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IMUNOLOGIA

2009/2010

Licenciatura em Bioqumica

Joana Maria Soares Pereira

3 Ano

FCUP/ICBAS

2009/2010

Imunologia

INTRODUO AO SISTEMA
IMUNITRIO
VISO GERAL DA RESPOSTA IMUNE

Imunidade
A Imunidade refere-se proteco da doena, mais especificamente, da doena infecciosas. As clulas
e as molculas responsveis pela imunidade constituem o sistema imunitrio, e a sua resposta colectiva
e coordenada introduo de substncias estranhas referida como resposta imune.
Assim, as funes do sistema imunitrio so:

Defender o organismo de micrbios e de substncias estranhas no infecciosas;


Defesa contra infeces;
Defesa contra certos tumores;
Impede a transplantao;
Causador de algumas doenas.

Em adio, mecanismos que normalmente protegem individuos da infeco e eliminam substncias


estranhas so capazes de causar dano tecidular e doena em alguns casos. Portanto, podemos definir
em melhor extenso:

Resposta imune aco contra componentes dos micrbios, a macromolculas, como proteinas
e polissacarideos, e a pequenos qumicos que so reconhecidos como estranhos, descuidando a
consequncia fisiolgica ou patolgica de tal reaco.

A resposta imune usa mecanismos protectores para controlar e eliminar os micrbios infecciosos. Todos
esses mecanismos se baseiam na deteco de caractersticas estruturais do agente patognico que os
distinguem das clulas do hospedeiro. Tal discriminao entre o agente infeccioso e o hospedeiro
essencial para permitir ao hospedeiro eliminar o microorganismo patognico sem ocorrer dano
excessivo dos tecidos do hospedeiro.
A imunologia o estudo da resposta imune no seu sentido lato e dos eventos celulares e moleculares
que ocorrem aps um organimo entrar em contacto com um micrbio e outras macromolculas
estranhas.

Perspectiva Histrica
A imunologia cresceu da observao de que individuos que recuperavam de certas doenas infecciosas
estavam protegidos contra a doena:
Immunis isento
Imunidade estado de proteco contra uma doena infecciosa
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Na histria da imunologia encontram-se vrios nomes:

Thucydides, ao descrever uma praga em Atenas, escreveu em 430 a.C. que apenas aqueles que
recuperaram da praga conseguiam podiam cuidar a doena pois no eram capazes de contrair a
doena uma segunda vez;
Edward Jenner, um mdico ingls, reparou que vacas que tinham recuperado da varola bovina
nunca contraiam a varola mais sria. Na base da sua observao, ele injectou material de uma
pstula (pequena borbulha caracterstica da varola) de varola bovina no brao de um rapaz de
8 anos de idade. Quando este rapaz foi mais tarde inoculado intencionalmente com varola, a
doena no se desenvolveu. O seu trabalho quanto vacinao (vaccinus vaca) foi publicado
em 1798. Este mtodo permitiu que a varola fosse a primeira doena erradicada por todo o
mundo;
Louis Pasteur cresceu bactrias que pensava provocarem clera aviria em cultura e mostrou
que galinhas injectadas com as bactrias desenvolviam clera. Aps regressar de umas frias,
ele injectou algumas galinhas com uma cultura antiga e estas ficaram doentes mas, para
surpresa de Pasteur, elas recuperaram. Pasteur cresceu ento uma nova cultura de bactrias
com a inteno de as injectar noutras galinhas, mas o suprimento em galinhas era baixo e,
portanto, ele usou as galinhas j anteriormente inoculadas. De novo para sua surpresa, as
galinhas estavam protegidas da doena. Assim, ele mostrou que a idade enfraqueceu a
virulncia do patognio e que tal estirpe atenuada pode ser usada para proteger da doena.
estirpe atenuada ele deu o nome de vacina, em honra ao trabalho de Jenner. Pasteur extendeu
as suas descobertas a outras doenas, demonstrando que era possivel atenuar, ou enfraquecer,
um patognio e administrar a estirpe atenuada como uma vacina. Em 1885, Pasteur administrou
pela primeira vez a sua vacina num humano, um pequeno rapaz que tinha sido mordido
repetidamente por um co com raiva. O rapaz Joseph Meister, foi inoculado com uma sria de
preparaes de virus da raiva atenuadas e sobreviveu.

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No entanto, a vacinao com estirpes atenuadas apresenta desvantagens:

Pessoas imunodeficientes so susceptiveis a ataque pela estirpe atenuada;


Os microorganismos podem no permanecer atenuados.

Podemos ainda definir dois tipos de vacinas:

Terapeuticas, que so usadas aps a inoculao com o agente patognico e que permitem lutar
contra este;
Preventivas, que so usadas antes da inoculao e que previnem a resposta imune.

Imunidade Inata e Adaptativa


A defesa contra micrbios mediada pelas primeiras reaces da imunidade inata e pelas respostas
mais tardias da imunidade adaptativa:

Estes dois tipos de imunidade diferem pelas suas caracteristicas e componentes:


Caracteristicas
Especificidade
Diversidade
Memria
Auto-tolerncia
Componentes
Barreiras celulares e
qumicas
Protenas sanguineas
Clulas

Imunidade Inata

Imunidade Adaptativa

Para estruturas partilhadas por grupos de


microorganismos relacionados
Limitada; codificada pela linhagem
germinativa
No
Sim

Para antignios dos microorganismos e para


antignios no microbianos
Elevada; receptores so produzidos por
recombinao somtica de segmentos de genes
Sim
Sim

Pele, epitlio mucoso; qumicos


antimicrobianos
Sistema complemento, outras
Fagcitos (macrfagos, neutrfilos),
clulas naturalmente assassinas (NK cells)

Linfcitos no epitlio; anticorpos secretados


nas superficies epiteliais
Anticorpos
Linfcitos, clulas dendriticas

A imunidade inata e a adaptativa constituem componentes de sistemas integrados de defesa do


hospedeiro nos quais numerosas clulas e molculas funcionam cooperativamente:

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Os mecanismos da imunidade inata fornecem uma defesa inicial potente contra as infeces;
No entanto, vrios micrbios patognicos evoluiram de modo a resistir imunidade inata, e a
sua eliminao requer os mecanismos mais poderosos da imunidade adaptativa;
A resposta imunitria inata aos micrbios tambm estimula a resposta adaptativa e influncia a
sua natureza;
A imunidade inata filogeneticamente o sistema de defesa do hospedeiro mais antigo.

Imunidade Inata
A Imunidade Inata, tambm chamada de imunidade nativa, fornece a primeira linha de defesa contra
os micrbios. Consiste nos mecanismos bioqumicos e celulares de defesa que esto em vigor mesmo
antes da infeco e esto bem posicionados para responder rapidamente infeco:

Estes mecanismos reagem apenas contra micrbios e produtos de clulas danificadas, e


respondem essencialmente do mesmo modo para repetidas infeces.

Os principais componentes da imunidade inata so:


Tipo de Componente
Barreiras anatmicas
Pele
Membranas mucosas

Barreiras fisiolgicas
Temperatura
Baixo pH
Mediadores qumicos

Barreiras
fagociticas/endociticas
Barreiras inflamatrias

Mecanismo
Barreira mecnica que retarda a entrada de micrbios;
Ambiente acidico (pH 3-5) retarda o crescimento de micrbios;
Flora normal compete como micrbios para locais de ligao e nutrientes;
Muco impede a entrada de microorganismos;
Cilios levam os microorganismos para fora do corpo
Temperatura corporal normal inibe o crescimento de alguns patognios;
Febre inibe o crescimento de alguns patognios
Acidez do estmago mata a maior parte dos microorganismos ingeridos
Lisozimas quebram a parede celular;
Interferon induz um estado antiviral em clulas no infectadas;
Sistema complemento lisa microorganismos ou facilita a fagocitose;
Receptores toll-like reconhecem moleculas microbianas, sinal celular para a secreo de
citocinas imunostimulatrias;
Colectinas rompem a parede celular do patognio
Vrias clulas internalizam (endocitose) e quebram macromolculas estranhas;
Clulas especializadas (moncitos, neutrfilos, macrofagos) internalizam (fagocitose),
matam e digerem microorganismos inteiros
Dano tecidular e infeco induzem clulas fagocitrias para a rea afectada

Os mecanismos da imunidade inata so especificos para estruturas que so comuns para grupos de
microorganismos relacionados e no distinguem diferenas ligeiras entre substncias estranhas:

PAMPS o sistema imunitrio inato reconhece estruturas que so compartilhadas por vrias
classes de micrbios e no esto presentes nas clulas do hospedeiro, as pathogen associated
molecular patterns. Existem na superficie dos patognios e avisam a entrada destes, podendo
ser reconhecidos por receptores;
DAMPS o sistema imunitrio inato reconhece estruturas encontradas nas clulas do
hospedeiro em stress ou mortas, as danger associated molecular patterns.

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Imunidade Adaptativa
Em contraste com a imunidade inata, a imunidade adaptativa estimulada pela exposio a agentes
infecciosos e aumenta em magnitude e capacidades defensivas com cada exposio sucessiva a um
micrbio particular. Assim, esta forma de imunidade desenvolve-se como uma resposta infecco e
adapta-se infeco:

Tm grande especificidade para molculas distintas e habilidade para relembrar e responder


mais vigorosamente a esposies repetidas ao mesmo micrbio;
capaz de reconhecer e reagir contra um grande numero de substncias microbianas e no
microbianas;
Tem uma extraordinria capacidade de distinguir entre diferentes micrbios e molculas,
mesmo que intamamente relacionadas, o que a torna muito especifica;

Os principais componentes da imunidade adaptativa so linfcitos e seus produtos secretrios, como os


anticorpos. Substncias estranhas que induzem respostas imunitrias especificas ou so os alvos de tais
respostas so designados antignios.

Tipos de respostas imunitrias adaptativas


Existem dois tipos de respostas imunitrias adaptativas que so mediadas por diferentes componentes
do sistema imunitrio e funcionam para eliminar diferentes tipos de micrbios:

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Imunidade humoral mediada por molculas no sangue e nas secrees da mucosa,


designados anticorpos, que so produzidos por clulas designadas linfcitos B. Os anticorpos
reconhecem antignios microbianos, neutralizam a infectividade dos micrbios e marcam
micrbios para eliminao por variados mecanismos efectores. Este o principal mecanismo de
defesa contra micrbios extracelulares e as suas toxinas porque os anticorpos secretados
podem ligar-se a esses micrbios e toxinas e assistir a sua eliminao. Os anticorpos so
especializados: diferentes tipos de anticorpos promovem a fagocitose de micrbios por clulas
do hospedeiro e outros ligam-se e provocam a libertao de mediadores inflamatrios das
clulas;

Imunidade mediada por clulas mediada por linfcitos T. Microbios intracelulares, como os
virus e algumas bactrias, sobrevivem e proliferam dentro do fagcito e de outras clulas
hospedeiras, onde esto inacessiveis para os anticorpos circulantes. Defesa contra tais infeces
funo deste tipo de imunidade, que promove a destruio de micrbios que residem em
fagcitos ou a morte das clulas infectadas, para elimnar os reservatrios de infeco.

A imunidade protectora contra um micrbio pode ser induzida por resposta do hospedeiro ao micrbio
ou pela transferncia de anticorpos ou linfcitos especificos para o micrbio:

Imunidade activa forma de imunidade que induzida pela exposio a um antignio estranho.
Assim, o individuo imunizado tem um papel activo na resposta ao antignio. Individuos e
linfcitos que no encontraram um antignio particular so designados de naive, implicando
que sejam imunologicamente inactivos. Individuos que responderam a um antignio microbiano
e esto protegidos de subsequentes exposies ao micrbios so designados de imunes;

Imunidade passiva forma de imunidade que conferida a um individuo por transferncia de


soro ou linfcitos de um individuo especificamente imunizado. O recebedor de tal transferncia
torna-se imune a um antignio particular sem nunca ser exposto ou ter respondido a esse
antignio. um mtodo util para conferir imunidade rapidamente. Um exemplo a
transferncia de anticorpos maternais para o feto, que permite aos recm-nascidos combater
infeces antes de desenvolverem a habilidade de produzirem anticorpos.

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Principais Caractersticas da Resposta Imunitria Adaptativa


Ambas as respostas imunitrias mediadas por clulas ou humorais a antignios estranhos tm um
numero de propriedades fundamentais que reflectem as propriedades dos linfcitos que medeiam
essas respostas:

Especificidade e diversidade as respostas imunes so especificas para antignios distintos e


para diferentes pores de um nico complexo proteico, polissacarideo ou outras molculas. As
partes de tais antignios que so especificamente reconhecidas por linfcitos individuais so
desigandos epitopos. Esta fina especificidade existe porque linfcitos individuais expressam
receptores de membrana que so capazes de distinguir diferenas subtis na estrutura de
diferentes antignios. Clones de linfcitos com diferentes especificidades esto presentes em
individuos no-imunizados e so capazes de reconhecer e responder a antignios estranhos. O
numero total de especificidades de antignios dos linfcitos de um individuo extremamente
elevado. esta diversidade o resultado da variabilidade em estruturas dos locais de ligao a
antignios dos receptores nos linfcitos;

Memria exposio do sistema imunitrio a antignios estranhos aumenta a sua habilidade


para responder de novo a esse antignio. As respostas a exposies seguintes ao mesmo
antignio so normalmente mais rpidas, maiores e qualitativamente diferente da primeira. A
memria imunolgica ocorre parcialmente porque cada exposio ao antignio expande a
clonagem de linfcitos para antignios especificos. Em adio, estimulao de linfcitos naive
por antignios gera clulas de memria de longa vida. Estas clulas de memria apresentam
caracteristicas especiais que as torna mais eficientes na resposta e eliminao do antignio do
que os linfcitos naive. Os linfcitos B de memria produzem anticorpos que se ligam a
antignios com maior afinidades que os anticorpos produzidos nas respostas imunitrias
primrias, e os linfcitos T de memria reagem muito mais rapida e vigorosamente ao antignio
do que os linfcitos T naive;

Expanso clonal os linfcitos sofrem proliferao considervel a seguir exposio ao


antignio. Este termo refere-se ao aumento do nmero de clulas que expressam receptores
idnticos para o antignio. Este aumento no numero de clulas especificas para um antignio
permite que a resposta imunitria adaptativa ocorra rapidamente;

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Especializao o sistema imunitrio responde por vias distintas e especiais a diferentes


micrbios, maximizando a eficincia dos mecanismos de defesa antimicrobianos. Assim, a
imunidade humoral e a mediada por clulas so elicitadas por diferentes classes de micrbios
ou pelo mesmo micrbio em diferentes estgios da infeco (extracelular e intracelular), e cada
tipo de resposta imunitria protege o hospedeiro contra essa classe de micrbio. Mesmo dentro
das respostas humorais ou mediadas por clulas, a natureza dos anticorpos ou dos linfcitos T
que so gerados pode variar entre classes de micrbios;

Contraco e homeostasia todas as respostas imunes normais desvanescem com o tempo


aps a estimulao pelo antignio, sendo que o sistema imunitrio retorna ao seu estado basal,
o que se designa de homeostasia. A contraco da resposta imune ocorre largamente porque
respostas que so provocadas por antignios funcionam para eliminar os antignios, sendo
assim a eliminao o estimulo essencial para a sobrevivncia e activao dos linfcitos;

Auto-tolerncia uma das propriedades mais importantes do sistema imunitrio de todos os


individuos normais a sua habilidade para reconhecer, responder, e eliminar antignios
estranhos enquanto no reage com as substncias antignicas desse individuo. A ausncia de
resposta imunolgica chamado de tolerncia. A tolerncia a antignios do prprio, ou autotolerncia, mantida por vrios mecanismos, que incluem a eliminao de linfcitos que
expressam receptores especifico para alguns antignios do prprio e permitindo que linfcitos
encontrem outros antignios do prprio de modo a que leve inactivao funcional ou morte
de linfcitos auto-reactivos. Anormalidades nestes sistemas levam a respostas auto-imunes.

Estas caracteristicas da imunidade adaptativa so necessrios caso o sistema imunitrio esteja a


desempenhar as suas funes normais de defesa do hospedeiro:
Caracteristica
Especificidade
Diversidade
Memria
Expanso clonal
Especializao
Contraco e homeostasia
Auto-tolerncia

Significado Funcional
Assegura que antignios distinctos provoquem respostas especificas
Permite que o sistema imunitrio responda a uma garnde variedade de antignios
Leva ao aumento da resposta a exposies repetidas ao mesmo antignio
Aumenta o numero de linfcitos especificos para um antignio
Gera respostas que so ptimas para a defesa contra diferentes tipos de micrbios
Permite que o sistema imunitrio responda e novos antignios
Previne o dano do hospedeiro durante a resposta a antignios estranhos

Componentes Celulares do Sistema Imunitrio Adaptativo


As principais clulas do sistema imunitrio so os linfcitos, as clulas apresentadoras de antignios e as
clulas efectoras.
Os linfcitos so as clulas que reconhecem e respondem especificamente a antignios estranhos e so,
assim, mediadores da imunidade humoral e mediada por clulas. Existem distintas subpopulaes de
linfcitos que diferem na sua funo:

Linfcitos B so as nicas clulas capazes de produzir anticorpos. Reconhecem antignios


extracelulares (incluindo da superficie celular) e diferenciam-se entre plasmcitos que secretam
anticorpos, funcionando como mediadores da imunidade humoral;

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Linfcitos T as clulas da imunidade mediada por clulas. Reconhecem antignios de


micrbios intracelulares e destroem esses micrbios ou as clulas infectadas. Os linfcitos T no
produzem anticorpos. Os seus receptores de antignios so molculas de membrana distintas
mas estruturalmente relacionadas com anticorpos. Estas clulas apresentam uma especificidade
restrita para os antignios, reconhecem apenas antignios pptidicos ligados a proteinas do
hospedeiro codificadas por genes do complexo principal de histocompatibilidade (MHC) e que
so expressas na superficie de outras clulas. Como resultado, estas clulas T reconhecem e
respondem a clulas associadas pela superficie mas no a antignios soluveis;
Clulas naturalmente assassinas (NK) - envolvidas na imunidade inata contra virus e outros
micrbios intracelulares.

Os linfcitos T consistem em populaes funcionalmente distintas de clulas:

Linfcitos T helper (TH cells) em resposta a estimulao antignica, secretam proteinas


denominadas citocinas, cujas funes so estimular a proliferao e diferenciao de linfcitos T
e activar outras clulas, incluindo linfcitos B, macrfagos e outros leuccitos. Apresentam sua
superficie CD4;
Linfcitos T citotxicos (TC cell) matam clulas que produzem antignios estranhos, como
clulas infectadas por virus e outros micrbios intracelulares. Apresentam sua superficie CD8;
Linfcitos T reguladores alguns linfcitos T e funcionam principalmente de modo a inibir a
resposta imunitria.

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Diferentes classes de linfcitos podem ser distinguidas pela expresso de proteinas de superficie que
so chamadas molculas CD e numeradas:

A iniciao e desenvolvimento da resposta imunitria adaptativa requer que os antignios sejam


capturados e disponibilizados a linfcitos especificos. As clulas que tm este papel so as clulas
apresentadoras de antignio (APCs):

Clulas dendriticas as clulas apresentadoras de antignios mais especializadas e capturam


antignio microbianos que entram apartir do ambiente externo, os transportam para os orgos
linfoides e apresentam os antignios ao linfcitos T naive para iniciar respostas imunitrias;
Outros tipos de clulas funcionam como ACPs em diferentes estgios das respostas imunes
humoral ou mediada por clulas.

A activao dos linfcitos pelo antignio leva gerao de numerosos mecanismos que funcionam para
eliminar o antignio. Esta eliminao normalmente requer a participao de clulas que so designadas
de clulas efectoras porque elas ela medeiam o efeito final da resposta imunitria, que eliminar o
micrbio:

Linfcitos T activados, fagocitos mononucleares e outros leuccitos funcionam como clulas


efectoras em diferentes respostas imunitrias.

Os linfcitos e as APCs esto concentradas em orgos linfticos anatomicamente discretos, onde


interagem com um outro para iniciar respostas imunitrias. Os linfcitos esto tambm presentes no
sangue, e daqui podem recircular para tecidos linfticos e para locais perifricos onde houve exposio
ao antignio para o eliminar.

Disfuno Imunitria e suas Consequncias


Embora a resposta imunitria inata e adaptativa tenham mecanismos de aco diferentes, o sinergismo
entre elas essencial para uma resposta imune eficaz. No entanto, importante regular as vias de
resposta imune:

Evitar a activao excessiva de linfcitos e o dano de tecidos durante o desenvolvimento de uma


resposta protectora normal contra os micrbios;
Prevenir reaces inapropriadas contra auto-antignios.

Por vezes, o sistema imunitrio falha na proteco adequada do hospedeiro ou ento desvia as suas
actividades causando desconforto, doena debilitante ou mesmo morte. Existem vrias manifestaes
comuns de disfuno imune:

Alergia e asma;
Rejeio de tecidos transplantados ou do prprio hospedeiro;

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Doena auto-imune;
Imunodeficincia.

Alergia e asma
A alergia e a asma resultam de respostas imunitrias inapropriadas, normalmente a antignios comuns
como o plen, alimento ou plos de animais.
Reaces alrgicas constituem respostas baseadas principalmente na
classe de imunoglobulinas IgE. A exposio do antignio (ou alergnio)
provoca uma estimulao pela IgE da libertao imediata de molculas
que causam sintomas que vo desde espirros e dermatites a inflamao
dos pulmes num ataque asmtico:

Quando o anticorpo produzido aps o contacto com o alergnio


do tipo IgE, esta classe de anticorpo reage via a sua regio
constante com mastcitos;
A reaco subsequente do local de ligao do anticorpo com o
alergnio provoca a secreo de molculas que causam sintomas
alergnicos pelos mastcitos a que a IgE est ligada.

O desconforto de alergias comuns, como a plen de plantas, consiste


numa ou duas semanas de espirros e coriza (inflamao da mucosa nasal,
acompanhada de secreo e obstruo nasal), que parece trivial quando
comparado com problemas como cncro, paragem cardaca ou infeces
de tratamento continuo.
A asma constitui uma resposta alrgica mais sria, uma doena crnica
dos pulmes na qual a inflamao, mediada por antignios ambientais ou
infeces, causa dificuldade severa na respirao.
Resposta a transplantes
Quando o sistema imunitrio encontra clulas ou tecidos estranhos, ele responde fortemente para
proteger o hospedeiro de invasores. No entanto, em alguns casos, a transplantao de clulas ou de um
rgo de outro individuo, apesar de ser visto pelo sistema imunitrio como uma invaso, poder ser o
nico tratamento possivel para uma doena:

Como o sistema imunitrio ir atacar e rejeitar qualquer orgo transplantado que no


reconhece como prprio, uma barreira a este potencial tratamento vital;
Um risco adicional ao transplante est no facto de que qualquer clulas transplantada com
actividade imunolgica ir reconhecer o hospedeiro como estranho e reagir contra este, o que
pode ser uma resposta fatal.

Estas reaces de rejeio podem ser suprimidas por drogas, mas este tipo de tratamento suprime toda
a funo imunitria, pelo que o hospedeiro deixa de estar protegido pelo seu sistema imunitrio e
torna-se susceptivel a doenas infecciosas.

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Doena auto-imune
Em certos individuos, o sistema imunitrio funciona de modo errado por perda da sua auto-tolerncia, o
que permite um ataque imunitrio contra o hospediro. Esta condio, auto-imunidade, pode levar a
vrias doenas crnicas debilitantes e os sintomas diferem dependendo dos tecidos e orgos que esto
a ser sujeitos a ataque:

Esclerose mltipla devido a ataque auto-imune do crebro e do sistema nervoso central;


Doena de Crohn devido a ataque dos tecidos do intestino;
Artrite reumatide devido a ataque nas articulaes dos braos e pernas.

Estas respostas podem ser provocadas e sustentadas por factores genticos e ambientais.
Imunodeficincia
Se qualquer um dos componentes da imunidade inata ou adaptativa estiver deficiente devido a
anormalidades genticas, ou se qualquer funo imunitria perdida devido a dano por agentes
quimicos, fisicos ou biolgicos, ocorre imunodeficincia. Nestes casos, diz-se que o hospedeiro sofre de
imunodeficincia e a sua severidade depende do numero de componentes afectados:

Imunodeficincia selectiva quando apenas um tipo de imunoglobulina, IgA, est em falta;


Imunodeficincia combinada severa (SCID) afecta tanto os linfcitos T e B e, se no tratada,
resulta em morte por infeco na idade jovem. Normalmente, so os doentes que tm de viver
dentro de bolhas para sobreviver;
Sindrome da imunodeficincia adequirida (SIDA) a forma mais comum de imunodeficincia
e resulta da infeco com o retrovirus da imunodeficincia humana (HIV). Aqui os linfcitos T
so infectados e e destruidos pelo HIV, causando o colapso do sistema imunitrio.

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IMUNIDADE INATA

Imunidade Inata
A imunidade inata constitui a primeira linha de defesa contra infeces. Os mecanismos da imunidade
inata existentes antes do encontro com microorganismos so rapidamente activados pelos
microorganismos antes do desenvolvimento das respostas imunes adaptativas:

A imunidade inata , filogeneticamente, o mecanismos de defesa contra microorganismos mais


antigo e co-evolui com os microorganismos para proteger todos os organismos multicelulares,
incluindo plantas e insectos.

A imunidade inata tem duas importantes funes:

Resposta inicial ao microorganismos previne, controla ou elimina infeces do hospedeiro. A


inibio ou eliminao qualquer um dos mecanismos da imunidade inata aumenta
marcadamente a susceptibilidade a infeces, mesmo quando o sistema inume adaptativo est
intacto e funcional. Muitos microorganismos patognicos evoluiram estratgias para resistir
imunidade inata e essas estratgias so cruciais para a sua virulncia. Na infeco por tais
microorganismos, as defesas da imunidade inata devem manter a infeco controlada at que
as respostas imunes adaptativas sejam activadas. As respostas imunes adaptativas, sendo mais
potentes e especializadas, so capazes de eliminar microorganismos que resistem aos
mecanismos de defesa inatos;

Estimula as respostas imunes adaptativas e influencia a sua natureza assim, optimiza as


respostas imunes adaptativas contra diferentes tipos de microorganismos. A imunidade inata
no serve s como um mecanismo de defesa antes da infeco, mas tambm fornece o aviso
de que uma infeco est presente contra a qual uma resposta imune adaptativa ser
subsequentemente montada. Ainda, diferentes componentes da resposta imune inata
normalmente reagem de modos distintos a diferentes microorganismos e, portanto, influencia o
tipo de resposta adaptativa que se desenvolve.

Alguns componentes da imunidade inata funcionam continuadamente, a todo o momento, mesmo


antes da infeco. Estes componentes incluem barreiras entrada microbiana fornecidas pelas
superficies epiteliais, como a pele e os epitelios dos tractos gastrointestinal e respiratrio. Outros
componentes so normalmente inactivos mas esto prontos a responder rapidamente na presena de
microorganismos, como os fagocitos e o sistema complemento.

Caracteristicas do Reconhecimento Imune Inato


A especificidade do sistema imunitrio inato para produtos microbianos difere da especificidade do
sistema imune adaptativo em vrios aspectos:
1. Os componentes da imunidade inata reconhecem estruturas que so carateristicas de
patognios microbianos que no esto presentes nas clulas do hospedeiro o sistema imune
inato reconhece apenas um numero limitado de produtos microbianos, enquanto o sistema
imune adaptativo capaz de reconhecer uma gama mais ampla de substncias estranhas
mesmo que sejam ou no produtos microbianos:
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As substncias microbianas que estimulam a imunidade inata so desiganados padres


moleculares associados a patognios (PAMPs), e os receptores que ligam essas
estruturas conservadas so designados receptores de reconhecimento de padres;
Diferentes classes de microorganismos expressam diferentes PAMPs. Essas estruturas
incluem cidos nucleicos que so nicos dos microorganismos (RNA de cadeia dupla
encontrado em virus), caracteristicas de proteinas encontradas em microorganismos
(iniciao por N-formilmetionina, tipico de proteinas bacterianas) e lipidos e
carboidratos complexos que so sintetizados por microorganismos e no pelas clulas
do hospedeiro (lipopolissacarideos em bactrias gram-positivo e oligossacarideos ricos
em manose encontrados nos microorganismos e no nos mamiferos);
Devido a esta especificidade por esturutras microbianas, o sistema imune inato capaz
de distinguir clulas do hospedeiro de clulas estranhas no pertencentes ao
hospedeiro.

2. O sistema inume inato reconhece produtos microbianos que so normalmente essenciais para
a sobrevivncia dos microorganismos - esta adaptao do hospedeiro importante porque
assegura que os alvos da imunidade inata no possam ser descartados pelos microorganimos
num esforo para escapar ao reconhecimento pelo hospedeiro. Em contraste, os
microorganismos podem mutar ou perder alguns dos antignios que so reconhecidos pelo
sistema imune adaptativo, permitindo assim que os microorganismos escapem defesa pelo
hospedeiro sem compremeterem a sua sobrevivncia;
3. As moleculas de reconhecimento de padres da imunidade inata incluem receptores de
reconhecimento de padres expressos na superficie ou no interior da clula, e proteinas
soluveis no sangue e no fluido extracelular os receptores associados clula podem ter duas
funes principais, traduzindo sinais que activam funes antimicrobianas e pro-inflamatorias
na clula em que so expressos e podem facilitar o uptake de microorganimos pela clula.
Receptores soluveis so responsveis por facilitar a eliminao de microorganismos do sangue,
estimulando o seu uptake pelas clulas ou activando mecanismos extracelulares de morte dos
microorganismos;
4. Os receptores de reconhecimento de padres do sistema imune inato so codificados no DNA
de germline em contraste, linfcitos T e B, os principais componentes da imunidade inata,
mudam o rearranjo de genes somtico para gerar os seus receptores de antignios. Como
apenas poucos receptores podem ser codificados na germline, o sistema imune inato apresenta
um reportrio limitado de especificidades. Ainda, enquanto o sistema imune adaptativo
consegue distinguir entre antignio de um microorganismo, a imunidade inata consegue
destinguir apenas classes de microorganismos;
5. O sistema imune inato tambm consegue reconhecer clulas do hospedeiro danificadas ou
sob stress clulas stressadas ou danificadas normalmente expressam molculas no
encontradas em abundncia em clulas saudveis, sendo assim facilmente reconhecidas pelo
sistema imune inato. Clulas que so directamente infectadas ou que esto na vizinhana de
outras clulas infectadas podem aumentar a expresso de molculas deste tipo. Deste modo, a
imunidade inata pode contribui para a eliminao de clulas que albergam microorganismos,
mesmo se produtos microbianos no forem expostos na superificie da clula.
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Receptores de
Reconhecimento de Padres
Receptores toll-like

Lectinas tipo C

Receptores scavenger
NLRs
Receptores N-formil Met-LeuPhe
Moleculas de
Reconhecimento Soluveis
Pentraxinas

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Localizao
Membrana plasmtica e membranas
endossomais de clulas dendriticas,
fagocitos, endoteliais e muitos outros
tipos de clulas
Membrana plasmtica dos fagcitos

Membrana plasmtica dos fagcitos


Citoplasma dos fagcitos e de outras
clulas
Mambrana plamstica dos fagcitos
Localizao
Plasma

Colectinas

Plasma;

Ficolinas

Alvolos
Plasma

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Imunologia

Exemplos Especificos e os seus Ligandos PAMP


TLRs 1-9: vrias molculas virais e microbianas

Receptor de manose: carboidratos na superficie


microbiana com terminais de manose e frutose;
Dectina: glicanos presentes nas paredes celulares
dos fungos
CD36: diacilglicerideos microbianos
Nod1, Nod2 e NALP3: peptidoglicanos microbianos
FPR e FRKL1: peptidos contendo residuos Nformilmetionil
Exemplos Especificos e os seus Ligandos PAMP
Proteinasreactivas C (CRP): fosforilcolina e
fosfatidiletanolamina microbianas
Lectina de ligao manose (MBL): carboidratos
com terminao em manose e frutose;
Proteinas surfactantes SP-A e SP-D: vrias estrutras
microbianas
Ficolina: componentes N-acetilglucosamina e cido
lipoteicoico das paredes celulares das bactrias
gram-positivo
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Imunologia

Receptores de Reconhecimento de Padres


Uma grande variedade de tipos de clulas expressa receptores de reconhecimento de padres e,
portanto, participam na resposta imune inata. Mesmo assim, outras clulas tambm os expressam,
mesmo no pertencendo resposta imune inata. As clulas que os expressam so:

Neutrfilos;
Macrofagos;
Clula dendriticas;
Clulas endoteliais;
Clulas epiteliais;
Linfcitos;
Etc

Estes receptores de reconhecimento de padres associados a


clulas esto presentes na superficie da clula, em vesiculas
endossomais e no citoplasma prontos a reconhecer
microorganismos em qualquer uma dessas localizaes:

Receptores de reconhecimento de padres esto ligados a


vias de trasduo do sinal intracelulares que activam vrias
respostas celulares, incluindo a produo de molculas que
promovem a inflamao e a defesa contra o
microorganismo.

Receptores toll-like (TLRs)


Os TLRs so uma familia evolucionalmente conservada de receptors de reconhecimento de padres
expressa em vrios tipos de clulas que exercem papeis essenciais nas respostas imunes inatas aos
microorganismos:

Toll foi originalmente identificada como um gene de Drosophila envolvido no estabelecimento


do eixo dorso-ventral durante a embriognese da mosca, mas subsequentemente foi tambm
descoberto que as proteinas Toll tambm medeiam respostas antimicrobianas;
Existem onze TLRs humanos diferentes, desigandos de TLR1 a 11;
Todos estes receptores contm um dominio homlogo a receptor Toll/IL-1 (TIR) na sua regio
citoplasmtica, que essencial na sinalizao.

Os principais tipos de clulas que expressam TLRs incluem:

Macrfagos;
Clulas dendriticas;
Neutrfilos;
Clulas epiteliais da mucosa;
Clulas endoteliais.

Os TLRs dos mamiferos esto envolvidos na resposta a vrios tipos divergentes de molculas que so
normalmente expressas por clulas microbianas mas no dos mamferos:

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TLRs so encontradas na superficie celular e nas membranas intracelulares, e so assim capazes


de reconhecer microorganismos em diferentes localizaes celulares;
Alguns dos produtos microbianos que estimulam a sinalizao via TLR incluem LPS bacterianos
gram-negativo, peptidoglicanos bacterianos gram-positivo, lipoproteinas bacterianas, cido
lipoteicoico, lipoarabinomannan, zymosan, a proteina microbiana flagelar fladelina, proteina de
fuso do virus respiratrio syncytial, motivos CpG no metilados, RNA de cadeia dupla, RNA de
cadeia simples;
TLRs 3, 7, 8 e 9 so maioritariamentente expressos dentro das clulas no reticulo
endoplasmtico (ER) e nas membranas endossomais, onde detectam cidos nucleicos
microbianos.

Apesar dos ligandos cidos nucleicos reconhecidos pelos TLRs no serem todos produzidos unicamente
por microorganismos, os cidos nucleicos produzidos pelas clulas dos hospedeiros no se encontram
normalmente nos endossomas, ou seja, os TLRs 3, 7, 8 e 9 destinguem substncias prprias de
estranhas baseado na localizao celular dos ligandos a que se ligam.
Vrias vias de sinalizao ligam o reconhecimento por TLR de ligandos microbianos com a activao de
factors de transcrio, resultando na expresso de genes importantes para a resposta imune inata:

Essas vias de sinalizao so iniciadas pela ligao do ligando ao TLR na superficie da clula, ou
no reticulo endoplasmtico ou nos endossomas, levando dimerizao das proteinas do TLR;

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A dimerizao do TLR acompanhada pelo recrutamento de proteinas adaptadoras contendo


um dominio TIR, que facilitam o recrutamento e a activao de vrias proteinas cinases, levando
activao de diferentes factores de transcrio.

Os principais factores de transcrio que so activados pelas vias de sinalizao dos TLRs so:

Factor nuclear KB(NF-KB) e/ou AP-I estimulam a expresso de genes que codificam vrias
molculas da resposta imune inata, incluindo citocinas inflamatrias (p. e. TNF e IL-1),
quimiocinas (p. e. CCL2) e molculas de adeso endotelial (p. e. E-selectina);
IRF-3 e IRF-7 promovem a expresso de genes do interfero, importante para a resposta
imune inata aos virus.

O uso de diferentes proteinas adaptadoras por diferentes TLRs fornece alguma variabilidade no tipo de
resposta celular que estimulada por produtos microbianos distintos.

Componentes do Sistema Imune Inato


O sistema imune inato consiste em:

Barreiras epiteliais;
Clulas dos tecidos e circulantes;

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Proteinas plasmticas.

As principais clulas efectoras do sistema imune inato so:

Neutrfilos;
Fagcitos mononucleares;
Clulas naturalmente assassinas (NK).

Estas clulas atacam microorganismos que ultrapassaram as barreiras epiteliais e entraram nos tecidos
ou na circulao. Cada um destes tipos de clulas tem um papel importante na resposta aos
microorganismos. Algumas das clulas da imunidade inata, principalmente macrfagos e clulas
naturalmente assassinas, secretam citocinas que activam fagcitos e estimulam a reaco celular da
respsota imune, designada inflamao:

A inflamao consiste no recrutamento de leuccitos e extravaso de vrias proteinas


plasmticas para o local de infecco, e activao dos leuccitos e de proteinas para a
eliminao do agente infeccioso;
A inflamao tambm capaz de danificar tecidos normais.

Se os microorganismos entrarem na circulao, so combatidos por vrias proteinas plasmticas. As


principais proteinas plasmticas da imunidade inata so:

Proteinas do sistema complemento;


Outras proteinas plasmticas que reconhecem estruturas microbianas, como a lectina que liga
manose.

Barreiras Epiteliais
As superficies epiteliais intactas formam barreiras intactas entre
os microorganismos no ambiente externo e os tecidos do
hospedeiro.

As trs principais interfaces entre o ambiente e o


hospedeiro so a pele e as superificies mucosas dos
tractos gastrointestinal e respiratrio;
Todas as trs esto protegidas pelo epitlio continuo que
previnem a entrada de micoorganismos, e a perda da sua
integridade comummente leva a infeco.

O epitlio, tal como os leuccitos, produz pptidos que apresentam propriedades anti-microbianas.
Existem duas familias estruturalmente distintas de peptidos anti-microbianos:
1. Defensinas pequenos pptidos catinicos, com cerca de 29 a 34 aminocidos de
comprimento, que contm trs ligaes dissulfito intracadeia. Trs familias de defensinas,
designadas , e , so distinguidas pela localizao dessa ligaes. As defensinas so
produzidas pelas clulas epiteliais das superficies mucosas e pelos leuccitos granulcitos,
incluindo neutrfilos, clulas NK e linfcitos T citotxicos. O conjunto das molculas de
defensinas produzidas difere entre diferentes tipos de clulas. As principais produtoras de
defensinas so as clulas de Paneth nas criptas do intestino grosso. As defensinas destas clulas
servem para limitar a quantidade de microorganismos no lumen. As defensinas so tambm
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produzidas noutros locais no intestino, nas clulas da mucosa respiratria e na pele. Algumas
defensinas so constitutivamente produzidas por alguns tipos de clulas, mas a sua secreo
aumentada por citocinas ou produtos microbianos. As aces protectoras das defensinas
incluem:
Toxicidade directa aos microorganismos, incluindo bactrias e fungos;
Activao de clulas envolvidas na resposta inflamatria aos microorganismos.
2. Catelicidinas so expressas pelos neutrfilos e por vrias barreiras epiteliais,incluindo a pele,
as clulas mucosas gastrointestinais e respiratrias. Uma proteina precursora da catelicidina de
18 kD transcrita e proteoliticamente clivada em dois pptidos, cada um com funes
protectoras. Tanto a sintese do percursor como a clivagem proteolitica so estimuladas pelas
citocinas inflamatrias e por produtos microbianos. O fragmento N-terminal tem actividade
antimicrobianas. E o C-terminal apresenta multiplas funes que servem para proteco contra
a infeco, que incluem:
Toxicidade directa a uma gama larga de microorganismos;
Activao de vrias respostas nos leuccitos e noutros tipos de clulas que promovem a
erradicao de microorganismos;
Apresenta um dominio (LL-37) que se liga e neutraliza LPS, que um componente txico
da parede celular externa das bactrias gram-negativo.
As barreiras epiteliais e as cavidades serosas contm certos tipos de linfcitos, incluindo linfcitos T e B1 (um subgrupo de clulas B) intra-epiteliais, que reconhecem e respondem a microorganismos que
encontram nesses locais. Uma terceira populao de clulas presente nos epitlios e nas cavidades
serosas so os mastcitos, que respondem directamente a produtos microbianos secretando citocinas e
mediadores lipidos que promovem a inflamao.
Fagcitos e Resposta Inflamatria
As clulas efectoras mais numerosas do sistema immune inato so clulas derivadas da medula ssea
que circulam no sangue e migram para os tecidos. Estas incluem:

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Clulas da linhagem mielide incluindo os neutrfilos, fagcitos mononucleares e clulas


dendriticas;
Clulas da linhagem linfoide incluindo as clulas naturalmente assassinas, as clulas
dendriticas e os linfcitos T e B.

Os fagcitos, incluindo os neutrfilos e os macrfagos, so clulas cuja a funo primria consiste na


identificao, ingesto e destruio dos microorganismos. As suas respostas funcionais na defesa do
hospedeiro consiste numa sequncia de passos:

Recrutamento activo de clulas para o local de infeco;


Reconhecimento de microorganismos;
Ingesto de microorganismos pelo processo de fagocitose;
Destruio dos microorganismos ingeridos;
Produzem citocinas, que apresentam vrias funes nas respostas imunes inata e adaptativa e
na reparao de tecidos.

Estas funes efectoras dos fagcitos so importantes no apenas na imunidade inata, mas tambm nas
fases efectoras das respostas imunes adaptativas:

Na imunidade mediada por clulas T, os linfcitos T estimulados por antignios conseguem


activar macrfagos para que estes se tornem mais eficientes na fagocitose;
Na imunidade humoral, o revestimento por anticorpos, ou opsonizao, dos micrbios promove
a fagocitose destes pelos macrfagos, pois estes ultimos apresentam receptores de superficie
para os anticorpos.

Granulcitos
Os granulcitos so classificados em neutrfilos, eosinfilos ou
basfilos com base na morfologia celular e nas caracteristicas da
colorao citoplasmtica:

Os neutrfilos apresentam um ncleo multilobado e um


citoplasma granulado que colora tanto com coloraes
acidicas como bsicas;
Os eosinfilos apresentam um ncleo bilobado e um
citoplasma granulado que colora com a eosina
(vermelho), uma colorao acidica;
Os basfilos, apresentam um ncleo lobado e um
citoplasma ricamente granulado que colora de azul
devido colorao bsica azul de metileno.

Tanto os neutrfilos como os eosinfilos so fagcitos, enquanto


os basfilos no o so.
Os neutrfilos, que constituem 50%-70% dos leuccitos
circulantes, so muito mais numerosas que os eosinfilos (1%3%) ou os basfilos (-1%).

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Neutrfilo

Eosinfilo

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Basfilo

Os neutrfilos, tambm designados leuccitos polinucleares, so a populao de leuccitos circulantes


mais abundante e medeiam as primeiras fases das respostas inflamatrias:

Circulam como clulas esfricas com cerca de 12 a 15/lm de dimetro com numerosas projeco
da membrana;
O seu ncleo segmentado em trs a cinco lbulos ligado, da a designao de leuccito
polimorfonuclear.

O citoplasma dos neutrfilos apresenta grnulos de dois tipos:


1. Grnulos especificos cheios de enzimas, como lisozimas, colagenase e elastase. No coloram
fortemente tanto como coloraes acidicas ou bsicas (eosina e hematoxilina,
respectivamente), que distingue os grnulos dos neutrfilos dos dos eosinfilos e basfilos,
respectivamente;
2. Grnulos azurfilos lisossomas que contm enzimas e outras substncias microbicidas,
incluindo defensinas e catelicidinas.
Os neutrfilos so produzidos na medula ssea e surgem de uma linhagem comum com os fagcitos
mononucleares, a linhagem mielide:

A produo de neutrfilos estimulada pelo granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF);


Um humano adulto produz mais de 1 x 1011 neutrfilos por dia, sendo que cada um circula no
sangue por apenas cerca de 6 horas.

Os neutrfilos migram para os locais de infeco poucas horas depois da entrada dos microorganismos.
Mas se um neutrfilo no for recrutado para o local de infeco nesse periodo, ele sofre apoptose e
normalmente fagocitado por macrfagos residentes no fgado ou no bao. Mesmo depois de entrarem
nos tecidos, os neutrfilos funcionam durante poucas horas e depois morrem.
Os eosinfilos, como os neutrfilos, so clulas fagociticas mveis que podem migrar do sangue para os
espaos entre os tecidos. O seu papel fagocitico menos importante que o dos neutrfilos, e parecem
apresentar papel importante na defesa contra organismos parasitas:

A secreo dos conteudos dos grnulos eosinfilos danificam a membrana do parasita.

Os basfilos so granulcitos no fagocitrios que funcionam pela libertao de substncias


farmacologivamente activas dos seus granulos citoplasmticos:

Estas substncias tm papel importante em certas respostas alrgicas.

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Fagcitos Mononucleares
O sistema dos fagcitos mononucleares consiste em clulas que apresentam uma linhagem comum
com a dos granulcitos, linhagem mielide, e a sua funo primria a fagocitose, apresentando um
papel importante na imunidade inata e adaptativa.
As clulas do sitema fagocitrio mononuclear originam-se na medula ssea, circulam no sangue e
maturam-se, tornando-se activas em vrios tecidos:

Moncito o primeiro tipo de clula que entra no sangue perifrico depois de deixar a
medula, estando diferenciada de modo incompleto. Apresenta 10 a 15/lm de dimetro e
apresenta um ncleo em forma de ferredura e um citoplasma fracamente granular contendo
lisossomas, vacuolos fagociticos e filamentos do citoesqueleto;
Macrfago moncito maduro que se forma quando este entra nos tecidos. Os macrfagos
podem assumir diferentes formas morfolgicas depois da activao por vrios estimulos
externos, como os microorganismos. Alguns desenvolvem um citoplasma abundante e so
designados clulas epitelioides devido sua semelhana com as clulas epiteliais da pele.
Macrfagos activados podem fundir-se formando clulas gigantes multinucleadas.

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A diferenciao dos moncitos em macrfagos tecidulares ocorre cerca de 8h aps a libertao dos
moncitos na circulao quando estes entram nos tecidos e envolve um nmero de alteraes:

A clula de tamanho 5 a 10 vezes;


Os organelos intracelulares aumentam em nmero e complexidade;
Aumenta a habilidade fagocitica, produzindo maiores niveis de enzimas hidroliticas e secretando
uma varieade de factores soluveis.

Os macrfagos esto dispersos por todo o corpo. Alguns tomam residncia num tecido particular,
desigando-se macrfagos residentes, enquanto outros se mantm moveis e so designados de
macrfagos livres e viajam atravs dos tecidos por movimentos amebide.
Clulas do tipo macrfago apresentam diferentes funes me diferentes tecidos e so designadas de
acordo com o tecido onde se localizam:

Macrfagos alveolares no pulmo;


Histicitos nos tecidos conjuntivos;
Clulas de Kupffer no fgado;
Clulas mesangiais no rim;
Clulas da microglia no crebro;
Osteoclastos no osso.

Apesar de normalmente se encontrarem num estado de repouso, os macrfagos so activados por uma
variedade de estimulos activadores no decurso da resposta imune:

A fagocitose de um antignio particular funciona como o estimulo activante inicial;


A actividade do macrfago pode tambm ser ainda aumentada por citocinas secretadas por
linfcitos TH activados, por mediadores da resposta inflamatria e por componentes da parede
bacteriana;
Um dos activadores de macrfagos mais potentes o interfero gama (IFN-) secretado pelos
linfcito TH activados.

Os macrfagos activados so mais eficientes que os que se encontram em repouso na eliminao de


potenciais patognios, o que se deve ao facto de exibirem:

Maior actividade fagocitica;


Maior habilidade para matar microorganismos ingeridos;
Maior secreo de mediadores inflamatrios;
Maior habilidade para activar linfcitos T;
Secretam vrias proteinas citotxicas que ajudam a eliminar uma gama alargada de patognios,
incluindo clulas infectadas com virs, clulas de tumores e bactrias intracelulares;
Expressam elevados niveis de molculas do MHC classe II, permitindo que funcionem mais
efectivamente como clulas apresentadoras de antignios;
Macrfagos e linfcitos TH facilitam mutuamente a activao de ambos durante a resposta
imune.

Devido ao facto de normalmente serem residentes num tecido, os macrfagos so as clulas do sistema
imunitrio com maior tempo de vida, mantendo-se normalmente inactivos, enquanto os neutrfilos
vivem cerca de 6 horas e esto prontos a actuar.
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Clulas Dendriticas
As clulas dendriticas apresentam um papel importante nas respostas inatas a infeces e na ligao
entre as respostas imunes inata e adaptativa:

Apresentam longas projeces membranares e capacidade fagociticas, e so amplamente


distribuidas pelos tecidos linfides, epitlio mucoso e parenquima dos orgos;
So derivadas de precursores da medula ssea e as mais relacionadas em linhagem com os
fagcitos mononucleares;
Expressam receptores de reconhecimento de padres e respondem aos microorganismos pela
secreo de citocinas.

Existem vrios tipos de clulas dendriticas, apesar da maior


parte das clulas dendriticas maduras apresentarem a mesma
funo principal, a apresentao de antignios aos linfcitos TH.
so conhecidos quatro tipos de clulas dendrtiticas:

Clulas de Langerhans;
Clulas dendriticas intersticiais;
Clulas dendriticas mielides;
Clulas dendriticas linfides.

Cada um dos tipos de clulas dendriticas origina-se de clulas


estaminais hematopoiticas por diferentes vias e em diferentes
localizaes, podendo descender tanto da linhagem mielide
como linfide.
Apesar das sua diferenas, todas elas constitutivamente expressam elevados niveis de molculas do
MHC classe II e membros da familia co-estimulante B7. Assim, so clulas apresentadoras de antignios
mais potentes que os macrfagos e as clulas B, pois estes ultimos precisam de ser activados antes de
funcionarem deste modo:

Formas imaturas de cada um destes tipos de clulas dendriticas adquirem antignior por
fagocitose ou endocitose;
O antignio processado e as clulas dendrtiticas maduras apresentam-no a linfcitos TH;
Aps a invaso microbiana ou durante a inflamao, formas maduras ou imaturas de clulas de
Langerhans e celulas dendriticas intersticiais migram para nodos linfticos de drenagem onde
apresentam os antignios a clulas TH, processo essencial para a iniciao da resposta por estas
clulas chave.

Outro tipo de clulas dendrtiticas, as clulas dendriticas foliculares, no se originam nas medula ssea
e apresentam uma funo diferente das clulas dendriticas com origem na mdeula:

No expressam colculas de MHC classe II, no funcionando como clulas apresentadoras de


antignios para a activao das clulas TH;
Localizadas exclusivamente em estruturas organizadas dos nodos linfticos designados foliculos
linfticos, que so ricos em clulas B;

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Expressam altos niveis de receptores de membranas para anticorpos, o que permite a ligao de
complexos anticorpo-antignio, assim, a interaco de clulas B com este antignio ligado pode
ter efeitos importantes na resposta dos linfcitos B.

Recrutamento de Leuccitos para o Local de Infeco


Os neutrfilos e os moncitos so recrutados do sangue para os tecidos pela ligao a molculas de
adeso nas clulas endoteliais e por quimiotaxia em resposta a quimio-atraidores produzidos em
resposta infeco:

Na ausncia de infeco, estes leuccitos circulam no sangue e no migram para os tecidos;


O seu recrutamento para locais de infeco um processo com multiplos passos envolvendo a
adeso de leuccitos circulantes superficie luminal das clulas endoteliais nas vnulas pscapilares e migrao atravs da parede do vaso.

Cada passo orquestrado por diferentes tipos de molculas:


1. Rolagem mediada por selectinas em resposta aos microorganismos e a citocinas produzidas
pelas clulas que encontram os microorganismos (e. g. macrfagos), as clulas endoteliais que
revestem as vnulas ps-capilaresno local de infeco rapidamente aumentam a expresso de
proteinas designadas selectinas sua superficie. As citocinas mais importantes na activao do
endotlio so o tumor necrosis factor (TNF) e a interleucina-I (IL-I). Os dois tipos de selectinas
expressas pelas clulas endoteliais so a P-selectina, que armazenada em grnulos
citoplasmticos e rapidamente redistribuida pela superficie em resposta a produtos microbianos
e citocinas, e a E-selectina, que sintetizada em resposta a IL-I e TNF como a produtos
microbianos, e expressa na superficie celular em 1 a 2 horas. Um terceira selectina,
desiganada L-selectina (CD62L), expressa nos linfcitos e outros leuccitos e funciona como
receptor para linfcitos T naive e clulas dendriticas nos nodos linfticos, mediando a sua
ligao ao endotlio das vnulas. Nos neutrfilos, funciona para a ligao destas clulas a clulas
endoteliais que foram activadas por citocinas (TNF, IL-I e IFN-) encontradas nos locais de
infeco. Os leuccitos expressam L-selectina e os ligandos carboidratos para as P- e E-selectinas
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nas pontas das sua microvilosidades, facilitando interaces com molculas na superficie das
clulas endoteliais. As interaces selectina-ligando so de baixa afinidade e facilmente
quebradas pela fora do sangue que flui. Como resultado, os leuccitos repetitivamente
deligam-se e ligam-se superficie endotelial. Este abrandamento dos leuccitos no endotlio
permite o prximo passo de estimulos;
2. Activao das integrinas mediada por quimiocinas quimiocinas so pequenas citocinas
pptidicas produzidas por macrfagos tecidulares, clulas endoteliais e outros tipos de clulas
em resposta a produtos microbianos e IL-I e TNF, citocinas associadas a infeces. A principal
funo das quimiocinas estimular a quimotaxia das clulas. As quimiocinas produzidas num
local de infeco so transportadas para a superficie luminal das clulas endoteliais das vnulas
ps-capilares, onde se ligam da glicosaminoglicanos, e so apresentadas em em altas
concentraes. Neste local, as quimiocinas ligam-se a receptores especificos de quimiocinas nas
superficie do leuccito em rolagem. Os leuccitos expresso uma familia de molculas de
adeso designadas integrinas, que esto num estado de baixa afinidade nas clulas inactivas e
no efectivos na mediao de interaces de adeso. Duas consequncias da sinalizao pelo
receptor de quimiocinas so o aumento da afinidade das integrinas dos leuccitos e
agrupamento membranar de integrinas, resultando num aumento da fora da ligao mediada
por integrinas dos leuccitos superfici endotelial;
3. Adeso estvel dos leuccitos ao endotlio mediada por integrinas em paraleo com a
activao das integrinas e a sua converso ao estado de alta afinidade, as citocinas (TNF e IL-I)
tambm aumentam a expresso endotelial de ligandos de integrina, principalmente vascular cell
adhesion molecule-1 (VCAM-1, o ligando da integrina VLA-4) e intercellular adhesion molecule-1
(ICAM-1, o ligando para as integrinas LFA-1 e Mac-1). O resultado final destas alteraes a
ligao firme do leuccito ao endotlio, sendo que o seu citoesqueleto se reorganiza e a clula
se espalha pela superficie endotelial;
4. Migrao dos leuccitos pelo endotlio (diapedse) as quimiocinas actuam depois nos
leuccitos aderentes e estimulam as clulas a migrar atravs dos espaos inter-endoteliais ao
longo de um gradiente quimico de concentrao das quimiocinas (i. e., para o local de infeco).
Outras proteinas expressas nos leuccitos e clulas endoteliais, principalmente CD31, tm um
papel importante nesta migrao atravs do endotlio. Os leuccitos produzem enzimas que
permite a sua passagem atravs das paredes dos vasos, e acumulam-se nos tecidos
extravasculares volta dos microorganismos infecciosos.
A acumulao dos leuccitos nos tecidos o principal componente da inflamao:

tipicamente ilicitada pelos microorganismos, mas tambm pode ser observada na resposta a
uma variedade de estimulos no infecciosos;
Existe alguma especificidade no processo de migrao de leuccitos baseado na expresso de
combinaes distinctas de molculas de adeso e receptores de quimiocinas em neutrfilos e
moncitos;
Padres temporariamente distintos de expresso de molculas de adeso e quimiocinas nos
locais de infeco tipicamente resulta no recrutamento inicial de neutrfilos (horas a dias)
seguida do recrutamento mais tardio de moncitos (dias a semanas);

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Outras combinaes de molculas de adeso e de quimiocinas controlam a ligrao de linfcitos


para os tecidos linfides ou no linfides.

Fagocitose de Microorganismos
Os neutrfilos e os macrfagos ingerem microorganismos em vesiculas pelo processo de fagocitose:

Processo activo, dependente de energia de englobamento de particulas de grandes dimenses


(> 0,5 m de dimetro);
A morte dos microorganismos ocorre em vesiculas formadas pela fagocitose, estando assim o
mecanismos de eliminao, que potencialmente poderia danificar o fagcito, esto isolados do
resto da clula.

O primeiro passo o reconhecimento do microorganismo pelo fagcito:

Os neutrfilos e os macrfagos so constantemente expostos a clulas normais, que ignoram,


mas ingerem especificamente vrios microorganismos e particulas;
Esta especificidade deve-se ao facto de neutrfilos e macrfagos expressarem receptores que
reconhecem especificamente microorganismos, e que esto funcionalmente ligados ao
mecanismo de fagocitose;
Alguns destes receptores so receptores de reconhecimento de padres, incluindo lectinas do
tipo-C e receptores scavenger. Receptores de reconhecimento de padres podem contribuir
para a fagocitose de apenas microorganismos que expresso padres moleculares particulares,
como a manose;
Outro grupo de receptores nos fagcitos reconhecem certas proteinas do hospedero que
revestem os microorganismos. Estas proteinas so designadas opsoninas, e incluem anticorpos,
proteinas do complemento e lectinas, e cobrem o microorganismo alvo para fagocitose no
processo designado de opsonizao.

Os fagcitos apresentam receptores que se ligam especialmente a anticorpos, molculas do


complemento e lectinas com alta afinidade. Estes receptores so criticos para a fagocitose da maior
parte dos microorganismos pelo processo de opsonizao:
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Um dos processo mais eficientes de opsonizao de


microorganismos o seu revestimento com anticorpos. Os
anticorpos apresentam locais de ligao ao antignio numa
extremidade e na outra extremidade, desiganada regio Fc,
o anticorpo interage com clulas efectoras e molculas do
sistema imune inato;
Os fagcitos expressam receptores Fc de alta afinidade
(FcyRI) especificos para um nico tipo de anticorpo, o IgG.
Assim, se um individuo responder a uma infeco com a
produo de IgG contra agentes microbianos, a molcula de
IgG liga-se a esse antignio, a extremidade Fc interage com
FcyRI nos fagcitos e o resultado final a fagocitose eficiente dos microorganismos;
Como diferentes anticorpos podem ser produzidos pela ligao de diferentes produtos
microbianos, a opsonizao mediada por anticorpos contribui para a fagocitose de uma larga
gama de microorganismos em comparao com o reconhecimento de padres;
Apesar dos anticorpos IgG serem essenciais para uma fagocitose eficiente de vrios organismos,
eles so de facto um produto do sistema imune adaptativo (linfcitos B) que se envolve com as
clulas efectoras do sistema imune inato (fagcitos) para que estas desempenham as sua
funes;
Vrios receptores de reconhecimento de padres soluveis e molculas efectoras do sistema
imune inato, incluindo complemento e lectinas, so opsoninas importantes, sendo que esto
presentes no sangue e se ligam a microorganismos facilitando a fagocitose pelos fagocitos que
expressam receptores para elas.

A opsonizao aumenta bastante o grau de ligao da particula a fagocitar ao fagcito, sendo que o
reconhecimento de anticorpos leva a um menor aumento relativamente ao do complemento. No
entanto, a combinao de ambos leva a um elevado aumento da ligao, logo da actividade fagocitica.

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Quanto aos receptores de anticorpos ou do complemento, estes diferem:

Receptores Fc dependentes de cinase de tirosina, activam cdc42 e rac, e a inflamao envolve


radicais de oxignio, TNF, IL-1 e IL-6;
Receptores do complemento independentes de cinases de tirosina, activam rho mas no
cdc42 ou rac, e no provocam inflamao.

Receptores Fc

Receptores do Complemento

Assim que um microorganismo ou particula se liga ao receptor no fagcito, a membrana plasmtica na


regio do receptor comea a redistribuir-se e extende projeces em volta do microorganismo ou
particula:

Quando a membrana saliente se extende para alm do dimetro da particula, o topo das
salincias fecha-se e forma-se uma vesicula intracelular fagossoma;
Esta vesicula contm a particula estranha ingerida e distancia-se da membrana plasmtica;
Os receptores na superficie da membrana tambm transmitem sinais activadores que
estimulam as actividade microbicidas dos fagcitos;
Os micoorganismos fagocitados so destruidos e, ao mesmo tempo, so produzidos pptidos a
partir de proteinas microbicidas e apresentados aos linfcitos T para que estes iniciem respostas
imunes adaptativas.

Destruio de Microorganismos Fagocitados


Os neutrfilo e macrfagos activados matam microorganismos fagocitados pela aco de molculas
microbicidas nos fagolisossomas:

Vrios receptores que reconhecem microorganismos, incluindo TLRs, receptores acoplados a


proteinas-G, receptores de Fc dos anticorpos e C3 do complemento e receptores para citocinas,

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principalmentes de IFN-, funcionam de modo cooperativo para activar a destruio de


microorganismos fagocitados pelos fagcitos;
A fuso dos fagossomas com lisossomas resulta na formao de fagolisossomas, onde a maior
parte dos mecanismos microbicidas esto concentrados.

Os mecanismos de destruio de microorganismos fagocitados so:


1. Enzimas proteoliticas produzidas por neutrfilos e macrfagos nos fagolisossomas e que
destroem os microorganismos. Uma das enzimas importantes nos neutrfilos a elastase, uma
serina protease de larga escala necessria para matar vrios tipos de bactrias. Outra enzima
importante a catepsina G sendo essencial na eliminao de microorganismos fagocitados;
2. Espcies reactivas de oxignio (ROS) formadas quando macrfagos e neutrfilos activados
convertem oxignio molcular. So agentes oxidantes altamente reactivos que destroem
microorganismos (e outras clulas). O sistema de produo de redicais livres primrio o
sistema fagcito oxidase:

Enzima com multiplas subunidades que se forma no fagcitos activados principalmente


na membrana fagolizossomal;
induzida e activada por vrios estimulos, incluindo IFN- e sinais de TLRs;
A sua funo reduzir oxignio molecular em ROS como radicais superxido, com o
NADPH actuando como cofacto;

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O superxido enzimaticamente dismutado em perxido de hidrognio, que usado


pela enzima mieloperoxidase para converter ies halogenetos no reactivos em cidos
halogenados que so txicos para as bactrias;
O processo pelo qual os ROS so produzidos designado exploso respiratria;
Apesar da gerao de ROS txicos ser comummente visat como a principal funo da
fagocito oxidase, outra funo da enzima produzirs condies nos vacuolos fagociticos
que so necessrias para a actividade de enzimas proteoliticas;
A oxidase actua como uma bomba de electres, gerando um gradiente electroquimico
atravs da membrana do vacuolo, que compensado pelo movimento de ies para o
vacolo. O resultado uma diminuio de pH e da osmolaridade dentro do vacuolo, o
que necessrio para a actividade da elastase e da catepsina G;
Uma doena designada doena granulomatosa crnica causada por uma deficincia
num dos componentes da fagcito oxidase, compremento a capaciade dos neutrfilos
matarem certas espcies de bactrias gram-positivo.

3. Intermedirios reactivos de azoto produzidas em adio aos ROS pelos macrfagos, sendo o
mais comum o xido nitrico (NO), pela activao de uma enzima designada oxido nitrico sintase
indusivel (iNOS):
iNOS uma enzima citoslica que est ausente nos macrfagos em repouso mas pode
ser induzida em resposta a produtos microbianos que activam TLRs, especialmente na
combinao com IFN-, anoxia, baixos niveis de ferro, etc;
Cataliza a converso de arginina em citrulina, sendo o gs xido nitrico libertado j que
livremente difundivel:

Nos fagolisossomas, o xido nitrico combina-se com perxido de hidrognio, gerado


pela fagcito oxidase, para produzir radicais peroxinitrito altamente reactivos que
matam microorganismos;
A funo cooperativa e redundante dos ROS e do xido nitrico demonstrada pelo facto
de perda de iNOS e fagocito oxidase leva a um aumento da susceptibilidade a infeces
microbianas, relativamente perda de apenas um destes componentes.

Quando os neutrfilos e os macrfagos so fortemente activados, podem danificar tecidos normais do


hospedeiro pela libertao de enzimas lisossomais, ROS e NO:

Os produtos microbicidas destas clulas no distinguem entre tecidos do hospedeiro e


microorganismos;
Como resultado, se os produtos entram no ambiente extracelular, so capazes de danificar os
tecidos.

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Outras Funes dos Macrfagos Activados


Em adio eliminao de microorganismos fagocitado, os macrfagos servem muitas outras funes
na defesa do organismo:

Muitas destas funes so mediadas por citocinas. TNF, IL-1 e quimiocinas induzem as reaces
inflamatrias, mas, em adio, os macrfagos produzem IL-12 que estimula as clulas NK e as
clulas T a produzirem IFN-;
Altas concentraes de LPS induz uma doena sistmica caracterizada por coagulao
dosseminada, colapso vascular e anormalidades vasculares, todas constituindo efeitos
patognicos de altos niveis de citocinas secretadas por macrfagos activados por LPS;
Os macrfagos activados tambm produzem factores de crescimento de fibroblastos e clulas
endoteliais, que participam na remodelao de tecidos depois da infeco e da danificao.

Assim, podemos resumir alguns dos factores secretados por macrfagos activados do seguinte modo:
Factor
Interleucina 1 (IL-1)
Interleucina 6 (IL-6)
TNF
Proteinas do complemento
Enzimas hidroliticas
Interfero alfa (IFN-)
Tumor necrosis factor (TNF-)
GM-CSF
G-CSF
M-CSF

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Funo
Promove respostas inflamatria e a febre
Promovem a imunidade inata e a eliminao de patognios
Promovem a resposta inflamatria e a eliminao de patognios
Promovem a resposta inflamatria
Activa genes elulares, resultando na produo de proteinas que
conferem um estado antiviral na clula
Mata clulas de tumores
Promovem a hematopoiese indusivel

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Clulas Naturalmente Assassinas (NK cells)


As clulas naturalmente assassinas so uma linhagem de clulas relacionadas com os linfcitos tha
reconhecem clulas infectadas e/ou stressadas e respondem directamente matando essas clulas e
secretando citocinas inflamatrias:

Constituem 5% a 20% das clula mononucleares no sangue e no bao e so raras noutros rgos
linfides;
O termo naturalmente assassinas deriva do facto de se estas clulas estiverem isoladas do
sangue ou do bao, elas matam vrias clulas alvo sem qualquer necessidade de activao;
So tambm as principais fontes de IFN-, que activa macrofagos de modo a que estes matem
micrbios ingeridos;

Estas clulas derivam de percursores na medula ssea e aparecem como grandes linfcitos com
numerosos grnulos citoplasmticos, o que por vezes leva a uma designao de linfcitos granulares.
Estas clulas no so nem linfcitos B nem T e no expressam receptores somaticamente rearranjados,
como imunoglobulinas ou receptores T.
Reconhecimento de Clulas Infectadas e Stressadas
A activao das clulas naturalmente assassinas regulada pelo balano entre sinais que so gerados
por receptores activadores e receptores inibitrios:

A maior parte destes receptores so complexos de


subunidades de ligao ao ligando, que reconhecem
molculas na superficies de outras clulas, e
subunidades sinalizadoras, que traduzem sinais
activadores ou inibitrios para a clula;
Quando uma clula naturalmente assassina interage
com outra clula, o resultado determinado pela a
integrao de sinais gerados por um arranjo de
receptores
inibitrios
e
activadores
so
simultaneamente expressos pela clula naturalmente
assassina e simultaneamente interagem com ligandos
na outra clula;
Em geral, os sinais activadores devem ser bloquedos
pelos sinais inibitrios de modo a prevenir a activao
de clulas naturalmente assassinas e o ataque de
clulas normais;

A maior parte destes receptores nas clulas naturalmente


assassinas reconhece molculas MHC classe I ou proteinas
que so estruturalmente semelhantes a molculas MHC
classe I:

No entanto, importante perceber que estas clulas


usam tipos de receptores fundamentalmente
diferentes dos receptores usados pelas clulas T para
reconhecer MHC tipo I ou II.

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Os receptores activadores nas clulas naturalmente assassinas reconhecem um grupo heterogeneo de


ligandos que so expressos nas clulas que sofreram stress, nas que foram infectadas com micrbios
intracelulares ou clulas que foram malignamente transformadas:

Cascatas de sinalizao dependentes de cinases so iniciadas quando os receptores activadores


nas clulas naturalmente assassinas ligam os seus ligandos, rapidamente levando a uma
actividade citotxica contra as clulas alvo e produzindo citocinas.

Os receptores inibitrios nas clulas naturalmente assassinas ligam-se a molculas MHC classe I, que
so normalmente expressas na maior parte das clulas saudveis no infectadas:

A ligao destes receptores inibitrios aos seus ligandos desencadeia casacatas de sinalizao
dependentes de fosfatases, que contra-actuam os efeitos das cinases nas casacatas de
sinalizao iniciadas pelos receptores activadores;
Devido especificidade dos receptores inibitrios para molculas MHC classe I do prprio,
clulas do hospedeiro normais esto protegidas das clulas naturalmente assassinas;
Esta especificidade no usual dos receptores inibitrios para as moleculas MHC classe I normais
permite ao sistema imune inato atacar clula viralmente infectadas que seriam invisiveis s
clulas T, que requerem a expresso de MHC para o reconhecimento.

A infeco de clulas do hespedeiro, especialmente por alguns virus, normalmente leava a uma
expresso reduzida de molculas MHC classe I e, assim, os ligandos para os receptores inibitrios so
perdidos. Como resultado, as clulas naturalmente assassinas so libertadas do seu estado normal de
inibio. Ao mesmo tempo, ligandos para os receptores activadores so expressos e, assim, as clulas
infectadas so mortas.

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Por outro lado, a expanso e a actividade das clulas naturalmente assassinas so tambm estimuladas
por citocinas, principalmente IL-15 e IL-12:

A citocina IL-12 derivada dos macrfagos um potente indutor da produo de IFN- e da


actividade citotxica, sendo esta actividade aumentada pelo IL-18;
IL-12 e IL-18 tambm estimulam a produo de IFN- pelas clulas T e so assim particiantes
centrais na produo de IFN- e subsequente activao de macrofagos mediada por IFN- tanto
na imunidade inata com adaptativa;
Os IFNs tipo I, IFN- e IFN-, tambm activam o potencial cititxico das clulas naturalmente
assassinas, talvez pelo aumento da expresso de receptores de IL-12 e assim a resposta a estes;
IL-IS, IL-12 e IFNs tipo I so produzidos por macrofagos em resposta infeco e assim as trs
citocinas activam as clulas naturalmente assassina na imunidade inata;
Altas concentraes de IL-2 tambm estimulam as actividades das clulas naturalmente
assassinas, e cultura em IL-2 por vezes usada para aumentar a sua actividade.

Funes Efectoras das Clulas Naturalmente Assassinas


As funes efectoras das clulas naturalmente assassinas so:

Efeito citotxico o mecanismos de citotoxicidade mediada por clulas naturalmente


assassinas essencialmente o mesmo dos linfcitos T citotxicos. Estas clulas apresentam
grnulos que contm proteinas que medeiam a morte das clulas alvo. Quando as clulas
naturalmente assassinas so activadas, a exocitose de grnulos liberta estas proteinas para as
clulas alvo. Uma proteina granular das clulas naturalmente assassinas, designada perforina,
facilita a entrada de outra proteinas granulares, designadas granzimas, para o citoplasma das
clulas alvo levando apoptose da clula alvo. Por matar clulas infectadas com virus e
bactrias intracelulares, as clulas naturalmente assassina eliminam reservatrios de infeco.
Isto tambm pode ocorrer contra algumas clulas tumorais;

Defesa contra micrbios intracelulares matam clulas viralmente infectadas antes dos
linfcitos citotxicos antignio-especificos serem completamente activados, ou seja, durante os
primeiro dias depois da infeco viral. Cedo no curso da infeco viral, as clulas naturalmente
assassinas so expandidas e activadas por citocinas da imunidade inata, como IL-12 e IL-IS, e
matam clulas infectadas, especialmente aqeulas que apresentam niveis reduzidos de
molculas MHC classe I. Em adio, os IFN- secretado por clulas naturalmente assassinas
activa macrofagos para destruirem microbios fagocitados. Esta activao por IFN- consegue
controlar uma infeco por uma bactria intracelular por vrios dias ou semanas e assim

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fornece tempo para o desenvolvimento da imunidade mediada por clulas T e a eliminao da


infeco por estas.
A ausncia de clulas naturalmente assassinas leva a um aumento da susceptibilidade a infeces por
alguns virus e bactrias intracelulares. Em ratos sem clulas T, a resposta das clulas naturalmente
assassinas deve ser adequada para manter a infeco controlando tais micrbios por algum tempo, mas
os animais normalmente sucumbem na ausncia de imunidade mediada por clulas T. as clulas
naturalmente assassinas tambm matam clulas infectadas que tentam escapar ao ataque imune
mediado por clulas T citotxicas pela reduzida expresso de molculas MHC classe I.

Papel da Imunidade
Adaptativa

Inata

na

Estimulao

da

Resposta

Imune

A resposta imune inata fornece sinais que funcionam de modo concertado com antignios para
estimular a proliferao e a diferenciao de linfcitos T e B especificos para determinados antignios.
Enquanto a reposta imune inata fornece uma defesa inicial, tambm
prepara a resposta imune adaptativa. A activao de linfcitos
requere dois sinais, o primeiro sendo o antignio e o segundo
componentes da resposta imune inata a micrbios ou clulas
danificadas. Esta ideia designada de two-signal hypothesis para a
activao de linfcitos:

Sinal 1 - a necessidade do antignio assegura que a resposta


adaptativa especifica;
Sinal 2 - a necessidade de um estimulo adicional provocado
por micrbios ou reaces da imunidade inata a micrbios
assegura que as respostas imunes adaptativas so induzidas
quando existe um perigo de infeco e no quando os
linfcitos reconhecem antignios inofensivos, incluindo
antignios do prprio.

As molculas produzidas durante as reaces da imunidade inata que funcionam como sinais
secundrios para a estimulaom de linfcitos incluem:

Co-estimuladores, para as clulas T;


Citocinas, tanto para as clulas T e B;
Produtos da destruio de complemento, apenas para as clulas B

No entanto, os sinais secundrios gerados durante as respostas imunes inatas a diferentes micrbios
no aumentam apenas a magnitude da subsequente resposta imune adaptativa como tambm
influenciam a natureza da resposta imune adaptativa:
1. A principal funo da imunidade mediada por clulas T activar macrfagos de modo a que
estes destruam micrbios intracelulares:
Agentes infecciosos que se ligam a TLRs tendem a estimular as respostas imunes
mediadas por clulas T, pois a sinalizao por TLR aumenta a habilidade de clulas
apresentadoras de antignios induzirem a diferenciao de clulas T em clulas
efectoras designadas clulas TH1;
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Clulas TH1 produzem a citocina IFN-, que consegue activar macrofagos de modo a
estes matarem micrbios que de outro modo poderiam sobrevivers nas vesiculas
fagociticas;

2. Em contraste, vrios micrbios extracelulares que entram no sangue activam a via alternativa do
complemento, que por sua vez aumenta a produo de anticorpos por linfcitos B. esta
imunidade humoral serve para eliminar micrbios extracelulares.
O papel da imunidade inata na estimulao das respostas imunes inatas a base da aco de
adjuvantes, que so substncias que necessitam de ser administradas em conjunto com antignios
proteicos para provocar respostas imunes inatas dependentes de clulas T mximas:

Adjuvantes so uteins em imunologia experimental e vacinas clinicas;


Vrios adjuvantes usados experimentalmente constituem proutos microbianos, como
micobactrias mortas e LPS, que se ligam a TLRs e provocam respostas imunes inatas fortes no
local de entrada do antignio.

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RECONHECIMENTO DE
ANTIGNIOS
O COMPLEXO PRINCIPAL DE HISTOCOMPATIBILIDADE

O Complexo Principal de Histocompatibilidade


Todos os mamiferos estudados at agora possuem um grupo de genes fortemente ligados, o complexo
principal de histocompatibilidade (MHC), cujos produtos tm papeis importantes no reconhecimento
intercelular e na descriminao entre o prprio e o estranho:

O MHC participa no desenvolvimento de respostas imunes humorais e mediadas por clulas;


Enquanto os anticorpos reagem com antignios sozinhos, a maior parte das clulas T
reconhecem antignios apenas quando estes esto associados com uma molcula MHC.

As principais funes dos linfcitos T so defesa contra micrbios intracelulares e activao de outras
clulas, como macrfagos e linfcitos B. Todas estas funes requerem que os linfcitos T interajam
como outras clulas, que sero clulas do hospedeiro infectadas, clulas dendriticas, macrfagos e
linfcitos B. No entanto, os receptores de antignio das clulas T conseguem apenas reconhecer
antignios que so apresentados por outras clulas. A tarefa de apresentar antignios associados a
clulas para reconhecimento pelas clulas T realizada por proteinas especializadas codificadas pelo
complexo principal de histocompatibilidade (MHC).

Como as molculas MHC actuam como estruturas apresentadoras de antignios, o grupo particular de
molculas MHC expressas por um individuo influencia o reportrio de antignios a que as clulas T H e Tc
desse individuo reagem. Por esta razo, o MHC determina parcialmente a resposta a um antignio
individual de organismos infecciosos e est, assim, implicado na susceptibilidade a uma doena e no
desenvolvimento da autoimunidade. Assim, o conhecimento da estrutura e da biossintese de molculas
MHC e a associao de pptidos antignios com molculas MHC fundamental para a compreenso de
como as clulas T reconhecem antignios.
A recente compreenso que as clulas naturalmente assassinas expressam receptores para antignio
MHC classe I e o facto da interaco receptor-MHC poder levar a inactivao ou activao, expande o
papel conhecido desta familia de genes.
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Descoberta do MHC
O conceito de que a rejeio de tecidos estranhos o resultado de uma resposta imune a molculas na
superficie das clulas, agora designados antignios de histocompatibilidade, tem origem no trabalho
de Peter Gorer nos meados dos anos 1930:

Gorer estava a usar estirpes puras de ratinhos para identificar grupos antignios do sangue e, no
curso destes estudos, ele identificou quatro grupos de genes, designados de I a IV;
Trabalhos levados a cabo nos anos 1940s e 1950s por Gorer e George Snell estabeleceram que
os antignios codificados pelos genes no grupo designado II participava na rejeio de tumores
transplantados e outros tecidos;
Snel designou estes genes como genes de histocompatibilidade, e a sua designao corrente
como genes de histocompatibilidade-2 (H-2) refere-se ao grupo II dos genes de antignios de
Gorer.

Assim, o MHC foi descoberto como:

Locus gentico cujos produtos eram responsveis pela rejeio rpida de enxertos de tecidos
trocados entre linhagens puras de ratos.

Nos anos 1940s, George Snell e os seus colegas usaram tcnicas genticas para analisar a rejeio de
tumores transplantados e outros enxertos de tecidos entre estirpes de ratos de laboratrio. Primeiro,
foi necessrio produzir estirpes de ratinhos isognicos por cruzamento repetitivo de irmos:

Aps 20 geraes, cada membro de cada estirpe apresentava sequncias de cidos nucleicos
idnticas em todas as localizaes de todos os cromossomas;
No caso dos genes polimrficos, cada estirpe pura, j que homozigtica, expressa um nico
alelo, e diferentes estirpes expressam diferentes alelos;

Quando um tecido ou orgo, como um enxerto de pele, transferido de um animal para outro existem
dois resultados possiveis:
1. Em alguns casos, a pele enxertada sobrevive e funciona
como pele normal;
2. Em outros casos, o sistema imune destroi o enxerto, um
processo designado de rejeio.
Estas experincias de transferncia de pele mostraram que
enxertos torcados entre animais de uma estirpe pura so aceites
enquanto enxertos torcados entre diferentes estirpes so
rejeitadas:

Os genes responsveis por tornarem o tecido enxertado


reconhecido como similar ou diferente dos tecidos do
prprio so desigandos genes de histocompatibilidade;
As diferenas entre prprio e estranho foram atribuidas a
polimorfismos entre diferentes alelos de genes de
histocompatibilidade;

Tcnica genticas foram de seguida aplicadas para identificar os genes relevantes:


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A estratgia critica neste esforo foi a criao de linhagens congnica de ratinhos. Em dua
estirpes congnicas, os ratinhos so idnticos em todos os loci excepto naquele em que foram
seleccionados para serem diferentes;
Anlises de ratinhos congnicos que foram seleccionados pela sua habilidade de rejeitar
enxertos indicaram que uma nica regio gentica era responsavel pela rejeio rpida de
enxertos e foi designada de locus princiapl de histocompatibilidade;
O locus particular que foi identificado pelo grupo de Snell estava ligado a um gene no
cromossoma 17 codificante de um grupo de antignios sanguineos designado antignio-II, e
assim essa regio foi designada de histocompatibilidade-2, ou simplesmente H-2.

Inicialmente, pensava-se que este locus continha um nico gene que controlava a compatibilidade de
tecidos. Contudo, ocorreram eventos de recombinao ocasionais no locus H-2 durante o cruzamento
de diferentes estirpes, indicando que ele contem vrios genes diferentes mas fortemente ligados, cada
um envolvido na reeio de enxertos. Assim, a regio gentica que controlava a rejeio de enxertos foi
designada de complexo principal de histocompatibilidade.
Genes que determinam o destino de tecidos enxertados esto presentes em todas as espcies de
mamiferos, so homologos das genes H-2 primeiro identificados em ratinho e so todos designados
genes MHC. Durante cerca de 20 anos aps a descoberta do MHC, o seu nico papel documentado era a
rejeio de enxertos. No entanto, a transplantao no um fenmeno normal e no parecia existir
qualquer razo bvia para o facto de um grupo de genes ter sido preservado durante a evoluo
quando a sua nica funo era controlar a rejeio de enxertos de tecidos estranhos.
Nos anos 1960s e 1970s foi descoberto que os genes MHC so de importncia fundamental para todas
as respostas imunes a proteinas antignios:

Baruj Benacerraf, Hugh McDevitt e os seus colegas descubriram que estirpes puras de ratinhos e
porquinhos diferiam na sua habilidade para produzir anticorpos contra polipptidos sintticos
simples;
Os genes relevantes foram designados genes de resposta imune (Ir), e foram todos encontrados
da regio do MHC.

Sabemos agora que os genes Ir so, de facto, genes MHC que codificam molculas MHC que diferem na
sua habilidade a ligar e apresentar proteinas antignios:

Estirpes que respondem - herdam alelos MHC cujos produtos ligam tais pptidos, formando
complexos pptido-MHC que so depois reconhecidos por clulas T helper. Estas clulas T
ajudam ento clulas B a produzir anticorpos;
Estirpes que no respondem expressam molculas MHC que no so capazes de ligar a
peptidos derivados de um antignio polipeptidico e, assim, estas estirpes no geram clulas T
helper ou anticorpos especificos para o antignio.

Organizao Geral e Herana do MHC


O complexo principal de histocompatibilidade uma coleco de genes organizados num alogamento
continuo e longo de DNA:

HLA MHC do humano e encontra-se no cromossoma 6;


H-2 MHC do ratinho e encontra-se no cromossoma 7.

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Apesar do arranjo de genes ser de certo modo diferente, nos dois casos os genes MHC esto
organizados em regies que codificam trs classes de molculas MHC:

Genes MHC classe I codificam glicoproteinas expressas na superficie da maior parte das
clulas nucleadas. A prinicpal funo dos seus produtos a apresentao de pptidos
antignicos a clulas TC (CTL);
Genes MHC classe II codificam glicoproteinas expressam principalmente em clulas
apresentadoras de antignios (macrfagos, clulas dendrtiticas e linfcitos B), onde apresentam
pptidos antignicos a clulas TH;
Genes MHC classe III codificam, em conjunto com outros produtos, vrias proteinas
secretadas que apresentam funes imunes, incluindo componentes do sistema complemento e
molculas envolvidas na inflamao.

Podemos dividir as molculas MHC classe I em dois tipos:

Molculas classe I clssicas so as codificadas pelas regies K e D no ratinho e pelos loci A, B e


C no humano. Foram as primeiras a serem descobertas e so expressas numa ampla gama de
tipos de clulas;
Molculas classe I no-clssicas so genes ou grupos de genes adicionais dentro dos
complexos H-2 ou HLA que tambm codificam molculas classe I. A sua expresso limitada a
certos tipos de clulas especificos e apesar das suas funes no serem todas conhecidas,
alguns produtos podem ter papeis altamente especializados na imunidade.

As duas cadeias das molculas MHC classe II so codificadas pelas regies IA e IE em ratinho e pelas
regies DP, DQ e DR em humanos:

A terminologia pode ser de algum modo confusa visto que a regio D em ratinho codifica
olculas classe I enquanto a regio D (DR, DQ, DP) em humanos refere-se a genes codificantes
de molculas MHC classe II;
Como nos loci classe I, molculas classe II adicionalmente codificadas nesta regio apresentam
funes especializadas nos processos imunes.

Joana Maria Soares Pereira

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As molculas MHC classe I e classe II apresentam caracteristicas estruturais comuns e ambas


apresentam papeis no processamento de antignios. Em contraste, a regio MHC classe III, que se
encontra entre as regies classe I e classe II, codifica molculas que so criticas para a funo imune
mas que tm pouco em comum com as molculas classe I e classe II. Os produtos classe III incluem:

Componentes do complemento (C4, C2, BF);


Citocinas inflamatrias, incluindo tumor necrosis factor (TNF) e heat-shock proteins.

Formas allicas do MHC


Os loci constituintes do MHC so altamente polimrficos, isto , existem vrias formas alternativas dos
genes em cada locus entre a populao, o que se designa de alelos. Os genes dos loci MHC encontramse todos juntos e a frequncia de recombinao, isto , a frequncia de eventos de crossover
cromossomal durante a mitose, indicativo da distncia entre determinados segmentos de genes,
baixa:

Assim, a maior parte dos individuos herda os alelo codificados por estes loci to juntos como
dois grupos, um de cada progenitor;
Cada grupo de alelos referido com hapltipo. um individuo herda um hapltipo da me e
outro do pai;
Em populaes hibridas, os recem-nascidos so geralmente heterozigticos em vrios loci e
expressaro ambos os alelos MHC da me e os do pai. Estes alelos so codominantemente
expressos, isto , ambos os produtos maternais como paternais so expressos nas mesma
clulas.

