Expresin y el estado mutacional

de los objetivos con el tratamiento

correspondiente y oncogenes
clave en 123 tumores de glndulas
salivales malignas
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.

J. Cros 1,
E. Sbidian 2,
S. Hans 3,
H. Roussel 1,
F. Scotte 4,
E. Tartour 5,
D. Brasnu 3,
P. Laurent-Puig 6,
P. Bruneval 1,
H. Blons 6, y
C. Badoual 1, 5, , *
+Afiliaciones de los autores

1.

1.

Departamento de Patologa, G. Pompidou Europea hospital APHPUniversit Paris Descartes, Paris

2. 2 Departamento de Salud Pblica de la Universidad Paris Est CrteilEA4393, Creteil
3. 3 Departamentos de Ciruga de Cabeza y Cuello
4. 4 Oncologa, G. Pompidou Europea Hospital-Universidad Paris
Descartes, Paris
5. 5 INSERM U970 Paris-Centre de recherche Equipo cardiovasculaire 10, Pars
6. 6 Departamento de Bioqumica y Molecular Oncologa, G. Pompidou
Europea Hospital-Universidad Paris Descartes, Inserm Unit Mixte de
Recherche-S775, Pars, Francia
* Correspondencia a: Prof. Ccile Badoual, Departamento de Patologa, G. Pompidou
Europea hospital APHP-Universit Paris Descartes, 20 Rue Leblanc, Paris 75015, Francia. Tel: + 331-56-09-38-98; Fax: + 33-1-56-09-38-89; E-mail: cecile.badoual@egp.aphp.fr

Recibido 13 de febrero 2013.

1

Revisin recibi 01 de julio 2013.

Aceptado 03 de julio 2013.

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Abstracto
Antecedentes Los tumores malignos de las glndulas salivales (msgt) son
entidades raras y pleomrficas. Los pacientes con enfermedad avanzada
pueden beneficiarse de la terapia dirigida; Sin embargo, los objetivos
especficos para la optimizacin y la personalizacin de los tratamientos an no
se han identificado.
Diseo inmunohistoqumica para C-KIT, EGFR, HER2, MUC1, mTOR fosfoestrgenos, receptores de progesterona andrgenos / / y Ki67 se llev a cabo y
se evala en trminos de libre de progresin y la supervivencia global. Alto
rendimiento de deteccin molecular de oncogenes clave se realiz en 107
pacientes que utilizan los mtodos de diagnstico de rutina y la tecnologa
Sequenom.
Resultados Se identificaron varios cables de terapia, incluyendo altos niveles
de HER2 y receptores de andrgenos en los carcinomas de los conductos
salivales, C-KIT en los carcinomas mioepiteliales y EGFR en los carcinomas
mucoepidermoides. Mutaciones recurrentes que implican elementos aguas
abajo de la va EGFR se encontraron en HRAS, especialmente en los tumores
con un componente mioepiteliales, y en otros oncogenes

clave (KRAS / NRAS / PI3KCA / BRAF / MAP2K). Por otro lado, <1% de las
muestras tena EGFR o HER2 mutaciones.
Conclusin Varios subtipos de tumores sobreexpresan objetivos de terapias
dirigidas que sugieren potenciales clientes potenciales de la terapia. Genotipo
resultados sugieren la activacin aguas abajo de EGFR en 18 de las 107
muestras que podran estar asociados con la baja eficacia de los inhibidores de
EGFR. Otras molculas, tales como inhibidores de PI3K / MEK o de mTOR,
pueden tener actividad anti-tumoral en este subgrupo. La alta tasa de mutacin
en HRAS destaca un novedoso evento oncognico clave en TGSM.

Palabras clave

C-KIT

EGFR

HER2

tumores de glndulas salivales malignas

terapias dirigidas
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Introduccin
Los tumores de la glndula salival malignos (msgt) son raros, representando ~
6% de todas las neoplasias de cabeza y cuello. La ltima de la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS) individualiza 24 subtipos epiteliales, por lo que cada
entidad an ms raro. Cinco subtipos representan el 80% de todos los tumores
[carcinoma mucoepidermoide (MEC), el carcinoma adenoide qustico (ADCC),
carcinoma de clulas acinares (ACC), adenocarcinoma no especificado (NOS) y
el carcinoma ex adenoma pleomorfo]. Aspectos histolgicos varan
ampliamente entre los subtipos, y una clasificacin ms simple basado en el
pronstico fue propuesta por Regezi et al. [1] (Tabla S1, disponible en Annals of
Oncology en lnea).
Tratamiento curativo se basa en la ciruga, que puede ser complementada con
radioterapia. Sin embargo, los tumores suelen ser de crecimiento lento y se
descubren en una etapa avanzada, no quirrgico. Gestin de los tumores
localmente avanzados o metastsicos es difcil, ya que las quimioterapias
convencionales tienen escasa eficacia. Las terapias dirigidas pueden ofrecer
importantes beneficios para estos pacientes; Sin embargo, hasta la fecha, no
existen directrices o herramientas para la seleccin de los pacientes
candidatos. Las terapias dirigidas incluyen molculas mayores tales como antiestrgenos o andrgenos, las molculas ms recientes, como anti-HER2 / EGFR /
agentes mTOR, y molculas en pruebas clnicas iniciales como un inhibidor de
PI3K y una vacuna anti-MUC1. Los informes sobre la expresin de molculas
especficas, son raras, muy heterognea, y a veces totalmente contradictorio,
principalmente debido a los pequeos grupos de pacientes y el uso de
diferentes anticuerpos.
El objetivo de este estudio fue evaluar sistemticamente en una de las mayores
cohortes retrospectivas de epitelio TGSM la expresin y valor pronstico de los

