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D i r e c t o r i o
C o n t e n i d o
Editorial
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15-24
25-35
36-42
43-53
54-60
61-67
68-76
C o n t e n i d o
Evaluacin de compuestos polifenlicos contenidos en cscara de
manzana Red Delicious y su relacin con pigmentos con actividad
antioxidante.
Evaluation of Polyphenolic compounds contained in shell of Red Delicious apple
and its relationship with pigments with antioxidant activity
Yessica Garca-Santos, Laura Silvia Mastachi-Prez,
Ana Luisa Jofre-Garfias y Leandro Rodrigo Gonzlez-Gonzlez
77-82
83-90
Los autores
Gua de Autores
91-98
99-106
E d i t o r i a l
La investigacin como funcin sustantiva de las Universidades, representa una oportunidad nica para
las comunidades acadmicas en el proceso de generacin y profundizacin del conocimiento. Esto en la
Universidad Simn Bolvar ha sido un pilar y prioridad desde sus inicios hace 33 aos.
Nos aproximamos al cierre del Plan de Desarrollo Institucional 2010-2015 y con gusto les comparto que
alcanzaremos muchas de las metas establecidas en materia de investigacin. Esto sin duda no hubiera sido
posible slo con el trabajo de quienes a lo largo de este periodo hemos encabezado la Coordinacin de
Investigacin, sino que es producto de un trabajo conjunto con ustedes, docentes y alumnos, que da con
da muestran su compromiso con la Universidad Simn Bolvar y con el quehacer investigativo.
Investigacin Universitaria Multidisciplinaria se mantiene como el rgano de difusin ms importante de
las investigaciones realizadas por el personal docente de nuestra institucin. Hoy contamos con una revista
slida, que cumple los estndares de calidad requeridos. En su contenido no slo se presenta la generacin
de conocimiento de la universidad, sino que adems, puede verse el trabajo conjunto que los docentes de
nuestra Institucin han realizado con sus pares de otras instituciones para el desarrollo de los proyectos.
Lo anterior ha permitido reforzar la vinculacin y el posicionamiento de nuestra casa de estudios.
En este nmero los lectores podrn encontrar textos provenientes de las tres Facultades de la USB. En el
rea de las Ciencias Econmico Administrativas se encuentra el texto del Mtro. Gonzalo Gallardo sobre los
procesos de internacionalizacin de las empresas bancarias. Con esta publicacin por cuarto ao consecutivo se presenta productividad de esta Facultad con miras a la evaluacin de la LGAC de dicha instancia
ante RENIECYT.
En este nmero la Facultad de Ciencias Humanas presenta dos artculos, el primero analiza la incidencia
de la sociedad civil en la toma de decisiones gubernamentales. El segundo pone sobre la mesa un tema
relevante: el desarrollo de competencias comunicativas en los estudiantes de licenciatura.
La Facultad de Ciencia y Tecnologa, mantiene su repunte en la produccin de artculos. En esta ocasin
da continuidad a trabajos previos en el rea de biologa, qumico farmacutico bilogo, ingeniera en alimentos y biotecnologa. El lector encontrar artculos relacionados con algas, pudricin de cactceas, el
mosquito Anopheles albimanus, el efecto teratognico del Zoapatle y la Ruda, los elementos antioxidantes
de la manzana Red Delicious, elementos biotecnolgicos del Coffea arbica L, entre otros.
Los artculos publicados en la edicin 2014 de nuestra revista, hacen importantes aportaciones y abren la
discusin en torno a las distintas reas del conocimiento. Esperamos sean de utilidad.
Facultad
de
Ciencias
Econmico
Administrativas
Resumen
Durante las ltimas tres dcadas la banca espaola ha registrado un alto y continuo proceso
de crecimiento, transformacin productiva y tecnolgica. Esta transformacin se ha visto
apoyada por una gestin y organizacin empresarial que se moderniza ao tras ao,
incorporando entre sus nuevos paradigmas a la internacionalizacin como seal inequvoca
de bancos que, al buscar acrecentar su competitividad, logran una verdadera insercin en la
economa mundial.