Se os ratinhos forem puros, isto , apresentarem alelos idnticos em cada loci, cada locus H-2 ser
homozigtico porque os hapltipos materno e paterno so idnticos, e todos os recm-nascidos
expressaro hapltipos idnticos. Certas estirpes de ratos puras foram designadas como estirpes
prottipo e o hapltipo MHC expresso por essas estirpes designado por um sobrescripto itlico
arbitrrio (e.g. H-2a, H-2b). Estas designaes referem-se ao conjunto inteiro de H-2 alelos herdados
numa estirpe sem ser necessrio listar cada alelo individualmente. No entanto, diferentes estirpes
podem ter o mesmo hapltipo MHC, diferindo apenas noutros genes fora do MHC.
Estirpe
prottipo
CBA
CBA/2
C57BL/10(B10)
A
A.SW
A.TL
DBA/1

Outras estirpes com o mesmo


hapltipo
AKR, C3H, B10.BR, C57BR
BALB/c, NZB, SEA, YBR
C57BL/6, C57L, C3H.SW, LP, 129
A/He, A/Sn, A/Wy, B10.A
B10.S, SJL
STOLI, B10.Q, BDP

Hapltipo
k
d
b
a
s
t1
q

Alelos H-2
K
k
d
b
a
s
s
q

IA
k
d
b
a
s
k
q

IE
k
d
b
a
s
k
q

S
k
d
b
a
s
k
q

D
k
d
b
a
s
d
q

Se dois ratos de estirpes puras contendo diferentes hapltipos MHC forem cruzados, a gerao F1 herda
hapltipos de ambos os progenitores e, assim, expressam os alelos de locus MHC de ambos. Como tais
F1 expressam as proteinas MHC de ambas as estirpes parentais em todas as clulas, eles so
histocompativeis com ambas as estirpes e capazes de aceitar enxertos de ambas as estirpes
progenitoras. Contudo, nenhuma das estirpes parentais puras so capazes de aceitar um enxerto de
uma ratinho F1 porque metade das molculas MHC sero estranhas para o progenitor.
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Numa populao no pura, cada individuo geralmente heterozigtico em cada locus. O complexo HLA
humano altamente polimrfico e existem multiplos alelos de cada gene classe I e classe II. Contudo,
tal como com os ratinhos, os loci MHC humanos esto juntos e so herdados como um hapltipo.
Quando o pai e a me apresentam diferentes hapltipos, existe uma probabilidade de 1 para 4 do
filhote herdar os mesmos hapltipos do pai e da me e, assim, serem histocompativeis com cada um.

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Apesar da taxa de recombinao por crossover ser baixa dentro do HLA, esta contribui
significativamente para a diversidade dos loci nas populaes humanas. A recombinao gentica gera
novas combinaes allicas e o elevado numero de geraes intervenientes desde o aparecimento dos
humanos como espcie permitiu uma recombinao extensiva, de modo que raro dois individuos no
relacionados apresentarem grupos de genes HLA idnticos.
Assim, vrias caracteristicas importantes dos genes MHC e dos seus produtos foram deduzidas de
anlises genticas e bioquimica clssicas feitas em ratinhos e humanos:
1. Os dois tipos de genes MHC polimrficos, os genes MHC classe I e os genes MHC classe II,
codificam dois grupos de proteinas estruturalmente distintas mas homlogas. Molculas MHC
classe I apresentam pptidos a clulas T CD8+, e molculas MHC classe II apresentam pptidos a
clulas T CD4+;
2. Os genes MHC so os genes mais polimrficos presentes no genoma. Sequenciao molecular
mostrou que um nico alelo HLA pode consistir em multiplas variantes que diferem
ligeiramente;
3. Os genes MHC so concomitantemente expressos em cada individuo. Isto , para um
determinado gene MHC, cada individuo expressa os alelos que so herdados de ambos os pais.
Para o individuo, isto maximiza o numero de molculas MHC disponivel para ligar peptidos para
apresentao a clulas T.

Molculas MHC
As molculas MHC classe I e classe II so glicoproteinas membranares intimanente relacionadas
estrutura e funcionalmente:

Ambas as molculas MHC classe I e classe II foram isoladas e purificadas e as estruturas


tridimensionais dos seus dominios extracelulares foram determinadas por cristalografia de
raios-X;
Ambos os tipos de glicoproteinas membranares funcionam como molculas apresentadoras de
pptidos antignicos altamente especializadas que formam complexos estveis com pptidos
antignicos, apresentando-os na superficie da clula para reconhecimento por clulas T.

Em contraste, as molculas MHC classe III so um grupo de proteinas no relacionadas que no


partilham de semelhana estrutural e funo comum com as molculas da classe I e da classe II.
As principais caracteristicas das molculas MHC apresentadoras de antignios so, resumidamente:
Caracteristica
Cadeias polipetidicas
Localizao dos residuos
polimrficos
Local de ligao ao co-receptor
das clulas T
Tamanho da fenda de ligao
ao pptido
Nomenclatura
Humano
Ratinho
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MHC classe I

MHC classe II

(44-47 kD)
2-microglobulina (12 kD)

(32-34 kD)
(29-32 kD)

Dominios 1 e 2

Dominios 1 e 1

Regio 3 liga-se a CD8

Regio 2 liga-se a CD4

Acomoda pptidos com cerca de 8-11


residuos

Acomoda pptidos com cerca de 10-30


residuos ou mais

HLA-A, HLA-B, HLA-C


H-2K. H-2D, H-2L

HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP


I-A, I-E
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Todas as molculas MHC partilham certas caracteristicas estruturais que so criticas para o seu papel
de apresentao de pptidos e reconhecimento de antignios pelos linfcitos:
1. Cada molcula MHC consiste numa fissura de ligao ao pptidos extracelular, ou groove,
seguida de dominios imunoglobulin (Ig)-like e dominos transmembranares e citoplasmticos.
As molculas classe I so compostas por uma cadeia polipeptidica codificada no MHC e uma
segunda cadeia no codificada pelo MHC, enquanto as molculas classe II so constituidas por
duas cadeias codificadas pelo MHC. Apesar desta diferena, as estruturas tridimensionais das
molculas MHC classe I e classe Iiso semelhantes;
2. Os residuos de aminocidos polimrficos das molculas MHC esto localizados na e
adjecentes fissura de ligao do pptido. Esta fissura formada pelo enrolamento do Ntermini das proteinas codificadas pelo MHC e composta por -hlices paralelas sobre oito
folhas-. Os residuos polimrficos, que so aminocidos que variam entre diferentes alelos,
esto localizados dentro e volta da fissura. Esta poro das molculas MHC liga-se a pptidos
para os apresentar a clulas T, e os receptores de antignios nas clulas T interagem com este
pptido e com as -hlices das molculas MHC. Devido variabilidade de aminocidos nesta
regio, diferentes molculas MHC ligam-se a e apresentam diferentes pptidos e so
reconhecidas especificamente pelos receptores de antignios de diferentes clulas T;
3. Os domnios Ig-like no polimrficos das molculas MHC contm locais de ligao para as
molculas CD8 e CD4 das clulas T. CD4 e CD8 so expressas em sub-populaes distintas de
linfcitos T maduros e participam, em conjunto com os receptores de antignios, no
reconhecimento do antignio, isto , so co-receptores:
CD4 liga-se selectivamente a molculas MHC classe II e por isso que as clulas T CD4+
reconhecem apenas pptidos apresentados por molculas MHC classe II, funcinando
depois como linfcitos TH;
CD8 liga-se selectivamente a molculas MHC classe I e por isso que as clulas T CD8 +
reconhecem apenas pptidos apresentados por molculas MHC classe I, funcionando
depois como linfcitos Tc.
Estrutura das Molculas MHC classe I
As molculas MHC classe I contm uma cadeia-de 45 kDa associada no-covalentemente com uma
molcula 2-microglobulina de 12 kDa:

Cadeia- uma glicoproteina transmembranar


codificada por genes polimrficos nas regies A, B e
C do complexo HLA humano e nas regies K e D/L
do complexo H-2 do ratinho;

2-microglobulina proteina codificada por um


gene altamente conservado localizado num
cromossoma diferente.

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A associao da cadeia- com a 2-microglobulina necessria para a expresso das molculas MHC
classe I nas membranas celulares. A cadeia- ancorada na membrana plasmtica pelo seu segmento
transmembranar hidrofbico e cauda citoplasmtica hidrofilica.
Anlises estruturais revelaram que a cadeia- das molculas MHC classe I esto organizadas em:

Trs dominios externos (1, 2 e 3), cada contendo aproximadamente 90 aminocidos;


Um dominio transmembranar com cerca de 25 aminocidos hidrofbicos seguidos de um
pequeno alongamento de aminocidos carregados (hidrofilicos);
Um segmento citoplasmtico de 30 aminocidos.

A 2-microglobulina semelhante em tamanho e organizao ao dominio 3, mas no contem uma


regio transmembranar e no covalentemente ligada glicoproteina classe I. Esta regio e a 3
revelam homologia e tambm com os dominios das regies constantes das imunoglobulinas.
A enzima papaina cliva a cadeia- 13 residuos acima do dominio transmembranar, libertando a poro
extracelular da molcula, consistindo nos 1, 2, 3 e na 2-microglobulina. A purificao e cristalizao
da poro extracelular revelou dois pares de dominios a interagirem:

Um par distante da membrana dos dominios 1 e 2, formando uma plataforma de folhas-


antiparalelas rodeadas por duas longas regies de -hlices. A estrutura forma uma fenda
profunda com as longas -hlices como paredes e as folhas- antiparalelas como o fundo. Os
residuos polimrficos das molculas classe I esto confinados aos dominos 1 e 2, onde
contribuem para variaes entre diferentes alelos classe I na ligao a pptidos e
reconhecimento por clulas T;
Um par prximo da membrana dos dominios 3 e 2-microglobulina, formando uma estrutura
essencial para o reconhecimento do MHC pela clula T. Estes esto organizados em duas folhas praguedas, cada formada por cadeias- antiparalelas de aminocidos. Esta estrutura
caracteristica de dominios imunoglobulina e, assim, as molculas MHC e a 2-microglobulina so
classificadas como membros da superfamilia de imunoglobulinas.

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A fenda de ligao ao pptido est localizada na superficie superior da molcula MHC classe I e
suficientemente grande para ligar um peptido de cerca de 8-10 aminocidos. Estes pptidos so, de
facto, antignios processados e pptidos do prprio.
O dominio 3 parece ser altamente conservados entre molculas MHC classe I e contem uma sequncia
que interage com a molcula membranar CD8 presente nas clulas Tc. A 2-microglobulina interage
extensivamente com o dominio 3 e tambm com amincidos dos dominios 1 e 2. A interaco com
a 2-microglobulina e a com um pptido pela cadeia- classe I essencial paraa molcula classe I
alcanar a conformao completamente montada. Na ausncia de 2-microglobulina, a cadeia- MHC
classe I no expressa na membrana celular.
Estrutura das Molculas MHC Classe II
As molculas MHC classe II contm duas cadeias polipptidicas diferentes, uma cadeia- de 33 kDa e
uma cadeia- de 28 kDa, associadas por interaces no covalentes:

Como as cadeias- classe I, as molculas MHC classe II


so glicoproteinas membranares que contm dominios
externos, um segmento transmembranar e um
segmento citoplasmtico;
Cada cadeia numa molcula classe II contem dois
dominios externos: os dominio 1 e 2 numa cadeia e
os dominios 1 e 2 na outra cadeia.
Os dominios 2 e 2 prximos da membrana, como os
dominos 3 e 2-microglobulina das molculas MHC
classe I, apresenta semelhana sequencial com a
estrutura
das
imunoglobulinas,
sendo
tambmclassificadas como membros da superfamilia de
imunoglobulinas;
A poro das molculas classe II distante da membrana composta pelos dominios 1 e 1 e
forma uma fenda de ligao ao antignio;
Ao contrrio das molculas MHC classe II, os genes que codificam ambas as cadeias das
molculas classe II pertencem ao MHC e so polimrficos.

Os segmentos N-terminal 1 e 1 das cadeia classe II interagem para formar a fissura de ligao ao
pptido, que estruturalmente semelhante fissura das molculas classe I:

Quatro folhas das fissura e das paredes constituidas por -hlices so formadas pelo
segmento 1 e as outras quatro folhas e a segunda parede so formadas pelo segmento 1;
Os residuos polimrficos esto localizados nos segmentos 1 e 1, dentro e volta da fissura,
como nas molculas MHC classe I. Nas molculas classe II humanas, a maior parte dos residuos
polimrficos est na cadeia ;
Nas molculas classe II, as terminaes da fissura de ligao ao pptido esto abertas, de modo
que pptidos de 30 ou mais residuos conseguem encaixar.

Os segmentos 2 e 2 das molculas MHC classe II, como as 3 e 2-microglobulina da classe I, esto
enroladas em dominios Ig e so no-polimrficas entre vrios alelos de um gene particular da classe II:

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O segmento 2 das molculas classe II contm locais de ligao para CD4, de modo semelhante
ao local de ligao a CD8 no segmento 3 da cadeia pesada da classe I;
Em geral, cadeias de um locus do MHC classe II (e.g., DR) normalmente emparelha com
cadeias do mesmo locus e menos commumente com cadeias de outros loci (e.g., DQ, DP);
As terminaes C-terminal dos segmentos 2 e 2 continuam em pequenas regies de ligao
seguidas de um alongamento de aproximadamente 25 residuos transmembranares e
hidrofbicos;
Nas duas cadeias, as regies transmembranares terminam com grupos de residuos de
aminocidos, seguidos de pequenas caudas citoplasmticas hidrofilicas.

A molcula classe II completamente montada um heterodimero constituido por uma cadeia , uma
cadeia e um pptido antignico ligado. Para alm disso, a expresso estvel de molculas classe II na
superficie da clula requeres a presena de todos os trs componetes do heterodimero. Como nas
molculas classe II, isto assegura que as molculas MHC que acabam na superficie da clula so as
molculas que esto a actuar normalemnte na sua funo de apresentao de pptidos antignicos.
Relao Exo/Estrutura dos Genes e Proteinas MHC
Exes separados codificam cada regio de proteinas classe I e classe II. Cada um dos genes classe I do
humano e do ratinho apresenta um exo 5 que codifica um pequeno pptido sinal seguido de cinco ou
seis exes que codificam a cadeia das molculas classe I:

O pptido sinal serve para facilitar a insero da cadeia no reticulo endoplasmtico e


removido por enzimas proteoliticas no reticulo endoplasmtico depois da translaco estar
completa;
Os trs exes seguintes codificam os dominios extracelulares 1, 2 e 3 e os seguintes exes
codificam a regio transmembranar (Tm);
Um ou dois codes 3-terminal codificam os dominios citoplasmticos (C).

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Como os genes MHC classe I, os genes classe II esto organizados numa srie de exes e intres
reflectindo a estrutura dos dominios das cadeias e :

Ambos os genes e que codificam molculas MHC classe II de ratinho e humanas apresentam
um exo lider, um exo 1 ou 1, um exo 2 ou 2 e um mais exes citoplasmtico.

Ligao de Pptidos a Molculas MHC


As molculas MHC apresentam uma ampla especificidade para a ligao a pptidos, em contraste com a
grande especificidade de reconhecimento de antignios pelo receptor de antignios dos linfcitos T e
existem vrias caracteristicas importantes da interaco das molculas MHC com os pptidos
antignicos:

Cada molcula MHC classe I e classe II apresentam uma nica fenda de ligao a um pptido
pptido, mas cada molculas MHC pode ligar-se a diferentes pptidos;
Os pptidos que se ligam a molculas MHC partilham caracteristicas estruturais que promovem
esta interaco;
A associao de pptidos com molculas MHC um processo saturvel e muito lento;
As molculas MHC de um individuo no so capazes de discriminar entre pptidos estranhos e
pptidos derivados de proteinas desse individuo.

A habilidade das molculas MHC ligarem diferentes pptidos foi estabelecida por diferentes evidncias
experimentais:

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1. Se uma clula T especifica para um pptido for estimulada


por clulas apresentadoras de antignios que apresentam
esse mesmo pptido, a resposta inibida pela adio de
excesso de um outro pptido com semelhana estrutural.
Nestas experincias, a molcula MHC liga diferentes
pptidos mas a clula T reconhece apenas um desses
pptidos;
2. Estudos de ligao directa com molculas MHC purificadas
em soluo estabeleceram que uma nica molcula MHC
consegue ligar diferentes pptidos (um de cada vez) e que
multiplos pptidos competem entre si para a ligao a uma
nica molcula MHC;
3. As anlises de pptidos eluidos de molculas MHc purificadas de clulas apresentadoras de
antignios mostraram que diferentes pptidos podem ser eluidos de qualquer tipo de molcula
MHC.
A determinao da estrutura cristalina das molculas MHC classe I e classe II confirmou a presena de
uma unica fenda de ligao a pptidos nestas molculas. No supreendente que uma nica molcula
MHC seja capaz de ligar multiplos pptidos porque cada individuo contem apenas algumas molculas
MHC diferentes (6 molculas classe I e cerca de 10-20 molculas classe II num individuo heterozigtico),
e essas devem ser capazes de apresentar pptidos de um numero enorme de proteinas antignicas.

Os pptidos que ligam molculas MHC partilham caracteristicas estruturais que promovem a interaco
destes com as molculas MHC:
1. Molculas classe I conseguem acomodar pptidos com um comprimento de cerca de 8-11
residuos e molculas classe II ligam pptidos que podem ter cerca de 10-30 residuos ou mais,
sendo o tamanho ptimo 12-16 residuos;
2. Pptidos que se ligam a uma forma allica particular de uma molcula MHC comtm residuos de
aminocidos que permitem interaces de complementariedade entre o pptido e essa
molcula MHC;
3. Os residuos que um pptido que ligam molcula MHC so distintos dos reconhecidos pelas
clulas T.

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Numa clula, vrias chaperones e enzimas facilitam a ligao do pptido a molculas MHC. Quando
formado, a maior parte dos complexos pptido-MHC so estveis, e as constantes cinticas de
dissociao so indicativas de tempos de semi-vida longos, que variam entre vrias horas a dias:

Esta taxa de dissociao to baixa permite que os complexo pptido-MHC persistam tempo
suficiente na superificie da clula apresentadora de antignios para que estes sejam
reconhecidos pelas clulas T;
Esta caracteristica da apresentao de antignios permite que as poucas clulas T que so
especificas para o antignio localizem-no enquanto as clulas circulam pelos tecidos e, assim,
gerar respostas imune eficientes contra o antignio.

Com as molculas MHC no so capazes de distinguir entre pptidos estranhos e pptidos do prprio,
apresentam tanto pptidos do prprio como pptidos estranhos e as clulas T examinam esses pptidos
para a presena de pptidos estranhos. Este processo central para a funo de vigilncia das clulas T.
No entanto, a incapacidade das molculas MHC discriminarem entre antignios prprios e estranho
levanta duas questes:
1. Como as molculas MHC so continuadamente expressas expostas a, e presumivelmente
ocupadas por, pptidos do prprio abundantes, como que as suas fendas de ligao a pptidos
esto sempre disponiveis para ligar e apresentar pptidos estranhos, que so raros?
2. Se os pptidos propros esto continuadamente a ser apresentados, porque que o individuo
no desenvolve reaces autoimunes?
As respostas a estas questes encontra-se na biologia celular da biossintese e montagem das molculas
MHC, na especificidade das clulas T e na sensividade requintada destas clulas a pequenas quantidade
de complexos MHC-pptido.
Base Estrutural da Ligao de Pptidos a Molculas MHC
A ligao de pptidos a molculas MHC uma interaco no covalente mediada por residuos dos
pptidos e das fendas das molculas MHC:

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

Proteinas antignicas so proteoliticamente clivadas nas clulas apresentadoras de antignios


para gerar os pptidos que se ligaro e sero apresnetados pelas molculas MHC;
Esses pptidos ligam-se s fendas das molculas MHC numa conformao extendida e, quando
ligados, os pptidos a as molculas de gua associadas preenchem as fendas, fazendo contactos
extensivos com residuos de aminocidos que formam o pavimento de folhas- e as paredes de
-hlices.

Na maior parte das molculas MHC, as cadeias- do


pavimento da fenda contm bolsas. Os residuos de
aminocidos do pptido podem conter cadeias laterais
que encaixam nessas bolsas e ligam-se por a aminocidos
complementares na molcula MHC, normalmente por
interaces hidrofbicas. Tais residuo do pptido so
designados residuos de ancoragem porque contribuem
para a maior parte das interaces favorveis ligao:

Ancoram o pptido na fenda da molcula MHC;


Esto localizados no meio ou nas terminaes do
pptido;
Cada pptido de ligao ao MHC normalmente
contem apenas um ou dois residuos de
ancoragem e isto permite uma grande
variabilidade nos outros residuos do pptido, que
so residuos que so reconhecidos por clulas T
especificas.

No entanto, nem todos os pptidos usam residuos de


ancoragem para ligar a molculas MHC, especialmente a
molculas MHC classe II:

Interaces especificas do peptido com as -hlice laterais da fenda MHC tambm contribuem
para a ligao do pptido por formao de pontes de hidrognios ou ponte salinas com este;
Para alm disso, pptidos de ligao a molculas classe I normalmente contm aminocidos
bsicos ou hidrofbicos na sua terminao carboxi que tambm contribuem para a interaco.

Assim, como vrios residuos dentro e nas redondezas da fenda de ligao ao pptido das molculas
MHC so polimrficas (e.g., diferem entre vrios alelos MHC), diferentes alelos favorecem a ligao de
diferentes pptidos. Esta a base estrutural da funo dos genes MHC como genes da resposta
imune:

Apenas animais que expressam alelos MHC que ligam um pptido particular e o apresentam a
clulas T so capazes de responder a esse pptido.

Os receptores de antignios das clulas T reconhecem tanto os pptidos antignicos como as


molculas MHC, sendo o pptido responsvel pela requintada especificidade do reconhecimento do
antignio e os residuos MHC contribuindo para a restrio de MHC das clulas T:

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Uma poro do pptido exposta na superficie da fenda


da molcula MHC e as cadeias laterais de aminocidos
desta poro do pptido so reconhecidos pelos
receptores de antignios de clulas T especificas;
O mesmo receptor da clula T tambm interage com
residuos polimrficos das -hlices da molculas MHC
em si.

Portanto, variaes no pptido ou na fenda de ligao ao


pptido da molcula MHC alterar a apresentao desse pptido
ou o reconhecimento pelas clulas T.

Diversidade de Molculas MHC entre A nimais


Uma enorme diversidade exibida pelas molculas MHC dentro de uma espcie e entre individuos. Esta
variabilidade assemelha-se diversidade de anticorpos e receptores de clulas T, mas a fonte de
diversidade de molculas MHC no a mesma:

Anticorpos e receptores de clulas T so gerados por vrios processos somticos, incluindo


rearranjo de genes e mutaes somticas de genes rearranjados. Assim, a gerao de
receptores de clulas T e B dinmica, alterando durante o tempo num individuo;
Em contraste, as molculas MHC expressas por um individuo so fixas nos genes e no alteram
ao longo do tempo. A diversidade do MHC dentro de uma espcie tem origem no polimorfismo,
a presena de multiplos alelos num determinado locus gentico dentro da espcie.

A diversidade de molculas MHC num individuo resulta no apenas deste apresentar multiplos alelos
para cada gene mas tambm da presena de genes duplicados com funes semelhnates ou
sobrepostas, ao contrrio dos isotipos das imunoglobulinas. Como inclui genes com semelhantes mas
no idnticas funes e estruturas (por exemplo, HLA-A, -B e C), o diz-se que o MHC polignico.
O MHC possui um nmero extraordinariamente grande de alelos diferentes em cada locus e um dos
complexos genticos mais polimrficos conhecidos nos vertebrados superiores. Esses alelos diferem
nas suas sequncias de DNA entre individuos em cerca de 5-10% e o nmero de diferenas de
aminocidos entre alelos MHC pode ser significante, com cerca de 20 aminocidos a contribuir para a
natureza estrutural nica de cada alelo:

Anlises de genes classe I do HLA humano revelaram aproximadamente 240 alelos A, 470 alelos
B e 110 alelos C. Em ratinhos o polimorfismo igualmente elevado;
Os genes humanos classe II so de igual modo altamente polimrficos e, em alguns casos,
existem numeros diferentes de genes em individuos diferentes. O numero de genes HLA-DR da
cadeia- pode variar entre 2 e 9 em hapltipos diferentes, e conhecem-se 350 alelos de genes
DRB. No entanto, a cadeia DRA altamente conservada, com apenas 2 alelos diferentes
conhecidos.

Este polimorfismo to elevado resulta numa diversidade tremenda de molculas MHC dentro de uma
espcie. Usando os nmeros de formas allicas dos HLA-A, -B e C, possivel calcular o numero terico
de combinaes que podem existir (240x470x110=12.408.000) para os hapltipos classe I.
Considerando tambm os hapltipos classe II, obtemos uma diversidade elevadissima de alelos MHC.

Joana Maria Soares Pereira

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Desiquilibrio de Ligao
O clculo da diversidade terica assume uma combinao completamente aleatria dos alelos. No
entanto, a diversidade actual inferior, pois certas combinaes allicas ocorrem mais frequentemente
em alguns hapltipos HLA do que o previsto pela combinao aleatria, um estado referido com
desiquilibrio de ligao:

O desiquilibrio de ligao a diferena entre a frequncia observada para uma combinao


particular e a esperada para as frequncias de alelos individuais;
A frequncia esperada para a combinao deve ser calculada pela multiplicao da frequncia
de dois alelos.
HLA-A1 ocorre em 16% dos individuos numa populao (frequncia de 0,16)
HLA-B8 ocorre em 9% dos individuos dessa populao (frequncia de 0,09)
Ser esperado que a combinao de HLA-A1 com HLA-B8 ocorra em 1,4% dos individuos.
No entanto, esta combinao observada em 8,8% dos individuos!

Foram j avanadas vrias explicaes para o desiquilibrio de ligao:


1. A mais simples que ainda no decorreram geraes suficientes para se atingir o numero de
crossovers necessrios para atingir o equilibrio entre os alelos presentes em fundadores da
populao. Os hapltipos que esto representados em maior percentagem na populao hoje
refletem as combinaes de alelos presentes nos fundadores;
2. Alternativamente, efeitos selectivos podero ter levado a uma maior frequncia de certa
combinaes allicas. Por exemplo, certas combinaes de alelos podem produzir resistncia a
certas doenas, levando a que sejam seleccionados, ou podem gerar efeitos malignos, como
susceptibilidade a desordens autoimunes, e sofrer seleco negativa;
3. Os crossovers podem ser mais frquentes em certas regies da sequncia de DNA, e a presena
ou ausncia de regies propensas a sofrer crossover entre alelos pode dictar a frquncia de
associao de alelos. De facto, comprova-se a existncia de alguns locais deste gnero dentro do
MHC.
Apesar do desiquilibrio de ligao, existe aida um enorme polimorfismo no MHC humano e continua a
ser muito dificil emparelhar tipos de MHC do dador e do aceitador para transplantes de rgos com
sucesso.
Relevncia Funcional do Polimorfismo
A divergncia sequencial entre alelos do MHC de uma espcie bastante elevada, tanto com a
divergncia observada para os genes codificantes para algumas enzimas entre espcies. No entanto, a
variao sequencial entre molculas MHC no est aleatoriamente distribuida ao longo da cadeia
polipptidica, est agrupada em pequenos segmentos, maioritariamente nos dominios 1 e 2 das
molculas classe I e no dominio 1 das molculas classe II.

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Dos aminocidos que mostram polimorfismo significante, a maior parte encontra-se na fenda de ligao
ao pptido destas molculas. Assim, a importncia do polimorfismo ser:

As diferenas allicas contribuem para as diferenas observadas na habilidade das molculas


MHC interagirem com um determinado pptido antignico.

Organizao Genmica do MHC


O MHC ocupa cerca de 2000 kb do DNA do ratinho e cerca de 4000 kb do DNA humano. Nos humanos, o
MHC est localizado no brao curto do cromossoma 6 e a 2-microglobulina codificada por um gene
no cromossoma 15:

O locus MHC extende-se cerca de 4 centrimorgans, significando que ocorrem crossovers no


MHC numa frequncia de cerca de 4% em cada meiose;
A recentemente completa sequncia do genoma humano mostra que esta regio bastante
densa, sendo que a maior parte dos genes apresentam funes conhecidas.

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Em humanos, a regio MHC classe I tem cerca de 2000 kb de comprimento e contem aproximadamente
20 genes. No entanto, em ratinho, o MHC classe I consiste em duas regies separadas pelas regies
classe II e III. Incluidos na regio classe I esto os genes que codificam as molculas MHC classe I
clssicas bem caracterizadas, designadas HLA-A, HLA-B e HLA-C em humanos e H-2K, H-2D e H-2L em
ratinhos.
No entanto, vrios genes classe I no-clssicos, identificados por mapeamento molecular, esto
tambm presentes no MHC humano e do ratinho:

Em ratinhos, os genes classe I no-clssicos esto localizados em trs regies (H-2Q, T e M) a


jusante do complexo H-2;
Em humanos, os genes classe I no-clssicos incluem os loci HLA-E, HLA-F, HLA-G, HFE, HLA-J e
HLA-X em cojunto com a familia recentemente descoberta de genes MIC, que inclui desde MICA
a MICE;
Alguns dos genes MHC classe I no-clssicos so pseudogenes e no codificam um produto
proteico, mas outros, como HLA-G e HFE, codificam produtos classe I-like com funes
altamente especializadas;
A familia MIC de genes classe I apresenta apenas 15%-30% de identidade sequencial para com
os genes clssicos, e os membros designados como MICA so altamente polimrficos. Os
produtos de genes MIC so expressos em niveis baixos nas clulas epiteliais e so induzidos pelo
calor ou outros estimulos que influenciam as heat shock proteins.

As funes dos genes MHC classe I no-clssicos so amplamente desconhecidas, apesar de alguns
estudos sugerirem que algumas destas molculas, como as molculas MHC classe I clssicas, podem
apresentar pptidos s clulas T:

Uma molcula codificada pelo locus H-2M em retinho capaz de ligar um pptido self derivado
de uma subunidade da NADH desidrogenase, uma enzima codificada pelo genoma mitocondrial.
Este pptido self contem uma metionina N-terminal formilada. Curiosamente, pptidos
derivados de organismos procariticos tambm apresentam metioninas formiladas;
Estas molculas H-2M podem assim apresentar pptidos de organismos procariticos que so
capazes de viver intracelularmente, como de Mycobacterium tuberculosis, Listeria
monocytogenes, Brucella abortus e Salmonella typhimurium.

A regio MHC classe II contem genes que codificam as cadeias e das molculas MHC classe II
clssicas desiganadas HLA-DR, DP e DQ em humanos e H-2IA e IE em ratinho. O mapeamento
molcular do MHC classe II revelou multiplos genes para cadeias- em algumas regies tanto para
humanos como para ratinhos, tal como multiplos genes para cadeias- em humanos:

Na regio DR humana, por exemplo, existem trs ou quatro genes de cadeia- funcionais;
Todos os produtos destes genes de cadeia- podem ser expressos em conjunto com o produto
do gene de cadeia- numa determinada clula, aumentanto deste modo o numero de molculas
apresentadoras de antignios diferentes na clula;
Apesar da regio DR humana conter apenas um gene de cadeia-, cada uma das regies DP e
DQ apresentam dois.

Foram tambm identificados genes MHC classe II no-clssicos tanto em ratinho como em humanos:

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Em ratinhos, vrios genes classe II (O, O, M e M) codificam molculas MHC no-clssicas


que exibem polimorfismo limitado e um padro de expresso diferente das molculas classe II
clssicas IA e IE;
Na regio classe II humana, genes no-clssicos denominados DM e DO foram identificados;
Os genes DM codificam uma molcula classe II-like (HLA-DM) que facilita o carregamento de
pptidos antignicos para as molculas MHC classe II;
As molculas DO classe II, que so expressas apenas no timo e nas clulas B aduras, funcionam
como reguladores do processamento de antignios classe II.

A regio MHC classe III em humanos e ratinhos contem uma coleco heterognea de genes:

Estes genes codificam vrios componentes do complemento, duas esteride 21-hidrolases, duas
heat-shock proteins e duas citocinas (TNF- e TNF-);
Alguns destes produtos MHC classe III tm papel importante em algumas doenas. Por exemplo,
mutaes em genes codificantes para 21-hidrolases esto relacionadas com congenital adrenal
hyperplasia;
A presena de um grupo de genes classe III conservada em todas as espcies com MHC.

Expresso de Molculas MHC


Como as molculas MHC so necessrias para a apresentao de antignio aos linfcitos T, a expresso
destas proteinas determina se antignios estranhos (e.g., microbianos) nessas clula sero
reconhecidos por clulas T. Assim, existem vrias caracteristicas importantes da expresso de molculas
MHC:

As molculas classe I so constitutivamente expressas virtualmente em todas as clulas


nucleadas, enquanto as molculas classe II so normalmente expressas apenas em clulas
dendriticas, linfcitos B, macrfagos e algumas outras clulas;
A expresso de molculas MHC aumentada por citocinas produzidas durantes as respostas
imunes inata e adaptativa;
A taxa de transcrio o principal determinate do nivel de sintese e expresso de molculas
MHC na superficie.

O padro de expresso do MHC est relacionado com as funes das clulas restritas a classe I e
restritas a classe II:

A funo efectora dos linfcitos Tc CD8+ restritas a classe I matar clulas infectadas com
micrbios intracelulares, como virus. Com os virus so capazes de infectar virtualmente todas as
clulas nucleadas, os ligandos que as clulas T CD8+ reconhecem necessitam de ser
apresentados por todas as clulas nucleadas. A expresso de molculas MHC classe I em todas
as clulas nucleadas tem precisamente este propsito, fornecendo um sistema de apresentao
para antignios virais;
Os linfcito TH CD4+ restritos a classe II apresentam um grupo de funes que requerem o
reconhecimento de antignios apresentados por um nmero de clulas mais limitado. Em
particular, clulas T CD4+ naive precisam de reconhecer antignios que so apresentados por
clulas dendrtiticas em rgos linfcitos perfricos. Linfcitos TH CD4+ diferenciados tm como
principal funo activar macrfagos a eliminar micrbios extracelulares que foram fagocitados e
activar os linfcitos B a produzir anticorpos que tambm eliminam micrbios extracelulares. As

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molculas classe II so expressas principalmente nestes tipos de clulas e fornecem um sistema


de apresentao de pptidos antignicos derivados de micrbios e proteinas extracelulares.
A regulao da expresso de genes MHC feita por citocinas produzidas durante as respostas imunes
inata e adaptativa:
1. Na maior parte dos tipos de clulas, os interferes IFN-, IFN- e IFN- aumentam o nivel de
expresso de molculas classe I, e TNF e LT podem ter o mesmo efeito. Os interferes so
produzidos durante o inicio da resposta imune inata a vrios virus, e TNF e LT so produzidos em
resposta a vrias infeces microbianas. Assim, as respostas imunes inatas a micrbios
aumentam a expresso de molculas MHC que apresentam antignios microbianos a clulas T
especificas para micrbios;
2. A expresso de molculas MHC classe II tambm regulada por citocinas e outros sinais em
diferentes clulas. IFN- a principal citocina envolvida na estimulao da expresso de de
molculas classe II pelas clulas apresentadoras de antignios, como as clulas dendriticas e os
macrfagos:
O IFN- produzido pelas clulas naturalmente
assassinas durante as reaces imunes inatas, e
por clulas T activadas por antignios durantes
reaces imunes adaptativas;
A habilidade do IFN- aumentar a expresso de
classe II em clulas apresentadoras de
antignios um mecanismo amplificador na
imunidade inata;
Nas clulas dendriticas, a expresso de
molculas classe II tambm aumenta a resposta
a sinais de Toll-like receptors respondendo a
componentes microbianos, promovendo assim a
apresentao de antignios microbianos;
Linfcitos B expressam constitutivamente
molculas classe II e aumentam a expresso em
resposta ao reconhecimento de antignios e a
citocinas produzidas por clulas TH, melhorando
assim a apresentao de antignios pelas clulas
TH;
Clulas endoteliais vasculares, como os macrfagos, aumentam a expresso de classe II
em resposta ao IFN-. A significncia deste fenmeno no clara mas vrios tipos de
clulas no imunes expresso poucos, se no nenhumas, molculas molculas MHC a
menos que sejam expostas a elevados niveis de IFN- mas no perecem apresentar
antignios a clulas CD4+;
Clulas T humanas, mas no de ratinho, expressam molculas classe II depois da
activao. Contudo, nenhuma citocina foi identificada nesta resposta.
As citocinas aumentam a expresso de MHC por estimulao da taxa de transcrio de genes classe I e
classe II numa larga variedade de tipos de clulas:

Estes efeitos so mediados pela ligao de factores de transcrio activados por citocinas a
sequncias de DNA regulatrias nas regies promotoras dos genes MHC;

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Vrios factores de transcrio devem ser


montados e ligar-se a uma proteina designada
activador de transcrio classe II (CIITA), e o
complexo inteiro liga-se ao promotor classe II e
promove a trancrio eficiente;
Por manter o complexo de factores de
transcrio junto, a CIITA funciona como um
regulador principal da expresso de genes classe
II e expressa em resposta ao IFN-;
Mutaes em alguns destes factores de
transcrio foram identificadas como a causa de
doenas
humanas
de
imunodeficincia
associadas com expresso deficiente de
molculas MHC.

A expresso da maior parte das proteinas envolvidas no


processamento e apresentao de antignios
coordenadamente regulada. Assim, o IFN- aumenta a
transcrio de no s genes classe I e classe II como
tambm de 2-microglobulina, dos genes que codificam
duas das subunidades do proteossomas e dos genes que
codificam as subunidade do heterodimero TAP.

PROCESSAMENTO DE ANTIGNIOS E SUA APRESENTAO AOS


LINFCITOS T

Reconhecimento de Antignios pelos Linfcitos T


Os linfcitos T tm um papel importante nas respostas imunes adaptativas contra proteinas
antignicas:

Na imunidade mediada por clulas, as clulas T CD4+ activam macrfagos para destruir
micrbios fagocitados e as clulas T CD8+ matam clulas infectadas por micrbios intracelulares;
Na imunidade humoral, as clulas TH CD4+ interagem com linfcito B e estimulam a proliferao
e diferenciao dessas clulas B.

Tanto a fase de induo como a efectora das respostas das clulas T so desencadeadas pelo
reconhecimento de um antignio especifico. As clulas T reconhecem fragmentos peptidicos que so
derivados de proteinas antignicas e que esto ligados a molculas na superficie celular codificadas por
genes do MHC. As clulas que apresentam pptidos associados ao MHC so designadas clulas
apresentadoras de antignios (APCs):

Certas APCs apresentam antignios a clulas T naive durante a fase de reconhecimento das
respostas imunes de modo a iniciar essas respostas;

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E algumas APCs apresentam antignios a clulas T diferenciadas durante a fase efectora para
desencadear os mecanismos que levam eliminao do antignio.

As formas fisico-quimicas dos antignios que so reconhecidos pelas clulas T so diferentes das
reconhecidas pelos linfcitos B e pelos anticorpos, e este facto levou descoberta do papelo do MHC
no reconhecimento de antignios pelas clulas T: vrias caracteristicas do reconhecimento de
antignios so unicas dos linfcitos T:
1. A maior parte das clulas T reconhece pptidos e no outras molculas. Isto portque apenas
pptidos se ligam a molculas MHC. A maior parte dos linfcitos T reconhecem apenas pptidos
enquanto as clulas B so capazes de reconhecer pptidos, proteinas, cidos nucleicos,
polissacarideos, lipidos e pequeno quimicos. Como resultados, as respostas imunes mediadas
por clulas T so normalmente induzidas por antignios pptidicos, a fonte natural de pptidos
estranhos, enquanto as respostas imunes humorais so observadas com antignio pptidicos e
no pptidicos. Para alm disso, algumas clulas T so especificam para pequenos haptenos
quimicos, como dinitrofenol, uruchiol do veneno de hera, plactams de antibiticos pinicilina.
Nestas situaes, os haptenos devem ligar-se a proteinas do proprio e estes pptidos
conjugados so reconhecidos por clulas T.
2. As clulas T so especificas por sequncias de aminocidos dos pptidos. Em contraste, as
clulas B reconhecem determinantes conformacionais dos antignios,mesmo proteinas, na sua
configurao terciria nativa. Os receptores de antignios das clulas T reconhecem poucos
residuos num nico pptido e diferentes clulas T so capazes de distinguir pptidos que
diferem mesmo num nico aminocido;
3. As clulas T reconhecem e respondem a pptidos antignicos estranhos apenas quando estes
esto ligados superficie das APCs, enquanto as clulas B e anticorpos secretados se ligam a
antignios soluveis nos fluidos corporais e a antignios expostos na superficie das clulas
estranhas. Isto ocorre porque as clulas T so capazes de reconhecer apenas pptidos ligados e
apresentados pelas molculas MHC, e estas so proteinas intgrais da membrana das APCs;
4. As clulas T de qualquer individuo reconhecem pptidos antignicos estranhos apenas
quando estes esto ligados e so apresentados pelas molculas MHC desse individuo. Esta
caracteristica designada restrio MHC e pode ser demonstrada em situaes experimentais
nas quais os linfctios T de um individuo so misturadas com APCS de outro individuo;
5. As clulas TH CD4+ reconhecem pptidos ligados a molculas MHC classe II, enquanto as
clulas Tc CD8+ reconhecem pptidos ligados a molculas MHc classe I. Assim, as clulas T CD4+
so restritas a MHC classe II e as clulas T CD8+ so restritas a MHC classe I. A razo para esta
segregao que o CD4 se liga directamente a molculas MHC classe II e o CD8 a molculas
MHC classe I;
6. As clulas T CD4+ restritas a classe II reconhecem pptidos derivados principalmente de
proteinas extracelulares que so internalizadas em vesiculas pelas APCs enquanto as clulas T
CD8+ reconhecem pptidos derivados do citosol, principalmente proteinas endogenamente
sintetizadas. Isto ocorre porque proteinas vesiculares entram na via de processamento e
apresentao de pptidos classe II e as proteinas citoslicas entram na via classe I.
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A primeira demonstrao da restrio MHC surgiu de estudos de Rolf Zinkernal e Peter Doherty, que
examinavam o reconhecimento de clulas infectadas por virus por linfcitos T citotxicos (CTLs)
especificos para virus em ratinhos puros:

Se um ratinho for infectado por um virus, as CTLs CD8+ especififcas para virus desenvolvem-se
no animal. Essas CTLs reconhecem e matam clulas infectadas por virus apenas se essas clulas
infectadas expressarem molculas MHC de alelos que so expressos no animal no qual as CTLs
foram geradas;
Pelo o uso de estirpes de ratinhos MHC congnicos, mostrou-se que as CTLs e a clula alvo
infectada devem ser derivadas de ratinhos que partinham um alelo MHC classe I;
Assim, o reconhecimento de antignios pelas CTLs CD8+ restrito a alelos MHC classe I self;
Experincias essencialmente semelhantes demonstraram tambm que as respostas dos
linfcitos TH CD4+ a antignios so restritos a MHC classe II.

A restrio MHC das clulas T uma consequncia dos processos de seleco durante a maturao de
clulas T no timo:

Durantes este processo de maturao, as clulas T que expressam receptores de antignios


especificos para pptidos ligados a MHC prprio so selecionados para sobreviver, e as clulas
que no reconhecem MHC do prprio acabam por morrer;

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Este processo assegura que as clulas T que atingem a maturidade so as teis porque sero
capazes de reconhecer antignios apresentados pelas molculas MHC do individuo.

A descoberta da restrio MHC forneceu uma evidncia definitiva que as clulas T no reconhecem
apenas proteinas antignicas mas tambm residuos polimrficos das molculas MHC, que so residuos
que distinguem MHC prprio do estranho. Assim, as molculas MHC apresentam pptidos para
reconhecimento por linfcitos T e so tambm componentes integrais dos ligandos que as clulas T
reconhecem. No entanto, apesar das clulas T serem restritas a MHC do prprio, elas tambm
reconhecm molculas MHC etsranhas presentes em enxertos de tecidos e rejitam-nos.
Em adio apresentao de pptidos associada ao MHC, existe um outro sistema de apresentao de
antignios especializado para apresentar antignios lipidicos:

A molcula CD1 classe I no-polimrfica expressa numa variedade de APCs e epitlios, e


apresenta antignios lipidicos a populaes de clulas T no usuais que no so restritas a MHC;
Uma variedade de clulas so capazes de reconhecer antignios lipidicos apresentados pelas
CD1, incluindo clulas T CD4+, CD8+ e CD4-CD8- que expressam recpetores de clulas T (TCR)
e tambm clulas T ;
Existe um pequeno grupo de clulas T que expressam marcadores de clulas naturalmente
assassinas, designadas NK-T cells, e reconhecem lipidos associados a CD1 e glicolipidos,
incluindo alguns produzidos por bactrias.

Clulas Apresentadoras de Antignios


As respostas dos linfctios T especificos para proteinas antignicas requerem a participao de clulas
apresentadoras de antignios (APCs), que capturam e apresentam as clulas T. Esta concluso
baseada em vrias linhas de evidncia experimental:
1. As clulas T presentes no sangue, bao ou nodos linfticos de individuos imunizados com uma
proteina antignica podem ser activadas pela exposio a esse anitgnio numa cultura de
tecido. Se clulas dendriticas, macrfagos e linfcitos B contaminates forem removidos da
cultura, os linfcitos T purificados no respondem ao antignio, e a resposta pode ser
restaurada pela adio de qualquer uma dessas clulas. Isto permite determinar que tipo de
clula capaz de apresentar funo apresentadora de antignios;
2. Se um antignio for recolhido por clulas dendriticas ou macrfagos in vitro e dpois injectado
num ratinho, a quantidade de antignio associado a clulas para induzir a resposta 1000 vezes
inferior quantidade de mesmo antignio necessria quando administrado por si s nums
forma livre. Isto , as proteinas associadas a clulas so muito mais imunognicas que as
proteinas soluveis. Isto explicado pelo facto de a forma imunognica do antignio ser a forma
associada a APCs e apenas uma pequena fraco de antignio livre injectado que acaba
associado a APCs in vivo. Este conceito agora explorado para imunizar pacientes com cancro
contra os seus tumores pelo crescimento de APCs (especeialmente, clulas dendriticas) desses
pacientes incubando-as com antignios tumorais e injectando-as nos pacientes como uma
vacina celular.

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As clulas apresentadoras de antignios apresentam duas funes importntes na activao de clulas


T:

Processamento de antignios as APCs convertem proteinas antignicas a pptidos, e


apresentam complexos pptido-MHC para reconhecimento por clulas T;
Co-estimulao algumas APCs fornecem estimulos (co-estimuladores) s clulas T, para alm
dos iniciados pelo reconhecimento dos complexos pptido-MHC pelo receptor da clula T, que
so necessrios para as respostas completas das clulas T, especialmente as clulas CD4 + naive.

A funo apresentadora de antignios das APCs aumentada pela exposio a produtos microbianos:

As clulas dendriticas e os macrfagos expressam Toll-like receptors que respondem a micrbios


pelo aumento da expresso de molculas MHC e de co-estimuladores, melhorando a eficincia
da apresentao de antignios e antivando as APCs a produxir citocinas, que estimulam as
respostas das clulas T;
As clulas dendriticas e os macrfagos que so activados por micrbios expressam receptores
de quimiocinas que estimulam a sua migrao para locais de infeco, amplificando assim a
apresentao de antignios e a antivao de clulas T.

Para induzir a resposta das clulas T a uma proteina antignica experimentalmente, o antignio deve
ser administrado com substncias designadas adjuvantes, que podem ser produtos microbianos, como
micobactrias mortas, ou mimitizam micrbios e estimulam as respostas das clulas T pelos mesmo
mecanismos dos produtos microbianos:

No possivel usar vrios abjuvantes microbianos em humanos devido inflamao aptolgica


que os produtos microbianos geram;
Alguns adjuvantes que so usados em humanos, como almen, so especialmente bons na
estimulao das respostas dos anticorpos mas so estimuladores de clulas T menos potentes;
Antignios proteicos administrados na forma aquosa sem adjuvantes tanto no induzem
respostas das clulas T como induzem um estado de no-resposta, designado de tolerncia.

Diferentes tipos de clulas funcionam como clulas apresentadoras de antignios para activar clulas T
naive e previamente efectoras diferenciadas:

Clulas dendriticas so as clulas apresentadoras de antignios mais efectivas na activao de


clulas T CD4+ e CD8+ naive e, assim, na iniciao das respostas das clulas T;

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Macrfagos apresentam antignios a c+elulas T CD4+ diferenciadas (efectoras) na fase


efectora da imunidade mediada por clulas;
Linfcitos B apresentam antignios a clulas TH durante as respostas imunes humorais.

As clulas dendriticas, macrfagos e linfcitos B expressam molculas MHC classe II e co-estimuladores,


e so, assim, capazes de activar linfcitos T CD4+. Por esta razo, estes trs tipos de clulas foram
designados clulas apresentadoras de antignios profissionais. Contudo, este termo por vezes usado
para referir apenas as clulas dendrtiticas porque:

Este o unico tipo de clulas cuja funo principal capturar e apresentar antignios;
o unico tipo de APCs capazes de iniciar respostas das clulas T.

Resumidamente, podemos organizar as principais caracteristicas das APCs do seguinte modo:


Tipos de clulas

Clulas dendriticas

Macrfagos

Linfcitos B

Expresso de
Co-estimuladores
Constitutiva; aumenta com
Constitutiva; aumenta
a maturao; induzivel pelo
com a maturao;
IFN-, interaces CD40aumentada pelo IFN-
CD40L
Baixa ou negativa;
Induzivel pelo LPS, IFN-,
induzida pelo IFN-
interaces CD40-CD40L
Induzida pelas clulas T
Constitutiva; aumentada
(interaces CD40-CD40L),
pela IL-4
cross-linking antignio
receptor
MHC classe II

Clulas endoteliais
vasculares

Unduzivel pelo IFN-;


constitutiva em humanos

Constitutiva; induzivel em
ratinhos

Vrias clulas epiteliais


e mesenquimais

Induzivel pelo IFN-

Probabelmente nenhuma

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Principal funo
Iniciao das respostas das
clulas T a proteinas
antignicas
Fase efectora das respostas
mediadas por clulas
Apresentao de antignios a
+
clulas TH CD4 nas respostas
imunes humorais
(interaces clula T-clula B)
Promove a activao de
clulas T especificas para
antignios no local de
exposio ao antignio
Funo fisiolgica
desconhecida

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Papel das Clulas Dendriticas na Iniciao das Respostas das Clulas T


As clulas dendrtiticas esto presentes nos rgos linfticos, no epitlio da pele e dos tractos
respiratrio e gastrointestinal e no intersticio da maior parte dos rgos parenquimais:

Estas clulas so morfologicamente identificadas


pelas suas projeces membranosas;
Existem grupos de clulas dendriticas que podem
ser distinguidas pela expresso de vrios
marcadores membranares e podem ter diferentes
papeis nas respostas imunes;
Todas as clulas dendriticas tm origem em
percursores da medula ssea e a maior parte,
designadas clulas dendriticas mielides, esto
relacionadas em linhagem com os fagcitos
mononucleares;
As clulas dendriticas epiteliais so as clulas de
Langerhans e ocupam cerca de 25% da rea
superficial da epiderme devido s suas grandes
projeces.

Normalmente, as clulas dendriticas epiteliais e dos


tecidos encontram-se num estado de descanso ou
imaturo, necessitando de um processo de maturao:

Estas clulas dendriticas capturam proteinas antignicas microbianas e transportam os


antignios para nodos linfticos;
Em resposta aos componentes microbianos encontrados, as clulas dendriticas maturam-se
enquanto migram para os nodos linfticos e tornam-se extremamante eficientes na
apresentao de antignios e na estimulao de clulas T naive;
As clulas dendriticas maduras residem nas zonas de clulas T nos nodos linfticos e neste local
apresentam antignios a clulas T, e neste local so simplesmente designadas clulas
dendriticas.

Assim, a iniciao das respostas das clulas T CD4+ d-se nos rgos linfoides perifricos, sendo
necessrio um transporte de antignios para os rgos linfides depois de serem recolhidas na sua
entrada portal:

As vias comuns de entrada de antignios estranhos, como micrbios, num hospedeiro so a pele
e os epitlios dos sistemas respiratrio e gastrointestinal. Em adio, antignios microbianos
podem ser produzidos em qualquer tecido que possa ter sido infectado;
A pele, o epitlio mucoso e os rgos parenquimais contm numerosos capilares linfticos que
drenam linfa dessas locais para os nodos linfticos regionais. A linfa contem uma amostra de
todos os antignios soluveis e associados a clulas presentes nestes tecidos;
Os rgos linfticos que se encontram ao longo dos vasos linfticos actuam como filtros da linfa
em numerosos pontos antes desta alcanar o sangue;
Antignios que entram na corrente sanguinea so de modo semelhante testados no bao.

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Imunologia

O funo das clulas dendriticas residentes nos epitlios e nos tecidos capturar proteinas antignicas
e transportar os antignios para drenagem nos nodos linfticos:

As clulas dendriticas imaturas, residentes nos epitlios e nos tecidos, expressam receptores
membranares que se ligam aos micrbios, como receptores de manose. As clulas dendriticas
usam esses receptores para capturar e endocitar antignios microbianos, e iniciam o
processamento de proteinas em pptidos capazes de se ligar a molculas MHC.
As clulas dendriticas tambm expressam Toll-like receptors que reconhecem molculas
microbianas e activam a clula para secreo de citocinas e iniciam o seu processo de
maturao;
As clulas dendriticas que so activadas por micrbios e por citocinas produzidas localmente,
como tumor necrosis factor, perdem a sua adeso pelos epitlios e comeam a expressar um
receptor de quimiocinas designado CCR7 que especifico para quimiocinas produzidas nas
zonas de clulas T nos nodos linfticos. Assim, as quimiocinas atraem clulas dendriticas
carregadoras de antignios microbianos para as zonas de clulas T dos nodos linfticos
regionais;
A maturao tambm converte as clulas dendriticas cuja funo era capturar antignios em
clulas que so capazes de apresentar antignios a clulas T naive e activar os linfcitos. As
clulas dendriticas maduras expressam elevados niveis de molculas MHC classe II com pptidos
ligados tal como co-estimuladores necessrios para a activao de clulas T;
Quando estas clulas se tornam residentes no nodos linfticos, elas esto completamente
desenvolvidas em potentes APCs com a habilidade de activar linfcitos T. Clulas T naive que
recirculam atravs dos nodos linfticos encontram estas APCs, as clulas T que so especificas
para a apresentao de complexos pptido-MHC so activadas e um resposta imune iniciada.

Assim, podemos descrever vrias propriedades das clulas dendriticas que as tornam as clulas
apresentadoras de antignios mais efectivas na iniciao de respostas primrias das clulas T:
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1. As clulas dendriticas esto estrategicamente localizadas em locais comuns de entrada de


micrbios e antignios estranhos e em tecidos que podem ser colonizados por micrbios;
2. As clulas dendriticas expressam receptores que permitem que elas capturem micrbios e
respondam a estes;
3. Estas clulas migram preferencialmente para zonas de clulas T nos nodos linfticos, atravs dos
quais linfcitos T naive circulam procurando por antignios estranhos;
4. Clulas dendriticas maduras expressam elevados niveis de co-estimuladores, que so
necessrios para activar linfcitos T naive.
Clulas dendriticas imaturas
Principal funo
Expresso de receptores Fc, receptores
de manose
Expresso de molculas envolvidas na
activao de clulas T:
B7, ICAM-1, IL-12
Molculas MHC classe II
Semi-vida
Numero de molculas de superficie

Captura de antignios

Clulas dendriticas maduras


Apresentao de antignios a
clulas T

++

- ou baixa

++

~ 10 hr
6
~ 10

>100 hr
6
~ 7 x 10

Os antignios podem tambm ser transportados para os nodos linfticos numa forma soluvel. Quando a
linfa entra num nodo linfide atravs de um vasos lifntico aferente filtrada por todo o nodo:

Aqui, os antignios soluveis na linfa podem ser extraidos do fluido por clulas dendriticas
residentes e macrfagos e as clulas B no nodo podem tambm reconhecer e internalizar
antignios soluveis;
As clulas dendriticas, os macrfagos e as clulas B que reconheram proteinas antignicas
podem depois process-las e apresentar esses antignios a clulas T naive e a clulas T efectoras
que foram anteriormente produzidas;
Assim, as populaes de APCs nos nodos linfticos acumulam e concentram antignios e
apresentam-nos a linfcitos T CD4+ especificos.

As clulas dendriticas so tambm as melhores APCs na induo de respostas primrias de clulas T


CD8+, mas isto coloca um problema especial porque os antignios que estes linfcitos reconhecem tm
de ser produzidos em qualquer tipo de clula, como uma clula infectada por virus ou tumoral:

As clulas dendriticas apresentam a habilidade de ingerir clulas infectadas por virus ou


tumorais e apresentar antignios dessas clulas em molculas MHC classe I;
Esta via de apresentao de antignios contrria regra geral de que antignios ingeridos em
vesicula so apresentadas em molculas MHC classe II, enquanto pptidos associados a MHC
classe I so derivados de proteinas citoslicas;
Este processo designado cross-presentation para indicar que um tipo de clula capaz de
apresentar antignios de outra clula e activar clulas T especificas para esses antignios.

Os linfcitos B reconhecem antignios soluveis tal como antignios apresnetados por clulas
dendriticas. Um tipo de clulas especializadas designadas de clulas dendriticas foliculares, que so
distintas das clulas dendriticas comuns, apresentam antignios a linfcitos B previamente activados
em centros germinais.
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Apresentao de Antignios a Linfcitos T Efectores Diferenciados


Nas respostas imunes mediadas por clulas, os macrfagos apresentam os antignios de micrbios
fagocitados e clulas T efectoras, que activam os macrfagos a matar os micrbios. Este processo a
reaco central da imunidade mediada por clulas:

Moncitos circulantes so capazes de migrar para qualquer local de infeco e inflamao, onde
se diferenciam em macrfagos e fagocitam e destroem micrbios;
As clulas T CD4+ aumentam as actividade microbicidas destes macrfagos. A maior parte dos
macrfagos expressa baixos niveis de molculas MHC classe II e co-estimuladores, e niveis mais
elevados so induzidos pela citocina IFN-.

Por outro lados, nas respostas imunes humorais os linfcitos B internalizam proteinas antignicas
soluveis e apresentam pptidos derivados dessas proteinas a clulas TH. Esta funo das clulas B
essencial para a produo de anticorpos dependentes de clulas TH, um processo que ocorre
principalmente nos rgos linfides.
Todas as clulas nucleadas so capazes de apresentar pptidos associados a molculas MHC classe I,
derivados de proteinas antignicas citoslicas, a linfcitos T CD8+ citotxicos porque todas as clulas
nucleadas expressam molculas MHC classe I:

A maior parte das proteinas antignicas estranhas que esto presentes no citosol so
engenamente sintetizadas, como proteinas virais em clulas infectadas por virus e proteinas
mutadas em clulas tumorais;
Todas as clulas nucleadas so susceptiveis a infeces virais e a mutaes causadoras de
tumores. Assim, importante que o sistema imune seja capaz de reconhecer antignios
citoslicos ancoradas em qualquer tipo de clula;
CTLs CD8+ diferenciadas so capazes de reconhecer pptidos associados a classe I e matar
qualquer clula que expresse antignios;
A expresso ubiqua de molculas classe I permite que CTLs restritas a classe Ireconheam e
aliminam qualquer tipo de clula infectada por virus ou tumoral;
Micrbios fagocitados podem tambem ser reconhecidos por CTLs CD8+ porque alguns destes
micrbios ou os seus antignios podem escapar das vesiculas fagociticas para o citosol.

No entanto, a apresentao de pptidos associados a molculas MHC classe II ocorre apenas nas APCs,
mas ainda outras clulas so capazes de expressar estas molculas MHC classe II:

As clulas endoteliais vasculares em humanos expressam molculas MHC classe II e podero


apresentar antignios a clulas T sanguineas que se tornaram aderentes aprede do vaso. Isto
contribui para o recrutamento e activao de clulas T nas reaces imunes mediadas por
clulas;
As clulas endoteliais em enxertos so tambm alvos de clulas T reagindo contra enxertos
antignicos. Vrias clulas epiteliais e mesenquimais expressam molculas MHC classe II em
resposta a IFN-. O significado fisiolgico da apresentao de antignios por estas clulas ainda
no claro, e j que no expressam co-estimuladores no devem ter papel importante na
apresentao de antignios a clulas T;
As clulas epiteliais timicas expressam constitutivamente molculas MHC classe II e tm um
papel critico na apresentao de complexos MHC-pptido a clulas T que sofrem maturao no

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timo como parte dos processos de seleco que moldam o reportrio de especificidades das
clulas T.

Processamento de Antignios
As vias de processamento de antignios convertem proteinas antignicas derivadas do espao
extracelular ou do citosol em pptidos e carregam esses pptidos nas molculas MHC para
apresentao aos linfcitos T:

As vias de processamento e apresentao de antignios usam organelos e enzimas subcelulares


que apresentam funes generalizadas de degradao e reciclagem de proteinas que no so
exclusivamente usadas para a apresentao de antignios ao sistema imune;
Assim, tanto a via de apresentao de antignio pelo MHC classe I ou classe II evoluiram como
adaptaes de funes celulares bsicas;
Os mecanismos celulares de processamento de antignios so designados para gerar pptidos
que apresentam caracteristicas estruturais necessrias para a associao com molculas MHC e
para colocar esses pptidos na mesma localizao celular das molculas MHC apropriadas com
fendas de ligao a pptidos disponiveis;
A ligao de pptidos a molculas MHC ocorre antes da expresso na superficie da clula e um
componente integral da biossintes e montagem das molculas MHC, devido tamb ao facto de
este passo ser necessrio para uma montagem estvel das molculas MHC.

Os diferentes destinos dos antignios vesiculares e citoslicos so devidos a vias de biossintese e


montagem diferentes para molculas classe I e classe II:

Esta diferente fundamental entre antignios vesiculares e citoslicos foram demonstrados


experimentalmente pela anlise da apresentao do mesmo antignio produzido em APC por
diferentes vias;
Se uma proteina globular for adicionada na forma soluvel a APCs e endocitada para vesiculas
destas clulas, ele subsequentemente apresentada como pptidos associados a classe II e
reconhecida por clulas T CD4+;

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Em contraste, se a mesma proteina antignica for produzida no citoplasma de APCs com


produto de um gene modificado de modo a entrar na via secretria, ou introduzida
directamente no citoplasma de APCs por choque osmtico, ela apresentada na forma de
pptidos associados a classe I que so reconhecidos por clulas T CD8+.

As principais caracteristicas das vias MHC classe I e classe II so:


Caracteristica

Via MHC classe II


Cadeias e polimrficas, pptido

Composio do complexo pptido-MHC


estvel

Tipos de APCs
Clulas T
Fontes de proteinas antignicas
Enzimas responsveis pela gerao de
pptidos
Local de carregamento do MHC
Molcula envolvidas no transporte de
pptidos e carregamento de molculas
MHC

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Clulas dendriticas, fagcito


mononucleares, linfcitos B,
clulas endoteliais, epitlio timico
+
Clulas T CD4
proteinas endossomais/lisossomais
(maioritariamente internalizadas
do ambiente extracelular)
Proteases endossomais e
lisossomais (e.g., catepsinas)
Compartimento vesicular
especializado
Chaperones no ER; cadeia
invariante no RE, Golgi e MIIC/CIIV;
DM

Via MHC classe I


Cadeia polimrfica, 2micrglobulina, pptido

Todas as clulas nucleadas


+

Clulas T CD8
Proteinas citoslicas
(principalmente sintetizadas na
clula, podem tambm entrar no
citosol a partir dos fagossomas)
Proteossoma citoslico
Reticulo endoplasmtico
Chaperones, TAP no RE

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Via MHC Classe II


A produo de pptidos associados a MHC classe II a partir de antignios endocitados involve a
degradao proteolitica de proteinas internalizadas em vesiculas endociticas e a ligao de pptidos a
molculas MHC classe II nestas vesiculas:

1. RECOLHA DE PROTEINAS EXTRACELULARES PARA COMPARTIMENTOS VESICULARES DAS APCS

Os passos iniciais na apresentao de proteinas antignios extracelulares so a ligao do antignio


naive a uma APC e a internalizao desse antignio. Diferentes APCs so capazes de se ligar a proteinas
antignicas de vrios modos e com eficincias e especificidades variveis:

Clulas dendriticas e macrfagos expressam uma variedade de receptores de superficie que


reconhecem estruturas partilhadas por vrios micrbios. Assim, estas APCs ligam e internalizam
micrbios eficientemente;
Macrfagos tambm expressam receptores para as pores Fc dos anticorpos e receptores para
a proteina do complemento C3b, que liga antignios com anticorpos ligados ou proteinas do
complemento e melhoram a sua internalizao;
Na superficie dos linfcitos B tambm existem receptores, as imunoglobulinas de superficie,
que, devido s suas elevadas afinidade para antignios, conseguem mediar a internalizao de
proteins presentes a concentraes muito baixas no fluido extracelular.

Depois da internalizao, as proteinas antignicas localizam-se em vesiculas intracelulares revestidas


por uma membrana e os endossomas so vesiculas com pH acidico que contm enzimas proteoliticas. A
via endossomal de trfego intracelular de proteinas comunica com lisossomas, que so vesiculas
revestidas por uma membrana mais densas e com conteudo enzimtico. Micrbios particulares so
internalizados em vesiculas designadas fagossomas, produzindo vesiculas designadas fagolisossomas. A
fuso dos lisossomas com as vesiculas de endocitose leva degradao do contedo fagocitado.

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No entanto, alguns micrbios, como as micobactrias e a Leishmania, podem sobreviver e mesmo


replicar nos fagossomas ou endossomas, fornecendo uma fonte persistente de antignios nos
compartimentos vesiculares.
2. PROCESSAMENTO DE PROTEINAS INTERNALIZADAS EM VESICULAS ENDOSSOMAIS E LISOSSOMAIS

Proteinas internalizadas so degradadas enzimaticamente em endossomas tardios e lisossomas para


gerar pptidos que so capazes de se ligar s fendas de molculas MHC classe II. A degradao de
proteinas antignicas em vesiculas um processo activo mediado por proteases que apresentam um
pH ptimo:

O processamento de proteinas soluveis por macrfagos (e outras APCs) inibida mantendo as


APCs metabolicamente inertes por fixao quimica ou aumentando o pH de vesiculas
intracelulares acidicas com agentes como as cloroquinas;
Vrios tipos de proteases esto presentes em endossomas e lisossomas e inibidores especificos
destas enzimas bloqueiam a apresentao de proteinas antignicas pelas APCs;
As formas processadas da maior parte das proteinas antignicas que as clulas T reconhecem
podem ser artificialmente geradas por protelise. As APCs que so quimicamente fixadas ou
tratadas com cloroquina antes de processarem proteinas antignicas podem apresentar
eficientmente pptidos antes digeridos desse antignio mas no a proteina intacta a clulas T
especificas.

Vrias enzimas diferentes participam na degradao de proteinas antignicas nos endossomas. As


proteases mais abundantes nos endossomas so as catepsinas, que so proteases tiol e aspartil com
largas especificidades de substratos e que apresentam um papel importante na produo de pptidos
para a via classe II. Proteinas parcialmente degradadas ou clivadas ligam-se a fendas MHC classe II livres
e so enzimaticamente aparadas para o seu tamanho final.
A maior parte dos pptidos de ligao a MHC classe II so derivados de proteinas internalizadas do
meio extracelular e proteinas de compartimentos secretrios que so normalmente degradadas em
lisossomas. Menos frequentemente, as proteinas citoplasmticas e membranares podem tambm
entrar na via classe II.
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Em alguns casos, isto pode resultar de digesto enzimtica de conteudos citoplasmticos, autofagia:

Nesta via, proteinas citoplasmticas so presas em vesiculas derivadas do reticulo


endoplasmtico designadas autofagossomas;
Estas vesiculas fundem-se com lisossomas e as proteinas citoplasmticas so proteoliticamente
degradadas;
Os pptidos gerados por esta via podem ser entregues s mesmas vesiculas classe II s quais os
pptidos derivados de antignios ingeridos so entregues.

Alguns pptidos que se associam com molculas classe II derivam de proteinas membranares que
podem ser recicladas pela mesma via endocitica que as proteinas extracelulares. Assim, mesmo virus,
que replicam no citoplasma de clulas infectadas, produzem proteinas citoplasmticas e membranares
que so degradadas em pptidos que entram na via MHC classe II de apresentao de antignios. Este
pode ser um mecanismo para a activao de clulas TH CD4+ especificas para antignios virais.
3. BIOSSINTESE E TRANSPORTE DE MOLCULAS MHC CLASSE II PARA OS ENDOSSOMAS

A biossintese de molculas MHC classe II ocorre no RE e esto so transportadas para endossomas com
uma proteina associada, designada cadeia invariante (Ij), que ocupa as fendas de ligao ao pptido de
molculas classe II recentemente sintetizadas:

As cadeias e das molculas MHc classe II so coordenadamente sintetizadas e associadas


uma outra no RE;
Dimeros classe II nascentes so estruturalmente instveis e a sua montagem auxiliada por
chaperones residentes no RE, como a calnexina;
A Ij no polimrfica tambm se associa com heterodimeros MHC classe II no RE.

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A proteina Ij um trimero composto por trs subunidades de cerca de 30 kDa, cada uma das quais se
liga a um heterodimero MHC classe II de tal modo que interfere com o carregamento da fenda
formada pelas cadeias e :

Assim, as molculas MHC classe II no conseguem ligar e apresentar pptidos que encontram no
RE, deixando tais pptidos para se associar a molculas classe I;
A Ij tambm promove a montagem de molculas classe II e direcciona molculas classe II
recentemente formadas para endossomas tardios e lisossomas onde proteinas internalizadas
foram proteoliticamente degradadas em pptidos.

Ao contrrio das vesiculas contendo proteinas destinadas para secreo ou para a superficie da clula,
as vesiculas contendo molculas MHC classe II emergem do aparelho de Golgi e so enviadas para
endossomas e lisossomas:

Durante a sua viagem at superficie das clulas, as vesiculas exociticas transportadoras de


molculas MHC classe II encontram-se e fundem-se com vesiculas endociticas contendo
antignios internalizados e processados;
Como resultado, as molculas classe II entram nas vesiculas que tambm contm pptidos
gerados por protelise de proteinas endocitadas.

Foi definida uma classe de endossomas ricos em classe II que apresentam papeis importantes na
apresentao de antignios. Em macrfagos e linfcitos B humanos, designa-se compartimento MHC
classe II, ou MIIC:

Apresenta uma aparncia multilaminar por microscopia electrnica;


Contem todos os compartimentos necessrios para a associao pptido-classe II, incluido
enzimas que degradam proteinas antignicas, as molculas classe II, as Ij e uma molcula
designada human leukocyte antigen DM (HLA-DM).

APCs de ratinhos KO deficiente em Ij mostram apresentao deficiente de algumas proteinas


antignicas mas so ainda capazes de apresentar pptidos associados a classe II derivados de uma larga
gama de proteinas. Assim, isto sugere que a importncia da Ij pode variar de acordo com o antignio e
aser apresentado.
4. ASSOCIAO DE PPTIDOS PROCESSADOS COM MOLCULAS MHC CLASSE II EM VESICULAS

Nos MIIC, ocorre a associao de pptidos s molculas MHC classe II. A Ij (cadeia invariante) dissociase das molculas MHC classe II pela aco combinada de enzimas proteoliticas e da molculas HLA-DM,
e os pptidos antignicos so ento capazes de se ligar a fendas de ligao de pptido disponiveis nas
molculas MHC classe II:

Como as Ij bloqueiam o acesso fenda de ligao ao pptido de molculas MHC classe II, devem
ser removidas antes de se poderem formar complexos de pptidos com molculas MHC classe
II;
As mesma enzimas proteoliticas, como catepsina S, que geraram pptidos a partir de proteinas
internalizadas tambm actuam sobre as Ij, degradando-as e deixando apenas um pequeno
pptidos de 24 aminocidos designado pptido classe II associado a cadeia invariante (CLIP);
O CLIP localiza-se na fenda de ligao ao pptido de molculas classe II. Assim, necessria a
remoo do CLIP antes da fenda se tornar acessivel para os pptidos produzidos a partir de
proteinas extracelulares;

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Esta remoo feita pela a aco de uma molcula chamada HLA-DM (ou H-2M no ratinho), que
codificada no MHC, tem uma estrutura semelhante a molculas MHC classe II e co-localiza-se
com as molculas MHC classe II nos compartimentos MIIC;
Assim que o CLIP removido, os pptidos gerados por protelise de proteinas antignicas
internalizadas so capazes de se ligar a molculas MHC classe II. Assim, as molculas HLA-DM
aceleram a ligao de pptidos a molculas classe II;
Como as terminaes das fendas de ligao em molculas MHC classe II esto abertas, pptidos
grandes e mesmo proteinas inteiras no enroladas podem ligar-se fenda e so depois
aparadas por enzimas proteoliticas para o tamanho adequado;
Os pptidos apresentados na superficie das clulas classe II tm um tamanho de 10-30 residuos,
sendo que normalmente so gerados por este processo de aparamento.

As molculas HLA-DM diferem das molculas classe II em vrios aspectos:

No so polimrficas;
No se associam com as Ij;
No so expressas na superficie das clulas.

As molculas HLA-DM actuam como trocadores de pptidos, facilitando a remoo do CLIP e a adio
de outros pptidos a molculas MHC classe II. O papel critico das HLA-DM foi demonstrado pela
descoberta de que linhas celulares mutantes que no apresentam Dm, e ratinhos KO que no contm a
proteina homloga H-2M, so deficientes na apresentao de pptidos derivados de proteinas
extracelulares:

Quando molculas MHC classe II so isoladas deste mutantes, encontram-se CLIPs quase
exclusivamente a ocupar as suas fendas de ligao, facto consistente com o papel de remoo
do CLIP pelo DM;
Transfeco de genes codificantes de DM para estas linhas celulares mutantes restaura a
apresentao de antignios associados a classe II.

Linfcitos B, e talvez outras APCs, expressam outro heterodimero classe II-like no-polimrfico
designado HLA-DO:

A maior parte das DO nas clulas encontrada com as DM, sugerindo que as molculas DO
podero regular a eficincia da apresentao de antignios ou o tipo de pptidos que so
gerados nas clulas B;
Contudo, as DO no so necessrias para o processamento de antignios, e as suas funes
continuam pobremente definidas.

Joana Maria Soares Pereira

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5. EXPRESSO DE COMPLEXOS PPTIDOS-CLASSE II NA SUPERFICIE DAS APCS

As molculas MHC classe II so estabilizadas pela ligao de pptidos e os complexos pptido-classe II


estveis so deixados na membrana das APCs, onde so apresentados para reconhecimento pelas
clulas T CD4+:

A necessidade da ligao do pptido para a estabilizao de molculas MHC classe II assegura


que apenas complexos pptido-MHC apropriadamente carregados so expressos na superficie
das clulas;
Assim, que so expressos na superficie das APCs, os complexos pptido-classe II so
reconhecidos por clulas T CD4+ especificas, com o co-receptor CD4 a ter um papel essencial na
ligao a regies no-polimrficas das molculas MHC classe II;
A baixa taxe de dissociao e, assim, o longo tempo de semi-vida dos complexos pptido-MHC
aumenta a probabilidade de uma clula T especifica para tal complexo faa contacto e seja
activada;
Enquanto molculas classe II carregadas com pptidos viajam dos endossomas tardios para a
superficie da clula, outras molculas envolvidas na apresentao de antignios, como DM,
mantm-se em vesiculas e no so expressas com proteinas membranares.

Como as APCs apresentam continuadamente pptidos derivados de todas as proteinas que encontram,
apenas uma fraco muito pequena de complexos pptido-MHC na superficie celular apresentaro o
mesmo pptido. Alm disso, a maior parte dos pptidos ligados sero derivados de proteinas do prprio
normais porque no existe nenhum mecanismo para destinguir proteinas self de non-self no processo
que gera os complexos pptido-MHC. Isto gera duas questes:
1. Como que as clulas T reconhecem e so activadas por qualquer antignio estranho se
normalmente todas as APCs apresentam principalmente complexos pptido-MHC self?
As clulas T so notavelmente sensiveis e necessitam de reconhecer especificamente muito
poucos complexos pptido-MHC para serem activadas. Estima-se que apenas cerca de 100
complexos de um pptido particular com uma molcula MHC classe II na superficie de uma APC
so capazes de iniciar uma resposta especifica de uma clula T. Isto representa menos de 0,1%
do nmero total de molculas MHC classe II presentes na superficie de uma APC. Assim,
antignios recentemente introduzidos podem ser processados em pptidos que carregam
suficientes molculas MHC de APCs para activar clulas T especificas para esses antignio,
apesar de algumas molculas MHC estarem ocupadas por pptidos self. A habilidade das APCs
internalizarem, processarem e apresentarem uma mistura heterognea de proteinas self e nonself assegura que o sistema imune seja capaz de reconhecer pequenas exposies a antignios
estranhos. O reconhecimento de antignios pelas clulas T tambm desencadeia uma
redestribuio de molculas MHC sobre as APCs para a clula T, estabelecendo um feedback
positivo que promove o reconhecimento de antignios.
2. Se individuos processam as suas proteinas e as apresentam em associam com as prprias
molculas MHC classe II, porque que no desenvolvemos normalmente respostas imune
contra as nossas proteinas?
Complexos pptido-MHC self so formados mas no induzem autoimunidade porque clulas T
especificas para tais complexos so morta ou inactivadas. Assim, as clulas T no capazes de
responder normalmente a antignios self.
Joana Maria Soares Pereira

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Via MHC Classe I


A produo de pptidos associados a MHC classe I feita por degradao proteolitica de proteinas
citoslicas, transporte dos pptidos gerados para o RE e a sua ligao a molculas MHC classe I
recentemente sintetizadas:

1. FONTES DE ANTIGNIOS CITOSLICOS

Os pptidos que so apresentados ligados a molculas MHC classe I derivam de proteinas citoslicas,
sendo a maior parte sintetizadas endogenamente nas clulas nucleadas:

Antignios estranhos no citosol so produtos de virus ou outros micrbios intracelulares que


infectaram tais clulas;
Nas clulas tumorais, vrios genes mutados ou expressos em excesso podem produzir proteinas
antignicas que so reconhecidas por CTLs restritas a classe I;
Pptidos que so apresentados em associao com molculas classe I podem tambm ser
derivados de micrbios ou outros antignios particulares que so internalizados nos
fagossomas.

Alguns micrbios so capazes de danificar as membranas dos fagossomas e criar poros atravs dos
quais os micrbios e os seus antignios entram no citosol. Por exemplo, estirpes patognicas de Listeria
monocytogenes produzem uma proteinas, designada listeriolisina, que permite que a bactria escape
de vesiculas para o citosol. Assim que os antignios de micrbios fagocitados esto no citosol, so
processados como qualquer outro antignio citoslico.
2. DEGRADAO PROTEOLITICA DE PROTEINAS CITOSLICAS

O principal mecanismo para a produo de pptidos a partir de proteinas antignicas citoslicas a


protelise pelo proteossoma:

O proteossoma uma grande enzima multimrica com uma larga actividade proteolitica que
encontrada no citoplasma da maior parte das clulas;

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Uma forma do proteossoma com 700 kDa aparece como


um cilindo composto por dois aneis externos e dois
internos, cada anel sendo composto por sete subunidades.
Trs das sete subunidades so os locais cataliticos para
protelise;
Um proteossoma maior, 1500 kDa, mais importante na
produo de pptidos classe I e composto pela estrutura
de 700 kDa mais algumas subunidades adicionais que
regulam a actividade proteolitica;
Duas subuinidade cataliticas presentes nos proteossomas
de 1500 kDa, designadas LMP-2 e LMP-7, so codificadas
por genes no MHC, e so particularmente importantes para
a produo de de pptidos classe I.

O proteossoma realiza uma funo bsica das clulas degradando vrias proteinas danificadas ou mal
montadas. Estas proteinas so alvo de degradao proteossomal por ligao covalente a vrias cpias
de pequenos pptidos designados ubiquitina. Proteinas ubiquinadas so reconhecidas pelas cpsulas
dos proteossomas e so desenroladas, a ubiquitina removida e as proteinas so puxadas para dentro
do proteossoma.

O proteossoma apresenta uma ampla gama de especificidade de substratos e gera uma grande
variedade de pptidos a partir de proteinas citoslicas, mas no as degrada em aminocidos:

Em clulas tratadas com a citocina IFN-, existe um aumento da transcrio e sintese de LMP-2 e
LMP7, e essas proteinas substituem duas das subunidades do proteossoma;
Isto resulta numa alterao de especificadade para substratos de modo que os pptidos
produzidos apresentam cerca de 6-30 residuos e contm aminocidos C-terminais bsicos ou
hidrofbicos, caracetristicas tipicas de pptidos transportados por molculas MHC classe I;
Assim, os proteossomas so excelentes exemplos de organelos cujas funes celulares bsicas
foram adaptadas para o papel expecializados de apresentao de antignios.

Vrias linhas de evidncia estabeleceram que a degradao proteossomal de proteinas citoslicas


necessaria para a entrada na via de processamento de antignios classe I:
1. Inibidores especificos da funo proteossomal bloqueiam a apresentao de uma proteina
citoplasmtica a clulas T restritas a MHC classe I. Contudo, se o pptido que reconhecido
pelas CTLs for sintetizados directamente no citoplasma de uma clula como produto de um
minigene transfectado, o pptido apresentado e a clula pode ser morta por CTLs. Nesta
situao, a apresentao do pptido no bloqueada por inibidores de enzimas proteossomais,
indicando que assim que os antignios so convertidos a pptidos citoslicos no necessitam de
mais dagradao proteossomal;
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2. Em algumas linhas celulares, a inibio da ubiquitinizao tambm inibe a apresentao de


ptoteinas citoplasmticas a clulas T restritas para MHC classe I especificas. De modo reciproco,
modificao de proteinas por ligao de uma sequncia N-terminal que reconhecida por
enzimas de conjugao de ubiquitina leva ao aumento da ubiquitinizao e a apresentao de
antignios associados a MHC classe I mais rapidamente;
3. Ratinhos nos quais genes codificantes de determinadas subunidades proteossomais (LMP-2 ou
LMP-7) so eliminados mostram defeitos na produo de CTLs contra alguns virus,
presumivelmente devido a deficiente apresentao de antignios virais associados a MHC classe
I.
Assim, os mecanismos preoteoliticos que geram pptidos antignicos que ligam molculas MHC classe I
so diferentes dos mecanismos descritos para as associaes pptido-MHC classe II. Isto tambm
evidente a partir da observao que agentes que aumentam o pH endossomal e lisossomal, ou
directamente inibem proteases endossomais, bloqueiam a apresentao de antignios restrita a classe
II mas no classe I, enquanto inibidores da ubiquitinizao ou dos proteossomas fazem exactamente o
inverso.
No entanto, existem outros mecanismos de produo de pptidos para apresentao via classe I que
no exigem ubiquinizao e o proteossoma, podendo ocorrer degradao de proteinas no RE.
3. TRANSPORTE DE PPTIDOS DO CITOSOL PARA O RETICULO ENDOPLASMTICO

Como os pptidos antignicos para a via classe I so produzidos no citosol mas as molculas MHC classe
I so sintetizadas no RE, tem de existir um mecanismo de transporte de pptidos para o RE. A proteina
transportadora, designada TAP (transportador associado com o processamento de antignios):

Heterodimero trans-membranar constituido por duas proteinas: TAP1 e TAP2;


Em adio aos seus segmentos trans-membranares, as proteinas TAP1 e TAP2 apresentam um
dominio projectado para o lumen do RE e um dominio de liagao a ATP que se projecta para o
citoso;
Ambas as proteinas TAP1 e TAP2 pertencem familia de proteinas transportadoras de ligao a
ATP encontradas na membrana de vrias clulas, incluindo bactrias, e que medeiam o
transporte de pequenas molculas dependente de ATP.

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Pptidos gerados no citosol pelo proteossoma so translocados pela TAP para o RE por um processo
que requer a hidrlise de ATP e a TAP tem caracteristicas importantes que beneficiam este transporte:

A TAP apresenta o mximo de afinidade para pptidos com cerca de 8-10 aminocidos, o que
corresponde a um tamanho ptimo para ligao a molculas MHC classe I;
Em adio, a TAP favorece pptidos com residuos hicrofbicos ou bsicos C-terminais, os
residuos preferidos para ancoragem a molculas MHC classe I;
A TAP ptima para o transporte de pptidos que iro interagir com molculas MHC classe I.

Os genes TAP1 e TAP2 localizam-se na regio MHC classe II, adjacentes aos genes LMP2 e LMP7. Ambos
os genes transportadores e LMP so polimrficos, o que significa que diferentes alelos so expressos
numa populao. Este polimorfismo pode contribuir para a variao observada entre individuos
relativamente s suas respostas a diferentes antignios endogenos.
4. MONTAGEM DE COMPLEXOS PPTIDO-MHC CLASSE I NO RETICULO ENDOPLASMTICO

A sintese e montagem de molculas classe I envolve um processo de vrios passos no qual a ligao do
pptido um ponto importante:

As cadeias e 2-microglobulina classe I so sintetizadas no RE e o enrolamento adequado de


cadeias nascentes assistida por vrias chaperones do RE, como calnexina e calreticulina;
No RE, os dimeros classe I formados vazios continuam ligados ao complexo TAP por tapasina;
Depois da entrada no RE via TAP, os pptidos so normalmente aparados para o tamanho
apropriado por uma aminopepidase residente no RE, ERAP;
Os pptidos podem ento ligar-se fenda da molcula classe I adjacente, sendo depois o
complexo pptido-classe I libertado da tapasina e capaz de sair do RE e ser transportado para a
superficie da clula;
Na ausncia de pptido ligado, a maior parte dos dimeros MHC classe I formados so instveis,
no so transportados do RE eficientmente e so degradados neste local.

Pptidos transportados para o RE preferencialmente ligam-se a molculas classe I mas no a classe por
duas razes:
1. Molculas classe I recentemente sintetizadas esto ligadas parte luminal dos complexos TAP,
prontas para receber pptidos;
2. No RE, as fendas de ligao a pptidos de molculas MHC classe II recentemente sintetizadas
esto bloqueadas pela Ij associada.

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5. EXPRESSO DE COMPLEXOS PPTIDO-MHC CLASSE I NA SUPERFICIE CELULAR

Molculas MHC classe I com pptidos ligados so estruturalmente estveis e so expressas na superficie
celular:

Complexos pptido-MHC classe I que foram produzidos no RE movem-se atrav do aparelho de


Golgi e so transportados para a superficie da clula por vesiculas exociticas;
Assim que so expressas na superficie da clula, os complexos pptido-classe I so reconhecidos
por clulas T CD8+ especificas, com o co-receptor CD8 apresnetado um papel essencial ligandose a regies no-polimrficas das molculas MHc classe I.

Vrios virus evoluiram mecanismos que interferem com a montagem e carregamento de molculas
MHC classe I, enfatizando a importncia desta via na imunidade antiviral.

Significado Fisiolgico da Apresentao de Antignios via MHC


As vias de apresentao de antignio classe I ou classe II processam proteinas disponiveis para
apresentao a clulas T, e a maior parte dessas proteinas so prprias do hospedeiro. Proteinas
estranhas so relativamente raras, podendo derivar de micrbios infecciosos, outros antignios
estranhos introduzidos no corpo e tumores.
As clulas T apresentam uma funo de vigilncia, analisando todos os pptidos apresentados para a
presena de pptidos estranhos e respondendo a estes ultimos:

Pptidos do prprio no estimulam respostas das clulas T, porque clulas T com receptores
para estes pptidos foram eliminadas durante a maturao no timo ou porque as clulas podem
sofrer inactivao por reconhecimento de antignios do prprio;
As molculas MHC apresentam antignios do espao extracelular ou do citosol de todas as
clulas nucleadas, e isto importante porque micrbios podem residir nas duas localizaes.
Apesar de pptidos derivados de antignios estranhos (e.g., microbianos) no serem
abundantes, estes antignios estranhos so reconhecidos pelo sistema imune devido eslevada
sensibilidade das clulas T;
Micrbios infecciosos estimulam a expresso de co-estimuladores nas APCs que aumentam as
respostas das clulas T, assegurando assim que as clulas T sejam activadas quando micrbios
esto presentes.