objetivos con el tratamiento correspondiente, as como el estado mutacional de

los genes implicados en las respuestas de terapia anti-EGFR, y para llevar a
cabo una gran pantalla de mutaciones en los jugadores oncognicos clave para
dar a conocer nuevas vas para atacar.
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Pacientes y mtodos
pacientes

El estudio fue aprobado por el comit de tica del Hospital Europeo G.

Pompidou. Los pacientes fueron seleccionados de las bases de datos de
patologa de tres hospitales de Pars utilizando todos los subtipos msgt
epiteliales como trminos de bsqueda y una fecha de la ciruga entre 1991 y
2010. De los 132 expedientes de pacientes recuperados, 123 fueron
incluidos (Figura S1, disponible en Annals of Oncology en lnea). , Datos clnicos
y patologa demogrficos se obtuvieron de los registros quirrgicos y
patolgicos. Los tumores fueron analizados por los subtipos definidos por la
clasificacin de la OMS y se agrupan en los tumores de bajo, intermedio y alto
grado de acuerdo con la clasificacin propuesta por Regezi et al. [1].
inmunoqumica

Especmenes tumorales se fijaron en formalina y embebidos en parafina.Los

detalles de los anticuerpos primarios, los procedimientos de tincin y controles
positivos se enumeran en la Tabla suplementaria S2, disponible en Annals of
Oncology en lnea, y las muestras de tincin positiva se muestran en la Figura
S2, disponible en Annals of Oncology en lnea. Dos patlogos interpretarse de
forma independiente la tincin, cegado a los resultados clnicos. Casos
discordantes se discuten para llegar a un acuerdo. El porcentaje de clulas
positivas para los receptores de Ki67, andrgeno / estrgeno / progesterona
(tincin nuclear), C-KIT (membrana citoplasmtica y) y mTOR (citoplsmica) se
registr. Se utiliz un anlisis semi-cuantitativo basado en la patologa mamaria
para HER2 y EGFR.MUC1 expresin se evalu por el porcentaje de clulas
teidas y intensidad de la tincin (dbil / moderada / fuerte).
La extraccin de ADN y la pantalla mutacional

Se aisl el ADN de los tumores microdissected utilizando el QIAamp DNA Mini Kit
(Qiagen, Courtaboeuf, Francia). Que daa el ADN fijador o material insuficiente
impidi el anlisis de 16 pacientes, dando 107 pacientes con ADN de buena
calidad. KRAS codn 12 y 13 mutaciones, BRAF p.V600E yEGFR p.L858R fueron
seleccionadas por la discriminacin allica. ParaBRAF y EGFR sondas, la
sensibilidad se increment mediante la adicin de un bloqueador de cido
nucleico peptdico. KRAS codn 61 y HRAScodones 12-13-61 mutaciones fueron
evaluados por secuenciacin directa. La deteccin de deleciones o inserciones
en el exn 19 de EGFR y 20 de EGFR y HER2 se llev a cabo mediante anlisis
de fragmento. Todas las secuencias de primers estn disponibles bajo
peticin. Una pantalla mutacional de alto rendimiento se llev a cabo en 87
muestras con suficiente ADN utilizando un panel personalizado en la
Sequenom automatizar (Tabla S3, disponible en Annals of Oncology en lnea).
El anlisis estadstico

Los datos fueron analizados utilizando el software STATA versin 11 (Stata, Inc.,
College Station, TX, EE.UU.). Las pruebas fueron de dos colas yP-valores <0,05
fueron considerados. La supervivencia global se midi desde la ciruga hasta el
ltimo seguimiento o la muerte. Supervivencia libre de eventos se midi desde
la ciruga hasta la ltima de seguimiento o la recidiva local o metstasis. La
supervivencia global y libre de eventos se estimaron por el mtodo de KaplanMeier. Los factores que pueden influir en la supervivencia libre de progresin y
global fueron probados mediante la comparacin de las curvas de supervivencia

con la prueba de log-rank.Un paso a paso se utiliz el modelo de riesgos

proporcionales de Cox para dar cuenta de forma simultnea para todos los
factores pronsticos potenciales a travs del tiempo. Las variables que surgen
de modelos univariados con un P-valor <0,15 se incluyeron en el modelo
multivariado final. Se estimaron los coeficientes de riesgo y un intervalo de
confianza de dos caras 95% (IC del 95%).
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resultados