Los profundos cambios por los que ha atravesado Mxico (apertura, liberalizacin y
desregularizacin), aunado a su entonces modesto nivel de bancarizacin, los actuales
mrgenes de intermediacin y la modernizacin de los sistemas de supervisin y regulacin
bancaria, representan atractivas posibilidades para la banca espaola.
As entonces, la presente investigacin recoge, expone y analiza una serie de lineamientos
estratgicos que constituyen verdaderos principios generales que permiten disgregar y
explicar las razones de la presencia de la banca espaola en Mxico, enfatizando el valor
estratgico y econmico de su proceso de internacionalizacin, considerando sus objetivos,
oportunidades, riesgos y cursos de accin para su eficiente expansin en el pas.
Palabras clave: Internacionalizacin, estrategia, empresa bancaria.
Abstract
During the last three decades, the Spanish bank has registered a high and continuous growth
process, production and technological transformation. This transformation has been supported by management and business organization that every year is modernized. They are
incorporating new paradigms to their internationalization as a strong indication of Banks,
I N V E S T I G A C I N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AO 12, N 12, ENERO - DICIEMBRE 2013
F a c u l t a d
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A d m i n i s t r a t i v a s
seeking to increase their competitiveness; they achieve a true integration into the world
economy.
The Deep changes that Mexico has crossed (openness, liberalization, and deregulation),
working together with its modest level of banking, brokerage current margins and modernization of systems banking supervision and regulation, represent important possibilities for
the Spanish banking.
This research reflects, and analyzes a series of strategic guidelines that are truly general
principles for disaggregate, and explain the reasons for the presence of Spanish Banks in
Mexico, emphasizing the strategic and economic value of its internalization process, considering their objectives, opportunities, risks and courses of action for its efficient expansion
in Mexico.
Keywords: Internationalization, strategy, banking enterprise.
Introduccin
Un comportamiento empresarial eficiente ha
de conducir a la supervivencia y expansin de la
actividad bancaria, lo que obligatoriamente implica
la generacin de beneficios. En este sentido, se
tienen que disear estrategias cuyos puntos de
atencin han de centrarse en los siguientes aspectos
fundamentales:
1) Proporcionar al mercado productos y servicios
ms baratos y/o mejores que los suministrados
por los competidores, y
2) Lograr un comportamiento que minimice los
costos de transaccin.
As, se pueden definir las actuaciones competitivas
del banco, cuyos aspectos esenciales vienen
configurados por las ya clsicas tres estrategias
genricas: liderazgo de costos, diferenciacin de
productos y enfoque o segmentacin (Porter, 1987).
Originalmente, el inters de los inversionistas
espaoles en Mxico se concentraba en las actividades
manufactureras, sin embargo, han ido perdiendo
importancia a favor de los servicios, principalmente en
telecomunicaciones, energa y banca. Particularmente,
la banca espaola hace tiempo que ha iniciado una
serie de fusiones a nivel nacional, partiendo de la
premisa de que sus dos principales bancos estn
especializados en determinados nichos y segmentos
y pueden, por lo tanto, competir favorablemente en
el plano de la banca nacional.
Desarrollo
La mejora y fortalecimiento de la ventaja competitiva
de la empresa bancaria espaola se fundamenta
en el acrecentamiento del valor de la estrategia a
seguir, en el perfeccionamiento de sus mecanismos
de preservacin, as como en su adecuacin con las
ventajas comparativas de los pases en que opera.
As entonces, un aumento de la ventaja competitiva
puede ser debido a una mejora de la tecnologa, al
perfeccionamiento de los canales de distribucin, a
la obtencin de economas de escala y de alcance, o
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Conclusin
En el entorno competitivo en que se desenvuelve la
actividad bancaria internacional, caracterizada por el
incremento de los niveles de competencia de todos
los agentes que intervienen como consecuencia de
los procesos de liberacin, innovacin, madurez y
globalizacin, la entidad bancaria est obligada
a dar una respuesta estratgica acorde con las
amenazas y oportunidades del nuevo mercado con
garantas de eficiencia y eficacia que conlleven
alcanzar el xito empresarial.