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A apresentao de proteinas vesiculares versus citoslicas pelas vias MHC classe II ou classe I,
respectivamente, determina quais os grupos de clulas T que respondero a antignios encontrados
nestas duas pools de proteinas:

Antignios extracelulares normalmente terminam em vesiculas endossomais e activam


clulas T CD4+ restritas a classe II porque proteinas vesiculares so processadas em pptidos que
se ligam a classe II. As clulas T CD4+ funcionam como ajudantes para estimular mecanismos
efectores, como anticorpos e a fagocitose, que servem para eliminar antignios extracelulares;

Antignios citoslicos antignios sintetizados endogenamente esto presentes na pool


citoplasmtica de proteinas, onde esto inacessiveis aos anticorpos e fagocitose. Estes
antignios citoslicos entram na via de processamento de molculas classe I e activam CTLs
CD8+ restritas a classe I, que matam as clulas que produzem os antignios intracelulares. A
expresso de molculas classe I em todas as clulas nucleadas assegura que os pptidos de
virtualmente qualquer proteina podem ser apresentados para reconhecimento por clulas T
CD8+. Assim, antignios de micrbios que residem em diferentes localizaes celulares
selectivamente estimulam as respostas das clulas T que so mais efectivos na eliminao desse
tipo de micrbio.

Isto especialmente importante porque os receptores de antignios de clulas T H e CTLs no so


capazes de distinguir entre micrbios extracelulares e intracelulares. Pela secreo de pptidos
derivados de diferentes tipos de micrbios, as molculas MHC guiam estes subgeupos de clulas T a
responder a micrbios que cada grupo consegue combater.
A especificidade nica das clulas T para antignios ligados superficie de clulas essencial para as
funes dos linfcitos T, que so amplamente mediadas por interaces que requerem contacto clulaJoana Maria Soares Pereira

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clula directo e por citocinas que actuam a curtas distncias. As APCs no apresentam apenas
antignios a linfcitos T mas tambm so alvos das funes efectoras das clulas T:

Macrfagos com micrbios fagocitados apresentam antignios microbianos a clulas T CD4 + e as


clulas T respondem pela activao da macrfago para a destruio dos micrbios;
Linfcitos B que ligaram e endocitaram especificamente uma proteina apresentam pptidos
derivados deste antignios a clulas TH, e as clulas T estimulam depois os linfcitos B a produzir
anticorpos contra a proteina;
A apresentao de pptidos associados a classe I permite que CTLs CD8+ detectem e respondam
a antignios produzidos em todas as clulas nucleadas e destroem estas clulas.

As molculas MHC determinam a imunogenicidade de proteinas antignicas por duas vias relacionadas:
1. Os epitopos de proteinas complexas que elicitam as respostas das clulas T mais fortes so os
pptidos que so gerados por protelise em APCs e ligam mais avidamente a molculas MHC. Se
um individuo imunizado com uma proteina antignica multideterminante, em muitos casos a
maioria das clulas T que respondem so especificas para uma ou poucas sequncias de
aminocidos lineares do antignio, designadas epitopos ou determinantes imunodominantes.
As proteases envolvidas no processamento de antignios produzem uma variedade de pptidos
a partir de proteinas naturais, e apenas alguns desses pptidos possuem as caracteristicas que
permitem que estes se liguem a molculas MHC presentes em cada individuo;

2. A expresso de alelos MHC classe II particulares num individuo determina a habilidade desse
individuo para responder a antignios particulares. Sabemos que os genes de resposta imune
(Ir) que controlam as respostas dos anticorpos so genes estruturais do MHC classe II. Estes
influenciam a resposta imune porque vrias molculas MHC classe II allicas diferem na sua
habilidade de ligar a diferentes pptidos antignicos e, assim, estimular as clulas TH especificas.

Apresentao de Lipidos Antignicos por Molculas CD1


Uma excepo regra que as clulas T apenas reconhecem pptidos o reconhecimento de lipidos e
glicolipidos antignicos por uma populao de clulas T numericamente raras designadas clulas T
naturalmente assassinas (NK-T cells). Estes linfcitos apresentam propriedades no usuais:

Expressam marcadores que so caracteristicos de clulas T e de clulas naturalmente


assassinas;
Apresentam receptores com uma diversidade limitada.

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As clulas NK-T reconhecem lipidos e glicolipidos apresentados por molculas MHC classe I-like no
clssicas designadas CD1. Apesar das suas vias de trfego intracelular diferirem de modos subtis, todas
as molculas CD1 ligam a apresentam lipidos por uma via unica:

Molculas CD1 recentemente sintetizadas ligam lipidos celulares e carregam-nos at superficie


da clula;
A partir daqui, os complexos CD1-lipido so endocitados para endossomas ou lisossomas, onde
lipidos que foram ingeridos do ambiente externo so capturados e novos complexos CD1-lipido
regressam superficie da clua;
Assim, as molculas CD1 ligam lipidos endocitados durante a reciclagem e apresentam-nos sem
processamento aparente.

As clulas NK-T que reconhecem os lipidos antignicos parecem ter um papel na defesa contra
micrbios, especialmente micobactrias (que so ricas em componentes lipidicos).

MHC e Susceptibilidade a Doena


Alguns alelos HLA ocorrem com muito maior frequncia nos individuos que sofrem certas doenas
relativamente populao a que pertencem. As doenas associadas com alelos MHC particulares
incluem:

Doenas autoimunes;
Certas doenas virais;
Algumas doenas neurolgicas;
Vrias alergias diferentes.

A associao entre alelos HLA e uma determinada doena deve ser quantificada pela determinao da
frequncia de alelos HLA espressos por individuos com essa doena, e comparando esses dados com a
frequncia do mesmo alelo na populao geral. Esta comparao permite o calculo do risco relativo
(RR):
Doena
Espondilite anquilosante
Sindrome de Goodpasture
Enteropatia sensivel ao gluten
Hemacromatose hereditria
Diabetes tipo I
Esclerose multipla
Miastenia grave
Narcolepsia
Artrite reactiva (Yersinia,
Salmonella, Gonococcus)
Sindrome de Reiter
Artrite reumatide
Sindrome de Sjorgen
Lupus eritematosa sistmica

Alelo HLA associado


B27
DR2
DR3
A3
B14
A3/B14
DR4/DR3
DR2
DR3
DR2

Risco relativo
90
16
12
9,3
2,3
90
20
5
10
130

B27

18

B27
DR4
Dw3
DR3

37
10
6
5

Um risco relativo de 1 significa que o alelo HLA expresso com a mesma frequncia no paciente
e na populao geral, indicando que o alelo no confere risco de doena;

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Um risco relativo substancialmente superior a 1 indica uma associao entre o alelo HLA e a
doena.

A existncia de uma associao entre um alelo MHC e uma doena no pode ser interpretada como
implicando que a expresso do alelo causa a doena, a relao entre alelos MHC e o desenvolvimento
da doena complexa. Por exemplo,

No caso da espondilite anquilomatose, foi sugerido que devido forte ligao entre os genes
TNF- e TNF- com o locus HLA-B estas citocinas podem estar envolvidas na destruio da
cartilagem, o que caracteristico desta doena.

Quando as associaes entre alelos MHC e doena so fracas, reflectidas por baixos valores de risco
relativo, provavel que multiplos genes influenciem a susceptibilidade, dos quais apenas um do MHC.
Gmeos so um bom modelo para mostrar que estas doenas no so herdadas por degregao
Mendeliana simples j que ambos herdam o factor de risco mas no significa que ambos desenvolvero
a doena. Isto sugere que que multiplos factores genticos e ambientais apresentam papeis no
desenvolvimento da doena, especialmente doena autoimunes, com o MHC a apresentar um papel
importante mas no exclusivo.
Uma dificuldade adicional na associao de um produto MHC particular com uma doena o fenmeno
gentico de desiquilibrio de ligao. O facto de alguns alelos MHC classe I estarem em desiquilibrio de
ligao com alelos MHC classe II faz com que a sua contribuio na susceptibilidade a doenas parea
mais pronunciada do que na realidade. Por exemplo,

Se DR4 contribui para risco de doena e se este ocorre frequentemente em combinao com A3
devido ao desiquilibrio de ligao, o A3 ser incorrectamente associado com a doena.

Um numero de hipteses foram sugeridas para explicar o papel do MHC na susceptibilidade a doenas:

Diferenas allicas podem levar a diferenas na resposta imune, que se devem a variaes na
habilidade de apresentar antignios processados ou na habilidade das clulas T reconhecerem
antignios apresentados;
Formas allicas de genes MHC podem codificar molculas que so reconhecidas como
receptores por virus ou toxinas bacterianas;
A anlise gentica da doena deve considerar a possibilidade de genes em multiplos loci
estarem envolvidos e que interaces complexas entre eles podem ser necessrias para
desencadear a doena.

Por outro lado, algumas evidncias sugerem que uma reduo no polimorfismo do MHC numa espcie
pode predispor essa espcie a doena infecciosas. Por exemplo, chitas e outros felinos so altamente
susceptiveis a doenas virais e apresentam um polimorfismo de MHC muito limitado. Este aumento de
suceptibilidade dever resultar da reduo no numero de molculas MHC diferentes diponiveis na
espcie como um todo e a uma limitao correspondente da gama de antignios processados com os
quais estas molculas MHC interagem. Assim,

Os altos niveis de polimorfismo do MHC observados em vrias espcies tem como vantagem
fornecer uma grande gama de molculas MHC apresentadoras de antignio;
Apesar de alguns individuos numa espcie provavelmente no serem capazes de desenvolver
um resposta imune a um determinado antignio e assim serem susceptiveis infeco por este,

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o polimorfismo extremo assegura que pelo menos alguns membros da espcie sero capazes de
responder e sero resistentes;
A diversidade de MHC parece proteger uma espcie de uma grande gama de doenas
infecciosas.

importante salientar tambm que as molculas MHC esto tambm presentes na saliva e noutras
secrees, funcionando como feromonas.

RECEPTORES DE ANTIGNIOS E MOLCULAS ACESSRIAS NAS


CLULAS T

Recepo de Antignios pelas Clulas T


Os linfcitos T respondem a fragmentos pptidicos de proteinas
antignicas que so apresentados por clulas apresentadoras de
antignios (ACPs). A iniciao destas respostas requere:

O reconhecimento especifico de antignios pelas clulas T;


Adeso das clulas T s APCs;
Traduo do sinal a partir da superficie ao ncleo da clula
T.

Cada um destes eventos mediado por grupos distintos de


molculas na superficie das clulas T:

Molculas membranares envolvidas no reconhecimento do


antignio e na sinalizao intracelular;
Molculas envolvidas na adeso das clulas T s APCs.

Os linfcitos T apresentam especificidade dupla:

Reconhecem residuos polimrficos de MHC prprio, o que conta para a restrio de MHC;
Reconhecem residuos de pptidos antignicos apresentados por estas molculas MHC, o que
responsvel pela especificidade.

Molculas MHC e pptidos formam complexos na superficie das APCs. O receptor que reconhece estes
complexos pptido-MHC designado T cell receptor (TCR). O TCR um receptor clonalmente
distribuido, o que significa que clones de clulas T com diferentes especificidades expressam diferentes
TCRs. Os sinais bioquimicos que so desencadeados nas clulas T por reconhecimento de antignios no
so traduzidos pelo TCR em si mas sim por proteinas invariantes designadas CD3 e , que esto nocovalentemente ligadas ao TCR para formar o complexo TCR.
Assim, nas clulas T, e tambm nas clulas B, o reconhecimento de antignios e a sinalizao so
separadas por dois grupos de molculas:

Um receptor de antignos altamente varivel o TCR nas clulas T e o TCB nas clulas B;
Proteinas sinalizadoras invariantes cadeias CD3 e nas clulas T e Ig e Ig nas clulas B.

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Os receptores de clula T no apresentam apenas funo de activao de clulas T imaturas que


encontram antignios, mas este receptor e um receptor relacionado designado receptor pr-T
desempenham papeis importantes durante o desenvolvimento de clulas T.
As clulas T tambm expressam outros receptores membranares que no reconhecem antignios mas
participam em respostas as antignios, sendo designados colctivamente molculas acessrias:

O papel fisiolgico de algumas molculas acessrias facilitar a sinalizao pelo complexo TCR,
enquanto outras fornecem sinais secundrios para a activao completa das clulas T;
Outras molculas acessrias funcionam como molculas de adeso para estabilizar a ligao das
clulas T s APCs, permitindo assim que o TCR se ligue ao antignio o tempo suficiente para a
traduo dos sinais necessrios;
Molculas de adeso tambm regulam a migrao de clulas T para os locais onde os antignios
se localizam e respondam a estes;
A maior parte da molculas de adeso tambm participam na formao de sinapses
imunologicas entre clulas T e APCs.

TCR para Pptidos Antignicos Associados a MHC


O receptor de antignios de clulas TH CD4+ e de clulas TC CD8+ restritas a MHC um heterodimero
constituido por duas cadeias polipptidicas transmembranares, designadas e , covalentemente
ligadas por uma ponte dissulfito. Cada cadeia e constituida por:

Um dominio Ig-like N-terminal varivel (V);


Um dominio Ig-like constante (C);
Uma regio transmembranar hidrofbica;
Uma pequena regio citoslica.

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A poro extracelular do heterodimero estruturalmente semelhante ao fragmento de ligao ao


antignio (Fab) de uma molcula Ig, que construida pelas regies V e C da cadeia leve e pelas regies
V e C da cadeia pesada.

As regies V das cadeias e do TCR contm pequenos segmentos de aminocidos onde a


variabilidade entre diferentes TCrs est concentrada e estes formam as regies hipervariveis ou
determinantes da complementaridade (CDRs):

Trs CDRs na cadeia esto justapostas a trs regies similares na cadeia para formar a parte
do TCR que reconhece especificamente complexos pptido-MHC;
Uma quarta CDR encontra-se no dominio V da cadeia , e esta no parece participar no
reconhecimento de antigenios mas o local de ligao para produtos microbianos designados
superantignios.

Cada cadeia TCR codificada por multiplos segmentos gnicos que sofrem rearranjo somtico durante a
maturao dos linfcitos T. Nas cadeias e , a terceira regio hipevarivel composta por sequncias
codificantes por segmentos de genes V e J (joining), no caso da cadeia , ou segmentos V, D
(diversidade) e J, no caso da cadeia . Estas regies CDR3 tambm contm sequencias juncionais que
so codificadas por nucletidos adicionados, designados assim nucltidos de regies N e P. Assim, a
maior parte da variabilidade dos TCRs est concentrada nas regies CDR3.

As regies C das cadeias e continuam em pequenas regies dobradia, que contm residuos de
cisteina que contribuem para pontes de dissulfureto que ligam as duas cadeias:

A dobradia seguida por pores transmenbranares hidrofbicas e uma caracteristica no


usual a presena de residuos acidicos positivamente carregados, incluindo residuos de lisina
(na cadeia ) ou um residuo de lisina e arginina (na cadeia ). Estes residuos interagem com
residuos carregados negativamente presentes nas pores transmembranares de outros
polipeptidos (CD3 e ) que fazem parte do complexo TCR;
Ambas as cadeias e apresentam caudas citoplasmticas C-terminal com cerca de 5-12
residuos de comprimento. Estas regies citoplasmticas so muito curtas para traduzirem sinais,
e molculas fisicamente associadas com o TCR permitem esta transmisso do sinal.

Os TCRs e as molculas Ig so estruturalmente semelhantes, mas existem vrias diferenas


significantivas entre estes dois tipos de receptores de antignios:

O TCR no produzido numa forma secretada, e no cumpre uma funo efectora por si s. Por
outro lado, ligando-se a complexos pptido-MHC, os complexos TCR iniciam sinais que activam
as funes efectoras das clulas T;
Para alm disso, ao contrrio dos anticorpos, as cadeias TCR nas sofrem alteraes de expresso
da regio C ou maturao de afinidade durante a diferenciao das clulas T.

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Caracteristica ou funo

Componentes
Nmero de dominios Ig

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Anticorpo (imunoglobulina Ig)

Cadeias leve e pesada


Cadeia pesada um dominio V, trs ou
quatro dominio C
Cadeia leve um dominio V e um
dominio C

Numero de CDRs

Trs em cada cadeia

Molculas sinalizadoras associadas


Afinidade para o antignio (Kd)
Alteraes depois da activao celular
Produo da forma secretada
Alterao de isotipo
Mutaes somticas

Ig e Ig
-7
-11
10 -10 M (Ig secretada)

Formas de antignios reconhecidos

Diversidade
Reconhecimento de antignios por
Funes sinalizadoras mediadas por
Funes efectoras mediadas por

Imunologia

Sim
Sim
Sim
Macromolculas (proteinas,
polissacarideos, lipidos, cidos
nucleicos), pequenos pptidos;
epitopos conformacionais e lineares
Cada clone apresenta uma
especificidade unica; potencial para
9
>10 especificidades distintas
Regies variveis (V) das cadeias leve e
pesada das Ig membranares
Proteinas (Ig e Ig) das Ig associadas
membrana
Regies constantes (C) de Ig
secretadas

Receptor da clula T (TCR)

Cadeias e
Um dominio V e um dominio C em cada
cadeia
Trs em cada cadeia para ligao ao
antignio; quarta regio hipervarivel na
cadeia
CD3 e
-5
-7
10 -10 M
No
No
No
Pptidos apresentados por molculas
MHC nas APCs; epitopos lineares
Cada clone apresenta uma
especificidade unica; potencial para
11
>10 especificidades distintas
Regies variveis (V) das cadeias e
Proteinas (CD3 e ) associadas com TCR
TCR no apresenta funo efectora

Papel do TCR no Reconhecimento de Pptidos Antignicos Associados a MHC


O local de ligao ao antignio do TCR formado pelos seis CDRs das cadeias e que esto
espalhados para formar uma superficie de reconhecimento de complexos pptido-MHC. Esta estrutura
semelhante s superficies de ligao ao antignio dos anticorpos, que so formadas por regies V de
cadeias leves e pesadas. Nas estruturas de TCR que foram analisadas em detalhe:

o TCR contacta com o complexo pptido-MHC numa orientao diagonal, encaixando entre os
pontos altos das -hlices MHC;

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Imunologia

Em geral, o loop CDR1 das cadeias e do TCR esto posicionadas nas extermidades do pptido
ligado, os loops CDR2 sobre as hlices da molcula MHC, e o loop CDR3 est posicionado sobre
o centro do MHC associado;
As cadeias laterias de apenas um ou dois residuos de aminocidos do pptido ligado ao MHC
que fazem contacto com o TCR.

A afinidade do TCR para complexos pptido-MHC baixa, muito menor que a da maior parte dos
anticorpos:

Nas poucas clulas T que foram analizadas em detalhe, a constante de dissociao (K d) das
interaces do TCR com complexos pptido-MHC varia entre 10-5-10-7 M;
Esta baixa afinidade para a ligao especifica de antignios e provavelmente a razo para a
necessidade de molculas de adeso para estabilizar a ligao das clulas T s APCs, permitindo
que as respostas biolgicas se iniciem.

A sinalizao via complexos TCR parece requerer ligaes prolongadas ou repetitivas a complexos
peptido-MHC, o que tambm promovido pela adeso estvel entre as clulas T e as APCs. O TCR e as
molculas acessrias nas membranas plasmtica das clulas T movem-se coordenadamente com os
seus ligandos na membrana da APC para formar estruturas supramoleculares transients que so
designadas sinapses imunolgicas. A formao desta sinapse regula a traduo de sinal mediada pelo
TCR.

Proteinas CD3 e dos Complexos TCR


As proteinas CD3 e esto no covalentemente associadas com o heterodimero e, quando o TCR
reconhece antignios, estas proteinas associadas tranmitem os sinais que leva activao das clulas T:

Cada complexo TCR contem um dimero associado com um heterodimero CD3 , um


heterodimero e um heterodimero ligado por pontes dissulfito;
As cadeias CD3 e so idnticas em todas as clulas T independentemente da especificidade, o
que consistente com o papel de ambas na sinalizao e no no reconhecimento de antignios.

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Imunologia

As proteinas CD3 , e so homlogas entre si e so divididas em trs regies:

As regies N-terminal extracelulares das cadeias , e contm um unico dominio Ig-like, e


assim estas proteinas so membros da superfamilia Ig;
Os segmentos transmembranres de todas as cadeias CD3 contm um residuo de aspartato
negativamente carregado, que se liga a residuos carregados positivamente nos dominios
transmembranares das cadeias e do TCR;
Os dominios citoplasmticos das proteinas , e tm cerca de 44-81 residuos de
comprimento e cada um desses dominios contem uma cpia de um motivo conservado
importante para a sinalizao que designado immunoreceptor tyrosine-based activation motif
(ITAM).

Os motivos ITAMs tm um papel importante na sinalizao pelo complexo TCR. So encontrados nas
caudas citoplasmticas de vrias proteinas membranares de outros linfcitos que esto envolvidas na
tranduo de sinais, incluindo:

A cadeia do complexo TCR;


As proteinas Ig e Ig associadas com molculas Ig membranares nos linfcitos B;
Componentes de vrios receptores Fc;
Componentes do receptor activador NKG2D nas clulas naturalmente assassinas;
Etc...

A cadeia apresenta uma curta regio extracelular de nove aminocidos, uma regio transmembranar
contendo um residuo de aspartato negativamente carregado e uma regio citoplasmtica longa (113
aminocidos) que contem trs ITAMs. normalmente expressa com um heterodimero e est tambm
associada com receptores de sinalizao de outros linfcitos, como os receptores Fc (FcRIII) nas
clulas naturalmente assassinas.
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A expresso do complexo TCR requer a sintese de todos os seus componentes:

Durante a maturao das clulas T no timo, as proteinas CD3 e so sintetizadas antes dos
genes e do TCR serem expressos, mas estas proteinas no viajam para a membrana
plasmtica e so degradadas;
Chaperones, como as calnexinas, retm membros individuais do complexo TCR no RE antes do
complexo ser completamente montado e, em clulas T maduras, o complexo TCR inteiro
montado no RE e transportado para a superficie celular.

Funes das Proteinas CD3 e


As cadeias CD3 e ligam o reconhecimento do antignio pelo TCR aos eventos bioquimicos que levam
activao funcional das clulas T. Vrias linhas de evidncia suportam o papel critico destes
componentes do complexo TCR na traduo de sinal nas clulas T:

Anticorpos contra proteinas CD3 normalmente estimulam as respostas funcionais das clulas T
que so idnticas a respostas induzidas por antignios. Ao contrrio dos antignios, que
estimulam clulas T especificas, anticorpos anti-CD3 ligam-se a e estimulam todas as clulas T,
idependentemente da especificidade. Assim, os anticorpos anti-CD3 so activadores policlonais
das clulas T;

A cauda citoplasmtica das proteinas CD3 e suficiente para traduzir sinais necessrios para a
activao das clulas T na ausncia de outros componentes do complexo TCR. Isto foi mostrado
expressando, em certas linhas de clulas T, molculas quimricas obtidas por engenharia
gentica contendo a poro citoplasmtica das cadeias CD3 e fundida com os dominios de
outros receptores superficiais para ligando soluveis, como o receptor para a interleucina-2 (IL2). A ligao do ligando (e.g., IL-2) a estes receptores quimricos resulta na activao de
respostas idnticas s induzidas pela estimulao atravs do complexo TCR normal nas mesmas
clulas T.

Os primeiros eventos intracelulares que ocorrem nas clulas T depois do reconhecimento do antignio
a fosforilao de residuos de tirosina das ITAMs nas caudas citoplasmticas pas proteinas CD3 e por
cinases. Os residuos fosforilados nas ITAMs tornam-se locais de ancoragem para uma tirosina cinase,
que recrutada para a cadeia e desencadeia vias de traduo de sinal que levam a alteraes da
espresso de genes nas clulas T.
Joana Maria Soares Pereira

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Co-receptores e Receptores de Co-estimuladores nas Clulas T


Outras categorias de proteinas para alm do complexo TCR na superficie das clulas T contribuem de
um modo principal na activao e diferenciao dos linfcitos T:

Co-receptores representam uma categoria de proteinas membranares que aumentam a


sinalizao do TCR. Os seus nomes referem-se ao facto de estes ligarem molculas MHC e,
assim, reconhecem uma parte dos mesmo ligandos (complexos pptido-MHC) como os
receptores de antignios;

Receptores de co-estimuladores representam um grupo de proteinas que tambm


apresentam sinais activadores a clulas T, mas estas proteinas, em contraste com os coreceptores, reconhecem molculas nas APCs que no fazem parte dos complexos pptido-MHC.
Os receptores de quimiocinas e citocinas so tambm de grande importncia para as respostas
das clulas T, por exemplo.

CD4 e CD8: Co-receptores Envolvidos na Activao das Clulas T Restritas a MHC


As CD4 e CD8 so proteinas das clulas T que ligam regies no polimrficas das molculas MHC e
facilitam a sinalizao pelo complexo TCR durante a activao das clulas T:

As clulas T maduras expressam ou CD4 ou CD8, mas no ambos;


As CD4 e as CD8 interagem com molculas MHC classe II e classe I, respectivamente, quando os
receptores de antignios das clulas T reconhecem especificamente complexos pptido-MHC
nas APCs.

A principal funo das molculas CD4 e CD8 encontra-se na traduo de sinal no momento de
reconhecimento do antignio. Para alm disso, reforam a ligao das clulas T s APCs. Como as CD4 e
as CD8 participam em conjunto com os TCR no reconhecimento de molculas MHC e na activao das
clulas T, so designadas co-receptores.

Joana Maria Soares Pereira

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35% body T cells

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Imunologia

65% body T cells

As CD4 e CD8 so glicoproteinas transmembranares membros da superfamilia Ig, que medeiam funes
semelhantes a estas:

CD4 expressa como um monmero na superficie de clulas T perifricas e timcitos e est


presente nos fagcitos mononucleares e em algumas clulas dendriticas. Apresenta quatro
dominios Ig-like extracelulares, uma regio hidrofbica transmembranar e uma cauda
citoplasmtica altamente bsica com cerca de 38 aminocidos. Os dois dominios N-terminal Iglike da proteina CD4 ligam ao dominio 2 no polimrfico das molculas MHC classe II;
CD8 a maior parte existe como heterodimeros mantidos por pontes dissulfito compostos por
duas cadeias relacionadas designadas CD8 e CD8. Ambas as cadeias apresentam um unico
dominio Ig-like
extracelular, uma regio hidrofbica transmembranar e uma cauda
citoplasmtica altamente bsica com cerca de 25 aminocidos de comprimento. O dominio Ig da
CD8 liga-se ao dominio 3 no polimrfico das molculas MHC classe I. Algumas clulas T
expressam homodimeros CD8, mas este parece funcionar de modo semelhante.

A ligao selectiva das CD4 s molculas MHc classe II e das CD8 s molculas MHC classe I assegura
que as clulas T CD4+ respondem a pptidos antignicos associados a classe I e que as clulas T CD8 +
respondem a pptidos antignicos associados a classe II. A separao das respostas das clulas T CD4 + e
CD8+ a estes diferentes grupos de antignios ocorre devido s especificidades dos CD4 e CD8 a
diferentes classes de molculas MHC:

CD4 liga-se a molculas MHC classe II e expresso em clulas T cujos TCRs reconhecem
complexos de pptidos e molculas MHC classe II. A maior parte das clulas T CD4+ restritas a
classe II so clulas TH produtoras de citocinas e funcionam na defesa do hospedeiro contra
micrbios extracelulares que so ingeridos por macrfagos ou so reconhecidos por anticorpos
de modo a serem eliminados;
CD8 liga-se a molculas MHC classe I e expresso em clulas T cujos TCRs reconhecem
complexos de pptidos com molculas MHC classe I. A a maior parte das clulas T CD8+ restritas
a classe I so CTLs, que servem para erradicar infeces por micrbios intracelulares que
residem no citoplasma de clulas infectadas;
Algumas clulas T CD4+, especialmente em humanos, funcionam como CTLs, mas mesmo estas
so restritas a classe II.

Joana Maria Soares Pereira

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Os papeis essenciais das CD4 e CD8 nas respostas funcionais das clulas T foram demonstradas por
vrios tipos de experincias:

Anticorpos especificos para CD4 selectivamente bloqueiam a estimulao de clulas T restritas a


classe II pos antignios e APCs, e anticorpos para CD8 selectivamente bloqueiam a morte de
clulas alvo por CTLs restritas a MHC classe I;
Se genes TCR e forem isolados de um clone de clula T CD4+ e transfectado para outra linha
de clulas T que no expressam CD4, a linha transfectada no responder a APCs que carregam
o antignio classe II relevante associado. A resposta restaurada de o gene CD4 for
cotransfectado com os genes TCR. O mesmo observado relativamente relao CD8/classe I;
Uma APC que no apresenta molculas MHC no capaz de apresentar antignios a ou activar
clulas T. A habilidade de activar clulas T restaurada pela transfeco da APC com molculas
MHC normais mas no pela transfeco de molculas MHC nos quais os locais de ligao de CD4
ou CD8 no polimrficos esto mutados;
Ratinhos KO que no apresnetam CD4 ou CD8 no contm clulas T maduras restritas a classe II
ou classe I, respectivamente, porque estes co-receptores tm um papel importante na
maturao das clulas T no timo.

As CD4 e CD8 participam nos primeiros eventos da traduo de sinal que ocorre depois do
reconhecimento pela clula T de complexos pptido-MHC nas APCs. Estas funes de traduo do sinal
so mediadas por por tirosinas cinases especificas de clulas T que est no covalentemente mas
fortemente associada com as caudas citoplasmticas das CD4 e CD8. A associao destas cinases com
estas molculas necessria para a maturao e activao das clulas T:

Quando uma clula T reconhece complexos pptido-MHC via os seus receptores de antignios,
interaces simultnea de CD4 ou CD8 com as molculas MHC leva o co-receptor e a sua cinase
associada para prximo do complexo TCR;
A cinase fosforila os residuos de tirosina dos ITAMs das cadeias CD3 e , iniciando a cascata de
activao das clulas T.

ANTICORPOS E ANTIGNIOS

Os Anticorpos
Os anticorpos so as proteinas de ligao ao antignio presentes nas membranas das clulas B e
secretadas pelos plasmcitos:

Anticorpos ligados membrana conferem especificidade antignica s celulas B, sendo a


proliferao especifica para antignios das clulas B causada pela interaco deste anticorpo
com os antignios;
Anticorpos secretados circulam no sangue, onde servem como efectores para a imunidade
humoral procurando e neutralizando antignios ou marcando-os para eliminao.

Todos os anticorpos partilham caracteristicas estruturais, ligam-se ao atignio e participam num


numero limitados de funes efectoras. Aqueles que so produzidos em resposta a um antignio
particular so heterogneos.
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A maior parte dos antignios so complexos e contm diferentes determinantes antignicos, e


normalmente o sistema imune responde a estes pela produo de anticorpos para vrios epitopos no
antignio. Esta resposta requer o recrutamento de vrios clones de clulas B. As suas respostas so
anticorpos monoclonais, sendo que cada um liga especificamente um unico determinante antgnico.
Em conjunto, estes anticorpos monoclonais constituem a resposta por anticorpos sricos policlonal e
heterognea contra um antignio imunizantes, no sangue.

Estrutura Bsica dos Anticorpos


O sangue pode ser separado numa centrifuga num fraco fluida e noutra celular:

Plasma a fraco fluida e contem todas as pequenas molculas e macromolculas soluveis


do sangue, incluindo fibrina e outras proteinas requeridas para a formao de coagulos. Se estas
molculas coagulantes forem excluidas, o fluido resultante designado de soro;
Fraco celular contem os eritrcitos, leuccitos e plaquetas.

Sabe-se que os anticorpos residem no soro, e a primeira evidncia que os anticorpos estavam contidos
em fraces particulares de proteinas sricas surgiu de uma experincia clssica por A. Tiselius e E. A.
Kabat, em 1939:

Eles imunizaram coelhos com a proteina ovalbumina e dividiram o soro dos ratinhos imunizados
em duas aliquotas;
A electroforese de uma aliquota revelou quatro picos correspondentes a albumina e s
globulinas alpha (), beta () e gamma ();
A outra aliquota srica reagiu com albumina e o precipitado formado foi removido. As proteinas
srica que restaram, que no reagiram com o antignio, foram separadas em electroforese;
A comparao do perfis electroforticos das duas aliquotas revelou uma queda abrupta do pico
-globulina na aliquota que reagiu com o antignio.

Assim a fraco -globulina foi identificada como contendo anticorpos sricos, que foram designados
imunoglobulinas, para distingui-los de qualquer outras proteinas que podiam estar contidas na fraco
-globulina. No entanto, sabe-se agora que, apesar das imunoglobulinas G (IgG), a principal classe de
anticorpos, ser de facto encotrada principalmente na fraco -globulina, quantidades significantes
desta e de outras classes importantes de anticorpos so encontradas nas fraces e de soro.

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As molculas de anticorpos apresentam uma estrutura comum de quatro cadeias polipptidicas,


tambm designadas imunoglobulinas:

Duas cadeias leves (L), polipptidos com peso molecular de cerca de 25.000;
Duas cadeias pesadas (H), polipptidos maiores com peso molecular de cerca de 50.000;
Cada cadeia leve ligada a uma cadeia pesada por uma ponte dissulfito, e por ligaes no
covalentes como pontes salinas, pontes de hidrognio e ligaes hidrofbicas, para formar o
heterodimero (H-L);
Interaces no covalentes semelhantes e pontes dissulfito ligam dois heterodimero (H-L) para
formar uma estrutura bsica de quatro cadeias (H-L)2, um dimero de dimeros;
O numero exacto de as posies precisas destas pontes dissulfito diferem entre classes e
subclasses de anticorpos.

Os primeiros 110 aminocidos das regies N-terminais das cadeias leve e pesada variam altamente
entre anticorpos com diferentes especificidades. Estes segmentos com sequncias altamente variveis
so designadas regies V:

VL nas cadeias leves e VH nas pesadas;


Todas as diferenas de especificidade apresentadas por diferentes anticorpos podem ser
relacionadas com diferenas nas sequncias de aminocidos nas regies V;
A maior parte das diferenas entre anticorpos caem em reas das regies V, designadas regies
determinantes de complementariedade (CDRs como visto para os TCRs) e so estes CDRs nas
cadeias leves e pesadas que constituem o local de ligao aos antignios na molcula de
anticorpo.

Por outro lado, dentro da mesma classe de anticorpo, muito poucas diferenas so observadas quando
comparamos sequncias no resto da molcula. As regies com sequncias relativamente constantes
abaixo das regies variveis foram designadas regies C:

CL nas cadeias leves e CH nas pesadas;


Os anticorpos so glicoproteinas. Com pequenas excepes, os locais de ligao dos
carboidratos so restritos a estas regies.

O papel da glicolisao no ainda bem entendido, mas provavelmente aumenta a solubilidade dos
anticorpos. A glicolisao inapropriada, ou a sua ausncia, afecta a taxa pela qual os anticorpos so
retirados do soro, e diminui a eficincia da interaco entre o anticorpos e o sistema complemento e
entre os anticorpos e os receptores Fc.
Quando a fraco -globulina do soro separada em fraces de baixo e elevado peso molcular,
anticorpos com cerca de 150.000 MW, designados imunoglobulinas G (IgG) so encontradas na fraco
de baixo peso molecular e experincias com esta molcula permitiram a modulao da estrutura de
uma molcula de anticorpo:
1. A digesto breve das IgG com a enzima papaina produz trs fragmentos, dois dos quais so
idnticos:
Os dois fragmentos idnticos (cada um com peso molecular de 45.000) apresentam
actividade de ligao ao antignios e foram designados fragmentos Fab;
O outro fragmento (com peso molecular de 50.000) no apresenta actividade de ligao
ao antignio e foi designado fragmento Fc.
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2. A digesto com pepsina, uma enzima proteolitica diferente, tambm demonstrou que as
propriedades de ligao ao antignio pelo anticorpo podem ser separadas do resto da
molcula:
A digesto por pepsina gerou um unico fragmento com peso molcular de 100.000
composto por dois fragmentos Fab-like designado fragmento F(ab)2, que se liga ao
antignio;
O fragmento Fc no foi recuperado porque foi digerido a vrios fragmentos.

Anticorpos por si s foram usados para determinar como que os produtos enzimticos Fab, F(ab)2 e
Fc esto relacionados com produtos de reduo das cadeias leves e pesadas, e isto foi feito pelo uso
de soros de caprinos que foram imunizadas tanto com fragmentos Fab ou Fc de IgG de coelho:

O anticorpos para o fragmento Fab reagiu tanto com as cadeias H e L, enquanto o anticorpo
para o fragmento Fc reagiu apenas com a cadeia H;
Isto leva conluso que o fragmento Fab consiste em pores de uma cadeia pesada e de outra
leve e que o Fc contem apenas componentes das cadeias pesadas;
A partir destes resultados a estrutura da IgG foi deduzida.

Estrutura Aprofundada das Imunoglobulinas


A estrutura das molculas imunoglobulinas determinada pela organizao primria, secundria,
terciria e quaternria da proteina:
1. A estrutura primria, a sequncia de aminocidos, conta para as regies constantes e variveis
das cadeias pesadas e leves;
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2. A estrutura secundria formada pelo enrolamento da cadeia polipptidica numa folha-


pragueada antiparalela;
3. As cadeias so depois enroladas numa estrutura terciria de dominios globulares compactos,
que so ligados aos dominios vizinhos da cadeia polipeptidica que se encontram fora das folhas;
4. Os dominios globulares de cadeias polipeptidicas pesadas e leves interagem numa estrutura
quaternria, formando dominios funcionais que permitem que a molcula de ligue
especificamente ao antignio e, ao mesmo tempo, realizar um numero de funes biolgicas
efectoras.

Enrolamento Imunoglobulina
Anlise cuidadosas das sequncias de aminocidos das cadeias pesadas e leves das imunoglobulinas
mostraram que ambas as cadeias contm vrias unidades homlogas com cerca de 110 residuos de
aminocidos. Dentro de cada unidade, denominadas dominios, uma ponte dissulfito intracadeia forma
um loop com cerca de 60 aminocidos:

As cadeias leves contm um dominio varivel (VL) e um dominio constante (CL);


As cadeias pesadas contm um dominio varivel (VH) e trs ou quatro dominios constantes (CH1,
CH2, CH3 e CH4), dependendo da classe do anticorpo.

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Anlises de cristalografia revelaram que os dominios imunoglobulina so enrolados numa estrutura


compacta caracteristica designada enrolamento imunoglobulina:

Esta estrutura consiste numa sandwich de duas folhas- pragueadas, cada uma contendo
cadeias- antiparalelas de aminocidos, que so ligadas por loops de vrios comprimentos;
As duas folhas- numa estrutura deste tipo so estabilizadas por interaces hidrofbicas entre
elas e pela ponte dissulfito.

Apesar de dominios variveis e constantes apresentarem estrutura semelhante, existem diferenas


subtis entre elas. O dominio V ligeiramente mais longo que o dominio C e contem um par extra de
cadeias- na estrutura das folhas-, tal como uma seuqunica loop extra que conecta este par de
cadeias-.
A estrutura bsica deste enrolamento imunoglobulina contribui para:

A estrutura quaternria das imunoglobulinas facilitando interaces no-covalentes entre


dominios atraves das faces das folhas-. Interaces formam ligaes entre dominios idnticos
(e.g., CH2/CH2, CH3/CH3 e CH4/CH4) e entre dominios no idnticos (e.g., VL/VH e CH1/CL);
Comprimentos e sequncias de aminocidos variveis que formam loops ligando as cadeias-.
Algumas sequncias de loops dos dominios VL e VH contm aminocidos variveis e constituem
o local de ligao ao antignio desta molcula.

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Dominios da Regio Varivel e Ligao ao Antignio


Comparaes detalhadas das sequncias de aminocidos de um grande numero de dominios VL e VH
revelaram que a variao sequencial est concentrada em poucas regies discretas desses dominios. O
padro desta variao melhor resumido medindo quatitativamente a variabilidade em cada ponto da
cadeia polipeptidica. a variabilidade definida como:

A determinao quantitativa da variabilidade dos dominios VL e VH mostram que variaes mximas so


observadas em sequncias que correspondem aos loops que ligam as cadeias-. Essas regies foram
designadas originalmente regies de hipervariabilidade em reconhecimento da sua elevada
variabilidade. No entanto, estas regies formam os locais de ligao ao antignio e, por isso, so agora
designadas regies determinantes da complementariedade (CDRs). As regies restantes dos dominios
VL e VH exibem menor variao, sendo designados regies framework (FRs):

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A grande gama de especificidades exibida pelos anticorpos devida a variaes no


comprimento e na sequncia de aminocodps das seis CDRs em cada fragmento Fab;
A regio framework actua como scaffold que suporta os seis loops;
A estrutura tri-dimensional das regies framework de virtualmente todos os anticorpos
analizados pode ser sobreposta, no entanto, os loops hipervariveis apresentam diferentes
orientaes em diferentes anticorpos.

Difraco de raios-X de vrios complexos anticorpo-antignio mostrou que vrios CDRs fazem contacto
com o antignio, podendo at fazer os seis. Em geral, parece que mais residuos dos CDRs da cadeia
pesada contactam com o antignio, do que residuos dos CDRs da cadeia leve. Assim, o dominio V H
normalmente contribui mais para a ligao ao antignio do que o dominio VL.
A forma do local de ligao ao antignio formada por qualquer combinao de CDRs varia
dramaticamente entre anticorpos. Isto deve-se a diferenas de tamanho dos antignios, que levaro a
diferentes tipos de interaces:
1. Contactos entre um grande numero de proteinas antignicas globulares grandes e anticorpos
ocorrem numa grande superficie, sendo que, na rea de contacto, depresses ou salincias no
antignio complementam salincias ou depresses no anticorpo. Nesta rea, cerca de 15-22
aminocidos no anticorpo contactam o mesmo numero de residuos na proteina antignica;

2. Anticorpos que ligam pequenos antignios, como haptenos, fazem-no em bolsas mais pequenas,
em que o antignio encaixado.

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As interaces no covalentes que formam a base da ligao antignio-anticorpos incluem:

Pontes de hidrognio;
Ligaes inicas;
Interaces hidrofbicas;
Interaces de van der Waals.

Como estas interaces so individualmente fracas


(comparado com uma ligao covalente), um grande
numero delas necessrio para formar uma ligao
antignio-anticorpo forte. Ainda, como cada uma destas
interaces no covalentes opera a distncias muito
curtas, geralmente cerca de 1x10-7 mm, uma interaco
antignio-anticorpo forte depende de uma aproximao e
de um encaixe entre o anticorpo e o antignio. Isto
depende assim de uma elevada complementariedade
entre antignio e anticorpo, um requerimento que
caracteriza as interaces antignio-anticorpo.
Com o avano da resoluo da estrutura dos fragmentos Fab, comeou a tornar-se claro que em alguns
casos a ligao do antignio induz alteraes conformacionais no antignio, no anticorpo, ou em
ambos, dependendo do anticorpo e do antignio. Esta alterao de conformao resulta no encaixe
fechado entre o epitopo e o local de ligao ao antignio no anticorpo, necessrio para as interaces.
Assim, em adio variabilidade no comprimento e na composio em aminocidos dos loops CDR, a
habilidade destes loops alterarem de conformao significativamente no local de ligao permite que os
anitcorpos assumam uma forma mais complementar para os epitopos. No entanto, estas alteraes no
necessitam de ser limitadas ao anticorpo, o que tambm pode inactivar os antignios (no caso de
molculas com actividade biolgica).
Dominios da Regio Constante
Os dominios da regio constante das imunoglobulinas
participam em vria funes biolgicas que so determinadas
pela sequncia de aminocidos de de cada dominio. Existem
vrios dominios com diferentes funes, sendo de importncia
mais elevada:

Dominios CH1 e CL;


Regio dobradia;
Dominios da regio Fc.

Os dominios CH1 e CL existem em todos os tipos de cadeia


pesadas e servem para:

Extender os braos Fab da molcula de anticorpo,


facilitando assim a interaco com o anticropo e
aumentando a rotao mxima dos braos Fab;
Ajudam a manter os dominios VH e VL juntos atravs de
pontes dissulfito entre eles;

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, e

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Imunologia

Contribuem para a diversidade de anticorpos permitindo uma maior associao aleatria entre
dominios VH e VL do que aquela que ocorreria se esta associao fosse feita apenas pelas
interaces VH/VL.

Estas consideraes para estes dois dominios apresentam implicaes importantes na montagem de
diversos anticorpos pois rearranjos aleatrios de genes imunoglobulina geram sequncia unicas VH e VL
que depois geram locais de ligao ao antignio unicos, e a presena destes dois dominios aumenta o
numero de interaces VH/VL estveis que so possiveis, contribuindo para a diversidade geral de
molculas de anticorpos que podem ser expressos num animal.
As cadeias pesadas , e contm uma sequncia pptidica extendida entre os dominios CH1 e CH2 que
apresenta homologia com outros dominios. Esta regio, designada regio dobradia (hinge region):

rica em residuos de prolina e flexivel, fornecendo flexibilidade s IgA, IgD e IgG;


Como resultado, os dois braos Fab so capazes de assumir vrios ngulos um com o outro
quando o antignio est ligado, podendo assim um anticorpo ligar um antignio cujos epitopos
estejam mais ou menos separados;
Varia em comprimento (10-60 residuos) entre diferentes isotipos de imunoglobulinas, sendo
que as maiores diferenas entre as subclasses IgG esto concentradas nesta regio.

Os aminocidos mais comuns nas regies dobradia so:

Prolina fornecem a esta regio uma conformao polipeptidica extendida, tornando-a


particularmente vulnervel clivagem por enzima proteoliticas. aqui que o anticorpo clivado
pela papaina ou pepsina;
Cisteina formam ponte dissufito inter-cadeias que mantm as duas cadeias pesadas juntas. O
numero de pontes dissulfito na regio dobradia varia consideravelmente entre diferentes
classes de anticorpos e entre espcies.
e

Por outro lado, as cadeias pesadas das imunoglobulinas do tipo e


no apresentam uma regio hinge, mas contm um dominio
adicional de 110 aminocidos (CH2/CH2) que apresenta caracteristicas
semelhantes regio dobradia.

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Como visto anteriormente, as cadeias pesadas nas IgA, IgD e IgG contm trs dominios na regio
constante e uma regio dobradia enquanto as cadeias pesada na IgE e IgM contm quatro regies
constantes e nenhuma regio dobradia. Os dominios correspondentes dos dois grupos so:
IgA, IgD, IgG
CH1/CH1
Regio dobradia
CH2/CH2
CH3/CH3

IgE, IgM
CH1/CH1
CH2/CH2
CH3/CH3
CH4/CH4

Cristalografia raios-X revelou que dos dois dominios CH2 das IgA, IgD e IgG, e os dominios CH3 das IgE e
IgM, so separados por cadeias laterais oligossacrideo, sendo estes os dois dominios globulares mais
acessiveis que os outros em meio aquoso. Isto contribui para a actividade biolgica destes dominios na
activao de components do complemento pelas IgG e IgM.
O dominio C-terminal designado CH3/CH3 nas IgA, IgD e IgG e CH4/CH4 nas IgE e IgM, e este est
relacionado com a possibilidade de podermos dividir a imunoglobulinas em dois tipos, sendo diferentes
em ambos os tipos:
1. Imunoglobulinas secretadas (sIg) apresentam uma sequncia de aminocidos hidrofilica de
vrios comprimentos nas suas terminaes carboxilicas;
2. Imunoglobulinas membranares (mIg) o dominio C-terminal contem trs regies (uma
sequncia extracelular hidrofilica de 26 residuos, uma sequncia transmembranar hirdofbica e
uma cauda citoplasmtica) sendo a regio transmembranar constante entre isotipos de
imunoglobulinas, enquanto os comprimentos das sequncias extracelular e citoplasmtica
variveis.

As clulas B expressam diferentes classes de mIg em diferentes estgios de desenvolvimento:

Clulas B imaturas, ou clulas pr-B, expressam apenas mIgM;


Mais tarde na maturao, mIgD co-expresso com IgM na superficie das clulas B maduras
antes de estas serem activadas por um antignio;

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Imunologia

Uma clula B de memria capaz de expressar mIgM, mIgG, mIgA ou mIgE.

Mesmo quando diferentes classes so expressas sequencialmente numa unica clula, a especificidade
antignica de todas a molculas de anticorpos membranares expressas por uma unica clula idntica,
se modo que cada anticorpo liga o mesmo epitopo.

Funes Efectoras Mediadas por Anticorpos


Em adio a ligar antignios, os anticorpos participam numa grande gama de outras actividades
biolgicas. Quando consideramos o papel dos anticorpos na defesa contra uma doena, importante
ter em conta que os anticorpos no matam ou removem patognios apenas por se ligarem a eles. Para
serem efectivos contra estes patognios, os anticorpos no devem apenas reconhece-los mas tambm
evocar respostas que resultaro na remoo do antignio e na morte do patognio:

Opsonizao (visto j no capitulo da fagocitose);


Activao do complemento - IgM e, em humanos, a maior parte das subclasses de IgG so
capazes de activar uma classe de glicoproteinas sricas designadas sistema complemento. O
principal produto desta activao um fragmento pptidico designado C3b que se liga a
complexos de opsonizao e que reconhecido pelos eritrcitos e pelos macrfagos. Isto facilita
a fagocitose pelos macrfagos e tambm permite que os eritrcitos transportem estes
complexos para o figado ou bao onde macrfagos residentes eliminam os antignios e matam
os patognios sem danificar o eritrcito;
Citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos - A ligao de um anticorpo
ligado a clulas alvo (clulas do hospedeiro infectadas com virus) a receptores Fc de um numero
de tipos de clulas, particularmente clulas naturalmente assassinas, capaz de dirigir
actividades citotxicas efectoras contra a clula alvo;
Transcitose Define a entrega de anticorpos nas superficies mucosas dos tractos respiratrio,
gastrointestinal e urogenital, tal como o seu exporte para o leite materno, que requer o
movimento de imunoglobulinas atraves das camadas epiteliais.

Enquanto as regies variveis dos anticorpos so quem liga os antignios, a regio constante das
cadeias pesadas (CH) responsvel por esta variedade de interaces colaborativas com outras
proteinas, clulas e tecidos, que resultam nas funes efectoras da resposta humoral.
Como estas funes efectoras resultam de interaces entre a regio constante das cadeias pesadas e
outras proteinas sricas ou receptores membranares, nem todas as classes de imunoglobulinas
apresentam as mesmas propriedades funcionais.
A capacidade das imunoglobulinas serem transportadas por transcitose depende das propriedades da
regio constante:

Em humanos e ratinhos, a IgA a principal espcie de anticorpo que sofre tal transporte, apesar
das IgM tambm poderem ser transportadas para as superficies das mucosas;
Algumas espcies de mamiferos, como os humanos e os ratinhos, tambm transferem grandes
quantidades de IgG da me para o feto. Visto que os sistemas circulatorios da me e do feto so
separados, os anticorpos devem ser transportados atravs do tecido da placenta. Isto fornece
uma inicial proteco do feto, o que uma forma de imunizao passiva.

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Imunologia

Classes e Actividades Biolgicas dos Anticorpos


As vrias classes e isotipos de imunoglobulinas so distinguidas por sequncias de aminocidos unicas
na regio constante das cadeias pesadas, que conferem propriedades funcionais e estruturais
especificas da classe. A estrutura das principais classes na forma secretada a seguinte:

As propriedades moleculares e biolgicas das diferentes classes podem ser sumariadas na seguinte
tabela:

ou

Concentrao
srica (mg/mL)
3,5

Semi-vida
srica (dias)
6

ou

Traos

Nenhum

ou

0,05

IgG

IgG1-4

(1, 2, 3
ou 4)

ou

13,5

23

IgM

Nenhum

ou

1,5

Isotipo

Subtipos

Cadeia H

IgA

IgA1,2

(1 ou 2)

IgD

Nenhum

IgE

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Cadeia L

Funes
Imunidade das mucosas
Receptor de antignios nas
clulas B naive
Defesa contra parasitas
helmintos, hipersensibilidade
imediata
Opsonizao, activao do
complemento, citotoxicidade
mediada por clulas,
imunidade neo-natal, inibio
por feedbcak das clulas B
Receptor de antignios nas
clulas B, activao do
complemento

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Imunoglobulina G (IgG)
A classe de imunoglobulinas G, a mais abundante no soro, constitui cerca de 80% do total de
imunoglobulinas no soro. A molcula de IgG consiste em duas cadeias pesadas e duas cadeias leve
ou . Existem quatro subclasses de IgG humana, distinguidas por diferenas na sequncia da cadeia e
numeradas de acordo com a diminuio das suas concentraes no soro:

As sequncias de aminocidos que distinguem as quatros subclasses IgG so codificados por


diferentes genes CH, cujas sequncias de DNA so 90%-95% homlogas;
As caracteristicas estruturais que distinguem estas subcalsses so o tamanho da regio
dobradia e o numero e posio das pontes dissulfito entre as cadeias pesadas.

As diferenas subtis de aminocidos entre subclasses de IgG afectam a actividade biolgica das
molculas:

IgG1, IgG3 e IgG4 atravessam a placenta e tm um papel importante na proteco do feto em


desenvolvimento;
IgG3 o activador do complemento mais efectivo seguido por IgG1. IgG2 menos eficiente e
IgG4 no capaz de activar o complemento;
IgG1 e IgG3 ligam receptores de Fc com elevada afinidade nas clulas fagociticas e, assim,
medeiam a opsonizao. IgG4 apresenta uma afinidade intermdia para receptores Fc e IgG2
apresenta uma afinidade extremamente baixa.

Imunoglobulina M (IgM)
As imunoglobulinas M correspondem a cerca de 5%-10% do total de imunoglobulinas sricas, com uma
concentrao srica mdia de 1,5 mg/mL. Podemos ter duas formas de IgM:

IgM monomrica, com um peso moleculas de 180.000, expressa com um anticorpo


membranar nas clulas B;
IgM pentamrica a forma secretada, na qual cinco unidades monomricas so mantidas em
conjunto por pontes dissulfito que ligam os dominios C-terminal das cadeias pesadas (CH4/CH4)
e os seus dominios CH3/CH3.

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IgM membranar

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IgM secretada

Na IgM pentamrica, as cinco subunidades monomricas esto arranjadas com as suas regies Fc no
centro de um pentmero e os dez locais de ligao ao antignio na periferia da molcula. Cada
pentmero contem um polipptido adicional designado cadeia J (joining), que se encontra ligado por
pontes dissulfito a residuos de cisteina de duas das dez cadeias . Esta cadeia parece ser necessria
para a polimerizao do monmero para formar a IgM pentamrica, e adicionada mesmo antes da
secreo do pentmero.
A IgM a primeira classe de imunoglobulinas a ser secretada numa primeira resposta ao antignio, e
tambm a primeira imunoglobulina a ser sintetizada nos recm-nascidos. Devido sua estrutura
pentamrica com 10 locais de ligao ao antignio, a IgM srica apresenta uma maior valncia
relativamente aos outros isotipos, tendo uma actividade biolgica mais rpida:

Uma IgM capaz de ligar 10 pequenas moleculas de haptenos, contudo, devido ao


impedimento estreo, apenas cerca de 5 molculas de antignios maiores se conseguem ligar
simultaneamente;
Devido elevada valncia , a IgM pentamrica mais eficiente do que outros isotipos na ligao
a antignios com vrios epitopos repetidos, como particulas virais e eritrcitos, formando
aglutinados e inactivando particulas virais mais rapidamente do que qualquer outro isotipo;
IgM mais eficiente que IgG na activao do complemento, que requer duas regies Fc em
grande aproximao.

Devido ao seu elevado tamanho, a IgM no se difunde bem e, assim, encontrada em concentraes
muito baixas nos fluidos intercelulares. A presena da cadeia J pemite que as IgM se liguem a
receptores nas clulas secretrias, que a transportam atravs de revestimentos epiteliais de modo a
entrarem nas secrees externas que banham as superficies mucosas.
Imunoglobulina A (IgA)
Apesar das imunoglobulinas A constituirem cerca de 10%-15% das imunoglobulinas totais no soro, elas
so a classe de imunoglobulinas predominantes nas secrees externas como o leite materno, a saliva,
as lgrimas e o muco dos tractos broncal, genitourinrio e digestivo. Assim, podemos ter dois tipos de
IgA:
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IgA srica existem principalmente como um monmero, mas formas polimricas (dimeros,
trimeros e alguns tetrameros) so por vezes observadas, todas contendo uma cadeia J;
IgA secretria a das secrees externas e consiste num dimero ou tetramero, uma cadeia J e
uma cadeia polpeptidica designada componente secretrio.

IgA srica

IgA scertria

O componente secretrio derivado a partir do receptor que responsvel pelo transporte da IgA
polimrica atravs da membrana celular, e a cadeia J idntica com aquela encontrada na IgM
pentamrica, servindo para funes semelhantes facilitando a polimerizao dos dois tipos de IgA:

O componente secretrio um polipptido de 70.000 MW produzido pelas clulas epiteliais das


membranas mucosas e consiste em cinco dominios Ig-like que se ligam a dominios da regio Fc
do dimero IgA;
Esta interaco estabilizada por uma ponte dissulfito entre o quinto dominio do componente
secretrio e uma das cadeias da IgA dimrica.

A produo diria de IgA secretria maior que a de qualquer outra classe de imunoglobulina. Os
plasmcitos secretores de IgA esto concentrados ao longo da superficie das membranas mucosas e,
todos os dias, um humano secreta 5g a 15g de IgA secretria nas secrees mucosas:

1. Estas clulas preferencialmente migram para tecidos subepiteliais, onde a IgA secretada se liga
fortemente a receptores para moleculas imunoglobulinas polimricas, que so expressos nas
mucosas epiteliais e no epitlio glandular nas glndula mamrias, salivares e lacrimais;

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2. Depois da IgA polimrica se ligar a estes receptores, o complexo IgA-receptor transportado


atravs da barreira epitelial para o lumen;
3. O transporte deste complexo envolve endocitose mediada por receptores e transporte directo
das vesiculas atravs da clula epitelial para a membrana luminal, onde a vesicula se funde com
a membrana plasmtica;
4. O receptor ento clivado enzimaticamente da membrana e torna-se o componente secretrio,
que se encontra ligado e libertado em conjunto com a IgA polimrica nas secrees mucosas.
Os componente secretrio mascara locais susceptiveis a clivagem por proteases na regio dobradia das
IgA secretrias, permitindo que a molcula polimrica exista durante mais tempo no ambiente rico em
proteases do muco que de outro modo no seria possivel. Este mecanismo de transporte tambm
usado pelas IgM pentamricas, mas estas ultimas existem numa percentagem muito menor nas
secrees mucosas.
As principais actividades biolgicas das IgA so:

Funo efectora importante nas superficies membranares das mucosas, que so os principais
locais de entrada de organismos patognicos;
Como so polimricas, as IgA secretrias so capazes de ligar de modo cruzado antignios com
multiplos epitopos;
A ligao de IgA secretria a antignios superficiais de virus e bactrias previne a ligao destes
s clulas mucosas, inibindo a infeco virica e a colonizao bacteriana;
Complexos de IgA secretria e antignios so facilmente presos no muco e depois eliminados
pelas clulas epiteliais ciliada do tracto respiratrio ou pelos movimentos peristlticos do
sistema digestivo;
O leite materno contem IgA secretria e muitas outras molculas que ajudam a proteger o
recem-nsacido contra a infeco durante o primeiro ms de vida. Como o sistema imune dos
bebs no est completamente funcional, a amamentao tem um papel importante na
manuteno da saude dos recm-nascidos.

Imunoglobulina E (IgE)
A potente actividade biolgica das imunoglobulinas E permitiu que
estas fossem identificadas no soro apesar da concentrao srica
extremamente baixa (0,3 g/mL). Estes anticorpos medeaim as
reaces de hipersensibilidade imediata que so responsveis pelos
sintomas da febre do feno, asma, urticria e choque anafiltico:

IgE liga-se a receptores Fc na membrana dos basfilos no


sangue e dos mastcitos nos tecidos;
A ligao cruzados dos antignios a molculas IgE ligadas
aos recepotres induz os basfilos e os mastcitos a
translocarem os seus grnulos para a membrana plasmtica
e a libertarem o seu conteudo para o ambiente
extracelular;
Como resultado, uma variedade de mediadores
farmacologicamente activos so libertados e do origem s
manifestaes alrgicas.

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No entanto, a desgranulao dos mastcitos localizada induzida pelas IgE podem tambm libertar
mediadores que facilitam a montagem de clulas necessrias para a defesa antiparasitica.
Imunoglobulinas D (IgD)
A classe de imunoglobulinas D apresenta uma concentrao srica de 30 g/mL e constitui cerca de
0,2% das imunoglobulinas sricas totais. Em conjunto com as IgM, as IgD so as principais
imunoglobulinas membranares expressas pelas clulas B maduras, e o seu papel na fisiologia das clulas
B ainda est sob investigao.
Assim, podemos resumir as principais propriedades dos diferentes subtipos de imunoglobulinas na
seguinte tabela:
Propriedade/Actividade
Peso molecular

IgG1

IgG2

IgG3

IgG4

150.000

150.000

150.000

150.000

23

Componente da cadeia
pesada
Nivel srico normal
(mg/mL)
Semi-vida srica (dias)
Activa a via do
complemento clssica
Atravessa a placenta
Presente na membrana
cas clulas B maduras
Liga a receptores Fc nos
fagcitos
Transporte para as
mucosas
Induz desgranulao
dos mastcitos

IgA1
150.000600.000

IgA2
150.000600.000

IgM

IgE

IgD

900.000

900.000

150.000

0,5

3,0

0,5

1,5

0,0003

0,03

23

23

2,5

+/-

++

+++

+/-

++

+/-

++

++

++

Determinantes Antignicos nas Imunoglobulinas


Como os anticorpos so glicoproteinas, eles podem funcionar como potentes imunognios para induzir
uma resposta por anticorpos. Tais anticorpos anti-Ig so ferramentas poderosas para o estudo do
desenvolvimento das clulas B e das respostas imunes humorais. Os determinantes antignicos, ou
epitopos, nas imunoglobulinas caem em trs principais categorias, que esto localizadas em pores
caracteristicas da molcula:
1. Determinantes isotipicos regies constantes que colectivamente definem cada classe e
subclasse de cadeia pesada e cada tipo e subtipo de cadeia leve numa espcie. Cada isotipo
codificado por um gene de regio constante separado, e todos os membros de uma espcie
carrega o mesmo gene de regio constante, que apresenta multiplos alelos. Assim, diferentes
espcies expressam diferentes isotipos;
2. Determinantes alotipicos apesar de todos os membros de uma espcie herdarem o mesmo
grupo de genes isotipo, multiplos alelos existem para alguns dos genes. Estes alelos codificam

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diferenas de aminocido subtis, designados determinantes alotipicos, que ocorrem em alguns,


mas no todos os membros de uma espcie;
3. Determinantes idiotipicos a sequncia de aminocidos unica dos dominios VH e VL de um
determinado anticorpo funciona no apenas como local de ligao ao antignio mas tambm
como determinantes antignicos. Estes determinantes idiotipicos surgem das regies variveis
da cadeias pesadas e leves. Em alguns casos, um idiotipo pode ser mesmo o local de ligao ao
antignio e noutros casos podem incluir regies variveis fora do local de ligao.

Receptor da Clula B (BCR)


Os receptores da clula B (BCRs) so imunoglobulinas membranares mas, tal como os TCRs, estas
molculas apresentam caudas citoplasmticas curtas:

mIgM e mIgD apresentam apenas 3 aminocidos citoplasmticos;


mIgA apresenta apenas 14 aminocidos citoplasmticos;
mIgG e mIgE apresentam apenas 28 aminocidos citoplasmticos.

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Em cada caso, a cauda citoplasmtica demasiado pequena para


ser capaz de se associar a molculas sinalizadoras intracelulares
(e.g., tirosina cinases e proteinas G). Portanto, as imunoglobulinas
membranares no constituem por si s o receptor completo e
associam-se com proteinas acessrias (Ig e Ig) para formar o
complexo BCR:

o complexo BCR um complexo de proteinas


transmembranres composto por uma mIg e heterodimeros
Ig e Ig ligados por pontes dissulfito;
A cadeia Ig apresenta uma cauda citoplasmtica mais
longa contendo 61 aminocidos e a cauda da cadeia Ig
contem 48 residuos;
As caudas do heterodimero Ig/Ig so suficientemente
longas para interagir com molculas sinalizadoras
intracelulares.

Este complexo diferente do TCR, como j foi visto anteriormente quando foi estudado o TCR.

A Superfamilia Imunoglobulina
As estruturas de vrias cadeias imunoglobulina pesadas e leves partilham vrias caracteristicas,
sugerindo que elas apresentam um ancestral comum. Em particular, todas as classes de cadeias pesadas
e leves apresentam a mesma estrutura do dominio imunoglobulina (enrolamento imunoglobulina).
Para alm disso, um grande numero de outras proteinas possuem uma ou mais regies homlogas com
um dominio imunoglobulina, como j visto para o MHC e o TCR. Cada uma destas proteinas
classificada como membro da superfamila imunoglobulina e os genes que as codificam evoluiram
independentemente e no partilham ligao gentica ou funo. As seguintes proteinas, em conjunto
com as imunoglobulinas por si s, so membros representativos da superfamilia imunoglobulina:

Heterodimero Ig/Ig, parte do BCR;


Receptor poli-Ig, que contribui para o componente secretrio das IgA e IgM;
Receptor da clula T (TCR);
Proteinas acessria da clula T, incluindo CD2, CD4, CD8, CD28 e as cadeias , e do CD3;
Molculas MHC classe I e classe II;
2-microglobulina, uma proteina invariante associada com as molculas MHC classe I;
Vrias molculas de adeso celular, incluindo VCAM-1, ICAM-1, ICAM-2 e LFA-3;
Factor de crescimento derivado das plaquetas.

Muitas outras proteinas tambm pertencem superfamilia imunoglobulina. Anlises cristalogrficas


ainda no foram feitas a todos os membros desta superfamilia. No entanto, a sequncia de aminocidos
primria dessas proteinas sugere que todas elas contm um dominio com enrolamento imunoglobulina
tipico. Especificamente, todos os membros da superfamilia imunoglobulina contm pelo menos um ou
mais segmentos de 110 aminocidos capazes de se arranjarem nesse enrolamento.

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A maior parte dos membros da superfamilia imunoglobulina no capaz de se ligar a antignios. Assim,
a estrutura caracteristica Ig encontrada em tantas proteinas membranares deve apresentar uma outra
funo para alm da ligao a antignios. Uma possibilidade que o enrolamento imunoglobulina
poder facilitar as interaces entre proteinas membranares.

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MATURAO, ACTIVAO E
REGULAO DOS LINFCITOS
ORGANIZAO E EXPRESSO DE GENES IMUNOGLOBULINA

Diversidade de Imunoglobulinas
Uma das caracteristicas mais importantes do sistema imune dos vertebrados a sua habilidade para
responder a uma gama aparentemente ilimitada de antignios estranhos pois virtualmente todos os
anticorpos estudados at agora contm uma unica sequncia de aminocidos na regio varivel mas
apenas um numero limitado de sequncias invariveis na regio constante. A base gentica para esta
combinao numa unica molcula proteica encontra-se na organizao dos genes de imunoglobulinas
(Ig):

No DNA da linha germinativa, multiplos segmentos de genes condificam pores das cadeias
leve ou pesada de uma nica imunoglobulina;
Estes segmentos de genes so carregados nas clulas germinativas mas no podem ser
transcritos e traduzidos em cadeias completas at serem rearranjados em genes funcionais;
Durante a maturao das clulas B na medula ssea, certos segmentos desses genes so
aleatoriemante baralhados por um sistema gentico dinmico capaz de gerar mais de 106
combinaes;
Processos subsequentes aumentam a diversidade do reportrio de locais de ligao do
anticorpo para um numero que excede 106 em pelo menos duas ou trs ordens de magnitude.

Assim, os processos de desenvolvimento das clulas B so cuidadosamente regulados:

A maturao de uma clula B progenitora progride atravs de uma sequncia ordenada de


rearranjos de genes Ig, acoplada com modificaes dos genes que contribuem para a
diversidade do produto final;
No final deste processo, uma clula B madura, imunocompetente, conter sequncias
codificantes para uma regio varivel funcional da cadeia pesada e uma regio varivel da
cadeia leve;
Assim, a clula B individual antigenicamente comprometido com um epitopo especifico.

Depois da estimulao antignica de uma clula B madura nos orgos linfides perifricos, rearranjos
adicionais de segmentos de genes da regio constante podem gerar alteraes no isotipo expresso, o
que produz alteraes nas funes biolgicas efectoras da molcula de imunoglobulina sem alterar a
sua especificidade. Assim, as clulas B madura contm DNA cromossmico que j no semelhante ao
DNA da linha germinativa.
Assim, enquanto pensamos no DNA genmico como uma impresso digital gentica estvel, a linhagem
de clulas linfocitrias no retem uma cpia intacta desta impresso. O rearranjo genmico uma
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caracteristica essencial da diferenciao dos linfcitos, e nenhum outro tipo de clula dos vertebrados
sofre este processo.

Modelo Gentico Compativel com a Estrutura das Imunoglobulinas


Como sabemos, existe um enorme reportrio de respostas dos anticorpos (10 8). No entanto, se todos
os anticorpos diferentes que levam a esta gama de diversidade de respostas fossem expressos por
genes no nosso genoma, seria necessrio cerca de 1/3 do genoma. Assim, dificil iconciliar esta
diversidade com os modelos genticos clssicos.
Portanto, qualquer modelo vivel da organizao dos genes das imunoglobulinas tem de ter em conta
as seguintes propriedades dos anticorpos:

A vasta diversidade de especificidades dos anticorpos;


A presena de regies variveis nas cadeias leve e pesada das Ig na extermidade N-terminal e de
uma regio constante na extermidade C-terminal;
A existncia de isotipos com a mesma especificidade antignica, que resulta da associao de
uma determinada regio varivel com diferentes regies constantes da cadeia pesada.

Surgiram dois grupos de teorias na tentativa de descrever a organizao dos genes das
imunoglobulinas:
1. Teorias da linha germinativa o genoma contido nas clulas germinativas, ovulo e
epsermatozide, contem um grande reportrio de genes das imunoglobulinas. Assim, estas
teorias no invocam mecanismos genticos especiais na origem da diversidade de anticorpos.
Argumentam que o imenso valor vital do sistema imune justifica a dedicao de uma fraco
significativa do genoma codificao de imunoglobulinas;
2. Teorias de variao somtica o genoma contem um pequeno numero de genes das
imunoglobulinas, a partir dos quais um grande numero de anticorpos especificos so gerados
nas clulas somticas por maturao ou recombinao.
Independentemente da diversidade ser gerada por mecanismos da linha germinativa ou somticos, um
paradoxo mantem-se:
Como que a estabilidade mantida nas regies constantes (C) enquanto um mecanismo
diversificante gera a regio varivel (V)?

As teorias da linha germinativa no parecem ser capazes de responder a esta questo porque
parece dificil que um mecanismo evolutivo fosse capaz de gerar diversidade na parte varivel de
vrios genes das cadeias pesadas e leves preservando a regio constante;
As teorias da variao somtica no parecem ser capazes de responder a esta questo porque
parece dificil conceber um mecanismo que diversificasse a parte varivel de um unico gene das
cadeias pesadas e leves nas clulas somticas sem alterar a sequncia de aminocidos
codificada pela regios constante.

Em 1976, S. Tonegawa e N. Hozumi encontraram a primeira evidncia directa de que genes separados
codificam as regies V e C das imunoglobulinas e que os genes so rearranjados no decurso da
diferenciao das clulas B, o que d peso s teorias da variao somtica e explica a diferena de
variao nas duas regies das imunoglobulinas.
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Organizao dos Genes das Imunoglobulinas


As cadeias leves e e as cadeias pesadas so codificadas por familias multignicas separadas situadas
em diferentes cromossomas. No DNA da linha germinativa, cada uma destas familias multignicas
contm vrias sequncias codificantes, desiganadas segmentos de genes, separadas por regies no
codificantes. Durante a maturao das clulas B, esses segmentos de genes so rearranjados e juntos de
modo a formar genes de imunoglobulinas funcionais:

As familias e da cadeia leve contm segmentos de gene V (variavel), J (joining) e C


(constante), sendo que os segmentos VJ rearranjados codificam a regio varivel das cadeias
leves e o segmento C codifica a regio constante;
As familias da cadeia pesada contm segmentos de gene V (variavel), D (diversidade), J (joining)
e C (constante), sendo que os segmentos VDJ rearranjados codificam a regio varivel das
cadeias pesadas e o segmento C codifica a regio constante.

Os segmentos J codificam a regio terminal das regies constante que se ligam s regies constantes,
da o J de Joining.
Cada segmento de genes V precedido na sua terminao 5 por um pequeno exo que codifica um
pequeno pptido sinal (L) que guia a cadeia leve ou pesada atravs do reticulo endoplasmtico. Este
pptido sinal clivado das cadeias leves e pesadas nascentes antes da montagem da molcula de
imunoglobulina final. Assim, os aminocidos codificados por esta sequncia no aparecem na molcula
de imunoglobulina.
Familia de Multigenes das Cadeias
A familia de multigenes das cadeias na liha germinativa de ratinho contm:

3 segmentos de genes V, cada um com uma sequncia sinal a pequena distncia na


exterminada 5;
4 segmentos de genes J;
4 segmentos de genes C.

J4 um pseudogene, um gene defeituoso que incapaz de codificar uma proteina, e genes deste tipo
so indicados com o simbolo psi (). No entanto, o parceiro de regio constante do J 4 (C4) um gene
prefeitamente funcional. Assim, os segmentos de genes V e os trs J funcionais codificam a regio
varivel da cadeia leve e cada um dos segmentos de genes C funcionais codificam a regio constante de
cada um dos trs subtipos de cadeias (1, 2 e 3).
No entanto, em humanos, este locus mais complexo, contendo 31 segmentos de genes V, 4
segmentos de genes J e 7 segmentos C, e ainda bastantes pseudogenes de cada tipo de genes.

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Familia de Multigenes das Cadeias


A familia de multigenes das cadeias em ratinho, sendo semelhante em humano, contem:

Aproximadamente 85 segmentos de genes V, cada um com uma sequncia sinal a pequena


distncia na exterminada 5;
5 segmentos de genes J, um dos quais um pseudogene no funcional;
Um unico segmentos de genes C.

Tal como na familia de multigenes das cadeias , os segmentos de genes V e J codificam a regio
varivel da cadeia pesada e o segmento C codifica a regio constante. No entanto, como s existe um
nico segmento C, no existem subtipos de cadeias . Por outro lado, comparando o arranjo dos genes
desta familia e os da familia , vemos que o arranjo de cada uma muito diferente.
Familia de Multigenes das Cadeias Pesadas
A organizao dos genes das cadeias pesadas das imunoglobulinas semelhante, mas mais complexa,
dos genes e das cadeias leves. No entanto, um segmento de genes adicional codifica parte da regio
varivel das cadeias pesadas:

Segmento D (diversidade) segmento que se liga aos segmentos de genes VH e JH para codificar
a regio varivel interira da cadeia pesada. Codifica aminocidos no CDR3 e contribui para a
gerao da diversidade de anticorpos. Encontra-se entre os segmentos de genes VH e JH.

A familia de multigenes das cadeias pesadas em humano, sendo semelhante em ratinho, contem:

51 segmentos de genes VH localizados a montante dos segmentos de genes DH e cada um


precedido por uma sequncia sinal a pequena distncia na extremidade 5;
27 segmentos de genes DH localizados a jusante dos segmentos de genes VH;
6 genes JH funcionais a jusante dos segmentos de genes DH;
Uma srie de segmentos CH a jusante dos segmentos de genes JH, sendo que cada um codifica a
regio constante de um isotipo de cadeia pesada das imunoglobulinas. Os segmentos de genes
CH consistem em exes codificantes e intres no codificantes. Cada exo codifica um domino
separado da regio constante da cadeia pesada.

A conservao de funes biolgicas efectoras importantes da molcula de anticorpo mantida pelo


numero limitado de genes de regio constante da cadeia pesada. Em humanos e ratinhos, os segmentos
de genes CH so arranjados sequencialmente na ordem C, C, C, C e C e este arranjo no acidental,
ele est relacionado com a expresso sequencial das classes de imunoglobulinas no curso do
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desenvolvimento das clulas B e a resposta inicial IgM das clulas B quando encontram pela primeira
vez um antignio.

Rearranjos dos Genes das Regies Variveis


Genes funcionais que codificam as cadeias leves e pesadas das imunoglobulinas so montadas por
eventos de recombinao ao nivel do DNA. Estes eventos e os eventos paralelos que envolvem genes do
receptor das clulas T so os unicos rearranjos de DNA especificos de um local conhecidos nos
vertebrados.
Os rearranjos de genes das regies variveis ocorrem numa sequncia ordenada durante a maturao
das clulas B na medula ssea:

Os genes das regies variveis das cadeias pesadas rearranjam primeiro;


Depois rearranjam os genes das regies variveis das cadeias leves;
No final do processo, cada clula B contem uma unica sequncia de DNA para a regio varivel
funcional para a sua cadeia pesada e outra para a sua cadeia leve.

O processo de rearranjo de genes das regies variveis produz clulas B maduras, imunocompetentes,
sendo cada uma dessas clulas consignada a produzir anticorpos com um local de ligao codificado por
uma sequncia particular dos seus genes V rearranjados. Por outro lado, rearranjos dos genes da regio
constante da cadeia pesada gerar alteraes seguintes na classe de imunoglobulina (isotipo) expressa
por uma clula B, mas estas alteraes no afectaro a especificidade antignica da clula.
Os passos no rearranjo de genes das regies variveis ocorrem numa sequncia ordenada, mas so
eventos aleatrios que resultam na determinao aleatria da especificidade da clula B.
Rearranjos V-J das Cadeias Leves
A expresso de ambas as cadeias leves e requer rearranjos dos segmentos de genes V e J da regio
varivel:

Em humanos, qualquer um dos segmentos de genes V funcionais pode combinar-se com


qualquer uma das quatro combinaes J-C;
Em ratinho, mais complicado, sendo que o rearranjo de DNA pode juntar o segmento de gene
V1 com qualquer um dos segmentos J1 ou J3, ou o segmento de gene V2 com o segmento de
gene J2;
No DNA de cadeia leve , qualquer um dos segmentos de genes V pode ser combinado com
qualquer um dos segmentos de genes J.

Assim, os genes e rearranjados contm as seguintes regies na ordem 53:

Um pequeno exo sinal (L);


Uma sequncia no codificante (intro);
Um segmento VJ;
Um segundo intro;
A regio constante.

A montante de cada segmento sinal do gene encontra-se uma sequncia promotora. A sequncia de
cadeia leve rearranjada transcrita pela RNA polimerase a partir do exo L atravs do segmento C at
ao sinal stop, gerando um transcrito de RNA primrio para a cadeia leve. Os intres no transcrito
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primrio so removidos por enzimas de processamento de RNA, e o mRNA de cadeia leve resultante sai
assim do nucleo. O mRNA de cadeia leve liga-se a ribossomas e traduzido na proteina de cadeia leve.
A sequncia sinal no N-terminal transporta a cadeia polipeptidica para o lumen do reticulo
endoplasmtico rugoso e depois clivada, portanto, no est presente no produto proteico de cadeia
leve.
Esquematicamente, para as cadeias , o processo de rearranjo e expresso o seguinte:

Rearranjos V-D-J das Cadeias Pesadas


A produo de genes de cadeia pesada funcionais requer dois eventos de rearranjo separados dentro
da regio varivel:
1. Um segmento de gene DH primeiro combina-se com um segmento JH;
2. O segmento DHJH resultante aproxima-se e combina-se com um segmento VH para gerar uma
unidade VHDHJH que codifica a regio varivel inteira.
Assim, no DNA de cadeia pesada, os rearranjos da regio varivel produz um gene rearranjado que
contm as seguintes regies na ordem 53:

Um pequeno exo L;
Um intro;
Um segmento VDJ;
Outro intro;
Uma srie de segmentos de genes C.

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Tal como nos genes das cadeias leves, uma sequncia promotora est localizada a uma pequena
distncia a montante de cada sequncia L da cadeia pesada. Assim que o rearranjo concluido, a RNA
polimerase pode ligar-se sequncia promotora e transcrever o genes de cadeia pesada inteiro,
incluindo os intres. Inicialmente, ambos os segmentos de genes C e C so transcritos. Poliadenilao
diferencial e splicing de RNA remove os intres e processa o transcrito primrio para gerar mRNA,
incluindo tanto o transcrito C como o C. Estes dois mRNAs so depois traduzidos, e o pptido sinal do
polipptido nascente resultante clivado, gerando cadeias e acabadas. A produo de dois mRNAs
de cadeia pesada permite que a clula B madura, imunocompetente, expresse ambas IgM e IgD com
especificidade antignica idntica na sua superficie.
Esquematicamente, o processo de rearranjo e expresso o seguinte:

Mecanismos de Rearranjos de DNA das Regies Variveis


Estudos de sequenciao de DNA revelaram a presena de sequncias sinal de recombinao (RSS)
unicas nas extremidades de cada segmento de genes V, D e J da linha germinativa:

Uma RSS est localizada a 3 de cada segmento de gene V, a 5 de cada segmento de gene J e
dos dois lados de cada segmento de gene D;
Estas sequncias funcionam como sinais para o processo de recombinao de rearranja os
genes;
Cada RSS contem um heptamero palindrmico conservado e um nonamero rico em AT
conservado separado por uma sequncia interveniente com 12 ou 23 pares de bases.

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As sequncias intervenientes de 12- e 23-bp correspondem, respectivamente, a uma ou duas voltas da


hlice de DNA. Por esta razo, as sequncias so deignadas sequncia sinal de recombinao one-turn
(one-turn RSS) e sequncia sinal de recombinao two-turn (two-turn RSS).

A RSS V apresenta um espao one-turn e a RSS J apresenta um espao two-turn;


No DNA de cadeia leve , esta ordem revertida, isto , a RSS V apresenta um espao two-turn
e a RSS J apresenta um espao one-turn;
No DNA de cadeia pesada, as RSS dos segmentos de genes VH e JH apresentam espaos two-turn
enquanto cada lado dos segmentos de genes DH apresentam espao one-turn.

A lei one-turn/two-turn diz que RSS com um espao one-turn se conseguem ligar apenas a sequncias
com um espao two-turn. Esta lei assegura, por exemplo, que um segmento VL se liga apenas a um
segmento JL a no a outro segmento VL e tambm que os segmentos VH, DH e JH se combinam na ordem
apropriada e que outros segmentos os mesmo tipo no se ligam um ao outro.
A recombinao V-(D)-J, que ocorre nas junes entre as RSSs e as sequncia codificantes, catalizada
por enzimas colectivamente designadas recombinase V(D)J. Estas enzimas so os unicos produtos de
genes especificos das clulas linfides que esto envolvido no rearranjo V-(D)-J:

RAG-1 e RAG-2 produtos de genes activantes da recombinao;


TdT terminal deoxynucleotidyl transferase.

A recombinao de segmentos de genes da regio varivel consite nos seguintes passos, catalizados
por um sistema de enzimas recombinases:
1. Reconhecimento de RSSs por enzimas recombinase, seguida de sinapse na qual duas sequncias
sinal e as sequncias codificantes adjacentes (segmentos de genes) so aproximadas;
2. Clivagem de uma cadeia de DNA pelas RAG-1 e RAG-2 nas junes das RSSs com as sequncias
codificantes;
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3. Uma reaco catalizada pelas RAG-1 e RAG-2 na qual o


grupo OH 3 livre no corte na cadeia de DNA ataca a
ligao fosfodiester que liga a cadeia oposta RSS,
simultaneamente produzindo uma estrutura hairpin na
extremidade de corte da sequncia codificante e a
quebra da cadeia dupla na RSS;
4. Corte do hairpin para gerar locais de adio de
nucletidos de regio P, seguida de primming de
alguns nucletidos a parte da sequncia codificante
por uma endonuclease de cadeia simples;
5. Adio de cerca de 15 nucletidos, designados
nucletidos de regio N, nas extermidades de corte
das sequncias codificantes de segmentos V, D e J das
cadeias pesadas por uma enzima TdT;
6. Reparo e ligao para juntar as sequencias codificantes
e para juntar as sequncias sinal, catalizada por
enzimas doublestrand break repair normais (DSBR),
que so expressas em todas as clulas somticas.
A recombinao resulta na na formao de uma encaixe
codificante, entre as duas sequncias codificantes, e um
encaixe sinal, entre as RSSs. A orientao transcripcional dos
segmentos de genes a serem ligados determina o destino do
encaixe sinal e dos DNA interveniente:

Quando os dois segmentos de genes esto na mesma


orientao transcripcional, a combinao resulta na
deleco do encaixe sinal e do DNA interveniente
como um produto circular;
Menos frequentemente, se os dosi genes tiverem
orientaes opostas, a combinao resulta por
inverso do DNA, resultando na reteno de ambos os
encaixes no cromossoma.

No locus humano, cerca de metade dos segmentos de genes V esto invertidos relativamente aos J e
a sua combinao feita assim por inverso.
A TdT um membro dos factores non-homologous end joining
(NHEJ) que so expressos em qualquer clula e esto envolvidos
no reparo do DNA. Estas adicionam nucletidos ao DNA e fecham
espaos entre dois pedaos de DNA. Constituem um complexo
enzimtico cujas enzimas so:

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DNA-PKs;
Ku-70 e Ku-86;
Artemis;

Pol ;
DNA-ligase IV;
XRCC4.

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Qualquer deficincia nestas enzimas, NHEJ e Rags, leva a doenas autoimunes pois os linfcitos ficam
incapazes de produzir anticorpos.
Juno Flexivel dos Segmentos
Uma das caracteristicas notveis da recombinao de segmentos de genes a diversidade de junes
codificantes que so formadas entre dois quaisquer segmentos. Apesar das quebras na cadeia dupla de
DNA para inicai os rearranjos V-(D)-J serem introduzidos precisamente nas junes das RSSs e das
sequncias codificantes, a ligao subsequente das sequncias codificantes imprecisa. A diversidade
juncional nas ligaes V-J e V-D-J so geradas por um numero de mecanismos:

Variao no corte do hairpin para gerar nucletidos P;


Variaes no aparamento das sequncias codificantes;
Variaes na adio de nucletidos N;
Flexibilidade na juno de sequncias codificantes a introduo de aleatoriedade no processo
de juno ajuda a gerar diversidade de anticorpos contribuindo para a hipervariabilidade do
local de ligao ao antignio.

A juno flexivel pode gerar hipervariebilidade por alterar o open reading frame. No entanto, podemos
ter duas consequncias:

Rearranjo no produtivo - os segmentos de genes podem ser ligados fora de fase, de modo que
o open reading frame no preservado e a unidade VJ ou VDJ resultante provavelmente pode
conter condes stop, de modo que interrompe a traduo;
Rearranjo produtivo os segmentos de genes podem ser ligados em fase, de modo que o open
reading frame preservado e a unidade VJ ou VDJ pode ser traduzida inteiramente, levando a
um anticorpo completo.

Se um alelo rearranja no produtivamente, uma clula B pode ser capaz de rearranjar o outro alelo
produtivamente. Se um gene de cadeia leve e um de cadeia pesada rearranjados em fase no forem
produzidosm a clula B morre por apoptose. Estima-se que apenas um 1/3 das combinaes VL-JL e 1/3
das combinaes VH-DH-JH so produtivas. Como resultado, menos de 1/9 (11%) das clulas pr-B na
medula ossea maturam e deixam-na como clulas B imunocompetentes.

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Excluso Allica
As clulas B, como todas as clulas somticas, so diplides e
contm os cromossomas maternos e os paternos. No entanto,
apesar de uma clula B ser diplide, ela expressa os genes
rearranjados de apenas um cromossoma. O processo pelo qual isto
ocorre, designado excluso allica, assegura que clulas B
funcionais nunca contm mais de uma unidade VHDHJH e VLJL:

essencial para a especificidade antignica da clula B,


porque a expresso de ambos os alelos levaria a
multiespecificidade das clulas B;
Este fenmeno sugere que assim que um rearranjo VH-DHJH produtivo e um rearranjo VL-JL produtivo ocorrem, a
maquinaria de recombinao desligada, de modo que os
genes de cadeia leve e pesada em cromossomas
homlogos no so expressos.