de poblacin, las caractersticas del tumor y tratamientos

Sesenta y dos mujeres (50,4%) y 61 hombres con una edad media de 52 se

incluyeron ( 18) aos. Caractersticas del tumor se resumen en la
Tabla1. Estaban disponibles para 99 pacientes (80%) Los datos sobre el
tratamiento adyuvante despus de la ciruga; 51 no tenan la terapia
adyuvante, 4 quimioterapia recibida solo, 18 tenan la radioterapia sola
(tpicamente 66 Gy) y 26 recibieron quimioterapia seguida de radioterapia.Los
regmenes quimioteraputicos, cuando est disponible, se basa principalmente
en las sales de platino (carboplatino o cisplatino en 14 y 3 pacientes,
respectivamente), en algn momento asociados con 5-fluorouracilo (7
pacientes). Quimioterapias a base de Taxol eran raras (3 pacientes).
Ver esta tabla:

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Mesa 1.

Caractersticas del tumor al momento del diagnstico

expresin de posibles dianas moleculares y Ki67

Ocho objetivos de terapia personalizada se ensayaron para determinar los

niveles de expresin (Tabla 2). Expresin fue relativamente homognea para
todos los marcadores de la prueba. C-KIT fue el marcador ms frecuentemente
expresada (55 de 112, el 49,1% del total). Slo los casos que muestran una
fuerte EGFR y HER2 expresin (puntuacin de 3+ con criterios de patologa
mamaria) fueron considerados positivos. Si tambin se consideraron positivos
los casos con un resultado de 2 +, entonces EGFR fue el marcador ms
expresada (61 de 109, el 56% de los casos).Expresin del marcador fue rara vez
restringido a un subtipo de tumor, pero se observaron tendencias
claras. Receptor de andrgenos y la expresin de HER2 eran fuertes y
frecuentes en los carcinomas de los conductos salivales (SDC). La expresin de
EGFR estaba presente en casi la mitad de MEC y el adenocarcinoma NOS. C-KIT
se observ expresin en prcticamente todos los casos de ADCC y en ms de
tres cuartas partes de carcinomas epiteliales mioepiteliales. MUC1 (expresin
moderada y fuerte) y fosfo - mTOR eran en su mayora positivos en el
adenocarcinoma NOS y ACC, respectivamente. El receptor de progesterona no
se expres y receptores de estrgeno raramente.
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Tabla 2.

Expresin inmunohistoqumica de dianas moleculares con el tratamiento

correspondiente
El ndice de proliferacin, MIB1 / Ki67, fue superior al 20% en una cuarta parte
de los casos (de corte escogidos de la literatura [2]). COSUDE y el
adenocarcinoma NOS tenan el ndice de proliferacin ms alta media.MIB1 /

Ki67 se asoci con un grado del tumor [odds ratio (OR) (IC del 95%: 1,8 a 13,7)
4,9].
las caractersticas del tumor y del paciente asociados con libre de progresin
y la supervivencia global

Anlisis univariado se resumen en las Tablas 3 y 4. El tumor de grado mostr la

asociacin ms fuerte con libre de progresin y la supervivencia
global. Metstasis ganglionar se asoci con la supervivencia global. Estado de la
ciruga R1 se asoci con recurrencia ms rpido, pero no tuvo ningn impacto
en la supervivencia global. Ki67 fue el nico marcador molecular asociado con
libre de progresin y la supervivencia global. Quimioterapia seguida de
radioquimioterapia, pero no la quimioterapia o la radioterapia sola, se asoci
con ambos resultados. En el anlisis multivariado, el grado tumoral se asoci
independientemente con ambos resultados, mientras que la edad> 50 aos y
bajo ndice de proliferacin solamente se asociaron con la supervivencia general
ms corta.
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Tabla 3.

Asociacin entre las caractersticas del tumor y la supervivencia libre de

progresin
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Tabla 4.

Asociacin entre las caractersticas del tumor y la supervivencia global

mutaciones dentro de la va EGFR y otros oncogenes clave

Los resultados de las dos pantallas de mutaciones fueron

concordantes(Tabla S3, disponible en Annals of Oncology en lnea). Veinticuatro
alteraciones se identificaron en 22 muestras. No hay mutaciones activantes
clsicos o de insercin / deleciones en los exones 19 y 20 deEGFR se
encontraron. Un tumor tena una insercin de 3AA en HER2 exn 20 sin
sobreexpresin (puntuacin 1+). La exploracin de aguas abajo del gen KRAS /
BRAF / MEK / ERK mostr ninguna mutacin en los codones 12/13 de KRAS, pero
un carcinoma mioepiteliales tenido una activacin deKRAS mutacin en el
codn 61 (Convenio 182 A> T, p.Q61L). Otros dos tumores (carcinoma exadenoma pleomrfico y MEC) tenan una rara KRASmutacin (c.175G> A,
pA59T), cuyo significado an no est claro. No mutacin activadora clsica
(V600E) se encontr en BRAF, pero una de ADCC tenido un c.1781 A> G
mutacin, pD594G.
La exploracin de aguas abajo de PI3K / Akt / mTOR no
mostr PTEN oAkt2 mutaciones; Sin embargo, cinco muestras haban
mutado PI3K (dos mutaciones activadoras en el exn 1, dos en el exn 9 y una
en el exn 20) y un TP53 mutacin de ganancia de funcin conocida para
activar HRAS y el EGFR / PI3K estuvo presente en dos casos (c .818G> A,
p.R175H) [3].
Activacin HRAS mutaciones que implican codn 61 (Convenio 182 A> T,
p.Q61L, uno de los casos y el Convenio 182 A> G, p.Q61R, seis casos) estaban
presentes en el 7% (7 de 107) de los tumores. Subtipo de anlisis revel que, en
los tumores con un componente mioepiteliales, la tasa de mutacin alcanz
33% (3 de 9) (uno de los tres carcinomas mioepiteliales y dos de seis