As entonces, la experiencia nos muestra que en
su camino a su internacionalizacin, la empresa
bancaria espaola se orienta a aquellas estrategias
basadas en economas de escala, bien sea por la
va de fusiones o por el camino de alianzas entre
entidades del pas en que desea participar. En este
panorama, opta por desarrollar de forma intensiva
productos y servicios o buscar su especializacin en
algn determinado segmento del negocio bancario
(banca universal, banca comercial, banca corporativa
o de inversiones). Pero en todos los casos, deber
acudir a mercados, clientes y operaciones en los
que el gran volumen de la actividad se convierte
en ventaja competitiva y, para lo cual, la entidad
debe partir de determinada posicin competitiva
mediante una importante o familiar presencia en
el mercado local y estar respaldada con un tamao
mnimo de referencia y de prestigio de operacin.
La incursin de los dos principales bancos espaoles
en el sistema bancario mexicano se ve favorecida
por su gran potencial de desarrollo y por diversos
componentes, entre los que destacan: la proximidad
de su red tnica (idioma/cultura), la apertura del
mbito econmico, poltico y social en ambos pases,
la experiencia estratgica que conlleva la incursin
internacional de la banca espaola (incremento y/o
fortalecimiento de cuota de mercado, seguimiento
de clientes valiosos, prctica operacional en
otros mercados, etctera), ventajas competitivas
(mejorar y/o adaptar los productos y los sistemas
de logstica, comunicacin y distribucin, as como
la prctica de transformar marcas extranjeras en
regionales, etctera), la cercana de Mxico con el
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Referencias
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Recuperado el 19 de agosto de 2014.
Facultad
de
Ciencias
Humanas
Resumen
Abstract
This paper will discuss the relevance of the expression influencing public policy, which is
frequently used by different social actors to refer to the result of their activities. From the
analysis of a specific case of organized neighbors, we conclude that influence is possible, as
long as the complexity of the public policy/public action is known, and provided that this
target implies a longstanding, organized, and challenging task.
Keywords: Advocacy, public policies, social actors.
Introduccin
Durante los ltimos lustros, una expresin utilizada
indistintamente tanto por actores sociales, como
por actores polticos ha sido la de participacin
ciudadana. En la retrica el vocablo ha producido
tal polisemia, que su significado ha terminado
de vaciarse, dejando de orientar su prctica. Ms
recientemente, principalmente entre personajes
adscritos a las organizaciones de la sociedad civil
(OSC), se ha popularizado la expresin, presentada
como anhelo resultante de su labor diaria, incidir en
polticas pblicas. Nos parece que ambas expresiones
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Desarrollo
Ciclo y etapas de la poltica pblica
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El caso de Iztacalco
En el mes de julio de 2011, en las colonias Agrcola Oriental6 y El Rodeo localizamos un polgono recreativo7
donde haba un par de canchas de futbol rpido, una de basquetbol, un grupo de juegos infantiles, una Casa
de Cultura separada de los juegos infantiles por una entrecalle, y finalmente una bodega del servicio de limpia
(vase figura 3)
En la identificacin de las etapas de la accin pblica encontramos un actor social detonante de este ciclo y
un conjunto de decisiones polticas resultado del conflicto, antes que de la ponderacin tcnica. Un ao antes,
entre marzo y septiembre de 2010, vecinos de ambas colonias se organizaron para detener la construccin de un
conjunto habitacional de ms de mil departamentos en un predio colindante al polgono recreativo (LH,2010).
Sus argumentos contra la construccin fueron la alta densidad de poblacin en el lugar, la agudizacin de
la falta de agua, la saturacin vehicular y la deficiencia en el transporte pblico a las horas pico en la zona,
as como una falta de planeacin del gobierno delegacional no slo para contemplar medidas de mitigacin
urbana, sino tambin y principalmente medidas de mitigacin social8.