O modelo de excluso allica diz que assim que um rearranjo produtivo alcanado, a sua proteina
codificada expressa e a presena desta proteina actua como sinal para prevenir rearranjos de genes
futuros. De acordo com este modelo:
1. A presena de de cadeia pesada sinaliza na clula B de modo a que esta desligue o rearranjo
de outros alelos de cadeia pesada e inicie o rearranjo de genes de cadeia leve;
2. Se um rearranjo produtivo ocorrer, as cadeias leves so produzidas e emparelham com as
cadeias pesadas de modo a formar uma molcula de anticorpo completa. A presena deste
anticorpo desliga os rearranjos seguintes das cadeias leves;
3. Se um rearranjo no produtivo para ambos os alelos , rearranjos dos genes de cadeias
comeam. Se nenhum rearranjo dos alelos for produtivo, a clula B para a maturao e morre
por apoptose.

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Produo da Diversidade de Anticorpos


Sete modos de diversificao de anticorpos foram j identificados em ratinho e humanos:

Segmentos de multiplos genes da linha germinativa;


Juno combinatria V-(D)-J;
Flexibilidade juncional;
Adio de nucletidos regio P (adio P);
Adio de nucletidos regio N (adio N);
Hipermutao somtica;
Associao combinatria de cadeias leves e pesadas.

Apesar da contribuio exacta de cada uma destas vias de diversificao para a diversidade total do
anticorpo no ser conhecida, cada uma destas contribui significativamente para o imenso numero de
anticorpos distintos que o sistema imune mamifero capaz de gerar.
Segmentos de Multiplos Genes da Linha Germinativa
Um inventrio dos segmentos de genes V, D e J funcionais no DNA da linha germinativa de um humano
revela 51 VH, 25 D, 6 JH, 40 V, 5 J, 31 V e 4 J segmentos de genes. Em adio a estes segmentos
funcionais existem ainda vrios pseudogenes e devemos ter em emnte que estes valores foram obtidos
de apenas um individuo, podendo variar entre diferentes individuos. Em ratinho, apesar dos valores
serem conhecidos com menos preciso, parecem existir cerca de 135 VH, 13 D, 4 JH, 85 V, 4 J, 3 V e 3 J
segmentos de genes:

Apesar do numero de genes encontrados na linha germinativa de humanos e ratinhos ser menor
ao esperado pelo modelo da linha germinativa, os multiplos segmentos de genes V, D e J da
linha germinativa contribuem claramente para a diversidade de locais de ligao ao antig+enio
nos anticorpos.

Juno Combinatria V-(D)-J


A contribuio dos multiplos segmentos de genes da liha germinativa para a diversidade dos anticorpos
magnificada pelo rearranjo aleatrio desses segmentos nas clulas somticas. possivel calcular
quanta diversidade pode ser alcanada pelo rearranjo de genes:

A habilidade de qualquer um dos segmentos de genes VH combinar com qualquer um dos


segmentos DH e com qualquer um dos segmentos JH fornece uma quantidade consideravel de
diversidade de cadeias pesadas;
De modo semelhante, a combinao de qualquer um dos um dos segmentos de genes V L
combinar com qualquer um dos segmentos JH fornece uma quantidade considerve de cadeias
leves;
A combinao de cadeias leves com cadeias pesadas aumenta a diversidade um modo colossal.

No entanto, importante ter em conta que estes so calculos minimos de diversidade potencial. A
flexibilidade juncional, as adies de nucletidos P e N e, especialmente, a hipermutao somtica
contribuem bastante para a diversidade dos anticorpos, e que estes valores elevados no significam que
a um determinado momento da sua vida um individuo tenha este numero de variedades de anticorpos,
mas sim o reportrio total que podemos encontrar em vrios individuos.
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Multiplos segmentos da linha
germinativa
Em Humano
V
D
J
Juno combinatoria V-D-J e V-J
(numero possivel de combinaes)
Associaes combinatrias possiveis
das cadeias leves e pesadas
Em Ratinho
V
D
J
Juno combinatoria V-D-J e V-J
(numero possivel de combinaes)
Associaes combinatrias possiveis
das cadeias leves e pesadas

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Cadeia pesada

Cadeias leves

51
27
6

40
0
5

30
0
4

51 x 27 x 6 = 8262

40 x 5 = 200

30 x 4 = 120

8262 x (200 + 120) = 2,64 x 10

134
13
4

85
0
4

2
0
3

134 x 13 x 4 = 6968

85 x 4 = 340

2x3=6

6968 x (340 + 6) = 2,41 x 10

Flexibilidade Juncional
A enorme diversidade gerada por meio das combinaes dos segmentos V, D e J de seguida
aumentada por um fenmeno designado flexibilidade juncional:

A recombinao envolve a ligao RSSs para formar um encaixe sinal e a ligao de sequncias
codificantes para formar o encaixe codificante;
Apesar das RSSs serem sempre ligadas de modo preciso, a ligao das sequncias codificantes
normalmente imprecisa.

A flexibilidade juncional leva a vrios rearranjos no produtivos mas tambm gera combinaes
produtivas que codificam aminocidos alterantivos em cada juno codificante, aumentanto a
diversidade de anticorpos:

A variao na sequncia de aminocidos gerada pela flexibilidade juncional nas junes


codificantes caem na terceira regio hipervarivel (CDR3) no DNA da cadeia leve a da cadeia
pesada;
Visto que a CDR3 tem a maior contribuio para a ligao ao antignio pela molcula de
anticorpo, as alteraes de aminocidos gerados pela flexibilidade juncional so importantes na
gerao da diversidade dos anticorpos.

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Adio P
Aps a primeira clivagem de uma unica cadeia de DNA na juno de um segmento de genes de regio
varivel e a RSS ligada, os nucletidos na terminao da sequncia codificante formam uma estrutura
em hairpin. Este hairpin depois clivado por uma endonuclease:

A segunda clivagem por vezes ocorre a uma posio que deixa uma pequena cadeia simples na
terminao da seuqncia codificante;
A adio subsequente de nucletidos complementares a esta cadeia (adio P) por enzimas de
reparao gera uma sequncia palindrmica na juno codificante e, assim, esses nucletidos
so designados nucletidos P;
Variaes na posio na qual o hairpin cortado leva, assim, a variaes na sequncia da juno
codificante.

Adio N
As junes codificantes da regio varivel em genes rearranjados de cadeias pesadas contm pequenas
sequncias de aminocidos que no so codificadas pelos segmentos de genes V, D ou J na linha
germinativa. Esses aminocidos so codificados por nucletidos adicionados durante o processo de
juno de D a J e de V a DJ por uma reaco catalizada pela TdT, processo esse designado adio N:

Cerca de 15 nucletidos podem ser adicionados s junes DH-JH e VH-DH-JH;


A diversidade adicional gerada pela adio de nucletidos N bastante elevada porque as
regies N parecem consistir em sequncias completamente aleatrias;
Como esta diversidade ocorre nas junes V-D-J codificantes, est localizada no CDR3 dos genes
de cadeia pesada.

Hipermutao Somtica
Toda a diversidade de anticorpos descrita at agora tem origem em mecanismos que operam durante a
formao de regies variveis especificas por rearranjo de genes. Diversidade de anticorpos adicional
gerana em unidade de genes de regies variveis rearranjados por um processo designado
hipermutao somtica. Como resultado, nucletidos individuais nas unidades VJ ou VDJ so
substituidos por outros alternativos, potencialmente alterando a especificidade das imunoglobulinas
codificadas:

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A hipermutao somtica rearranja regies V localizadas numa sequncia de DNA contendo


cerca de 1500 nucletidos, o que inclui o total dos segmentos VJ ou VDJ;
A hipermutao somtica a uma frequncia de 10-3 pares de base por gerao. Esta taxa
bastante superior taxa de mutao espontnea (10-8) de outros genes;
Visto que o comprimento combinado dos genes da regio varivel das cadeias pesada e leve
cerca de 6000 bp, a hipermutao somtica introduzir pelo menos uma mutao a cada duas
divises celulares no par de genes VH e VL que codificam um anticorpo.

O mecanismo de hipermutao somtica ainda no foi determinado, mas envolve a enzima AID
(activation induced cytidine deaminase). A maior parte das mutaes so substituies em vez de
deleces ou inseres. A hipermutao somtica introduz essas substituies de um modo quase
completamente aleatrio:

Certos motivos de nucletidos e sequncias palindrmicas dentro dos VH e VL podem ser


especialmente susceptiveis a hipermutao somtica;
Hipermutaes somticas ocorrem por todo o segmento VJ ou VDJ, mas em clulas B maduras
esto agrupadas nos CDRs das sequncias VH e VL, onde influenciam a afinidade geral para o
antignio e entraro na seleco de clulas B com maior afinidade para um determinado
antignio durante a maturao.

A hipermutao somtica aumenta progressivamente ao longo da primeira, segunda e terceira


imunizaes aumentando a afinidade do anticorpo para um antignio. Isto permite que clulas B
especificas para um antignio sejam seleccionadas e que a diversidade de anticorpos seja produzida
mesmo depois dos genes serem rearranjados e de uma clula B se tornar especifica para um antignio.
Isto , permite que clulas B alterem de especificidade ou aumentem a sua especificidade para um
antignio.
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Associao Combinatria de Cadeias Leves e Pesadas


Em humanos, existe a potencialidade de gerar 8262 genes de cadeia pesada e 320 genes de cadeia leve
como resultado dos rearranjos de genes das regies variveis. Assumindo que qualquer um dos genes
de cadeia leve ou pesada possiveis podem ocorrer aleatoriamente na mesma clula, o numero
potencial de combinaes das cadeias leves com as cadeias pesadas possiveis 2.644.240:

Este numero provavelmente superior quantidade de diversidade combinatoria actualmente


gerada num individuo, porque no ser provvel que todas as VH e VL se emparelhem umas com
as outras;
Para alem disso, o processo de recombinao no completamente aleatrio. Nem todos os
segmentos VH, D e VL so usados com a mesma frequncia. Alguns so usados mais
frequentemente, outros apenas ocasionalmente, e ainda outros quase nunca.

Apesar do numero de diferentes locais de anticorpos diferentes que o sistema imune capaz de gerar
ser dificil de calcular com preciso, sabe-se que este elevado. Devido ao grande numero de novas
sequncias criadas por flexibilidade juncional, adio P e adio N serem no terceiro CDR, elas esto
posicionadas para influenciar a estrutura do local de ligao do anticorpo. Em adio a estas fontes de
diversidade de anticorpos, o fenomeno de hipermutao somtica contribui de enormemente para o
reportrio de anticorpos depois da estimulao pelo antignio.
No entanto, estes processos ocorrem mais commumente para ratinhos e humanos, sendo que outros
animais, como as aves, usam outros mecanismos e mais frquentemente a mutao somtica.

Class Switching entre Genes da Regio Constante


Depois da estimulao antignica de uma clula B, o DNA de cadeia pesada pode sofrer mais rearranjos
nos quais a unidade VHDHJH pode combinar com qualquer outro segmento de gene CH. O mecanismo
exacto deste processo, designado classe switching ou isotype switching, ainda no claro, mas involve
sequncias de DNA designadas regies de switch localizadas 2-3 kb a montante de cada segmento CH
(excepto C):

Estas regies de switch so relativamente grandes (2-10 kb) e compostas por multiplas cpias de
pequenas repeties (GAGCT e TGGGG);
Uma proteina ou sistema de proteinas que constitui a recombinase de switch (enzima AID)
reconhece estas repeties e liga-se a elas levando a uma recombinao do DNA que resulta no
switch de classe.

Proteinas intracelulares regulatrias conhecidas como citocinas actuam como factores de switch e
tm um papel importante na determinao da classe particular de imunoglobulias que expressa como
sequncia do switching:

Interleucina 4 (IL-4), por exemplo, induz o class switching de C para C1 ou C;


Em alguns casos, a IL-4 induz switching de um modo sucessivo, sendo primeiro de C para C1 e
depois de C1 para C.

A examinao dos produtos de exciso de DNA produzidos durante o switching de C para C1


mostraram que era gerada um produto de exciso circular contendo C em conjunto com a terminao
5 da regio de switch 1 (S1) e a terminao 3 da regio de switch (S). Em adio, o switch de C1
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para C produziu produtos de exciso circular contendo o C1 em conjunto com pores das regies de
switch , e .

Assim, o class switching depende da actuao de trs elementos:

Regies de switch;
Recombinase de switch (enzima AID);
Citocinas sinais que dictam o isotipo para o qual a clula B troca.

Expresso de Genes Ig
Como na expresso de outros genes, o processamento ps-transcripcional de transcritos primrios de
imunoglobulinas necessrio para produzir mRNAs funcionais:

Os transcritos primrios produzidos a partir de genes de cadeia pesada e leve rearranjados


contm sequncias de DNA intervenientes que incluem intres no codificantes e segmentos de
gene J no perdidos durante o rearranjo V-(D)-J;
Os segmentos de gene C das cadeias pesadas esto organizados como uma srie de exes
codificantes e intres no codificantes. Cada exo de segmento de gene CH corresponde a um
dominio da regio constante ou a uma regio dobradia da cadeia pesada.

Assim, o trascrito primrio deve ser processado para remover as sequncias de DNA intervenientes e os
exes que permanecem deve ser ligados por RNA splicing. O processamento do transcrito primrio no
nucelo remove cada uma destas sequncias interveniente para gerar o produto mRNA final. O mRNA
depois exportado do nucleo para ser traduzido por ribossomas nas cadeias H ou L completas.

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O processamento de um transcrito primrio de cadeia pesada pode dar origem a diferentes mRNAs, o
que explica como uma nica clula B capaz de produzir formas secretada ou membranares de uma
imunoglobulina particular e simultaneamente expressar IgM e IgD.
Expresso de Imunoglobulinas Secretadas e Membranares
Uma imunoglobulina particular pode existir tanto na forma membranar ou secretada. As duas formas
diferem na sequncia de aminocidos dos dominios C-terminal da cadeia pesada (CH3/CH3 na IgA, IgD e
IgG e CH4/CH4 na IgE e IgM):

A forma secretada apresenta uma sequncia hidrofilica com cerca de 20 aminocidos no dminio
C-terminal;
Na forma membranar esta regio substituida por uma sequncia com cerca de 40
aminocidos contendo um segmento hidrofilico que se extende para fora da clula, um
segmento hidrofbico transmembranar e um pequeno segmento hidrofilico no C-terminal que
se extende para o citoplasma.

Por algum tempo, a existncia destas duas formas parecia inconsistente co a estrutura do DNA da linha
germinativa para a cadeia pesada, que contem um nico segmento de gene CH correspondente a cada
classe e subclasse. A sequenciao do segmento de gene C mostrou que:

Este consiste em quatro exes (C1, C2, C3 e C4) cada um correspondente a quatro dominios
na molcula IgM. O exo C4 contem uma sequncia de nucletidos (designada S) em 3 que
codifica a sequncia hidrofilica do dominio CH4 da IgM secretada;
Dois exes adicionais designados M1 e M2 localizam-se 1,8 kb a jusante do 3 do exo C4,
sendo que M1 codifica o segmento transmembranar e M2 codifica o segmento citoplasmtico
do dominio CH4 na IgM membranar.

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Outros estudos de sequenciao revelaram que todos os segmentos de genes C H apresentam dois exes
M1 e M2 adicionais a jusante que codificam os segmentos transmembranar e citoplasmtico.
O transcrito primrio produzido por transcrio de um gene rearranjado contem duas sequncias
sinalizadoras de poliadenilao, ou locais poli-A, no segmento C:

O local 1 localiza-se na extremidade 3 do exo C4, e o local 2 localiza-se na extremidade 3 do


exo M2;
Se a clivagem do transcrito primrio e adio da cauda poli-A ocorre no local 1, os exes M1 e
M2 so perdidos. A exciso de intres e o splicing dos exes que ficam produz assim mRNA que
codifica a forma secretada da cadeia pesada;
Se a clivagem e poliadenilao do transcrito primrio ocorre, por outro lado, no local 2 um
diferente padro de splicing resulta. O splicing remove a sequncia S na extremidade 3 do exo
C4, que codifica a extremidade C-terminal hidrofilica da forma secretada e liga o exo C4 com
os exes M1 e M2, produzindo mRNA para a forma membranar da cadeia pesada.

Assim o processamento diferencial de um transcrito primrio determina se ser produzida a forma


membranar ou secretada de uma imunoglobulina.
Expresso Simultnea de IgM e IgD
O processamento de RNA diferencial tambm tem subjacente a expresso de IgM e IgD membranares
pelas clulas B maduras pois a transcrio de genes de cadeia pesada rearranjados pelas clulas B
produz transcritos primrios que contm ambos os segmentos de genes C e C:

Os segmentos de genes C e C esto juntos no gene rearranjado (apenas a uma distncia de


cerca de 5 kb) e a ausncia de um local de switch entre eles permite que a regio VDJCC inteira
seja transcripta numa nico transcrito primrio com cerca de 15 kb, que contem quatro locais
poli-A;
Os locais 1 e 2 esto associados com C como j descrito e os locais 3 e 4 esto localizados em
locais semelhantes no segmento de gene C;

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Se o transcrito de cadeia pesada clivada e poliadenilada no local 2 depois dos exes C, o


mRNA codificar a forma membranar da cadeia pesada ;
Se a poliadenilao ocorrer a jusante do local 4 depois dos exes C, o mRNA codificar a forma
membranar da cadeia pesada .

J que as clulas B maduras expressam as IgM e IgD na sua membrana, ambas as vias de processamento
devem ocorrer simultaneamente.

Organizao e Rearranjo dos Genes TCR


Os genes que codificam os receptores e das clulas T so expressos apenas na linhagem das
clulas T. Os quatro loci TCR (, , e ) esto organizados na linha germinativa de um modo bastante
semelhante organizao de multigenes das imunoglobulinas (Ig):

Como no caso dos genes Ig, os genes TCR funcionais so produzidos por rearranjos de
segmentos V e J nas familias das cadeias e e segmentos V, D e J das familias de cadeias e ;
No ratinho, os segmentos de genes das cadeias , e esto localizados nos cromossomas 14, 6
e 13, respectivamente;
Os segmentos de genes localizam-se no cromossoma 14 entre os segmentos V e J. Esta
localizao significante, porque um rearranjo produtivo dos segmentos de genes da cadeia
elimina C, de modo que, uma determinada clula T, o receptor no pode ser co-expresso
com o receptor .

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A organizao da familia de multigenes de TCR em humanos geralmente semehlante do ratinho,


apesar do numero de segmentos diferir:
Gene

Localizao cromossmica

Em Humano
Cadeia
Cadeia
Cadeia
Cadeia
Em Ratinho
Cadeia
Cadeia
Cadeia
Cadeia

Numero de segmentos de genes


V
D
J
C

14
14
7
7

50
3
57
14

14
14
6
13

100
10
20-30
7

3
2

70
3
13
5

1
1
2
2

2
2

50
2
12
3

1
1
2
3

A cadeia , como a cadeia L das imunoglobulinas, codificada por segementos de genes V, J e C e a


cadeia , como a cadeia H das imunoglobulinas, codificada por segmentos de genes V, D, J e C. O
rearranjo dos segmentos de genes das cadeias e do TCR resulta em juno VJ da cadeia e juno
VDJ da cadeia :

Depois da transcrio de genes TCR rearranjados, processamento de RNA e traduo, as cadeias


e so expressas com um heterodimero ligado por pontes dissulfito na membrana da clula
T;
Ao contrrio das imunoglobulinas, que podem ser membranares ou secretadas, o hetrodimero
expresso apenas na forma membranar. Assim, no necessrio nenhum processamento
diferencial de RNA para produzir formas membranar e secretada.

Cada regio constante do TCR inclui:

Uma sequncia de conexo;


Uma sequencia transmembranar;
Uma sequncia citoplasmtica.

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O DNA da linha germinativa que codifica as cadeias e do TCR muito mais simples que o DNA da
linha germinativa que codifica a cadeia pesada das imunoglobulinas, que contem multiplos segemtnos
de gene C que codificam distintos isotipos com diferentes funes efectoras:

O DNA da cadeia tem apenas um segmento de gene C;


O DNA da cadeia tem dois segmentos de gene C, mas os seus produtos proteicos diferem
apenas em alguns aminoicdos e no apresentam diferenas funcionais conhecidas.

Mecanismo de Rearranjo do DNA do TCR


Os mecanismos pelos quais o DNA da linha germinativa para o TCR rearranjado para formar genes do
receptor funcionais parecem ser semelhantes aos mecanismos de rearranjo dos genes Ig:

RSSs conservados, contendo tanto sequncias de espao 12-pb (one-turn) ou 23-pb (two-turn)
foram identificadas na vizinhana de cada segmento de genes V, D e J no DNA da linha
germinativa para o TCR;
Todos os rearranjos de genes TCR seguem a lei one-turn/two.turn observada para os genes Ig,
portnato a recombinao ocorre apenas entre dois tipos diferentes de RSSs.

Como as clulas pr-B, as clulas pr-T expressam genes activantes da recombinao (RAG-1 e RAG-2).
A enzima recombinase RAG-1/2 reconhece os sinais de reconhecimento das RSSs e catalizam a juno
V-J e V-D-J durante o rearranjo de genes do TCR pelos mesmo mecanismos deleccional ou inversional
que ocorrem para os genes Ig:

RAG-1/2 introduz um corte numa cadeia de DNA entre as sequncias codificante e sinal;
A recombinase depois cataliza a reaco de transfeco que resulta na formao de um hairpin
na sequncia codificante;
Produtos de exciso circular so gerados por deleco durante o rearranjo dos genes de TCR.

Apesar das clulas B e T usarem mecanismos bastante semelhantes para o rearranjo de genes das
regies variveis, os genes Ig no so normalmente rearranjados nas clulas T e os genes TCR no so
rearranjados nas clulas B. Provavelmente, o sistema de enzimas recombinase regulado em cada
linhagem celular, de modo que apenas rearranjos de DNA do receptor correcto que ocorrem.
Rearranjo de segmentos de genes nas clulas B e T cria uma sequncia de DNA unica para essa clula e
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a sua progenia. O grande numero de configuraes possiveis para os genes rearranjados faz com que
esta sequncia nova funcione como marcador que especifico para o clone da clula.
Excluso Allica dos Genes TCR
Os genes esto localizados no complexo de genes e so eliminados por rearranjos da cadeia . Este
evento fornece um modo irrevogvel de excluso dos genes localizados no mesmo cromossoma
enquanto os genes rearranjam. A excluso allica de genes para as cadeias e ocorre tambm, mas
existem excepes:

A organizao dos segmentos de genes para cadeia em dois grupos significa que, se rearranjos
no produtivos ocorrerm, o timcito pode sofrer um segundo rearranjo. Isto aumenta a
probabilidade de um rearranjo produtivo para a cadeia . Assim que um rearranjo produtivo
ocorrer para um alelo de cadeia , o rearranjo do outro alelo inibido.

Excepes excluso allica so mais observadas para os genes de cadeias do TCR:

Anlise a clones de clulas T que expressam TCRs funcionais revelaram um numero de clones
com rearranjos produtivos de dois alelos da cadeia ;
Quando um linfoma de clulas T imaturo que expressa um TCR particular subclonado,
vrios subclones obtidos expressam o mesmo alelo de cadeia mas um alelo de cadeia
diferente do expresso pela clula parental original;
Estudos com ratinhos trangnicos indicam que a excluso allica menos rigorosa para os genes
de cadeia do que para cadeia .

Visto que a excluso allica no completa para a cadeia do TCR, existem ocasies raras quando mais
de uma cadeia expressa na membrana de uma determinada clula T, mas apenas uma levar a um
receptor restrito a MHC prprio e, assim, funcional.
Estrutura Geral dos Genes TCR Rearranjados
A estrutura geral dos genes TCR rearranjados a seguinte:

As regies variveis dos TCRs so codificadas por sequncias VDJ e VJ rearranjadas. Nos genes
TCR, a juno combinatroia de segmentos de genes V parece gerar a CDR1 e a CDR2, enquanto
a flexibilidade juncional e a adio de nucletidos N gera a CDR3;

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Os genes TCR rearranjados tambm contm um pequeno exo sinal (L) a montante das
sequncias VJ ou VDJ. Os aminocidos codificados por este exo so clivados quando a cadeia
polipeptidica nascente entra no reticulo endoplasmtico;
A regio constante de cada cadeia TCR codificada por um segmento de gene C que apresenta
multiplos exes correspondendo aos dominios estruturais na proteina. O primeiro exo do
segmento de gene C codifica a maior parte do dominio C da cadeia correspondente e a seguir
encontra-se um pequeno exo que codifica a sequncia de conexo, seguida de exes que
codificam a regio transmembranar e a cauda citoplasmtica.

Diversidade de TCRs
Apesar do DNA da linha germinativa para o TCR conter menos segmentos de genes V que o DNA da
linha germinativa para as Ig, vrios mecanismos que operam durante o rearranjo de genes de TCR
contribuem para um alto grau de diversidade entre os TCRs:

Juno combinatria de segmentos de genes de regio varivel;


Juno alternativa de segmentos de genes de cadeia ;
Flexibilidade juncional;
Adio P e adio N.

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O mecanismo pelo qual a diversidade para o TCR gerada deve permitir que o receptor reconhea um
grande numero de antignios processados diferentes enquanto restringe o seu reportrio de
reconhecimento de MHC a um numero muito pequeno de molculas de MHC do prprio:

O DNA do TCR tem muito menos segmentos de gene V do que o DNA das Ig. Assim, foi
postulado que o pequeno numero de segmentos de genes no DNA do TCR foi seleccionado para
codificar um numero limitado de regies CDR1 e CDR2 com afinidade para regies das hlices
de molculas MHC;
Apesar desta ser uma ideia atractiva, o complexo TCR-pptido-MHC faz contacto atravs das
CDR1 e CDR3. Portanto, os residuos do TCR que ligam o pptido versus os que ligam o MHC no
so confinados apenas regio CDR3.

Em contraste com a limitada diversidade dos CDR1 e CDR2, a CDR3 do TCR tem ainda maior diversidade
do que aquela observada nas imunoglobulinas. A diversidade na CDR3 gerada por diversidade
juncional na ligao dos segmentos V, D e J, na ligao de multiplos segmentos de genes D e na
introduo de nucletidos P e N nas junes V-D-J e V-J.
Ao contrrio dos genes Ig, os genes TCR no aparecem sofrer mutao somtica extensiva. Isto , os
genes TCR funcionais gerados por rearranjos durante a maturao das clulas T no timo tm as mesmas
sequncias que aquelas encontradas na populao de clulas T maduras perifrica. A ausncia de
mutao somtica nas clulas T assegura que a especificidade das clulas T no altera depois da
seleco timica e, assim, reduz, a possibilidade de mutao aleatria que poderia gerar
autoreactividade. No entanto, por vezes pode ser observada mutao somtica.
A juno combinatorial de segmentos de genes da regio varivel gera um grande numero de
combinaes de segmentos de genes aleatrios para todas as cadeias TCR, como ocorre para os genes
de cadeia pesada e leve das Ig:

Apesar de existirem menos segmentos de genes V e V do que os segmentos de genes VH e VL


das imunoglobulinas, esta diferena compensada pelo grande numero de segmentos J no DNA
da linha germinativa para o TCR;
Assumindo que a especificidade de ligao ao antignio de um determinado TCR depende da
regio varivel de ambas as cadeias, associao aleatria dos segmentos V e V leva a cerca de
106 combinaes possiveis para o receptor .

A localizao das RSSs one-turn (12 pb) e two-turn (23 pb) no DNA das cadeias e do TCR difere da
localizao no DNA das Ig. Devido a este arranjo, pode ocorrer juno alternativade segmentos de gene
D enquanto a regra one-turn/two-turn observada. Assim, possivel que um segmento V se combine
directamente com um segmento J ou D, gerando uma unidade (VJ) ou (VDJ).
A juno alternativa de segmentos de genes de cadeia gera unidades semelhantes e, em adio, um
D pode combinar-se com outro originando (VDDJ) e, em humanos, (VDDDJ). Este mecanismo, que
no pode operar um DNA de cadeia pesada de Ig, gera diversidade adicional considervel nos genes
TCR.
A juno de segmentos de genes durante o rearranjo de genes TCR exibe flexibilidade juncional. Tal
como nos genes Ig, a flexibilidade capaz de gerar vrios rearranjos no produtivos, mas tambm
aumenta a diversidade codificando vrios aminocidos alternativos em cada juno.

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Para alm disso, tanto nos genes Ig e TCR, nucletidos podem ser adicionados nas junes entre alguns
segmentos de genes durante os rearranjos:

Variaes na clivagem por endonucleases leva adio de mais nucletidos que so


palindrmicos. Esta adio P pode ocorrer nos genes que codificam as cadeias TCR e Ig:
A adio N, catalizada pela TdT, gera diversidade juncional adicional. Enquanto nos genes Ig
ocorre apenas nos genes de cadeia pesada, esta adio ocorre em genes codificantes de todas
as cadeias TCR, sendo adicionados cerca de 6 nucletidos de um modo aleatrio.

No entanto, algumas destas combinaes levam a rearranjos no produtivos por insero de codes
stop que terminam prematuramente a cadeia TCR, ou por substituio de aminocidos que tornam o
produto no funcional. Apesar de cada regio juncional no gene TCR codificar apenas 10-20
aminocidos, uma grande diversidade pode ser gerada nestas regies (estima-se que os efeitos
combinados da adio N e da adio P podem gerar cerca de 1013 sequncias de aminocidos possiveis).

VISO GERAL DO DESENVOLVIMENTO DOS LINFCITOS

Viso Geral do Desenvolvimento dos Linfcitos


A maturao dos linfcitos T e B envolve uma srie de eventos que ocorrem nos rgos linfticos
generativos (centrais):

A entrada (commitment) das clulas progenitoras na linhagem das clulas B e T;


Um processo temporalmente ordenado de rearranjo de genes de receptores de antignios e
expresso de proteinas receptoras de antignios;
Eventos de seleco que preservam as clulas que produziram proteinas receptoras de
antignios correctas e eliminam clulas potencialmente perigosas que reconhecem fortemente
antignios do prprio. Estes checkpoints asseguram que apenas linfcitos que expressam
receptores funcionais com especificidades uteis se maturam e entram no sistema imune
perifrico;

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Proliferao
de clulas progenitoras e imaturas mantidas num estdio precoce de
desenvolvimento, fornecendo uma grande pool de clulas que podem gerar linfcitos uteis;
Diferenciao de clulas B e T em subpopulaes funcionalmente e fenotipicamente
distinctas. As clulas B desenvolvem-se em clulas B foliculares, da zona marginal e B-1, e as
clulas T desenvolvem-se em linfcitos T CD4+ helper e CD8+ citotxicos e em clulas T . Esta
diferenciao em classes distinctas fornece uma especializao que caracteristica do sistema
imune adaptativo.

Aps a gerao de um diverso reportrio linfide nos rgos linfticos centrais, linfcitos naive
adquirem a habilidade de re-circular e subsequentemente moverem-se de um orgo linftico
secundrio para outro na procura de um antignio.

Entrada das Clulas Progenitoras na Linhagem das Clulas B e T


Clulas estaminais pluripotentes na medula ssea (e fgado fetal), geralmente referidas como clulas
estaminais hematopoiticas (HSCs), do origem a todas as linhagens de clulas sanguineas, incluindo
clulas da linhagem linfide. As HSCs maturam-se em progenitores linfides comuns (CLPs) que so
capazes de dar origem a:

Clulas B;
Clulas T;
Clulas naturalmente assassinas;
Algumas clulas dendriticas.

A maturao das clulas B a partir de progenitores que


entram na sua linhagem ocorre maioritariamente na medula
ssea e, antes do nascimento, no fgado fetal:

As clulas estaminais que derivam do figado fetal do


origem principalmente a um tipo de celula B
designadas clulas B B-1;
As clulas estaminais derivadas da medula ssea do
origem maior parte das clulas B circulantes (clulas
B foliculares).

Precursores dos linfcitos T deixam o figado fetal antes do nascimento e a medula ssea mais tarde na
vida, e circulam para o timo, onde completam a sua maturao:

A maior parte das clulas T tm origem nas HSCs do figado fetal;


A maior parte das clulas T, que so clulas T , tm origem nas HSCs da medula ssea.

Em geral, menos diversidade de clulas B e T gerada nos estdios iniciais da vida fetal. E apesar das
suas diferentes localizaes anatmicas, os primeiros eventos de maturao das clulas T e B so
fundamentalmente semelhantes. A entrada na linhagem das clulas B ou das clulas T depende de
instrues recebidas na superficie da clula, seguidas de induo de reguladores transcripcionais
especificos que levam a que uma CLP assuma especificamente um destino B ou T.
O desenvolvimento inicial das clulas B e T caracterizado pela proliferao dos progenitores,
estimulada pricipalmente pela citocina interleucina-7 (IL-7), resultando em aumentos marcados no
numero de clulas:
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A proliferao assegura que uma pool suficientemente grande de clulas progenitoras ser
gerada para eventualmente fornecer um reportrio altamente diverso de linfcitos especificos
para antignios;
A IL-7 produzida pelas clulas estaminais na medula ssea e no timo e essencial para a
maturao das clulas T e B nos estdios iniciais de vida pois ratinhos com mutaes no gene da
IL-7 ou do receptor desta demonstram deficincias profundas em clulas T e B maduras e baixa
maturao de precursores de linfcitos nos estdios inicias de desenvolvimento, no entanto, as
clulas B humanas no requerem IL-7 para proliferar.

A actividade proliferativa no inicio do desenvolvimento dos linfcitos, levada a cabo principalmente pela
IL-7, cessa antes do rearranjo de genes dos receptores estar completo. Sendo assim, a sobrevivncia e a
proliferao subsequentes dos linfcitos maduros dependem de sinais dos receptores das clulas pre-B
e pre-T. De facto, a maior expanso das linhagens das clulas B e T ocorre como uma consequncia da
sinalizao do pr-receptor de antignios. Este um checkpoint importante no desenvolvimento, pois
apenas as clulas que expressam receptores funcionais podem seguir para a seguinte etapa.

Rearranjo e Expresso de Genes de Receptores de Antignios


Os produtos dos genes de receptores de antignios fornecem tambm sinais que asseguram a
sobrevivncia selectiva de linfcitos com especificidades uteis. Cada clone do linfcitos T ou B produz
um receptor de antignio com uma estrutura de ligao ao antignio unica e num individuo existem 107
ou mais clones de clulas T e B diferentes, cada com um unico receptor.
A habilidade de cada individuo gerar estes reportrios de linfcitos diversos evoluiu de um modo que
no requer um numero igualmente grande de genes de receptores de antignios distintos. Caso
contrrio, uma grande proporo do genome mamifero (1/3) seria usado para codificar as molculas de
Ig e TCR. Assim:
1. Genes de receptores de antignios funcionais so produzidos nas clulas B imaturas na medula
ossea e nas clulas T imaturas no timo por um processo de rearranjo de genes, que designado
para gerar um grande numero de exes codificantes de regies variveis usando uma fraco
relativamente pequena do genoma.
Os eventos de rearranjo de DNA que levam produo de receptores de antignios no dependem da,
ou no so influenciados pela, presena de antignios. Ou seja, os receptores de antignios so
expressos antes dos encontros com antignios.

Eventos de Seleco
Pr-receptores de antignios e receptores de antignios fornecem sinais aos linfcitos em
desenvolvimento que so necessrios para a sobrevivncia dessas clulas e sua proliferao e
maturao continuada. O processo geral de maturao dos linfcitos pode ser resumido do seguinte
modo:
1. O rearranjo de genes para Ig e TCR envolve a adio e remoo aleatria de bases entre
segmentos de genes combinados entre si de modo a maximizar a diversidade;
2. Apenas um em trs das clulas B e T em desenvolvimento que rearranja um gene de receptor de
antignio faz um rearranjo produtivo e, assim, capaz de gerar uma proteina funcional. Nas
clulas B em desenvolvimento, o primeiro gene de receptor de antignio a ser completamente
rearranjado a cadeia pesada das Ig. Nas clulas T , a cadeia do TCR rearranjada primeiro;
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3. Clulas que rearranjam com sucesso os seus genes de cadeia pesada das Ig expressam a
proteina de cadeia pesada e montam um pr-receptor de antignio conhecido como o receptor
da clula pr-B. De modo anlogo, o mesmo ocorre para a cadeia do TCR, formando-se um
pr-TCR;
4. Depois deste checkpoint, os linfcitos desenvolvem-se nos orgos linfticos centrais e
expressam o receptor de antignio completo enquanto ainda esto imaturos, sofrendo depois
eventos de seleco.

Na ausncia de expresso do pr-receptor de antignio, as clulas que fazem rearranjos no


produtivos dos loci Ig pesada ou TCR sofrem morte celular programada. Parece que a montagem dos
complexo pr-BCR e pr-TCR, na ausncia de qualquer ligando conhecido, fornece sinais para a
sobrevivncia, proloferao, excluso allica e desenvolvimento segunite das linhagens de clulas B e T.
Quando os linfcitos se desenvolvem nos orgos linfides centrais e expressam o receptor de antignios
completo, ainda num estado imaturo, as clulas potencialmente perigosas que reconhecem avidamente
estruturas do prprio sero eliminadas ou induzidas a alterar os seus receptores de antignios e as
clulas que expressam receptores de antignios uteis sero preservados. Isto d-se por eventos de
seleco:

Seleco positiva processo envolvido na preservao de especificidades uteis. Na linhagem T,


a seleco positiva assegura a maturao de clulas T cujos receptores se ligam com baixa
avidez (fracamente) a molculas MHC. As clulas T madura cujos precursores foram
positivamente seleccionados por molculas MHC do prprio no timo so capazes de reconhecer
pptidos antignicos estranhos apresentados pelas mesmas molculas MHC do prprio nas
clulas apresentadoras nos tecidos perifricos. A seleco positiva fornece sinais de

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sobrevivncia aos linfcitos T e B que arranjaram


apropriadamente os seus receptores de
antignios;

Seleco negativa processo que elimina ou


altera os linfcitos em desenvolvimento cujos
receptores de antignios se ligam fortemente a
antignios do prprio presentes nos rgos
linfticos generativos. A seleco negativa dos
linfcitos em desenvolvimento um mecanismo
importante para a manuteno da tolerncia a
vrios antignios do prprio, o que designado de
tolerncia central.

Tanto as clulas B ou T em desenvolvimento so


susceptiveis a sofrer seleco negativa durante um curto
periodo de tempo aps os receptores de antignios serem
pela primeira vez expressos:

As clulas T em desenvolvimento com alta


afinidade para antignios do prprio so
eliminadas por apoptose, um processo conhecido
como deleco clonal;
Clulas B imaturas fortemente auto-reactivas sero induzidas a sofrer mais rearranjos de genes
Ig e, assim, evitar a auto-reactividade, um processo designado de editing do receptor.

Gerao de Subgrupos de Linfcitos


O processo de seleco positiva fornece sinais que asseguram que os subgrupos de linfcitos T CD4+ e
CD8+ so adequados para a classe de molculas MHC apropriada que elas iro reconhecer:

Precursores que expressam tanto CD4 e CD8 diferenciam-se tanto em clulas T CD4+ restritas a
MHC classe II ou CD8+ restritas a MHC classe I;
As clulas CD4+ que deixam o timo podem ser activadas por antignios para se diferenciarem
em clulas TH cujas funes efectoras so mediadas por proteinas membranares especificas e
pela produo de citocinas;
as clulas CD8+ podem diferenciar-se em linfcitos TC cuja prinipal funo efectora matar
clulas alvo infectadas.

Um processo semelhante durante a seleco positiva das clulas B dirige o desenvolvimento destas
clulas em dois subgrupos de linfcitos B perifricos distintos. Clulas B em desenvolvimento derivadas
da medula ssea diferenciam-se:

Clulas B foliculares que recirculam e medeiam respostas imunes dependentes de clulas T nos
rgos linfticos secundrios;
Clulas B da zona marginal que residem na vezinhana dos seios marginais no bao e medeiam
respostas amplamente independentes de clulas T a antignios sanguineos.

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MATURAO, DIFERENCIAO E ACTIVAO DAS CLULAS B

Maturao dos Linfcitos B


Os principais eventos durante a maturao dos linfcitos B so:

Rearranjo e expresso de genes Ig numa ordem precisa;


Seleco e proliferao das clulas B em
desenvolvimento no checkpoint do pr-receptor de
antignios;
Seleco do reportrio de clulas B maduras.

Os linfcitos B, antes do nascimento, desenvolvem-se a partir


de precursores no figado fetal, saco vitelino e bao e, depois do
nascimento, so gerados maioritariamente na medula ssea. A
maioria dos linfcitos B tm origem em progenitores na medula
ssea adultos que so inicialmente Ig negativos, se
desenvolvem em clulas B imaturas que expressam molculas
IgM membranares e, depois, deixam a medula ssea para
maturarem no bao, onde as clulas B da linhagem folicular
expressam IgM e IgD na sua superficie. no bao que as clulas
imaturas adquirem a habilidade de recircularem e povoar todos
os rgos linfticos perifricos. As clulas B foliculares
recirculantes residem nos foliculos linfticos e tm a habilidade
de reconhecer antignios estranhos e de responder a estes
sendo que o desenvolvimento de uma clula B madura a partir
de um progenitor linfide dura cerca de 2 a 3 dias.
Clulas Progenitoras na Medula ssea
O desenvolvimento das clulas B inicia-se enquanto as clulas estaminais se diferenciam nas primeiras
clulas da linhagem das clulas B, as clulas B progenitoras (clula pr-B) que expressam uma tirosina
fosfatase transmembranar designada CD45R. As clulas pr-B proliferam na medula ssea,
preenchendo os espaos extravasculares entre grandes sinusoides no eixo do osso. A proliferao e
diferenciao das clulas pr-B em clulas B precursoras (clulas pr-B) requer o micro-ambiente
fornecido pelas clulas do estroma da medula ssea.
As clulas do estroma tm dois papeis importantes:

Interagem directamente com clulas pr-B e pr-B;


Secretam vrias citocinas, notavelmente IL-7, que suportam o processo de desenvolvimento.

Na primeira etapa de desenvolvimento, as clulas pr-B requerem contacto directo com clulas do
estroma na medula ssea. Esta interaco mediada por vrias molculas de adeso celular, incluindo
VLA-4 na clulas pr-B e o seu ligando, VCAM-1, na clula do estroma:

Aps o contacto inicial ser feito, um receptor na clula pr-B designado c-Kit interage com uma
molcula na superficie da clula do estroma conhecida como factor stem-cell (SCF);

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Esta interaco activa a c-Kit, que uma tirosina cinase, e a clula pr-B comea a dividir-se e a
diferenciar-se em clulas pr-B e comea expressando um receptor para IL-7.

A IL-7 secretada pelas clulas do estroma dirige o processo de maturao, eventualmente induzindo a
regulao de molculas de adeso nas clulas pr-B, de modo que as clulas em proliferao so
capazes de se desligar das clulas do estroma. Neste ponto, as clulas pr-B no requerem mais
contacto directo com clulas do estroma mas continuam a requerer IL-7 para o crescimento e a
maturao.
Rearranjo de Genes Ig
A maturao das clulas B depende do rearranjo do DNA para imunoglobulinas nas clulas estaminais
linfides:

Primeiro ocorre na etapa das clulas pr-B rearranjo DH-JH dos genes de cadeia pesada;
De seguida, ocorre um arranjo VH-DHJH;
Se o primeiro arranjo no for produtivo, o arranjo VH-DH-JH continua no outro cromossoma.

Aps a concluso do rearranjo de cadeias pesada, a clula classificada como uma clula pr-B e o
desenvolvimento continuado de uma clula pr-B numa clula B imatura requer o rearranjo produtivo
de genes de cadeia leve. Devido excluso allica, apenas um isotipo de cadeia leve expresso na
membrana da clula B. A realizao de um rearranjo de cadeia leve produtivo compremete a, agora,
clula B imatura a uma especificidade antignica particular determinada pela sequncia VDJ da cadeia
pesada e a sequncia VJ da cadeia leve:

As enzimas recombinase RAG-1 e RAG-2, que so necessrias para o rearranjo de genes de


cadeia pesada e de cadeia leve, so expressas durante as etapas das clulas pr-B e pr-B;
A enzima TdT, que cataliza a insero de nucletidos N nas junes codificantes D H-JH e VH-DHJH,
est activa durante a etapa de clulas pr-B. como a expresso de TdT desligada quando
ocorre o rearranjo de cadeias leves, nucletidos N no so normalmente encontrados nas
junes codificantes VL-JL.

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A fase da medula ssea do desenvolvimento das clulas B culmina na produo de clulas B imaturas
que expressam IgM membranar. Nesta etapa de desenvolvimento, a clula B no est completamente
funcional e antignios induzem morte ou anergia (falta de resposta) em vez de diviso e diferenciao.
A maturao completa sinalizada pela co-expresso de IgD e IgM na membrana. Esta progresso
envolve uma alterao no processamento do RNA do transcrito primrio de cadeia pesada que permite
a produo de dois mRNAs, um que codifica a forma membranar da cadeia e outro que codifica a
forma membranar da cadeia .

Apesar da IgD ser uma marcador superficial das cluls B naive maduras, a sua funo ainda no
conhecida. Contudo, visto que ratinhos knockout para Ig apresentam numeros normais de cluls B
completamente funcionais, a IgD no essencial nem para o desenvolvimento das clulas B nem para a
resposta a antignios.
Receptor da Clula Pr-B
Na clula pr-B, a cadeia membranar encontra-se associada com um cadeia leve substituta (surrogate
light chain), um complexo constituido por duas proteinas, que se associam para formar uma estrutura
semelhante a uma cadeia leve:
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Uma sequncia V-like desiganada Vpr-B;


Uma sequncia C-like designada 5.

O complexo membranar da cadeia pesada com a cadeia leve substituta surge na clula pr-B
associado com o heterodimero Ig/Ig para formar o receptor da clula pr-B e apenas clulas pr-B
que so capazes de expressar cadeias pesadas membranares em associao com cadeias leves
substitutas so capazes de proceder na via de maturao. Existe tambm a especulao de que o
receptor das clulas pr-B reconhecem ligandos ainda no identificados nas membrana das clulas do
estroma, transmitindo um sinal clulas pr-B que previne o rearranjo VH-DHJH do outro alelo da cadeia
pesada, levando assim a excluso allica.

Aps o establecimento de um receptor da clula pr-B efectivo, cada clula pr-B sofre multiplas
divises celulares, produzindo 32 a 64 descendentes. Cada uma das clulas produzidas deve assim
rearranjar diferentes segmentos de genes de cadeia leve, aumentando assim a diversidade geral de
reportrio de anticorpos.
O papel critico do receptor da clula pr-B foi demosntrado com ratinhos knockout nos quais o gene
que codifica a proteina 5 do receptor foi inactivado. O desenvolvimento das clulas B nesses ratinhos
ficou bloqueada na etapa pr-B, o que sugere que:

Um sinal gerado atraves do receptor necessrio para que as clulas pr-B procedam para a
etapa das clulas B imaturas.

Factores de Transcrio e Defeitos no Desenvolvimento das Clulas B


Vrios factores de transcrio diferentes actuam no desenvolvimento das clulas hematopoiticas e
cerca de uma duzia deles parecem ter papeis no desenvolvimentos das clulas B, sendo que quatro so
particularmente importantes:

E2A;
Early B-cell factor (EBF);
B-cell specific antivator protein (BSAP);
Sox-4.

Ratinhos que no apresentam E2A no expressam RAG-1, so incapazes de fazer rearranjo DHJH e
falham na expresso de 5, um componente critico da cadeia leve sustituta, sendo um padro
semelhante tambm obeservado para ratinhos deficientes em EBF. Assim:
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E2A e EBF apresentam papeis importantes no desenvolvimento inical das clulas B e podem
tambm apresentam papeis importantes nas etapas inicias de entrada na linhagem cas clulas
B.

A supresso do gene Pax-5, cujo produto o factor de transcrio BSAP, tambm resulta na reteno
do desenvolvimento das clulas B numa etapa inical:

Locais de ligao de BSAP so encontrados nas regies promotoras de vrios genes especificos
das clulas B, incluindo Vpre-B e 5, num numero de regies de switch de Ig e no enhancer da
cadeia pesada de Ig;
BSAP tem um papel importante nas etapas iniciais do desenvolvimento das clulas B;
tambm expresso no sistema nervoso central e a sua ausncia resulta em defeitos severos no
desenvolvimento cerebral.

No entanto, apesar de no se conhecer o local exacto de aco de Sox-4, este afecta as etapas iniciais
da activao das clulas B. E tambm preciso ter em conta que, apesar de todos estes factores de
transcrio afectarem o desenvolvimento em etapas inicias, alguns deles esto activos em etapas mais
tardias.
Falhas semelhantes no desenvolvimento dos linfcitos so tambm observadas quando existe uma
mutao no gene que codifica a subunidade catalitica da proteina cinase dependente do DNA (DNAPKCS), designada mutao da imunodeficincia severa combinada (SCID).

Enquanto a actividade recombinase da SCID capaz de marcar sequncias de reconhecimento


consensus (sinais) nas extremidades dos elementos codificantes V, D e J e induzir quebras de
cadeia dupla nas fronteiras sinais/codificantes, ela no capaz de mediar a formao de junes
codificantes a uma frequncia significante;
Esta incapacidade reflecte um defeito geral no reparo de quebras de DNA de cadeia dupla e a
morte dos linfcitos por incapacidade de reparar quebras cromossmicas resultantes da
tentativa de recombinao.

E o mesmo se observa tambm em casos de mutao de proteinas envolvidas na via de sinalizao do


receptor da clula pr-B, como BLNK, e do receptor da clula pr-B, como Btk, o que impede a
passagem destas clulas etapa seguinte e provoca uma imunodeficincia

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Marcadores de Superficie
A progresso a partir da clula progenitora at clula B madura tipificada por um padro alterado de
marcadores de superficie:

CD45R - na etapa pr-B, as clulas no apresentam as cadeias leves ou pesadas dos anticorpos
mas expressam esta forma de proteina tirosina fosfatase encontrada nos leuccitos, e durante
todas as outras etapas;
Ig/Ig expressas na etapa pr-B e tambm encontradas em associao com as formas
membranares dos anticorpos em etapas mais tardias do desenvolvimento das clulas B;
CD19, CD43 e CD24 parte do co-receptor da clula B, leucossialina e uma molcula conhecida
como heatstable antigen (HSA), respectivamente. Expressas nas clulas pr-B tambm;
C-Kit expressa apenas na superficie das clulas pr-B e um receptor para o ligando promotor
do crescimento presente nas clulas do estroma;
CD25 expressa nas clulas pr-B em substituio de CD43 e constitui o receptor para IL-2.

Enquanto as clulas progridem da etapa pr-B para a pr-B, expressam muitos dos marcadores que
estava presentes durante a etapa pr-B. Contudo, deixam de expressar c-Kit e CD43 e comeam a
expressar CD25.
A apresentao do receptor da clula pr-B (pr-BCR) uma caracteristica saliente da etapa pr-B.
Depois do rearranjo da cadeia leve, imunoglobulinas membranares que contm tanto as cadeias leves
como pesadas surgem, e as clulas, agora classificadas como clulas B imaturas, perdem o pr-BCR e
no expressam mais CD25.
Existem anticorpos monoclonais que so capazes de reconhecer todos estes marcadores antignicos,
tornado possivel reconhecer e isolar as vrias etapas do desenvolvimento das clulas B pelas tcnicas
de imunohistoquimica e citometria de fluxo.
Subgrupos de Clulas B
Subgrupos de clulas B distintos desenvolvem-se a partir de diferentes progenitores:

Clulas B B-1 tm origem em clulas HSCs derivadas do figado fetal;


Clulas B B-2 tm origem em clulas HSCs derivadas da medula ssea.

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Notch2

As clulas B B-1 diferem da maior parte dos linfcitos e desenvolvem-se de um modo unico:

Expressam a molcula CD5 (Ly-1);


No adulto, grandes numeros destas clulas so encontrados como uma auto repopulao nas
cavidades pleural e peritoneal;
Desenvolvem-se mais cedo que as clulas B convencionais e expressam um reportrio
relativamente limitado de genes V e exibem muito menor diversidade juncional do que as
clulas B convencionais (a TdT no expressa no figado fetal);
Secretam espontaneamente anticorpos IgM que normalmente reagem com polissacarideos e
lipidos microbianos. Estes anticorpos so por vezes designados anticorpos naturais porque esto
presentes em individuos sem imunizao, apesar de ser possivel que a flora microbiana do
tracto gastrointestinal seja a fonte de antignios que estimula a sua produo;
Fornecem uma fonte de produo rpida de anticorpos contra micrbios em locais particulares,
como o perineurio;
Na pleura, podem diferenciar-se em cerca de metade das clulas secretoras de IgA na lmina
prpria;
So anlogas s clulas T pois ambas possuem reportrios de receptores de antignios
limitados e esto ambas envolvidas na resposta a antignios microbianos comummente
encontrados nas primeiras etapas das respostas imunes.

As clulas B B-2 passam rapidamente atravs de duas etapas transicionais e podem desenvolver-se em
dois grupos distintos de clulas:

Clulas B da zona marginal localizam-se primariamente nas vizinhanas dos seios marginais no
bao e so de algum modo semelhantes s clulas B-1 pois apresentam diversidade limitada e
so capazes de responder a antignios polissacarideos e produzir anticorpos naturais.
Expressam IgM e o marcador de superficie CD21. Respondem muito rapidamente a micrbios
sanguineos e diferenciam-se em clulas plasmticas secretoras de IgM de curta vida. Apesar de
geralmente mediarem respostas imunes independentes de clulas T contra patognios
circulantes, estas clulas parecem tambm ser capazes de mediar algumas respostas imunes

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dependentes de clulas T. Surgem por diferenciao da clula B madura progenitora na


presena de Notch2;

Clulas B foliculares constituem a maior parte das clulas B maduras e co-expressam cadeias
pesadas e em associao com cadeias leves ou e, assim, produzem tanto IgM e IgD
membranares. Ambas as classes de Ig utilizam o mesmo exo VDJ e associam-se com cadeias
pesadas idnticas e, assim, exibem a mesma especificidade de antignio. Deste modo, splicing
alternativo permite que uma clula B produza simultaneamente mRNAs e proteinas maduras de
dois isotipos diferentes de cadeia pesada. O mecanismo pelo qual uma clula comea a
expressar ambos os isotipos ainda desconhecido mas a co-expressam de IgM e IgD alcanada
pela aquisio de competncia funcional e de habilidade para recircular, e esta a razo pela
qual clulas B foliculares so tambm designadas clulas B maduras.

A correlao entre a expresso de IgD e a aquisio de competncia funcional sugere que a IgD o
receptor activador essencial das clulas B maduras. No entanto, no existe evidncia para uma
diferena funcional entre IgM e IgD membranares.
As clulas B foliculares so na maior parte das vezes designadas clulas B recirculantes, visto que
migram de um orgo linftico para o seguinte, residindo em nichos especializados conhecidos como

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foliculos de clulas B. Nestes nichos, estas clulas B so mantidas, em parte, por sinais transmitidos por
um ligando trpico do familia de citocinas tumor necrosis factor (TNF) designado de BAFF ou BlyS.

Clulas B maduras, naive, respondem a antignios e, a no ser que as clulas encontrem antignios que
reconhecem com alta afinidade e a que respondem, elas morrem em dias.
Resumidamente, as principais caracteristicas dos diferentes subgrupos de clulas B so:
Propriedade/Actividade
Quando produzido pela
primeira vez
Regies N nas junes VDJ
Reportrio da regio V
Localizao primria
Modo de renovao
Produo de
imunoglobulinas
espontnea
Isotipos secretados
Resposta a carboidratos
antignicos
Resposta a proteinas
antignicas
Necessidade de ajuda das
clulas T
Hipermutao somtica
Desenvolvimento de
memria

Clulas B-1

Clulas B-2 convencionais

Clulas B-2 da zona


marginal

Feto

Aps nascimento

Aps nascimento

Algumas
Restrito
Cavidade corporais
(peritoneal, pleural)
Auto-renovao

Extensivas
Diverso
rgos linfticos
secundrios
Repostas na medula ssea

Sim
Parcialmente restrito

Alta

Baixa

Baixa

IgM >> IgG

IgG > IgM

IgM > IgG

Sim

Talvez

Sim

Talves

Sim

Sim

No

Sim

Por vezes

Baixa-nenhuma

Alta

Baixa-nenhuma

Sim

Bao
Grande longevidade

Seleco do Reportrio de Clulas B Maduras


O reportrio de clulas B maduras positivamente seleccionado da pool de clulas B imaturas. A
seleco positiva est bem definida nos linfcitos T e responsvel por preservar as clulas T CD4 + e
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CD8+ restritas a MHC do prprio de uma pool de clulas T imaturas no seleccionadas. No existe uma
restrio comparvel para o reconhecimento de antignios pelas clulas B. No entanto, a seleco
positiva parece ser um fenmeno gerado para identificar linfcitos que completaram o seu programa de
rearranjo com sucesso e possivelmente facilitando a produo de subgrupos de clulas T ou B:

Acredita-se que apenas clulas B que expressam molculas Ig membranares funcionais recebem
sinais de subrevivncia constitutivos derivados do BCR;
Antignios do prprio parecem influenciar a fora do sinal do BCR e, assim, a escolha
subsequente da linhagem de clulas B perifricas durante a maturao de clulas B.

Clulas B imaturas de reconhecem antignios do prprio com grande avidez podem ser induzidas a
alterar as suas especificidades por um processo designado de editing do receptor:

Neste processo, o reconhecimento de antignios leva reactivao de genes Rag, a eventos


adicionais de recombinao V-J de cadeia leve, e produo de novas cadeias Ig leves,
permitindo que a clula expresse diferentes receptores de clula B que no so auto-reactivos;
Este processo ocorre normalmente em genes de cadeia leve, sendo que exes VJ que
codificam os dominios variveis das cadeias leves auto-reactivas so eliminados e substiuidos
por novos exes exes VJ ou por rearranjos da cadeia leve ;
O novo exo exes VJ dever ser gerado pelo rearranjo de um gene V a montante do gene V
original que produziu uma cadeia leve auto-reactiva com um segmento J a jusante do segmento
J originalmente rearranjado.

Clulas B imaturas que expressam receptores de alta afinidade para antignios prprios e que
encontram esses antignios na medula ssea devem morrer ou no maturar se no forem editados. A
eliminao geralmente designada seleco negativa e parcialmente responsvel pela manuteno
da tolerncia das clulas B a antignios prprios que esto presentes na medula ssea:

Os antignios que medeiam a seleco negativa normalmente antignios prprios abundantes


ou multivalentes (e.g., membranares) fornecem sinais fortes a linfcitos B imaturos que
expressam IgM que parecem ser especificos para esses antignios prprios;
O reconhecimento do antignio pela a morte por apoptose das clulas B imaturas, quando o
editing falha.

Assim que feita a transio para a etapa das clulas B maduras+IgD+IgM, o reconhecimento de
antignios leva a proliferao e diferenciao, e no a apoptose oi editing do receptor. Como resultado,
as clulas B maduras que reconhecem antignios com grande afinidade nos tecidos linfides perifricos
so activadas e esse processo leva a respostas imunes humorais.
Podemos ter quatro destinos diferentes para as clulas B imaturas na medula ssea dependendo da
avidez e do tipo de ligando que ligam:

Molcula prpria multivalente quando as clulas B imaturas expressam receptores que


reconhecem ligandos multivalentes, como molculas membranares prprias, elas so
eliminadas de reportrio (deleco clonal). Estas clulas B ou sofrem editing do receptor, de
modo que a auto-reactividade do receptor eliminada, ou sofrem morte celulars programada
ou apoptose (seleco negativa);

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Molcula prpria soluvel clulas B imaturas que se ligam a antignios prprios soluveis
capazes de fazer cross-link com o receptor da clula B so mantidos num estado de no
resposta ao antignio (anrgico) e carregam muito poucas IgM membranares. Estas clulas
migram para a periferia onde expressam IgD mas se mantm anrgicas. Se em competio com
outras clulas B na periferia, elas so rapidamente perdidas;

Molcula prpria que no permite cross-link e com baixa afinidade clulas B imaturas que
ligam estes ligandos no recebem qualquer sinal como resultado da sua interaco e maturam
normalmente para expressar tanto IgM como IgD na superficie da clula. Tais clulas so
potencialmente auto-reactivas e so clonalmente ignorantes j que o seu ligando est presente
mas no capaz de as activar;

Reaco no prpria clulas B imaturas que no encontram antignio maturam normalmente,


migram da medula ssea para os tecidos linfides perifricos onde se tornam clulas B
recirculantes maduras carregadoras de IgM e IgD na sua superficie.

Activao e Proliferao das Clulas B


Aps o exporte de clulas B da medula ssea, ocorre activao, proliferao e diferenciao na periferia
na presena de antignio. A activao e seleco clonal conduzida pelo antignio de clulas B naive
leva produo de clulas B de memria e de plasmcitos e na ausncia de activao induzida pelo
antignio, as clulas B naive na periferia apresentam uma curta longevidade, morrendo em poucas
semanas por apoptose.

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Clulas B naive so clulas que no se dividem e que se encontram na etapa G 0 do ciclo celular. A
activao dirige as clulas naive para o ciclo celular, progredindo atravs da fase G 1 para a S, na qual o
DNA replicado. A transio de G1 para S um ponto de restrio critico no cicli celular. Assim que a
clula alcana a etapa S, ela complete o ciclo, movendo-se atravs G2 para a mitose (M). Estes sinais e
eventos podem ser agrupados em duas categorias:

Sinais de competncia dirigem a clula B de G0 para G1,


tornando a clula competente para recebr os sinais
seguintes para o nivel seguinte de sinais;
Sinais de prograsso dirigem depois a clula de G1 para
S e no final para a diviso celular e diferenciao.

A competncia alcanada, no por um mas, por dois eventos de


sinalizao distintos, que so designados sinal 1 e sinal 2. Esses
eventos de sinalizao so gerados por diferentes vias com
antignios dependentes do timo (dependentes de clulas TH TD
antigen) e no dependentes do timo (no dependentes de clulas
TH TI antigen), mas ambas as vias incluem sinais gerados quando
antignio multivalentes se ligam e fazem cross-link de mIg.
Assim que a clula B adquiriu uma sinal de competncia efectivo na activao inicial, a interaco de
citocinas e possivelmente outros ligandos com o BCR fornece sinais de progresso.
Traduo de Sinais de Activao
Todos os isotipos de mIg apresentam caudas citoplasmticas muito curtas, sendo que tanto mIgM e
mIgD nas clulas B extendem para o citoplasma apenas trs aminocidos, mIgA extende 14 aminocidos
e mIgG e mIgE extendem 28 aminocidos. Em cada caso, a cauda citoplasmtica muito curta para ser
capaz de gerar um sinal em associao com molculas de sinalizao intracelulares, como tirosina
cinases e proteinas G. Assim, as mIgs esto associadas com um heterodimero Ig/Ig, formando o
receptor das clulas B (complexo BCR). Assim, o BCR divide-se funcionalmente em:

Molcula Ig de ligao ao ligando;


Heterodimero Ig/Ig de traduo de sinal.

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Uma diviso funcional semelhante marca oo pr-BCR, que traduz sinais via um complexo consitindo
num heterodimero Ig/Ig e cadeias pesadas combinados com cadeias substitutas de cadeia leve.
A cadeia Ig apresenta uma cauda citoplasmtica longa com cerca de 61 aminocidos e a cadeia Ig
apresenta uma cauda com 48 aminocidos. As caudas citoplasmticas de ambas as cadeias contm
motivos ITAM, que so encontrados tambm em vrias molcula do complexo TCR. interaces com as
caudas citoplasmticas de Ig/Ig traduzem estimulos produzidos por cross-link de molculas mIg em
sinais intracelulares efectivos.

O cross-link de BCRs resulta na induo de vrias vias de traduo de sinal e na activao da clula B.
estas incluem:

Compartimentao da funo nas subunidades do receptor a via comea com receptores de


antignios que so compostos por uma subuinidade de sinalizao e outra de ligao ao
antignio. A subunidade de ligao ao antignio confere especificidade mas apresenta caudas
citoplasmticas muito curtas para traduzir o sinal para o citoplasma da clula. A subuinidade
sinalizadora apresenta caudas citoplasmticas mais longas que so os tradutores de sinal no
complexo receptor;

Activao de tirosina cinases associadas membrana a proteinas tirosina cinases associadas


ao receptor (Lyn, Blk e Fyn) catalizam fosforilaes durante as primeiras etapas da traduo de
sinal que so essenciais para a formao de um complexo receptor de sinalizao funcional;

Montagem de uma complexo de sinalizao grande com actividade tirosina cinase as


tirosinas fosforiladas dos ITAMs no BCR fornecem locais de ancoragem para molculas que se
ligam a estes receptores;

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Recrutamento de outras vias de traduo de sinal sinais apartir do BCR resultam na produo
de mensageiros secundrios que activam vrias vias de sinalizao importantes, a via da PKC, a
via do clcio e a via das proteinas Ras-MAP cinase;

Alteraes na expresso de genes um dos resultados importantes dos processos de traduo


de sinal a gerao ou translocao para o nucleo de factores de transcrio activos que
estimulam ou inibem a transcrio de genes especificos.

Falhas na traduo de sinal podem levar a severas consequncias para o sistema imunitrio.
Complexo Co-receptor da Clula B
A estimulao atravs dos receptores de antignios pode ser modificada siginificativamente por sinais
atravs de co-receptores. Nas clulas B, um componente da membrana, desigando co-receptor da
clula B fornece sinais estimulantes. O co-receptor da clula B um complexo de trs proteinas:

CD19 membro da superfamilia de


imunoglobulinas, tem uma longa cauda
citoplasmtica e trs dominios extracelulares;
CR2 (CD21) receptor de C3d, um produto da
quebra do sistema complemento, que um
importante mecanismo efector para a destruio
de invasores. O envolvimento da C3d na via de
actividade do co-receptor revela diferentes braos
do sistema imune a interagirem entre si. CR2
tambm funciona como um receptor para uma
molcula membranar e para a proteina
transmembranar TAPA-1 (CD81).

Em adio ao co-receptor estimulador, outra molcula,


CD22, que constitutivamente associada com o receptor
de clulas B no activas, fornece sinais negativos que
fazem com que seja mais dificil activar a clula B.
O papel mediado pelo co-receptor o seguinte:
1. O componente CR2 do complexo co-receptor liga-se a antignios revestidos por complemento
que foram capturados pelas mIg na clula B;
2. Isto liga o co-receptor ao BCR e permite que o componente CD19 do co-receptor interaja com o
componente Ig/Ig do BCR;
3. Fosforilao de CD19 permite que este se ligue a molculas sinalizadoras;
4. Estas molculas so ento capazes de contribuir para o processo de activao e o complexo coreceptor serve para amplificar o sinal transmitido pelo BCR.
Este fenmeno explica como clulas B naive, que normalmente expressam mIg com baixa afinidade
para antignios, so capazes de responder a muito baixas concentraes de antignio numa resposta
primria. Tais respostas, mesmo que inicialmente de baixa afinidade, desenpenham papeis significantes
na gerao de anticorpos de alta afinidade.

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No entanto, o componente CD19 do co-receptor da clula B capaz de desempenhar um papel


independente do CR2, o receptor do complemento.
Papel das Clulas T H
A activao das clulas B por proteinas antignicas soluveis requer o envolvimento de clulas TH. A
ligao do antignio a mIg das clulas B no induz por si s um sinal de competncia efectivo sem
interaco adicional com molculas membranares em clulas TH. Em adio, um progresso mediada
por citocinas requerida para a proliferao das clulas B.

Este processo dependente de clulas T (TD) mais complexo do que a activao independente de
clulas T (TI).
Depois da ligao do antignio por mIg nas clulas B, o antignio internalizado por endocitose
mediada pelo receptor e processado na via endocitica em pptidos. A ligao do antignio inicia
tambm a sinalizao atravs do BCR que induz a clula B a regular um numero de molculas
membranares, incluindo molculas MHC classe II e ligando co-estimulador B7:

Expresso aumentada de ambas estas proteinas membranares melhora a habilidade das clulas
B funcionarem como clulas apresentadoras de antignios na activao de clulas T H.

As clulas B ajudam assim o seus ajudantes porque os pptidos antignicos produzidos nas vias de
processamento antignicas associam-se com molculas MHC classe II e so apresentadas na membrana
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das clulas B s clulas TH, induzindo a sua activao. Quando a concentrao de antignio elevada,
macrfagos e clulas dendriticas so APCs efectivas, mas, quando os niveis de antignio caem, as
clulas B tornam-se as principais apresentadoras de antignio s clulas TH.
Assim que a clula TH reconhece um pptido antignico processado apresentado por uma molcula
MHC classe II na membrana de uma clula B, as duas clulas interagem para forma um conjugado B-T:

Nestes conjugados, as clulas TH apresentam o aparelho de Golgi e centros microtubulares rearranjados para a juno com a clula B;
Este ajuste estrutural facilita a libertao de citocinas para a clula B especifica para o antignio.

A formao do conjugado B-T no leva apenas a libertao direccionada de citocinas das clulas TH mas
tambm regulao de CD40L, uma proteina membranar das clulas TH que depois interage com CD40
nas clulas B para fornecer um sinal essencial para a activao de clulas B dependente de clulas T:

CD40 pertence familia TNF de proteinas membranares e citocinas soluveis que regulam a
porliferao celular e a morte celular por apoptose;
CD40L pertence familia de receptores de TNF (TNFR).

Interaces de CD40L com CD40 nas clulas B fornece um sinal (sinal 2, ou secundrio) clula B que,
em conjunto com o sinal gerado pela mIg (sinal 1, ou primrio), dirige a clula B para G 1. Os sinais
apartir de CD40 so traduzidos por um numero de vias de sinalizao intracelulares resultando no fim
na alterao da expresso de genes.
Apesar das clulas B estimuladas por proteinas membranares a partir de clulas T H activadas serem
capazes de proliferar, elas falham na diferenciao a no ser que citocinas estejam tambm presentes.
Isto sugere que ambos os sinais de contacto e das citocinas so necessrios para induzir a proliferao e
diferenciao de clulas B.

Assim que activada, a clula B comea a expressar receptores membranares para vrias citocinas,
como IL-2, IL-4, IL-5 e outras. Esses receptores ligam depois citocinas produzidas pela clula T H com
quem interagem. Os sinais produzidos pela interaces citocina-receptor suportam a proliferao das
clulas B e capaz de induzir a diferenciao em plasmcitos e clulas B de memria, o class switching
e a maturao da afinidade.

Resposta Humoral
A cinetica e outras caracteristicas da resposta humoral diferem consideravelmente dependendo se a
resposta humoral resulta de uma activao de clulas B naive (resposta primria) ou de clulas B de
memria (resposta secundria). Em ambos os casos, a activao leva produo de anticorpos
secretados de vrios isotipos, que diferem na sua habilidade de mediar funes efectoras especificas:
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O primeiro contacto de um antignio exgeno com um individuo gera uma resposta humoral primria,
caracterizada pela produo de plasmcitos secretores de anticorpos e de clulas B de memria. A
cintica desta resposta depende de:

Natureza do antignio;
Via de administrao do antignio;
Presena ou ausncia de adjuvantes;
Espcies ou estirpes a serem imunizadas.

Em todos os casos, contudo, uma resposta primria caracterizada por:

Uma fase lag, durante a qual clulas B naive sofrem seleco clonal, subsequente expanso
clonal e diferenciao em clulas de memria ou plasmcitos;
Um aumento logaritmico dos niveis sricos de anticorpos, a seguir fase lag, que atinge um
pico, estabiliza por algum tempo e depois cai.

A durao da fase lag varia com a natureza do antignio:

A imunizao de ratinhos com um antignio como eritrcitos de carneiro (SRBCs) tipicamente


resulta numa fase lag de 3-4 dias. Oito ou nove divises celulares sucessivas de clulas B
activadas durante 4-5 dias geram depois plasmcitos e clulas de memria. O pico dos niveis de
plasmcitos alcanado aos dias 4-5 enquanto o pico de anticorpos sricos alcanado por
volta dos dias 7-10;
Para antignios soluveis, a fase lag um pouco mais longa, normalmente durando cerca de uma
semana. O pico nos niveis de plasmcitos alcanado aos dias 9-10 e o pico de anticorpos
sricos alcanado ao dia 14.

Durante a resposta humoral primria, IgM secretada inicialmente, normalmente seguida por um
switch de modo a aumentar a proporo de IgG. Dependendo da persistncia do antignio, a resposta
primria pode durar vrios periodos, variando de alguns dia a vrias semanas.
As clulas de memria formadas durante a resposta primria param de se dividir e entram na fase G0 do
ciclo celular. Estas clulas tm tempos de vida variveis, com algumas persistindo durante toda a vida
do individuo. A capacidade de desenvolver uma resposta humoral secundria depende da existncia
desta populao de clulas B de memria tal como de clulas T de memria. A activaode clulas de
memria resulta numa resposta de anticorpos secundria que pode ser distinguida da primria de
vrios modos:
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Tem um periodo lag inferior, antige maior magnitude, dura menos tempo;
Caracterizada pela secreo de anticorpos com elevada afinidade para o antignio, e isotipos
diferentes de IgM predominam.

Propriedade
Clulas B que respondem
Periodo Lag aseguir
administrao do antignio
Tempo do pico de resposta
Magnitude do pico de resposta
Isotipo produzido
Antignios
Afinidade dos anticorpos

Resposta primria
Clulas B naive

Resposta secundria
Clulas B de memria

Geralmente 4-7 dias

Geralmente 1-3 dias

7-10 dias

3-5 dias
Geralmente 100-1000 vezes
superior que a resposta primria

Varia dependendo do antignio


IgM predomina primariamente na
resposta
Dependento do timo e
independente do timo
Inferior

IgG predomina
Dependente do timo
Superior

Um grande factor na resposta mais rpida e na maior magnitude das resposta secundrias o facto de
populaes de clulas B de memria especificas para um determinado antignio serem maiores que as
populaes correspondentes de cluls B naives e tambm o facto das clulas de memria serem mais
faceis de activar do que as clulas B naive. O processo de afinidade da maturao e o class switching so
responsveis pela maior afinidade e diferentes isotipos ixibidos numa resposta secundria. Os maiores
niveis de anticorpos acoplados com a maior afinidade geral fornece uma defesa do hospedeir eficiente
contra a re-infeco. A alterao nos isotipos fornece anticorpos cujas funes efectoras so
particularmente moldadas a um determinado anitgnio.
A existncia de clulas B de memria de grande longevidade conta para a existncia de um fenmeno
designado original antigenic sin, que foi inicialmente observado quando a resposta de anticorpos a
vacinas da gripe foi monitorizada em adultos:

A monitorizao revelou que a imunizao com uma vacina de uma estirpe da gripe elicitava
uma resposta de anticorpos responsveis para essa estirpe mas tambm elicitava,
paradoxalmente, uma resposta de anticorpos de grande magnitude para outras estirpes de
gripe s quais o individuo tinha sido exposto na infncia. Parecia assim que a primeira exposio
ao antignio tivesse deixado uma impresso longa no sistema imunitrio;
Este fenmeno pode ser explicado pela presena de uma populao de clulas de memria,
elicitada pela estirpe de gripe encontrada na infncia, que activada por epitopos reactivos na
vacina da estirpe encontrada mais tarde;
Este processo gera uma resposta secundria, caracterizada por anticorpos com maior afinidade
para a primeira estirpe viral.

Papel das Clulas T H na Resposta Humoral a Haptenos


Quando animais so imunizados com pequenos compostos orgnicos (haptenos) conjugados com
grandes proteinas (carregaoras), o conjugado induz uma resposta imune humoral consistindo em
anticorpos tanto para os epitopos hapteno e para os epitopos inalterados da proteina carregadora.
Vrios estudos demonstraram que a gerao da resposta humoral requer o reconhecimento do
antignio tanto pelas clulas TH como pelas clulas B, cada uma reconhecendo diferentes epitopos no
mesmo antignio.
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Isto conhecido como o efeito hapteno e caracterizado por:

O hapteno tem de estar quimicamente acoplado a uma


molcula carregadora maior para induzir uma resposta
humoral ao hapteno. Se um animal for imunizado com
o hapteno e o carregador em separado, muito poucos
ou nenhuns anticorpos so gerados;
De modo a gerar uma resposta humoral secundria a
um hapteno, o animal tem ser imunizado de novo com
o mesmo conjugado usado na primeira imunizao. Se
a segunda imunizao for feita com o mesmo hapteno
mas o conjugado for diferente no existe resposta
secundria.

Vrios estudos demonstraram que as clulas imunizadas contra o haptenos e as clulas imunizadas
contra o carregador constituem populaes distinctas. Estas experincias demosntraram que a resposta
de clulas B condicionadas a haptenos a conjugados carregadores de haptenos requer a presena de
clulas TH CD4+ condicionadas a carregador especificas para epitopos do carregador.
As experincias com conjugados carregadores de haptenos revelaram que tanto as clulas T H como as B
tm de ser capazes de reconhecer determinantes antignicos na mesma molcula para que ocorra a
activao das clulas B. Esta propriedade da interaco das clulas T com as B na resposta humoral
designada reconhecimento associativo.

Locais in vivo para a Induo da Resposta Humoral


A activao e diferenciao das clulas B ocorre em locais anatomicos definidos cuja estrutura
estabelece certas restries aos tipos de interaces celulares que ocorrem. Quando um antignio
introduzido no corpo torna-se concentrado em vrios rgos linfticos perifricos:

Antignios sanguineos so filtrados pelo bao;


Antignios presentes nos espaos tecidulares drenados pelo sistema linftico so filtrados pelos
nodos linfticos regionais.

Um nodo linftico um filtro extremamente eficiente


capaz de reter mais de 90% de antignios que passam
atraves dele pelos vasos linfticos aferentes. Antignios ou
complexos anticorpo-antignio entram no nodo linftico
tanto sozinhos como associados a clulas transportadoras
de antignios (e.g, clulas de Langerhans ou dendriticas) e a
macrfagos e, enquanto este atravessa toda a arquitectura
celular do nodo, encontrar um de trs tipos de clulas
apresentadoras de antignios:

Clulas dendriticas no paracortex;


Macrfagos espalhados por todo o nodo;
Clulas dendriticas foliculares nos foliculos e centros germinativos.

O desafio antignico que leva a uma resposta imune humoral envolve uma srie de eventos complexos,
que ocorrem em microambientes distintos dentro do nodo linftico. Vias ligeiramente diferentes
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operam durante uma resposta primria e secundria porque muito do tecido antignico est
complexado com anticorpos circulantes na resposta secundria.
Assim, a induo da resposta humoral ocorre do seguinte modo:

Assim que a activao das clulas B mediada por antignios ocorre, pequenos focus de clulas B
em proliferao formam-se nas extremidades da zona rica em clulas T;
Estas clulas B diferenciam-se em plasmcitos secretando isotipos IgM e IgD;
A maior parte dos anticorpos produzidos durante a resposta primria tm origem nos
plasmcitos destes focus.

Uma sequncia de eventos semelhante ocorre no bao, onde a activao de clulas B inicial ocorre na Tcell-rich periarterial lymphatic sheat, PALS.
Alguns dias aps a formao dos focus nos nodos linfticos, algumas clulas B activadas, em conjunto
com algumas clulas TH, podem migrar dos focus para foliculos primrios. Estes foliculos desenvolvemse depois em foliculos secundrios, que fornecem um microambiente especializado favorvel a
interaces entre clulas B, clulas TH activadas e clulas dendriticas foliculares. Aps estas interaces,
as clulas B activadas migram para o centro do foliculo secundrio, formando um centro germinativo.
importante ter em ateno que, apesar de partilharem a morfologia altamente ramificada das clulas
dendriticas derivadas da medula ssea, as clulas dendriticas foliculares:

No tm origem na medula ssea, no expressam molculas MHC classe II e no apresentam


antignios a clulas T CD4+;
Apresentam longas extenses, ao longo das quais se encontram receptores Fc e receptores do
complemento. Estes receptores permitem que a clula dendritica folicular retenha e apresente
complexos antignio-anticorpo por longos periodos de tempo, mesmo meses, na superficie da
clula.

Centros Germinativos e Diferenciao de Clulas B Induzida p or


Antignio
Os centros germinativos surgem entre 7-10 dias aps a exposio inicial a antignios dependentes do
timo e podemos distinguir duas zonas distintas:

Zona escura (Dark zone) - Durante a primeira etapa da sua formao, as clulas B activadas
sofrem proliferao intensa. As clulas B em proliferao, conhecidas como centroblastos,
surgem nesta zona e distinguem-se pelo seu grande tamanho, citoplasma extenso, cromatina
difusa e ausncia de Ig membranares. Os centroblastos eventualmente do origem a
centrcitos, que so pequenas clulas B que no se dividem e expressam Ig membranares;

Zona clara (Light zone) os centrcitos movem-se da zona escura para esta regio, que contem
clulas dendrtiticas foliculares, onde alguns centrcitos fazem contacto com antignios
apresentados como complexos antignio-anticorpo na superficie de clulas dendrititicas
foliculares.

Trs eventos de diferenciao importantes ocorrem nos centros germinativos:

Maturao da afinidade;

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Class switching;
Formao de plasmcitos e clulas B de memria.

Maturao da Afinidade
Resumidamente, os eventos celulares nos centros germinativos processam-se do seguinte modo:

Clulas B estimuladas por antignios migram para os centros germinativos, onde reduzem a
expresso de Ig membranares e sofrem rpida diviso celular e mutao de genes de regio V
de imunoglobulinas rearranjados na zona escura;
Subsequentemente, a diviso pra e as clulas B migram para a zona clara e aumenta a
expresso de Ig membranar. Nesta etapa designam-se centrcitos;
Na zona clara, os centrcitos devem interagir com clulas dendriticas foliculares e clulas T
helper para sobreviverem;
As clulas dendriticas foliculares ligam complexos antignio-anticorpo ao longo das suas
extenses e os centrcitos devem competir uns com os outros para ligar o antignio. As clulas
B que apresentam Ig membranares de alta afinidade so aquelas que competem com sucesso;

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Aquelas clulas B que perdem nesta seleco mediada pelo antignio morrem por apoptose;
As clulas B que passam na seleco e recebem um segundo sinal de sobrevivncia a partir das
clulas T helper diferenciam-se em clulas B de memria ou plasmcitos secretores de
anticorpos.

Assim, o principal objectivo dos centros germinativos gerar clulas B de alta afinidade a partir de
clulas B de baixa afinidade. Em geral, a maturao da afinidade e a formao de clulas B de memria
requer os centros germinativos. Contudo, algum class switchig e a formao significante de plasmcitos
ocorre tambm fora dos centros germinativos.

Papel da Hipermutao Somtica


Monitorizando os genes de anticropos durante uma resposta imune observa-se que ocorrem mutaes
extensivas nos genes Ig que respondem infeco das clulas B no centros germinativos. A introduo
de mutaes pontuais, deleces e inseres nos genes de imunoglobulina rearranjados um processo
bastante direccionado:

A maior parte destas mutaes ocorre na regio que se extende desde cerca de 0,5 kb a 5 at
1,5 kb a 3 dos segmentos V(D)J dos genes de imunoglobulina rearranjados;
Apesar do processo de hipermutao inserir mutaes por toda a regio V, a seleco conduzida
pelo antignio resulta na eventual emergncia de genes de imunoglobulinas nos quais a maior
parte das mutaes se encontram nas CDRs.

As taxas extremamentes elevadas (1 a cada 2 divises) e a direco precisa da hipermutao so


caracteristicas extraordinrias unicas do sistema imunitrio e a determinao deste mecanismo ainda se
encontra desconhecido.
Como a mutao somtica ocorre aleatoriamente, gerar poucas clulas com receptores de alta
afinidade e muitas clulas com receptores com afinidade igual ou mais baixa que os da clula me para
um antignio particular. Assim, necessria seleco para derivar uma populao de clulas que
apresentam maior afinidade. O centro germinativo o local de seleco:

Clulas B que apresentam receptores de alta afinidade para o antignio sero positivamente
selecionadas e deixam o centro germinativo;
Clulas B que apresentam receptores de baixa afinidade sofrem seleco negativa e morrem no
centro germinativo.

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Papel da Seleco
A hipermutao somtica dos genes das regies variveis das cadeias pesada e leve ocorre quando os
centroblastos proliferam na zona escura do centro germinativo. A seleco ocorre nas zona clara, na
populao de centrcitos que no se dividem. O factor mais importante na seleco a habilidade de
molculas Ig membranares nos centrcitos reconhecerem e ligarem antignios apresentados por clulas
dendriticas foliculares:

Como as superficies das clulas dendriticas foliculares esto ricamente cobertas por receptores
Fc e do complemento, antignios complexados com anticorpos ou antignios ligados a
fragmentos do complemento gerados durante a activao do complemento so capazes de se
ligar s clulas dendriticas foliculares;
Um centrcito cujas Ig membranares se liga e sofre crosslinking com antignios ligados a clulas
dendriticas foliculares recebem um sinal que essencial para a sua sobrevivncia;
Aqueles que no recebem este final morrem.

Contudo, os centrcitos devem competir para as pequenas quantidades de antignios apresentados nas
clulas dendriticas. Como a quantidade de antignio limitada, os centrcitos com receptor de maior
afinidade tm maior probabilidade de se ligar com sucesso do que aqueles com menor afinidade.
Apesar da ligao do antignio ser necessria para a sobrevivncia do centrcito, no suficiente. Um
centrcito deve receber sinais gerados por interaco dom clulas T CD4+ helper para sobreviver.
Centrcitos que no recebem estes dois sinais sofrem apoptose nos centros germinativos. De facto,
uma das caracteristicas dos centros germinativos a morte celular por apoptose que ai ocorre. Isto
claramente evidente pela presena de fragmentos de cromatina condensada, indicativa de apoptose,
em macrfagos especificos que removem clulas por fagocitose nos tecidos linfticos.
Class Switching
Os anticorpos tm duas actividade importantes:

Ligao especifica a um antignio, que determinada pelos dominios VH e VL;


Participao em vrias funes biolgicas efectoras, que determinada pelo isotipo do dominio
constante da cadeia pesada.

O class switching permite que qualquer dominio VH se associe com a regio constante de qualquer
isotipo. Isto permite que a especificidade do anticorpo continue constante enquanto as actividades
biolgicas efectoras da molcula variam. Um numero de citocinas afectam a deciso de qual class de Ig
escolhida quando uma clula B que carrega IgM sofre class switch.
A resposta humoral a antignios dependentes do timo marcada por um class switching extensivo para
isotipos diferentes de IgM, enquanto a resposta humoral a antignios independentes do timo
(independentes de clulas T) dominada por IgM. No caso dos antignios dependentes do timo, a
interaco de clulas B com as clulas T helper necessria, isto , necessria a maturao da
afinidade feita pela seleco nos centros germinativos. Esta interaco feita CD40 na clula B e CD40L
na clula T helper e essencial para a induo do class switch.
A importncia da interaco CD40/CD40L ilustrada pelo sindroma X-linked hyper-IgM, uma
imunodeficincia nas quais as clulas TH falham na expresso de CD40L. Os pacientes com esta doena
produzem IgM mas no outros isotipos. Tais pacientes falham na gerao de populaes de clulas de
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memria, falham na formao de cnetros germinativos, e os seus anticorpos no sofrem hipermutao


somtica.