carcinomas epiteliales mioepiteliales). En un carcinoma mioepiteliales,

la HRAS mutacin p.Q61R era o bien homocigoto o asociado con la prdida de
heterozigosidad. Activacin de las mutaciones de NRAS estuvieron presentes en
dos casos (codones 12 y 13). Ms abajo, las mutaciones raras en MAP2K4 y 7 se
encontraron [MAP2K4 p.S251N (c.752G> A) en un MEC y MAP2K7 p.R162H
(c.485G> A) en un adenocarcinoma NOS]. Dos tumores tenan ms de una
mutacin; un adenoma carcinoma ex-pleomrfico tena KRAS (c.175G> A,
pA59T) yPI3K (c.1624G> A, p.E542K) mutaciones, mientras que una de ADCC
tenaNRAS (c.34G> C, p.G12R) y un PI3K (c.1633G> A, p.E545K) mutaciones.
La presencia de una mutacin va EGFR no se asoci con la supervivencia libre
de progresin [hazard ratio (HR) = 1,28 (IC del 95%: 0,48 a 3,43), p = 0,62],
pero la tendencia se poda ver con la supervivencia global [HR 2,62 ( IC del
95%: 0,82 a 8,4), P = 0,11] en el anlisis univariado.
No hay tumores tenan mutaciones oncognicas comunes en CTNNB1 /
PDGFRa / SMAD4 / FBXW7 / CMET / STK11.
En resumen, 18 de los 107 (16,8%), los tumores tenan al menos una alteracin
gentica que era exclusivo para KRAS, BRAF, HRAS, NRAS y PI3K.
Seccin anteriorSeccin siguiente

discusin
Presentamos una expresin comprensiva y anlisis mutacional de los objetivos
de tratamiento relevante en el estudio ms grande de TGSM hasta la
fecha. Este estudio retrospectivo evalu 123 pacientes atendidos en tres
hospitales durante un perodo de 19 aos e incluy raras subtipos de tumores, a
menudo agresivos para los cuales han sido publicados sin datos. La expresin
de los objetivos es de acuerdo con la literatura, pero ninguno estaba
relacionado con el pronstico excepto Ki-67.Sobreexpresin de EGFR y la
ausencia de C-KIT han sido reportados como pobres biomarcadores
pronstico [4]; sin embargo, esta discrepancia puede ser explicada por la
poblacin. Ms de un tercio de los pacientes fueron incluidos en los ltimos 3
aos, que puede haber socavado el anlisis de pronstico, especialmente en los
tumores de crecimiento lento.
Slo alteraciones moleculares relacionadas con terapias dirigidas fueron
probados en este estudio. Aunque algunas translocaciones son frecuentes en
MEC t (11; 19) (CRYC1-MAML2) o ADCCs t (6; 9) (MYB-NFIB) y que tienen un
impacto pronstico, todava no son el objetivo de los inhibidores
especficos [5, 6] .
Los receptores de progesterona no se expresaron los receptores de estrgeno y
excepcionalmente tal como se public en otra parte [7]. Estos resultados
sugieren que el tamoxifeno o terapias basadas en inhibidores de la aromatasa
son poco probable que tenga un efecto.
La expresin del receptor de andrgenos tambin es globalmente poco
frecuentes, pero un anlisis subtipo revel que, respectivamente 'Tipo tumores
excretores' tales como SDC y el adenocarcinoma NOS hizo expresar el receptor
en el 66,7% (2 de 3) y 33,3% (4 de 12) de los casos, de acuerdo con los niveles
de expresin reportados en otra parte [8]. Japser et al. inform recientemente el
tratamiento de 10 pacientes con SDC localmente avanzado o metastsico
usando un anti-andrgenos no esteroideos (bicalutamida). La mitad de los
pacientes mostraron una regresin o estabilizacin y la mediana de
supervivencia libre de progresin de 12 meses fue mayor que la reportada
previamente con quimioterapia convencional [9]. Targeting HER2 tambin
puede ser eficaz en estos tumores. De los tres casos SDC ensayadas, uno
mostr una fuerte expresin de HER2 (3+) y uno una insercin potencialmente
la activacin de los tres aminocidos en el exn 20 del HER2. Aunque no
probamos para HER2 amplificacin de genes, varios estudios han confirmado
que, en TGSM, como en el carcinoma de mama, una puntuacin de 3+ en la
inmunoqumica se asocia frecuentemente con HER2 amplificacin [diez -