Figura 3. Polgono recreativo, colonias colindantes y rea de consulta
Las movilizaciones lograron suspender hasta en dos ocasiones la obra y reducir a menos de 800 departamentos el
nuevo conjunto habitacional, pero el desgaste al que fue sometido el actor social emergente gener una divisin
en dos posiciones, por un lado, el grupo que acept las medidas de mitigacin urbana, que entre otras consider
la propuesta de una nueva cancha de futbol rpido en el polgono recreativo, con recursos que aportara la
6 En procesos electorales para elegir Comits Ciudadanos la colonia Agrcola Oriental se divide en ocho demarcaciones territoriales. Las que
colindan con el polgono, adems de la colonia El Rodeo son Agrcola Oriental II y Agrcola Oriental III. Esta anotacin nos permitir reconocer
de mejor manera el proceso que se describir a continuacin.
7 A esta rea de alrededor de 25 metros de ancho por 207 metros de largo, que aparece en la cartografa la denominaremos indistintamente
polgono recreativo o sencillamente polgono. El polgono est delimitado por las calles Oriente 217, al poniente, Oriente 229, al oriente, Sur
18, al norte, y Sur 20 al Sur.
8 Se referan a las medidas de prevencin, minimizacin, mitigacin y seguridad que exige la Ley Ambiental del Distrito Federal a toda obra que
por su dimensin tenga algn impacto ambiental, entre ellas la construccin de conjuntos habitacionales. (ALDF; 2011, Art. 46 y ss.) Mitigacin
social no existe, pero la expresin haca referencia al dficit de infraestructura cultural, educativa y recreativa de la zona. Por ejemplo, en la editorial del peridico Ciudad Iztacalco mencionaban: Por ejemplo, hay una poblacin adolescente y joven que est mal atendida en las escuelas
secundarias de la zona, que no tiene lugares de esparcimiento, que compartir con las personas avecindadas de su edad, habitantes hacinados
en cubculos de 58 m2, ambientes de violencia y reas de inseguridad, qu medidas se estn tomando al respecto? CI No. 13 marzo 2013.
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14 El legislador con quien se hizo esta gestin fue Adolfo Orive Bellinger, LXII legislatura Federal, 2012-2015. El monto comprometido
fue de un milln y medio de pesos. Al respecto vase CI No. 13, 2013.
Se revis Cmara de Diputados (2012), pero la cantidad no aparece
desglosada.
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Logros
Acuerdos no materializados
Colocar en la agenda de gobierno delegacional el Ampliar el rea hacia uno de sus costados.
inters por el polgono.
La cancha de basquetbol,
Colocar en dos reas legislativas el inters por
La cancha de voleibol
gestionar recursos para esta rea,
El rea recreativa,
Canalizar a la administracin delegacional, para
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efectos de la obra, 7.5 millones de pesos
El rea cvica
La construccin de una cancha de ftbol rpido
con pasto sinttico
La iluminacin.
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Conclusin
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Referencias
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Resumen
El presente artculo resume los resultados de una investigacin de tipo cualitativa que tuvo como
objetivo detectar estrategias para optimizar la enseanza de las competencias comunicativas
en escritura en los estudiantes de licenciaturas en Comunicacin. Se entrevist a un grupo de
7 informantes claves, todos ellos maestros de nivel superior en las reas de Expresin Escrita y/o
Redaccin para realizar un diagnstico de la situacin actual de la enseanza de Competencias
Comunicativas en Escritura de los estudiantes de la licenciatura en Comunicacin de las siguientes
escuelas de nivel superior: Universidad Simn Bolvar, Universidad Anhuac Mxico Norte y la
Escuela de Periodismo Carlos Septin Garca, todas instituciones educativas localizadas en la zona
metropolitana de la Ciudad de Mxico. Los resultados arrojaron datos significativos sobre la
manera en que este representativo sector docente considera el retraso con que llegan sus alumnos
a sus cursos de Redaccin, Expresin Escrita y materias afines. Posteriormente a esa primera fase,
se obtuvieron una serie de propuestas de Estrategias de Enseanza-Aprendizaje para mejorar
las Competencias de Escritura en estudiantiles de nivel superior, mismas que sern parte, en un
futuro, de una propuesta o manual para la optimizacin de Competencias Comunicativas.