Clulas de Memria e Plasmcitos


Depois das clulas B serem seleccionadas nos centros germinativos para aquelas que carregam mIg de
alta afinidade para antignios apresentados pelas clulas dendriticas foliculares, algumas clulas B
diferenciam-se em plasmcitos e outras tornam-se clulas de memria:
Propriedade
Marcadores membranares
Imunoglobulinas
Receptores do complemento
Localizao anatmica
Longevidade
Recirculao
Afinidade do receptor
Molculas de adeso

Clula B naive

Clula B de memria

IgM, IgD
Baixo
Bao
Curta
Sim
Afinidade mdia
baixa
Baixo ICAM-1

IgM, IgD(?), IgG, IgA, IgE


Alto
Medula ssea, nodo linftico, bao
Pode ser longa
Sim
Afinidade mdia elevada devido
maturao da afinidade
Alto ICAM-1

Plasmcitos geralmente no apresentam imunoglobulinas membranares detectveis e, em


vez disso, sintetizam grandes niveis de anticorpos secretados (a taxas superiores a 1000
molculas de anticorpo por clula por segundo). A diferenciao das clulas B em plasmcitos
requer uma alterao no processamento de RNA de modo que a forma secretada da cadeia
pesada sintetizada em vez da membranar. Em adio, apresentam uma taxa de expresso de
cadeia pesada muito mais elevada. A transcrio aumentada pelos plasmcitos pode ser
explicada pela sintese de maiores niveis de factores de transcrio que se ligam aos enhancers
das imunoglobulinas. Para alem disso, alguns memcanismos devem estar coordenados para
aumentar a transcrio dos genes de cadeia pesada e de cadeia leve, mesmo estando estes
genes em diferentes cromossomas;

Clulas B de memria clulas B que sobrevivem seleco na zona clara dos centros
germinativos podem diferenciar-se neste tipo de clulas semelhantes a clulas B naive mas com

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propriedades diferentes. Por exemplo, excepo das imunoglobulinas membranares, algumas


molculas membranares distinguem as clulas B naive das de memria. As clulas B naive
expressam apenas IgM e IgD enquando as clulas B de memria, devido ao class switching,
expressam isotopos adicionais, incluindo IgG, IgA e IgE.

MATURAO, DIFERENCIAO E ACTIVAO DAS CLULAS T

Maturao dos Linfcitos T


A maturao dos linfcitos T a partir dos seus progenitores envolve:

Rearranjo e expresso sequencial dos genes TCR;


Proliferao celular;
Seleco induzida pelo antignio;
Aquisio de capacidades funcionais.

Em vrios aspectos, este mecanismo semelhante maturao das clulas B. Contudo, a maturao
das clulas T apresenta algumas caracteristicas unicas que reflectem a especificidade dos linfcitos T
para pptidos antignicos associados a MHC prprio e a necessidade de um microambiente
especializados para a seleco de clulas com esta especificidade.
Papel do Timo na Maturao das Clulas T
O timo o principal local de maturao das clulas T. Esta funco do timo demonstrada por
deficincias imunolgicas associadas com a ausncia de timo:

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Se o timo removido de ratinhos neo-natais, estes animais falham no desenvolvimento de


clulas T maduras;
A ausncia congenital de timo, como ocorre no sindrome de DiGeorge em humanos ou em
estirpes de ratinhos nus, caracterizada por baixo numero de clulas T maduras em circulao e
nos tecidos linfides perifricos e deficincia severa na imunidade mediada por clulas T.

O timo regride com a idade e virtualmente indectvel em humanos aps a puberdade, mas alguma
maturao de clulas T continua atravs da vida adulta, como indicada pela reconctituio com sucesso
do sistema imune em adultos que recebem transplantes de medula ssea. possivel que o resto do
timo regredido seja adequado para alguma maturao de clulas T. Como as clulas T de memria
apresentam uma longa longevidade (talvez mais de 20 anos em humanos) e se acumulam com a idade,
a necessidade de gerar novas clulas T diminui enquanto o individuo envelhece.
Os linfcitos T tm origem em precursores que surgem no
figado fetal e na medula ssea adulta e que se fixam no timo:

Em ratinhos, os linfcitos imaturos so primeiro


detectados no timo no dia 11 de uma gestao
normal de 21 dias, o que corresponde a mais ou menos
7-8 semanas de gestao;
Clulas T em desenvolvimento no timo so designadas
timcitos e os timcitos mais imaturos no expressam
TCR nem co-receptores CD4 ou CD8, so encontrados
nos seios subcapsulares e na regio cortical do timo;
A partir daqui, os timcitos migram para e atravs do
crtex, onde a maior parte dos eventos da maturao
subsequente ocorrem;
no crtex que os timcitos primeiro expressam TCRs
e , e as clulas T se comeam a maturar em
clulas T CD4+ restritas a MHC classe II ou CD8+
restritas a MHC classe I;
Enquanto estes timcitos entram nas etapas finais da
maturao, eles migram para o crtex da medula e
saem do timo atravs da circulao.

O ambiente timico fornece estimulos que so necessrios para a proliferao e maturao dos
timcitos. A maior parte destes estimulos tm origem em clulas timicas para alm das clulas T em
maturao. Estas incluem clulas epiteliais timicas e macrfagos e clulas dendriticas derivadas da
medula ssea:

No crtex, as clulas epiteliais formam uma rede de processos citoplasmticos longos, volta
dos quais os timcitos devem passar para alcanar a medula. Tambm existem clulas epiteliais
na medula;
Clulas dendriticas derivadas da medula ssea esto presentes na fronteira corticomedular e na
medula e macrfagos esto presentes principalmente na medula;
A migrao dos timcitos atravs deste arranjo anatmico permite interaces fisicas entre
timcitos e estas outras clulas, que so necessrias para a maturao dos linfcitos.

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Dois tipos de molculas produzidas pelas clulas no-linfides timicas so importantes para a
maturao das clulas T:

Molculas MHC classe I e classe II expressas nas clulas epiteliais e nas clulas dendriticas no
timo. As interaces dos timcitos em maturao com estas molculas MHC no timo so
essenciais para a seleco do reportrio de clulas T maduras;
Citocinas e quimiocinas secretadas pelas clulas do estroma do timo, incluindo as clulas
epiteliais, e estimulam a proliferao de clulas T imaturas e orquestram a transio do crtex
para a medula da linhagem de timcitos , respectivamente. A citocina melhor definida a IL7, que um critico factor de crescimento linfopoietico, e quimiocinas como CCL21 e CCL19, que
so reconhecidas pelo receptor de quimiocinas CCR7 nos timcitos, medeiam o movimento
guiado dos timcitos pelo timo.

As taxas de proliferao e morte celular por apoptose so extremamente elevadas nos timcitos
corticais. Um nico precursor d origem a muita progenia, e 95% dessas clulas morre por apoptose
antes de alcanar a medula. A morte celular deve-se combinao de rearranjos no produtivos do
gene de cadeia do TCR, no seleco positiva por molculas MHC no timo e a seleco negativa
induzida por antignios prprios. Para alm disso, timcitos corticis so sensiveis a radiao a
glucocorticides, sendo que, in vivo, altas doses de corticides induzem morte apopttica dos timcitos
corticais.
Inicio da Maturao das Clulas T no Timo
Durante a maturao das clulas T, existe uma ordem precisa na qual genes TCR so rearranjados e o
TCR e os co-receptores CD4 e CD8 so expressos:

No ratinho, a expresso superficial de TCR ocorre primeiro, 3 a 4 dias aps as clulas


precursoras chegarem ao timo, e o TCR expresso 2 ou 3 dias depois;
No timo humano fetal, a expresso do TCR comea s 9 semanas de gestao, seguida pela
expresso do TCR s 10 semanas.

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Os timcitos corticais, que so recm-chegados apartir da medula ssea, contm genes TCR na sua
configurao da liha germinativa e no expressam TCR, cadeias CD3 ou , ou CD$ ou CD8. Estas clulas
so designada timcitos duplo-negativos e esta etapa de maturao conhecida como a etapa das
clulas pr-T:

A maioria dos timcitos duplo-negativos (>90%) dar origem a clulas T que expressam TCR e
restritas a MHC com CD4 ou CD8;
Proteinas Rag-1 e Rag-2 so expressas primeiro nesta etapa e so necessrias para o rearranjo
de genes do TCR.

Os rearranjos D-J no locus da cadeia do TCR ocorre primeiro, e envolve a combinao do segmento
de gene D1 com um dos seis segmentos J1 ou combinao do segmento D2 com um dos seis
segmentos J2. Os rearranjos V-DJ ocorrem na transio entre a etapa das clulas pr-T e a
subsequente etapa das clulas pr-T durante o desenvolvimento das clulas T . As sequncias de
DNA entre os segmentos que sofrem rearranjo, incluindo genes D, J e possivelmente C1 (se os
segmentos D2 e J2 forem usados), so eliminados durante estes processos de rearranjo formando no
final uma cadeia funcional.
Receptor da Clula Pr-T
Se um rearranjo produtivo do genes da cadeia do TCR ocorrer numa determinada clula pr-T, a
proteina da cadeia expressa na superficie em associao com uma proteina invariante designada
pr-T e com proteinas CD3 e para formar um receptor da clula pr-T. O pr-TCR medeia a seleco
das clulas pr-T em desenvolvimento que produtivamente rearranjaram a cadeia do TCR, pois cerca
de dois teros das clulas T em desenvolvimento adiciona ou remove bases nas junes de rearranjo
que de um modo no multiplo de trs e, assim, esses rearranjos falham na codificao da proteina do
TCR.
A funo do complexo pr-TCR no desenvolvimento das clulas T semelhante do pr-BCR no
desenvolvimento das clulas B:
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Imunologia

Sinais a partir do pr-TCR medeiam a sobrevivncia


das clulas pr-T e contribuem para a expanso
proliferativa durante o desenvolvimento das
clulas T;
Os sinais do pr-TCR tambm iniciam a
recombinao do locus da cadeia do TCR e dirige
a transio a etapa duplo-negativa para a etapa
duplo-positiva do desenvolvimento dos timcitos,
levando tambm expresso de CD4 e CD8;
Estes sinais tambm inibem o rearranjo seguinte de
locus de cadeia do TCR limitando a acessibilidade
dos outros alelos maquinaria de recombinao.
Isto resulta numa excluso allica da cadeia .

Tal como nas clulas pr-B, no se sabe qual, se existir, ligando o pr-TCR reconhece. A sinalizao do
pr-TCR, tal como a sinalizao do pr-BCR, poder ser iniciada de um modo dependente de ligando e
tambm dependente da montagem do complexo pr-TCR. Esta sinalizao mediada por um numero
de cinases citoslicas e proteinas adaptadoras que so conhecidas por tambm estarem envolvidas na
sinalizao do TCR.
A funo essencial dos pr-TCR na maturao das clulas T foi demonstrada por numerosos estudos
com ratinhos mutados geneticamente:

Em ratinhos deficientes em Rag-1 ou Rag-2, os timcitos no so capazes de rearranjar os genes


das cadeias e e falham na maturao aps a etapa duplo-negativa. Se um gene rearranjda
funcionalmente introduzido nestes ratinhos deficientes como um transgene, a cadeia
expressa associa-se com pr-T para formar um pr-TCR, e a maturao procegue para a etapa
duplo-positiva. Um transgene de cadeia sozinho no liberta a maturao porque a cadeia
necessria para a formao do pr-TCR;
Ratinhos KO que no apresentam qualquer componente do complexo pr-TCR (i.e., a cadeia
TCR, pr-T, CD3, ou Lck tirosina cinase envolvida na sinalizao do TCR e do pr-TCR)
mostram um bloqueio na maturao das clulas T na etapa duplo-negativa.

Produo de Timcitos Efectores e Expresso do TCR


Na etapa seguinte da maturao das clulas T, os timcitos expressam CD4 e CD8 e so designados
timcitos duplo-positivos. Clulas T duplo-positivas tambm induzem a expresso do receptor CCR7 de
quimiocinas, que guia estas clulas do crtex at medula, onde quimiocinas especificas para este
receptor so secretadas por clulas do estroma. A expresso de CD4 e CD8 essencial para os eventos
de seleco subsequentes:

O rearranjo dos genes da cadeia do TCR e a expresso de heterodimeros TCR ocorre na


populao CD4+CD8+ duplo-positiva, mesmo antes ou durante a migrao dos timcitos do
crtex para a medula;
Uma segunda onda de expresso de genes Rag no final da etapa pr-T promove a recombinao
do gene do TCR;
Assim que o rearranjo da cadeia comea, este procegue por 3 ou 4 dias (em ratinho) at a
expresso de Rag-1 e Rag-2 ser desligada por sinais do TCR durante a seleco positiva.

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Os passos envolvidos no rearranjo de genes de cadeia do TCR so bastante semelhantes aos que
ocorrem durante o rearranjo dos genes de cadeia do TCR. No entanto, como no existem segmentos
D no locus TCR , o rearranjo consiste apenas na juno de segmentos V e J:

O grande numero de segmentos J permite multiplas tentativas de juno V-J produtiva em cada
cromossoma, aumentando assim a probabilidade de um TCR funcional ser produzido;
Em contraste, com o locus da cadeia do TCR, onde a produo da proteina e formao do prTCR suprime rearranjos seguintes, existe muito pouca, se nenhuma, excluso allica no locus da
cadeia .

Assim, rearranjos produtivos de cadeias do TCR podero ocorrer em ambos os cromossoma e, se isto
acontecer, a clula T ir expressar duas cadeias . De facto, cerca de 30% das clulas T perifricas
expressam dois TCRs diferentes, com diferentes cadeias mas com a mesma cadeia . A consequncia
funcional desta expresso dual de receptores ainda desconhecida mas como apenas um necessrio
para a seleco positiva, ser possivel que o segundo TCR no apresente qualquer afinidade para MHC
prprio e, assim, no ter funo.
A regulao transcripcional do gene de cadeia ocorre de um modo bastante semelhante da cadeia
:

Existem promotores a 5 de cada gene V que apresentam baixo nivel de actividade e so


responsveis por alto nivel de transcrio de clulas T especificas quando em proximidade com
um enhancer localizado 3 do gene C;
A incapacidade de rearranjar com sucesso a cadeia do TCR em cada cromossoma leva a uma
falha na seleco positiva e estes timcitos morrem por apoptose pois no fizeram um rearranjo
produtivo.

A expresso do gene TCR cedo na etapa duplo-positiva leva formao do TCR completo, que
expresso na superficie celular em associao com proteinas CD3 e . A expresso coordenada das
proteinas CD3 e e a montagem de compexos TCR intactos so necessrias para a expresso na
superficie. O rearranjo de genes TCR resulta na deleco do locus que se encontra entre segmentos
V. Como resultado, esta clula no capaz de se tornar uma clula T .
A expresso de genes Rag e recombinao seguinte de genes TCR cessa depois desta etapa de
maturao e as primeiras clulas a expressar TCRs encontram-se no crtex tmico, sendo esta expresso
baixa comparada com clulas T maduras. Por virtude da sua expresso de complexos TCR completos, as
clulas duplo-positivas so capazes de responder a antignio e so sujeitas a seleco positiva e
negativa.
Clulas que sofrem esta seleco com sucesso progridem para se
maturarem em clulas CD4+ ou CD8+, que so designadas timcitos
single-positivos. Assim, as etapas da maturao das clulas T podem ser
distinguidas pela expresso de CD4 e CD8. Esta maturao fenotipica
acompanhada pela maturao funcional:

Clulas CD4+ - adquirem a habilidade de produzir citocinas em


resposta estimulao de antignio subsequente e expressar
molculas efectoras (como ligando CD40) que ajudam os
linfcitos B e os macrfagos;

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Clulas CD8+ - tornam-se capazes de produzir molculas que matam outras clulas.

Timcitos single-positivos maduros entram na medula timica e depois deixam o timo para povoarem
tecidos linfticos perifricos.

Marcadores de Superficie
Apesar dos co-receptores CD4 e CD8 no serem expressos nas fases inicias da etapa duplo-negativo, o
programa de diferenciao progride e marcado por alteraes na expresso de molculas de
superficie como c-Kit, CD44 e CD25:

A populao de timcitos inicial apresenta c-Kit, o receptor de factores de crescimento para as


clulas estaminais, e CD44, uma molcula de adeso envolvida no povoamento do timo. CD25, a
cadeia do receptor de IL-2, tambm surge cedo na etapa duplo-negativa. Durante este
periodo, as clulas esto a proliferar mas os genes TCR continuam no rearranjados;
A clula pra de expressar c-Kit, reduz marcadamente a expresso de CD44, e liga a expresso
de genes Rag-1 e Rag e comea a rearranjar genes TCR;
A partir daqui, a clula expressa TCR ou pr-TCR, tal como proteinas acessrias do complexo TCR
e tambm co-receptores.

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Processos de Seleco Durante a Maturao das Clulas T


A seleco de clulas T em desenvolvimento dependente do reconhecimento do antignio
(complexos pptido-MHC) no timo e responsvel por preservar clulas uteis e eliminar aquelas que
podem ser potencialmente perigosas:

O reportrio de cluls T imaturo, no seleccionado, consiste em clulas cujo receptor capaz de


reconhecer qualquer pptido antignico (prprio ou estranho) apresentado por qualquer
molcula MHC (prpria ou estranha), mas tambm podem ser expressos receptores incapazes
de detectar qualquer complexo MHC-antignio;
Em todos os individuos, as unicas clulas T teis so aquelas especificas para pptidos estranhos
apresentados por molculas MHC prprias;
Em todos os individuos, as clulas T que reconhecem antignios prprios com alta avidez podem
levar a auto-imunidade.

Assim, os processos de seleco actuam no reportrio de clulas T imaturas para assegurar que apenas
as clulas uteis completam o processo de maturao. Quando timcitos duplo-positivos primeiro
expressam TCRs , esses receptores encontram pptidos prprios (os unicos pptidos normalmente
presentes no timo) apresentados por molculas MHC prprias (as unicas molculas MHC disponiveis
para apresentar pptidos) prinicpalmente nas clulas epiteliais timicas no crtex mas tambm em
clulas dendriticas nesta localizao. Esta apresentao pode levar a dois resultados:

Seleco positiva processo no qual timcitos cujo TCR liga com baixa avidez (i.e., fracamente)
a complexos pptido-MHC prprios so estimulados a sobreviver, e timcitos cujos receptores
no reconhecem molculas MHC prprias so induzidos a morrer por uma via de apoptose
geral. Isto assegura que as clulas T que maturam so restritas a MHC prprio. Este processo
tambm fixa a restrio a MHC classe I ou classe II dos subgrupos de clulas T, assegurando que
as clulas T CD8+ sejam especificas para pptidos apresentados por molculas MHC classe I e as
clulas T CD4+ sejam especificas para pptido apresentados por molculas MCH classe II;

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Seleco negativa processo no qual timcitos cujos TCRs se ligam foretmente a pptidos
antignicos prprios em associao com molculas MHC prprias so eliminados. Isto elimina
clulas T em desenvolvimento que so altamente autorreactivas contra antignios prprios que
esto presentes em elevadas concentraes no timo.

O resultado final destes processos de seleco que o reportrio de clulas T maduras que deixam o
timo restrito a MHC prprio e tolerante a vrios antignios prprios.
Seleco Positiva de Timcitos: Desenvolvimento da Restrio MHC
A seleco positiva funciona de modo a promover a sobrevivncia e expanso selectiva de timcitos
com TCRs restritos a MHC prprio:

Timcitos duplo-positivos so produzidos sem


qualquer estimulao antignica e comeam a
expressar
TCRs

com
especificidades
aleatoriamente geradas;
No crtex timico, essas clulas imaturas encontram
clulas epiteliais que apresentam uma variedade de
pptidos prprios ligados a molculas MHC classe I e
classe II;
Se o TCR numa clula reconhecer pptidos
apresentados por molculas MHC classe I e ao
mesmo tempo CD8 interagir com molculas MHC
classe I, essa clula T recebe sinais que previnem a
sua morte e promovem a sua maturao continuada;
Para proceder na via de maturao, a clula T deve
continuar a expressar TCR e CD8 mas pode perder a
expresso de CD4;
O resultado o desenvolvimento de uma clula T
CD8+ restrita a MHC classe I.

Um processo inteiramente anlogo leva ao desenvolvimento de clulas T CD4+ restritas a MHC classe II
e qualquer clula T que expressa u TCR que no reconhece uma molcula MHC carregada com pptido
no timo morrer e ser perdida.
Os papeis essenciais das molculas MHC e da especificdade do TCR na seleco positiva foram
establecidos por uma variedade de linhas experimentais:

Se um timo de uma estirpe pura for transplantado em animais quimricos de outra estirpe, as
clulas T que maturam so restritas ao tipo de MHC apresentado pelo timo. Os timos
tranplantados tm de ser irradiados ou tratados com drogas citotxicas para matar todos os
macrfagos, clulas dendriticas e clulas linfides residentes originrias da medula ssea. De
novo, clulas T desenvolvem-se nestes timos, e a sua habilidade para reconhecer antignios
restrita a produtos de genes MHC expressos nas clulas epiteliais timicas e no necessariamente
a produtos de genes expressos nas clulas extratimicas. Assim, o epitlio timico o elemento do
hospedeiro critico para seleco positiva (i.e., o desenvolvimento de padres de restrio MHC
das clulas T);

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Se um TCR transgnico com uma restrio MHC conhecida expresso numa estirpe de
ratinho que tambm expressa o alelo MHC para o qual o TCR especifico, as clulas T iro
maturar e popular tecidos linfides perifricos. Se o ratinho de outro hapltipo MHC e no
expressa a molcula MHC que o TCR transgnico reconhece, existrio numeros normais de
timcitos CD4+CD8+ mas muito poucas clulas T maduras que expressam o TCR transgnico. Este
resultado demonstra que timcitos duplo-positivos devem expressar TCRs que se ligam a
molculas MHC prprias para serem positivamente seleccionadas.

Durante a transio de clulas duplo-positivas para single-positivas, os timcitos com TCRs restritos
para classe I tornam-se CD8+CD4- e as clulas com TCRs restritos para classe II tornam-se CD4+CD8-:

CD4 e CD8 funcionam como co-receptores com o TCR durante a seleco positiva e reconhecem
molculas MHC quando os TCRs reconhecem complexos pptido-MHC;
Sinais apartir do complexo TCR e dos co-receptores funcionam em conjunto para promover a
sobrevivncia dos timcitos e esta funo das molculas CD4 e CD8 semelhante aos seus
papeis na activao de clulas T maduras.

Nesta etapa da maturao, existir uma perda aleatria do gene CD4 ou CD8, e apenas aquelas clulas
que expressam o co-receptor correcto (i.e., CD4 numa clula T restrita a classe II ou CR8 numa clulas
restrita a classe I) continuaro a maturao. tambm possivel que a expresso do co-receptor errado
seja activamente suprimida, mas como isto alcanado desconhecido. Vrias linhas experimentais
demonstraram como ocorre esta transio:

Ratinhos KO que no expressam MHC classe I nas clulas epiteliais timicas no desenvolvem
clulas T CD8+ mas desenvolvem timcitos CD4+CD8- e clulas T CD4+. Inversamente, ratinhos
deficientes em MHC classe II no desenvolvem clulas T CD4+ mas desenvolvem clulas T CD8+.
Estes resultados demonstram que as clulas epiteliais timicas devem expressar molculas MHC

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classe I ou classe II para seleccionar positivamente clulas single-positivo CD8+ ou CD4+,


respectivamente;
Em ratinhos transgnicos que expressam TCRs restritos a MHC classe II, as clulas T que se
desenvolvem so quase exclusivamente CD4+, mesmo havendo numeros normais de timcitos
CD4+CD8+. Inversamente, se um TCR trasngnico restrito a classe I, as clulas T que maturam
so CD8+. Assim, o co-receptor e a especificidade MHC do TCR devero igualar se um linfcito se
est a desenvolver numa clula T madura.

Para alm disto, os pptidos ligados s molculas MHC nas clulas epiteliais timicas tm um papel
essencial na seleco positiva. Estes pptidos associados a MHC nas clulas apresentadoras de antignio
timicas provavelmente tm duas funes nas seleco positiva:

Promovem a expresso estvel das molculas MHC na superficie da clula;


Influenciam as especificidades das clulas que so seleccionadas.

Obviamente, o timo no capaz de conter os antignios estranhos aos quais um individuo capaz de
responder. Assim, pptidos estranhos no podem estar envolvidos na seleco positiva de clulas T que
por fim recenhocero esses pptidos. No entanto, pptidos prprios so necessrios para a seleco
positiva e o papel exacto que tm neste processo foi sujeito de numerosos estudos.
Para resolver o papel dos pptidos na seleco de clulas T, foi necessrio desenvolver sistemas nos
quais a gama de pptidos apresentados a timcitos em desenvolvimentos era limitada e fcil de
manipular experimentalmente:

Para a seleco positiva dependente de MHC


classe I, isto foi conseguido pelo o uso de ratinhos
deficientes em TAP-1 ou 2-microglobulina.
Nestes ratinhos, as molculas classe I so
instveis e no so carregadas com pptidos
citoslicos, mas podem ser carregadas com
pptidos exogenamente adicionados. Se timos de
tais ratinhos forem cultivados sem a adio de
pptidos, poucas celulas maturam. A adio de
pptidos
aumenta
drasticamente
o
+
desenvolvimento de clulas T CD8 singlepositivo, indicando seleco positiva de timcitos
que expressam TCRs restritos a MHC classe I;
Uma descoberta chave nestas experincias foi que um ou poucos pptidos induziam a seleco
positiva de um grande reportrio de clulas T CD8+ que podiam potencialmente reconhecer
vrios pptidos no relacionados. Contudo, a ausncia de pptido era suficiente para gerar um
numero normal de clulas T maduras. Para alm disso, misturas complexas de pptidos
induziam a maturao de mais clulas T CD8+ do que os pptidos unicos.

A concluso retirada destas experincias que:

Pptidos ligados a molculas MHC so necessrios para a seleco positiva de clulas T e alguns
pptidos so melhores que outros no suporte deste processo.

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A descoberta de que pptidos diferem no reportrio de clulas T que seleccionam sugerem que a
especificidade do reconhecimento de antignio, e no apenas o reconhecimento de MHC, tm alguma
papel na seleco positiva, pois o reconhecimento fraco, ou com baixa avidez, de pptidos no timo
protege clulas T imaturas de uma via de morte apopttica e permite que as clulas completem a sua
maturao.
Este modelo de seleco positiva baseado no fraco reconhecimento de antignios prprios levanta uma
questo fundamental:
Como que a seleco positiva dirigida por antignios prprios produz um reportrio de clulas T
maduras especificas para antignios estranhos?

A resposta mais provvel que a seleco positiva permite que diferentes clones de clulas T
sobrevivam e se diferenciem, e que vrias clulas T que reconhecem pptidos prprios com
baixa avidez iro, aps a maturao, reconhecer com sucesso pptidos estranhos com uma
afinidade suficientemente elevada para serem activadas e gerarem respostas imunes.

Seleco Negativa de Timcitos: Tolerncia Central


A seleco negativa de timcitos funciona induzindo a morte apopttica de clulas cujos receptores
reconhecem complexos pptido-MHC no timo com alta avidez:

Entre as clulas T duplo-positiva que so geradas no timo, algumas podero expressar TCRs que
reconhecem antignios prprios com alta afinidade;
Os pptidos presentes no timo so pptidos prprios derivados de proteinas antignicas
altamente expressas tal como de algumas proteinas restritas a tecidos particulares;
Em clulas T imaturas, a consequncia do reconhecimos de antignios com alta avidez a
induzo da apoptose;
Assim, os timcitos imaturos que expressam receptores de alta afinidade para antignios
prprios no timo so eliminados, resultando na seleco negativa do reportrio de clulas T.

Este processo elimina as clulas T auto-reactivas potencialmente mais perigosas e um dos


mecanismos que asseguram que o sistema imune no responde a vrios antignios prprios, uma
propriedade desiganada de auto-tolerncia. Esta tolerncia induzida nos linfcitos imaturos pelo
reconhecimento de antignios prprios nos rgos linfticos generativos (ou centrais) tambm
chamada de tolerncia central, para ser contrastada com a tolerncia perifrica induzida nos linfcitos
maduros por antignios prprios nos tecidos perifricos.
A prova formal da eliminao de clones de clulas T reactivos para antignios no timo (tambm
designada deleco clonal) surgiu de vrias linhas experimentais que permitiram que os investigadores
observassem os efeitos do reconhecimento de antignios prprios por um grande numero de clulas T
em desenvolvimento:

Quando ratinhos transgnicos para TCR so expostos ao pptido para o qual o TCR especifico,
uma grande quantidade de morte celular induzida no timo e ocorre um bloqueio no
desenvolvimento de clulas T maduras que expressam TCR transgnico;
Uma deleco semelhante de clulas T imaturas observado se ratinhos transgnicos que
expressam um TCR especifico para um pptido antignico conhecido so criados com ratinhos
que expressam esse antignio ou se os ratinhos so injectados com grandes doses de antignio.
Isto pode ser mimisado in vitro cultivando timos intactos de ratinhos transgnicos para TCR com

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altas concentraes de pptido para o qual o TCR especifico. Em todos estes exemplos, existe
um bloqueio da maturao das clulas T depois do etapa cortical duplo-positiva,
presumivelmente porque timcitos imaturos expressam o TCR transgnico, reconhecem o
antignios nas clulas apresentadoras de antignio e so eliminadas. A deleco de clulas T
imaturas auto-reactivas ocorre quando o TCR num timcito CD4+CD8+ se liga fortemente a um
pptido prprio apresentado por outra clula timica.
A seleco negativa pode ocorrer tanto na etapa duplo-positiva no cortex e em clulas T single-positivas
acabadas de gerar na medula. As clulas apresentadoras de antignios timicas que medeia a seleco
negativa so principalmente clulas dendriticas e clulas epiteliais timicas medulares, enquanto as
clulas epiteliais corticas so especialmente efectivas na induo da seleco negativa:

Clulas T duplo-positivas so levadas para a medula timica pelas quimiocinas especificas CCR7,
as CCL21 e CCL19;
Na medula, clulas epiteilais timicas medulares expressam uma proteina nuclear designada AIRE
(regulador autoimune) que induz a expresso de um numero de genes tecido-especificos no
timo, fazendo assim um hospedeiro de pptidos tecido-especificos disponiveis para
apresentao no timo a clulas T duplo-positivas e single-positivas durante o processo de
seleco negativa.

O factor chave determinante da escolha entre


seleco positiva e negativa a fora de
reconhecimento do antignio:

Baixa avidez leva a seleco positiva;


Alta avidez leva a seleco negativa.

As molculas CD4 e CD8 provavelmente tm um papel na seleco negativa, como tm na seleco


positiva, porque estes co-receptores participam no reconhecimento de molculas MHC que apresentam
pptidos prprios.
A base celular da seleco negativa no timo a induo de morte por apoptose por sinais activos
promotores de morte que so gerados quando o TCR de timcitos imaturos se ligam com alta afinidade
ao antignio. Isto contrasta com a via de apoptose induzida pela ausncia de seleco positiva. A
induo por sinalizao do TCR de uma proteina pr-apopttica designada Bim tem um papel
importante na induo de dano mitocondrial e apoptose de timcitos durante a seleco negativa.
O reconhecimento de antignios prprios no timo capaz de gerar tambm uma populao de clulas T
reguladoras (clulas T naturalmente reguladoras), cuja funo prevenis reaces autoimunes. No
claro como um antignio prprio causa deleco de algumas clulas T imaturas e o desenvolvimento de
clulas T reguladoras a partir de outros timcitos imaturos com a mesma especificidade.

Linfcitos T
Os timcitos que expressam TCR e so linhagens separadas com um precursor comum. Nos timos
fetais, os primeiros rearranjos de genes TCR envolvem os loci e e a recombinao destes loci
procegue de um modo semelhante ao observado para os outros genes do outro TCR, apesar da ordem
de rearranjos parecer ser menos rigido do que nos outros loci.
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Clulas T que expressam funcionalmente cadeias e no expressam TCRs , e vice versa. A


independncia destas linhagens indicada por vrias linhas de evidncia:

Clulas T maduras que expressam normalmente contm rearranjos de genes com quadro
de leitura errado, indicando que essas clulas nunca foram capazes de expressar receptores ;
Ratinhos KO para o gene da cadeia do TCR desenvolvem numeros normais de clulas T e
ratinhos KO para o gene da cadeia do TCR desenvolvem numeros normais de clulas T .

A diversidade do reportrio de clulas T tericamente maior que a do reportrio de clulas T ,


em parte devido permisso de juno D-D. Pradoxalmente, contudo, a diversidade actual de TCRs
expressos limitada porque apenas alguns dos segmentos V, D e J disponiveis so usados nas clulas T
maduras, por razes desconhecidas. A diversidade limitada faz lembrar a diversidade limitada do
subgrupo B-1 dos linfcitos B e sugere que as clulas T funcionam como defensores iniciais contra
um numero limitado de micrbios comummente encontrados nas barreiras epiteliais (defesa inata).
Em humanos, menos de 5% das clulas T apresentam o heterodimero e a percentagem de clulas T
nos rgos linfticos de ratinho apresentam cerca de 1% a 3%. Em adio sua presena no sangue e
nos tecidos linfticos, estas clulas tambm aparecem na pele, no epitlio intestinal e no epitlio
pulmonar, constituindo mais de 1% das clulas da epiderme de pele de ratinho.
As clulas T caracterizam-se por:

No so restritas a MHC;
No expressam os co-receptores CD4 e CD8 presentes nas populaes de clulas T .

Linfcitos T Naturalmente Assassinos (NK -T Cells)


As clulas T naturalmente assassinas no so restritas a MHC e no
reconhecem pptidos apresentados por clulas apresentadoras de antignios:

Expressam TCRs ;
So restritas a CD1;
Apresentam uma marcador superficial encontrados nas clulas
naturalmente assassinas, da o seu nome.

Os TCRs das clulas T-NK reconhecem lipidos antignicos ligados fenda das
molculas CD1. As molculas CD1 so molculas semelhantes a MHC classe I
feitas de uma cadeia pesada e 2-microglobulina. A cadeia pesada apresenta
uma fenda construida por residuos hidrofbicos que consegue ligar e apresentar lipidos antignicos.
Estes lipidos antignicos podem ser derivados de micrbios endocitados ou de lipidos prprios.
Uma grande quantidade de clulas T-NK restritas a CD1 apresentam um receptor de clulas T
invariante, resultante de um unico e esterotipico rearranjo de genes de cadeia do TCR. para alm
disso, as clulas T-NK secretam citocinas e participam na defesa do hospedeiro, mas so tambm
relevantes de um ponto de vista regulatrio no contexto de auto-imunidade e alergia.
Clulas T em desenvolvimento a expressar TCRs invariantes sero positivamente selecionados no
crtex timico na etapa duplo-positiva por CD1 e lipidos prprios apresentados na superficie de outros
timcitos corticais. Essas clulas T-NK selecionadas no expressam CCR7 e, assim, no migram para a

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medula como outras clulas T convencionais. Estas clulas recebem instrues para sair do timo e se
alojarem num numero de locais perifricos, principalmente o figado.

Activao dos Linfcitos T


Linfcitos T naive alojam-se nos rgos linfticos secundrios, onde podem encontrar antignios
apresentados por clulas dendriticas maduras em molculas MHC classe I ou classe II e serem activados.
Isto resulta na expano da pool de linfcitos especificos para um antignio e na diferenciao destas
clulas em linfcitos efectores e de memria:

Proteinas antignicas que atravessam as barreiras epiteliais so capturadas por clulas dendriticas
imaturas e transportadas para os nodos linfticos, e os antignios que entram no sangue so
capturados pelas clulas dendriticas e levados para o bao. Se estes patognios estiverem associados a
PAMPs, como ligandos para os TLRs, as clulas dendriticas so activadas e induzidas a expressar coestimuladores como proteinas B7 na superficie da clula. As clulas dendriticas que encontraram
micrbios e interanlizaram os seus antignios comeam a maturar e a migrar para as zonas de clulas T
dos rgos linfticos secundrios como os nodos linfticos.
Assim, a partir daqui, o processo de activao das clulas T ocorre do seguinte modo:

As clulas T naive a as clulas dendriticas so levadas para as zonas de clulas T por quimiocinas
que activam o receptor de quimiocinas CCR7;
Quando alcanam estas reas de clulas T, as clulas dendriticas apresentam antignios em
molculas MHC e tambm expressam co-estimuladores que podem fornecer sinais secundrios
s clulas T naive;
Quando uma clula T naive com a especificidade correcta reconhece antignios, na forma de
complexos pptido-MHC, e recebe sinais via a interaco de B7 com receptores de coestimuladores na clula T, essa clula T naive activada.

Clulas T estimuladas por antignios que receberam o sinal 1 atravs do receptor de antignio e o sinal
2 via receptores de co-estimuladores podem ser induzidas a secretar citocinas e a expressar receptores
de citocinas. A citocina interleucina-2 (IL-2) fornece sinais autocrinos a clulas T activadas, levando
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expanso de clones especificos para o antignio, e, em conjunto com outras citocinas produzidas pelas
clulas T e outras APCs, tambm estimula a diferenciao das clulas T em clulas efectoras e de
memria. Algumas destas clulas T activadas deixam os rgos linfticos onde a activao ocorreu e
entram na circulao. Outras clulas T CD4+ ficam no rgo linftico, onde ajudam linfcitos B a
diferenciarem-se em plasmcitos.

Depois, as clulas T efectoras reconhecem antignios em rgos linfticos ou em tecidos no-linfticos


perifricos e so activados a desempenhar as suas funes efectoras. Estas clulas so capazes de
migrar para qualquer local de infeco ou inflamao. Aqui, estas clulas encontram de novo o
antignio para o qual so especificos e respondem de modo a eliminar a fonte de antignio:

As clulas T efectoras CD4+ subgrupos expressam molculas membranares e secretam citocinas


que activam (ajudam) macrfagos a matar micrbios fagocitados. Algumas clulas T CD4+ helper
continuam nos rgos linfticos e ajudam clulas B a diferenciar-se em clulas que secretam
anticorpos para ligar a antignios;
Linfcitos T CD8+ citotxicos (CTLs), as clulas efectoras do subgrupos CD8, matam clulas
infectadas e tumores, clulas que apresentam antignios associados a MHC classe I.

As clulas T de memria so uma populao expandida de clulas T especificas para antignios que so
capazes de responder rapidamente a antignios e diferenciar-se em clulas efectoras que eliminam o
antignio. Em geral, a activao de clulas T de memria dependenapenas da ligao do TCR, e sinais
secundrios co-estimuladores no so necessrios nesta etapa de diferenciao.
A resposta das clulas T decai depois do antignio ser eliminado. Este decaimento importante para
que o sistema imune retome o estado de descanso, ou homeostasia. Isto acontece principalmente
porque a maioria das clulas T activadas por antignio morrem por apoptose pois, enquanto o antignio
eliminado, os linfcitos so privados de estimulos de sobrevivncia que so normalmente fornecidos
prlo antignio e por co-estimuladores e citocinas produzidos durante as reaces inflamatrias ao
antignio.
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A sequncia de eventos nas respostas das clulas T CD4+ e CD8+ so fundamentalmente semelhantes.
No entanto, existem bastantes diferenas na iniciao e culminao destas respostas.

Activao dos Linfcitos T CD4 +


A diferenciao dos linfcitos T CD4+ naive em clulas efectoras da imunidade mediada por clulas
requer o reconhecimento do antignio e co-estimulao. A iniciao das respostas imunes mediadas
por clulas requer que as clulas T CD4+ e os antignio que elas reconhecem estejam presentes no
mesmo tecido linfide ao mesmo tempo. Isto alcanado pela recirculao de clulas T naive e pelo
transporte de antignios para os rgos linfticos:

Clulas T naive migram do sangue para rgos linfticos, de um rgo linftico para outro, e de
novo para o sangue, at que encontrem o antignio para o qual eles expressam receptores
especificos;
O antignio entregue nos nodos linfticos pela drenagem linftica e ao bao pelo sangue;
As clulas dendriticas tm um papel importante na recolha de antignios nos locais de infeco
e na migrao atravs dos vasos linfticos at aos nodos linfticos. Durante a sua migrao para
os nodos linfticos, as clulas dendriticas maturam e tornam-se eficientes clulas
apresentadoras de antignios (APCs).

Depois, a activao das clulas T CD4+ naives requer a apresentao de antignios pelas clulas
dendriticas. Assim que se encontram nos nodos linfticos, as clulas dendritica apresentam pptidos
derivados de proteinas antignicas endocitadas em associao com molculas MHC classe II a clulas T
CD4+ naive:

Reaces imunes mediadas por clulas T CD4+ so elicitadas por proteinas antignicas de
micrbios extracelulares que so ingeridos pelas clulas dendriticas, ou por proteinas
antignicas soluveis que so administradas com adjuvates, no caso das vacinaes, e recolhidas
pelas clulas dendriticas;
Estes antignios microbianos ou soluveis so internalizados em vesiculas pelas clulas
dendriticas e apresentadas em associao com molculas MHC classe II.

Alguns quimicos introduzidos atraves da pele tambm elicitam reaces de clulas T, deignadas
contact sensitivity reactinos. Acredita-se que estes quimicos se ligam e modificam proteinas prprias,
criando novos determinantes antignicos que so apresentados a clulas T CD4+ ou CD8+.
Em adio apresentao de antignios, as clulas dendriticas respondem a estruturas microbianas
pela expresso de altos niveis de co-estimuladores, como proteinas B7-1 e B7-2, que fornecem sinais
secundrios para a activao de clulas T, e pela secreo de citocinas como IL-2, que estimula a
deiferenciao de clulas T. Os sinais co-estimuladores so geralmente essenciais para a activao e
diferenciao das clulas T CD4+, sendo as CD8+ menos dependentes.
A proliferao das clulas T em resposta ao reconhecimento do antignio mediada principalmente por
uma via de crescimento autocrina, na qual a clula T que responde secreta as sua citocinas promotoras
do crescimento e tambm exprime receptores superficiais para essas citocinas. O principal factor de
crecimento autocrino da maior parte das clulas T a IL-2:

A produo de IL-2 e a expresso de receptores de alta afinidade para a IL-2 requer o


reconhecimento do antignio por clulas T especificas tal como co-estimulao;

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Assim, as clulas que reconhecem antignios produzem IL-2 e tambm respondem


preferencialmente a esta citocina, assegurando que as clulas T especificas para o antignio so
as que mais proliferam.

O resultado da proliferao de clulas T naive a expanso clonal, que gera a partir de uma pequena
pool de linfcitos naive especificos o grande numero de clulas necessria para eliminar o antignio.
Estes numeros decaem rapidamente enquanto o antignio eliminado e, depois da resposta imune
retroceder, o numero de clulas de memria sobreviventes especificas para o antignio na ordem de
1 em 104.
Enquanto os antignios so eliminados, vrias clulas T activadas morrem por apoptose, fornecendo
assim um mecanismo homeosttico que leva o sistema imune ao seu estado basal de descanso depois
na infeco ser eliminada. Algumas das clulas T que proliferaram diferenciam-se em clulas efectoras e
outra progenia de linfcitos T estimulados por antignios diferenciam em clulas de memria, que
apresentam grande tempo de vida e respondem rapidamente a antignios.

Activao das Clulas T CD8 +


A activao de clulas T CD8+ naive tambm requer reconhecimento de antignios e sinais secundrios,
mas a natureza dos sinais secundrios diferente da das clulas CD4+. Para serem estimuladas a se
proliferar e diferenciar em CTLs efectoras, clulas T CD8+ naive devem reconhecer pptidos antignicos
associados a MHC classe I e tambm encontrar co-estimuladores nas APCS ou sinais fornecidos pelas
clulas T helper.
As clulas dendriticas tambm tm um papel importante na activao de clulas T CD8 + naive:

A resposta das clulas T CD8+ elicitada por pptidos microbianos que esto presentes no
citosol de clulas infectadas e so apresentados por molculas MHC classe I. Os micrbios que
produzem antignios citoslicos so tipicamente virus, que expressam proteinas no citoplasma
de clulas infectadas;
As clulas T CD8+ tm de responder tambm a algumas bactrias fagocitadas e virus se esses
micrbios ou suas proteinas antignicas forem transportadas para fora dos fagossomas para o
citosol.
Clulas dendriticas que expressam esses antignios citoslicos so capazes de activar clulas T
CD8+ naives, do mesmo modo que iniciam as respostas das clulas T CD4+

Contudo, a induo da resposta das clulas T CD8+ tem um problema especial porque o antignio que
estas clulas reconhecem pode ser poduzido num tipo de clula que no uma APC profissional e no
capaz de activar clulas T naive. De modo a iniciar a resposta, o antignio tem acesso via MHC classe I
das clulas dendriticas. As clulas dendriticas tm a especial habilidade de capturar e ingerir clulas
infectadas por virus ou tumorais, e apresentar os antignios virais ou tumorais a clulas T CD8 + naives:

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Nesta via, os antignios ingeridos so transportados das vesiculas para o citosol, donde os
pptidos entram na via classe I, uma caracteristica unica das clulas dendriticas e designada de
apresentao cruzada.

A activao completa das clulas T CD8+ e a sua diferenciao em CTLs funcionais pode requerer a
participao de clulas TH CD4+. Isto , as clulas TH fornecem sinais secundrios s clulas T CD8+. O
requerimento de clulas TH pode variar de acordo com o tipo de exposio do antignio:

No cenrio de uma resposta imune inata forte a um micrbio, se APCs profissionais esto
directamente infectadas pelo micrbio, ou se a apresentao cruzada de antignios microbianos
eficiente, a ajuda das clulas TH CD4+ pode no ser necessria;
Clulas TH CD4+ podem ser necessrias para a resposta das CTLs a infeces de virus latentes,
transplantes de rgos, e tumores, sendo que todos tendem a gerar reaces imunes inatas
fracas.

As clulas TH podem promover a activao de clulas T CD8+ atravs de vrios mecanismos:

Clulas TH podem secretar citocinas que estimulam a diferenciao de clulas T CD8+;


Clulas TH estimuladas por antignios expressam um membro da familia de TNFs designado
ligando CD40 (CD40L), que se liga a CD40 nas APCs e activa estas APCs a serem mais eficientes
na estimulao da diferenciao de clulas T CD8+.

Os efeitos das clulas TH parecem ser principalmente na diferenciao de clulas CD8+ em clulas de
memria mais funcioanis, e menores nas expanso clonal inicial e no desenvolvimento inicial das CTLs.
Antes da exposio ao antignio, a frequncia de clulas T CD8+ naives especificas para qualquer
antignio de 1 em 105 a 106 linfcitos. A seguir exposio ao antignio, o numero de clulas T CD8 +
especificas para esse antignio aumenta para mais de 1 em 10.

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Estudos em ratinhos revelaram uma grande expanso no esperada de clulas T CD8 + durante a fase
aguda de infeces com micrbios intracelulares. Apesar de ter sido mais dificil quantificar a expanso
de clulas T CD4+ estimulada por antignios, ela parece ser muito menor expanso clonal das clulas
T CD8+:

Isto seria de esperar, porque CTLs CD8+ desempenham as suas funes efectoras atacando
directamente clulas infectadas, enquanto clulas TH CD4+ unicas secretam citocinas que
activam vrias clulas efectoras como macrfagos e, assim, um numero bastante maior de CTLs
so necessrias para a imunidade protectiva.

Vrias citocinas funcionam como factores de crescimento para dirigir a expanso clonal das clulas T
CD8+. Estas incluem IL-12, IL-15 e IL-7.

Papel dos Co-estimuladores na Activao das Clulas T


A proliferao e diferenciao das clulas T naive requer sinais fornecidos por molculas nas APCs,
desigandas co-estimuladores, em adio a sinais induzidos por antignios:

O sinal secundrio para a activao das clulas T designada co-estimulao porque funciona
em conjunto com o antignio para estimular a clula T;
Na ausncia de co-estimulao, as clulas T que encontram antignios no respondem e
morrem por apoptose ou entram num estado de anergia.

A via co-estimulatria melhor caracterizada na activao das clulas T envolve a molcula de superficie
CD28 das clulas T, que se liga s molculas co-estimulatrias B7-1 (CD80) e B7-2 (CD86) expressas em
APCs activadas:

CD28 fornece sinais que aumentam as respostas das clulas T a antignios, incluindo
sobrevivncia celular, produo de citocinas como IL-2 e diferenciao de clulas T naive em
clulas efectoras e de memria;
B7-1 e B7-2 so estruturalmente semelhantes a glicoproteinas de cadeia unica integrais da
membrana, cada com dois dominios Ig-like extracelulares, apesar de na superficie celular a B7-1
existir como dimero e B7-2 como um monmero. As molculas B7 so expressas principalemnte
nas APCs, incluindo clulas dendriticas, macrfagos e linfcitos B. Esto ausentes ou so
expressas em baixos niveis em APCs em descanso e so indusidas por vrios estimulos.

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O papel essencial dos co-estimuladores B7 na activao das clulas T foi estabelecido por vrios tipos
de experincias:

In vitro, populaes purificadas de clulas T CD4+ respondem a antignios secretando citocinas e


proliferando quando o antignio apresentado pelas APCs que expressam molculas B7 mas
no quando o antignio apresentado por APCs que no expressam B7. Um anticorpo
inactivador que se liga a CD28 capaz de fornecer um sinal so-estimulador artificial e induzir as
respostas das clulas T mesmo quando as APCs no apresentam molculas B7;
Se uma populao de clulas T CD4+ cultivada com agentes que fazem cross-linking com TCR,
como anticorpos anti-CD3, as clulas T produzem muito poucas citocinas e no proliferam. De
novo, se um sinal so-estimulador adicional fornecido por anitcorpos que se ligam a CD28, a
clula T capaz de responder. O sinal co-estimulatrio fornecido pelo anticorpo anti-CD28 na
ausncia de sinal TCR no induz por si s a reposta das clulas T;
Ratinhos KO que no apresentam B7-1 e B7-2 so deficientes em respostas dependentes de
clulas T imunizao com proteinas antignicas.

A expresso de co-estimuladores regulada e assegura que as respostas dos linfcitos T so iniciadas


no momento e local adequado:

A expresso de co-estimuladores B7 aumentada por produtos microbianos que se ligam a TLRs


e por citocinas como IFN- produzidas durante as reaco imunes inatas a micrbios. A induo
de co-estimuladores por micrbios e por citocinas da imunidade inata promove as respostas das
clulas T a antignios microbianos;
Em adio, clulas T activadas expressam CD40L na sua superficie, que se liga a CD40 expresso
nas APCs e fornece sinais que aumentam a expresso de co-estimuladores B7 nas APCs.

De todas a potenciais APCs, as clulas dendriticas maduras expressam o niveis mais elevados de coestimuladores e, como resultado, so os estimuladores mais potentes de clulas T naive (que so
completamente dependentes da co-estimulao para activao). Os adjuvantes tm como papel
estimular a expresso de co-estimuladores nas APCs e a ausncia de co-estimuladores em APCs no
activadas nos tecido normais contribui para a manuteno de tolerncia a antignios prprios. como
tais APCs tecidulares so capazes de apresentar antignios prprios a clulas T, a falta de expresso de
co-estimuladores assegura que clulas T potencialmente auto-reactivas so sejam activadas e se
tornem anrgicas.
Clulas T efectoras e de memria anteriormente activadas so menos dependentes da co-estimulao
pela via B7:CD28 que as clulas naive. Esta propriedade das clulas efectoras e de memria permite que
elas respondam a antignios apresentados por vrias APCs que possam residir em tecidos no-linfides
e que expressam menores niveis de B7. Assim, a diferenciao de clulas T CD8 + em CTLs efectoras
requer co-estimulao mas CTLs efectoras so capazes de matar outras clulas que no expressam coestimuladores.
Uma funo essencial da via B7:CD28 a produo de clulas T reguladoras:

Clulas T reguladoras so clulas T CD4+CD25+ que so capazes de suprimir a funo das clulas
T efectoras;
Uma grande proporo destas clulas desenvolvem-se no timo e so conhecidas como clulas T
naturalmente reguladoras;
O desenvolvimento de clulas T naturalmente reguladoras requer B7 e CD28.

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O mecanismo bioquimico pelo qual interaces CD28:B7 promovem a activao das clulas T
incompletamente conhecido:

Sinais mediados por CD28 aumentam a produo de citocinas, especialmente o factor de


crescimento de clulas T autcrino IL-2. Isto ocorrer por uma combinao de transcrio
aumentada e estabilizao do mRNA de IL-2;
Ainda, sinais CD28 promivem a sobrevivncia de clulas T, em parte por aumento da expresso
da proteina anti-apottica Bcl-x.

A via CD28:B7 de co-estimulao o prottipo de uma familia muito maior de receptores e ligando que
funcionam para estimular e inibir as clulas T.

Uma proteina designada ICOS (co-estimulador induzivel) homlogo do CD28 e deve o seu
nome ao facto de ser induzido nas clulas T aps a activao. O ligando para ICOS homlogo
de B7-1 e B7-2. ICOS parece ser particularmente importante na estimulao da produo de
certas citocinas, notavelmente IL-10, e na activao de clulas T efectoras previamente
diferenciadas;
Uma proteina designada CTLA-4 (CD152) tambm homloga do CD28, liga-se a B7-1 e B7-2, e
expressa em clulas T activadas. As contrrio do CD28, CTLA-4 funciona para terminar as
respostas das clulas T e tem um papel importncia da auto-tolerncia e se for inibido a
resposta das clulas T no termina.

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Para elm desta via, a interaco de CD40L nas clulas T com


CD40 nas APCs melhora a activao das clulas T. Isto ocorre
porque o compromisso de CD40 nas APCs activa as APCs para as
tornar mais potentes, talvez por aumentar a expresso de
molculas B7 e a secreo de citocinas como IL-2, que promove
a diferenciao das clulas T. Assim, a via CD40 amplifica
indirectamente as respostas das clulas T e no funciona como
uma via de co-estimulao por si s:

Clulas T naive so activadas por complexos pptidoMHC em APCs previamente activadas por PAMPs em
TLRs;
O reconhecimento do antignio pelas clulas T em
conjugao com a activao de CD28 induz a expresso
de ligando CD40 (CD40L) nas clulas T activadas;
CD40L liga-se a CD40 nas APCs e estimula a expresso de
molculas B7 e a secreo de citocinas que activam as
clulas T;
Assim, CD40L nas clulas T torna as APCs melhor APCs e
as vias B7 e CD40 estimulam-se mutuamente.

Muitas outras molculas superficiais das clulas T, incluindo CD2 e integrinas, fornecem sinais coestimulatrios in vitro, mas o seu papel fisiolgico em ratinhos e humano menos claro.

Traduo do Sinal pelo Complexo TCR


As vias de sinalizao das clulas T activam coordenadamente a transcrio de genes que so
silenciosos nas clulas naive e cujos produtos medeiam as respostas e funes das clulas T activadas. O
reconhecimento do antignio pelo TCR inicia uma sequncia de sinais bioquimicos nas clulas T que
resulta na activao transcripcional de genes particulares e a entrada das clulas no ciclo celular. Estes
genes exprossos nas clulas T depois do reconhecimento do antignio codificam vrias proteinas que
medeiam as respostas biolgicas destas clulas.
Factor de Transcrio

Vrias caracteristicas gerais importantes da traduo do sinal das clulas T esto j establecidas:

A activao das clulas clulas T involve a integrao de sinais a partir de multiplos receptores
o TCR fornece especificidade e os receptores de citocinas e co-estimuladores tm papeis
importantes na expanso clonal e diferenciao;

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As respostas bioquimicas iniciais ao reconhecimento do antignio consiste num agrupamento


de co-receptores com o receptor do antignio e a fosforilao de tirosinas de motivos ITAM
o TCR no apresenta actividade enzimtica intrinseca mas est associado com com o complexo
de proteinas CD3 e que ligam enzimas e contm ITAMs. A fosforilao de tirosinas nos ITAMs
inicia a traduo de sinal e a activao a jusante de tirosina cinases, que por sua vez fosforilam
residuos de tirosina noutras proteinas adpatadoras. Os eventos subsequentes na traduo de
sinal so gerados por recrutamento especifico de enzimas chave sendo que cada uma inica vias
de sinalizao a jusante distinctas;

Sinais a partir do receptor de antignio activam coordenadamente um numero de vias


bioquimicas importantes sendo as mais importantes a via das Ras-MAP cinase, a via da
proteina cinase C (PKC) e a via de clcio-calcineurina a activao destas enzimas ocorre em
minutos aps o reconhecimento do antignio. As enzimas activadas em cada uma destas vias
induzem a expresso de de vrios genes nas clulas T, um processo de leva vrias horas.

Formao da Sinapse Imunolgica


Quando o complexo TCR reconhece pptidos associados a MHC numa APC, vrias molculas da
superficie das clulas T e molculas de sinalizao intracelulares so rapidamente mobilizadas para o
local de contacto APC-clula T. Esta regio designada sinapse imunolgica, ou cluster supramolecular
de activao (SMAC):

As molculas das clulas T que se rapidamente mobilizadas para o centro da sinapse incluem o
complexo TCR (o TCR e as cadeias CD3 e ), os co-receptores CD4 ou CD8, receptores para coestimuladores (como CD28), enzimas como PKC- e proteinas adpatadoras que se associam com

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as caudas citoplasmticas dos receptores transmembranares. Nesta poro da sinapse,


designada c-SMAC (para cluster supramolecular de activao central), a distncia entre a
membrana plasmtica da clula T e a da APC cerca de 15 nm;
As integrinas ficam na periferia da sinapse, onde funcionam para estabilizar a ligao da clula T
com a APC, formando uma poro perifrica da SMAC designada p-SMAC. Nesta parte da
sinapse, as duas membranas esto a uma distncia de cerca de 40 nm.

c-SMAC
p-SMAC

Vrias molculas de sinalizao encontradas nas sinapses esto localizadas em regies da membrana
plasmtica que apresentam um conteudo lipidico diferente do resto da membrana e que so
designadas jangadas lipidicas (lipid rafts) ou micro-dominios enriquecidos em glicolipidos e colesterol.
A sinalizao do TCR e dos receptores co-estimuladores iniciada nestas jangadas e induzem rearranjos
do citoesqueleto que permitem que as jangadas se fundam e formem a sinapse imunolgica. devido
composio destas jangadas que os vrios componentes membranares da interaco de podem mover
na membrana.
As sinapses imunolgicas podem ter vrias funes durante e depois da activao da clula T:
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Apesar da traduo de sinal do TCR ser iniciada antes da formao da sinapse e ser necessria
para a formao da sinapse, a sinapse imunolgica por si s capaz de fornecer uma interface
unica para o desencadeamento do TCR. A activao da clula T necessita de ultrapassar os
probelmas de uma geralmente baixa afinidade dos TCRs para ligandos pptido-MHC e a
presena de poucas molculas MHC a apresentar qualquer pptido numa APC. A formao da
sinapse ultrapassa estes problemas. A sinapse representa um local no qual activaes repetidas
dos TCRs podem ser sustentadas com este baixo numero de complexos pptido-MHC na APC,
facilitando assim a sinalizao prolongada e efectiva da clula T;

A sinapse assegura a entrega especifica de granulos secretrios e sinais apropriados a APCs ou


alvos. A entrega vectorial de granulos secretrios contendo perforina e granzimas pelas CTLs a
clulas alvo ocorre na sinapse. De modo semelhante, interaces CD40L-CD40 so facilitadas
pela acumulao destas molculas na sinapse imunolgica. Algumas citocinas so tambm
secretadas de um modo directo na fenda sinptica;

A sinapse um local importante para o turnover de molculas de sinalizao, principalmente


por ubiquinao e entrega em endossomas tardios e lisossomas. Esta degradao de proteinas
sinalizadoras podem contribuir para a terminao da activao das clulas T.

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MECANISMOS EFECTORES DAS


RESPOSTAS IMUNES
AS CITOCINAS

As Citocinas
As citocinas so proteinas secretadas pelas clulas da imunidade inata e dapatativa que mediam muitas
das funes destas clulas:

So produzidas em resposta a micrbios e outros antignios, e diferentes citocinas estimulam


diversas respostas de clulas envolvidas na imunidade e inflamao;
Na fase de activao das respostas imunes adaptativas, as citocinas estimulam o crescimento e
diferenciao de linfcitos, e na fases efectoras da imunidade inata e adaptativa activam
diferentes clulas efectoras para que estas eliminem micrbios e outros antignios;
As citocinas tambm estimulam o desenvolvimento de clulas hematopoiticas;
As citocinas so importantes como agentes terapeuticos e como alvos de antagonistas
especificos em vrias doenas imunes e inflamatrias.

A nomenclatura das citocinas baseia-se normalmente nas suas fontes celulares:

Monocinas designao original das citocinas produzidas por fagcitos mononucleares;


Linfocinas designao original das citocinas produzidas por linfcitos;
Interleucinas citocinas que so produzidas por uns leuccitos (e.g., macrfagos ou clulas T) e
que actuam noutros leuccitos.

Com o desenvolvimento de anticorpos anti-citocinas e de sondas moleculares, tornou-se claro que a


mesma proteina pode ser sintetizada por linfcitos, moncitos e por uma variedade de clulas
tecidulares, incluindo clulas endoteliais e algumas clulas epiteliais. Assim, o termo genrico citocina
o nome preferido para esta classe de mediadores.
Por outro lado, o termo interleucina imperfeito porque muitas citocinas que so sintetizadas apenas
por leuccitos e que actuam apenas em leuccitos no so designadas interleucinas, por razes
histricas, enquanto muitas citocinas designadas de interleucinas so produzidas ou actuam noutras
clulas para alm dos leuccitos. Todavia, o termo tem tido sucesso porque enquanto novas citocinas
so molecularmente caracterizadas, -lhes atribuido um numero interleucina (IL) (e.g., IL-1, IL-2, e por ai
fora) para manter a nomenclatura standard.

Propriedades Gerais das Citocinas


As citocinas so polipeptidos produzidos em resposta a micrbios e outros antignios que medeiam e
regulam as reaces imunes e inflamatrias.

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Apesar das citocinas serem estruturalmente diversas, elas partilham vrias propriedades:
1. A secreo de citocinas um evento breve e limitado. As citocinas no so normalmente
armazenadas e a sua sintese iniciada por transcrio de genes como resultado da activao
celular. Tal activao da transcrio transiente e os mRNAs que codificam as citocinas so
instveis, de modo que a sintese de citocinas transiente. A produo de algumas citocinas
deve ser adicionalmente controlada por processamento de RNA e por mecanismos pstraduo, como libertao proetolitica de um produto activo de um precursor inactivo. O
processamento proteolitico importante, por exemplo, na produo de TNF, IL-1 e TGF-
activos. Quando sintetizadas, as citocinas so rapidamente secretadas, resultando numa
exploso quando necessrias;
2. As aces das citocinas so muitas vezes pleiotrpicas e redundantes. O pleitotropismo referese habilidade de uma citocina actuar em diferentes tipos de clulas. Esta propriedade permite
que a citocina medeie diversos efeitos biolgicos, mas limita altamente o uso terapeutico das
citocinas porque a administrao de uma citocina para um efeito clinico desejado pode resultar
em muitos efeitos indesejados. A redundncia refere-se propriedade de multiplas citocinas
apresentarem os mesmos efeitos funcionais. Devido a esta redundncia, antagonistas contra
uma unica citocina ou mutao de um gene de citocina no tero consequncias funcionais, pois
outras citocinas iro compensar;
3. As citocinas muitas vezes influenciam a sintese e a aco de outras citocinas. A habilidade de
uma citocina estimular a produo de outras leva a casacatas nas quais uma segunda ou terceira
citocina mediaro os efeitos biolgicos da promeira. Duas citocinas podem antagonizar a aco
de ambas, produtir efeitos adaptativos, ou, em alguns casos, produzir efeitos maiores que os
antecipados ou sinrgicos;
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4. As aces das citocinas podem ser locais ou sistmicas. A maior parte das citocinas actuam
prximo do local onde so produzidas, tanto na clula que a secreta (aco autcrina) ou numa
clula vizinha (aco parcrina). As clulas T muitas vezes secretam citocinas no local de
contacto com as APCs, na sinapse imunolgica. Esta pode ser a razo do facto das citocinas
muitas vezes actuarem em clulas que esto em contacto com os produtores de citocinas.
Quando produzidas em grandes quantidades, as citocinas podem entrar na circulao e actuar
num local distante do local de produo (aco endcrina). O TNF um exemplo de uma
citocina que tem efeitos sitmicos e locais importantes;
5. As citocinas iniciam as suas aces ligando-se a receptores membranares especificos nas
clulas alvo. Os receptores para as citocinas ligam os seus ligandos com altas afinidades, com
constantes de dissociao entre 10-10-10-12 (os anticorpos tipicamente ligam os antignio com
10-7-10-11 e os TCRs ligam pptidos associados a MHC com 10-5-10-7). Assim, apenas pequenas
quantidades de uma citocina so necessrias para ocupar os receptores e provocar uma
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resposta biolgica. A maior parte das clulas expressa baixos niveis de receptores de citocinas
(na ordem dos 100-1000 receptores por clula), mas estes so adequados para induzir
respostas;

6. Sinais externos regulam a expresso de receptores de citocinas e, assim, a resposta das clulas
s citocinas. Por exemplo, a estimulao de clulas B ou T por antignios leva a uma maior
expresso de receptores de citocinas. Por esta razo, durante uma resposta imune, os linfcitos
especificos para antignios so quem responde preferencialmente s citocinas secretadas. Este
um mecanismo para a manuteno da especificidade das respostas imunes, apesar da
citocinas no serem especificas para os antignios. A expresso dos receptores tambm
regulada pelas citocinas por si s, incluindo a mesma citocina que liga o receptor, permitindo a
amplificao positiva ou o feedback negativo;
7. As respostas celulares da maior parte das citocinas consistem em alteras na expresso de
genes nas clulas alvo, resultando na expresso de novas funes e, por vezes, na proliferao
das clulas alvo. Muitas das alteraes na expresso de genes induzidas pelas citocinas resulta
na diferenciao dos linfcitos T e B e na activao de clulas efectoras como os macrfagos.
Por exemplo, as citocinas estimulam o switch de isotipos de anticorpos nas clulas B, a
diferenciao de clulas TH em subgrupos TH2 e TH1, e a activao de mecanismos microbicidas
na fagocitose. Excepes so as quimiocinas, que elicitam alteraes rpidas na afinidade das
integrinas e na reorganizao do esqueleto que favorecem a migrao, e uma citocina designada
TNF, que capaz de induzir a apoptose activando enzimas celulares, sem transcrio de novos
genes ou sintese proteica;
8. As respostas celulares s citocinas so fortemente reguladas, e existem mecanismos de
feedback inibitrios para terminar essas respostas. Estes mecanismos incluem a induo pelas
citocinas de genes que codificam inibidores dos receptores de citocinas ou das vias de
sinalizao a jusante activadas pelos recepotres. Os inibidores incluem receptores armadilha
de citocinas expressos na superficie celular, molculas que bloqueiam interaces entre cinases
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Imunologia

sinalizadoras, fosfatases que contra-atacam os efeitos cinases activadoras, e molculas que


bloqueiam interaces produtivas de factores de transcrio induzidos por citocinas com o DNA.
Categorias Funcionais das Citocinas
As citocinas podem ser classificadas em trs categorias funcionais principais com base nas suas aces
biolgicas principais:
1. Mediadoras e reguladoras da imunidade inata produzidas principalmente por fagcitos
mononucleares em resposta a agentes infecciosos. PAMPs, como o LPC e DNA de cadeia dupla
viral, ligam-se a TLRs na superficie das clulas ou nos endossomas dos macrfagos e estimulam
a sintese e secreo de algumas das citocinas importantes da imunidade inata. As mesmas
citocinas podem tambm ser secretadas por macrfagos que so activados por clulas T
estimuladas por antignios (i.e., como parte da imunidade adaptativa mediada por clulas). A
maior parte dos membros deste grupo de citocinas actuam em clulas endoteliais e leuccitos
para estimular as reaces inflamatrias iniciais aos micrbios, e alguns funcionam para
controlar estas respostas. As clulas naturalmente assassinas e as clulas T naturalmente
assassinas tambm produzem citocinas durante as reaces imunes inatas;
2. Mediadoras e reguladoras da imunidade adaptativa produzidas principalmente por linfcitos
T em resposta ao reconhecimento especifico de antignios estranhos. Algumas citocinas das
clulas T funcionam principalmente para regular o crescimento e diferenciao de vrias
populaes de linfcitos e, assim, tm um papel importante na fase de activao das respostas
imunes dependentes de clulas T. Outras citocinas derivadas das clulas T recrutam, activam e
regulam clulas efectoras especializadas, como fagcitos mononucleados, neutrfilos e
eosinfilos, para que estes eliminem antignios na fase efectora das respostas imunes
adaptativas;
3. Estimuladoras da hematopoiese produzidas pelas clulas do estroma da medula ssea,
leuccitos e outras clulas e estimulam o crescimento e diferenciao de leuccitos imaturos.
Caracteristicas
Exemplos
Principal fonte celular

Imunidade inata
TNF, IL-1, IL-12, IFN-*
Macrfagos, clulas NK

Prinicpais funes
fisiolgicas

Mediadores da inflamao (local e


sistmica)

Estimulo

LPS (endotoxina), peptidoglicanos


bacterianos, RNA viral, citocinas
derivadas das clulas T (IFN-)

Proteinas antignicas

Quantidade produzida

Pode ser elevada; detectavel no soro

Geralmente baixa; notrmalmente no


detectavel no soro

Efeitos locais ou
sistmicos

Ambos

Normalmente apenas local

Doenas sistmicas (e.g., choque


sptico)
Inibidores
Corticosterides
*O IFN- tem papeis importantes na imunidade inata e adaptativa.
Papel em doena

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Imunidade adaptativa
IL-2, IL-4, IL-5, IFN-
Linfcitos T
Regulao do crescimento e
diferenciao dos linfcitos; activao
de clulas efectoras (macrfagos,
eosinfilos, mastcitos)

Dano tecidular local (e.g, inflamao


granulomatosa)
Ciclosporina, FK-506

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Imunologia

Em geral, as citocinas da imunidade inata e adaptativa so produzidas por diferentes populaes de


clulas e actuam em diferentes clulas alvo. Contudo, estas distines no so absolutas porque a
mesma citocina pode ser produzida durante reaces da imunes inatas e adaptativas, e diferentes
citocinas produzidas durante tais reaces podem ter aces sobrepostas.
Receptores das Citocinas e Sinalizao
Todos os receptores de citocinas consistem numa ou mais
proteinas transmembranares cujas pores extracelulares
so responsveis pela ligao s citocinas e cujas pores
citoplasmticas so responsveis pela iniciao das vias de
sinalizao intracelulares:

Estas vias de sinalizao so tipicamente activadas


pelo agrupamento do receptor induzido pelo ligando,
aproximando as pores citoplasmticas de duas ou
mais molculas de receptor num processo anlogo
ao da sinalizao dos receptores de antignios das
clulas B e T.

Existem vrios critrios pelos quais os receptores de


citocinas so classificados. A classificao mais usada feita
com base nas homologias estruturais dos dominios
extracelulares de ligao s citocinas e mecanismos de
sinalizao intracelulares partilhados.
Assim, de acordo com esta classificao, os receptores de citocinas podem ser divididos em vrias
familias:
1. Receptores de citocinas do tipo I tambm designados receptores hemopoietina, contm uma
ou mais cpias de um dominio com dois pares de residuos de cisteina conservados e uma
sequncia prxima da membrana de triptofano-serina-X-triptofano-serina (WSXWS), onde X
pode ser qualquer aminocido:
Ligam tipicamente citocinas que tm uma estrutura secundria de quatro -hlices,
designadas citocinas do tipo I. As caracteristicas conservadas dos receptores formam
estruturas que ligam citocinas com estrutura secundria em quatro -hlices, mas a
especificidade para citocinas individuais determinada por residuos de aminocidos que
variam entre receptores;
Consistem em cadeias unicas de ligao ao ligando e uma ou mais cadeias de transduo
do sinal, que so normalmente partilhadas por receptores para diferentes citocinas.
Todos os receptores de citocinas do tipo I usam vias de sinalizao Jak-STAT que
induzem a transcrio de novos genes;
2. Receptores de citocinas do tipo II so semelhantes aos receptores do tipo I em virtude dos
dois dominios extracelulares como cisteinas conservadas, mas no contm o motivo WSXWS.
Estes receptores consistem numa cadeia polipeptidica de ligao ao ligando e uma cadeia de
transduo do sinal. Todos os receptores de citocinas do tipo II usam vias de sinalizao JakSTAT;
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Imunologia

3. Receptores da familia IL-1 partilham sequncias citoslicas conservadas, designadas dominios


Toll-like/IL-1 receptor (TIR) e usam vias de transduo do sinal semelhantes e que induzem a
transcrio de novos genes;
4. Receptores de TNF so parte de uma grande familia de proteinas (algumas no so receptores
de citocinas) com dominios extracelulares trimricos conservados ricos em cisteinas, e
mecanismos de sinalizao intracelulares partilhados que induzem a apoptose ou estimulam a
expresso de genes;
5. Receptores -helicais com sete dominios membranares so tambm designados receptores
serpentina, porque os seus dominios transmembranares atravessam para trs e para a frente a
membrana, e receptores acoplados a proteinas G, porque as suas vias de sinalizao enfovem
proteinas de ligao ao GTP (proteinas G). O genoma dos mamiferos codifica muitos destes
receptores envolvidos em vrios tipos de respostas ceulares. No sistema imune, membros desta
classe de receptores medeiam respostas rpidas e transientes a quimiocinas e vrios
mediadores inflamatrios diferentes.

Os membros de uma familia definida pelos dominios extracelulares normalmente usam vias de
sinalizao semelhantes, mas podem existir excepes. No entanto, os principais mecanismos de
transduo do sinal usados pelos receptores de citocinas podem ser resumidos na seguinte tabela:
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Via de transduo do sinal

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Receptores de citocinas

Via Jak-STAT

Receptores de citocinas tipo I e tipo II

Sinalizao do receptor de
TNF por TRAFs

Familia de receptores de TNF: TNRRII, CD40

Sinalizao do receptor de
TNF por dominios de morte

Familia de receptores de TNF: TNFRI, Fas

Via dominio TIR/IRAK

Receptores de IL-1 e IL-18

Receptores associados a
cinases

Receptor de TGF-, receptor de MCSF, receptor de factor stem cell

Sinalizao de proteinas G

Receptores de quimiocinas

Imunologia
Mecanismo de sinalizao
Fosforilao e activao dos factores de
transcrio STAT mediadas por Jak
Ligao das proteinas adaptadoras da
familia TRAF, activao de factores de
transcrio
Ligao de proteinas adaptadoras da
familia de dominios de morte, activao
das caspases
Ligao de cinases da familia IRAK a
dominios TIR, activao de factores de
transcrio
Actividade cinase intrinseca no receptor,
activao de factores de transcrio
Torca de GTP e dissoao de G-GTP de
G, G-GTP activa vrias enzimas
celulares

Antagonistas de Citocinas
J foi reportado um numero de proteinas que inibem a actividade biolgica das citocinas. Estas
proteinas actuam por um de dois modos:
1. Ligam directamente ao um receptor de citocinas mas no activam a clula;
2. Ligam directamente a citocina, inibindo a sua actividade.
O inibidor mais bem caracterizado o antagonista do
receptor de L1 (IL-1Ra), que se liga ao receptor de IL-1
mas no apresenta actividade:

A ligao de IL-1Ra ao receptor de IL-1 bloqueia a


ligao de IL-1 e IL-1;
Julga-se que a produo de IL-1Ra tem papel da
regulao da intensidade da resposta inflamatria;
Foi clonado e est a ser investigado como um
potencial tratamento de doenas inflamatrias
crnicas.

Outros inibidores das citocinas so encontrados na corrente sanguinea e no fluido extracelular. Estes
antagonistas soluveis tm origem na clivagem enzimtica do dominio extracelular de receptores de
citocinas. Entre os receptores de citocinas soluveis que foram detectados encontram-se aqueles para:
IL-2;
IFN- e ;
IL-4;
TNF-;
IL-6;
LIF.
IL-7;
Destes, o receptor soluvel para IL-2 (sIL-2R), que libertado na activao crnica de clulas T, o
melhor caracterizado. Um segmento que contem os 192 aminocidos N-terminal da subunidade
libertado por clivagem proteolitica, formando um receptor de IL-2 soluvel de 45 kDa. Este receptor
capaz de ligar IL-2 e prevenir a sua interaco com o receptor membranar de IL-2. A presena de sIL-2R
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Imunologia

usado como marcador da activao crnica de clulas T e observada num numero de doenas,
incluindo autoimunidade, rejeio de transplantes ou SIDA.
Alguns virus tambm produzem proteinas de ligao a citocinas ou mimicos de citocinas. A evoluo de
tais estratgias anti-citocinas por patognios microbianos uma boa evidncia biolgica da
importncia das citocinas na organizao e promoo de respostas imune anti-microbianas eficientes:

Os poxvirus codificam uma proteina soluvel que liga TNF e uma proteina soluvel que liga IL-1.
Como tanto o TNF como a IL-1 exibem um largo espectro de actividade na resposta inflamatria,
estas proteinas soluveis que ligam citocinas podem proibir ou diminuir os efeitos inflamatrios
das citocinas, conferindo assim ao virus uma vantagem selectiva;
O virus Epstein-Barr produz uma molcula semelhante a IL-10 (IL-10 viral ou vIL-10) que se liga
ao receptor de IL-10 e, como a IL-10 celular, suprime respostas mediadas por clulas T H1, que
so efectivas contra muitos parasitas intracelulares como os virus.

Molculas produzidas por virus que mimetizam as citocinas permitem que o virus manipule a resposta
imune de modos que ajudam a sobrevivncia do patognio. Esta uma modificao interessante e
poderosa que alguns virus sofreram na sua luta continua para ultrapassar a barreira formidvel da
imunidade do hospedeiro.
A seguinte tabela lista um numero de produtos virais que mimetizam citocinas ou os seus receptores:
Virus
Leporipoxvirus
Vrios poxvirus
Vaccinia, virus da varola
Epstein-Barr
Herpesvirus-8 humano
Citomegalovirus

Produto
Receptor soluvel de IFN-
Receptor soluvel de IFN-
Receptor soluvel de IL-10
Homlogo de IL-10
Homlogo de IL-6, homlogos das quimiocinas MIP-I e MIP-II
Trs homlogos de receptores de quimiocinas diferentes, um dos quais liga trs
quimiocinas soluveis diferentes (RANTES, MCP-1 e MIP-1)

Para alm destes antagonistas, claro agora tambm que as clulas evoluiram mecanismos sofisticados
para prevenir a respostas s citocinas. Como exemplo, existe a familia de proteinas supressoras da
sinalizao das citocinas (proteinas SOCS) que completam um loop de feedback negativo para atenuara
transduo de sinal de citocinas que actuam atravs da via Jak/STAT:

As proteinas SOCS inibem componentes da cascata de sinalizao das citocinas via ligao
directa ou prevenindo o acesso ao complexo de sinalizao, actuando principalmente sobre a
vias dos TLRs e do receptor da IL-1;
As proteinas SOCS tambm parecem marcar transdutores de sinal para destruio
proteossomal;
Anlises de ratinhos geneticamente modificados nos quais as proteinas SOCS so sobreespressas ou eliminadas estableceram que esta familia de reguladores negativos apresenta
papeis indispensveis na regulao das respostas das citocinas em clulas do sistema imune e
noutros tecidos;
Outras evidncias sugerem tambm que a ruptura da expresso ou actividade das SOCS est
associada com vrias doenas imunes e inflamatria, o que faz crer que a manipulao da
actividade das SOCS pode fornecer uma futura estratgia terapeutica na gesto de desordens
imunolgicas.

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Imunologia

Citocinas que Medeiam e Regula m a Imunidade Inata


Um importante componente da resposta imune inata inicial a virus e bactrias a secreo de citocinas,
que medeiam muitas das funes efectoras da imunidade inata. As principais citocinas da imunidade
inata so:

Tumor necrosis factor (TNF);


Interleucina-1 (IL-1);
Quimiocinas;
Interleucina-12 (IL-12;
Interferes tipo I (IFN- e IFN-);
Interleucina-10 (IL-10);
Interleucina-6 (IL-6);
Interleucina-15 (IL-15);
Interleucina-18 (IL-18);
Interleucina-23 (IL-23);
Interleucina-27 (IL-27).

No entanto, uma citocina, o IFN-, tem papeis importantes na imunidade inata e na adaptativa.
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Imunologia

Resumidamente, as caracteristicas destas citocinas so:


Citocina

Tamanho (kD)

Principais fontes
celulares

Principais alvos celulares e efeitos


biolgicos
Clulas endoteliais: activao (inflamao,
coagulao)
Neutrfilos: activao
Hipotlamo: febre
Figado: sintese de proteinas de fase aguda
Musuclo, tecido adiposo: catabolismo
Vrios tipos celulares: apoptose
Clulas endoteliais: activao (inflamao,
coagulao)
Hipotlamo: febre
Figado: sintese de proteinas de fase aguda

Tumor necrosis
factor (TNF)

17 kD, 51 kD
homotrimero

Macrfagos, clulas T

Interleucina-1
(IL-1)

17 kD forma madura; 33
kD precursores

Mcrfagos, clulas
endoteliais, algumas
clulas epiteliais

Quimiocinas

8-12 kD

Macrfagos, clulas
endoteliais, clulas T,
fibroblastos, plaquetas

Interleucina-12
(IL-12)

Heterodimero de 35 kD
+ subunidades 40 kD

Macrfagos, clulas
dendriticas

IFNs tipo I (IFN-,


IFN-)

IFN-: 15-21 kD
IFN-: 2-25 kD

IFN-: macrfagos
IFN-: fibroblastos

Interleucina-10
(IL-10)

Homodimero de 34-40
kD; subunidades 18 kD

Macrfagos, clulas T
(principalmente clulas T
reguladoras)

Interleucina-6
(IL-6)

19-26 kD

Macrfagos, clulas
endoteliais, clulas T

Interleucina-15
(IL-15)

13 kD

Macrfagos, outras

Interleucina-18
(IL-18)

17 kD

Macrfagos

Clulas NK e clulas T: sintese de IFN-

Macrfagos e clulas
dendriticas

Clulas T: manuteno das clulas T


produtoras de IL-17

Macrfagos e clulas
dendriticas

Clulas T: inibio das clulas TH1; possivel


papel na diferenciao de TH1
Clulas NK: sintese de IFN-

Interleucina-23
(IL-23)
Interleucina-27
(IL-27)

Heterodimero de
subunidades unicas de
19 kD e 40 kD de IL-12
Heterodimero de
subunidades de 28 kD e
13 kD

Leuccitos: quimotaxia, activao, migrao


para tecidos
Clulas T: diferenciao TH1
Clulas NK e clulas T: sintese de IFN-,
actividade citotxica aumentada
Todas as clulas: estado antiviral, expresso
aumentada de MHC classe I
Clulas NK: activao
Macrofagos, clulas dendriticas: inibio da
produo de IL-12 e expresso de coestimuladores e molculas MHC classe II
Figado: sintese de proteinas de fase aguda
Clulas B: proliferao de clulas
produtoras de antignios
Clulas NK: proliferao
+
Clulas T: proliferao (clulas CD8 de
memria)

Tumor Necrosis Factor (TNF)


O TNF o principal mediador das respostas inflamatrias agudas contra bactrias gram-negativas e
outros micrbios infecciosos e responsvel por muitas das complicaes sistmicas das infeces
sistmicas:

O nome desta citocina deriva da sua identificao original como um factor srico que causa
necrose de tumores;
O TNF tambm designado TNF- para distingui-lo do TNF-altamente relacionado, tambm
designado linfotoxina (LT).

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Imunologia

Produo, Estrutura e Receptores


Esta citocina pode ter vrias fontes celulares, mas uma principal entre todas:

Fagcitos mononucleares activados principal fonte de TNF;


Clulas T estimuladas por antignios;
Clulas naturalmente assassinas;
Mastcitos.

O estimulo mais potente que elicita a produo de TNF pelos macrfagos a ligao de TLRs como LPS
e outros produtos microbianos, e grandes quantidades desta citocina sero produzidas durante
infeces por bactrias gram-negativas, que libertam LPS. No entanto, o IFN-, produzido por clulas T e
clulas naturalmente assassinas, aumenta a sintese de TNF por macrfagos estimulados por LPS.
Em fagcitos mononucleares, a sintese de TNF ocorre em vrios passos e podemos ter dois tipos de TNF
durante o processo:

TNF membranar o TNF inicialmente sintetizado como uma proteina membranar do tipo II
no-glicosilada com uma regio N-terminal intracelular e uma grande regio C-terminal
extracelular. expressa como um homodimero e capaz de se ligar a receptores de TNF do tipo
II (TNF-RII);

TNF secretada a forma membranar do TNF clivada


por uma metaloproteinase associada membrana
libertando um polipptido de 17 kD. Trs destas cadeia
polipptidicas polimerizam para formar uma proteina
de TNF circular com 51 kD. Esta TNF secretada assume
uma forma de pirmide triangular, sendo cada lado
formado por uma subunidade. Os locais de ligao do
receptor localizam-se na base da pirmide, permitindo
ligaes simultneas da citocina a trs molculas de
receptor.

Existem dois receptores de TNF distintos, que apresentam ambos uma afinidade baixa no usual para
receptores de citocinas:
1. Receptor de TNF do tipo I (TNF-RI) tem tamanho molecular de 55 kD e uma constante de
afinidade de 1x10-9 M;
2. Receptor de TNF do tipo II (TNF-RII) tem tamanho molecular de 75 kD e uma constante de
afinidade de 5x10-10 M.
Ambos os receptores de TNF esto presentes na maior parte dos tipos de clulas. Os receptores de TNF
so membros de uma familia de proteinas maior, muitas das quais esto envolvidas nas respostas
imune e inflamatrias. Estes receptores existem como um trimero na membrana plasmtica mesmo
antes da ligao do TNF mas a transduo do sinal difere entre receptores:

A ligao de citocinas a alguns membros da familia de receptores de TNF, como TNF-RI, TNF-RII
e CD40 leva ao recrutamento de proteinas, designadas factores associados ao receptor de TNF
(TRAFs) para os dominios citoplasmticos dos receptores. Os TRAFs activam factores de
transcrio, principalmente o factor nuclear B (NF-B) e a proteina activadora-1 (AP-1);

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Imunologia

A ligao de citocinas a outros membros da familia, como TNF-RI, leva ao recrutamento de uma
proteina adaptadora que activa caspases e provoca apoptose.

Assim, diferentes membros da familia de receptore de TNF so capazes de induzir a expresso de gene a
a morte celular, e alguns so capazes de fazer ambos. No entanto, ratinhos KO para TNF-RI mostram
defesas do hospedeiro mais fracas, sugerindo que o TNF-RI mais importante para a funo da citocina.
Aces Biolgicas
A principal funo fisiolgica do TNF estimular o recrutamento de neutrfilos e moncitos para os
locais de infeco e activar essas clulas a erradicar micrbios. O TNF medeia estes efeitos por vrias
aces nas clulas endoteliais vasculares e nos leuccitos:

O TNF induz as clulas endoteliais vasculares a expressar molculas de adeso que torna a
superficie endotelial adesiva para os leuccitos, inicialmente para os neutrfilos e
subsequentemente para os moncitos e linfcitos. As molculas de adeso mais importantes
so as selectinas e ligandos para as integrinas dos leuccitos;
O TNF estimula as clulas endoteliais e os macrfagos a secretar quimiocinas que aumentam a
afinidade das integrinas dos leuccitos para os seus ligandos e induzem a quimotaxia e
recrutamento de leuccitos. O TNF tambm actua em fagcitos mononucleares para estimular a

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

secreo de IL-1, que funciona de modo semelhante ao TNF. Este um exemplo de cascata de
citocinas que apresentam actividade biolgicas semelhantes ou complementares;
O TNF estimula as actividades microbicidas dos neutrfilos e macrofagos.

As aces do TNF nas clulas endoteliais e nos leuccitos so criticas para as respostas inflamatrias
locais contra os micrbios. Se quantidades inadequadas de TNF esto presentes (e.g., em animais
tratados com anticorpos neutralizantes anti-TNF ou ratinhos KO para o gene TNF), uma consequncia
ser a fallha na conteno de infeces. O TNF tambm contribui para as reaces inflamatrias locais
que so nocivas para o hospedeiro (e.g., nas doenas autoimunes) e anticorpos neutralizantes para o
TNF e receptores soluveis de TNF podem reduzir a inflamao em pacientes com artrite reumatide e
doena inflamatria intestinal.