12]. Estos resultados, junto con los informes de casos COSUDE seleccionados
con HER2 amplificacin tratados con xito con traztuzumab son
alentadores [13]. HER2 tambin se sobreexpresa en 2 de 12 casos de
adenocarcinoma NOS y puede representar una opcin de tratamiento.
C-KIT se sobreexpresa en la mayora de ADCC (34 de 37, 91,9%). En contraste
con los resultados con tumores del estroma gastrointestinal, inhibidores de la
tirosina quinasa tales como imatinib no son activos en ADCCs, probablemente
porque la mayora de los tumores albergan una de tipo salvaje C-KIT, lo que
sugiere que esta va no est conduciendo tumourigenesis [14, 15]. C-kit
tambin se expresa ampliamente en el carcinoma epitelial-mioepitelial y en
menor medida en el carcinoma mioepiteliales (5 de 6, 83,3% y 1 de 6, 16,7%,
respectivamente). Dado que no se sabe si estos tumores tienen una de tipo
salvaje o la protena C activada-KIT, puede ser factible para el tratamiento con
imatinib en funcin de la C-KIT estado mutacional.
EGFR fue el marcador ms ampliamente expresada si la puntuacin de 2+ y 3+
se consideraron positivos. Una sobreexpresin fuerte (puntuacin 3+ utilizando
criterios HER2) se encontr en casi la mitad de MEC y el carcinoma ex-adenoma
pleomrfico (10 de 22, 45,5% y 5 de 12, 41,7%, respectivamente). El significado
de esta sobreexpresin en la gnesis tumoral no est claro. En otros tipos de
tumores, la sobreexpresin de EGFR no se correlacion con la respuesta a los
anticuerpos de EGFR-bloqueo tales como cetuximab [16]. Sin embargo, varios
estudios utilizando cetuximab o lapatinib (un inhibidor dual de EGFR / HER2)
fueron prometedores [10, 17]. Nuestra pantalla mutacional mostr varios
tumores que albergan mutaciones activadoras de KRAS, NRAS, HRAS yMAPK,
por un lado, y PI3K as como PI3K activacin de la mutacin deTP53 en la otra
mano. Las mutaciones en la va EGFR fueron dbilmente asociados con la
supervivencia global (HR 2,62; IC del 95%: 0,82 a 8,4, P = 0,11) en el anlisis
univariado; Sin embargo, los tipos de tumores fueron heterogneos y subgrupos
demasiado pequeo para llevar a cabo anlisis estadsticos
significativos. Informes recientes de Ettl et al. en una gran cohorte de MGST
demostrado que el 15% de los casos tena una polisoma cromosoma 7 (que
contiene el EGFR gen) y menos casos tuvo un EGFRamplificacin. Estas
alteraciones moleculares se asocian con un peor resultado [11, 12]. Tomados en
conjunto, estos datos sugieren un papel de la va EGFR en el crecimiento TGSM.
No hay alteraciones de activacin de EGFR o BRAF se encontraron sugiriendo
baja eficacia con inhibidores de la tirosina quinasa. Tumores raros (2 de 107)
tenan no clsicos KRAS o BRAF mutaciones, lo que implica que el cetuximab
podra ser utilizado (sin investigacin del pre-teraputica). inhibidores de mTOR
como los inhibidores de PI3K everolimus y futuras deben ser probados,
especialmente en ACC en el que a menudo se activa mTOR (5 de 13,
38,5%). Adems, dos casos CAC haba alteraciones moleculares en esta va, uno
que alberga una mutacin activante clsica en el exn 20 de PI3K (p.H1047R) y
el otro un TP53mutacin (p.R175H), que activa el EGFR / va PI3K [3 , 18]. No
hay mutaciones en PTEN se encontraron, pero Ettl et al. informaron que
alrededor del 20% de TGSM tena una delecin en PTEN [11]. Estos tumores
tenan un peor pronstico y pueden ser sensibles a los inhibidores duales
mTOR / PI3K.
El oncogn ms frecuentemente mutado fue HRAS (7% en total, 7 de 107),
especialmente en ricos subtipos de tumores mioepiteliales (3 de 9). Esta nueva
va tumorignico en TGSM es importante en otros tipos de tumores tales como
tumores uroteliales papilares [19]. El impacto de HRAS la activacin de la
respuesta cetuximab no est claramente establecida, pero algunos informes
indican actividad disminuida en casos mutados que provoc la prueba
sistemtica de HRAS en estos tumores. Dos casos tenan dos mutaciones
concomitantes dentro de la va EGFR (KRAS / PI3K yNRAS / PI3K). Si estas dos
mutaciones estn presentes en todas las clulas o representan dos clones
tumorales no se pueden distinguir con la tcnica utilizada.