Palabras clave: Enseanza, competencias comunicativas, escritura, estrategias.
Abstract
This article summarizes the results of a qualitative research that aimed to identify the strategies
to optimize the teaching of Writing Communication Skills in students on Communication. We met
a group of seven key informants, all senior teachers in areas of Written and / or Writing Expression for a diagnosis of current status of the teaching of Writing Communication Skills of students
in the following schools: Universidad Simon Bolivar, Universidad Anahuac del Norte, and Carlos
Septin Garcia, Journalism school, all institutions are located in Mexico City. The results showed
significant details on how this representative education sector, know about the delay in their
students into their courses of drafting, writing and related matters. In addition, there were some
proposals for Teaching-Learning Strategies on Writing Skills to improve students in higher level,
either in the future will be part of a manual to the optimization of Communication Skills.
Keywords: Education, communication skills, writing, strategies.
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Introduccin
Pocas veces en la matrcula de materias de una
Universidad con marcada especializacin en
la ciencia, tecnologa o investigacin se le da
importancia a cursos que cuiden el desempeo
y acrecentamiento de las habilidades bsicas de
redaccin, investigacin, anlisis, expresin de ideas
y juicios de los alumnos, ya sea de manera escrita u
oral. De hecho en la mayora de las universidades
de Mxico parten de la idea de que ya deben
tener esas habilidades, y por lo tanto, no forman
parte de su currcula profesional. Estos niveles de
experiencia y conocimiento, en el mejor de los casos,
se dejan a lo que los estudiantes recibieron en sus
niveles de educacin secundaria y media superior.
Curiosamente por lo que se ve en los hechos, esta
situacin ocurre tambin en las instituciones cuyas
carreras estn enfocadas en la investigacin.
Estas habilidades resultan indispensables en la
carrera de ciencias de la comunicacin, pues el
conjunto de ese saber hacer, debe entenderse
en el contexto de las Competencias Profesionales
que es un concepto que encierra una profunda
reflexin cuando se comprende que cada profesin,
oficio, o puesto laboral, implica una serie de
caractersticas, conocimientos, y habilidades para
el mejor desempeo de una actividad. Lo que
deriva en una realidad altamente competitiva que
necesita, por un lado, la formacin o demostracin
de competencias y, por el otro, el compromiso de
cada individuo por capacitarse y estar actualizado
en un rea especfica de trabajo.
Por ello, en el caso de quienes estudian una
licenciatura de ciencias de las comunicacin deben
poseer y saber utilizar adecuadamente, las llamadas
Competencias Comunicativas CC1 que fueron
distinguidas desde los aos 60, principalmente por
el etngrafo de la comunicacin Dell Hathaway
Hymes2, antroplogo y lingista estadounidense.
Dentro de estas CC que son: saber escuchar y hablar,
saber leer y escribir correctamente, destaca el hecho
cotidiano y evidente que casi todo profesor detecta
y padece al impartir cualquier curso o materia
de la carrera de comunicacin: sus alumnos no
1 Se utilizar la abreviatura CCa lo largo de la investigacin para
usos prcticos, no en el sentido de Ciencias de la Comunicacin.
2 Cabra apuntar que la etnografa de la comunicacin es el entrecruce de la antropologa y la lingstica, corriente antropolgica que
empieza a desarrollarse mundialmente a mediados de los aos sesenta y a comienzos de los setenta.
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Desarrollo
Competencias Comunicativas
El xito del Proceso de Enseanza Aprendizaje en las
aulas universitarias de la carrera de comunicacin se
basa en gran parte en el apoyo de las Competencias
Comunicativas de la Escritura (CCE) de los estudiantes.
Existe fundamento en sostener las estrechas
relaciones que se hallan entre la escritura y el
aprendizaje de un alumno, de ah la importancia de
que los docentes que imparten materias relacionadas
con Expresin Escrita, Redaccin y afines se
conviertan en un eje fundamental de la educacin
universitaria en esta carrera.