Em infeces severas, o TNF produzido em grandes quantidades e causa anormalidades patolgicas e


danos sistmicos. Se o estimulo para a produo de TNF for suficientemente forte, a quantidade de
citocina produzida to grande que ela entra na corrente sanguinea e actua em locais distantes como
uma hormona endocrina. As principais aces sistmicas do TNF so as seguintes:

O TNF actua no hipotlamo para induzir febre e , assim, designado como um pirognio
enggeno (para destingui-lo do LPS, que funciona como um pirognio exgeno, derivado de
micrbios). A produo de febre em resposta ao TNF (e IL-1) mediada pela sintese aumentada
de prostaglandinas pelas clulas hipotalmicas estimuladas pelas citocinas. Os inibidores da
sintese de prostaglandias, como a aspirina, reduzem a febre bloquenado esta aco do TNF e da
IL-1;
O TNF actua nos hepatcitos para aumentar a sintese de certas proteinas sricas, como a
proteina srica amilide A e fibrinognio. O aumento de proteinas plasmticas derivadas dos
hepatcitos induzida pelo TNF e pela IL-1 e IL-6, duas outras citocinas da imunidade inata,
constitui a resposta de fase aguda do estimulo inflamatrio;

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Imunologia

A produo prolongada de TNF causa a pera de clulas musculares e de adipcitos. Esta perda
resulta da supresso do apetite induzida pelo TNF e da sintese reduzida de lipoproteina lipase,
uma enzima necessria para a libertao de cidos gordos da lipoproteina circulantes de modo
que estes no podem ser usados pelos tecidos;
Quando grandes quantidades de TNF so produzidas, com concentraes sricas de cerca 10-7 M
ou mais, a contractilidade do miocardio e o tonus do musculo liso vascular so inibidos,
resultando uma queda marcada da presso arterial, ou choque;
O TNF causa trombose intravascular, principalmente como um resultado da perda das
propriedade anticoagulantes normais do endotlio. O TNF estimula a expresso de factor
tecidular pelas clulas endoteliais, um potentes activador da coagulao, e inibe a expresso de
trombomodulina, um inibidor da coagulao. As alteraes endoteliais so exacerbadas pelas
actiao de neutrfilos, levando tamponao por essas clulas. A habilidade desta citocina
causar a necrose de tumores um resultado da trambose dos vassos sanguineos tumorais;
Elevados niveis circulantes de TNF causam disturbios metablicos severos, como uma queda das
concentraes de acar no sangue a niveis incompativeis com a vida. Isto deve-se ao uso
elevado da glucose pelo musculo e impossibilidade do figado repor a glucose.

Uma complicao da sepse bacteriana gram-negativa pode levar a um sindrome designado choque
sptico (ou choque endotoxina), que caracterizado por colapso vascular, coagulao intravascular
disseminada e disturbios metablicos:

Deve-se produo exacerbada de TNF e outras citocinas, incluindo IL-12, IFN- e IL-1, induzidas
pelo LPS. Assim, a concentrao de TNF srica pode dar informao sobre infeces graves por
bactrias gram-negativas;
O choque sptico pode ser reproduzido em animais experimentais pela administrao de LPS ou
TNF;
Antagonistas do TNF podem prevenir a mortalidade em modelos experimentais mas ensaios
clinicos como anticorpos anti-TNF ou com receptores soluveis para o TNF no mostraram
beneficios para os pacientes com sepse, talvez porque outras citocinas podem elicitar as
mesmas respostas do TNF.

Existem vrias citocinas e proteinas membranares pertencentes familia de TNF e receptores de TNF,
e todos tm funes importantes nas respostas imunes inata e adaptativa:

Ligando CD40 e ligando Fas ambos expressos em linfcitos T activados. O primeiro medeia a
activao de macrfagos e clulas B e o segundo est envolvido na eliminao de alguns tipos
de clulas;
BAFF e APRIL desempenham papeis importantes na sobrevivncia e diferenciao de clulas
B;
Ligando relacionado com o TNF induzido por glucocorticoides (GITR) e ligando OX40 so
molculas da familia TNF que podem estar envolvidas na regulao da resposta das clulas T;
Receptor activador de NF-B expresso em osteoclastos e alguns macrfagos e clulas
dendriticas. A citocinas que o ligando deste receptor, designada ligando RANK, produzida
por clulas T activadas. A produo desta citocina activa os osteoclastos e, assim, tem um papel
importante na reabsoro de osso em muitos estados de doena, notavelmente a artrite
reumatide.

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211

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Imunologia

Interlucina-1 (IL-1)
A principal funo da IL-1, semelhante do TNF, funcionar como um mediador da resposta
inflamatria do hospedeiro a infeces e outros estimulos. Esta citocina trabalha em conjunto com o
TNF na imunidade inata e na inflamao.
Produo, Estrutura e Receptores
Esta citocina pode ter vrias fontes celulares, mas uma principal entre todas:

Fagcitos mononucleares activados principal fonte de IL-1. Sintese induzida por produtos
microbianos, como LPS, e por outras citocinas, como TNF;
Neutrfilos;
Clulas epiteliais (e.g., queratincitos);
Clulas endoteliais.

Existem duas formas de IL-1, IL-1 e IL-1, que so menos de 30% homlogas uma da outra mas ligam
ao mesmo receptor de superficie e aprsentam as mesmas actividades biolgicas. Ambos os
polipeptideos IL-1 so sintetizados como precursores de 33 kD e so secretados como proteinas
maduras de 17 kD:

A forma activa da IL-1 a forma clivada, mas a IL-1 activa tanto como precursor de 33 kD ou
como produto clivado menor;
A IL-1 clivada pela cisteina protease caspase-1 (tambm designada enzima conversora de IL1), que foi o primeiro membro da familia de caspases, muitas das quais envolvidas na morte
apopttica, a ser identificado;
A IL-1 secretada por uma via no-clssica visto que, ao contrrio da maior parte das proteinas
secretadas, nem a IL-1 nem a IL-1 apresentam sequncias sinais hidrofbicas que
encaminham o polipeptideo nascente para o reticulo endoplasmtico.

IL-1

IL-1

A IL-1 medeia os seus efeitos biolgicos atravs de um receptor membranar designado receptor IL-1 do
tipo I, que usa vias de transduo do sinal qua activam os factores de transcrio NF-B e AP-1. Este
receptor um membro de uma familia de proteinas membranares integrais que contm um dominio
extracelular de ligao ao ligando do tipo imunoglobulina e um dominio de sinalizao TIR na regio
citoplasmtica.
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Imunologia

Os eventos de sinalizao que ocorrem quando a IL-1


se liga ao receptor de IL-1 do tipo I so semelhantes
aqueles associados com os TLRs, j que o dominio TIR
tambm se encontra nos TLRs:

Aps a ligao de IL-1, a proteina adaptadora


MyD88 recrutada para o dominio TIR,
seguida por duas proteina cinases, a cinase-4
associada com o receptor de IL-1 (IRAK4) e
IRAK, e outra proteina adaptadora, TRAF-6;

A sinalizao a jusante envolve vrios eventos


de fosforilao e formao de novos
complexos com outras cinases e proteinas
adaptadoras, eventualmente levando
activao de NF-B.

Aces Biolgicas
Os efeitos biolgicos da IL-1 so semelhantes aos do TNF e dependenm da quantidade de citocinas
produzidas:

Quando secretada a baixas concentraes, a IL-1 funciona como mediador da inflamao local.
Actua nas clulas endoteliais para aumentar a expresso de molculas de superficie que
medeiam a adeso de leuccitos, como ligandos para as integrinas;
Quando secretada em grandes quantidades, a IL-1 entra na corrente sanguinea e exerce efeitos
endcrinos. A IL-1 sistmica induz febre, sintese de proteinas plasmticas de fase aguda pelo
figado, directamente e indirectamente atravs da estimulao da produo de IL-6, e produo
de neutrfilos e plaquetas na medula ssea.

As semelhanas entre as aces da IL-1 e as do TNF parecem supreendentes porque as citocinas e os


seus receptores so estruturalmente diferentes. A explicao provvel para os efeitos biolgicos
semelhantes que ambos os receptores de citocinas sinalizam atravs de proteinas homlogas e
activam os mesmos factores de transcrio. Contudo, existem vrias diferenas entre a IL-1 e o TNF. Por
exemplo, a IL-1 no induz a morte apopttica das clulas e, mesmo a altas concentraes sistmicas,
no causa alteraes patofisiolgicas de choque sptico por si s.
Os fagcitos mononucleares produzem um antagonista natural da IL-1 (IL-1Ra) que estruturalmente
homlogo da citocinas e liga aos mesmos receptores mas no biologicamente activo, sendo assim um
inibidor competitivo da IL-1:

Pode ser um regulador endgeno da aco de IL-1;


usado para para tratar artrite reumatide sistmica juvenil.

No entanto, a regulao da inflamao mediada pela IL-1 pode tambm ocorrer por expresso de
receptores do tipo II, que liga IL-1 mas no traduz sinal. A principal funo deste receptor ser actuar
como uma armadilha que inibe competitivamente a ligao de IL-1 ao receptor de sinalizao do tipo I.
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Imunologia

Quimiocinas
As quimiocinas so uma grande familia de citocinas estruturalmente homlogas que estimulam o
movimento de leuccitos e regulam a migrao de leuccitos do sangue para os tecidos. Assim, o nome
quimiocinas uma contraco de citocinas quimotcticas:

Algumas quimiocinas so produzidas por vrias clulas em resposta a estimulos inflamatrios e


recrutam leuccitos para os locais de infeco;
Outras quimiocinas so produzidas constitutivamente em vrios tecidos e recrutam leuccitos
(principalmente linfcitos) para esses tecidos na ausncia de inflamao.

Produo, Estrutura e Receptores


Existem cerca de 50 quimiocinas humanas, todas delas sendo polipeptideos de 8-12 kD que contm dois
loops internos dissulfito. As quimiocinas so classificadas em quatro familias com base no numero e
localizao dos seus residuos de cisteina N-terminal:

Familia CC - uma das duas principais familias de quimiocinas, e os dois residuos de cisteina
esto adjacentes;
Familia CXC uma das duas principais familias de quimiocinas, e os dois residuos de cisteina
encontram-se separados por um outro aminocido;
Familia C apenas apresenta uma cisteina;
Familia CX3C as duas cisteinas encontram-se separadas por trs aminocidos.

Estas diferenas correlacionam-se com a organizao das subfamilias em grupos de genes diferentes. As
quimiocinas eram originalmente denominadas com base no modo como eram identificada e que
respostas provocavam. Mais recentemete, uma nomenclatura standard usada em parte com base nos
receptores a que ligam.
As quimiocinas das subfamilias CC e CXC so produzidas por leuccitos e por vrios tipos de clulas
tecidulares, como clulas endoteliais, epiteliais e fibroblastos:

Em muitas destas clulas, a secreo de quimiocinas induzida por micrbios, via sinalizao do
TLR, e por citocinas inflamatria, principalmente TNF e IL-1;
Vrias quimiocinas CC so tambm produzidas por clulas T estimuladas por antignios,
fornecendo uma ligao entre a imunidade adaptativa e o recrutamento de leuccitos
inflamatrios.

As quimiocinas que so produzidas constitutivamente (i.e., sem qualquer estimulo inflamatrio) nos
rgos linfides esto envolvidas no trafego fisiolgico de linfcitos atravs dos rgos:

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Imunologia

As quimiocinas ligam-se a proteoglicanos nas clulas endoteliais e so apresentadas deste modo


a leuccitos circulantes que se ligaram s superficies endoteliais via interaces dependnetes de
selectinas;
A apresentao endotelial fornece uma alta concentrao local de quimiocinas, que causa a
activao de integrinas dos leuccitos, fortalecendo a adeso, e a estimulao da mobilidade
dos leuccitos e trans-migrao atravs da parede do vaso sanguineo.

Os receptores das quimiocinas so receptores acoplados a proteinas G como sete dominios transmembranares -helicais:

Quando ocupados pelo ligando, estes receptores actuam como proteinas de troca de GTP,
catalizando substituio de GDP por GTP;
A forma associada ao GTP destas proteinas capaz de activar uma variedade de enzimas
celulares que modulam a configurao proteica do citosqueleto e a afinidade das integrinas;
Os receptores de quimiocinas podem ser rapidamente inibidos, e este um mecanismo
provvel para terminar as respostas.

Pelo menos 10 receptores distintos para quimiocinas CC (designados CCR1-CCR10) e seis para
quimiocinas CXC (designados CXCR1-CXCR6 foram j identificads, e esta lista deve estar incompleta. Os
receptores de quimiocinas so expressos em leuccitos, com os maiores numeros e diversidade
observados nas clulas T. Os receptores exibem especificidade sobrepostas para quimiocinas entre
cada familia, e os padres de expresso celular dos receptores determina quais os tipos de clulas que
respondem a qual quimiocina:

Certos receptores de quimiocinas, principalmente CCR5 e CXCR4, actuam como co-receptores


para o virus da imunodeficincia humana (HIV);
Alguns linfcitos T activados secretam quimiocinas que ligam ao CCR5 e bloqueiam a infeco
com HIV competindo com o virus.

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Imunologia

As quimiocinas e receptores conhecidas e as suas principais funes so as seguintes:


Quimiocina
Quimiocinas CC
CCL1
CCL2
CCL3

Nome original

Receptor da quimiocina

I-309
MCP-1
MIP-1

CCR8
CCR2
CCR1, CCR5

CCL4

MIP-1

CCR5

CCL5
CCL7
CCL8
CCL9/CCL10
CCL11
CCL12
CCL13
CCL14
CCL15
CCL16
CCL17
CCL18

RANTES
MCP-3
MCP-2
Eotaxina
Desconhecido
MCP-4
HHC-1
MIP-1
HHC-4
TARC
DC-CK1

CCR1, CCR3, CCR5


CCR1, CCR2, CCR3
CCR3, CCR5
CCR1
CCR3
CCR2
CCR2, CCR3
CCR1, CCR5
CCR1, CCR3
CCR1, CCR2
CCR4
?

CCL19

MIP-3/ELC

CCR7

CCL20

MIP-3

CCR6

CCL21

SLC

CCR7

CCL22
CCL23
CCL24
CCL25
CCL26
CCL27
CCL28
(Cont.)

MDC
MPIF-1
Eotaxina-2
TECK
Eatoxina-3
CTACK
MEC

CCR4
CCR1
CCR3
CCR9
CCR3
CCR10
CCR10

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Principal funo
Recrutamento de moncitos e migrao de clulas endoteliais
Recrutamento de leuccitos
Recrutamento de leuccitos
Recrutamento de clulas T, clulas dendriticas, moncitos e
clulas NK, co-receptor do HIV
Recrutamento de leuccitos
Recrutamento de leuccitos
Recrutamento de leuccitos
?
Recrutamento de eosinfilos, basfilos e TH2
Recrutamento de leuccitos
Recrutamento de leuccitos
?
Recrutamento de leuccitos
?
Recrutamento de clulas T e basfilos
Alojamento de linfcitos e clulas dendriticas
Migrao das clulas T e das clulas dendriticas para zonas
parafoliculares dos nodos linfticos
?
Migrao das clulas T e das clulas dendriticas para zonas
parafoliculares dos nodos linfticos
Recrutamento de clulas T e basfilos
?
Recrutamento de eosinfilos, basfilos e TH2
Migrao dos astrcitos
Recrutamento de eosinfilos, basfilos e TH2
Migrao de clulas da derme
Migrao de clulas da derme

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Quimiocina
Nome original
Quimiocinas CXC
CXCL1
GRO
CXCL2
GRO
CXCL3
GRO
CXCL4
PF4
CXCL5
ENA-78
CXCL6
GCP-2
CXCL7
NAP-2
CXCL8
IL-8
CXCL9
Mig
CXCL10
IP-10
CXCL11
I-TAC
CXCL12
SDF-1/
CXCL13
BCA-1
CXCL14
BRAK
CXCL16
Quimiocinas C
XCL1
Linfotactina
XCL2
SCM-1
Quimiocinas CX3C
CX3CL1

Fractaquina

Receptor da quimiocina
CXCR2
CXCR2
CXCR2
CXCR3B
CXCR2
CXCR1, CXCR2
CXCR2
CXCR1, CXCR2
CXCR3
CXCR3, CXCR3B
CXCR3
CXCR4
CXCR5

Imunologia
Principal funo

CXCR6

Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de neutrfilos
Agregao de plaquetas
Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de neutrfilos
Recrutamento de clulas T efectoras
Recrutamento de clulas T efectoras
Recrutamento de clulas T efectoras
Recrutamento de leuccitos, co-recepotr do HIV
Migrao das clulas B para os foliculos
?
?

XCR1
XCL1

Recrutamento de clulas T e clulas NK


?

CX3CR1

Recrutamento de clulas T, clulas NK e macrfagos; activao


de clulas T citotxicas e de clulas NK

Aces Biolgicas
As quimiocinas envolvidas nas reaces inflamatrias so produzidas por leuccitos em resposta a
estimulos externos, e as quimiocinas que regulam o trafego celular atravs dos tecidos so produzidas
constitutivamente por vrias clulas nesses tecidos. As quimiocinas foram discobertas com base na suas
actividades quimio-atractoras, mas sabe-se j que elas tm vrias funes importantes no sistema
imune e noutros sistemas:

As quimiocinas recrutam as clulas da defesa do hospedeiro para locais de infeco. O


recrutamento de leuccitos regulado por vrias aces sequenciais das quimiocinas nestas
clulas. As quimiocinas ligadas a proteoglicanos nas clulas endoteliais actuam em leuccitos
que rolam sobre a superfice endotelial e aumentam a afinidade das integrinas dos leuccitos
para os seus ligandos, o que permite que o TNF, a IL-1 e as quimiocinas funcionem
cooperativamente. As quimiocinas induzem o movimento dos leuc+ocitos e a sua migrao
atravs de um gradiente quimico de citocinas estimulando a polimerizao e despolimerizao
alternadas dos filamentos de actina. Diferentes quimiocinas actuam em diferentes clulas e, em
coordenao com o tipo de molcula de adeso expressa, controlam assim a natureza do
infiltrado inflamatrio;

As quimiocinas regulam o trafego de linfcitos e outros leuccitos atravs dos tecidos


linfides perifricos. Diferentes quimiocinas promovem a migrao de clulas T, clulas B e
clulas dendriticas para rgos linfides perifricos. Vrias quimiocinas tambm promovem a
migrao de clulas T efectoras e de memria previamente activadas para tecidos no linfides,
incluindo orgos mucosos e a pele. Estas selectividade dos diferentes tipos de clulas para

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Imunologia

diferentes locais anatmicos depende a uma grande extenso do local onde as quimiocinas so
produzidas e dos receptores de quimiocinas que so expressos nessas clulas;

As quimiocinas promovem a angiognese e a cura de feridas. Estas actividades esto


associadas principalmente com a familia de quimiocinas CXC, e envolve tanto quimiocinas prangiognicas, expressas logo aps o dano do tecido, e quimiocinas anti-angiognicas, expressas
no final do processo de cura. Os efeitos angiognicos podem ser uma combinao da produo
de factores inflamatrios pelas clulas inflamatrias e pelos fibroblastos sob induo das
quimiocinas e de efeitos directos das quimiocinas nas clulas vasculares, como clulas
endoteliais, que expressam o receptor CXCR2;

As quimiocinas esto envolvidas no desenvolvimento de diversos orgos no linfides.


Ratinhos KO para o receptor CXCR4 apresentam defeitos fatais no desenvolvimento do corao
e do cerebelo. Estes papeis das quimiocinas aumetam a possibilidade de muitas outras funes,
ainda no descobertas, de envolvimento na morfognese.

Interleucina-12 (IL-12)
A IL-12 um mediador principal da resposta imune inata inicial contra micrbios intracelulares e um
indutor chave da imunidade mediada por clulas, a resposta imune adaptativa contra esses micrbios:

Esta citocina foi originalmente identificada como um activador da funo citotxica das clulas
naturalmente assassinas;
As suas aces mais importantes so estimular a produo de IFN- pelas clulas T e clulas NK
e suportar a diferenciao de clulas TH CD4+ naive em clulas produtoras de IFN- (TH1).

Produo, Estrutura e Receptores


A IL-12 existe como um heterodimero ligado por pontes
dissulfureto de subunidade de 35 kD (p35) e 40 kD (p40):

Subunidade p35 tem uma estrutura globular


constituida por quatro hlices , que partilhada por
vrias citocinas diferentes do tipo I ou da familia de
citocinas hematopoiticas;
Subuinidade p40 homloga poro extracelular da
cadeia do receptor de IL-6.

A IL-12 pertence a uma familia de pelo menos cinco citocinas heterodimricas cujas subunidades so
homlogas a uma ou a ambas as cadeias p35 e p40 da IL-12. Dois membros desta familia, IL-23 e IL-27,
tm papeis importantes, em conjunto com a IL-12, nas respostas imune protectoras e patolgicas
mediadas por clulas T.
A sntese de IL-12 feita pelas clulas dendriticas activadas e os macrfagos activados:

Muitas clulas parecem sintetizar a subunidade p35, mas apenas os fagcitos e as clulas
dendriticas produzem o componente p40 e, assim, a citocina biologicamente activa;

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Imunologia

Durante as reaces imunes inatas a micrbios, a IL-12 produzida em resposta sinalizao do


TLR induzida por vrios estimulos microbianos, incluindo LPS, infeco por bactrias
intracelulares e infeces por virus;
Em adio, as clulas TH estimulados por antignios induzem a produo de IL-12 por
macrfagos e clulas dendriticas, principalmente pela ligao do ligando CD40 das clulas T ao
CD40 das clulas dendriticas e dos macrfagos;
O IFN- produzido por clulas NK ou clulas T tambm estimula a produo de IL-12.

Assim, a IL-12 produzida pelas APCs quando elas:

Apresentam antignios a clulas T;


Durante as fases de induo e efectora das respostas imunes mediadas por clulas.

O receptor da IL-12 (IL-12R) um mebro da familia de receptores de citocinas do tipo I. um


heterodimero composto por subuinidades 1 e 2, sendo ambas homlogas a uma subunidade do
receptor de IL-6. A p40 da IL-12 liga-se subunidade 1 do receptor da IL-12 e a p35 liga-se
subunidade 2, sendo ambas as cadeias necessrias para uma ligao com alta afinidade citocina e
para a sinalizao.
A via de sinalizao usada pelo receptor da IL-12 a via JakSTAT, na qual:

A ligao da citocina ao receptor activa as proteinas


tirosina cinases associadas ao receptor designadas
Janus cinases (Jak);
No fim leva activao de factores de trascrio
designados transdutores do sinal e activadores da
transcrio (STATs).

Muitas citocinas usam esta via para induzir respostas em


clulas alvo, e diferentes citocinas activam diferentes
combinaes de Jaks e STATs. No caso do receptor da IL-12:

A Jak Tyk2 associa-se com a subunidade 1 do


receptor e a Jak2 associa-se com a subunide 2;
A proteina STAT principalmente envolvida, que
necessria para a maior parte dos efeitos biolgicos
da IL-12, a STAT4.

A expresso da cadeia 2 do receptor da IL-12 aumentada por citocinas, principalmente pelo IFN-
(cuja produo estimulada pela IL-12), e isto um exemplo de uma loop positivo de amplificao nas
respostas imunes.
Aces Biolgicas
A IL-12 crucial para a iniciao da sequncia de respostas que envolvem os macrfagos, as clulas NK
e os linfcitos T que resulta na eliminao total dos micrbios intracelulares:
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Imunologia

A IL-12 estimula a produo de IFN- pelas clulas NK e pelos linfcitos T. Os macrfagos e as


clulas dendriticas produzem IL-12 em resposta a muitos micrbios. A IL-12 secretada estimula
as clulas NK e as clulas T a produzir IFN-, que depois activa os macrfagos a matarem os
micrbios fagocitados. Assim, a imunidade inata contra muitos micrbios mediada por
citocinas que actuam na seguinte sequncia:
Micrbios macrfagos e clulas dendriticas IL-12 IFN- activao dos macrfagos
morte dos micrbios
Grandes quantidades de IL-12 so produzidas em sepse severa por gram-negativas, resultando
na produo de IFN-, que actua em sinergia com o LPS bacteriano estimulando a produo de
TNF pelos macrfagos, o principal mediador do choque sptico. Antagonistas da IL-12 previnem
a letalidade em alguns modelos experimentais de choque sptico induzido por LPS;

A IL12, em conjunto com o IFN-, promove a diferenciao de linfcitos TH CD4+ em clulas TH1
produtoras de IFN-. O subgrupo TH1 das clulas TH activa fagcitos na imunidade mediada por
clulas;

A IL-12 aumenta as funes citotxicas de clulas NK e clulas T CD8 +, ambas activadas. Esta
funo tambm importante na imunidade mediada por clulas.

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220

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Imunologia

Estudos com ratinhos KO e o fentipo raro de pacientes com mutaes no receptor de IL-12 suportam a
concluso de que a IL-12 importante para a produo de IFN-, diferenciao de clulas TH1 e para a
resistncia do hospedeiro a micrbios intracelulares. No entanto, a interpretao destes defeitos
genticos complicada devido ao facto dos genes mutados estarem tambm envolvidos na funo da
IL-23, porque esta contem a mesma cadeia p40 e porqeu o seu receptor apresenta IL-12R1. E ainda, a
sisntese de IFN- no completamente eliminada em ratinhos deficientes em IL-12 provavelmente
devido aco de citocinas compensatrias.
A IL-12 uma ponte importante entre a imunidade inata e adaptativa pois:

produzida durante as reaces imunes inatas inicias contra micrbios intracelulares;


Promoven as respostas imunes adaptativas que protegem o hospedeiro contra esses micrbios.

Interferes do Tipo I (IFNs)


Os interferes do tipo I (IFNs) so uma grande familia de citocinas estruturalmente relacionadas que
medeiam a resposta imune inata inicial contra infeces virais. O termo interfero deriva da habilidade
destas citocinas interferirem com a infeco viral.
Existem muitos IFNs do tipo I, todos eles com uma homologia estrutural considervel e codificados por
genes num nico cluster no cromossoma 9. Em humanos, os IFNs do tipo I incluem:

IFN- (que pode depois ser sub-dividido em 13 subtipos diferentes);


IFN-;
IFN-;
IFN-;
IFN-.

Produo, Estrutura e Receptores


As clulas dendriticas plasmocitoides e os fagcitos mononucleares so as principais fintes de IFN-. Por
outro lado, o IFN- uma unica proteina produzida por vrias clula, como os fibroblastos, e por
vezes designada IFN dos fibroblastos.
As clulas dendriticas plasmocitoides, que circulam no sangue humano e esto presentes em vrios
tecidos, so uma fonte particular de IFNs do tipo I na resposta inata inicial contra muitos virus e os
principais estimulos para a sintese de IFNs do tipo I so:

O estimulo mais potente so os cidos nucleico virais, que se ligam a vrios receptores
intracelulares ou sensores qye esto ligados via de sinalizao que activa a familia de factores
de transcrio factor regulador do interfero (IRF);
TLR3, TLR7 e TLR9, todos nas membranas endossomais, reconhecem dsRNA, DNA de cadeia
simples e DNA CpG no-metilado, respectivamente, levando a activao do IRF e expresso de
genes;
Os sensores citoplasmticos RIG-I e MDA-5 reconhecem RNA viral e tambm induzem a
expresso de IFN do tipo via activao de RIF;
Clulas T activadas por antignios estimulam os fagcitos monucleares a produzirs IFNs do tipo
atravs da via CD40-CD40L.

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Imunologia

Todos os IFNs do tipo I ligam o mesmo receptor de superficie e induzem respostas biolgicas
semelhantes. O receptor de IFN do tipo I um membro da familia de receptores de citocinas do tipo II
composto por um heterodimero de dois polipeptideos estruturalmente relacionados, IFNAR1 e IFNAR2,
que esto associados com as tirosinas cinases da familia Janus Tyk2 e Jak1, respectivamente.
Aps ligao ligao dos IFN do tipo I ao receptor, via clssica de sinalizao que transduz o sinal dos
IFNs do tipo I :

As cinases ficam activas e levam fosforilao de STAT1 e STAT2, formao de um heterodimero


e recrutamento de IRF9;
O complexo STAT-1/2:IRF9 resultante transloca-se para o ncleo e liga-se a sequncias de cidos
nucleicos designadas elementos de resposta estimulados por IFN (ISREs) que esto presentes
em vrios genes diferentes, induzindo a sua transcrio.

Em adio a esta via clssica de sinalizao pelo receptor de IFN do tipo I, vrias outras vias de
sinalizao iniciadas pelo receptor de IFNs do tipo I tambm contribuem para as respostas biolgicas
das clulas a IFNs do tipo I:

A fosforilao de STAT1 leva formao de homodimeros de STAT1 que ligam a diferentes


sequncias de cidos nucleicos, designadas IFN--activated sites (GAS), que esto presentes em
alguns dos genes que contm ISREs e noutros genes;
O receptor de IFNs do tipo I tambm activa vias dependentes de MAP cinases e vias de PI-3
cinase, ambas contribuindo para as respostas biolgicas das clulas a IFNs do tipo I.

importante salientar que a regulao pelos IFNs do tipo I da transcrio de genes regulada por
diferentes proteinas co-activadoras, que formam complexos com dimeros STAT ligados a sequncias
ISRE e GAS.
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Imunologia

Aces Biolgicas
As aces dos IFNs do tipo I protegem contra infeces virais e promovem a imunidade mediada por
clulas contra micrbios intracelulares:

Os interferes do tipo I inibem a replicao viral. O IFN leva a que as clulas sintetizem um
numero de enzimas que interferem com a transcrio de RNA ou DNA viral e com a replicao
viral. A aco antiviral dos IFNs do tipo I principalmente uma aco parcrina, pelo que uma
clula infectada por um virus secreta IFN para proteger clulas vizinhas que no esto
infectadas. Uma clula que respondeu ao IFN e resistente a infeces virais encontra-se em
estado antiviral. O IFN secretado por uma clula infectada pode tambm actuar de um modo
autocrino para inibir a replicao viral nessa clula;

Os IFNs do tipo I aumentam a expresso de molculas MHC classe I. Como as CTLs CD8+
reconhecem antignios estranhos ligados a molculas MHC classe I, o IFN do tipo I aumenta o
reconhecimento de antignios virais associados a classe I em clulas infectadas e, assim, a
eficincia da morte dessas clulas mediada por CTLs. O IFN tipo I tambm aumenta a actividade
citotxica de clulas NK;

Os interferes do tipo I estimulam o


desenvolvimento de clulas TH1 em
humanos.
Este
efeito
deve-se
principalmente habilidade dos IFNs do tipo
I promoverem nas clulas T a expresso de
receptores funcionais para a principal
citocina indutora de TH1, IL-12;

Os IFNs do tipo I promovem o sequestro de


linfcitos
nos
ndulos
linfticos,
aumentando assim a activao dos linfcitos
por antignios concentrados no ndulos,
especialmente nas infeces virais;

Os interferes do tipo I inibem a


proliferao de vrios tipos de clulas,
incluindo linfcitos, in vitro. Isto deve-se
induo das mesmas enzimas que bloqueiam
a replicao viral, mas isto tambm envolve
outras enzimas que alteram o metabolismo
de aminocidos como triptofano.

Assim, as principais actividades dos IFNs do tipo I funcionam em conjunto para eliminar as infeces
virais:

Ratinhos KO pra o receptor de IFNs do tipo I so susceptiveis a infeces virais;

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Imunologia

IFN- est em uso clinico como um agente anti-viral para alguns problemas hematolgicos
malignos;
IFN- usado como uma terapia para a esclerose multipla, mas os mecanismos do seu efeito
benfico nesta doena ainda so desconhecidos.

Interleucina-10 (IL-10)
A IL-10 um inibidor dos macrfagos e clulas dendriticas activadas e, assim, est envolvida no controlo
das reaces imunes inatas e da imunidade mediada por clulas.
Produo, Estrutura e Receptores
A IL-10 um membro de uma familia de citocinas dimricas nocovalentemente ligadas, sendo que cada cadeia contem um dominio
de seis -hlices que intercalam com a outra cadeia. A esta familia
tambm pertencem IL-19, IL-20, IL-22, IL-24 e IL-26:

O receptor de IL-10 pertence familia de receptores de


citocinas do tipo II e consiste em duas cadeias, que se
associam com as cinases da familia Janus Jak1 e Tyk2, sendo a
STAT3 a principal molcula a jusante na sinalizao a ser
induzida pela IL-10;
A IL-10 produzida principalmente por macrfagos e clulas T reguladoras, ambas activadas;
Como tanto produzida por e inibe as funes dos macrfagos, esta citocina um exemplo de
um regulador de feedback negativo.

No claro quais os diferentes estimulos que podero actuar nos macrfagos para induzir a produo
de uma citocina regulatria como a IL-10 ou citocinas efectoras como TNF e IL-12, ou quais os estimulos
que elicitam a produo de todas estas citocinas mas com diferentes cinticas. No entanto, a IL-10
tambm produzida por alguns tipos de clulas no-linfides (e.g., queratincitos).
Aces Biolgicas
Os efeitos biolgicos da IL-10 resultam da sua habilidade para inibir muitas das funes dos macrfagos
activados. Os macrfagos respondem aos microbios secretando citocinas e expressando coestimuladores que aumenta a activao de clulas T e a imunidade mediada por clulas. A IL-10 actua
nos macrfagos activados para terminar essas respostas e levar o sistema ao seu estado de repouso
quando a infeco eliminada:

A IL-10 inibe a produo de IL-12 por macrfagos activados e pelas clulas dendriticas. Como a
IL-12 um estimulo critico para a secreo de IFN- e um indutor das reaces imunes inatas e
mediadas por clulas contra micrbios intracelulares. De facto, a IL-10 foi dscoberta como um
inibidor da produo de IFN-;

A IL-10 inibe a expresso de co-estimuladores e de molculas MHC classe II em macrfagos e


clulas dendriticas. Devido a estas aces, a IL-10 serve para inibir a activao das clulas T e
terminar as reaces imunes mediadas por clulas.

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Imunologia

O virus Epstein-Barr contem um gene homlogo IL-10 humana, e a IL-10 viral tem as mesma
actividade da citocina natural. Isto levanta a possibilidade interessante de que a aquisio do gene IL-10
durante a evoluo do virus deu-lhe a habilidade de inibir a imunidade do hospedeiro e, assim, uma
vantagem de sobrevivncia no hospedeiro afectado.
Outras Citocinas da Imunidade Inata
A interleucina-6 (IL-6) uma citocina que funciona tanto na imunidade inata como na adaptativa:

sintetizada pelos fagcitos mononucleares, clulas endoteliais vasculares, fibroblastos e outras


clulas em resposta a micrbios e outras citocinas, principlamente IL-1 e TNF. tambm
produzida por algumas clulas T activadas;
A forma funcional da IL-6 um homodimero, com cada subunidade a formar um dominio
globular de quatro -hlices;
O receptor de IL-6 consiste numa proteina de ligao citocina e numa subunidade de
transduo do sinal, ambas pertencendo familia de receptores de citocinas do tipo I;
A principal via de sinalizao induzida pela IL-6 envolve a activao de Jak1 e STAT3, e leva
transcrio de diferentes genes.

A IL-6 tem diversas aces, entre elas:


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Imunologia

Na imunidade inata, estimula a sintese de proteinas de fase aguda pelas hepatcitos e, assim,
contribui para a resposta de fase aguda;
Estimula a produo de neutrfilos, normalmente actuando em conjunto com factores
estimuladores de colnias;
Na imunidade adaptativa, a IL-6 estimula o crescimento de linfcitos B que se diferenciaram em
produtores de anticorpos;
Actua de modo semelhante como factor de crescimento para plasmcitos neoplsticos
(mielomas), e muitas clulas de mieloma que crescem autonomamente secretam IL-6 como
factor de crescimento autocrino;
capaz de promover o crescimento de hibridomas produtores de anticorpos monoclonais, que
so derivados dos mielomas;
Promove as reaces imunes mediadas por clulas estimulando a produo de algumas
citocinas pr-inflamatrias (principalmente IL-17) e inibindo a gerao e as aces das clulas T
reguladoras.

A interleucina-15 (IL-15) uma citocina que serve funes importantes de estimulao do crescimento
e de sobrevivncia para as clula T e NK:

um membro da familia de citocinas do tipo I e produzida por fagcitos mononucleares e,


provavelmente, por outors tipos de clulas em resposta infeco viral, ao LPS e a outros sinais
que desencadeiam a imunidade inata;
estruturalmente homloga IL-2;
O receptor para a IL-15 apresenta uma cadeia de ligao a citocinas que homloga mas
distinta da cadeias do receptor de IL-2, e as mesmas cadeias de transduo do sinal do
receptor de IL-2. A cadeia liga a IL-15 com alta afinidade;
A ligao de IL-15 ao seu receptor activa vias dependentes de Jak3, STAT5 e Akt que promovem
a sobrevivncia da clula e levam proliferao;
As funes da IL-15 incluem a sobrevivncia de clulas T CD8+, clulas NK e clulas T NK;
A IL-15 parece ser necessria para a diferenciao e activao de clulas NK.

A interleucina-18 (IL-18) uma citocina estruturalmente relacionada com a IL-1:

Ao contrrio da IL-1, as suas principais funes biolgicas so aumentar a produo de IFN-


pelas clulas T e promover a diferenciao de clulas T CD4+ TH1 produtoras de IFN-. Estes
efeitos da IL-18 so sinrgicos com os da IL-12;
As principais fontes de IL-18 so os macrfagos e as clulas dendriticas, e a produo
dependente de caspase-1, tal como na IL-1;
O receptor de IL-18 da familia IL-1/TLR e sinaliza atravs de um dominio TIR que recruta
proteinas IRAK e TRAF, levando activao dos factores de transcrio NF-B e AP-1.

As interleucinas-23 e -27 so membros de uma familia de citocinas estruturalmente relacionadas com a


IL-6 e com a IL-12, e os seus receptores so estruturalmente relacionados com os receptores de IL-6 e
IL-12. Como a IL-12, as suas funes ligam a imunidade inata e a imunidade adaptativa:

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IL-23
Citocina heterodimrica composta por uma nica
cadeia de 19 kD (p19) emparelhada com a cadeia
p40 de IL-12;

Produzida por macrfagos e clulas dendriticas em


resposta infeco microbiana;
O receptor de IL-23 expresso em clulas T e
clulas NK, e consiste num heterodimero de uma
unica cadeia IL-23R e a cadeia IL-12R1;

Contribui para a patologia inflamatria de doenas


autoimunes como encefalomielite alrgica
experimental;
Parece ser importante para a resistncia a algumas
bactrias, incluindo o organismo gram-negativo
Klebsiella pneumoniae;
Um modo pelo qual influencia as respostas autoimunes e protectoras atravs da promoo da
diferenciao ou manuteno das clula T que
produzem IL-17, uma citocina pr-inflamatria.

Imunologia
IL-27
Heterodimero composto por uma subunidade helical (IL-17 p28), ligada a uma subunidade
homloga ao dominio estracelular do receptor de
IL-6;
Produzida por macrfagos e clulas dendriticas em
resposta a patognios;
Liga-se a um receptor de alta afinidade
heterodimerico, IL-27R, composto pela cadeia
gp130 IL-6 e por uma segunda cadeia homloga
que mais expresso em clulas NK e NK-T em
repouso, clulas T de memria e efectoras e clulas
T reguladoras;
A sua influncia nas respostas imunes complexa e
inclui tanto funes pr-inflamatrias e
reguladoras;
Como a IL-12, promove a diferenciao TH1 e a
produo de IFN- pelas clulas T;
Ratinhos KO para IL-27R desenvolvem respostas
inflamatrias mediadas por clulas T contra certos
patognios infecciosos, o que indica um papel da
IL-27 no controlo das respostas das clulas T.

Vrias citocinas foram identificadas por homologia de sequncias como pertencentes familia de
citocinas relacionadas com IL-10:

Incluem IL-19, IL-20, IL-22, IL-24 e IL-26;


Todas ligam receptores de citocinas do tipo II que partilham vrias subunidades;
Parecem regular reaces inflamatroias em tecidos, mas as suas funes fisiolgicas ainda no
so conhecidas.

Papeis das Citocinas na Imunidade Inata e na Inflamao


Diferentes citocinas tm papeis chave na imunidade inata contra diferentes classes de micrbios.
Em infeces por bactria extracelulares piognicas (pus-forming), os macrfagos respondem s
endotoxinas bacterianas e, talvez, contra outros produtos microbianos produzindo TNF, IL-1 e
quimiocinas:

TNF e IL-1 actuam no endotlio vascular no local de infeco para induzir a expresso de
molculas de adeso que promovem a ligao estvel dos neutrfilos e moncitos sanguineos
ao endotlio neste local;
Quimiocinas produzidas por macrfagos e clulas endoteliais estimulam a extravaso do
leuccitos para a infeco, onde a reaco da imunidade inata montada para eliminar os
micrbios infecciosos.

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Imunologia

Como seria de esperar, o TNF, a IL-1 e as quimiocinas


so as primeiras citocinas a serem secretadas, pois so
elas que abrem o caminho dos leuccitos para o local
de infeco. S depois outras citocinas so secretadas.
A IL-12 e o IFN- so as citocinas mais importantes nas
respostas imunes contra bactrias intracelulares:

Os macrfagos e as clulas dendriticas


respondem a muitos micrbios, incluindo
bactrias intracelulares e produtoras de LPS,
secretando IL-12, que induz a produo local
de IFN- a partir de clulas NK e clulas T;
O IFN- activa depois os macrfagos a destruir
micrbios fagocitados.

A IL-12 tambm estimula a subsequente resposta imune adaptativa e dirige-a para as clulas TH1, que
so mediadores da imunidade celular e a resposta mais efectiva na destruio de bactrias
intracelulares. Estas aces da IL-12 so complementadas pela IL-18.
O recrutamento e a activao de leuccitos mediados por citocinas so responsveis por danos em
tecidos normais que normalmente acompanham as reaces imunes inatas s infeces. Estas citocinas
derivadas de macrfagos, especialmente o TNF e a IL-1, so tambm responsveis pelas manifestaes
sistmicas da infeco.
Em infeces virais, IFNs do tipo I so secretados por clulas infectadas, clulas dendriticas e
macrfagos e funcionam para inibir a replicao e infeco virais, e outras citocinas so tambm
secretadas:

A IL-15 estimula o desenvolvimento e, talvez, a activao de clulas NK;


A IL-12 aumenta a actividade cititxica das clulas NK;
A morte de clulas infectadas por virus mediada por clulas NK elimina os resevatrios de
infeco.

Assim, as citocinas dominantes produzidas em resposta a diferentes micrbios contribuem para a


natureza das reaces imunes inatas contra esses micrbios:

A resposta inicial contra bactrias piognicas consiste principalmente em neutrfilos;


A resposta contra bactrias intracelulares dominada por macrfagos activados;
A resposta contra virus consiste em clulas NK em adio a outras clulas inflamatrias.

Contudo, pode existir uma sobreposio considervel.

Citocinas que Medeiam e Regulam a Imunidade Adaptativa


As citocinas medeiam a proliferao e a diferenciao dos linfcitos aps o reconhecimento de
antignios na fase acticvadora das respostas imunes adaptativas e medeiam a activao de clulas
efectoras especializadas na fase efectora da imunidade adaptativa.
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Imunologia

A produo de citocinas uma das principais respostas dos linfcitos T ao reconhecimento de


antignios, podendo as principais citocinas da imunidade adaptativas ser resumidas na sequinte
tabela:
Citocina

Tamanho (kD)

Principais fontes
celulares

Interleucina-2
(IL-2)

14-17 kD

Clulas T

Interleucina-4
(IL-4)

18 kD

Clulas T CD4 (TH2),


mastcitos

Interleucina-5
(IL-5)

45-50 kD; homodimero de


subunidades de 20 kD

Clulas T CD4 (TH2)

Interfero-
(IFN-)

50 kD (glicosilada);
homodimero de
subunidades de 21 a 24 kD

Clulas T (TH1, CD8 ),


clulas NK

Transforming
growth factor (TGF-)

25 kD; homodimero de
subunidades de 12,5 kD

Clulas T,
macrfagos, outros
tipos de clulas

Linfotoxina (LT)

21-24 kD, secretada como


um homotrimero ou
associado com LT2 na
membrana celular

Clulas T

Interleucina-13
(IL-13)

15 kD

Clulas T CD4 (TH2),


clulas NKT,
mastcitos

Interleucina-17
(IL-17)

20-30 kD

Clulas T

Clulas T: proliferao, sintese aumentada de


citocinas, potencia a apoptose mediada por
FAS, promove o desenvolvimento de clulas T
reguladoras, sobrevivncia
Clulas NK: proliferao, diferenciao
Clulas B: proliferao, sintese de anticorpos
(in vitro)
Clulas B: switch de isotipo para IgE
Clulas T: diferenciao de TH2, proliferao
Macrfagos: inibio da activao mediada
por IFN-
Mastcitos: proliferao (in vitro)
Eosinfilos: activao, produo aumentada
Clulas B: proliferao, produo de IgA
Macrfagos: activao (funes microbicidas
aumentadas)
Clulas B: switch de isotipo para subclasses de
IgG opsonizantes e fixadoras do complemento
Clulas T: diferenciao TH1
Vrias clulas: expresso aumentada de MHC
classe I e II, processamento e apresentao de
antignios a clulas T aumentada
Clulas T: inibio da proliferao e das
funes efectoras
Clulas B: inibio da proliferao, produo
de IgA
Macrfagos: inibio da activao,
estimulao dos factores angiognicos
Fibroblastos: sintese de colagnio aumentada
Recrutamento e activao de meutrfilos
Organognese linfide

Joana Maria Soares Pereira

Principais alvos celulares e efeitos biolgicos

Clulas B: switch de isotipos para IgE


Clulas epiteliais: produo de muco
aumentada
Fibroblastos: sintese de colagnio aumentada;
Macrfagos: sintese de colagnio aumentada
Clulas epiteliais: produo de quimiocinas
aumentada
Macrfagos: produo de quimiocinas e
citocinas aumentada
Clulas epiteliais: produo de GM-CSF e GCSF

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Imunologia

Interleucina-2 (IL-2)
A IL-2 um factor de crescimento, sobrevivncia e diferenciao para os linfcitos T, e desempenha um
papel principal na regulao das respostas das clulas T atravs da sua aco nas clulas T reguladoras:

Devido sua habilidade para suportar a proliferao de clulas T estimuladas por antignios, a
IL-2 foi inicialmente designada factor de crescimento de clulas T;
Acuta nas mesmas clulas que a produzem ou em clulas adjacentes, actuando, assim, como um
factor de crescimento e sobrevivncia autcrino ou parcrino.

Produo, Estrutura e Receptores


A produo e secreo de IL-2 feita principalmente pelos linfcitos T
CD4+:

A activao de clulas T por antignios e co-estimuladores


estimula a transcrio do gene IL-2 e a sintese e secreo da
proteina;
A produo de IL-2 transiente, com um pico de secreo a
ocorrer 8 a 12 aps a activao;
As clulas T CD4+ secretam IL-2 na sinapse imunolgica formada
entre a clulas T e a APC;
Receptores de IL-2 nas clulas T tambm tendem a localizar-se
na sinapse, de modo que a citocina e os seus receptores
atingem concentraes locais suficientemente altas para iniciar
respostas celulares.

A IL-2 secretada uma glicoproteina de 14-17 kD que apresenta uma


estrutura globular com quatro -hlices, o que coressponde a um
fentipo de citocinas que interagem com receptores de citocinas do
tipo I.
A expresso de receptores de IL-2 funcionais induzida aps a
activao de clulas T naive e efectoras. No entanto, as clulas T
reguladoras, que tm de estar num estado activado constante por
antignios prprios, apenas expressa receptores de IL-2.
O receptor de IL-2 (IL-2R) consiste em trs proteinas nocovalentemente associadas incluindo IL-2R (CD25), IL-2R/15R e c.
Das trs cadeias, apenas IL-2R unica do IL-2R:

A IL-2 liga-se cadeia com baixa afinidade, e no leva a


qualquer resposta sinalizadora citoplasmtica detectvel;
IL-2R/15R, que tambm faz parte do receptor de IL-15,
contribui para a ligao de IL-2 e entra na via de sinalizao
dependente de Jak3-STAT5;
A cadeia partilhada com receptores de IL-4, IL-7 e IL-15, e

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230

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Imunologia

assim designada de cadeia comum (c). Apesar desta cadeia no estar directamente envolvida
na ligao de IL-2, a sua associao com o complexo receptor tambm necessaria para a
entrada nas vias de transduo do sinal de MAP cinases e PI-3 cinase.
A regulao da expresso de receptores de IL-2 feita do seguinte modo:

Os complexos IL-2Rc so expressos a baixos niveis em clulas T em descanso (e em clulas NK)


e ligam com uma afinidade de aproximadamente 10-9 M;
A expresso de IL-2R induzida de novo e a expresso de IL-2R sobre-regulada com a
activao de clulas T CD4+, CD8+ e de memria. Assim, esta subunidade essencial para a
activao das clulas T;
As clulas que expressam IL-2R e formam complexos IL-2R so capazes de ligar IL-2 mais
fortemente, com uma afinidade de 10-11 M, e a estimulao do crescimento de tais clulas
ocorre a concentraes de IL-2 similarmente baixas.

Estudos in vitro indicam que a IL-2, produzida em resposta estimulao pelo antignio, necessria
para a induo de IL-2R e IL-2R e, assim, as clulas T que produzem IL-2 ou clulas prximas das
clulas produtoras de IL-2 so mais provveis de responder citocina. No entanto, as clulas T CD4+
reguladoras, que tm um papel essencial na manuteno da tolerncia a auto-antignios, expressam IL2R e IL-2R mesmo sem activao por antignios ou IL-2.
Aces Biolgicas
a IL-2 foi originalmente descrita como um factor de crescimento das clulas T com base em estudos in
vitro, mas mais recentemente outros estudos indicam outros papeis da IL-2 que devero predominar in
vivo:
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Imunologia

A IL-2 requerida para a sobrevivncia e, talvez, para a funo das clulas T reguladoras, que
suprimem respostas imunes contra antignios prprios e outros. A expresso constitutiva de
receptores de IL-2 nas clulas T reguladoras consistente com a sua necessidade de IL-2 para a
sobrevivncia. Estudos em ratinhos KO forneceram evidncias de que a funo primria, no
redundante, da IL-2 in vivo a supresso de respostas I. Ratinhos que no apresentam IL-2, IL2R ou IL-2R desenvolvem linfadenopatia e autoimunidade mediada por clulas T, e no
apresentam clulas T reguladoras. Estas descobertas em ratinho indicam que outras citocinas
pordem partilhar com a IL-2 o papel de factor de crescimento para clulas T mas as funes
reguladoras da IL-2 no podem ser substituidas por outras citocinas;

A IL-2 estimula a sobrevivncia, proliferao e diferenciao de clulas T activadas por


antignios. A IL-2 tambm promove a sobrevivncia de clulas induzindo a proteina antiapopttica Bcl-2. A IL-2 promove a progresso do ciclo celular atravs da sintese de ciclinas e da
degradao de um bloqueador do ciclo celular, o p27. A IL-2 aumenta tambm a produo de
outras citocinas efectoras, como IFN- e IL-4, pelas clulas T;

A IL-2 promove a proliferao e diferenciao de clulas naturalmente assassinas. Esta citocina


estimula o crescimento de clulas NK e aumenta as suas funes citotxicas, produzindo clulas
designadas lymphokine-activated killer cells. Como as clulas NK, em semelhana com as
clulas T em descanso, expressam IL-Rc (mas no IL-2R), podem ser estimuladas apenas por
altos niveis de IL-2. Nas clulas NK, o complexo c est associado com a cadeia do receptor de
IL-15, e a IL-15 funciona como um factor de crescimento para estas clulas;

A IL-2 actua nas clulas B tanto como factor de crescimento mas tambm como um estimulo
para a sintese de anticorpos, uma funo demonstrada in vitro.

Interleucina-4 (IL-4)
A IL-4 o principal estimulo para a produo de anticorpos IgE e para o desenvolvimento de clulas T H2
apartir de clulas TH CD4+ naive:

A IL-4 a citocina que marca o subgrupo TH2 e funciona tanto como uma citocina indutora e
efectora destas clulas.

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Imunologia

Produo, Estrutura e Receptores


A IL-4 um membro da familia de citocinas com uma estrutura de quatro
-hlices e as suas principais fontes celulares so:

Linfcitos T CD4+ do subgrupo TH2;


Mastcitos activados.

O receptor de IL-4 das clulas linfides consiste numa cadeia , que


membro da familia de receptores de citocinas do tipo I, associada com a
cadeia c partilhada por outros receptores de citocinas:

Este receptor IL-4Rc sinaliza atravs da via Jak-STAT (Jak3- ou 4STAT6) e por uma via que envolve um substrato de resposta
insulina (IRS), designado IRS-2.

A IL-4 a unica citocina que a activa a proteina STAT6, que induz a transcrio de genes que so
responsveis por muitas das aces da IL-4, como a diferenciao de TH2 e o switch pra IgE das clulas
B.
Aces Biolgicas
As aces biolgicas da IL-4 incluem a estimulao de IgE e as reaces mediadas pro
mastcitos/eosinfilos:

A IL-4 a principal citocina que estimula o switch de cadeias pesadas de Ig nas clulas B para o
isotipo IgE. Ratinhos KO para IL-4 tm menos de 10% dos niveis normais de IgE. Os anticorpos
IgE tm papeis importantes nas defesas mediadas por eosinfilos contra infeces helminticas
ou artrpodes, sendo esta a principal funo das clulas T H2 na defesa do hospedeiro. A IgE
tambm o principal mediador das reaces de hipersensibilidade imediatas (alergias) e a
produo de IL-4 importante para o desenvolvimento de alergias.a IL-4 tambm aumenta o
switch para IgG4 e inibe o switch para IgG2 e IgG3, ambos estimulados por IFN-. Esta uma das
vrias aces antagonistas reciprocas da IL-4 e do IFN-;

A IL-4 estimula o desenvolvimento de clulas TH2 a partir de clulas T CD4+ e funciona como
um factor de crescimento autcrino para clulas TH2 diferenciadas. Assim, a IL-4 responsvel
pela induo e expanso desta subgrupo. Ratinhos KO para IL-4 ou STAT6 mostram uma
deficincia no desenvolvimento e na manuteno de clulas TH2, mesmo aps os estimulos que
so normalmente indutores potentes desta subgrupo. A IL-4 inibe tambm o desenvolvimento
de clulas TH1 e TH17;

Em conjunto com a IL-13, contribui para a activao de uma forma alternativa de macrfagos
que distinta da resposta dos macrfagos ao IFN-. Os efeitos a IL-4 nos macrfagos incluem a
induo da arginase levando produo de colagnio, e a uma expresso aumentada de
receptores de manose, que promve a fagocitose de micrbios.

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Imunologia

Interleucina-5 (IL-5)
A IL-5 um activador de eosinfilo e serve como uma ponte entre a activao de clulas T e a
inflamao eosinofilica.
Produo, Estrutura e Receptores
A IL-5 um membro da familia de citocinas tipo I composta por um homodimero de um polipeptideo
que contem um dominio de quatro -hlices e as suas principais fontes celulares so:

Clulas T CD4+ do subgrupo TH2;


Mastcitos activados.

O receptor de IL-5 um heterodimero composto por uma unica cadeia e uma cadeia comum (c),
que tamb faz parte dos receptores de IL-3 e de factor estimulante d colnias de granulcitosmacrofagos (GM-CSF):

A cadeia IL-5R capaz de ligar IL-5 com baixa afinidade, mas no sinaliza;
A cadeia c no liga IL-5 por si s mas necessria para uma ligao de alta afinidade pela
cadeia e para a entrada nas vias de transduo do sinal;
A principal via de sinalizao induzida pela IL-5 envolve Jak2 e STAB.

Aces Biolgicas
As principais aces da IL-5 so:

Activar eosinfilos maduros;


Estimular o crescimento e a diferenciao de eosinfilos;
Estimular a proliferao de clulas B e a produo de anticorpos IgA.

Os eosinfilos antivados so capazes de matar helmintos. Os eosinfilos expressam receptores Fc


especificos para antocpros IgG e IgA e so, assim, capazes de ligar micrbios opsonizados por IgG e IgA,
como helmintos. Ratinhos KO para IL-5 so deficientes em respostas dos eosinfilos e so susceptiveis a
infeces por helmintos.
Interleucina-13 (IL-13)
A IL-13 estrutural e funcionalmente semelhante IL-4 e desenpenha papeis chave na defesa contra
helmintos e nas doenas alrgicas.
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Imunologia

Produo, Estrutura e Receptores


A IL-13 um membro da familia de citocinas com uma estrututa com quatro -hlices, com homologia
de sequncia limitada mas com homologia estrutural para com a IL-4 significativa sendo as suas
principais fontes celulares:

Principalmente clulas T CD4+ do subgrupo TH2;


Clulas T CD8+;
Clulas NK-T;
Basfilos;
Eosinfilos.

Esta citocina codificada por um gene numa regio do cromossoma 5 humano que inclui vrios genes
de citocinas importantes nas doenas alrgicas, incluindo IL-4, IL-5 e IL-9.
O receptor funcional de IL-13 um heterodimero da cadeia IL-4R e da cadeia IL-13R1:

Este complexo capaz de ligar tanto IL-4 como IL-13 com alta afinidade, e responsvel pelo
facto da maior parte dos efeitos da IL-13 serem partilhados com a IL-4;
O receptor IL-4R/IL-13R1 expresso numa grande variedade de clulasm incluindo clulas B,
fagcitos mononucleares, clulas dendriticas, eosinfilos, basfilos, fibriblastos, clulas
endoteliais e clulas epiteliais bronquiais. As clulas T no expressam receptor de IL-13.

A sinalizao do IL-13R semelhante sinalizao do IL-4R, envolvendo a fosforilao mediada por Jak1
e Tyk2 da STAT6 tal como IRS2. Como o receptor de IL-13 no inclui a cadeia c, alguns dos eventos de
sinalizao a jusante induzidos pela ligao de IL-4 ao receptor de IL-4 no so induzidos nem pela
ligao de IL-4 nem de IL-13 ao IL-13R.
Um segundo receptor de alta afinidade para IL-13, designado IL-3R2, no parece apresentam
quaisquer funes sinalizadoras, e dever actuar como um inibidor negativo dominante e/ou como um
receptor armadilha que bloqueia os efeitos da IL-13 em certos tipos de clulas, incluindo clulas
epiteliais bronquiais.

Aces Biolgicas
A IL-13 actua em conjunto com a IL-4 na produo dos efeitos associados com a inflamao alrgica e na
defesa contra parasitas. Os padres de distribuio distinctos dos receptores de IL-4 e IL-13, a diferena
na sinalizao por estes receptores e diferenas na induo e estabilidade de IL-4 e IL-13 provavelmente
contribuem para o facto da IL-13 apresentar efeitos biolgicos que so distinctos dos da IL-4:
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235

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Imunologia

A IL-13 promove a fibrose como parte da fase de reparao de tecidos dos estados
inflamatrios crnicos. A funo fibrognica da IL-13, que no partilhada com a IL-4, deve-se
estimulao de fibroblastos e macrfagos para que estes sintetizem colagnio, em parte
induzindo a expresso da enzima arginase-I, e estimulao do macrfagos para que estes
produzam TGF-, que por si s promove a fibrose. A fibrose induzida por IL-13 contribui
significativamente para a patologia da asma crnica, das doenas intersticiais do pulmo e das
infeces parasiticas;

A IL-13 estimula a produo de muco pelas clulas epiteliais do pulmo. Esta propriedade
tambm no partilhada com a IL-4 e tambm contribui para a patognese da asma. A secreo
de muco mediada pela IL-13 deve-se aos efeitos da citocina na proliferao, diferenciao e
funo secretria das clulas epiteliais caliciformes bronqueiais;

A IL-13 induz o switch de classe para IgE das clulas B. Esta propriedade partilhada com a IL-4.
Ratinhos KO para IL-13 tm niveis de IgE reduzidos, mas produzem IL-4;

A IL-13 promove a inflamao induzindo a expresso de molculas de adeso epiteliais (e.g.,


VCAM-1) e quimocinas, que medeiam o recrutamento de granulcitos e moncitos para os
tecidos. Os efeitos pr-inflamatrios da IL-13 podem ser protectores contra infeces
parasiticas e prejudiciais no caso de doena asmtica e outras doenas dos pulmes.

Interfero- (IFN-)
O IFN- a principal citocina activadora de macrfagos e serve funes criticas na imunidade inata e na
imunidade adaptativa mediada por clulas contra micrbios intra-celulares:

tambm designado IFN imune ou do tipo II;


Apesar de apresentar alguma actividade anti-viral, no uma citocina anti-viral potente, e
funciona principalmente como um activador das clulas efectoras do sistema imune.

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Imunologia

Produo, Estrutura e Receptores


O IFN- uma proteina homodimrica e as suas principais fontes celulares so:

Clulas naturalmente assassinas;


Clulas CD4+ TH1, sendo caracteristica destes grupo de clulas;
Clulas T CD8+.

As clulas NK secretam IFN- em resposta a ligandos activadores na superficie de clulas do hospedeiro


infectadas ou em stress ou em resposta IL-12, actuando como mediador da imunidade inata. No
entanto, na imunidade adaptativa, as clulas T produzem IFN- em resposta ao reconhecimento de
antignios e a produo aumentada pelas IL-12 e IL-18. Assim, a sequncia de reaces que envolvem
IL-12 e IFN- central para a imunidade mediada por clulas contra micrbios intracelulares.
O receptor de IFN- composto por dois polipeptidos estruturalmente homlogs que pertencem
familia de receptores do tipo II, designadas IFN-R1 e IFN-R2:

A IFN- liga-se e induz a heterodimerizao de IFNR1 e IFN-R2, que se associam, respectivamente,


com as cinases Jak1 e Jak2;
A activao destas enzimas leva fosforilao de
STAT1 e dimerizao, ligao de dimeros STAT1 a
sequncias GAS em regies reguladoras de vrios
genes e transcrio desses genes, como no casos dos
IFNs do tipo I;
Os genes induzidos pelo IFN- codificam diferentes
molculas envolvidas no aumento das respostas
imunes adaptativas e nas funes efectoras dos
macrfagos.

Diferentes genes que resposndem ao IFN- so activados


tanto pela STAT1 sozinha como por esta em conjunto com
outros factores de transcrio, incluindo factor-1 de
resposta ao IFN (IRF-1) e transactivador classe II, que so
induzidos pela STAT1. Ratinhos KO para STAT1 so
completamente insensiveis s aces do IFN-.
Aces Biolgicas
As funes do IFN- so importantes na imunidade mediada por clulas contra micrbios intracelulares:

O IFN- activa os macrfagos para que estes matem micrbios fagocitados. Em conjunto com o
CD40L, o IFN- o meio pelo qual as clulas TH1 aumentam a funo dos macrfagos, e o IFN-
a unica via pela qual as clulas NK activam os macrfagos na imunidade inata. O IFN- aumenta
a funo microbicida dos macrfagos estimulando a sintese de espcies reactivas de oxignio e
xido nitrico. O IFN- medeia estes efeitos principalmente activando a transcrio de genes que
codificam as enzimas necessrias para a produo de espcies reactivas de oxignio e
intermedirios reactivos de azoto. As molculas reactivas so produzidas nos lisossomas e
destroem micrbios que esto contidos nos fagolisossomas;

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Imunologia

O IFN- promove a diferenciao de clulas T CD4+ naive em clulas TH1 e inibe a diferenciao
em clulas TH2. O IFN- estimula a produo de um factor de transcrio chamado T-bet que
promove directamente a diferenciao em TH1. O efeito indutor de TH1 do IFN- tambm
parcialmente mediado indirectamente activando fagcitos mononucleares a produzirem IL-12,
que a principal citocina indutora de TH1. Em ratinho, o IFN- aumenta a expresso da cadeia
sinalizadora do receptor de IL-12. A inibio da diferenciao em TH2 pelo IFN- envolve a
supresso mediada pelo T-bet do GATA-3, um factor de transcrio que necessrio para a
entrada das clulas T naive na linhagem TH2;

O IFN- actua nas clulas B para promover o switch para certas subclasses de IgG,
principalmente IgG2 em ratinho, e para inibir o switch para isotipos dependentes de IL-4,
como IgE e IgG1. As subclasses IgG induzidas pelo IFN- ligam receptores Fc em fagcitos e
activam o complemento, e ambos estes mecanismos promovem a fagocitose de micrbios
opsonizados. Assim, o IFN- induz as respostas de anticorpos que tambm participam na
eliminao de micrbios mediada por fagcitos, em concerto com os efeitos directos
activadores de macrfagos desta citocina;

O IFN- estimula a expresso de molculas MHC classe I e classe II e de co-estimuladores nas


APCs. O IFN- tambm estimula a produo de muitas proteinas envolvidas nao processamento
de antignios, incluindo TAP, os compnentes LMP-2 e LMP-7 do proteossoma, e HLA-DM. Assim
o IFN- aumenta a apresentao de antignios associada a MHC e amplifica a fase de
reconhecimento das respostas imunes aumentando a expresso de ligandos que as clulas T
reconhecem. O IFN- tambm um activador das clulas endoteliais vasculares e potencia
muitas das aces do TNF nas clulas endoteliais, promovendo a adeso e a extravaso dos
linfcitos T para os locais de infeco.

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Imunologia

O efeito final destas actividade do IFN- promover as reaces inflamatrias ricas em macrfagos
enquanto inibe as reaces ricas em eosinfilos dependentes de IgE. Ratinhos KO para IFN- ou
receptor de IFN- so suceptiveis a infeces com micrbios intracelulares, como micobactrias, devido
activao deficiente dos macrfagos.
Transforming Growth Factor (TGF-)
A principal aco do TGF- no sistema imunitrio inibir a proliferao e a activao dos linfcitos e
outros leuccitos. No entanto, o TGF- capaz de exercer tanto efeitos anti-inflamatrios como prinflamatroios dependendo do momento da sua aparncia, a quantidade produzida e a da razo de
expresso sistmica/local:

O TGF- foi descoberto como um produto de tumores que promovia a sobrevivncia de clulas
em meios de cultura semi-slidos;
actualmente uma familia de molculas fortemente relacionadas codificadas por genes
distintos, comummente designados TDF-1, TGF-2 e TGF-3;
As clulas do sistema imune sintetizam principalmente TGF-1.

Produo, Estrutura e Receptores


O TGF-1 uma proteina homodimrica que tem como principais fontes celulares:

Clulas T estimuladas por antignios;


Fagcitos monucleares activados pelo LPS;
Muitos outros tipos de clulas.

Algumas clulas T reguladoras produzem TGF- e as mesmas c+elulas podem tambm produzir IL-10,
que, como a TGF-1 tem actividade imunossupressivas.
A TGF-1 sintetizada como um precursor inactivo que proteoliticamente clivado no complexo de
Golgi e forma um homodimero. Este homodimero de TGF-1 secretado numa forma latente em
associao com outros polipeptideos, que devem ser removidos extracelularmente por digesto
enzimtica antes da citocina se ligar aos receptores e exercer os seus efeitos biolgicos.
O receptor do TGF-1 consiste em duas proteinas diferentes, activin receptor-like kinase5 (ALK5) e TGFRII, que sinaliza atravs de um dominio serina/treonina cinase que fosforila factores de transcrio
designados Smads:

Aquando da ligao do TGF-1, a ALK5 fosforila Smad2 e Smad3, que em complexo com Smad4,
se translocam para o ncleo, se ligam a promotres de genes alvo e regulam a sua transcrio.

Aces Biolgicas
O TGF- tem vrias aces biolgicas, entre elas:

O TGF- inibe a proliferao e as funes efectoras das clulas T e a activao dos macrfagos.
O TGF- tambm actua em outras clulas, como neutrfilos e clulas endoteliais,
maioritariamente contra-atacando os efeitos das citocinas pr-inflamatroias, por estas aces,
o TGF- actua para inibir as respostas imunes e inflamatrias. Ratinhos nos quais o gene TGF-1
foi eliminado, ou nos quais o receptor de TGF- foi selectivamente bloqueado em clulas T,
desenvolvem leses inflamatrias descontroladas e linfoproliferao;

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Imunologia

O TGF- regula a diferenciao de subgrupos de clulas T funcionalmente distinctos. Alguns


estudos em ratinhos indicam que a sobrevivncia ou diferenciao das clulas T reguladoras
depende em parte do TGF-. Em adio, o TGF- produzido pelas clulas T reguladoras, ou
talvez pelas clulas dendriticas, capaz de bloquear o desenvolvimento de subgrupos de clulas
T CD4+ TH1 e TH2 efectoras. Para alm disso, o TGF- em combinao com citocinas elicitadas
durante as respostas imunes inatas, como a IL-5, pode promover a diferenciao do subgrupo
de clulas T CD4+ que secreta IL-17. Assim, o TGF- tem efeitos complexos nas respostas imunes
mediadas por clulas T efectoras;

O TGF- extimula a produo de anticorpos IgA induzindo o switch das clulas B para este
isotipo. A IgA o isotipo de anticorpo necessrio para a imunidade das mucosas;

O TGF- regula a reparao dos tecidos aps as reaces imunes e inflamatrias locais. Esta
funo mediada por aces especificas do TGF- na sintese de colagnio e na produo de
enzimas modificadoras da matriz pelos macrfagos e pelos fibriblastos, e contribuindo para a
angiognese.

Outras Citocinas da Imunidade Adaptativa


A interleucina-17 (IL-17) inclui uma familia de seis citocinas estruturalmente relacionadas, algumas das
quais promovem o dano tecidular em doenas de hipersensibilidades e outras so importantes para a
defesa contra infeces bacterianas:

As estruturas das citocinas IL-17 e dos seus receptores no so partilhadas por outras citocinas e
as vias de transduo do sinal que os receptores usam ainda no esto completamente
caracterizadas;

Joana Maria Soares Pereira

240

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Imunologia

A IL-17A e a F, que so os membros mais bem caracterizados da familia, so produzidas por


vrios tipos de clulas, incluindo um subgrupo de clulas T CD4+ efectoras diferentes das TH1 e
TH2;
A diferenciao e a manuteno destas clulas produtoras de IL-17 dependente do TGF-, da
IL-23 e de citocinas produzidas durante as reaces imunes inatas, como a IL-6.

As principais funes da IL-17 so:

As IL-17A e F estimulam as clulas endoteliais e os macrfagos a produzir IL-1, TNF e vrias


quimocinas, que promovem o recrutamento de neutrfilos;
A IL-17 tambm induz as clulas a produzirem citocinas hematopoiticas que estimulam a
produo de neutrfilos pela medula ssea.

A IL-17 produzida pelas clulas T responsvel pela inflamao destrutiva caracteristica de vrios
modelos de doenas autoimunes.
A interleucina-32 (IL-32), previamente designada natural killer cell transcript 4, uma citocina prinflamatria:

principalmente expressa em clulas naturalmente assassinas, clulas T, clulas epiteliais e


mancitos;
capaz de induzir as citocinas pr-inflamatrias TNF- e IL-1 em macrfagos;
Desempenha um papel importante nas respostas imunes inata e adaptativa, apresentando
sinergia com outros membros da imunidade inata;
estimulada pela Mycobacterium tuberculosis e actua de modo sinergtico com os ligandos
NOD1 e NOD2 para estimular a libertao de IL-1 e IL-6 de um modo dependente de caspase-1;
A proteinase 3 uma proteina de ligao a IL-32 especifica que cliva a citocina para aumentar
a sua actividade.

Papel das Cirocinas das Clulas T nas Respostas Imunes Adaptativas Especializadas
As citocinas da imunidade adaptativa so criticas para o desenvolvimento das respostas imunes e para a
activao de clulas efectoras que servem para eliminar micrbios e outros antignios.
Uma caracteristica chave da imunidade adaptativa o facto das respostas serem especializadas para
eliminar diferentes tipos de micrbios. Muita desta especializao deve-se s aces de citocinas, que
devero ser produzidas por subpopulaes de clulas TH:

Diferentes tipos de micrbios estimulam clulas T CD4+ naive a diferenciarem-se em clulas


efectoras que produzem grupos de citocinas distintos e desempenham funes ditintas, sendo
os subgrupos melhor definidos as clulas TH1 e TH2;
Muitos micrbios intracelulares (bactrias e virus) induzem o desenvolvimento de clulas TH1,
que produzem IFN-, a citocina que activa e estimula a produo de anticorpos opsonizantes
que promovem a fagocitose;
Parasitas helminticos estimulam o desenvolvimento de clulas TH2, que produzem IL-4 e IL-5. A
IL-4 aumenta a produo de anticorpos IgE especificos e a IL-5 activa eosinfilos, sendo que
ambos contribuem para a destruio de parasitas.

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Imunologia

Citocinas que Estimulam a Hematopoiese


As citocinas so necessrias para a hematopoiese normal na medula ssea e fornecem um meio
refinamento da funo da medula ssea em resposta necessidade de leuccitos:

Vrias das citocinas geradas durante as respostas imunes inata e adaptativa estimulam o
crescimento e a diferenciao de clulas progenitoras na medula ssea;
Assim, as reaces imunes e inflamatrias, que consumem leuccitos, tambm elicitam a
produo de novos leuccitos.

Os leuccitos maduros surgem a partir de clulas estaminais pluripotentes pela entrada numa linhagem
particular (diferenciao) e expanso progressiva da progenia. A diferenciao e expano das clulas
progenitoras na medula ssea so estimuladas por citocinas, que so designadas factores estimulantes
de colnias (CSFs) porque apresentam a habilidade de estimular a formao de colnias de clulas em
culturas de medula ssea. Sob a influncia de diferentes CSFs, estas colnias adquirem caracteristicas
de linhagens celulares especificas (e.g., granulcitos, fagcitos mononucleares ou linfcitos).
Os nomes das CSFs refletem os tipos de colnias que surgem de ensaios com estas citocinas, sendo as
mais importantes as seguintes:

Stem cell factor (c-Kit ligand);


Interleucina-7 (IL-7);
Interleucina-3 (IL-3);

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Granulocyte-monocyte CSF (GM-CSF);


Monocyte CSF (M-CSF);
Granulocyte CSF (G-CSF).
242

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Clulas do estroma da
medula ssea
Fibroblastos, clulas do
estroma da medula ssea

Principais alvos
celulares
Clulas estaminais
pluripotentes
Progenitores linfides
imaturos

Todas

20-26 kD

Clulas T

Progenitores imaturos

Todas

18-22 kD

Clulas T, macrfagos,
clulas endoteliais,
fibroblastos

Progenitores imaturos
e diferenciados,
macrfagos maduros

Granulcitos e
moncitos, actividade
dos macrfagos

Monocyte CSF
(M-CSF)

Dimero de
70-90 kD,
subuinidades
40 kD

Macrfagos, clulas
endoteliais, clulas da
medula ssea, fibroblastos

Progenitores
diferenciados

Moncitos

Granulocyte
CSF (G-CSF)

19 kD

Macrfagos, fibriblastos,
clulas endoteliais

Progenitores
diferenciados

Granulcitos

Citocina
Stem cell factor
(c-Kit ligand)
Interleucina-7
(IL-7)
Interleucina-3
(IL-3)
Granulocytemonocyte CSF
(GM-CSF)

Tamanho
(kD)

Imunologia

24 kD
25 kD

Principais fontes celulares

Principais populaes de
clulas induzidas

Linfcitos B e T

Stem Cell Factor (c-Kit Ligand)


As clulas estaminas pluripotentes expressam um receptor membranar tirosina cinase que o produto
proteico do proto-oncogene celular c-Kit. A citocina que interage com este receptor designada c-Kit
ligand, ou stem cell factor, porque actua nas clulas estaminais imaturas:

Esta citocina sintetizada por clulas do estroma da medula ssea como uma proteina
transmembranar ou secretada, ambas produzidas a partir do mesmo gene por splicing
alternativo de RNA;
Esta citocina necessria para tornar as clulas do estroma da medula ssea responsivas a
outras CSFs mas no provoca a formao de colnias por si s;
Tem tambm um papel na sustentao da viabilidade e da capacidade proliferativa das clulas T
imaturas no timo e dos mastcitos nos tecidos mucosos.

A forma soluvel da citocina est ausente em estirpes de ratinhos mutantes designados steel. Este
ratinhos tm defeitos na produo de mastcitos mas no na maior parte das outras linhagens,
sugerindo que a forma membranar mais importante que a forma soluvel na estimulao das clulas T
a maturarem nas vrias linhagens hematopoiticas. A eliminao de ambas as formas da citocina por KO
de genes letal.
Interleucina-7 (IL-7)
A IL-7 um tipo de citocina da familia de citocinas de quatro -hlices do tipo I secretada pelas clulas
do estroma em muitos tecidos que estimula a sobrevivncia e expanso de precursore imaturos nas
lihagens de clulas T e B:

O receptor de IL-7 consiste numa unica cadeia de ligao a IL-7 associada com uma cadeia c,
pertencendo esta ultima tambm aos receptores de IL-2, IL-4 e IL-15;
essencial para a sobrevivncia de clulas T naive, maduras e clulas de memcria,
especialmente clulas de memria CD4+, ambas expressando grandes niveis de receptores de
IL-7.

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

Ratinhos KO para IL-7 ou para a cadeia do receptor de IL-7 so linfopnicos, com um numero
diminuido de clulas T e B. Por outro lado, ratinhos que no apresentam c e humanos com mutaes
em c mostram defeitos na maturao de linfcitos, uma doena conhecida nos humanos como
imunodeficincia combinada severa X-linked.
Interleucina-3 (IL-3)
A IL-3 um produto das clulas T CD4+ que actua nos progenitores da medula imaturos e promove a
expanso de clulas que se diferenciam em todos os tipos de clulas hematopoiticas conhecidos:

um membro da familia de citocinas constituidas por quatro -hlices;


Em humanos, o seu receptor consiste num componente de ligao a citocinas que um
membro da familia de receptores do tipo I e uma subunidade tradutora do sinal que
partilhada pelos receptores de IL-5 e GM-CSF. No entanto, em ratinho a subuinida tradutora do
sinal do receptor de IL-3 unica;
A transduo do sinal em ambas as espcies envolve a via Jak-STAT.

As principais funes da IL-3 so as seguintes:

Actua nos progenitores da medula imaturos e promove a expanso de clulas que se


diferenciam em todos os tipos de clulas hematopoiticas conhecidos;
Promove o crescimento e desenvolvimento de mastcitos a partir de progenitores derivados da
medula ssea, uma aco melhorada pela IL-4.

Contudo, ratinhos KO para o receptor de IL-3 no apresentam desrregulaes notveis na


hematopoiese. A IL-3 humana foi identificada por clonagem de cDNA de uma molcula homloga de
ratinho mas tem sido dificil estabelecer um papel desta citocina na hematopoiese. De facto, muitas das
aces da IL-3 de ratinho parecem ser realizadas pela GM-CSF humana.
Outras Citocinas Hematopoiticas
As GM-CSF, M-CSF e G-CSF so citocinas produzidas por clulas T activadas, macrfagos, clulas
endoteliais e clulas do estroma da medula ssea que actuam em progenitores da medula ssea para
aumentar a produo de vrios leuccitos:

A GM-CSF promove a maturao de clulas da medula ssea em clulas dendriticas e


moncitos;
A G-CSF gerada nos locais de infeco e actua como uma hormona endcrina para mobilizar
neutrfilos a partir da medula ssea para repor aqueles consumidos das reaces inflamatrias.

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

GM-CSF e G-CSF recombinantes so usadas para estimular a recuperao da medula ssea aps a
quimioterapia do cancro e transplante de medula ssea. Estas so algumas das aplicao das citocinas
com maior sucesso.
No entanto, existem outras terapias clinicas baseadas em citocinas, sendo entre elas as mais
importantes:
Agente

Remicade ou
Humira

Natureza do agente
Receptor de TNF quimrico/regio
constante da IgG
Anticorpo monoclonal contra o receptor de
TNF-

Roferon

Interfero--2a

Intron A

Interfero--2a

Betaseron
Avonex

Interfero--1b
Interfero--1a

Actimmune

Interfero--1

Neupogen

G-CSF

Leukine

GM-CSF

Enbrel

Neumega ou
Neulasta
Epogen

Aplicao clinica
Artrite reumatide
Artrite reumatide
Doena de Crohn
Hepatite B
Leucemia Hairy-cell
Sarcoma de Kaposi
Leucemia felina
Hepatite C
melanoma
Esclerose multipla
Esclerose multipla
Doena granulomatosa crnica
Osteoporose
Estimula a produo de neutrfilos
Reduo da infeco em doentes de cancro
tratados por quimioterapia e em pacientes
com SIDA
Estimula a produo de clulas mielides
aps transplantes de medula ssea

Interleucina-11

Estimula a produo de plaquetas

Eritropoietina

Estimula a produo de eritrcitos

RESPOSTAS EFECTORAS MEDIADAS POR CLULAS

Imunidade Humoral e Mediada por Clulas


Os ramos mediados por clulas e humoral do sistema imune assumem diferentes papeis na proteco
do hospedeiro:

Imunidade humoral os efectores da imunidade humoral so os anticorpos especificos,


molculas altamente especificas que so capazes de ligar e neutralizar antignios na superficie
das clulas e nos espaos extracelulares pois o dominio principal da proteco por anticorpos
encontra-se fora da clula. No entanto, se os anticorpos fossem os unicos agentes da
imunidade, os patognios que conseguiam escapar a estas molculas e os que colonizam o
ambiente intracelular iriam escapar ao sistema imune, o que no ocorre;
Imunidade mediada por clulas o seu principal papel detectar e eliminar clulas que
abrigam petognios intracelulares. A imunidade mediada por clulas tambm capaz de
reconhecer e eliminar clulas, como clulas tumorais, que sofreram modificaes genticas de
modo a expressarem antignios atipicos das clulas normais.

Joana Maria Soares Pereira

245

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Imunologia

Tanto clulas especificas para antignios como no-especificas para atignios podem contribuir para a
resposta imune mediada por clulas:

Clulas especificas incluem os linfcitos T CD8+ citotxicos (CTLs) e as clulas TH CD4+


secretoras de citocinas que mediam as hipersensibilidades;
Clulas no-especificas incluem clulas naturalmente assassinas (NK) e clulas no-linfides,
como macrfagos, neutrfilos e eosinfilos.

A actividade destes componentes especificos e no-especificos depende normalmente de


concentraes locais efectivas de vrias citocinas. De facto, as clulas T, as clulas NK e os macrfagos
so as fontes mais importantes das citocinas que organizam e suportam a imunidade mediada por
clulas.
Assim, apesar da imunidade humoral e da mediada por clulas apresentarem muitas caracteristicas
distintas, elas no so completamente independentes. Clulas como macrfagos, clulas NK, neutrfilos
e eosinfilos so capazes de usar anticorpos como receptores para reconhecer e marcar clulas para
destruio. Para alm disso, pptidos quimotacticos gerados pela activao do complemento so
capazes de contribuir para o agrupamento dos tipos de clulas necessrios para a resposta mediada por
clulas.

Tipos de Reaces Mediadas por Clulas


A importncia da imunidade mediada por clulas torna-se evidente quando o sistema se encontra
deficiente. Crianas com sindrome de DiGeorge, que nascem sem timo e, assim, no apresentam clulas
T para a imunidade mediada por clulas, geralmente so capazes de lidar com infeces por bactrias
extracelulares, mas no so conseguem eliminar efectivamente patognios intracelulares. A sua falta de
imunidade mediada por clulas funcional resulta em infeces repetidas por virus, bactrias
intracelulares e fungos. A severidade da imunodeficincia mediada por clulas nestas crianas tal que
mesmo virus atenuados presentes numa vacina so capazes de produzir infeces que colocam a sua
vida em risco.
Joana Maria Soares Pereira

246

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Imunologia

Sabe-se que diferentes tipos de micrbios provocam respostas protectoras por clulas T distinctas:
1. A resposta imune adaptativa contra micrbios residentes dos fagossomas de fagcitos
mediada por linfcitos T CD4+ efectores, designadas clulas TH, que reconhecem antignios
microbianos e activam os fagcitos a destruir micrbios ingeridos - os fagcitos so as
principais clulas da defesa do hospedeiro logo aps a infeco. A funo dos fagcitos ingerir
e matar micrbios mas muitos micrbios desenvolveram mecanismos que permitem que estes
sobrevivam e mesmo repliquem dentro dos fagcitos, de modo que a imunidade inata incapaz
de erradicar infeces por tais micrbios. Nestas situaes, a imunidade mediada por clulas
aumenta as aces microbicidas dos fagcitos e, assim, a eliminao de micrbios. Na
imunidade mediada por clulas contra micrbios fagocitados, a especificidade da resposta
devida s clulas T, mas a funo efectora actual, isto , a morte dos micrbios, mediada
pelos fagcitos. Esta cooperao dos linfcitos T com os macrfagos ilustra uma ligao
importantes entre a imunidade adaptativa e a inata pois, por meios de secreo de citocinas, as
clulas T estimulam a funo e focam a ctividade de clulas efectoras no-especificas da
imunidade inata, convertendo assim estas clulas em agentes da imunidade adaptativa;
2. A resposta imune adaptativa contra micrbios que infectam e replicam no citoplasma de vrio
tipos de clulas, incluindo clulas no-fagociticas, mediada por clulas T CD8+ citocxicas
(CTLs), que matam clulas infectadas e eliminam reservatrios de infeco as CTLs so o
principal mecanismo de defsa contra micrbios que infectam vrios tipos de clulas e replicam
intracelularmente. Se as clulas infectadas no apresentarem a capacidade de matar micrbios,
a infeco pode ser eliminada apenas destruindo essas clulas. A morte mediada por CTLs
tambm um mecanismo para a eliminao de micrbios que so recolhidos por fagcitos mas
que escapam do fagossoma para o citoso, onde no so suceptiveis s actividade microbicidas
dos fagcitos;

3. A activao de macrfagos e a inflamao dependentes de clulas T pode danificar tecidos


normais esta reaco designada delayed-type hypersensitivity (DTH) e p termo
hipersensibilidade refere-se ao dano tecidular causado por uma resposta imune. A DTH um
acompanhamento frequente da imunidade mediada por clulas protectora contra micrbios e a
causa de muita da patologia associada com certos tipos de infeco. Este tambm um
mecanismo de dano tecidular en vrias doenas autoimunes;
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Imunologia

4. A resposta imune adaptativa contra parasitas helminticos mediada por clulas T H2 estas
clulas estimulam a produo de anticorpos IgE e activam eosinfilos e mastcitos a destruirem
helmintos. As reaces imunes mediadas por TH2 so caracterizadas por inflamao rica em
eosinfilos;
5. O sistema imune inata tambm apresenta um brao celular mediado por clulas naturalmente
assassinas (NK) estas clula protegem contra clulas infectadas por virus e outros micrbios
intracelulares, matando clulas infectadas no inicio da infeco.
As respostas imunes mediadas por clulas consistem em:

Desenvolvimento de clulas T efectoras a partir de clulas naive nos rgos linfides perifricos;
Migrao destas clulas T efectoras e de outros leuccitos para os locais de infeco;
Activao de leuccitos mediada por citocinas para que estes destruam micrbios ou matem
directamente clulas infectadas.

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Imunologia

Clulas T CD4 + Efectoras


Uma das desobertas mais excitante na imunologia foi a identificao de subgrupos de clulas T CD4+
que diferem nas citocinas que produzem e nas suas funes efectoras:

As clulas T CD4+ podem diferenciar-se em subgrupos de clulas efectoras que produzem gupos
distinctos de citocinas e, assim, desempenham funes efectoras distinctas. Um dos melhores exemplos
da especializao da imunidade adaptativa a habilidade dos linfcitos T CD4+ activarem diversos
mecanismos efectores em resposta a diferentes tipos de micrbios. A base desta especializao est na
heterogeneicidade de clulas T CD4+, ilustrada pela existncia de subgrupos que diferem no modo como
so induzidos, que citocinas produzem e quais os mecanismos efectores que activam.
Clulas T H 1 e T H 2
Os subgrupos de clulas T efectoras mais bem definidos da linhagem CD4 + so as clulas TH1 e TH2,
sendo o IFN- a citocina caracteristica das clulas TH1 e as IL-4 e IL-5 as citocinas caracteristicas das
clulas TH2:

Foram as primeiras populaes de clulas T helper distinguidas em 1980 com base nas suas
citocinas secretadas, estudando grandes paineis de linhas celulares clonadas derivadas de
clulas T CD4+ de ratinho estimuladas por antignios, estudo feito por Mosmann e Coffman
(Mosmann et al. 1986).

agora claro que clulas T individuais expressam vrias misturas de citocinas e que existem muitas
subpopulaes com padres heterognios de produo de citocinas, especialmente em humanos.
Contudo, reaces imunes crnicas so normalmente relacionadas com populaes TH1 e TH2, sendo as
propores relativas destes subgrupos induzidas durante uma resposta imune os principai
determinantes das funes portectoras e consequncia patolgicas da resposta.
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Imunologia

As populaes TH1 e TH2 so distinguidas principalmente


pelas citocinas que produzem. As citocinas produzidas por
estes subgrupos de clulas T no apenas determinam as
suas funes efectoras como tambm participam no
desenvolvimento de expanso dos respectivos subgrupos:

O IFN- secretado pelas clulas TH1 promove a


diferenciao de clulas TH1 e inibe a proliferao
de clulas TH2;
A IL-4 produzida pelas clulas TH2 promove a
diferenciao de TH2 e a IL-10, tambm produzida
pelas clulas TH2 (mas tambm em menor
extenso pelas TH1), inibe o desenvolvimento de
clulas TH1.