En conclusin, este informe presenta la mayor serie TGSM con un anlisis

sistemtico de la expresin de los objetivos de tratamiento relevante junto con
un anlisis mutacional de los genes, ya sea tumourigenesis o importante
impulsora de respuesta a este tipo de terapias. Varios subtipos de tumores
frecuentemente sobreexpresados algunos objetivos de terapias dirigidas a
menudo asociados con mutaciones o activacin de los componentes aguas
abajo que confirman la importancia de la va subyacente y sugerir la terapia
conduce tales como inhibidores traztuzumab o andrgenos en SDC o anti-mTOR
en ACC. Sobreexpresin frecuente de EGFR y la activacin de mutaciones
de PI3K / NRAS / HRAS /MAPK en algunos subtipos son argumentos de peso para
orientar esta va.Con este fin, la ausencia de mutaciones
en EGFR / KRAS / BRAF favorece la terapia anti-EGFR basada en anticuerpos en
lugar de inhibidores de tirosina quinasa dirigidos contra EGFR o BRAF. Las
mutaciones activantes son individualmente raras y no se limita a un subtipo
que llev para la prueba molecular individual. La disponibilidad de la
secuenciacin de prxima generacin pronto permitir a las pruebas rpidas de
toda la va para seleccionar la terapia dirigida ptima. Finalmente, en algunos
subtipos especficos, la alta frecuencia de HRAS mutacin puede sugerir la
participacin de la va / catenin Wnt por analoga con tumores uroteliales.
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fondos
Este trabajo fue financiado en parte por el apoyo institucional de Merck Serono
Laboratorio [sin nmero de concesin].
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revelacin

Los autores han declarado no tener ningn conflicto de inters.

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expresiones de gratitud

Los autores desean agradecer a Bart Biesmans, MSc, Departamento de

Gentica Humana, Laboratorio de Oncologa Digestiva, UZ Leuvenat para
obtener ayuda con la pantalla a base de Sequenom, y los Dres Molini, Gedeon,
Verkarre, Thirouard, Finet, Abbey-Toby, Jeandel y Lefevre para proporcionar
algunos de los casos incluidos en el estudio.
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Notas al pie

Estos autores contribuyeron igualmente a este trabajo.

El Autor de 2013. Publicado por la Oxford University Press en nombre de la Sociedad
Europea de Oncologa Mdica. Reservados todos los derechos. Para los permisos, por

Cell Phone Use and Parotid Salivary

Gland Alterations: No Molecular
Evidence
1.
2.

Fabrcio TA de Souza 1,
Jeane F. Correia Silva-1,

3.
4.
5.
6.
7.
8.

Efignia F. Ferreira 2,
Elisa C. Siqueira 1,
Alessandra P. Duarte 1,
Marcus Vincius Gmez 3,
Ricardo S. Gmez 1, y
Carolina C. Gomes 4, *

+Afiliaciones de los autores

1.
2.
3.
4.

1.

Afiliaciones de los autores: Departamentos de 1 Ciruga Oral y Patologa y

2 Social y Preventiva Odontologa, Facultad de Odontologa,
3 Escuela de Medicina; y
4 Departamento de Patologa, Instituto de Ciencias Biolgicas de la Universidad
Federal de Minas Gerais, Belo Horizonte, Brasil
* Correspondiente Autor:
Carolina Gomes, Departamento de Patologa, Instituto de Ciencias Biolgicas de la Universidad
Federal de Minas Gerais, Av. Antnio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil,
CEP 31270 a 901. Telfono: 55-31-3409-2477; Fax: 55-31-3409-2430; Email: carolinacgomes@ufmg.br
Siguiente Seccin

Abstracto
Antecedentes: La asociacin entre el uso de telfonos celulares y el desarrollo de tumores de la
partida es controvertido. Debido a que existe evidencia inequvoca de que el microambiente es
importante para la formacin de tumores, se investig en las glndulas partidas si el uso del
telfono celular altera la expresin de productos de genes relacionados con el estrs celular.
Mtodos: Se utiliz la saliva producida por las glndulas partidas de 62 individuos para evaluar
alteraciones moleculares compatibles con el estrs celular, la comparacin de la saliva de la
glndula expuesto a la radiacin del telfono celular (ipsilateral) a la saliva de lo contrario, glndula
partida no expuesta (contralateral) de cada individuo. Se compar el flujo salival, concentracin
total de protenas, p53, p21, especies reactivas de oxgeno (ROS), y los niveles salivales de glutatin
(GSH), protenas de choque trmico 27 y 70, e IgA entre las partidas ipsilateral y contralateral.
Resultados: No se encontraron diferencias para cualquiera de estos parmetros, incluso cuando la
agrupacin de individuos por perodo de uso de telfonos celulares en el ao o por llamadas
mensuales promedio en minutos.
Conclusin e impacto: Nos proporcionan evidencia molecular que la exposicin de las glndulas
partidas al uso de telfonos celulares no altera el flujo partida salivales, la concentracin de
protenas, o los niveles de protenas de los genes que estn directa o indirectamente afectados por
el estrs celular inducida por el calor. Cncer Epidemiol biomarcadores Anterior; 23 (7); Un mil
cuatrocientos veintiocho hasta treinta y una. 2014AACR.
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Introduccin
No hay consenso sobre la asociacin entre el uso de telfonos celulares y los tipos de tumores de la
partida o de otro tipo (1-4). Los estudios moleculares en pacientes sanos pueden mostrar
alteraciones tempranas en la homeostasis tisular asociado con el uso del telfono celular, y
actualmente no existen tales datos. Se evaluaron los efectos del uso de telfonos celulares en una
serie de fisiolgicos, bioqumicos y parmetros moleculares de la saliva producida por la glndula
partida, comparando en cada individuo la saliva desde el lado en el que l / ella celebra
principalmente el telfono celular (ipsilateral) durante el telfono llamadas con la saliva de la
glndula opuesto (contralateral).
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Materiales y METODOS
El reclutamiento de participantes
Sesenta y dos personas sin enfermedad diagnosticada sistmica o antecedentes de trauma en la
cabeza y el cuello fueron reclutados despus de la aprobacin tica y consentimiento firmado. Los
que predominantemente sostiene el telfono celular a un lado de la cabeza fueron incluidos; los que
reportaron el uso del telfono celular al azar en ambos lados de la cabeza, las personas que tienen
afecciones que causan hiposalivacin o que utilizaron fueron excluidos dispositivos de manos
libres. Los participantes completaron un cuestionario que aborda cuestiones de perfil uso del
telfono celular (Tabla 1).

