianos, agentes
isot
onicos y retardantes de la absorcion y similares. El uso de estos medios y agentes para los ingredientes
farmaceuticamente activos es bien conocido en la tecnica. Excepto hasta donde cualquier medio o agente
convencional sea incompatible con el principio activo, se contempla su uso en formulaciones terapeuticas.
Tambien pueden ser incorporados en las composiciones principios activos suplementarios.
Es especialmente ventajoso formular composiciones parenterales en formas de dosificacion u
nica para
comodidad de administraci
on y uniformidad de dosificaci
on. Las formas de dosificaci
on u
nica tal como se
utilizan aqu se refiere a unidades separadas fsicamente adecuadas como dosificaciones unitarias para los
sujetos mamferos que sean tratados; cada unidad contiene un efecto terapeutico predeterminado asociado
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ES 2 104 952 T3

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con el vehculo farmaceutico requerido. La especificacion de las formas unitarias de dosificaci

on nuevas de
la invencion vienen impuestas por y dependen directamente de (a) las caractersticas u
nicas del material
activo y el efecto terapeutico particular que se alcance, y (b) las limitaciones inherentes a la tecnica de la
combinacion/formulaci
on tales como un material activo para el tratamiento de la enfermedad en sujetos
vivos que padecen un proceso de enfermedad en el que la salud del cuerpo se ve deteriorada.
El principio activo principal se formula para una administraci
on efectiva y conveniente en cantidades
efectivas con un vehculo farmaceuticamente aceptable en forma unitaria de dosificaci
on como se ha revelado aqu anteriormente. Una forma de dosificaci
on unitaria puede, por ejemplo, contener el compuesto
activo principal en cantidades que oscilan desde aproximadamente 0,1 hasta aproximadamente 400 mg,
siendo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 30 mg las cantidades preferidas. El compuesto
activo, expresado en proporciones, generalmente esta presente en desde aproximadamente 0,1 hasta 400
mg/ml de vehculo. En el caso de composiciones que contengan principios activos suplementarios, las
dosificaciones se determinan por referencia a la dosis usual y forma de administracion de dichos ingredientes.

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ES 2 104 952 T3
REIVINDICACIONES
1. Un compuesto representado por la f
ormula general (I),
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en la que el grupo nitro est

a sustituido en una cualquiera de las posiciones del benceno disponibles 26; en la que R y A representan separadamente los grupos NO2 , CN, COOR1 , CONR1 R2 , CSNR1 R2 o
SO2 NR1 R2 y A esta sustituido en una de las posiciones disponibles del benceno 2-6; en la que B repreogeno)2 o N(CH2 CH2 OSO2 R3 )2 sustituido en cualquiera de las posiciones disponibles
senta N(CH2 CH2 hal
del benceno; en la que R1 , R2 y R3 separadamente representan H, o un alquilo inferior opcionalmente
sustituido con funciones hidroxilo, eter, carboxilo o amino, que incluyen estructuras cclicas, o R1 y R2
junto con el nitr
ogeno al que est
an unidos forman una estructura heterocclica; y en la que R1 , R2 y/o
R3 representan un alquilo inferior, el grupo contiene de 1 a 6 atomos de carbono y en la que R1 , R2 y/o
oxidos de restos de esas aminas terciarias
R3 representan grupos que contienen aminas terciarias, los N-
tambien se incluyen.
2. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONH2 , A representa 4-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Cl)2 .

30

3. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONH2 , A representa 4-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Br)2 .
4. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONH2 , A representa 4-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 I)2 .

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5. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONHCH2 CH2 NMe2 , A representa 4-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Cl)2 .
6. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONHCH2 CH2 N(O)Me2 , A representa 4-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Cl)2 .
7. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONH2 , A representa 6-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Cl)2 .

45

8. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
2, R representa CONHCH2 CH2 NMe2 , A representa 6-NO2 y B representa 5-N(CH2 CH2 Cl)2 .
9. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicacion 1, en la que NO2 esta en la posicion
3, R representa CONH2 , A representa 5-NO2 y B representa 2-N(CH2 CH2 Cl)2 .

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10. Un compuesto de f
ormula (I) de acuerdo con la reivindicaci
on 1, en la que NO2 esta en la posicion
3, R representa CONHCH2 CH2 NMe2 , A representa 5-NO2 y B representa 2-N(CH2 CH2 Cl)2 .
11. Una sal de un compuesto tal como se define en una cualquiera de la reivindicaciones 1 a 10.

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12. Una composicion farmaceutica que comprende al menos un compuesto representado por la f
ormula
general (I) tal como se ha definido en la reivindicaci
on 1 o una sal tolerable fisiol
ogicamente del mismo
y uno o m
as vehculos o diluyentes farmaceuticamente aceptables.
13. Una composicion farmaceutica tal como se ha reivindicado en la reivindicacion 12, en la que la
composici
on comprende un compuesto tal como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones
2 a 10, o una sal tolerable fisiol
ogicamente del mismo.

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14. Un compuesto representado por la f
ormula general (I) tal como se ha definido en la reivindicaci
on
1 o una sal tolerable fisiol
ogicamente del mismo para ser utilizado como un medicamento.

15. El uso de al menos un compuesto representado por la f

ormula general (I) tal como se ha definido
en la reivindicacion 1 o una sal tolerable fisiol
ogicamente del mismo para la fabricacion de composiciones
farmaceuticas para el tratamiento de tumores.

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NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE)
y a la Disposici
on Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la
aplicaci
on del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a
Espa
na y solicitadas antes del 7-10-1992, no producir
an ning
un efecto en Espa
na en
la medida en que confieran protecci
on a productos qumicos y farmaceuticos como
tales.
Esta informaci
on no prejuzga que la patente este o no includa en la mencionada
reserva.

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