Assim, cada subgrupo amplifica-se a si prprio e regula o subgrupo reciproco. Por esta razo, assim que
uma resposta imune se desenvolve ao longo de uma via ela torna-se altamente polarizada nessa
direco, e a polarizao mais extrema observada em infeces crnicas ou na exposio crnica a
antignios ambientais, onde a estimulao imune persistente.
Para alm disso, as clulas T TH1 e TH2 podem tambm ser distinguidas pela expresso diferencial de
molculas de adeso e receptores para quimocinas e outras citocinas.
Assim, resumidamente, as propriedades dos subgrupos TH1 e TH2 so:
Propriedade
Citocinas produzidas
IFN-
IL-4, IL-5, IL-13
IL-10
IL-3, GM-CSF
Receptor de citocinas expresso
Cadeia IL-12R
IL-18R
Receptor de quimocinas expresso
CCR4, CCR8, CXCR4
CXCR3, CCR5
Ligandos para E- e P-selectina
Isotipos de anticorpos estimulados
Activao de macrfagos

Subgrupo TH1

Subgrupo TH2

+++
+/++

+++
++
++

++
++

+/++
++
IgG2a (ratinho)
Clssica

++
+/+/IgE, IgG1 (ratinho) / IgG4 (humano)
Alternativa

Desenvolvimento dos Subgrupos TH1 e TH2


Os subgrupos TH1 e TH2 desenvolvem-se a partir dos mesmos precursores, que so os linfcitos T CD4+
naive, e o padro de diferenciao determinado por estimulos presentes desde inicio durante as
respostas imunes:

Os estimulos indutores da diferenciao mais imporantes so as citocinas, com IFN- e IL-12 a


serem os principais indutores das clulas TH1 e IL-4 das clulas TH2.

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Imunologia

A diferenciao de TH1 ocorre em resposta a micrbios que infectam ou activam macrfagos e aqueles
que activam clulas naturalmente assassinas:

A diferenciao de clulas T CD4+ activadas por antignios a clulas TH1 efectoras estimulada
por vrias bactrias intracelulares, como Listeria e mycobacteria, e por alguns parasitas, como
Leishmania, todos infectando macrfagos;
Tambm pode ser estimulada por virus e por proteinas antignicas administradas com fortes
adjuvantes.

Uma caracteristica comum a todas estas condies de infeco e imunizao que estas elicitam
reaces imunes inatas que se associam com a produo de certas citocinas, incluindo IL-12, IL-18 e
interferes do tipo I. Alguns micrbios ligam-se a TLRs em macrfagos e clulas dendriticas e activam
directamente estas clulas a secretar estas citocinas. Por outro lado, outros micrbios podem
desencadear a secreo destas citocinas indirectamente, por exemplo, estimulando clulas NK a
produzir IFN-, que por sua vez actua em macrfagos para induzir a secreo de IL-12:

O IFN- produzido pelas clulas NK, tal como pelas clulas T que respondem e, talvez, tambm
por alguns macrfagos e clulas dendriticas, por si s uma citocina indutora das T H1;
As clulas T podem tambm aumentar a produo de citocinas pelos macrfagos, em virtude da
ligao de CD40L na clulas T ao CD40 nas APCs e estimulando a transcrio de genes de
citocinas;

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Imunologia

A interleucina-12 (IL-12) a principal citocina responsvel pela diferenciao das clulas TH1 e
pela induo da resposta imune mediada por clulas. Ratinhos KO para IL-12 so extremamente
susceptiveis a infeces por micrbios intracelulares;
A interleucina-18 (IL-18) actua de modo sinrgico com a IL-12.

A base molecular da diferenciao das TH1 envolve um jogo de sinais a partir do receptor da clula T, as
citocinas IFN- e IL-12 e os factores de transcripo T-bet, STAT1 e STAT4. O factor de transcrio T-bet,
um membro da familia de factores de transcrio T-box, considerado o regulador mestre da
diferenciao TH1:

A expresso de T-bet induzida nas clulas T CD4+ naive quando estas reconhecem antignios e
so expostas a IFN-;
O IFN- activa o factor de transcrio STAT1, que por sua vez estimula a expresso de T-bet;
O T-bet promove depois a produo de IFN- atravs de uma combinao da activao directa
da transcrio do gene IFN- e induzindo a remodelao da cromatina do locus IFN-.

A habilidade do IFN- estimular a expresso de T-bet e a habilidade do T-bet aumentar a transcripo de


IFN- monta um loop de amplificao positiva que dirige a diferenciao de clulas T atravs do
fentipo TH1.
A interleucina-12 (IL-12) contribui para a linhagem TH1 ligando-se a receptores em clulas T CD4+
estimuladas por antignios e activando o factor de transcrio STAT4, que aumenta ainda mais a
produo de IFN-. Ratinhos deficientes em IL-12, IL-12R ou STAT4 no so capazes de montar respostas
TH1 efectivas contra as infeces, e humanos com deficincias genticas na via de sinalizao do IL-12R
apresentam respostas enfraquecidas contra infeces por vrios tipos de bactrias intracelulares.
A diferenciao TH2 ocorre em resposta a helmintos e alergnios e envolve um jogo de sinais apartir do
receptor da clula Tm a citocina IL-4 e os factores de transcrio GATA-3 e STAT6:

Helmintos e alergnios causam estimulao das clulas T crnica, normalmente sem respostas
imunes inatas fortes que so necessrias para a diferenciao TH1;
Assim, as clulas TH1 podem desenvolver-se em resposta a micrbios e antignios que causam
estimulao das clulas T repetida ou persistente com baixa inflamao ou activao dos
macrfagos.

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A diferenciao de clulas T estimuladas por antignios no subgrupo TH2 dependente de IL-4, que
funciona activando o factor de transcrio STAT6, e o STAT6, em conjunto com os sinais TCR, induz a
expresso de GATA-3:

O GATA-3 um factor de transcrio que actua como um regulador mestre da diferenciao das
clulas TH2, aumentanto a expresso de genes das citocinas IL-4, IL-5 e IL-13, que esto
localizadas no mesmo locus gentico;
O GATA-3 funciona interagindo directamente com os promotres destes genes e tambm
causando a remodelao da cromatina, que abre o locus para aumentar a acessibilidade a
outros factores de transcrio;
O GATA-3 dirige clulas em diferenciao para o fentipo TH2 aumentanto a sua prpria
expresso via feedback positivo;
O GATA-3 bloqueia a diferenciao das TH1 inibindo a expresso da cadeia de sinalizao do IL12R.

O papel obrigatrio da IL-4 na diferenciao das TH2 levanta uma questo interessante:
Como as clulas TH2 diferenciadas so a principal fonte de IL-4 durante as respostas imunes contra
proteinas antignicas, de onde surge a IL-4 antes do desenvolvimento de clulas TH2?
Uma explicao provvel que as clulas T CD4+ estimuladas por antignios secretam pequenas
quantidades de IL-4 a partir da sua activao inicial. Se o antignio for persistente e estiver presente em
altas concentraes, a concentrao local de IL-4 aumenta gradualmente. Se o antignio tambm no
elicitar a inflamao com produo de IL-12, o resultado o aumento da diferenciao de clulas T em
clulas TH2. Para alm disso, em algumas situaes, a IL-4 produzida por mastcitos e, possivelmente,
outras populaes de clulas pode contribuir para o desenvolvimento de TH2.
Como podemos constatar, existe uma retroaco negativa que impede que um subgrupo celular se
desenvolva quando outro j se est a desenvolver, por aco antagonista de citocinas secretadas e
factores de transcrio expressos.

T-bet inibe a expresso de GATA-3, e vice-versa;


Na presena de IFN- h expresso de T-bet e
inibio da expresso de GATA-3;
Na presena de IL-4 h expresso de GATA-3 e
inibio de T-bet;
Na presena de IL-5 h expresso de GATA-3 e
inibio de T-Bet.

Assim, estes estimulos influenciam o padro de


diferenciao de clulas T. No entanto, outros estimulos
para alem das citocinas podem tambm influenciar o
padro de diferenciao de clulas T:

Em geral, altas doses de antignio sem adjuvantes


favorecem a diferenciao TH2;
Alguns estudos indicam que existem diferentes
subgrupos de clulas dendriticas, que promovem
selectivamente a diferenciao TH1 ou TH2;

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Imunologia

A construo gentica do hospedeiro um determinante importante do padro de


diferenciao de clulas T, j que ratinhos puros de algumas estripes desenvolvem respostas TH2
contra os mesmo micrbios que estimulam a diferenciao TH1 noutras estirpes.

Respostas Imunes Mediadas por T H 1


A principal funo das clulas TH1 encontra-se na defesa contra as infeces mediada por fagocitose,
especialmente infeces por micrbios intracelulares:

O IFN- produzido pelas clulas TH1 estimula as actividades microbicidas dos fagocitos,
promovendo assim a destruio intracelular de micrbios fagocitados;
O IFN- tambm estimula a produo de anticorpos IgG opsonizantes e que ligam complemento,
que promovem a fagocitose de micrbios;
O TNF produzido pelas clulas TH1 activa neutrfilos, aumentando a morte de micrbios.

Muitas doenas autoimunes especificas de determinados rgos e reaces inflamatrias, como


granulomas, devem-se activao excessiva das clulas TH1.
No entanto, para que a fase efectora da imunidade mediada por clulas seja desencadeada, as clulas T
efectoras tm de entrar em contacto com os fagcitos ou clulas infectadas que esto a apresentar os
antignios que iniciaram a resposta. Para localizar os micrbios em qualquer local, as clulas T efectoras
tm de se expandir clonalmente e diferenciar-se nos rgos linfides, como os ndulos linfticos, e
entrar na circulao para depois entrar no local de infeco.
Activao de Macrfagos e Outros Leuccitos Mediada por Clulas TH1
As clulas TH1 activam macrfagos para que estes eliminem micrbios fagocitados:

Como sabemos. os moncitos so recrutados do sangue e so expostos a sinais a partir de


clulas efectoras TH1 respondendo aos antignios no tecido;
Como resultado, esta interaco leva converso de moncitos a macrfagos activados que so
capazes de matar micrbios.

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A activao consiste, assim, na expresso aumentada de vrias proteinas que dotam os macrfagos
activados com a capacidade de desempenhar funes especializadas, como matar micrbios. Este
processo ocorre por sinais mediados por contacto fornecidos por interaces CD40L-CD40 e pela
citocina IFN-, tal como na estimulao dos linfcitos B, e ocorre do seguinte modo:
1. Quando clulas efectoras TH1 so estimuladas por antignios, as clulas secretam citocinas,
principalmente IFN-, e expressam CD40L;
2. O IFN- a principal citocina activadora de macrfagos. Ela activa algumas respostas de
macrfagos por si s e actua em conjunto com os ligandos TLR, como o LPS, ou com sinais CD40
para elicitar outras respostas;
3. O CD40L liga-se ao CD40 nos macrfagos que esto a apresentar antignios s clulas T e activa
uma via de transduo de sinal intracelular que semelhante via activada pelos receptores de
TNF;
4. A necessidade da interaco CD40L-CD40 na activao dos macrfagos assegura que os
macrfagos que esto a apresentar antignios s clulas T so tambm os macrfagos que so
mais eficientemente activados pelas clulas T.

Em resposta aos sinais CD40 e IFN-, a produo de vrias proteinas nos macrfagos aumentada. A
ligao ao CD40 activa os factores de transcrio NF-B e AP-1 e o IFN- activa os factores de transcrio
STAT-1 e factor-I de resposta do interfero (IRF-I). Como um resultado destes sinais, macrfagos
activados produzem quantidades aumentadas de proteinas que so responsveis pelas funes
efectoras das clulas na imunidade mediada por clulas:
Resposta dos macrfagos
Produo de espcies reactivas de oxignio, xido
nitrico e enzimas lisossomais
Secreo de citocinas
(TNF, IL-1, IL-12)
Expresso aumentada de co-estimuladores B7,
molculas MHC

Papel na imunidade mediada por clulas


Morte de micrbios nos fagolisossomas (funo efectora
dos macrfagos)
TNF, IL-1: recrutamento de leuccitos (inflamao)
IL-12: diferenciao TH1, produo de IFN-
Activao de clulas T aumentada (amplificao)

As funes efectoras dos macrfagos activados so as seguintes:


1. Macrfagos activados matam micrbios fagocitados, principalmente produzindo espcies
reactivas de oxignio microbicidas, xido nitrico e enzimas lisossomais a activao do
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Imunologia

macrfagos leva a uma sintese aumentada de espcies reactivas de oxignio e xido nitrico, tal
como de enzimas lisossomais, todos sendo agente microbicidas potentes que so produzidos
nos lisossomas dos macrfagos e matam micrbios ingeridos aps os fagossomas fundirem
como lisossomas. Estas substncias txicas podem tambm ser libertadas os tecidos adjacentes,
onde matam micrbios extracelulares e podem causar danos nos tecidos normais;
2. Macrfagos activados estimulam a inflamao aguda atravs da secreo de citocinas,
principalmente, TNF, IL-1 e quimocinas, e mediadores lipidicos de curta vida, como factor
activante das plaquetas, prostaglandinas e leucotrienos a aco colectiva destas citocinas e
destes mediadores lipidicos derivados dos macrfagos produzir uma inflamao local que
rica em neutrfilos e recrutar mais moncitos, que se tornam macrfagos e fagocitam e
destroem organismos infeccciosos;
3. Macrfagos activados removem tecidos mortos e facilitam a reparao depois da infeco
estar controlada macrfagos activados induzem a formao de tecido reparado secretando
factores de crescimento que estimulam a proliferao de fibriblastos (factor de crescimento
derivado de plaquetas), a sintese de colagnio (TGF-) e a angiognese (factor de crescimento
de fibroblastos). Assim, os macrfagos activados actuam como um cirurgio endgeno que
cauterizam a ferida e resolvem a reaco inflamatria.
Apesar do macrfagos serem capazes de responder directamente aos micrbios nas reaces imunes
inatas, a habilidade dos macrfagos matarem micoorganismos ingeridos altamente melhorada pelas
clulas T. por isto que a imunidade mediada por clulas capaz de eliminar micrbios que evoluiram
de modo a sobreviver nos macrfagos na ausncia de imunidade adaptativa.
Em adio a estas funes efectoras, os macrfagos activados tornam-se APCs mais eficientes devido a:

Niveis aumentados de molculas envolvidas no processamento de antignios (como


componentes do proteossoma e catepsinas);
Expresso aumentada de molculas MHC classe II e de co-estimuladores;
Produo de citocinas (como IL-12) que estimulam a proliferao e diferenciao de clulas T.

Estas respostas dos macrfagos funcionam para aumentar a activao das clulas T, servindo como
mecanismos de amplificao da imunidade mediada por clulas.
Alguns danos tecidulares podem normalmente acompanhar as reaces imunes mediadas por clulas
TH1 contra micrbios pois os produtos microbicidas libertados pelos macrfagos e enutrfilos activados
so capazes de danificar tecidos normais e no discriminam entre micrbios e tecidos do hospedeiro.
Contudo, este dano tecidular normalmente limitado em extenso e durao, e resolve-se enquanto a
infeco eliminada. no entanto, em alguns casos, as respostas TH1 cuasam dano tecidular significante.
Respostas Imunes Mediadas por T H 2
A principal funo efectora das clulas TH2 promover as reaces imunes mediadas por IgE e
eosinfilos/mastcitos, que protegem contra infeces helminticas secretando IL-4, IL-5 e IL-3, o que
ocorre do seguinte modo:

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Imunologia

1. Os helmintos so demasiado grandes para ser fagocitados e podem ser mais resistentes s
actividade microbicidas dos macrfagos que a maior parte das bactrias e virus;
2. A IL-4 e a IL-13 estimulam a produo de anticorpos IgE especificos para helmintos, que os
opsonizam. Acredita-se que os eosinfilos ligam helmintos opsonizados com IgE e que so
activados de modo a destrui-los. No entanto, parece que o receptor Fc dos eosinfilos
humanos no apresenta as cadeis sinalizadoras necessrias e, assim, estas clulas no podem
ser activadas pela IgE;
3. A IL-5 pode activar directamente os eosinfilos na vizinhana dos helmintos;
4. Os eosinfilos activados libertam o conteudo dos seus granulos, incluindo proteinas bsicas
principais e proteinas catinicas, que so capazes de destruir os resistentes integumentos dos
helmintos.
No entanto, os mastcitos expressam receptores Fc funcionais e podem ser activados pelos helmintos
revestidos por IgE, resultando na desgranulao por IgE, resultando em desgranulao. O conteudo dos
grnulos dos mastcitos incluem aminas vasoactivas, citocinas como TNF e mediadores lipidicos, todos
induzindo inflamao local que tambm funciona para destruir parasitas. Assim:

Os anticorpos estimulados pelas citocinas TH2 no promovem a fagocitose ou activam o


complemento eficientemente mas so capazes de neutralizar micrbios e toxinas.

As IL-4 e IL-13 so tambm capazes de activar macrfagos a expressar receptores de manose e a


expressar enzimas que promovem o sintese de colagnio e a fibrose. Este processo designado
activao alternativa de macrfagos, para distingui-lo da activao induzida pelo IFN-, que resulta e,
funes microbicidas potentes. Os macrfagos que so activados por citocinas TH2 contribuem para a
formao de granulomas e remodelao de tecidos nos locais de infeces parasiticas crnicas ou
doena alrgica, respectivamente.
As citocinas produzidas pelas clulas TH2 esto tambm envolvidas na blocagem da entrada e na
promoo da expulso de micrbios nos tecidos mucosos, pois a IL-3 estimula a produo de muco e IL4 estimula o peristaltismo no sistema gastrointestinal. Assim:
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Imunologia

As clulas TH2 desempenham um papel importante na barreira imunitria, isto , na defesa do


hospedeiro nas barreiras com o ambiente externo.

Para alm disto, o alojamento selectivo de clulas TH2 em certos locais inflamatrios dependente de
quimocinas particulares. As clulas TH2 expressam receptores de quimocinas (i.e., CCR3, CCR4 e CCR8)
que ligam a quimocinas (i.e., CCL11, CCL24, CCL26, CCL7, CCL13 e CCL22) que so altamente expressas
em locais de infeco por helmintos ou de reaces alrgicas, particularmente nos tecidos mucosos.

Assim, as respostas imunes mediadas por clulas TH2 so a causa das reaces alrgicas, e podem
interferir com as respostas imunes protectoras mediadas por TH1 contra infeces intracelulares.
Clulas T H 1 e T H 2 na Doena
Um dos modelos de dano tecidular mediado por clulas mais usado o modelo animal exprimental da
encefalomielite alrgica (EAE), que constitui um modelo experimental para doenas desmielizantes do
sistema nervoso. Como esta doena constitui um tipo de doena autoimune, que normalmente so
atribuidas a aces das clulas TH1, ser de esperar que:

A administrao de IFN- dever piorar os casos de EAE e anticorpos contra IFN- devero
melhorar os casos de EAE;
A EAE dever ser atenuada ou estar ausente em ratinhos deficientes em IFN-.

No entanto, estas hipteses foram todas negadas e os resultados de tais testes foram os opostos:
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Previso
Administrao de IFN- piora a EAE
Ratinhos KO para IFN- sero resistentes a EAE
Anticorpos para IFN- protegem em EAE
Ratinhos KO para TNF sero resistentes a EAE
Administrao de TNF piora a EAE

Imunologia

Resultado
Administrao de IFN- protege da EAE
A EAE piora em ratinhos KO para IFN-
Anticorpos para IFN- pioram a EAE
A EAE piora em ratinhos KO para TNF
Administrao de TNF protege da EAE

Enquanto os imunologistas se tornaram eficientes na clonagem de clulas T que causavam doenas


autoimunes como EAE e artrite, estudos da patogenicidade de clones de clulas T que podem induzir
EAE com paralisia mostraram a produo de citocinas TH1. Contudo, o grau de patgenicidade destes
clones no se co-relacionavam com as quantidade de IFN- que tais clones produziam. Assim, existiam
relaes inversas entre os niveis de citocinas TH1 e destruio autoimune de tecidos em EAE.
Por outro lado, estudando o papel da citocina IL-23 na EAE finalmente conseguiu responder a esta
contrariedade, levando descoberta de uma nova classe de clulas TH efectoras, as clulas TH17.
Clulas T H 17
Sabe-se agora que, aps estimulao antignica, as clulas T CD4+ naive activas, expandem-se e
diferenciam-se em diferentes subgrupos efectores designados TH1, TH2 e TH17 e caracterizados pela
produo de citocinas distintas e pelas suas funes efectoras:

As clulas TH1 produzem IFN- e so capazes de mobilizar o brao celular do sistema imune para
combater ptognios intracelulares;
As clulas TH2 secretam IL-4, IL-13 e IL-5, que so essenciais para a gerao da classe apropriada
de anticorpos e para a eliminao de patognios extracelulares;
A identificao da familia de citocinas IL-17 tal como da expanso de clulas T produtoras de IL17 mediada por IL-23 levou descoberta de um novo subgrupo de clulas T designadas clulas
TH17.

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Imunologia

De modo semelhante s clulas TH1 e TH2, as clulas TH17 requerem citocinas e factores de transcrio
especificos para a sua diferenciao e vrios dados sugerem que estas clulas tm papel importante na
defesa do hospedeiro contra patognios extracelulares, que no so eficientemente eliminados pela
imunidade tipo TH1 e TH2.
Como estes subgrupos apresentam funes efectoras especificas na eliminao das infeces, a
expanso desregulada das clulas TH CD4+ efectoras causa imunopatologia:

Excessiva resposta TH1 est associada como vrias doenas autoimunes e inflamatrias;
Produo de citocinas por TH2 aumentada est envolvida em doenas como alergia e asma;
Vrios dados sugerem que as TH17 so altamente pro-inflamatrias e que as clulas TH17 com
especificidade para antignios do prprio levam a autoimunidade severa em vrios modelos
animais.

A familia de citocinas IL-17 um grupo de citocinas recentemente descoberto, que inclui vrios
membros que so produzidos por diferentes clulas e que apresentam diferentes funes, que so
designados como IL-17 associados a uma letra de A a F:
Membro

Outros nomes
comuns

Receptores

Principais funes
Patologia autoimune,
recrutamento de neutrfilos e
imunidade contra patognios
extracelulares

IL-17A

IL-17 e CTLA8

IL-17RA e
IL-17RC

IL-17B

NA

IL-17RB

Actividades pro-inflamatrias?

IL-17C

NA

IL-17RE

Actividades pro-inflamatrias?

IL-17D

NA

Desconhecido

Actividades pro-inflamatrias?

IL-17E

IL-25

IL-17RA e
IL-17RB

Induz respostas TH2 e suprime


respostas TH17

NA

IL-17RA e
IL-17RC

Heterodimero
IL-17A-IL-17F

NA

IL-17RA e
IL-17RC

vIL-17

ORF13

IL-17RA (e
IL-17RC)

IL-17F

Recrutamento de neutrfilos e
imunidade contra patognios
extracelulares
Patologia autoimune,
recrutamento de neutrfilos e
imunidade contra patognios
extracelulares
Desconhecido

Expresso
+

Clulas TH17, clulas T CD8 ,


clulas T , clulas NK, clulas
NKT e clulas LTi
Clulas do tracto gastrointestinal,
pancreas e neurnios
Clulas da prostata e do rim fetal
Clulas do musculo, crebro,
corao, pulmo, pancreas e
tecido adiposo
Linfcitos intraepiteliais, clulas
epiteliais do pulmo, macrfagos
alveolares, eosinfilos, basfilos,
clulas NKT, clulas TH2,
mastcitos e clulas do tracto
gastrointestinal e do tero
+
Clulas TH17, clulas T CD8 ,
clulas T , clulas NK, clulas
NKT e clulas LTi
+

Clulas TH17, clulas T CD8 ,


clulas T , clulas NK, clulas
NKT e clulas LTi
Herpesvirus saimiri

Enquanto IL-17E (IL-25) principalmente produzida por clulas TH2, diferentes tipos de clulas
incluindo clulas T, clulas T , clulas NK e neutrfilos produzem IL-17A e IL-17F;
Em clulas T CD4+, a expresso de IL-17A ocorre especificamente em clulas TH17 para as quais
ficou como citocina caracteristica;
Contudo, comea a ser claro agora que as clulas TH17 tambm produzem IL-17F, IL-21 e IL-22.

Joana Maria Soares Pereira

260

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Imunologia

Nas clulas TH17, tal como noutras clulas, a IL-17F co-espressa com IL-17A sugerindo que estas duas
citocinas podem mediar coordenadamente as suas funes efectoras. Isto reforado pelo facto das IL17A e IL-17F so tambm capazes de formar heterodimeros e, assim, devero trabalhar em conjunto
para induzir respostas imunes efectoras. No entanto, a IL-17A e a IL-17F podem tambm actuar
independentemente.
Diferenciao das Clulas TH17 em Ratinho
A IL-23 foi inicialmente demonstrada na induo da produo de IL-17 em clulas T activadas e, como
IL-23R no expressa em clulas T naive, no supreendente que tenha sido dificil demonstrar a
induo directa das clulas TH17 pela IL-23. Contudo vrios estudos sugeriram que:

Isto possivel se IL-4 e IFN- forem


bloqueados;
O TGF- em aco na presena de citocinas
pr-inflamatrias, principalmente IL-6,
suficiente para induzir a diferenciao de
clulas T naive em clulas TH17.

tambm importante ter em conta que, a


estimulao de clulas T naive como TGF- e IL-6
tambm aumenta a expresso de mRNA RORt, que
o factor de transcrio caracteritico das clulas
TH17.
A fonte in vivo de TGF- durante a diferenciao de clulas TH17 ainda desconhecida, mas:

Vrias linhas de evidncia sugerem que clulas T reguladoras Foxp3+ podem estar envolvidas na
diferenciao de clulas TH17 atravs do fornecimento de TGF-;
In vitro, clulas densdriticas estimuladas com certos componentes microbianos, como LPS, so
capazes de induzir clulas TH17, mas requerem uma fonte endgena de TGF-, que pode ser
fornecida na presena de clulas T reguladoras na cultura.

Em contraste com IL-6, a IL-2 no necessria para a diferenciao das clulas TH17, de facto, inibe-a,
mas requerida na gerao e sobrevivncia de clulas T reguladoras. Assim, ratinhos deficientes em IL2 apresentam grande numero de clulas TH17 mas so deficientes em clulas T reguladoras perifricas,
e sofrem imunopatologia linfoproliferativa severa.
Isto supreendente, dada a dependncia de IL-2 de outros subgrupos de clulas T, e sugere que
factores adicionais substitutos de IL-2 podem surgir surante o desenvolvimento das clulas TH17. Um
candidato a IL-21, outro membro da familia de citocinas de cadeia como a IL-2:

A IL-21 produzida pelas clulas TH17 aps a estimulao por IL-6 e pela IL-21, apesar de outros
subgrupos de clulas T poderem tambm produzir IL-21;
A IL-21 actua de um modo autocrino para promover a diferenciao de clulas T H17 em
conjunto com o TGF-, e pode ainda compensar a ausncia de IL-6 para a induo de ROR e a
diferenciao de clulas TH17;
Apesar de ainda no ser claro que a IL-21 aumenta a taxa de converso de clulas TH17, esta
citocina pode no ser essencial para a entrada na linhagem das clulas TH17 ou para as suas
funes patognicas.

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Imunologia

Ao contrrio da IL-21, a IL-23 no um factor de diferenciao das clulas TH17. Contudo, esta citocina
estabiliza as clulas TH17 em diferenciao e leva a uma maturao destas clulas, por exemplo
induzindo IL-22 nas clulas TH17, da a identificao desta citocina como importante na linhagem de
clulas TH17.
Assim, usando todos estes dados, as principais citocinas e o seu papel na diferenciao das clulas T H17
em ratinho so as seguintes:

TGF-, IL-6 e IL-21 so importantes na diferenciao das clulas T CD4+ naive em clulas TH17;
A IL-23, fornecida por outra fonte celular, importante na manuteno e maturao das clulas
TH17 efectoras.

Diferenciao das Clulas TH17 em Humano


Apesar de existir acordo nos factores necessrios para a gerao das clulas TH17 em ratinho, as
citocinas cruciais iniciadoras do desenvolvimento das clulas TH17 em humano ainda no so claras:

A IL-23 capaz de dirigir a diferenciao de clulas TH17 e culturas com IL-23 ou IL-1 estimulam
o fentipo TH17, com baixa ou nenhuma sinergia quando ambas as citocinas esto presentes;
No entanto, outro estudo, identificou a IL-1 como uma citocina que dirige as clulas TH17 em
humanos, com IL-23 e IL-6 como potenciadores dos efeitos da IL-1.

No entanto, a descrio da IL-21 como um factor de crescimento autocrino e o seu potencial de


acoplamente com o TGF- na gerao de clulas TH17 de ratinho levanta a noo que estas citocinas
podem tambm estar presentes na diferenciao de clulas TH17 humanas.
Assim, usando todos estes dados, as principais citocinas e o seu papel na diferenciao das clulas T H17
em humano so as seguintes:

TGF-, IL-6, IL-21, IL-23 e IL-1 so importantes na diferenciao das clulas T CD4+ naive em
clulas TH17;
A IL-23, IL-6 e IL-1 so importantes na manuteno e maturao das clulas TH17 efectoras.

Apesar da sua diferenciao no ser idntica, o fentipo das clulas TH17 humanas apresentam
semelhanas com as clulas TH17 de ratinho:
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Imunologia

Ambos os subgrupos porduzem IL-17, IL-17F e IL-22 como citocinas caracteristicas;


A expresso de IL-23R e do receptor de quimocinas CCR6 definem adicionalmente este
subgrupo;
Parece que a produo de IFN- pelas clulas TH17 pode ocorrer em humanos com base na
expresso de receptores de quimocinas: clulas CCR6+CCR4+ produzem IL-17 exclusivamente,
enquanto CCR6+CXCR3+ produzem IL-17 e IFN-;
As clulas TH17 podem tambm produzir IL-26 enquanto clulas TH17 de ratinho patognicas
produzem TNF e IL-6.

Regulao da Diferenciao das Clulas TH17 pelas Clulas TH1 e TH2


Visto que os subgrupos de clulas TH1 e TH2 regulam a diferenciao de ambas, estas tambm paprecem
regular negativamente a diferenciao das clulas TH17:

A adio de IL-12, IFN- ou IL-4 a culturas inibe a diferenciao estimulada por IL-23 ou TGF-
mais IL-6 de clulas TH17 de ratinho e humanas.

No entanto, ainda no claro por quanto tempo as clulas T H17 so susceptiveis a esta regulao. Um
paradoxo nestes mecanismos a observao de que um subgrupo de clulas TH17 podem co-produzir
IFN-. Isto particularmente aparente quando olhamos para clulas T de locais de inflamao, por
exemplo, o crebro de ratinhos aps induco de EAE ou o intestino de pacientes com doena de Crohn
activa. Isto sugere, que o IFN- no consegue sempre desregular a produo de IL-17 e pode, de facto,
contribuir para a funo patognica das clulas TH17.
Para alm disso, interessante reparar que ratinhos que no apresentam o factor de transcrio T-bet
das clulas TH1 produzem grandes numeros de clulas IL-17+, presumivelmente devido ao numero
reduzido da produo de IFN-, sendo estes ratinhos extremamente susceptiveis EAE e outros
modelos de inflamao mediada pelas clulas TH17.

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Imunologia

Respostas Imunes Mediadas por T H 17


At data, as principais citocinas da familia IL-17 estudadas so a IL-17A, a IL-17E e a IL-17F e a
principal funo destas trs citocinas atrair quimicamente diferentes tipos de clulas atravs da
induo de outras citocinas e quimiocinas:

A IL-25 (IL-17E) induz a expresso de citocinas e


quimiocinas do tipo TH2 e apresenta um papel
nas respostas alrgicas do tipo TH2;
Ambas IL-17A e IL-17F apresentam propriedades
pro-inflamatrias e actuam numa larga gama de
tipos celulares para induzir a expresso de
citocinas (IL-6, IL-8, GM.CSF, G-CSF), quimiocinas
(CXCL1, CXCL10) e metaloproteinases. Para alm
disso, estas citocinas so citocinas chave para o
recrutamento, activao e migrao de
neutrfilos.

A anlise funcional da IL-17 sugeriu um papel


importante e unico para esta citocina na defesa do
hospedeiro contra patognios especificos pois a
produo de IL-17 e o recrutamento de neutrfilos
parecem ser importantes na defesa do hospedeiro
contra infeces por bactrias gram-negativo e fungos.
Em adio aos neutrfilos, a IL-17 parece tambm dictar a migrao de outros tipos de clulas efectoras
durante a infeco. Em suporte a esta hiptese, clulas TH17 especificas geradas durante a infeco
micobacteriana induzem a expresso de CXCL9, CXCL10 e CXCL11, que atraem as clulas T H1 CD4+ para
o pulmo de modo a controlar a infeco.
Papel das Clulas T H 17 na Autoimunidade
Em adio s infeces, as clulas TH1 desempenham um papel muito importante na induo e
propagao de doenas autoimunes em modelos animais e, potencialmente, em doenas autoimunes
em humanas:

A espresso de IL-17 foi detectada em tecidos alvo durante a progresso de vrias doenas
autoimunes humanas como esclerose multiplas, artrite reumatide e psoriase;
Ratinhos deficientes em IL-17 ou ratinhos tratados com antagonista de IL-17R so resistentes ao
desenvolvimento de artrite induzida por adjuvantes;
Animais deficientes em IL-17 desenvolvem EAE com severidade reduzida;
A administrao de um anticorpo neutralizante de IL-17 em ratinhos imunizados com mielina
antignica previne a expresso de quimiocinas no crebro e o desenvolvimento subsequente de
EAE.

A IL-17 est envolvida na patognese de vrias doenas autoimunes em ratinho e possivelmente em


humanos.

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Imunologia

A importncia do subgrupo TH17 nas doenas autoimunes foi demosntarada em ratinhos deficientes em
IL-23. Estes ratinhos apresentavam numeros semelhantes de clulas T produtoras de IFN- aos dos
wildtype mas uma diminuio acentuada das clulas T produtoras de IL.17 e eram resistente ao
desenvolvimento de EAE e artrite unduzida pelo colagnio. Enquanto muitos modelos animais de
doenas autoimunes eram anteriormente pensados como mediados exclusivamente por clulas do tipo
TH1, estas exprincias demonstraram a importncia do eixo IL-23/TH17 na patogenicidade destas
doenas. No entanto, as clulas TH1 dos ratinhos deficientes no eram to encefalitognicas como as
dos animais wildtype, sendo este resultado consistente com o papel do IL-23 na manuteno das clulas
TH17 mas sugerindo tambm que a liminao da resposta TH17 pode alterar a funo ou migrao de
clulas TH1 especificas.

Clulas T Reguladoras
A tolerncia ao prprio um mecanismo regulatrio imune importante que protege os tecidos do
prprio de danos mediados pelo sistema imunitrio e restringe as respostas imunes activas apenas
contra os invasores microbianos. Assim existe define-se:

Tolerncia central mecanismo pelo qual clones de linfcitos que reconhecem antignios do
prprio so eliminados no timo durante o desenvolvimento normal dos linfcitos.

Contudo, alguns clones de linfcitos com especificidade para antignios do prprio so encontrados em
animais e humanos sem autoimunidade. Para alm disso, a autoimunidade capaz de se desenvolver
na ausncia de defeitos na tolerncia central, definindo-se:

Tolerncia perifrica inicialmente pensava-se que previnia a auto-agresso por clulas T autoreactivas que escapam da deleco timica mas trabalhos mais profundos levaram
caracterizao de clulas T supressoras especificas, os reguladores das respostas imunes na
periferia.

Existem vrios tipos de clulas T reguladoras, incluindo:

TCR+CD4+;
TCR+CD8+;

TCR+CD4-CD8-;
TCR+

No entanto, a maior parte da investigao tem-se focado nas clulas T reguladoras TCR+CD4+, as
quais se podem ainda dividir em vrios subgrupos com fentipos distinctos, perfis de citocinas
secretadas e mecanismos de supresso diferentes. Entre estes subgrupos:
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Imunologia

Clulas T CD4+ produzidas no timo e entregues na periferia como uma linhagem de linfcitos de
longa vida especificos para antignio prprios so designadas clulas T reguladoreas naturais
CD4+CD25+ (nTreg);
Clulas T CD4+ recrutadas de linfcitos circulantes e que adquirem propriedade reguladoras
sobre condies particulares de estimulao do designadas clulas T reguladoras induzidas
(iTreg);
Existem dois tipos de clulas T CD4+ reguladoras induzidas, as clulas T reguladoras 1 (TR1) e as
clulas T helper 3 reguladoras (TH3).

As clulas T reguladoras esto envolvidas na regulao da resposta imune, manuteno da tolerncia e


homeostasia imunolgica e controlo da autoimunidade e sobrevivncia do cancro. Assim, as Tregs
desempenham um papel importante na autoimunidade, alergia, cancro, doena infecciosa e induo de
tolerncia transplantao. Como consequncia, anormalidade no numero e funes das clulas T regs
foram implicadas na patognese destas condies clinicas.
As Tregs so caracterizadas pelas expresso de Foxp3, um factor de represso transcripcional que est
fisicamente associado com a familia Rel de factores de transcrio, NFATs e NF-B, e bloqueia a sua
habilidade de induzir a expresso endgena dos seus genes alvo, incluindo genes de citocinas chave e
serve como marcador de subgrupos de clulas T reguladoras:

Clulas nTreg CD4+CD25+Foxp3+;


Clulas TR1 CD4+CD25-Foxp3+;
Clulas TH3 CD4+CD25-Foxp3-

Mecanismos de Aco das Clulas T Reguladoras


Diferentes subgrupos de clulas T reguladoras apresentam diferentes efeitos supressores, e estes so
tambm mediados de maneiras diferentes:

As clulas TR1 e TH3 dependem da produo de citocinas inibitrias, IL-10 e TGF-,


respectivamente, que inibiro a proliferao e aproduo de citocinas por clulas T efectoras,

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incluindo as clulas TH1, as clulas TH2 e as clulas T CD8+ citotxicas, tanto directamente como
atravs da influncia inibitria da maturao e activao de clulas dendriticas ou APCs;

As clulas nTreg (CD4+CD25+) inibem a proliferao de clulas T CD25-. Os mecanismos de


supresso parece ser multifactorial e inclui contacto clula-clula. Estas clulas tambm
expressam antignio 4 citotxico dos linfcitos T (CTLA4) que interage com CD80 e/ou CD86 na
superficie das APCS e esta interaco fornece um sinal negativo para a activao das clulas T.
Existe tambm alguma evidncia que TGF- secretado ou IL-10 secretada podem apresentar
tambm um papel nestas clulas T reguladoras.

As clulas T reguladoras foram inicialmente descritas como clulas no especificas para antignios que
actuam atravs de um mecanismo dependente de APCs. As clulas T reguladoras requerem a activao
via o seu TCR para se tornarem supressoras, mas quando activadas as suas funes efectoras so
completamente no especificas. No entanto, foi observado que podem existir populaes de clulas T
reguladoras que so especificas para antignios.
Parece que as populaes de clulas T reguladoras reconhecem antignios prprios e estas clulas, tal
como as clulas T convencionais, apresentam um reportrio TCR policlonal e so seleccionadas por
pptidos prprios. No entanto, pptidos prprios dirigem a seleco de timcitos CD4 +CD25+
reguladores por um processo que distinto da seleco negativa e positiva.
O numero crescente de mecanismos inibitrios descritos para as clulas T reguladoras sugere que astas
clulas tomam uma abordagem multipla na regulao imune. provvel que a importncia relativa de
cada mecanismo inibitrio dependente do contexto e modulada pelo meio inflamatrio e pela
magnitude da resposta imune. Em conjunto, estes mecanismos fornecem um potente arsenal com o
qual as clulas T reguladoras podem actuar.
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Induo de Clulas T Reguladoras na Periferia e Manuteno


As clulas T CD4+CD25- naive podem ser induzidas a se tornarem reguladoras na periferia por uma srie
de sinais:

Exposio a antignio na presena de citocinas imuno-supressoras como IL-10 e TGF- e/ou


cido retinico;
Activao por clulas dendriticas imaturas;
Activao no contexto de clulas T reguladoras naturais.

Muitos destes subgrupos de clulas T reguladoras actua secretando citocinas imunossupressoras IL-10
e/ou TGF-, que aumentam a diferenciao em clulas T reguladoras e inibem a diferenciao de outros
subgrupos de clulas T, o que diminui a resposta imune.

A manuteno das clulas T reguladoras na periferia ajudada por sinais via IL-2, CD28 e TGF-.
Adicionalmente, as clulas requerem interaces com os seus ligandos na periferia para maturao
e/ou sobrevivncia seguinte. Assim que se encontram na periferia, as clulas T reguladoras so capazes
de se expandir vigorosamente em resposta a sinais antignicos e proliferativos.
Aco das Clulas T Reguladoras na Diferenciao de Diferentes Subgrupos de Clulas T CD4 +
Como sabemos, aps a activao, uma clulas T CD4+ pode diferenciar-se em quatro subgrupos
diferentes dependendo das citocinas presentes no meio e as citocinas secretadas por cada um destes
subgrupos ir influenciar a diferenciao nos outros grupos. Ser, assim, um balano destas subgrupos
que ir dictar a resposta observada na infeco:

Na presena de IL-12 e interferes do tipo I e tipo II, produzidos na presena de patognios


intracelulares, as clulas T naive diferenciam-se em clulas TH1, que produzem IFN-, IL-12 e

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Imunologia

TNF-. Estas citocinas vo induzir a aliminao destas parasitas e o IFN- inibe a diferenciao
das clulas TH2 e TH17;
Na presena de IL-4, produzida na presena de patognios extracelulares como helmitos, as
clulas T naive diferenciam-se em clulas TH2, que produzem IL-4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13. A IL-4,
a principal citocina secretada pelas clulas TH2, inibe a diferenciao de clulas TH1 e TH17;
Elevados niveis de TGF- e IL-6 promovem a diferenciao de clulas TH17, bastante envolvidas
na defesa contra bactrias extracelulares, que no so eficientemente eliminadas pelas clulas
TH1 e TH2;
Quando os niveis de TGF- e IL-10 so bastante elevados, o que normalmente ocorre quando
uma reaco imune j ocorre h algum tempo, as clulas T naive na periferia so estimuladas a
diferenciar-se em clulas T reguladoras, que produziro TGF- e IL-10 que inibiro a
diferenciao dos outros subgrupos de clulas T. Isto permite que a infeco termine e previne
o desenvolvimento de autoimunidade.

Clulas T CD8 + Citotxicas


Os linfcitos T citotxicos (CTLs) so gerados pela activao de clulas T citocxicas (TC):

Apresentam capacidade litica e so criticos no reconhecimento e na eliminao de clulas


prprias alteradas (e.g., clulas infectadas com virus e clulas tumorais) e nas reaces de
rejeio de enxertos;
Geralmente so CD8+ e, assim, so retsritas a MHC classe I, apesar de em casos raros se ter
mostrado que clulas T CD4+ restritas a MHC classe II podem funcionar como citotxicas;
Como virtualmente todas as clulas nucleadas expressam molculas MHC classe I, as CTLs so
capazes de reconhecer e eliminar quase qualquer clula alterada.

A respostas imune mediada por CTLs pode ser dividida em duas fases, reflectindo diferentes aspectos
da respostas:
1. A primeira fase activa e diferencia clulas TC naive em CTLs efectoras funcionais;
2. Na segunda fase, as CTLs efectoras reconhecem complexos antignio-MHC classe I em clulas
alvo especificas, que leva a que destruam as clulas alvo.
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Imunologia

Activao e Diferenciao em CTLs Efectoras


As clulas TC naive so incapazes de matar clulas alvo e so, assim, referidas como precursores CTL
(CTL-Ps) para denotar o seu estado funcional imaturo. Apenas aps uma CTL-P ser activada que esta
clula se diferenciar numa CTL funcional com actividade citotxica.
A gerao de CTLs a partir de CTL-Ps parece requerer pelo menos trs sinais sequnciais:
1. Um sinal 1 especifico do antignio transmitido pelo complexo TCR aps reconhecimento de um
complexo pptido-MHC classe I;
2. Um sinal co-estimulador transmitido pela interaco CD28-B7 da CLP e da clula apresentadora
do antignio;
3. Um sinal induzido pela interaco de IL-2 com o receptor de IL-2 de alta afinidade, resultando na
proliferao e diferenciao de CTL-P activadas pelo antignio em CTLs efectoras.

Clulas CTL-Ps inactivas no expressam IL-2 ou receptores IL-2, no proliferam e no apresentam


actividade antignica. A activao antignica induz uma CTL-P a comear a expressar receptor IL-2 e, a
uma menor extenso, IL-2, a principal citocina necessria para a proliferao e diferenciao de CTL-Ps
activadas em CTLs efectoras. Em alguns casos, a quantidade de IL-2 secretada pela CTL-P activada pelo
antigenio pode ser suficiente para induzir a sua prpria proliferao e diferenciao, o que
particularmente verdadeiro para CTL-Ps de memria, que apresentam requerimentos de activao mais
baixos que as clulas naive.
Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

No entanto, no geral, a maior parte das CTL-Ps activadas requerem IL-2 adicional produzida por clulas
TH1 em proliferao para proliferar e diferenciar em CTLs efectoras. O facto do receptor de IL-2 no ser
expresso at a CTL-P ser activada pelo antignio mais a molculas MHC classe I favorece a expanso
clonal e aquisio de citotoxicidade apenas pelas CTL-Ps especificas para o antignio.
A dependncia de IL-2 para a proliferao e diferenciao facilmente demonstrada:

Em ratinhos KO para IL-2, a ausncia de IL-2 abortou a citotoxicidade mediada por CTLs;
Aps a eliminao do antignio, os niveis de IL-2 caem, o que induz as clulas TH1 e as CTLs a
sofrer morte celular programada or apoptose;
Deste modo, a resposta imune rapidamente terminada, diminuindo a probabilidade de dano
tecidular no especifico a partir da resposta inflamatria.

O papel das clulas TH1 na gerao de CTLs apartir de CTL-Ps ainda no completamente
compreendido e improvvel que as clulas TH1 e as CTL-Ps interajam directamente. No entanto, a IL-2
e a co-estimulao so importantes na transformao de CTL-Ps naive em clulas efectoras e as clulas
TH1 podem ser mediadores no fornecimento destes requerimentos essenciais:
1. A interaco de clulas TH com clulas apresentadoras de antignio pode resultar na produo
de IL-2 pelas clulas TH1;
2. A aco parcrina desta citocina em CTL-Ps naive vizinhas cujos TCRs esto ligados pode levar
diferenciao e proliferao destas clulas em CTLs activas;
3. As TH1 podem induzir a sobre-regulao de molculas co-estimuladoras na superficie de clulas
apresentadoras de antignios, ajudando as CTL-P a dividirem-se e a diferenciarem-se pela
gerao de niveis de co-estimulao adequados.

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

Fase Efectora de Imunidade Mediada por CTLs


A fase efectora da resposta mediada por CTLs envolve uma sequncia de eventos cuidadosamente
orquestrada que comea com o envolvimento da clula alvo pela clula atacante. Os principai eventos
na morte mediada por CTLs so:
1.
2.
3.
4.

Formao de conjugado;
Ataque membranar;
Dissociao da CTL;
Destruio da clula alvo.

Quando CTLs especificas para antignios so incubadas com clulas alvo apropriadas, os dois tipos de
clulas interagem e sofrem a formao de conjugados. A formao destes conjugados seguida por
vrios minutos por por um passo dependente de Ca2+ e de energia no qual a CTL programa a clula alvo
a morrer. Depois, a CTL dissocia-se da clula alvo e continua para se ligar a outra clula alvo. Durante
um periodo de tempo varivel (algumas horas) aps a dissociao da CTL, a clula alvo morre por
apoptose.
A formao do conjugado ocorre porque o complexo TCR-CD3 na membrana das CTLs reconhece
antignio em associao com molculas MHC classe I na clula alvo. Aps este reconhecimento
especifico do antignio, o receptor integrina LFA-1 na membrana da CTL liga-se a ICAMs na membrana
da clula alvo, resultando na formao de um conjugado:

A activao das CTLs mediada pelo antignio converte a LFA-1 de um estado de baixa avidez
para um estado de alta avidez;
Devido a este fenmeno, as CTLs aderem e formam conjugado apenas com as clulas alvo
apropriadas que apresentam pptidos antignicos com molculas MHC classe I;
A LFA-1 persiste no estado de alta avidez por cerca de 5-10 min aps a activao mediada pelo
antignio e depois retoma ao estado de baixa avidez;
A diminuio da avidez da LFA-1 facilitar a dissociao da CTL da clula alvo.

Joana Maria Soares Pereira

272

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Imunologia

As CTLs apresentam no seu citoplasma grnulos de armazenamente intracelulares bastante densos.


Estes grnulos foram isolados por fraccionamento e medeia o dano da clula alvo por si s. So
constituidos por:

Perforina monmero de proteinas de 65 kDa formadoras de poros e homlogas ao


componente C9 terminal do sistema complemento;
Granzimas vrias serina proteases.

As CTL-Ps no apresentam grnulos citoplasmticos e perforinas e parece que, aps a activao, estes
grnulos citoplasmticos surgem carregando monmeros de perforina recentemente expressos.
Imediatamente aps a formao do conjugado CTL-clula alvo, o aparelho de Golgi e os grnulos reorientam-se no citpolasma das CTLs para se concentrarem junto da juno com a clula alvo.
Evidncias sugerem que monmeros de proforina e proteases granzima so depois libertados por
exocitose no espao juncional entre as duas clulas.

Quando os monmeros de perforina contactam coma membrana da clula alvo, sofrem uma aletrao
conformacional, expondo um dominio anfiptico que se insere na membrana da clula alvo. Os
monmero polimerizam (na presena de Ca2+) para formar poros cilindricos com um dimetro interno
de 5-20 nm. Assim, um grande nmero de poros perforina so visiveis na membrana das clulas alvo na
regio da formao do conjugado. Resumidamente, este processo ocorre do seguinte modo:
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1. A interaco da CTL com a clula alvo provoca um aumento dos niveis de Ca 2+ intracelulares;
2. Estes niveis de Ca2+ elevados induzem a exocitose, na qual os grnulos se fundem com a
membrana celular da CTL;
3. A perforina monomrica libertada no pequeno espao entre as duas clulas;
4. Os monmeros de perforina libertados sofrem uma alterao conformacional induzida pelo Ca 2+
que permite que estes se insiram na membrana da clula alvo;
5. Na presena de Ca2+, os monmeros polimerizam na membrana;
6. A polimerizao leva formao de poros cilindricos.
Devido a esta funo, a perforina pode ajudar na entrada de granzima na clula alvo de dois modos:

A formao do poro na membrana celular da clula alvo permite a entrada directa da granzima
libertada no espao entre as duas clulas na clula alvo;
A perforina assiste a entrada atravs de uma via que envolve um receptor designado receptor de
manose-6-fosfato. Muitas clulas alvo apresentam este receptor na sua superficie e este liga
gramzima B. Os complexos granzima B/receptor manose-6-fosfato so internalizados e surgem
dentro de vesiculas. Neste caso, a perforina necessaria para a libertao da granzima B das
vesiculas no citoplasma da clula alvo.

Assim que entra no citoplasma da clulas alvo, a granzima B inicia uma cascata de reaces que resulta
na freagmentao do DNA da clula alvo em oligomeros de 200 bp, tipos de fragmentos de DNA tipicos
da apoptose:

Como as granzimas so proteases, no capazes de mediar directamente a fragmentao de


DNA, activando por outro lado uma via apoptotica na clula alvo;
Este processo apopttico no requer sintese de mRNA nem proteico tanto na CTL como na
clula alvo;
Este processo tambm capaz de fragmentar DNA viral, destruindo clulas infectadas por virus
e o DNA viral destas clulas. Esta fragmentao de DNA viral previne a replicao viral
continuada e montagem no periodo antes da clula alvo ser destruida.

Por outro lado, algumas linhas de CTLs potentes no apresentam porforinas nem granzimas. Nestes
casos, a citotoxicidade mediada pela via de sinalizao Fas/FasL:

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Imunologia

A proteina transmembranar Fas, que um mebro da familia de receptores TNF, capaz de


fornecer sinais de morte quando faz ligao cruzada com o seu ligando natural, um membro da
famila tumor necrosis designado Fas ligando (FasL);
O FasL encontrado na membrana de CTLs e sua interaco com o Fas nas clulas alvo
desencadeia a apoptose.

Assim, as CTLs de ratinhos so capazes de matar clulas alvo por mecanismos mediados por perforinas,
por um mecanismo que envolve a ligao de Fas na clula alvo com FasL apresentado na membrana da
CTL, ou, em alguns casos, por uma combinao dos dois mecanismos.
Assim, existem dois mecanismos responsveis pela iniciao a morte apopttica da clula alvo
mediada pelas CTLs:
1. Fornecimento direccional de proteinas citotxicas (perforina e granzimas) que so libertadas
das CTLs e entram nas clulas alvo;
2. Interaces de FasL membranar da CTLs com o receptor Fas na superficie da clula alvo, o que
se designada de via FasL-Fas.

Cada um destes eventos de iniciao resultam na activao de uma via de sinalizao que culmina na
morte da clula alvo por apoptose. Uma caracteristica da morte celular por apoptose o envolvimento
da familia caspase de serina protease, que clivam aps um residuo de aspartato:

Normalmente, as caspases esto presentes na clula como proenzimas inactivas procaspases


que requerem clivagem proteolitica para converso s formas activas;
A clivagem de uma procaspase produz um iniciador caspase activo, que cliva outra procaspase,
activando assim a sua actividade proteolitica;
O resultado final a desmontagem sistemtica e ordenada da clula que marca a apoptose.

Assim, esquematicamente, o mecanismo pelo qual estas duas vias entram na via apopttica das
caspases o segunite:
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As CTLs usam granzimas e FasL para iniciar cascatas de caspases nos seus alvos. As granzimas
introduzidas na clula alvo a partir da CTL mediam os eventos proteoliticos que activam um iniciador
caspase. De modo semelhante, a ligao do Fas numa clula alvo pelo FasL na CTL causa a activao de
um iniciador caspase na clula alvo. O resultado final das vias mediadas por perforina/granzima e Fas
a activao de vias de morte dormentes que esto presentes na clula alvo. Assim, a CTL no s mata a
clula alvo como a induz a cometer suicidio.

Clulas Naturalmente Assassinas


As clulas naturalmente assassinas foram descobertas por acidente quando imunologistas mediam a
actividade in vitro de clulas especificas de tumores recolhidas de ratinhos com tumores como clulas
com actividade citotxica no especifica e que actuavam de igaul modo em ratinhos com tumor e sem
tumor:

Estas clulas constituem cerca de 5%-10% da populao de linfcitos recirculantes e apresentam


uma morfologis de linfcitos grandes granulares;
Esto envolvidas nas defesas imunes contra virs e tumores.

Como as clulas naturalmente assassinas produzem um numero de citocinas imunologicamente


importantes, estas clulas desempenham papeis importantes na regulao imune e influenciam tanto a
imunidade adaptativa como a inata. Por exemplo:

A produo de IFN- pelas clulas naturalmente assassinas pode afectar a participao de


macrfagos na imunidade inata pela activao de actividade fagociticas e microbicidas;
O IFN- derivado de clulas naturalmente assassinas pode influenciar a diferenciao de
populaes de clulas TH em TH1 vs. TH2 pelos seus efeitos inibitrios na expanso de TH2 e
estimulao do desenvolvimento TH1 via induo de IL-12 por macrfagos e clulas dendriticas.

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As clulas naturalmente assassinas esto envolvidas na resposta inicial contra as infeces por certos
virus e bactrias intracelulares:

A actividade das clulas naturalmente assassinas


estimuladas por interferes do tipo I, pela IL-12 e
pelas IL-15. E, no curso de uma infeco viral, o nivel
destas citocinas aumenta rapidamente, seguido por
uma onda de clulas naturalmente assassinas que
atinge um mximo em 3 dias;
As clulas naturalmente assassinas so a primeira
linha de defesa contra infeces viricas, controlando a
replicao viral durante o tempo necessrio para a
activao, proliferao e diferenciao de clulas CTLP em CTLs funcionais no dia 7.

Desenvolvimento e Caracteristicas das Clulas Naturalmente Assassinas


As clulas naturalmente assassinas derivam do figado fetal e da medula ssea aps o nascimento e so
clulas linfides que partilham um progenitor comum com as clulas T, mas a sua linhagem detalhada
ainda continua desconhecida:

No embrio, as clulas estaminais hematopoiticas (HSCs) so geradas num regio que d


origem a todas as linhagens de clulas do sangue. Apesar dos passos intermedirios entre as
HSCs e as clulas naturalmente assassinas ainda no serem conhecidos, j foram identificados
precursores que so capazes de gerar clulas naturalmente assassinas no figado, timo, sangue e
bao fetal, como progenitores T-NK bipotentes;
No nascimento, o local da hematopoiese muda do figado fetal para a medula ssea. Aqui, os
percursores de clulas NK (NKPs), mas no progenitores T-NK bipotentes, foram identificados.
As clulas naturalmente assassinas encontradas no figado e timo adultos devem ser derivados
da medula ssea, mas tambm podem ser restos da vida fetal.

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As clulas naturalmente assassinas expressam alguns marcadores membranares que so encontrados


em moncitos e granulcitos, tal como alguns que so tipicos das clulas T. No entanto, diferentes
clulas naturalmente assassinas expressam diferentes grupos de molculas membranares e no se sabe
se estas heterogenicidade reflecte subpopulaes de clulas naturalmente assassinas ou diferentes
estgios na sua activao ou maturao. As principais molculas membranares expressas em clulas
naturalmente assassinas so:

CD3-;
CD56+;
CD2+ - subunidade do receptor de IL-2;
CD16+ - receptor para o fragmento Fc da
IgG;

CD95L - FasL
Ly49+ (em ratinho);
CD8+ - apenas observado em algumas.

A diferenciao das clulas naturalmente assassinas ocorre enquanto os percursores interagem com
citocinas e com clulas do estroma na medula ssea. Molculas de superficie so sequencialmente
expressas por clulas naturalmente assassinas em maturao e podem ser usadas como marcadores de
intermedirios do desenvolvimento em ratinhos e humanos. Apesar de alguns marcadores diferirem
entre as duas espcies, muitas so partilhadas e podem ser usada para deliniar estgios comuns da
diferenciao das clulas naturalmente assassinas:
1. A etapa 1 (commitment) marcada pela aquisio da expresso de receptor- da IL-2 (IL-2R);
2. A etapa 2 (maturao) pode ainda ser dividida em vrios passos. A aquisio da expresso de
molculas de proteina 1 receptor das clulas NK (NKR-P1), como NK1.1 em ratinhos e CD161 em
humanos) e CD2 identifica as clulas NK imaturas que no so liticas. DX5 em ratinho e CD56 em
humanos so subsequentemente adquiridas em conjunto com o potencial citolitico. A expresso
do complexo CD94-NKG2 adquirida mais tarde, mas antes da maturao final, que resulta na
expresso de receptores de MHC especificos (Ly49 em ratinhos e KIRs em humanos).

Os precursores de clulas naturalmente assassinas requerem citocinas como interleucina-15 (IL-15)


para a maturao e sobrevivncia, mas outras molculas soluveis e no soluveis podem participar no
desenvolvimento e maturao destas clulas.
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As clulas naturalmente assassinas so exportadas para a periferia, formando uma pool perifrica que
encontrada no sangue, em todos os rgos linfides e alguns tecidos parenquimais (pulmes e figado).
As clulas naturalmente assassinas perifricas devem recircular entre os diferentes rgos e tecidos. Em
humanos, foram j descritos dois subgrupos de clulas naturalmente assassinas que so especializadas
na produo de citocinas ou morte, no entanto, esta diviso no foi claramente mostrada em ratinho.

Apesar de existirem algumas semelhanas entre as clulas naturalmente assassinas e os linfcitos T,


existem diferenas entre as clulas NK e os linfcitos:

As clulas naturalmente assassinas no se desenvolvem exclusivamente no timo, o que


demonstrado por ratinhos que no apresentam timo, apresentando poucas ou nenhumas
clulas T mas apresentam populaes funcionais de clulas NK;
Ao contrrio das clulas T e B, as clulas naturalmente assassinas no sofrem rearranjo de genes
de receptores, o que demonstrado pela observao de que clulas naturalmente assassinas se
desenvolvem em ratinhos KO para RAG-1 e RAG-2, que no desenvolvem nem clulas T nem B.

O poder das clulas naturalmente assassinas e de outras vias protectoras da imunidade inata
claramente demonstrado pela sobrevivncia de ratinhos KO para genes RAG, que no apresentam
clulas T nem clulas B.
Funes Citotxicas das Clulas Naturalmente Assassinas
As clulas naturalmente assassinas matam clulas tumorais e clulas infectadas por virs por
processos semelhantes aos empregues pelas CTLs:
1. As clulas naturalmente assassinas carregam FasL na sua superficie e induzem a morte em
clulas alvo que apresentam Fas;
2. O citoplasma das clulas naturalmente assassinas contem numerosos granulos que contm
perforina e granzimas. No entanto, ao contrrio das CTLs, que necessitam de ser activadas antes
dos granulos surgirem, as clulas naturalmente assassinas so constitutivamente citotxicas,
apresentando grandes granulos no seu citoplasma. Aps uma clula naturalmente assassina
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aderir a uma clula alvo, ocorre desgranulao com a libertao de perforina e granzimas na
juno das duas clulas, sendo os papeis destes dois tipos de proteinas citotxicas os mesmos
nas CTLs.

Apesar destas semelhanas, as clulas naturalmente assassinas diferem das CTLs de vrios modos
significantes:
1. As clulas naturalmente assassinas no expressam receptores de clulas T especificos para
antignios nem CD3;
2. O reconhecimento de clulas alvo pelas clulas naturalmente assassinas no restrito a MHC;
3. A presena de molculas MHC classe I inibe a sua actividade citotxica;
4. A actividade das clulas naturalmente assassinas no aumenta aps uma segunda imunizao,
ou seja, a resposta das clulas naturalmente assassinas no gera memria imunolgica.
Devido ao facto das clulas naturalmente assassinas verem a sua actividade citotxica inibida pela
presena de molculas MHC classe I deve-se ao facto da actividade citotxica contra estas clulas ser
feita pelas CTLs e as NK so importantes na defesa contra virus que se alojam em qualquer clula e tm
como principal aco viral a diminuio da expresso de molculas MHC para que estas no sejam
eliminadas. Assim, as clulas naturalmente assassinas actuam em conjunto com as CTLs fazendo
primeiro a eliminao de clulas com expresso reduzida de molculas MHC, eliminando
indiscriminadamente clulas com uma expresso de MHC inferior normal, e deixando as clulas com
niveis superiores ou normais de molculas MHC para as clulas T.
No entanto, isto levanta a questo intrigante de como que estas clulas no atacam eritrcitos, que
so clulas no nucleadas, no expressando molculas MHC classe I. Seria de esperar que estas clulas
fossem eliminadas pelas clulas naturalmente assassinas mas, ao que parece, estas clulas tm outros
receptores membranares que impedem a actividade citotxica das clulas naturalmente assassinas.
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Receptores de Activao e de Inibio


Dado que as clulas naturalmente assassinas no expressam receptores especificos para antignios, os
mecanismos pelos quais as clulas naturalmente assassinas reconhecem clulas prprias alteradas e
destinguem estas das clulas normais tm sido alvo de investigao. Existem dois modelos para
explicar:
1. Two-receptor model postula que as clulas naturalmente assassinas empregam duas
categorias diferentes de receptores, um que fornece sinais inibitrios clulas naturalmente
assassina e outro que fornece sinais activadores;
2. Opposing-signals model tem como base a ideia do modelo anterior mas tem em conta que
existem vrios receptores diferentes na membrana celular para sinais activadores e um numero
de tipos diferentes de receptores inibitrios, sendo o mais correcto.
o balano entre sinais activadores e inibitrios que permite que as clulas naturalmente assassinas
destingam as clulas saudveis das clulas infectadas ou canceroas. importante ter em conta que
sinais activadores das clulas naturalmente assassinas adicionais podem ser fornecidos por factores
soluveis, incluindo citocinas como interferes tipo I, TNF-, IL-12 e IL-15.
A natureza exacta dos receptores membranares nas clulas naturalmente assassinas tem sido
estudada:
1. Receptores activadores a ligao cruzada por anticorpos de muitas molculas encontradas na
superficie das clulas naturalmente assassinas podem activar estas clulas artificialmente, mas
os ligandos naturais de muitos destes receptores de activao no so conhecidos. Alguns
candidatos de receptores de activao so:
Membros das proteinas de ligao a carboidratos conhecidos com lectinas tipo-C, assim
designados porque apresentam dominios de reconhecimento de carboidratos
dependentes de clcio (Ex: NKR-P1);
CD2, receptor da molcula de adeso LFA-3;
CD16, receptor FcIII e que, apesar de ser responsvel pelo reconhecimento mediado por
anticorpos e morte de clulas alvo pelas clulas naturalmente assassinas, no est
provavelmente envolvido na morte no dependente de anticorpos;
NKp30, NKp44 e NKp46.
2. Receptores inibitrios dois grupos principais de receptores inibitrios foram j encontrados
em clulas naturalmente assassinas, a familis de receptores inibitrios C-lectina (CLIR) e um
grupo de receptores inibitrios da superfamilia Ig (ISIR) conhecido como receptores inibitrios
killercell (KIR). Apesar destes grupos serem quimicamente diferentes, em conjunto so referidos
como a superfamilia de receptores inibitrios (IRS). Os mais importantes so:
Em humanos, o receptor inibitrio C-lectina CD94/NKG2, um heterodimero composto
por duas glicoproteinas, reconhece HLA-E em potenciais clulas alvo. Como as molculas
de HLA-E pertencem ao MHC classe I, so bons indicadores dos seus niveis. Estes
receptores no so especificos para um alelo particular de HLA e enviam siniais
inibitrios s clulas naturalmente assassinas com o resultado final de inibio da morte
da potencial clula alvo quando os niveis de MHC classe I so normais;
Em ratinho, o receptor LY49 o homlogo do CD94/NKG2;
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Imunologia

Em contraste, os receptores KIR so especificos para um ou um numero limitado de


produtos polimrficos de um loci HLA particular. No entanto, em contraste com as
clulas B e T, as clulas NK no so limitadas na expresso de receptores KIR.

Como os sinais de receptores inibitrios apresentam poder dominate sobre os sinais de receptores
activadores, um sinal negativo de qualquer receptor inibitrio, tanto CD94/NKG2 ou KIR, capaz de
bloquear a lise de clulas alvo por clulas naturalmente assassinas. Assim, as clulas que expressam
niveis normais de molculas MHC classe I inalterados tendem a escpara de todas as formas de morte
mediada por clulas naturalmente assassinas.
Assim, no opposing-signals model da regulao de clulas naturalmente assassinas podemos ter dois
casos:
1. Os receptores de activao ligam-se a ligandos na clula alvo, e estes ligandos podem ser
padres anormais de glicolisao da superficie de clulas tumorais ou clulas infectadas por
virus. O reconhecimento destes determinantes pelos receptores de activao das clulas
naturalmente assassinas sinaliza a estas clulas a morte da clula alvo;
2. Estes sinais podem ser sobrepostos por um sinal de receptores inibitrios. Isto previne a morte
da clula alvo e a proliferao das clulas naturalmente assassinas e a induo da secreo de
citocinas como IFN- e TNF-.

A consequncia geral deste modelo a poupana de clulas que expressam indicadores criticos de
normalidade, molculas MHC classe I, e matar clulas que no apresentam este indicador.

Citotoxicidade Mediada por Clulas Dependente de Anticorp os


Um numero de clulas que apresentam potencial citotxico expressam receptores membranares para a
regio Fc da molcula de anticorpo, sendo o tipo de citotoxicidade desempenhado por estas clulas
designado citotoxicidade mediada por clulas dependente de anticorpos (ADCC):

Quando o anticorpo est especificamente ligado a uma clula alvo, estas clulas carregadoras
de receptores conseguem ligar regio Fc do anticorpo, e assim clula alvo, e causam
subsequentemente a lise da clula alvo;
Apesar destas clulas citotxicas no serem especificas para o antignio, a especificidade do
anticorpo dirige-as para as clulas alvo especificas.

Entreas as clulas que medeiam a ADCC encontram-se:

Clulas naturalmente assassinas;


Macrfagos;

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Neutrfilos;
Eosinfilos.

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A morte de clulas alvo pela ADCC parece


envolver um numero de mecanismos citotoxicos
diferentes mas no a lise mediada pelo
complemento:

Quando macrfagos, neutrfilos ou


eosinfilos ligam uma clula alvo pelo
receptor Fc, elas tornam-se mais
metabolicamente
activas
e,
como
resultado, o nivel de enzimas liticas nos
seus granulos ou lisossomas aumenta;
A libertao de enzimas liticas no local de
contacto resultar no dano da clula alvo;
Moncios, macrfagos e clulas NK
activadas secretam TNF que tem efeito
citotxico na clula alvo;
Como clulas naturalmente assassinas e eosinfilos contm perforina em granulos
citoplasmticos, a morte da clula alvo tambm podem envolver o dano membranar mediado
por perforinas de modo semelhante ao descrito para as CTLs.

No so todos os isotipos de anticorpos que tm este papel, como sabemos, sendo de esperar que os
mais envolvidos neste processo sejam as molculas de IgG.
Actividade funcional
Neutralizao
Opsonizao
Sensibilizao para morte por
clulas NK
Sensibilizao de mastcitos
Activao do complemento
Distribuio
Transporte atravs do epitlio
Transporte atravs da placenta
Difuso para locais
extravasculares
Nivel srico mdio (mg/mL)

IgM
+
+

IgD
-

IgG1
++
+++

IgG2
++
*

IgG3
++
++

IgG4
++
+

IgA
++
+

IgE
-

++

++

+++
IgM
+
-

IgD
-

+
++
IgG1
+++

+
IgG2
+

+
+++
IgG3
++

IgG4
+/-

+
IgA
+++
-

+++
IgE
-

+/-

+++

+++

+++

+++

++

1,5

0,04

0,5

1,2

3x10

-5

Clulas Dendriticas
As clulas da familia dendritica encontram-se na maior parte dos rgos e actuam principalmente
como sentinelas, capazes de detectar sinais de perigo:

Encontram-se no corao, no figado, no rim, etc., tal como nas superficies mucosas como os
pulmes e o intestino;
Nestes tecidos, encontram-se num estado imaturo e tm a capacidade de reconhecer e capturar
antignios microbianos atravs de receptores especificos.

Como as clulas T e B se encontram principalmente nos rgos linfides, levanta-se a questo de como
que estas clulas podem ser activadas por patognios que invadem tecidos perifricos. Vrias
experincias mostraram que a imunidade das clulas T induzida quando os antignios alcanam
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tecidos linfides organizados e efatizam que as clulas apresentadoras de antignios funcionam de


modo critico como moventadores de antignios da periferia para tecidos linfides organizados.

As clulas dendriticas apresentam propriedades unicas que permitem que elas formem uma ligao
entre a periferia e rgos linfides, onde as respostas imunes so geramente iniciadas.
As caracteristicas das clulas dendriticas que as tornam clulas apresentadoras de antignios por
excelncia so:

Localizam-se nos locais de entrada de microorganismos (epitlio) e nos tecidos;


Apresentam receptores para capturar e responder aos microorganismos, como TLRs e
receptores de manose;
Migram para zonas de clulas T dos rgos linfides, tendo o CCR7 (receptor das citocinas CCL19
e CCL21) uma importncia elevada e permitindo que estas se localizam com as clulas T naive;
As clulas dendriticas maturas expressam elevados niveis de molculas co-estimulatrias
necessrias activao dos linfcitos naive.

Uma das marcas das clulas dendriticas a sua capacidade de migrar. As clulas dendriticas,
normalmente, apresentam como localizao as reas de entrada de antignios, como a derme, os
epitlios, as zonas marginais do bao, e, assim, so uma das primeiras linhas de defesa contra os
antignios. Quando reconhecem um antignio, estas clulas so capazes de o internalizar, por
fagocitose ou endocitose mediada por receptores, e migram para os ndulos linfticos, principalmente
para as zonas ricas em clulas T, e apresentam-nos via MHC classe II s clulas T. Isto permite a
activao das clulas T e provoca a sua diferenciao.
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No entanto, necessrio ter am conta que, para que efectuem a sua funo de apresentao de
antignios, as clulas dendriticas necessitam de ser activadas:

Se as clulas dendriticas no forem activadas, no conseguem exercer funo apresentadora


pois no expressam molculas co-estimulatrias na sua superficie, promovendo um estado de
anergia nas clulas T;
A activao feita pelos micrbios antignicos e leva ao aumento da expresso de molculas
co-estimulatrias (B7 expresso aumentada pelo reconhecimento de PAMPs pelos TLRs), que
promovem a activao das clulas T quando a clula dendritica apresenta pptidos antignicos;
A funo apresentadora das clulas dendriticas pode ser melhorada pelas clulas T activadas por
ligao do CD40L das clulas T ao CD40 das clulas dendriticas. Clulas T activadas apresentam
expresso de CD40L e esta ligao aumenta a activao das clulas dendriticas, melhorando a
sua actividade.

Origem e Desenvolvimento das Clulas Dendriticas


As clulas dendriticas tm origem nas clulas estaminais hematopoiticas na medula ssea e o seu
desenvolvimento caracterizado por:
1. Progenitores das clulas dendriticas na medula ssea migram via corrente sanguinea e alojamse em tecidos perifricos onde encontram vrios factores de crescimento essenciais como GMCSF, IL-4, IL-15, TNF-, TGF- e IL-3 secretados por vrios tipos de clulas incluindo clulas
endoteliais, mastcitos, queratincitos e fibroblastos no microambiente;
2. Tais factores de crescimento determinam o destino dos progenitores que se diferenciam em
clulas dendriticas de Langerhans imaturas, clulas dendriticas intersticiais ou clulas
dendriticas plasmacitoides.
As clulas dendritica seguem a linhagem das clulas mielides, mas podem tambm seguir a linhagem
das clulas linfides, e, portanto, progenitores nestas linhagens do origem a vrios tipos de clulas
dendriticas dependendo do tecido onde se alojam.
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Assim, existem diferentes subpopulaes de clulas dendriticas, e estas diferem na localizao, fentipo
e actividade biolgica, factores estes que so usados na classificao de diferentes clulas dendriticas:
Principais subgrupos
de clulas dendriticas
em ratinho

CD8
CD11b
high

CD8
+
CD11b
high

Plasmocitides
low

Langerhans

Fentipo

CD11c
+
CD8
CD11b
+
DEC205
CD4

CD11c
CD8
+
CD11b
DEC205
+
CD4

CD11c
+/CD8
CD11b
+
B220
+
GR-1

CD11c
dull
CD8
high
DEC205
+
Langerin

rgo

Bao e
outros

Bao e
outros

Bao e outros

Epitlio da
pele, outros

reas ricas
em clulas
T

Zonas
marginais
(bao),
sinus
subcapsular,
dome
subepitelial

Epitlio da
pele, reas
ricas em
clulas T dos
ndulos
linfticos

Microambiente

Zonas marginais,
reas ricas em
clulas T (nodulo
linftico)

high

Dermais
high

CD11c
CD8
+
CD11b
+
DEC205

CD8
CD11b
high

Derivadas de
moncitos
low

CD11c
CD8
CD11b
+
DEC205
CD4

CD11c
CD8
+
CD11b
+
DEC205
CD4

Derme da
pele,
outros

Placas de
Peyer

Bao
inflamado

Derme da
pele, reas
ricas em
clulas T
dos
ndulos
linfticos

reas ricas
em clulas
T do dome
subepitelial,
foliculos
associados
ao epitlio,
foliculos de
clulas B

No bao do ratinho, as subpopulaes de clulas dendriticas mais importantes so:

Clulas dendriticas convencionais (cDC) normalmente referidas como clulas dendriticas


linfides e podem ser CD8- ou CD8+, expressando altos niveis de MHC classe II e CD11c. Ou
seja, podem ser CD11c- CD8+ DEC205+ ou CD11c+ CD8- DEC205-;
Clulas dendriticas plasmocitides (pDC) apresentam baixos niveis de MHC classe II e de
CD11c, apresentando o fentipo CD8+/ CD11bB220+ Gr-1+.

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Clulas Dendriticas Convencionais


Como j sabemos, existem duas subpopulaes de clulas dendriticas convencionais:

CD8+ CD11c- DEC205+;


CD8- CD11c+ DEC205-.

Ambas as populaes tm a capacidade de captar antignio externos, processar e apresentar molculas


MHC classe II, mas estas duas subpopulaes diferem nos seus marcadores membranares, diferindo
assim tambm nas suas capacidade efectoras:
Molcula
TLR3
TLR7
TLR11
CD36
Clec9A (DNGR I)

CD8
+
+
+
+

CD8
+
-

Como CD36 e Clec9A so receptores envolvido na fagocitose de clulas mortes, as clulas CD8+
so mais eficientes na fagocitose destas clulas;
Extressam TLRs endossmicos e membranares mas, devido presena de TLRs intracelulares,
ambas so capazes de reconhecer e apresentar antignios intracelulares, como DNA viral, e
serem activados por estes. Neste caso, os antignios intracelulares so encaminhados para o
interior de endossomas e so ai reconhecidos. Se isso no ocorrer, existem outros receptores
citoslico que tm o mesmo efeito.

No entanto, as clulas CD8+ so mais eficientes na apresentao cruzada de antignios ligados a


clulas ou soluveis. Isto , so mais eficientes a apresentar pptidos externos por via MHC classe I, o
que importante para iniciar respostas contra tumores, antignios virais e desenvolver tolerncia a
antignios prprios. Assim, este processo critico para a induo de respostas imunes adaptativas
contra antignios virais e outros antignios que no so sintetizados pelas APCs profissionais que
podem activar os linfcitos T CD8+.

Joana Maria Soares Pereira

287

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Imunologia

A proliferao das CTLs aps estas via de apresentao cruzada de antignio pode ocorrer de trs
modos:

As clulas T CD8+ reconhecem antignio e co-estimuladores na membrana da clula dendritica,


proliferando na ausncia de clulas TH;
As clulas TH CD4+ produzem citocinas que estimulam a diferenciao das CTLs;
As clulas TH CD4+ aumentam a habilidade das clulas dendriticas estimularem a diferenciao
das CTLs, pela ligao CD40-CD40L.

Para alm desta diferente capacidade, as subpopulaes de clulas dendriticas convencionais tambm
diferem no papel na induo de respostas imunes contra patognios, devido ao facto de produzirem
diferentes citocinas:

Clulas dendriticas CD8+ - so especializadas na induo de respostas T CD8+ anti-virais devido


capacidade de fazerem apresentao cruzada. Como produzem altos niveis IL-12p70 e TGF-,
tm papel fundamental na induo de respostas TH1 e da induo de clulas T reguladoras,
respectivamente;
Clulas dendriticas CD8- - esto principalmente envolvidas na imunidade mediada por clulas
T CD4+, particularmente durante infeces bacterianas, e so importantes na induo de
respostas TH2.

Joana Maria Soares Pereira

288

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Imunologia

No entanto, estudos recentes onde se analisaram respostas imunolgicas in vivo durante a infeco
mostraram que:

Clulas dendriticas CD8+ esto envolvidas na induo de respostas T CD4+ e T CD8+ no s


durante infeces virais, mas tambm durante infeces bacteriana e parasiticas;
Sobre certas condies experimentais, as clulas dendriticas CD8- podem produzir IL-12 e
podem, por isso, estar envolvidas na induo de respostas TH1 contra patognios.

Assim, resumidamente, as caracteriticas das clulas dendriticas convencionais CD8+ so:

So extremamente eficientes na produo de IL-12 in vivo aps estimulao microbiana e


durante a infeco;
Apresentam a capacidade de produzir elevados niveis de IL-12p70 e, por isso, estimular as
respostas TH1, mas este mecanismo parece ser independente de IL-12 mas dependente de
CD70;
Quando activadas, produzem TGF- sendo mais eficientes na induo de clulas T Foxp3+, isto ,
clulas T reguladoras, o que no observado para as clulas dendriticas CD8-;
Podem activar respostas T CD4+ e T CD8+, devido capacidade de fazer apresentao cruzada;
So altamente eficientes no processamento e apresentao de antignios via MHC-classe I e
representam o principal subtipo para a induo de respostas T CD8+ contra patognio in vivo,
particularmente durante infeces virais.

E as caracteriticas das clulas dendriticas convencionais CD8- so:

So eficientes na captura de patognio e antignios derivados de patognios por fagocitose e


endocitose e apresenta-los s clulas T CD4+ atravs de molculas MHC classe II, induzindo
eficientemente respostas T CD4+;
No so capazes de fazer apresentao cruzada, no activando clulas T CD8+;
So mais eficientes na induo de respostas TH2;
No induzem as clulas T reguladoras pois no secretam TGF-, ao contrrio das clulas
dendriticas CD8+.

Clulas Dendriticas Plasmacitoides


Estas clulas diferenciam-se das clulas dendriticas convencionais por serem CD11clow CD8+/- CD118- Gr1+ e por expressarem selectivamente, no ratinho:

Siglec-H, que tambm expresso em alguns


macrfagos;
BST-2 (bone marrow stromal antigen-2), que
reconhecido pelo anticorpo PDCA-1, e pode ser
expresso noutras clulas quando expostas a IFN tipo I e
IFN-.

Assim, facil por citometria de fluxo identificar a presena de


clulas dendriticas plasmocitoides e convencionais no bao de
ratinhos pelo uso de anticorpos para marcadores celulares
diferentes.

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289

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Imunologia

Estas clulas secretam grandes quantidade de IFN tipo I, que induz um forte estado anti-viral, e
secretam tambm IL-12, IL6, TNF- e quimiocinas inflamatrias. Os interferes do tipo I secretados por
estas clulas conferem-lhes as suas funes e caracterizam-se por:

Diminuem a replicao viral, inibindo-a atravs da induo de enzimas que bloqueiam a


replicao viral;
Aumentam a expresso de MHC classe I e a actividade das clulas naturalmente assassinas;
Promovem a sobrevivncia das clulas T activadas e a formao de clulas de memria;
Promovem a actividade T CD8+ citolitica, e a produo de IFN- por clulas T CD8+;
Promovem a polarizao das clulas T CD4+ para TH1 em humanos;
Promovem a diferenciao e maturao das clulas dendriticas permitindo que estas
apresentem e faam apresentao cruzada de antignio a clulas T naive.

Para alm disso, ao produzirem IL-6 e IFNs do tipo 1, as clulas dendriticas plasmacitides podem
induzir a diferenciao de clulas B em plasmcitos produtores de imunoglobulinas e, ao produzirem
quimiocinas, podem atrair clulas T CD4+ e CD8+ activadas para os sitios de infeco.
Tal como as clulas dendriticas convencionais CD8+, as clulas dendriticas plasmacitoides expressam
molculas MHC classe II e molculas co-estimulatrias CD80 e CD86, apresentando antignios a clulas
T CD4+, e tambm so capazes de fazer apresentao cruzada de antignios a clulas T CD8+. No
entanto, a expresso de MHC por estas clulas menor, sendo esta funo efectuada com menor
eficincia.
Quando activadas, estas clulas dendriticas so capazes de produzir interleucina-12. Assim, para alm
da funo de activao das clulas T, estas clulas apresentam tambm as funes da IL-12:

Estimula a produo de IFN- pelas clulas NK e pelos linfcitos T;


Em conjunto com o IFN-, promove a diferenciao de linfcitos TH CD4+;
Aumenta as funes citotxicas de clulas NK e T CD8+ activadas.

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As clulas dendriticas plasmacitoides apresentam TLRs endossomais (TLR7 e TLR9) mas, ao contrrio
das convencionais, no expressam TLR2, TLR4, TLR5 ou TLR3. Assim, no so activadas por antignios
extracelulares (funo dos TLR2, TLR4 e TLR5) nem dsRNA viral intracelular (funo do TLR3) por esta
via. Deste modo, so activadas apenas por antignios especificos, que so os ligandos dos TLRs que
expressam:

TLR9 reconhece genomas virais de DNA de cadeia dupla ricos em sequencias CpG nometiladas;
TLR7 reconhecem RNA viral de cadeia simples.

No entanto, expressam tambm outros dois receptores de padres citoslicos que no pertencem
familia dos toll-like receptors e que reconhecem RNA viral:

RIG-I reconhecem preferencialmente ssRNA e dsRNA curtos;


MDA5 reconhece dsRNAs longos.

Assim, a activao e maturao das clulas dendriticas plasmacitoides feita por antignios
intracelulares que se ligam a estes receptores, havendo um aumento da secreo das citocinas
mencionadas e a um aumento da expresso de molculas MHC classe II e molculas co-estimuladoras
(CD80, CD86 e CD40), ficando estas clulas aptas para a activao das clulas T.

Outras Populaes de Clulas Dendriticas nos Ndulos Linfticos


No ndulo linftico podemos tambm encontrar clulas dendritica provenientes da pele, sendo as mais
importantes:

Clulas de Langerhans apresentam fentipo CD11chighCD8dullDC205highLangerin(CD207)+.


Esto presentas no epitlio da pele constituindo, em espao ocupado, grande parte do epitlio.
Derivam dos moncitos presentes no sangue, que na pele se diferenciam em clulas de
Langerhans. Aps activao entram no sistema linftico e migram para os ndulos linfticos,
onde activam clulas T;

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Clulas dendriticas da derme apresentam o fentipo CD11chighCD8-CD11b+DEC205+. Esto


presentes na derme, ou seja, na camada da pele inferior localizao das clulas de Langerhans,
e quando activadas tambm viajam para os ndulos linfticos.

Superantignios
Os superantignios so proteinas virais ou bacterianas que ligam simultaneamente o dominio V do TCR
e a cadeia de uma molculas MHC classe II. Foram j identificados superantignios endgenos
exgenos e o cross-link de uma TCR e uma molculas MHC classe II por qualquer um dos tipos de
antignios desencadeia um sinal activador que induz a activao e proliferao de clulas T:

Superantignios endgenos so proteinas membranares codificadas por certos virus que


infectam clulas de mamiferos. Um grupo, codificado pelo viru do tumor mamrio de ratinhos
(MTV), capaz de integrar o DNA de certas estirpes de ratinhos e, aps a integrao, proteinas
retrovirais so expressas na membrana de clulas infectadas. Estas proteinas virais, designadas
determinates minor lymphocyte stimulating (MIs), ligam sequncias V particulares nos TCRs e
liga de modo cruzado o TCR a uma molculas MCH classe II. Foram j identificadas quatro MIs,
originrias de diferentes estirpes de MTV;
Superantignios exgenos so proteinas soluveis secretadas por bactrias. Entre elas existem
uma variedade de exotoxinas secretadas por bactrias gram-positivas, como staphylococca
enterotoxins, toxic-shock-syndrome toxin e exfoliative-dermatitis toxin. Cada um destes
superantignios exgenos liga sequncias V particulares nos TCRs e faz liga o TCR a uma
molcula de MHC classe II.