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Mesa 1.
Caractersticas sociodemogrficas y el perfil de uso del telfono celular de los sujetos
Recogida de saliva
El examen clnico excluido alteraciones clnicas de las partidas. La saliva de ambas partidas de
cada individuo se recogi simultneamente. Flujo salival y la concentracin de protenas totales
fueron obtenidos para los 62 muestras. El nmero de sujetos incluidos en los ensayos vari desde
43 hasta 48, dependiendo de la disponibilidad de saliva.
La coleccin de la saliva era por la maana y los individuos no comer / beber o cepillarse los dientes
una hora antes. La saliva se recogi mediante un colector conectado a un dispositivo de succin de
vaco dental. Flujo salival fue estimulado con cido ctrico al 2% en una coleccin total de 10
minutos. La saliva se almacen como se describe (5), a excepcin de glutatin salival (GSH).
El anlisis molecular de la saliva
Las muestras se codificaron y los experimentos se llevaron a cabo a ciegas. La protena total se
midi usando el mtodo de Bradford. La saliva se proces de acuerdo con el protocolo del fabricante
y la concentracin total de protena se utiliza para corregir los valores para cada muestra. niveles de
p53 y p21 fueron detectados por ELISA (DuoSet; R & D Systems y 900-161; Enzo Life Sciences) y la
protena total se concentr (ProteoExtract-kit; CalBiochem). GSH se midi usando el kit Bioxytech
GSH-400 (Oxis Research), utilizando kits de ELISA HSP70 y HSP27 (EKS-715 y 960-076; Enzo Life
Sciences), e IgA con DKO078 (DiaMetra). La evaluacin de especies reactivas de oxgeno (ROS) se
llev a cabo por el protocolo estndar DCFH-DA.
El anlisis estadstico
Los datos fueron analizados utilizando el programa SPSS (versin 21.0) y GraphPad Prism (versin
5.0). Mtodos estadsticos descriptivos se utilizaron para la evaluacin de los datos. Las pruebas de
Shapiro-Wilk y de Kolmogorov-Smirnov, Wilcoxon, y t se utilizaron pruebas. Un nivel de significacin
de P <0,05 fue utilizado.
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Resultados
La caracterizacin de los sujetos y el perfil de uso de telfonos celulares se enumeran enla Tabla 1.
Se compararon los parmetros de la ipsilateral con los parmetros del lado contralateral.No hubo
diferencia en el flujo salival, concentracin de protena total, o los niveles salivales de p53, p21,
ROS, GSH, HSP70, HSP27, y IgA entre las partidas ipsilateral y contralateral (P> 0,05), como se
ilustra en la Fig. 1.

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Figura 1.
Parmetros salivales partidas de acuerdo con la exposicin al telfono celular (ipsilateral y
contralateral lados). No se observaron diferencias significativas en los valores medios de los
parmetros investigados al comparar ambos lados (P> 0,05).A, el flujo de saliva; B, la concentracin
total de protenas;C, los niveles de p53; D, los niveles de p21; E, DCF-fluorescencia (especies
reactivas de oxgeno); F, los niveles de GSH; Niveles de G, HSP70; H, los niveles de HSP27; y yo,
los niveles de IgA.
No hay diferencias en los parmetros fueron encontrados por las personas que agrupan segn el
uso mensual de telfono celular (ms frente a menos de 200 minutos / mes) o en funcin del perodo
de exposicin en aos (ms frente a menos de 10 aos) (P> 0,05).
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Discusin
Aunque los campos electromagnticos de radiofrecuencia emitidas por los telfonos celulares no
pueden romper los enlaces qumicos en el cuerpo humano, penetran los tejidos expuestos,
produciendo calor (6). La batera del telfono puede contribuir a la calefaccin (7). El aumento ms
significativo temperatura de la superficie durante el uso del telfono celular se produce en la regin
del odo (6), donde se encuentra muy superficial de la glndula partida.
Cultivo de clulas y la experimentacin con animales tienen sus limitaciones en la reproduccin
completamente las condiciones de un microambiente dado el tejido humano.As, los estudios
moleculares en pacientes sanos, naturalmente expuestos a una supuesta fuente "cancergenos"
pueden apuntar a principios de alteraciones en la homeostasis tisular inducida por el uso del telfono
celular. Por supuesto, no es posible obtener muestras de partidas normales humanos de ambas
glndulas partidas. Sin embargo, la formacin de saliva depende del estado funcional de las
glndulas que lo producen (8),haciendo que la saliva una valiosa herramienta de investigacin.
Si hay una relacin entre el uso del telfono celular y el desarrollo de tumores, lo ms probable
surge del estrs celular causada por el calentamiento del tejido. Se compararon los niveles de
protenas especficas que pueden indicar estrs celular y no encontr diferencias entre las partidas
ipsilateral y contralateral.
Sobre la base de nuestros resultados, se concluye que en la poblacin estudiada, el calor inducido
en la regin de las glndulas partidas por el uso del celular no altera el flujo partida glndula
salival, la concentracin de protenas salivales, o los niveles de p53, p21, ROS, GSH, HSP70,
HSP27, y IgA en la saliva producida por estas glndulas.
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Revelacin de posibles conflictos de inters