Como lo apunta Mariana Miras, existe un acuerdo en
considerar la reflexin actual acerca de la escritura
como instrumento de aprendizaje (Miras, 2000). Por
su parte, Janet Emig afirma que la escritura representa
un modo nico de aprendizaje no simplemente
valioso, sino simplemente especial- (en Miras, 2000).
Ahora bien, es importante comprender dentro de
este contexto, qu papel tienen en las Competencias
Comunicativas, las relativas a la escritura. El
antecedente ms directo data del siglo XX, en la
dcada de los 60, principalmente de dos aportaciones.
Una, la lingstica de Avram Noam Chomsky, y otra
la concepcin de Dell Hathaway Hymes acerca de las
Competencias Comunicativas.
Chomsky acu el concepto de Competencia
Lingstica para designar los aspectos importantes
de la lengua: el dominio de las reglas gramaticales,
gracias a las cuales un hablante o escritor es capaz
de generar frases gramaticalmente correctas, y el
uso o actuacin de la lengua que permite que
esas frases sean aceptadas por el oyente o lector.
l entenda a la Competencia Lingstica como
una estructura mental implcita y genticamente
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Mtodo
La presente investigacin utiliz metodologa
cualitativa, la cual, como instrumento principal,
emple la entrevista estructurada a Informantes
claves, que se realiz a un grupo representativo
de siete docentes que imparten materias de
Redaccin, Expresin Escrita y afines, en las siguientes
Instituciones de Educacin Superior ubicadas en la
zona metropolitana de la ciudad de Mxico- donde
se imparte la carrera de ciencias de la comunicacin
o periodismo: Universidad Anhuac Mxico Norte,
Universidad Simn Bolvar y la Escuela de Periodismo
Carlos Septin Garca.
El criterio que se utiliz para seleccionar a los
entrevistados fue ubicar y escoger aquellos que eran
titulares de las materias de redaccin, ortografa y
afines, los que tenan ms tiempo en impartir estas
ctedras, y por lo tanto mayor experiencia en el tema.
En el caso de las instituciones, se eligieron por ser
representativas de las que imparten las carreras
de Comunicacin o Periodismo. Tal es el caso de la
Universidad Anhuac Mxico Norte, que imparte la
carrera de comunicacin desde la dcada de los 70;
la Universidad Simn Bolvar con ms de 30 aos
de trayectoria, la mitad de los cuales ha ofrecido
una licenciatura en comunicacin, o bien la Escuela
de Periodismo Calos Septin, que es la primera
institucin educativa de Mxico en impartir estudios
de periodismo desde mayo de 1949.
El rango de edades de los profesores entrevistados
oscila entre los 34 y 51 aos (cinco hombres y dos
mujeres), con grados de estudios que van desde
licenciatura hasta doctorado. El parmetro de
tiempo dedicado a la docencia de estos entrevistados
se sita de los ocho a 18 aos, especialmente de
materias enfocadas, o con nexo, a la Expresin Escrita
y la Redaccin en distintas categoras o grados de
especializacin.
El instrumento de investigacin que se aplic a cada
uno de los integrantes de la muestra objeto de estudio
fue una entrevista cualitativa compuesta por 10
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reactivos, cuya finalidad fue obtener la percepcin, experiencia y conocimiento de los profesores entrevistados
ante el nivel, desempeo y aprendizaje de sus alumnos respecto a las Competencias Comunicativas de Escritura que
poseen, y la manera en que stas afectan o inciden en la enseanza de las materias relacionadas con la Redaccin.
Las preguntas de las entrevistas cualitativas estuvieron encaminadas a:
Valorar la presencia y utilidad de las materias de Redaccin en la carrera de comunicacin.
Establecer, con base en la experiencia y opinin de los entrevistados, la preparacin y perfil profesional
que debe poseer un docente de materias de Redaccin en la carrera de comunicacin.