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Os principais superantignios exgenos podem ser resumidos na seguinte tabela:


Superantignio
Staphylococcal enterotoxins
SEA
SEB
SEC1
SEC2
SEC3
SED
SEE
Toxic-shock-syndrome toxin (TSST1
Exfoliative-dermatitis toxin (ExFT)
Mycoplasma-arthritis supernatant
(MAS)
Streptococcal pyrogenic exotoxins
(SPE-A, B, C, D)

Especificidade V
Ratinho
Humano

Doena
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Intoxicao alimentar
Sindrome do choque txico
Sindrome de pele escaldada

1, 3, 10, 11, 12, 17


3, 8.1, 8.2, 8.3
7, 8.2, 8.3, 11
8.2, 10
7, 8.2
3, 7, 8.3, 11, 17
11, 15, 17
15, 16
10, 11, 15

nd
3, 12, 14, 15, 17, 20
12
12, 13, 14, 15, 17, 20
5, 12
5, 12
5.1, 6.1-6.3, 8, 18
2
2

Artrite, choque

6, 8.1-8.3

nd

Febre reumtica, choque

nd

nd

Como os superantignios ligam fora da fenda de ligao ao antignio do TCR, qualquer clulas T que
expresse uma sequncia V particular pode ser activada pelo superantignio correspondente, sem ter
em conta a especificidade antignica do TCR. Deste modo, os superantignios tero vrios efeitos
sobre as clulas T:

A activao policlonal e capaz de afectar uma


percentagem significante da populao TH total e as
activaes massivas que seguem o cross-link por uma
superantignio resulta numa produo exacerbada de
citocinas das clulas TH, levando a uma citotoxicidade
sistmica. A intoxicao alimentar induzida por
staphylococcal enterotoxins e o choque txico
induzido por toxic-shock-syndrome toxin so dois
exemplos de consequncias provocadas pela
produo elevada de citocinas induzida pelos
superantignios;

Os superantignios influenciam a maturao de


clulas T no timo pois induziro seleco negativa de
todos os timcitos que apresentam o dominio V do
TCR
correspondente

especificdade
do
superantignio. Tal deleco massiva pode ser
causada por superantignios endgenos ou exgenos
e caracterizada pela ausncia de todas as clulas T
cujos receptores possuem dominios V alvo do
superantignio.

A produo de superantignios corrompe eficientemente a resposta imunitria, premitindo que o


microorganismo a que este pertence se atravesse o sistema imunitrio sem ser eliminado. Um
mecanismos pelo qual isto feito atravs da induo de anergia nas clulas T contra os antignios e
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293

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os superantignios. Assim, a produo de superantignios evoluiu principalmente como um mecanismo


de invaso do sistema imune.

MIGRAO LEUCOCITRIA E INFLAMAO

Migrao Leucocitria e Inflamao


Muitos tipos de leuccitos movem-se de uma parte do corpo para outro. Isto especialmente
verdadeiro para os linfcitos, que circulam continuamente no sangue e na linfa e, em comum com
outros tipos de leuccitos, migram para os tecidos dos locais de infeco ou tecidos danificados.
Esta recirculao no aumenta apenas a hipotese de linfcitos especificos para um antignio particular
encontrar esse antignio como tambm critica para o desenvolvimento da resposta inflamatria:

A inflamao uma resposta complexa ao dano local ou outros danos e caracterizada por
rubor, calor, inchao e dor;
A inflamao envolve vrias clulas do sistema imune e numerosos mediadores.

A montagem e a regulao das respostas inflamatrias seriam impossiveis sem a migrao controlada
de populaes de leuccitos.

Recirculao de Linfcitos
Os linfcitos so capazes de um nivel extraordinrio de recirculao, movendo-se continuadamente
atravs do sangue e da linfa para vrios rgos linfides:

Aps uma viagem de crca de 30 min na corrente sanguinea, cerca de 45% dos linfcitos so
carregados do sangue directamente para o bao, onde residem durante cerca de 5h;
Numeros semelhantes de linfcitos (42%) saem
do sangue para vrios nodulos linfaticos
perifricos, onde residem durante cerca de 12h;
Um numero pequeno de linfcitos (10%) migram
para
tecidos
extra-linfides
tericrios
atravessando as clulas endoteliais dos capilares.

Os tecidos extra-linfides tercirios apresentam


normalmente poucas clulas linfides, se algumas, mas
so capazes de as importar durante uma resposta
inflamatria. O tecidos tercirios mais imunologicamente
activos so aqueles que fazem uma interface com o
ambiente externo, como:

Pele;
Epitlio mucoso do tracto gastrointestinal;
Epitlio mucoso do tracto pulmonar;
Epitlio mucoso do tracto genito-urinrio.

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O processo de recirculato de linfcitos continuada aumenta a probabilidade de linfcitos especificos


para determinados antignios encontrar esse antignio. Um linfcitos individual pode fazer um circuito
completo do sangue para os tecidos e linfa e voltar a fazer o mesmo uma ou duas vezes por dia. Como
apenas cerca de um em 105 linfcitos reconhece um antignio particular, um grande numero de clulas
T ou B faz contacto com clulas apresentadoras de antigenios num curto espao de tempo para que seja
gerada uma resposta imune especifica. Deste modo, a probabilidade de uma pequena percentagem de
linfocitos especificos fazer contacto com o antignio correspondente elevada pela elevada
recirculao. Para alm disso, isto pode tambm ser melhorado por factore que regulam, organizam e
direccionam a circulao de linfcitos e clulas apresentadoras de antignios.

Molculas de Adeso Celular


O endotlio vascular serve como porteiro regulando o movimento de molculas e leuccitos
sanguineos. Para que os leuccitos circulantes entrem nos tecidos inflamados ou nos tecidos linfides
perif+ericos, as clulas devem aderir e passar entre as clulas endoteliais que revestem os vasos
sanguineos, um processo de signados de extravaso:

As clulas endoteliais expressam molculas de adeso celular (CAMs) especificas para leuccitos:

Algumas destas proteinas membranres so expressas constitutivamente, e outras so expressas


apenas em resposta a concentraes locais de citocinas produzidas durante uma resposta
inflamatria;
Os linfcitos recirculantes, os moncitos e os granulcitos apresentam receptores que ligam as
CAMs no endotlio vascular, permitindo que estas clulas extravasem para os tecidos;
Em adio ao seu papel na adeso de leuccitos s clulas endoteliais, as CAMs nos leuccitos
tambm servem para aumentar a fora das interaces funcionais entre clulas no sistema
imune;
Vrias molculas de adeso contribuem para as interaces entre clulas TH e APCs, TH e clulas
B e CTLs e clulas alvo.

A maior parte das CAMs pertencem a quatro familias de proteinas:

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1. Selectinas a familia selectina de glicoproteinas membranares apresenta um dominio distal


lectin-like que permite que estas molculas se ligue a grupos carboidratos especificos. As
selectinas interagem principalmente com unidade de carboidratos sialylated, que se
encontram ligadas muitas vezes a molculas mucin-like. A familia de selectinas inclui trs
molculas, designadas L, E e P. A maior parte dos leuccitos circulantes expressam L-selectina,
enquanto as E-selectina e P-selectina so expressadas nas clulas vasculares endoteliais. Estas
molculas so responsveis pela adeso inicial dos leuccitos ao endotlio vascular;
2. Mucinas so um grupo de proteinas ricas em serina e treonina que so altamente glicosiladas.
A sua estrutura extendida permite que estas apresentem ligandos carboidratos sialylated s
selectinas. Por exemplo, as L-selectinas nos leuccitos reconhecem carboidratos em duas
molculas mucin-like (CD34 e GlyCAM-1) expressas em certas clulas endoteliais dos ndulos
linfticos. Outra molcula mucin-like (PSGL-1) encontrada em neutrfilos interage com E- e Pselectinas expressas no endotlio inflamado;
3. Integrinas so proteinas heterodimricas (constituidas por uma cadeia e uma ) que so
expressas por leuccitos e facilitam a adeso do endotlio vascular e outras intercaes clulaclula. As integrinas so agrupadas em categorias de acordo com o tipo de cadeia que contm.
Diferentes integrinas so expressas por diferentes populaes de leuccitos, permitindo que
estas clulas se liguem a diferentes CAMs que pertencem superfamilia de imunoglobulinas
expressas ao longo do endotlio vascular. Algumas integrinas devem ser activadas antes de
serem capazes de ligar com alta afinidade aos seus ligandos;

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4. ICAMS vrias molculas de adeso contm um numero varivel de dominios immunoglobulinlike e, assim, so classificadas na superfamilia de imunoglobulinas. Incluidas neste grupo esto
ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3 e VCAM, que so expressas nas clulas endoteliais vasculares e ligam a
vrias molculas de integrinas. Uma importante molcula de adeso designada MAdCAM-1
apresenta tanto dominios Ig-like como mucin-like. Esta molcula expressa no endotlio
mucoso e dirige a entrada de linfcitos para as mucosas. Ela liga-se a integrinas pelos seus
dominios Ig-like e a selectinas pelos seus dominios mucin-like.
Integrinas
As integrinas, como j mencionado, so molculas heterodimricas com uma subunidade e uma
subunidade . Foram j identificados 18 tipos de subunidades e 8 subunidades , e foram j
identificados 24 tipos de integrinas diferentes, sendo as mais importantes:

Estas molcula ligam os seus ligandos com alta afinidade, no entanto, para o fazerem necessitam de ser
activadas. A activao das integrinas feita do seguinte modo:
1. Diferentes conformaes das integrinas esto associadas cim distintas afinidades;
2. Sinais de activao intracelulares induzem a transio entre estes estados de afinidade, o que
aumenta a ligao do ligando. Este processo conhecido regulao da avidez das integrinas;
3. Quando activadas, as integrinas podem agrupar-se, de modo a mediar interaces multivalentes
com os ligandos.
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Extravaso de Neutrfilos
Enquanto uma resposta inflamatria se densenvolve, vrias citocinas e outros mediadores
inflamatroios actuam nos vasos sanguineos locais, induzindo a expresso aumentanda de CAMs
endoteliais. Assim, diz-se que o endotlio est activado ou inflamado.
Os neutrfilos so geralmente o primeiro tipo de clulas que se ligam ao endotlio inflamado e
extravasam para os tecidos. Para alcanar isto, os neutrfilos devem reconhecer o endotlio infalamdo
e aderir fortemente o suficiente para que saiam do sangue. Os neutrfilos ligados devem depoir
penetrar na camada endotelial e migrar para os tecidos vizinhos. Os moncitos e os eosinfilos
extravaso por um processo semelhante, mas os passos esto melhor establecidos para os neutrfilos.
O processo de extravaso dos neutrfilos pode ser dividido em quatro passos sequenciais:
1. Rolagem - os neutrfilos ligam-se fracamente ao endotlio por interaco de baixa afinidade de
selectinas. Durante uma resposta inflamatria, citocinas e outros mediadores actuam no
endotlio local, induzindo a expresso de molculas de adeso da familia de selectinas. Estas Ee P-selectinas ligam-se a molculas de adeso mucin-like na membrana dos neutrfilos. Esta
interaco prende o neutrfilo brevemente mas a fora da circulao sanguinea desprene do
neutrfilo. As molcula de selectinas noutras clulas endoteliais prendem de novo o neutrfilo e
este processo repetido faz com que o neutrfilo se movimento ligeiramente pelo endotlio;
2. Activao por estimulos quimio-atractores enquanto o neutrfilo rola, ele activado por
vrias molculo quimio-atractoras. Estas so caracteristicas permanentes da superficie
endotelial ou secretadas localmente por clulas envolvidas na resposta inflamatria. Entre os
quimio-atractores esto membros das quimiocinas, sendo que a IL-8 e a MIP-1 so duas
quimiocinas envolvidas no processo. No entanto, nem todos os quimio-atractores pertencem
familia das quimiocinas;

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3. Adeso a ligao destes quimio-atractores na membrana dos neutrfilos desencadeia um sinal


activador mediado por proteinas G associadas com o receptor. Este sinal induz uma alterao
conformacional nas molculas de intgrina nos neutrfilos, aumentando a sua afinidade para as
ICAMs no endotlio. Subsequentemente, as interaces entre as integrinas e os ICAMs estabiliza
a adeso do neutrfilo s clulas endoteliais, permitindo que a clula adira firmemente clula
endotelial;
4. Migrao trans-endotelial subsequentemente, o neutrfilo migra atarvs da parede do vaso
para os tecido. Os passos na migrao trans-endotelial e como que dirigida ainda so
desconhecidos. No entanto, ser mediada por quimio-atractores e interaces integrina-ITAMs
ou por um estimulo de migrao separado.

Extravaso de Linfcitos
Vrios subgrupos de linfcitos exibem extravaso directa em locais inflamatrios e rgos linfides
sencundrios. Assim, a recirculao de linfcitos cuidadosamente controlada para assegurar que as
populaes de clulas T e B adequadas so recrutadas para tecidos diferentes.

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Tal como com os neutrfilos, a extravaso de linfcitos envolve interaces entre um numero de
molculas de adeso celular:
Receptor nas
clulas

Expresso

Ligandos no
endotlio

Passos envolvidos
na interaco

CLA ou ESL-1

Clulas T efectoras

E-selectina

Rolagem

L-selectina

Todos os leuccitos

GlyCAM-1,
CD34,
MAdCAM-1

Rolagem

LFA-1

Subgrupos de
leuccitos

ICAM-1, 2, 3

Adeso

LPAM-1

Clulas T efectoras

MAdCAM-1,
VCAM-1

Rolagem/adeso

Mac-1

Moncitos

VCAM-1

PSGL-1

Neutrfilos

E- e P-selectinas

Rolagem

VLA-4

Neutrfilos, clulas
T, moncitos

VCAM-1,
MAdCAM-1,
fibronectina

Rolagem

VLA-6

Clulas T

Laminina

--

--

Principais funes
Alojamento na pele e migrao
para tecidos inflamados
Recirculao de linfcitos via
HEVs para ndulos linfticos
perifricos e migrao para
locais tercirios inflamados
Papel geral na extravaso de
linfcitos via HEVs e migrao
de leuccitos para tecidos
inflamados
Alojamento de clulas T ao
intestino via HEV mucoso,
migrao para tevidos
imflamados
Migrao de moncitos para
tecidos inflamados
Migrao de neutrfilos para
tecidos inflamados
Papel geral na migrao de
leuccitos para tecidos
inflamados
Alojamento de clulas T
progenitoras no timo, possivel
papel no alojamento de clulas
T em tecidos no mucosos

O processo geral semelhante ao que se passa durante a extravaso de neutrfilos e compreende as


mesmas quatro etapas de contacto e rolagem, activao, adeso e, finalmente, migrao transendotelial.
Vnulas de Endotlio Alto
Algumas regies do endotlio vascular nas vnulas ps-capilares de vrios rgos linfides so
compostas por clulas especializadas com uma forma cuboide e so designadas vnulas de endotlio
alto (HEVs):

As suas clulas contrastam em aparncia com as clulas endoteliais achatadas que revestem o
resto dos capilares;
Cada um dos rgos linfides secundrios, com a excepo do bao, contm HEVs;
Estima-se que cerca de 1,4x104 linfcitos extravasam a cada segundo atravs das HEVs num
nico ndulo linftico.

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O desenvolvimento e a manuteno das vnulas de endotlio alto nos rgos linfides so


influenciados por citocinas produzidas em resposta captura de antignios. Por exemplo, estas vnulas
no se desenvolve em animais criados num ambiente livre de germes. O papela da activao antignica
dos linfcitos na manutenos das HEVs demonstrado pelo bloqueio cirurgico da vasculatura linftica
aferente de um ndulo, de modo que a entrada de antignios bloqueada. Num curto periodo de
tempo, as HEVs mostram uma funo inibida e, eventualmente, revertem para uma morfologia mais
achatada.
As vnulas de endotlio alto expressam uma variedade de molculas de adeso celular e, como outras
clulas endoteliais vasculares, expressam CAMs das familias das:

Selectinas (E- e P-selectinas);


Mucinas (GlyCAM-1 e CD34);
ICAM (ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, VCAM-1 e MAdCAM-1).

Algumas destas molculas de adeso esto distribuidas de um modo especifico dos tecidos. Estas
molculas de adeso tecido-especificas so designadas adressinas vasculares (Vas) porque servem para
dirigir a extravaso de diferentes populaes de linfcitos recirculantes para rgos linfides
particulares.

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Alojamento de Linfcitos
O processo geral de extravaso de linfcitos semelhante extravaso de neutrfilos. No entanto, uma
caracteristica importante que destingue os dois processos que diferentes subgrupos de linfcitos
migram diferencialmente entre tecidos diferentes, um pocesso designado trfego ou alojamento:

Os diferentes padres de trfego de subgrupos de linfcitos so mediados por combinaes


unicas de molculas de adeso e quimiocinas;
Os receptores que dirigem a circulao de vrias populaes de linfcitos para tecidos linfides
e inflamatrios particulares so designados receptores de alojamento.

Foram j identificados um numero de molculas de adeso celular de linfcitos e clulas endoteliais que
participam na interaco de linfcitos com HEVs e com o endotlio de locais tercirios ou locais de
infeco. Para alm disso, as quimiocinas apresentam um papel principal na determinao da
heterogenicidade dos padres de circulao de linfcitos.
Recirculao de Linfcitos Naive
Um linfcito naive no capaz de montar uma resposta imune at que seja activada para se tornar
uma clulas efectora:

A activao de uma clula naive ocorre em microambientes especializados nos tecidos linfides
secundrios (e.g., ndulos linfticos perifricos, placas de Peyer, amigdalas e bao). Nestes
microambientes, as clulas dendriticas capturam antignios e apresentam-nos a linfcitos naive
resultando na sua activao;
As clulas naive no exibem preferncia para um tipo particular de tecido linfide secundrio e,
por outro lado, circulam indiscriminadamente para tecidos linfides secundrios por todo o
corpo reconhecendo molculas de adeso em HEVs.

A ligao inicial de linfcitos naive a HEVs geralmente mediada pela ligao do receptor de
alojamento L-selectina a molculas de adeso com GlyCAM-1 e CD34 nas HEVs. O padro de trfego das
clulas de naive desenhado para manter estas clulas constantemente em recirculao atravs do
tecido linfide secundrio, cuja funo primria aprisionar antignios sanguineos ou tecidulares.

Assim que linfcitos naive encontram antignios num tecido linfide secundrio, eles ficam activados e
aumentam para linfoblastos. A activao dura cerca de 48h e, durante esta fase, as clulas so retidas
na regio paracortical do tecido linfide secundrio. Durante esta fase, designada fase shut-down,
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linfcitos especificos para antignios no so detectados na circulao e ocorre proliferao e


diferenciao rpida de clulas naive. As clulas efectoras e de memria que so geradas por esta
processo deixam depois o tecido linfide e comeam a recircular.
Recirculao de Linfcitos Efectores e de Memria
Os padres de trfego dos linfcitos de memria e efectores defirem dos dos linfcitos naive:

As clulas efectoras tendem a alojar-se em regies de infeco reconhecendo o endotlio


vascular inflamado e molculas quimio-atractoras que so geradas durante a resposta
inflamatria;
As clulas de memria alojam-se selectivamente no tipo de tecido onde inicialmente
encontraram antignio. Isto assegura, provavelmente, que uma clula de memria particular
regresse ao tecido onde mais provvel re-encontrar o antignio que reconhece.

As clulas efectoras e de memria expressam niveis aumentados de certas molculas de adeso


celular, como LFA-1, que interagem com ligandos presentes em tecidos extra-linfides tercirios (como
a pele e a mucosa epitelial) e em locais de inflamao, permitindo que as clulas efectoras e de
memria entrem nesses locais. Como as clulas naive no apresentam as molculas de adeso celular
correspondentes, no se alojam nestes locais. O endotlio inflamado expressa um numero de molculas
de adeso, incluindo E- e P-selectinas e VCAM-1 e ICAM-1, que ligam a receptores expressos em altos
niveis em clulas de memria e efectoras.
Ao contrrio dos linfcitos naive, subgrupos de populaes de clulas de memria e efectoras exibem
comportamento tecido-selectivo. Tal especificidade tecidular devido no a um unico receptor de
adeso mas sim a diferentes combinaes de molculas de adeso:

Subgrupo de alojamento nas mucosas as clulas efectoras/de memria deste subgrupo


expressam altos niveis de integrinas LPAM-1 (47) e LFA-1 (Lb2), que ligam MAdCAM e
vrios ICAMs nas vnulas da lamina prpria intestinal. No entanto, estas clulas evitam a
direco para tecidos linfides secundrios porque apresentam baixos niveis de L-selectina que
facilitaria a sua entrada nos tecidos linfides secundrios;
Subgrupo de alojamento na pele este subgrupo tambm expressa baixos niveis de L-selectina
mas apresenta altos niveis de antignio linfocitrio cutneo (CLA) e LFA-1, que ligam E-selectinas
e ICAMs nas vnulas dermais da pele.

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No entanto, apesar das clulas efectoras e de memria que expressam niveis reduzidos de L-selectinas
no tenderem a alojar-se atravs das HEVs nos ndulos linfticos perifricos, elas so capazes de entrar
nos ndulos linfticos atravs dos vasos linfticos aferentes.
Interaces entre Molculas de Adeso
A extravaso de linfcitos para tecidos linfides secundrios ou regies de inflamao um processo
com multiplos passos envolvendo uma cascata de interaces entre molculas de adeso semelhante
envolvida na emigrao de neutrfilos da corrente sanguinea:

1. O primeiro passo normalmente uma interaco selectina-carboidrato semelhante


observada na adeso de neutrfilos. Linfcitos naive inicialmente ligam-se a HEVs pela Lselectina, que serve como um receptor de alojamento que dirige os linfcitos para um tecido
particular expressando a adesina mucin-like correspondente, como CD34 ou GlyCAM-1. A
rolagem ds linfcitos menos pronuncida que a dos neutrfilos. Apesar das interaces iniciais
selectina-carboidrato ser relativamente fraca, a velocidade baixa da corrente sanguinea nas
vnulas ps-capilares , particularmente nas regies das HEVs, reduz a probabilidade da fora da
corrente desprenda o linfcito;
2. No segundo passo, um estimulo activador das integrinas mediado por quimiocinas que esto
tanto localizadas na superficie endotelial como so secretadas localmente. O espesso glicoclice
que reveste as HEVs funcionar para reter estes factores quimio-atractores soluveis nas HEVs. A
possivel secreo nas HEVs de quimio-atarctores especificos dos linfcitos explicar porque os
neutrfilos no extravasam para os ndulos linfticos nas HEVs apesar de expressarem Lselectinas. A ligao das quimiocinas aos receptores acoplados a proteinas G nos linfcitos leva
activao de molculas de integrina na membrana;
3. Quando activadas, as molculas de integrinas interagem com ICAMs, de modo que os linfcitos
aderem firmemente ao endotlio;
4. No entanto, os mecanismos moleculares envolvidos no passo final, a migrao trans-endotelial,
so pouco conhecidos.
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O Processo Inflamatrio
A inflamao uma resposta fisiolgica a uma variedade de estimulos como infeces e dano tecidular:

Em geral, uma resposta inflamatria aguda tem um inicio rpido e dura pouco tempo;
A inflamao aguda geralmente acompanhada por uma reaco sistmica conhecida como
resposta de fase aguda, que caracterizada por uma rpida alterao dos niveis de vrias
proteinas plasmticas;
Em algumas doenas, a activao imune persistente pode resultar na inflamao crnica, que
normalmente leva a consequncias patolgicas.

Papel dos Neutrfilos


Nas primeiras etapas da resposta inflamatria, o tipo celular predominante que se infiltra para os
tecidos so os neutrfilos. A infiltrao de neutrfilos para os tecidos alcana um pico nas primeiras 6h
aps a inflamao, com a produo de neutrfilos na medula ssea a aumentar para alcanar esta
necessidade:

Os neutrfilos deixam a medula ssea a circulam no sangue;


Em resposta a mediadores da inflamao aguda, as clulas endoteliais vasculares aumentam a
sua expresso de E- e P-selectinas, com a trombina e a histamina a induzirem a expresso de Pselectinas e citocinas como IL-1 e TNF- a induzirem a expresso de E-selectinas;
Os neutrfilos circulantes expressam mucinas como PSGL-1 ou tetrassacarideos sialylated, que
ligam as E- e P-selectinas;
Esta ligao medeia a ligao de neutrfilos ao endotlio vascular, permitindo que as clulas
rolem na direco da corrent sanguinea;
Durante este tempo, quimiocinas como IL-8 ou outras molculas quimioatractoras actuam nos
neutrfilos, desencadeando sinais activadores que levam aletrao conformacional das
integrinas, resultando na adeso e subsequente migrao trans-endotelial dos neutrfilos.

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Quando nos tecidos, os neutrfilos activados tambm expressam niveis aumentadps de recepores de
quimio-atractores e, consequentemente, exibem quimiotaxia, migrando a favor de um gradiente de
molculas quimioatractoras:

Quimiocinas, produtos da quebra do complemento (C3am C5a e C5b67), fibrinopptidos,


prostaglandinas e leucotrienos so mediadores inflamatrios envolvidos na inflamao que so
quimiotcticos;
Molculas libertadas por microorganismos, como pptidos formil metionil, so tambm
quimiotcticos para os neutrfilos.

Para alm disso, os neutrfilos activados expressam niveis aumentados de recepores Fc para anticorpos
e receptores do complemento, permitindo que estas clulas ligem mais eficientemente a patognios
revestidos por anticorpos ou pelo complemento, aumentando assim a fagocitose.
Os sinais activadores tambm estimulam vias metablicas para uma exploso respiratria, o que produz
intermedirios reactivos de oxignio e intermedirios reactivos de azoto:

A libertao de alguns destes intermedirios reactivos e a libertao de mediadores dos


grnulos primrios e secundrios dos neutrfilos (proteases, fosfolipases, elastases e
colagenases) desempenha um papel importantes na morte de vrios patognios;
Estas substncias tambm contribuem para o dano tecidular que pode resultar de uma resposta
inflamatria.

A acumulao de clulas mortas e microorganismos, em conjunto com fluidos acumulados e vrias


proteinas, forma o que conhecido com pus.
Respostas Inflamatrias Locais e Sistmicas
A infeco ou o dano tecidular induzem uma cascata complexa de eventos no-especificos, conhecidos
como resposta inflamatria, que fornece uma proteco inicial restringindo o dano tecidulars ao local
de infeco ou dano tecidular. A resposta inflamatria aguda envolve:

Respostas localizadas;
Respostas sistmicas.

As marcas da resposta inflamatria localizada aguda so:

Inchao (tumor);
Vermelhido (rubor);
Dor (dolor);
Calor (calor);
Perda de funo.

Poucos minutos aps o dano tecidular, existe um aumento no dimetro vascular (vasodilatao),
resultando num aumento do volume de sangue na rea e uma reduo do fluxo sanguineo. O aumento
do volume de sangue aquece o tecido e faz com que este fique vermelho. A permiamilidade vascular
tambm aumenta, levando perda de fluido dos vasos sanguineos, particularmente nas vnulas pscapilares. Isto resulta na acumulao de fluido (edema) nos tecidos e, em alguns casos, a extravaso de
leuccitos, contribuindo para o inchao e para a vermelhido da rea.
Muitas das alteraes vasculares que ocorrem inicialmente numa resposta local so devidas a :
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Efeitos directos de mediadores enzimticos plasmticos, como bradiquinina e fibrinopptidos,


que induzem a vasodilatao e a permiabilidade vascular aumentada;
Efeitos indirectos das anafilotoxinas do complemento (C3a, C4a e C5a), que induzem a
desgranulao local dos mastcios com libertao de histamina. A histamina um potente
meidador da inflamao, causando vasodilatao e contraco do musculo liso;
As prostaglandinas so tambm capazes de contrinuir para a vasodilatao e permiabiliade
vascular aumentada associada com a resposta inflamatria aguda.

Algumas horas aps estas alteraes vasculares, os neutrfilos aderem s clulas endoteliais e migram
do sangue para os espaos tecidulares. Estes neutrfilos fagocitam patognios invasores e libertam
mediadores que contribuem para a resposta inflamatria, sendo os mais importantes as proteinas
inflamatrias dos macrofagos (MIP-1 e MIP-), quimiocinas que atraem macrfagos para o local de
inflamao. Os macrfagos chegam 5-6h aps o inicio da resposta inflamatria. Estes macrfagos so
clulas activadas que ixibem fagocitose aumentada e libertao aumentada de mediadores e citocinas
que contribuem para a resposta inflamatria.

Os macrfagos activados nos tecidos secretam trs citocinas que induzem muita da resposta
localizada:

IL-1, IL-6 e TNF- actuam localmente, induzindo a coagulao e um aumento da permeabilidade


vascular;
TNF- e IL-1 induzem a expresso aumentada de molculas de adeso nas clulas endoteliais
vasculares, pois o TNF- estimula a expressa de E-selectinas e a IL-1 induz o aumento da
expresso de ICAM-1 e VCAM-1, estas duas ultimas ligando-se a integrinas em linfcitos e
moncitos, pemitindo a extravaso de neutrfilos, moncitos e linfcitos;

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TNF- e IL-1 tambm actuam nos macrfagos e nas clulas endoteliais para induzir a produo
de quimiocinas que contribuem para o influxo de neutrfilos aumentandp a sua adeso s
culas endoteliais vasculares e funcionando como fortes molculas quimio-atractoras;
TNF- e IL-1 activam macrfagos e neutrfilos, promovendo a actividade fagocitica aumentada
e o aumento da libertao de enzimas liticas nos espaos intersticiais.

A resposta inflamatria local aguda pode ocorrer sem o envolvimento ostetantivo do sistema imune.
Contudo, muitas vezes as citocinas libertadas nos locais de infeco facilitam tanto a aderncia de
clulas do sistema imune a clulas endoteliais vasculares tal como a sua migrao atarvs da parede dos
vasos para os tecidos. O resultado um influxo de linfcitos, neutrfilos, moncitos, eosinfilos,
basfilos e mastcitos para o local de dano tecidular, onde estas clulas participam na eliminao do
antignio e na cicatrizao do tecido.
A durao e intensidade da resposta inflamatria local aguda deve ser cuidadosamente regulada para
controlar o dano tecidular e facilitar os mecanismos de reparao tecidular que so necessrios para a
cicatrizao. O TGF- parece ter um papel importante na limitao da resposta inflamatria, e promove
a acumulao e proliferao de fibroblastos e a deposio de uma matriz extracelular que necessria
para a reparao tecidular adequeada.
A resposta inflamatria local acompanhada por uma resposta sistmica conhecida como resposta de
fase aguda, marcada por:

Induo de febre, pois o aumento de temperatura corporal inibe o crescimento de um numero


de patognios e parece aumentar a resposta imune contra o patognio;
Sintese aumentada de hormonas como ACTH e hidrocortisona;
Produo aumentada de leuccitos:
Produo de um grande numero de proteinas de fase aguda no figado.

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Muitos efeitos sistmicos de fase aguda devem-se a aces combinadas de IL-1, TNF- e IL-6:

Cada uma destas citocinas actua no hipotlamo para induzir febre;


12 a 24h aps o inicio de uma resposta inflamatria de fase aguda, niveis aumentados de IL-1,
TNF- e IL-6 (tal como de factor inibitrio de leucemai (LIF) e oncostatina M (OSM)) induzem a
produo de proteinas por hepatcitos;
O TNF- tambm actua nas clulas endoteliais vasculares e nos macrfagos para induzir a
secreo de factores estimulantes de colnias (M-CSF, G-CSF e GM-CSF), que estimulam a
hematopoiese resultando num aumento transiente do numero de leuccitos necessrios para
desencadear a infeco.

SISTEMA DO COMPLEMENTO

O Sistema do Complemento
O sistema do complemento o principal efector do ramo humoral do sistema imune.
A investigao do complemento comeou nos anos 1890s quando Jules Bordet no Instituto Pasteur em
Paris mostrou que antisoro de ovelha para a bactria Vibrio cholerae causava lise das bactria e que o
aquecimento do antisoro destruia a actividade bacteriolitica. Supreendentemente, a habilidade de lisar
as bactrias foi restaurada neste soro aquecido adicionando soro fresco que no continha anticorpos
dirigidos contra a bactria e no era capaz de matar a bactria por si s.
Border correctamente colocou a hiptese da actividade bacteriolitica requerer duas substncias
diferentes:
1. Os anticorpos antibacterianos especificos, que sobrevivem ao processo de aquecimento;
2. Um componente sensivel ao calor responsvel pela actividade litica.
Paul Ehrlich em Berlim desenvolveu um trabalho semelhante independente e atribui o termo
complemento, definido-o como a actividade do soro sanguineo completar a aco dos anticorpos. Em
anos seguintes, os investigadores descobriram que a aco do complemento era resultado de
interaces de um grande e complexo grupo de proteinas.

Funes do Complemento
O complemento inclui mais de 30 molculas soluveis e proteinas ligadas a clulas. As actividades
biolgicas deste sistema afectam tanto a imunidade inata com a adquirida e vo mais alm das
observaes originais de lise bacteriana mediada por anticorpos.
Comparaes estruturais das proteinas envolvidas nas vias do complemento colocam a origem deste
sistema em organismos primitivos que possuiam sistemas imunes inatos rudimentares. Por contraste, o
facto de interaces de receptores celular com proteinas do complemento controlarem as actividades
das clulas B atribui a este sistema um papel no sistema imune adquirido altamente desenvolvido.
Assim, temos um sistema que atravessa a imunidade inata e a imunidade adquirida, contribuindo para
cada uma numa variedade de modos.

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Aps a activao inicial, os vrios componentes do complemento interagem, numa cascata altamente
regulada, para desempenharem um numero de funes bsicas, incluindo:

Lise de clulas, bactrias e virus;


Opsonizao, que promove a fagocitose de antignios particulares;
Ligao a receptores de complemento especificos em clulas do sistema imune, desencadeando
funes celulares especificas, inflamao e secreo de molculas imunorreguladoras, como os
linfcitos B, pois estes apresentam um receptor de complemento no seu complexo BCR;
Clearance imune, que remove complexos imunes da circulao e os deposita no bao e no
figado, sendo esta a funo mais importante do sistema do complemento, devido ao facto de
impedir a acumulao de complexos imunes.

Componentes do Complemento
As proteinas e glicoproteinas que compoem o sistema do complemento so sintetizadas
principalmente pelos hepatcitos, apesar de quantidades significantes serem tambm produzidas por
moncitos no sangue, macrfagos e clulas epiteliais dos tractos gastrointestinal e genito-urinrio:

Estes componentes constituem 5% (em peso) da fraco globulina do soro;

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A maior parte circula no soro em formas funcionalmente inactivas como pro-enzimas, ou


zimognios, que se encontram inactivos at clivagem proteolitica, que remove um fragmento
inibitrio e expoem o local activo;
A sequncia de reaces do complemento comea com uma cascata de enzimas.

A designao dos componentes do complemento feita por numeros (C1-C9), por letras (e.g, factor D)
ou pro nomes triviais (e.g, factor de restrio homloga):

Fragmentos peptidicos formados pela activao de um componente so denotados por


pequenas letras. Na maior parte dos casos, o fragmento mais pequeno resultante da clivagem
designado a e o maior designado b (e.g, C3a, C3b). no entanto, podem haver excepes;
Os fragmentos do complemento interagem com um outro para formar complexos funcionais.
Estes complexos que apresentam actividade enzimtica so designados por uma barra por cima
do numero ou simbolo (e.g., C, C).

Activao do Complemento
A activao do complemento um processo complexo e os primeiros passo, que culminam na
formao de C5b, podem ocorrer por trs vias diferentes:

Via clssica;
Via alternativa;
Via da lectina.

No entanto, os passos finais que levam ao ataque membranar so os membros em todas as vias.

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Apesar do nome o indicar parcialmente, a via clssica no a filogeneticamente mais antiga mas sim a
primeira identificada. A via alternativa e a via da lectina foram posteriormente identificadas mas so
aquelas filogeneticamente mais antiga, pois a sua activao feita por sistemas mais simples e da
imunidade inata.
Via Clssica
A via clssica iniciada pela ligao da proteina C1 do complemento aos dominios CH2 das IgG ou aos
dominios CH3 das molculas de IgM que se encontram ligadas a antignios:

A C1 um complexo multimrico grande composto


por subunidades C1q, C1r e C1s;
A subunidade C1q feita de uma matriz radial
semelhante a um guarda-chuva de seis subunidades
ligadas por um brao colagnio-like a uma haste
central;
Este haxemero desenpenha a funo de
reconhecimento da molcula e liga-se especificamente
a regies Fc de algumas cadeias pesadas e ;
Cada regio Ig Fc apresenta um unico local de ligao
ao C1q e cada molculas C1q deve ligar pelo menos
duas cadeias pesadas Ig para ser activada.

O ultimo ponto explica porque que os anticorpos ligados a antignio, e no os anticorpos que circulam
livremente, so capazes de iniciar a activao da via clssica:

Como cada molcula IgG apresenta apenas uma regio Fc, multiplas molculas de IgG devem
estar prximas antes do C1q se poder ligar, e multiplos anticorpos IgG so aproximados apenas
quando ligam um antignio multivalente;
Apesar da IgM circulante ser pentamrica, ela no capaz de se ligar a C1q porque as regies Fc
da IgM pentamrica livre esto na forma planar que inacessivel ao C1q. A ligao da IgM a um
antignio induz uma alterao conformacional que expoem os locais de ligao ao C1q nas
regies Fc e permite a ligao do C1q.

Assim, devido sua estrutura pentamrica, uma unica molcula de IgM capaz de ligar duas molculas
C1q e esta uma das razes pelas quais a IgM uma molcula de activao do complemento mais
eficiente que os anticorpos IgG.

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C1r e C1s so serinas proteases que formam um tetramero contendo duas molculas de cada proteina.
A ligao de duas ou mais cabeas globulares de C1q s regies Fc de IgG ou IgM leva activao
enzimtica da C1r associada, que cliva e activa a C1s, desencadeando uma cascata de reaces:
1. A C1s activada cliva a prxima proteina na cascata,
C4, para gerar C4b, sendo o fragmento mais
pequeno, C4a, libertado;
2. A C4 homloga da C3 e o C4b contem uma ligao
tioester interna que forma ligaes covalentes
amida ou ester com o complexo antignio
anticorpo ou com a superficie adjacente da clula
qual o antignio est ligado. Esta ligao da C4b
assegura que a activao da via clssica ocorre
numa superficie celular ou num complexo imune;
3. A prxima proteina do complemento, C2, complexa
com o C4b e clivada por uma molcula C1s vizinha
para gerar um fragmento C2a soluvel de
importncia desconhecida e um frgamento C2b
maior que fica fisicamente associado com o C4b na
superficie celular;
4. O complexo C4b2b resultante a convertase C3 da
via clssica pois apresenta a habilidade de ligar e
clivar proteoliticamente C3, sendo que a ligao ao
C3 mediada pelo componente C4b e a proteolise
catalizada pelo C2b;
5. A clivagem da C3 resulta na remoo do fragmento
C3a pequeno e o C3b capaz de formal ligaes
covalentes com as superficies celulares ou com o
anticorpo onde a activao do complemento foi
iniciada;
6. Assim que o C3b depositado, ele capaz de ligar
factor B e gerar mais C3 convertase pela via
alternativa;
7. Algumas molculas de C3b geradas pela C3
convertase da via clssica ligam a convertase e
fomam um complexo C4b2b3b. Este complexo
funciona como convertase C5 da via clssica
clivando C5 e iniciando os passos finais da activao
do complemento.
O efeito final dos multiplos passos enzimticos e de amplificao que um unica molcula de C3
convertase capaz de levar deposio de centenas ou milhares de molculas de C3b na superficie
celular onde o complemento activado.
Assim, resumidamente, as molculas da via clssica de activao do complemento so:

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Proteina
C1 (C1qr2s2)
C1q
C1r
C1s

Estrutura
750 kD
460 kD; hexamero de trs
pares de cadeias (22, 23,
24 kD)
85 kD dimero
85 kD dimero

Concentrao
srica (g/mL)

75-150
50
50

C4

210 kD, trimero de cadeias


de 97, 75 e 33 kD

300-600

C2

102 kD monmero

20

C3

185 kD (subunidade 110


kD; subunidade 75 kD)

1000-2000

Imunologia
Funo
Inicia a via clssica
Liga a poro Fc do anticorpo que ligou
antignio, a clulas apoptticas e a
superficies catinicas
Serina protease, cliva C1s para a activar
Serina protase, cliva C4 e C2
C4b liga covalentemente superficie da
clula do micrbio, onde o anticorpo est
ligado e o complemento foi activado
C4b liga C2 para clivagem por C1s
C4a estimula a inflamao (anafilotoxina)
C2a uma serina protease q funciona como
enzima activa das C3 e C5 convertases para
clivar C3 e C5
C3b liga superficie do micrbio, onde
funciona como opsonina e como um
componente das C3 e C5 convertases
C3a estimula a inflamao (anafilotoxina)

Uma variante no usual independente de anticorpos da via clssica foi descrita no contexto de
infeces pneumococais:

Macrfagos das zonas marginais do bao expressam um lectina de tipo-C na superficie celular
designada SIGN-R1 que capaz de reconhecer os polissacarideos pneumococais e ligar tambm
C1q;
A ligao multivalente de toda a bactria ou polissacarideo ao SIGN-R1 activa via clssica e
permite o eventual revestimento, de um modo dependentes de C4, do polissacarideo
pneumococal com C3b.

Via Alternativa
A via alternativa de activao do complemento resulta na proteolise de C3 e a ligao estvel do seu
produto de quebra C3b a superficies microbianas, sem a presena de anticorpos:

A proteina C3 contem uma ligao tioster reactiva que est enterrada num dominio
relativamente grande conhecido como dominio tioster;
Quando a C3 clivada, a proteina C3b sofre uma alterao conformacional importante e o
dominio tioster expoem a ligao tioster alteriormente escondida;
Normalmente, no plasma a C3 continuadamente clivada a baixas taxas para gerar C3b por um
processo de C3 tickover;
Uma pequena quantidade de C3b fica covalentemente ligada superficie de clulas, incluindo
micrbios, via a ligao tioster que reage com grupos amino ou hidroxilo de proteinas
membranares ou polissacarideos para formar ligaes amida ou ster;
Se estas ligaes no forem formadas, a C3b fica na fase fluida e a ligao tioster reactiva e
exposta rapidamente hidrolizada, inactivando a proteina. Como resultado, a activao do
complemento no pode seguir.

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Imunologia

Quando a C3b sofre a sua alterao conformacional ps-clivagem expondo o dominio tioster, um local
de ligao para uma proteina plasmtica designada factor B tambm exposto na proteina C3b que
est agora covalentemente ligada superficie de uma clulas microbiana ou do hospedeiro. Apartir
daqui, a cascata de reaces segue do seguinte modo:
1. O factor B agora ligado por sua vez clivado por uma serina protease plasmtica designada
factor D, libertando um pequeno fragmento designado Ba e gerando um fragmento maior
designado Bb que fica ligado ao C3b;
2. O complexo C3Bb a C3 convertase da via alternativa e cliva mais molculas C3, amplificando a
sequncia. No entanto, mesmo que C3b gerado pela via clssica, esta capaz de formar um
complexo com Bb e este complexo capaz de clivar mais C3;
3. Quando C3 clivado e o C3b fica ligado s clulas, C3a libertado e apresenta vrias actividades
biolgicas;
4. Algumas das molculas de C3b geradas pela C3 convertase da via alternativa ligam convertase
e isto resulta na formao de um complexo que contem uma unidade Bb e duas molculas C3b,
que consiste na C5 convertase da via alternativa que clivar C5 e inicia os passos finais da
activao do complemento.
A activao estvel da via alternativa ocorre na superficie das clulas microbianas e no nas clulas dos
mamfero. Se um complexo C3bBb formado numa clula mamifera, ele rapidamente degradado e a
reaco terminada pela aco de vrias proteinas regulatrias presentes nestas clulas. A ausncia de
proteinas regulatria nas clulas microbianas permite a ligao e a activao da C3 convertase da via
alternativa. Para alm disso, outra proteina da via alternativa, designada properdina, capaz de ligar e
estabilizar o complexo C3bBb e a ligao da properdina favorecida nos micrbios em oposio s
clulas do hospedeiro.
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Imunologia

Assim, resumidamente, as molculas da via alternativa de activao do complemento so:


Proteina

Estrutura

Concentrao
srica (g/mL)

C3

185 kD (subunidade 110


kD; subunidade 75 kD)

1000-2000

Factor B

93 kD monmero

200

Factor D

25 kD monmero

1-2

Properdina

Composta por quatro


subunidades de 56 kD

25

Funo
C3b liga superficie do micrbio, onde
funciona como opsonina e como um
componente das C3 e C5 convertases
C3a estimula a inflamao (anafilotoxina)
Bb uma serina protease e a enzima activa
das C3 e C5 convertases
Serina protease plasmtica, cliva o factor B
quando este est ligadp a C3b
Estabiliza a C3 convertase (C3bBb) nas
superficies microbianas

Para alm disso, os principais iniciadores da via alternativa da activao do complemento so:
Patognios e particulas de origem microbiana

No patognios

Vrias estirpes de bactrias gram-negativo


LPS de bactrias gram-negativo
Vrias estirpes de bactrias gram-positivo
cido teicico de paredes celulares gram-positivo
Paredes celulares de fungos e leveduras (zymosan)
Alguns virus e clulas infectadas por virus
Clulas tumorais (Raji)
Parasitas (tripanossomas)

Complexos IgG, IgA e IgE humanos


Complexos IgG de coelho
Factor venom cobra
Eritrcitos heterlogos (coelho, ratinho, galinha)
Polimeros aninicos
Carboidratos puros (agarose, inulina)

Via da Lectina
A via da lectina da activao do complemento desencadeada na ausncia de anticorpos pela ligao
de polissacarideos microbianos a lectinas circulantes, como:

Lectina de ligao a manose plasmtica (MBL);


Lectinas de reconhecimento de N-acetilglucosaminas conhecidas como ficolinas.

Estas lectinas soluveis so membros da familia das colectinas e semelhantes estruturalmente C1q. A
MBL liga-se a residuos de manose em polissacarideos e liga tambm serinas proteases associadas a MBL
(MASPs) como MASP-1, MASP-2 e MASP-3:

Oligomeros de MBL associam-se tipicamente com MASP-2 e MASP-3;


Estas duas proteases formam um complexo tetramrico semelhante ao formado pelas C1r e C1s
e a MASP-2 cliva C4 e C2.

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Imunologia

Apartir da clivagem de C4 e C2, os eventos subsequentes nesta via so idnticos aos que ocorrem na via
clssica.
A MBL uma proteina de fase aguda produzida na resposta inflamatria. A sua funo na activao do
complemento semelhante C1q. Este meio de activao dos componentes C2-C4 para formar C5
convertase sem a necessidade de anticorpos especificos representa um mecanismo de defesa inata
importante comparada com a via alternativa, mas utilizando elementos da via clssica excepto
proteinas C1.
Formao do Complexo de Ataque Membrana
A sequncia terminal da activao do complemento envolve
C5b, C6, C7, C8 e C9, que interagem sequencialmente para
formar uma estrutura macromolecular designada complexo
de ataque membrana (MAC):

Este complexo forma um grande canal atravs da


membrana da clula alvo, permitindo a difuso livre
de ies e pequenas molculas atravs da
membrana.

O resultado final das vias clssica, alternativa ou da lectina


a produo de uma C5 convertase activa:

Esta enzima cliva C5, que contem duas cadeias


cadeias proteicas, e ;
Aps ligao do C5 ao componente C3b no
enzimtico da convertase, a regio N-terminal da
cadeia clivada;
Isto gera o fragmento C5a pequeno, que difunde, e
o fragmento maior C5b, que liga superficie da
clula alvo e fornece um local de ligao para os
componentes subsequentes do complexo de ataque
membrana;
O componente C5b extremamente lbil e fica
inactico em 2 minutos a no ser que C6 se ligue a
ele e o estabilize.

Neste ponto, todas as reaces do complemento ocorrem


na superficie hidrofbica da membrana ou em complexos
imunes em fase fluida:

Quando C5b6 se liga a C7, o complexo resultante sofre uma transio estrutural hidrofilicaanfifilica que expoem regies hidrofbicas, que servem como locais de ligao a fosfolipidos
membranares;
Se a reaco ocorrer na membrana de uma clula alvo, os locais de ligao hidrofbicos
permitem que o complexo C5b67 se insira na bicamada fosfolipidica;
Se a reaco ocorrer num complexo imune ou noutra superficie no celular, os locais de ligao
hidrofbicos no so capazes de ancorar no complexo e este libertado;

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Imunologia

A ligao de C8 e C5b67 membranares induz um alterao conformacional em C8 de modo que


esta proteina tambm sofre transio conformacional hidrofilica-anfifilica, expondo uma regio
hidrofbica, que interage com a membrana plasmtica;
O complexo C5b678 cria um pequeno poro de 10 angstroms em dimetro sendo que a formao
deste poro capaz de levar lise de eritrcitos mas no de clulas nucleadas;
A ligao e polimerizao de C9 ao complexo C5b678 o ultimo passo. Esta uma molcula
porforin-like. Cerca de 10-17 molculas de C9 so capazes de ligar e polimerizar num unico
complexo C5b678. Durante a polimerizao, as molculas C9 sofrem uma transio hidrofilicaanfifilica de modo que conseguem ser inseridas na membrana.

O MAC completo apresenta uma forma tubular, um dimetro de 70-100 angstroms e consiste num
complexo de C5b678 rodeado por um complexo poli-C9. Como ies e pequenas molculas so capazes
de difundir livremente atravs do canal central do MAC, a clula no cpaz de manter a sua
estabilidade osmtica e morta por um influxo de gua e perda de electrlitos.

Os complexos C5b67 libertados de complexos imunes so capazes de se inserir na membrana de clulas


vizinhas e mediar a lise de clulas inocentes. Normalmente, proteinas regulatrias previnem este
acontecimento mas, em algumas doenas, danos tecidulares podem ocorrer por este meio.

Regulao do Sistema do Complemento


A activao da cascata do complemento e a estabilidade das proteinas do complemento activas so
altamente reguladas para prevenir a activao do complemento em clulas do hospedeiro normais e
para limitar a durao da activao do complemento mesmo em complexos de clulas microbianas e
antignio-anticorpo. Os principais mecanismos regulatrios que restringem a actividade do
complemento podem ser:

Um mecanismo geral de regulao de todas as vias a incluso de componentes altamente


lbeis que sofrem inactivao espontnea se no forem estabilizados por reaco com outros
componentes;

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Imunologia

Uma srie de proteinas regulatrias so capazes de inactivar vrios componentes do


complemento.

A regulao do complemento mediada prinicpalmente por vrias proteinas regulatrias, que podem
ser circulantes ou membranares. Muitas destas proteinas, tal como vrias proteinas das vias clssica e
alternativa, pertencem a uma familia designada reguladores da actividade do complemento (RCA) e so
codificadas por genes homlogos que esto localizados adjecente uns aos outros no genoma:
Proteina

Tipo de proteina

Via afectada

Funo
Inibidor de serina proteases: leva
dissociao de C1r2s2 de C1q
Bloqueia a formao de C3 convertase pela
ligao a C4b; cofactor para a clivagem do
C4b pelo factor I
Bloqueia a formao de C3 convertase pela
ligao a C3b; cofactor para a clivagem do
C3b pelo factor I

Inibidor de C1 (C1Inh)

Solvel

Clssica

C4b-binding protein (C4bBP)

Solvel

Clssica e da
lectina

Factor H

Solvel

Alternativa

Receptor do complemento
tipo-1 (CR1)
Proteina co-factora da
membrana (MCP)

Membranar

Clssica,
alternativa e
da lectina

Bloqueia a formao de C3 convertase pela


ligao a C4b ou C3b; cofactor para a
clivagem do C3b C3bBb ou C4b pelo factor I

Decay-accelerating factor
(DAF ou CD55)

Membranar

Factor I

Solvel

Clssica,
alternativa e
da lectina
Clssica,
alternativa e
da lectina

Acelera a dissociao de C4b2a e C3bBb (C3


convertases da via clssica e da via
alternativa
Serina protease: cliva C4b ou C3b usando
C4bBP, CR1, factor H, DAE ou MCP como
cofactor

Factor de restrio homloga


(HRF)
Inibidor membranar de lise
reactiva (MIRL ou CD59)

Membranar

Terminal

Liga C5b678 nas clulas autologas


bloqueando a ligao de C9

Proteina S

Solvel

Terminal

Inactivador da anafilotoxina

Solvel

Efectora

Liga C5b67 soluvel e previne a sua insero


na membrana celular
Inactiva a actividade anafilotoxina da C3a,
C4a e C5a pela remoo de Arg C-terminal
por N carboxipeptidase

A activao do complemento tem de ser regulada por duas razes:


1. Normalmente, ocorre activao do complemento a baixos niveis espontneamente e, se tal
activao for capaz de prosseguir, o resultado por ser o dano de clulas e tecidos normais;
2. Mesmo quando o complemento est activado onde necessrio, como nas clulas microbianas
ou em complexos antignio-anticorpo, ele precisa de ser controlado porque produtos de
degradao das proteinas do complemento so capazes de difundir para clulas adjacentes e
danifica-las.
A actividade proteolitica das C1r e C1s inibida por uma proteina plasmtica designada inibidor de C1
(C1Inh) que um inibidor de serina proteases que mimetiza os substratos normais de C1r e C1s:

Se C1q se liga a um anticorpo e comea o processo de activao do complemento, a C1Inh


torna-se um alvo da actividade enzimtica do C1r2C1s2 ligados;

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Imunologia

C1Inh clivado e liga-se covalentemento a estas proteinas e, como resultado, o tetramero


C1r2C1s2 dissocia-se de C1q, parando a activao da via clssica;
Deste modo, a C1Inh previne a acumulao de C1r2C1s2 enzimaticamente activas no plasma e
limita o tempo pelo qual C1r2C1s2 activo est disponivel para activao subsequente dos passos
seguintes do complemento.

A seguir a este passos, a montagem dos componentes das C3 e C5 convertases pode ser inibida pela
ligao de proteinas reguladoras a C3b e C4b depositidas nas superficies celulares:

Se C3b est depositado na superficie de clulas normais do hospediro, ele pode ser ligado a
vrias proteinas membranares, incluindo MCP, CR1 e DAF e proteina plasmtica factor H;
O C4b depositado nas superficies ceulares tambm ligado de modo semelhante a DAF, CR1 e a
outra poteina plasmtica designada C4bBP;
Por ligarem a C3b ou C4b, estas proteinas inibem competitivamente a ligao de outros
componentes da C3 conevertase, como Bb da via alternativa e C2b da via clssica, bloqueando a
progresso da cascata do complemento.

MCP, CR1 e DAF so produzidas por clulas mamiferas mas no pelos micrbios. Assim, estes
reguladores inibem selectivamente a activao do complemento nas clulas do hospedeiro e permitem
que a activao prossiga nos micrbios. Para alm disso, superficies celulares ricas em cido silico
favorecem a ligao da proteina reguladora factor H relativamente proteina factor B da via
alternativa. As clulas dos mamiferos expressam altos niveis de cido silico relativamente aos
micrbios, o que previne a activao do complemento nas clulas do hospedeiro mas permite nos
micrbios.
A reaco catalizada pelas enzimas C3 convertase das vias clssica, da lectina e alternativa o principal
passo de amplificao na activao do complemento, gerando centenas de molculas de C3b. o C3b
gerado por estas enzimas apresenta o potencial de se ligar a clulas vizinhas, mediando o dano de
clulas saudveis causando a opsonizao por clulas fagociticas com receptores para C3b ou induzindo
o complexo de ataque membranar. O dano de clulas do hospedeiro normal prevendio porque C3b
sofre hidrlise espontnea antes de ser capaz de se difundir, no se podendo ligar a clulas alvo.
No entanto, a C3b associada a clulas proteoliticamente degradada por uma serina protease
designada factor I, que activa apenas na presena de proteinas regulatrias:
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Imunologia

MCP, factor H, C4bBP e CR1 funcionam todos como co-factores para a clivagem de C3b mediada
pelo factor I, sendo que estas proteinas reguladoras nas clulas do hospedeiro promovem a
degradao proteolitica de proteinas do complemento;
A clivagem de C3b mediada por factor I gera fragmento designados iC3b, C3d e C3dg, que no
participam na activao do complemento mas so reconhecidos por receptores nos fagcitos e
nos linfcitos B.

Por ultimo, existe tambm regulao na via terminal da activao do complemento, isto , existe
tambm regulao da formao do complexo de ataque membranar, o que pode ocorrer de dois
modos:
1. A formao de MAC inibida por uma proteina membranar designada CD59, que uma
proteina ligada a glicofosfatidilinositol expressa em muitos tipos de clulas. Esta proteina
incorpora-se nos MACs em montagem antes da insero membranar de C5b678, inibindo a
adio subsequente de molculas C9. A CD59 est presente em clulas normais do hospedeiro,
onde limita a formao do MAC, mas no est presente nos micrbios;
2. A formao de MAC tambm inibida pos proteinas plasmticas como proteina S que se liga a
complexos C5b67 soluveis e previne, assim, a sua insero em membranas celulares prximas
do local onde a cascata do complemento foi iniciada.

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Imunologia

MACs em crescimento so capazes de se inserir em qualquer membrana celular vizinha para alm das
membrana onde foram gerados. Assim, os inibidores de MACs no plasma e nas membranas das clulas
do hospedeiro asseguram que a lise de clulas inocentes no ocorrer prximo do local de activao do
complemento.
Assim, resumidamente, os principais mecanismos de regulao da activao do sistema do
complemento so:

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Imunologia

No entanto, a fagocitose e o dano de clulas normais mediados pelo complemento so mecanismos


patognicos importantes em vrias doenas imunolgicas. Nestas doenas, grandes quantidade de
anticorpos podem ser depositados nas clulas do hospedeiro, gerando tantas proteinas do
complemento activas que as molculas reguladoras so incapazes de controlar a activao do
complemento.

Consequncias Biolgicas da Activao do Complemento


O complemento serve como um importante mediador da resposta humoral amplificando a resposta e
convertendo-a num eficiente mecanismo de defesa para a destruio de microorganismos:

O MAC medeia a lise celular;


Outros componentes ou produtos participam na resposta inflamatria;
Outros componentes ou produtos participam na opsonizao de antignios;
Outros componentes ou produtos participam na neutralizao viral;
Outros componentes ou produtos participam na clearance de complexos imunes

Para alm disso, produtos de degradao do complemento so capazes de activar linfcitos B pois o
complexo receptor destas clulas apresenta um co-receptor que reconhece C3d.
Efeito
Lise celular
Resposta inflamatria
Desgranulao de mastcitos e basfilos
Desgranulao de eosinfilos
Extravaso e quimiotaxia de leuccitos nos locais de
inflamao
Agregao de plaquetas
Inibio da migrao de moncitos/macrfagos e
induo do seu espalhamento
Libertao de neutrfilos da medula ssea
Libertao de enzimas hidroliticas pelos neutrfilos
Expresso aumentada de receptores do complemento do
tipo 1 e 3 (CR1 e CR3) em neutrfilos
Opsonizao de antignios particulares, aumentanto a
sua fagocitose
Neutralizao viral
Solubilizado e clearande de complexos imunes
Activao de linfcitos B

Produto do complemento mediador


C5b6789, MAC
C3a, C4a e C5a (anafilotoxinas)
C3a, C5a
C3a, C5a, C5b67
C3a, C5a
Bb
C3c
C5a
C5a
C3b, C4b, iC3b
C3b, C5b6789 (MAC)
C3b
C3d

Muitas das actividade biolgicas do sistema do complemento dependem da ligao de fragmentos do


complemento a receptores do complemento, que so expressos por vrias clulas:

Alguns receptores do complemento tm papel importante na regulao da actividade do


complemento ligando componentes do complemento biologicamente activos e degradando-os
em produtos inactivos.

Existem vrios receptores do complemento sendo que cada um apresenta um ligando principal. Estes
ligandos incluem vrios componentes do complemento e produtos da sua quebra proteolitica:

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Receptor

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Principais ligandos

CR1 (CD35)

C3b, C4b

CR2 (CD21)

C3d, C3dg, iC3b

CR3 (CD11b/18)
CR4 (CD11c/18)

iC3b

Receptor de
C3a/C4a

C3a, C4a

Receptor de C5a

C5a

Actividade
Bloqueia a formao de C3
convertase; liga complexos imunes
a clulas
Parte do co-receptor das clulas B;
liga complexos imunes a clulas
Liga molculas de adeso celular
nos neutrfilos, facilitando a sua
extravaso; liga complexos imunes,
aumentanto a sua fagocitose
Induz a desgranulao dos
moncitos e basfilos
Induz a desgranulao dos
moncitos e basfilos

Imunologia
Distribuio celular
Eritrcitos, neutrfilos, moncitos,
macrfagos, eosinfilos, clulas
dendriticas foliculares, clulas B,
algumas clulas T
Clulas B, clulas dendriticas
foliculares, algumas clulas T
Moncitos, macrfagos,
neutrfilos, clulas NK, algumas
clulas T
Mastcitos, basfilos, granulcitos
Mastcitos, basfilos,
granulcitos, moncitos,
macrfags, clulas endoteliais

Lise Celular
Os complexos de ataque membrana formados pela activao do complemento so capazes de lisar
bactrias gram-negativo, parasitas, virus, eritrcitos e clulas nucleadas:

Como as vias alternativa e da lectina geralmente ocorrem sem uma interaco inicial antignioanticorpo, estas vias servem como importantes defesas da imunidade inata contra
microorganismos infecciosos;
A necessidade de uma reaco inicial antignio-anticorpo na via clssica suplementa as defesas
no-especificas com um mecanismo de defesa mais especifico. Em alguns casos, a necessidade
de anticorpos no evento de activao pode ser fornecida por anticopros naturais, que so
produzidos contra componentes comuns de micrbios.

A lise de vrios patognios mediada pelos complexos de ataque membrana feita de vrios modos
dependendo do patognio e pode ser impedida por estes de vrios modos tambm:
1. Virus anticorpos e complemento tm um papel importante na defesa do hospedeiro contra
virus e so muitas vezes cruciais na conteno da infeco viral durante a infeco aguda e na
proteco de re-infeces. A maior parte dos virus com invlucro so susceptiveis a lise mediada
pelo complemento. O invlucro viral derivado da membrana plasmtica de clulas infectadas
e, assim, susceptivel formao de poros pelos MACs. Ex: herpesvirus, orthomyxovirus,
paramyxovirus e retrovirus;
2. Bactrias gram-negativo so geralmente lisadas eficientemente pelo sistema do
complemento. Contudo, algumas bactrias gram-negativo e a maior parte das gram-positivo
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Imunologia

apresentam mecanismos de escape ao dano mediado pelo complemento. Algumas bactrias


gram-negativo so capazes de desenvolver resistncia lise mediada pelo complemento o que
se correlaciona com a sua virulncia, mas a maior parte das bactrias gram-negativo so
susceptiveis lise mediada pelo complemento;
3. Bactrias gram-positivo estas bactrias so normalmente resistentes lise mediada pelo
complemento, porque a espessa camada de peptidoglicano na sua membrana previne a
insero de MAC na membrana interna;
4. Clulas nucleadas - sua lise requer a formap de multiplos MACs, enquanto um unico MAC
capaz de lisar eritrcitos. Muitas clulas nucleadas, incluindo a maior parte das clulas
cancerigenas, so capazes de endocitar MACs. Se o complexo for removido cedo, a clula
capaz de repara qualquer dano membranar e restaurar a sua estabilidade osmtica. Um
probelma deste facto a dificuldade de destruio de clulas cancerigenas por este meio.
Assim, os principais mecanismos de escape lise mediada pelo complemento de muitos tipos de
clulas e patognios so so seguintes:
Componente microbiano
Bactrias gram-negativo
Longas cadeias de
polissacarideos no LPS das
paredes celulares
Proteinas da membrana
externa
Elastase

Mecanismo de escape
As cadeias laterais previnem a insero de
MACs na membrana bacteriana
MAC interage com proteinas membranares e
no capaz de se inserir na membrana
bacteriana
Anafilotoxinas C3a e C5a so inactivadas pela
elastase microbiana

Exemplos
Estirpes resistentes de E. coli e
Salmonella
Estirpes resistentes de Neisseria
gonorrhoeae
Pseudomonas aeruginosa

Bactrias gram-positivo
Camada de peptidoglicano na
perede celular
Cpsula bacteriana
Outros micrbios
Proteinas que mimetizam as
proteinas reguladoras do
complemento

Insero de MAC na membrana bacteriana


prevenida pela espessa camada de
peptidoglicano
A cpsula fornece uma barreira fisica entre o
C3b depositado na membrana bacteriana e o
CR1 nas clulas fagociticas
Proteinas presentes em vrias bactrias,
virus, fungos e protozorios inibem a cascata
do complemento

Streptococcus

Streptococcus pneumoniae

Vaccinia virus, herpes simplex,


Epstein-Barr virus, Trypanosoma
cruzi, Candida albicans

Induo de Respostas Inflamatrias


A cascata do complemento muitas vezes vista como importante na lise celular, mas vrios pptidos
gerados durante a formao de MACs desempenham um papel decisivo no desenvolvimento de uma
resposta inflamatria efectiva.
Os fragmentos mais pequenos resultantes da clivagem do complemento, C3a, C4a e C5a, designados
anafilotoxinas, so importantes neste processo:

Ligam a receptores nos mastcitos e basfilos e induzem a desgranulao, que liberta histamina
e outros mediadores farmacologicamente activos;

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325

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Imunologia

Induzem contraces no musculo liso e aumenta a permeabilidade vascular.

A activao do sistema do complemento resulta no influxo de fluidos que carregam anticorpos e clulas
fagociticas para o local de entrada do antignio.

As actividades destas anafilotoxinas altamente reactivas so reguladas por uma protease srica
designadas carboxipeptidase N, que cliva um residuo de Arg do C-terminal das molculas. As molculas
formadas no fim da protelise de C3a e C4a esto completamente inactivas mas o produto de C5a
retem cerca de 10% da sua actividade quimiotctica e 1% da sua habilidade de provocar contraces do
musculo liso.
Para alm disso, C3a, C5a e C5b67 so capazes de induzir moncitos e neutrfilos a aderirem a clulas
endoteliais vasculares, extravasarem atravs do capilar e migrar para o local de activao do
complemento nos tecidos. O C5a mais potente neste processo, sendo necessrio a qunatidades da
ordem dos picomolares.
Opsonizao e Fagocitose
O C3b a principal opsonina do sistema do complemento, apser de C4b e iC3b apresentarem actividade
opsonizante:

A amplificao que ocorre com a activao de C3 resulta num revestimento por C3b de
complexos imunes e particulas antignicas;
Clulas fagociticas, tal como outras clulasm expressam receptores do complemento (CR1, CR3
e CR4) que ligam C3b, C4b ou iC3b;
Antignios revestidos por C3b ligam-se a clulas com CR1 e se a clula for um fagcito (e.g., um
neutrfilo, moncito ou macrfago) a fagocitose aumentada.

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Imunologia

A activao de clulas fagociticas por vrios agentes, incluindo a anafilotoxina C5a, aumenta o numero
de CR1s de 5000 em fagcitos no activados para 50.000 em clulas activadas, facilitando altamente a
fagocitose de antignios revestidos por C3b. Para alm disso, o fragmento C3b capaz de actuar como
adjuvante quando acoplado com proteinas antignicas pois marca os antignios directamente para a
fagocitose, aumentando a iniciano do processamento de antignios e acelerando a produo de
anticorpos especificos.
Eliminao de Complexos Imunes
A importncia do sistema do complemento na eliminao de complexos imunes observada em
pacientes com a doena autoimune lupus eritromatosa sistmica (SLE):

Estes individuos produzem grandes quantidades de


complexos imunes e sofrem dano tecidular como
resultado da lise mediada pelo complemento e
induo de hipersensibilidades do tipo II e III;
De facto, deficincias em C1, C2, C4 e CR1 predispoem
um individuo a SLE, pois deficincias no complemento
intereferem com a eficincia da solubilizao e
eliminao de complexos imunes, sendo que estes
complexos permanecem e provocam danos nos
tecidos.

O processo de eliminao de complexos imunes assim de


elevada importncia e ocorre do seguinte modo:

O revestimento de complexos imunes com C3b facilita


a sua ligao a CR1 em eritrcitos. Apesar dos
eritrcitos expressarem niveis de CR1 mais baixos que
os granulcitos, existem cerca de 103 eritrcitos para
cada leuccito, fazendo com que os eritrcitos
constituam cerca de 90% do CR1 no sangue;

Assim, os eritrcitos desempenham um papel


importante na ligao de complexos imunes
revestidos por C3b e carregam-nos para o figado e
para o bao;

Nestes rgos, os complexos imunes so desligados


dos eritrcitos e so fagocitados, prevenindo a sua
deposio nos tecidos.

Em pacientes com SLE, deficincias em C1, C2 e C4


contribuem para niveis reduzidos de C3b em complexos
imunes e, assim, inibem a sua eliminao. Os baixos niveis de
CR1 expressos nos eritrcitos dos pacientes com SLE tambm
intereferem com a ligao adequada de eliminao de
complexos imunes.
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Imunologia

Neutralizao da Infectividade Viral


Para a maior parte dos virus, a ligao de anticorpos sricos s subunidades repetidas das proteinas
estrutirais viricas cria complexos imunes particulares ideais para a activao da via clssica do
complemento. No entanto, alguns virus (e.g., retrovirus, Epstein-Barr virus, Newcastle disease virus e
rubella virus) so capazes de activar a via alternativa, da lectina e at a clssica na ausncia de
anticorpos.
O sistema do complemento medeia a neutralizao viral por um numero de mecanismos:

Algum grau de neutralizao alcanado atravs da formao de agregados virais maiores,


simplesmente porque estes agregados reduzem o numero de particulas virais infecciosas;
A ligao de anticorpos e/ou complemento superficie de particulas virais bloqueia a ligao
dos virus a clulas do hospedeiro susceptiveis;
Depositos de anticorpos e complemento em particulas virais facilita a ligao da particula viral a
clulas que possuem receptores Fc ou tipo-1 do complemento. No caso das clulas fagociticas,
tal ligao pode ser seguida de fagocitose e destruio intracelular da particula ingerida;
O complemento efeciente na lise da maior parte dos virus com envlucro, resultando na
fragmentao do envlucro e desintegrao do nucleocpside.

Activao de Linfcitos B
A proteina C3d gerada a partir de C3 liga-se ao receptor CR2 nas clulas B e facilita a activao de
clulas B e a iniciao das respostas imunes humorais:

C3d gerado quando o complemento activado por um


antignio, tanto directamente (e.g., quando o antignio
um polissacarideo microbiano) ou aps ligao a um
anticorpo;
A activao do complemento resulta na ligao covalente
do C3b e do seu produto de clivagem C3d ao antignio;
Os linfcitos B so capazes de ligar o antignio atarvs
dos seus receptores Ig e ligam simultaneamente o C3d
ligado atravs de CR2, o co-receptor do receptor de
antignios da clula B, aumentando assim a sinalizao
induzida pelo antignio nas clulas B.

Para alm disso, antignios opsonizados encontram-se tambm


ligados a clulas dendriticas foliculares nos centros germinativos.
As clulas dendriticas foliculares apresentam antignios a clulas
B nos centros germinativos e, assim, este processo importante
para a seleco de clulas B de alta afinidade.
A importncia do complemento nas respostas imunes humorais
ilustrada pela deficincia acentuada na produo de anticorpos
e na formao de centros germinativos em ratinhos KO para C3,
C4 ou CR2.

Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

BIBLIOGRAFIA
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ARTIGOS
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Joana Maria Soares Pereira

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Joana Maria Soares Pereira

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Imunologia

NDICE
INTRODUO AO SISTEMA IMUNITRIO......................................................... 1
Viso Geral da Resposta Imune ...................................................................................................... 1
Imunidade ............................................................................................................................................. 1
Perspectiva Histrica ............................................................................................................................ 1
Imunidade Inata e Adaptativa .............................................................................................................. 3
Imunidade Inata ............................................................................................................................... 4
Imunidade Adaptativa ..................................................................................................................... 5
Tipos de Respostas Imunitrias Adaptativas ........................................................................................ 5
Principais Caracteristicas da Resposta Imunitria Adaptativa ............................................................. 7
Componentes Celulares do Sistema Imunitrio Adaptativo ................................................................ 8
Disfuno Imunitria e suas Consequncias ...................................................................................... 10
Alergia e Asma ............................................................................................................................... 11
Resposta a Transplantes ................................................................................................................ 11
Doena Auto-imune ....................................................................................................................... 12
Imunodeficincia ............................................................................................................................ 12
Imunidade Inata........................................................................................................................... 13
Imunidade Inata ................................................................................................................................. 13
Caracteristicas do Reconhecimento Imune Inato .............................................................................. 13
Receptores de Reconhecimento de Padres .................................................................................. 16
Componentes do Sistema Imune Inato .............................................................................................. 18
Barreiras Epiteliais ......................................................................................................................... 19
Fagcitos e Resposta Inflamatria................................................................................................. 20
Clulas Naturalmente Assassinas (NK cells) .................................................................................. 34
Papel da Imunidade Inata na Estimulao da Resposta Imune Adaptativa ....................................... 37

RECONHECIMENTO DE ANTIGNIOS .............................................................. 39


O Complexo Principal de Histocompatibilidade ............................................................................. 39
O Complexo Principal de Histocompatibilidade ................................................................................. 39
Descoberta do MHC ........................................................................................................................... 40
Organizao Geral e Herana do MHC ............................................................................................... 41
Formas Allicas do MHC ................................................................................................................ 43
Molculas MHC .................................................................................................................................. 45
Estrutura das Molculas MHC Classe I ........................................................................................... 46
Estrutura das Molculas MHC Classe II .......................................................................................... 48
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Relao Exo/Estrutura dos Genes e Proteinas MHC .................................................................... 49


Ligao de Pptidos a Molculas MHC ............................................................................................... 50
Base Estrutural da Ligao de Pptidos a Molculas MHC............................................................ 52
Diversiade de Molculas MHC entre Animais .................................................................................... 54
Desiquilibrio de Ligao ................................................................................................................. 55
Relevncia Funcional do Polimorfismo .......................................................................................... 55
Organizao Genmica do MHC ......................................................................................................... 56
Expresso de Molculas MHC ............................................................................................................ 58
Processamento de Antignios e sua Apresentao aos Linfcitos T ............................................... 60
Reconhecimento de Antignios pelos Linfcitos T............................................................................. 60
Clulas Apresentadoras de Antignios ............................................................................................... 63
Papel das Clulas Dendriticas na Iniciao das Respostas das Clulas T ....................................... 66
Apresentao de Antignios a Linfcitos T Efectores Diferenciados ............................................. 69
Processamento de Antignios ............................................................................................................ 70
Via MHC Classe II ........................................................................................................................... 72
Via MHC Classe I ............................................................................................................................ 78
Significado Fisiolgico da Apresentao de Antignios via MHC ....................................................... 82
Apresentao de Lipidos Antignicos por Molculas CD1 ................................................................. 84
MHC e Susceptibilidade a Doena ...................................................................................................... 85
Receptores de Antignios e Molculas Acessrias nas Clulas T .................................................... 87
Recepo de Antignios pelas Clulas T............................................................................................. 87
TCR para Pptidos Antignicos Associados a MHC ....................................................................... 88
Papel do TCR no Reconhecimento de Pptidos Antignicos Associados a MHC ...................... 90
Proteinas CD3 e dos Complexos TCR ............................................................................................... 91
Funes das Proteinas CD3 e ....................................................................................................... 93
Co-receptores e Receptores de Co-estimuladores nas Clulas T ....................................................... 94
CD4 e CD8: Co-receptores Envolvidos na Activao das Clulas T Restritas a MHC ...................... 94
Anticorpos e Antignios ............................................................................................................... 96
Os Anticorpos ..................................................................................................................................... 96
Estrutura Bsica dos Anticorpos ......................................................................................................... 97
Estrutura Aprofundada das Imunoglobulinas .................................................................................... 99
Enrolamento Imunoglobulina ...................................................................................................... 100
Dominios da Regio Varivel e Ligao ao Antignio ................................................................. 102
Dominios da Regio Constante .................................................................................................... 104
Funes Efectoras Mediadas por Anticorpos ................................................................................... 107
Classes e Actividades Biolgicas dos Anticorpos .............................................................................. 108
Imunoglobulina G (IgG) ................................................................................................................ 109
Imunoglobulina M (IgM) .............................................................................................................. 109
Imunoglobulina A (IgA) ................................................................................................................ 110
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ImunoglobulinaE (IgE) .................................................................................................................. 112


Imunoglobulina D (IgD) ................................................................................................................ 113
Determinantes Antignicos nas Imunoglobulinas............................................................................ 113
Receptor da Clula B (BCR)............................................................................................................... 114
A Superfamilia Imunoglobulina ........................................................................................................ 115

MATURAO, ACTIVAO E REGULAO DOS LINFCITOS ........................ 117


Organizao e Expresso de Genes Imunoglobulinas................................................................... 117
Diversidade de Imunoglobulinas ...................................................................................................... 117
Modelo Gentico Compativel com a Estrutura das Imunoglobulinas ............................................. 118
Organizao dos Genes das Imunoglobulinas .................................................................................. 119
Familia de Multigenes das Cadeias ........................................................................................... 119
Familia de Multigenes das Cadeias ........................................................................................... 120
Familia de Multigenes das Cadeias Pesadas................................................................................ 120
Rearranjos dos Genes das Regies Variveis ................................................................................... 121
Rearranjos V-J das Cadeias Leves ................................................................................................ 121
Rearranjos V-D-J das Cadeias Pesadas ........................................................................................ 122
Mecanismos de Rearranjos de DNA das Regies Variveis ............................................................. 123
Juno Flexivel dos Segmentos .................................................................................................... 126
Excluso Allica ............................................................................................................................ 127
Produo da Diversidade de Anticorpos .......................................................................................... 128
Segmentos de Multiplos Genes da Linha Germinativa ................................................................ 128
Juno Combinatria V-(D)-J........................................................................................................ 128
Flexibilidade Juncional ................................................................................................................. 129
Adio P ....................................................................................................................................... 130
Adio N ....................................................................................................................................... 130
Hipermutao Somtica .............................................................................................................. 130
Associao Combinatria de Cadeias Leves e Pesadas................................................................ 132
Class Switching entre Genes da Regio Constante .......................................................................... 132
Expresso de Genes Ig ...................................................................................................................... 133
Expresso de Imunoglobulinas Secretadas e Membranares ....................................................... 134
Expresso Simultnea de IgM e IgG............................................................................................. 135
Organizao e Rearranjo dos Genes TCR ......................................................................................... 136
Mecanismo de Rearranjo do DNA do TCR.................................................................................... 138
Excluso Allica dos Genes TCR ................................................................................................... 139
Estrutura Geral dos Genes TCR Rearranjados .............................................................................. 139
Diversidade de TCRs ..................................................................................................................... 140
Viso Geral do Desenvolvimento dos Linfcitos .......................................................................... 142
Viso Geral do Desenvolvimento dos Linfcitos .............................................................................. 142
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Entrada das Clulas Progenitoras na Linhagem das Clulas B e T ................................................... 143


Rearranjo e Expresso de Genes de Receptores de Antignios ....................................................... 144
Eventos de Seleco ......................................................................................................................... 144
Gerao de Subgrupos de Linfcitos ................................................................................................ 146
Maturao, Diferenciao e Activao das Clulas B ................................................................... 147
Maturao dos Linfcitos B .............................................................................................................. 147
Clulas Progenitoras na Medula ssea ....................................................................................... 147
Rearranjo de Genes Ig .................................................................................................................. 148
Receptor da Clula pr-B.............................................................................................................. 149
Factores de Transcrio e Defeitos no Desenvolvimento das Clulas B ...................................... 150
Marcadores de Superficie ............................................................................................................ 152
Subgrupos de Clulas B ................................................................................................................ 152
Seleco do Reportrio de Clulas B Maduras............................................................................. 155
Activao e Proliferao das Clulas B ............................................................................................. 157
Traduo de SInais de Activao.................................................................................................. 158
Complexo Co-receptor da Clula B ............................................................................................... 160
Papel das Clulas TH ..................................................................................................................... 161
Resposta Humoral ............................................................................................................................ 162
Papel das Clulas TH na Resposta Humoral a Haptenos .............................................................. 164
Locais in vivo para a Induo da Resposta Humoral ........................................................................ 165
Centros Germinativos e Diferenciao de Clulas B Induzida por Antignio .................................. 166
Maturao da Afinidade .............................................................................................................. 167
Clulas de Memria e Plasmcitos .............................................................................................. 170
Maturao, Diferenciao e Activao das Clulas T ................................................................... 171
Maturao dos Linfcitos T .............................................................................................................. 171
Papel do Timo na Maturao das Clulas T ................................................................................. 171
Inicio da Maturao das Clulas T no Timo ................................................................................. 173
Receptor da Clula pr-T .............................................................................................................. 174
Produo de Timcitos Efectores e Expresso do TCR ................................................................. 175
Marcadores de Superficie ............................................................................................................ 177
Processos de Seleco Durante a Maturao das Clula T ......................................................... 178
Seleco Positiva de Timcitos: Desenvolvimento da Restrio MHC ......................................... 179
Seleco Negativa de Timcitos: Tolerncia Central ................................................................... 182
Linfcitos T ................................................................................................................................... 183
Linfcitos T Naturalmente Assassinos (NK-T Cells) .......................................................................... 184
Activao dos Linfcitos T ................................................................................................................ 185
Activao dos Linfcitos T CD4+ ....................................................................................................... 187
Activao dos Linfcitos T CD8+ ....................................................................................................... 188
Papel dos Co-estimuladores na Activao das Clulas T .................................................................. 190
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Imunologia

Traduo do Sinal pelo Complexo TCR ............................................................................................. 193


Formao da Sinapse Imunolgica .............................................................................................. 194

MECANISMOS EFECTORES DAS RESPOSTAS IMUNES ................................... 197


As Citocinas ............................................................................................................................... 197
As Citocinas....................................................................................................................................... 197
Propriedades Gerais das Citocinas ................................................................................................... 197
Categorias Funcionais das Citocinas ............................................................................................ 201
Receptores das Citocinas e Sinalizao ........................................................................................ 202
Antagonistas de Citocinas ............................................................................................................ 204
Citocinas que Medeiam e Regulam a Imunidade Inata.................................................................... 206
Tumor Necrosis Factor (TNF)........................................................................................................ 207
Interleucina-1 (IL-1) ...................................................................................................................... 212
Quimiocinas ................................................................................................................................. 214
Interleucina-12 (IL-12) .................................................................................................................. 218
Interferes do Tipo I (IFNs) ........................................................................................................... 221
Interleucina-10 (IL-10) .................................................................................................................. 224
Outras Citocinas da Imunidade Inata .......................................................................................... 225
Papeis das Citocinas na Imunidade Inata e na Inflamao ......................................................... 227
Citocinas que Medeiam e Regulam a Imunidade Adaptativa .......................................................... 228
Interleucina-2 (IL-2) ...................................................................................................................... 230
Interleucina-4 (IL-4) ...................................................................................................................... 232
Interleucina-5 (IL-5) ...................................................................................................................... 234
Interleucina-13 (IL-13) .................................................................................................................. 234
Interfero- (IFN-) ...................................................................................................................... 236
Transforming Growth Factor (TGF-) ....................................................................................... 239
Outras Citocinas da Imunidade Adaptativa ................................................................................. 240
Papel das Citocinas nas Respostas Imunes Adaptativas Especializadas...................................... 241
Citocinas que Estimulam a Hematopoiese ....................................................................................... 242
Stem Cell Factor (c-Kit Ligand) ..................................................................................................... 243
Interleucina-7 (IL-7) ...................................................................................................................... 243
Interleucina-3 (IL-3) ...................................................................................................................... 244
Outras Citocinas Hematopoiticas ............................................................................................... 244
Respostas Efectoras Mediadas por Clulas.................................................................................. 245
Imunidade Humoral e Mediada por Clulas..................................................................................... 245
Tipos de Reaces Mediadas por Clulas ......................................................................................... 246
Clulas T CD4+ Efectoras ................................................................................................................... 249
Clulas TH1 e TH2 .......................................................................................................................... 249
Respostas Imunes Mediadas por TH1 ........................................................................................... 254
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Imunologia

Respostas Imunes Mediadas por TH2 ........................................................................................... 256


Clulas TH1 e TH2 na Doena ........................................................................................................ 258
Clulas TH17 ................................................................................................................................. 259
Respostas Imunes Mediadas por TH17 ......................................................................................... 264
Papel das TH17 na Autoimunidade............................................................................................... 264
Clulas T Reguladoras ....................................................................................................................... 265
Mecanismos de Aco das Clulas T Reguladoras ....................................................................... 266
Induo de Clulas T Reguladoras na Periferia e Manuteno ................................................... 268
Aco das Clulas T Reguladoras na Diferenciao de Diferentes Subgrupos de Clulas T CD4 + 268
Clulas T CD8+ Citotxicas ................................................................................................................ 269
Activao e Diferenciao em CTLs Efectoras.............................................................................. 270
Fase Efectora da Imunidade Mediada por CTLs ........................................................................... 272
Clulas Naturalmente Assassinas ..................................................................................................... 276
Desenvolvimento e Caracteristicas das Clulas Naturalmente Assassinas.................................. 277
Funes Citotxicas das Clulas Naturalmente Assassinas ......................................................... 279
Receptores de Activao e de Inibio ......................................................................................... 281
Citotoxicidade Mediada por Clulas Dependente de Anticorpor .................................................... 282
Clulas Dendriticas ........................................................................................................................... 283
Origem e Desenvolvimento das Clulas Dendriticas .................................................................... 285
Clulas Dendriticas Convecionais ................................................................................................. 287
Clulas Dendriticas Plasmacitoides .............................................................................................. 289
Outras Populaes de Clulas Dendriticas nos Ndulos Linfticos .............................................. 291
Superantignios ................................................................................................................................ 292
Migrao Leucocitria e Inflamao............................................................................................ 294
Migrao Leucocitria e Inflamao................................................................................................. 294
Recirculao de Linfcitos ................................................................................................................ 294
Molculas de Adeso Celular ........................................................................................................... 295
Integrinas ..................................................................................................................................... 297
Extravaso de Neutrfilos ................................................................................................................ 298
Extravaso de Linfcitos ................................................................................................................... 299
Vnulas de Endotlio Alto ............................................................................................................ 300
Alojamento de Linfcitos ............................................................................................................. 302
Recirculao de Linfcitos Naive .................................................................................................. 302
Recirculao de Linfcitos Efectores e de Memria .................................................................... 303
Interaces entre Molculas de Adeso ...................................................................................... 304
O Processo Inflamatrio ................................................................................................................... 305
Papel dos Neutrfilos ................................................................................................................... 305
Respostas Inflamatrias Locais e Sistmicas ............................................................................... 306
Sistema do Complemento .......................................................................................................... 309
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Imunologia

O Sistema do Complemento............................................................................................................. 309


Funes do Complemento ............................................................................................................... 309
Componentes do Complemento ...................................................................................................... 310
Activao do Complemento ............................................................................................................. 311
Via Clssica................................................................................................................................... 312
Via Alternativa ............................................................................................................................. 314
Via da Lectina ............................................................................................................................... 316
Formao do Complexo de Ataque Membrana ........................................................................ 317
Regulao do Sistema do Complemento ......................................................................................... 318
Consequncias Biolgicas da Activao do Complemento .............................................................. 323
Lise Celular ................................................................................................................................... 324
Induo de Respostas Inflamatrias ............................................................................................ 325
Opsonizao e Fagocitose ............................................................................................................ 326
Eliminao de Complexos Imunes ................................................................................................ 327
Neutralizao da Infectividade Viral ............................................................................................ 328
Activao de Linfcitos B ............................................................................................................. 328

BIBLIOGRAFIA.............................................................................................. 329
NDICE ......................................................................................................... 331

Joana Maria Soares Pereira

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