Se han declarado no tener ningn conflicto de inters potencial.
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Autores de las contribuciones

Concepcin y diseo: TLC de Souza, RS Gmez, CC Gomes
Desarrollo de la metodologa: TLC de Souza, JF Correia-Silva, EF Ferreira, AP Duarte, CC Gomes
Adquisicin de datos (proporcionados animales, pacientes adquiridos y gestionados,
proporcionados instalaciones, etc.): TLC de Souza, EF Ferreira, AP Duarte
Anlisis e interpretacin de datos (por ejemplo, anlisis estadstico, bioestadstica, anlisis
computacional): TLC de Souza, JF Correia-Silva, EF Ferreira, EC Siqueira, RS Gmez, CC Gomes
Redaccin, revisin y / o revisin del manuscrito: TLC de Souza, RS Gmez, CC Gomes
El apoyo administrativo, tcnico o material (es decir, la presentacin de informes o la
organizacin de los datos, la construccin de bases de datos): TLC de Souza, EC Siqueira, MV
Gmez
La supervisin del estudio: TLC de Souza, RS Gmez, CC Gomes
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Proyectos financiados
Este trabajo fue apoyado por becas del Consejo Nacional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico
(CNPq) / Brasil, Fundacin de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) / Brasil, y
L'Oreal Brasil La Mujer y la Ciencia. RS Gmez, EF Ferreira, MV Gmez, y CC Gomes son becarios
de investigacin en el CNPq.
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Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a Pro-Rectora de Pesquisa de la Universidad Federal de Minas Gerais,
Brasil.

Recibido 31 de diciembre 2013.

Revisin recibi 18 de marzo 2014.

Aceptado 24 de marzo 2014.

2014 American Association for Cancer Research.

La expresin de la ciclina dependiente de inhibidor de la

quinasa 2A 16, la protena de tumor 53 y receptor del
factor de crecimiento epidrmico en los carcinomas de
las glndulas salivales no est asociado con infeccin
por el virus oncognico.
Senft E 1, Lemound J 2, Stucki-Koch A 1, Gellrich NC 2, Kreipe H 1, Hussein K 1.
Informacin del autor
Abstracto
Se sabe que la infeccin por el virus del papiloma humano (VPH) puede causar neoplasias de
clulas escamosas en varios sitios, tales como el carcinoma de cuello uterino y carcinoma
escamoso oral. Hay poca informacin sobre la expresin de VPH y sus marcadores predictivos
en los tumores de los mayores y menores glndulas salivales de la cabeza y el cuello. Por lo
tanto, evaluamos las neoplasias de glndulas salivales orales para identificar asociaciones
entre el VPH y el factor de crecimiento epidrmico receptor relacionada con la infeccin
(EGFR), dependiente de ciclina kinasa inhibidor 2A (CDKN2A / p16) y la protena p53 tumoral
(TP53). , Muestras fijadas con formalina embebidos en parafina de tejido de carcinomas de la
glndula salival oral (n = 51) y los tumores benignos (n = 26) se analizaron mediante reaccin
en cadena de la polimerasa anlisis (PCR) para varias especies de VPH, incluyendo los tipos
de alto riesgo 16 y 18 . Evaluacin de EGFR, CDKN2A, TP53 y el citomegalovirus (CMV) se

realiz mediante tcnicas de inmunohistoqumica. Virus de Epstein-Barr (EBV) se evalu por

EBV-RNA codificada por hibridacin in situ. Hemos demostrado que los tumores de las
glndulas salivales no estn asociados con la infeccin por VPH. La expresin de EGFR,
CDKN2A y TP53 puede estar asociada con la patologa tumoral, pero no es inducido por
HPV. CMV y EBV no eran detectables. En contraste con carcinomas de clulas escamosas
orales, las infecciones de HPV, CMV y EBV no estn asociados con lesiones neoplsicas
benignas o malignas de las glndulas salivales.