Conocer el nivel de Competencia Comunicativa de Escritura y los problemas de aprendizaje de estos contenidos
que tienen los estudiantes de la licenciatura de comunicacin que cursan materias de Redaccin, adems de
establecer las estrategias de enseanza ms funcionales y efectivas que han aplicado los docentes para atender
los problemas de aprendizaje de materias de escritura de los estudiantes de la carrera de comunicacin.
Apreciar desde qu nivel de estudios debe ser enseada -adecuadamente- a los estudiantes las CCE, y
establecer si debe ser incrementada o no la Competencia Comunicativa de Escritura de los estudiantes de
la carrera de comunicacin.
Aportar un marco referencial de cmo influye en la calidad de la enseanza de materias de Redaccin el
tipo y origen de las universidades que imparten la carrera de comunicacin.
Despus de valorar lo anterior, procedimos a indagar en entrevistas realizadas estrategias de enseanza
de las CCE.
Resultados
A continuacin presentaremos los resultados divididos en tres grandes reas. El inciso A relativo a entrevistas,
el B de estrategias de enseanza de las CCE, y el C, que es la reflexin general de los resultados.
A) Estado de las Competencias Comunicativas de Escritura
Los puntos medulares de respuestas de las entrevistas aplicadas al grupo de docentes presentan un panorama
del estado de las CCE de los estudiantes de la carrera de comunicacin o periodismo, y puede presentarse de
forma temtica, donde destacaremos los aspectos ms relevantes de cada rubro.
Tabla 1. Importancia de las materias de Redaccin/Expresin Escrita.
PRINCIPALES OPINIONES
- Substanciales Calificativos utilizados: fundamentales, importantes, indispensables y la piedra angular
de las carreras de Comunicacin y Periodismo.
- Coinciden los entrevistados que los contenidos en materias de redaccin se reflejan en los alumnos como
un acervo cada vez ms pobre respecto a su respuesta frente al aprendizaje de estas materias.
-Los docentes explican, entre otras cosas, que no se estn formando tcnicos, sino profesionales de la Comunicacin por lo que una expresin escrita deficiente modifica el contenido y calidad de los mensajes
que estos estudiantes pretenden difundir al momento de redactar.
-Prevalece el criterio de que la enseanza de materias de Redaccin proporciona a los alumnos de Comunicacin y Periodismo las herramientas bsicas para desarrollar cualquier tipo de trabajo, ya sea de investigacin, literario o periodstico.
Fuente: Grupo de docentes seleccionado.
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PRINCIPALES OPINIONES
- Juicios principales: no, nunca sern suficientes, pues el sentir de los entrevistados es que estas asignaturas deberan estar presentes desde los primeros semestres de la carrera hasta los ltimos.
- Argumenta el grupo de especialistas que muchos de los programas de las universidades se limitan slo
a cuestiones estructurales de la oracin (sintaxis) y no al sentido y significado que implican (semntica).
-Los entrevistados exponen: existe un vaco de conocimiento sobre las modificaciones constantes y recomendaciones que realizan las Academias de la Lengua Espaola y Regionales, lo que causa una importante
falta de informacin y estrategias de enseanza.
- Los profesores cuestionados coinciden: mientras muchos otros programas de estudios se modifican y
complementan constantemente, los que se refieren a Redaccin se han quedado detenidos en el tiempo.
Fuente: Grupo de docentes seleccionado.
PRINCIPALES OPINIONES
- Criterio uniforme, y concordante: Este profesor debera contar con un grado mnimo de Maestra, y que
su nivel de licenciatura correspondiera a alguna carrera relativa a Comunicacin, Periodismo o Literatura.
-Los entrevistados refirieron que esos docentes deberan poseer en su currculo profesional haber desempeado (o estar hacindolo) al parejo de su labor de enseanza, un trabajo relativo a sus estudios universitarios, es decir ser algn experto de la comunicacin escrita (periodista, literato, etc.) pero, sobre todo,
que escriba profesionalmente.
-Los profesores manifestaron, entre otras cosas, que no se estn formando tcnicos, sino profesionales de la
Comunicacin por lo que una expresin escrita deficiente modifica el contenido y calidad de los mensajes
que estos estudiantes pretenden difundir al momento de redactar.
-Dentro de este perfil ideal los docentes remataron que quien se dedica a la enseanza de la Escritura en
cualquiera de sus grados debe ser letrado, amante de la lectura, paciente, generoso, tico.
Fuente: Grupo de docentes seleccionado.
PRINCIPALES OPINIONES
- Principales calificativos sobre la importancia de la preparacin profesional de un docente de Redaccin
fueron: mucha, indispensable y fundamental.
- Refirieron los integrantes de la muestra que la preparacin y actualizacin deben ser una constante en
el cotidiano desarrollo de los docentes, quienes deben: adquirir mejores saberes y prcticas, poner en
operacin el modelo educativo de la institucin donde imparten conocimientos, profundizar en sus debilidades para corregirlas, y procurarse una formacin que los enriquezca como seres humanos.
-Explicaron los profesores entrevistados: todo docente se encuentra obligado a actualizarse para poder
dictar ctedra a partir de contenidos especializados y de vanguardia, sobre todo a ltimas fechas, con el
advenimiento de las nuevas tecnologas de la comunicacin y la informacin.
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PRINCIPALES OPINIONES
-Desde el nivel preescolar, especficamente el Knder, y afirmaron los entrevistados que la educacin
tiene que ser continua.
- Hay que repensar la educacin y tendra que tomarse en cuenta la solides con la que van egresando a
los alumnos en cada nivel educativo, es decir, no podemos cubrir las carencias de la primaria a un nivel
licenciatura.
-Las CCE deben ser enseadas desde el nivel bsico, y al llegar a una carrera como Comunicacin tienen
que ser vistas como competencias profesionales para llevar a cabo las actividades de comunicacin y la
capacidad de comprender una lengua.
Fuente: Grupo de docentes seleccionado.
El siguiente rubro de la entrevista realizada toc la parte institucional, para averiguar qu pensaban los
profesores respecto a la Redaccin y si debera ser incrementada en los estudiantes de comunicacin; asimismo,
qu plantearan para lograrlo.
Aqu cada docente propuso acciones significativas por parte de las Instituciones de Educacin Superior donde
se ofrece la carrera de comunicacin o periodismo para incrementar la capacitacin y aprendizaje de las CCE.
Los resultados arrojaron los siguientes datos:
1. Que se exigiera que cualquier profesor, aunque no imparta Redaccin, escriba de manera correcta.
2. Impartir cursos propeduticos antes de iniciar el primer semestre.
3. Crear ms diseo de talleres y laboratorios de experimentacin escrita y la bsqueda de formas didcticas
alternas.
4. Darse un compromiso por parte de los maestros, que entiendan que su materia no est aislada, sino que
va de la mano de todo un proyecto educativo.
5. Modificar el plan de estudios para que se dieran, al menos, tres asignaturas especficamente relacionadas
con redaccin, independientemente de la opcin terminal que eligieran los alumnos.
6. Incrementar el trabajo sustentado en las materias de Redaccin, en los mbitos de: la veracidad, claridad
y la belleza (a partir del desarrollo de un estilo propio lleno de valores artsticos y estticos).
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Discusin
Es importante destacar que lo ms valioso de sta
investigacin fue conocer de viva voz la experiencia
de cada docente entrevistado, el saber cmo ante
un problema comn y recurrente como el bajo nivel
de las CCE de los estudiantes que toman con ellos
materias de Redaccin, Expresin Escrita y afines,
afecta su desempeo.
Cada estrategia aqu descrita revela la pericia
e intuicin de cada docente, para trabajar
adecuadamente con sus grupos en la realizacin de
ejercicios tanto tradicionales como novedosos, que
demuestran que no hay lmite para la creatividad
docente en cuanto a implementar estrategias que
ayudan a hacer ms efectivo el Proceso de Enseanza
Aprendizaje, en este caso dentro de cursos de
Redaccin en sus distintas modalidades.
Conclusin
Tras la investigacin de campo, las respuestas y
reflexiones de lo dicho por el grupo de los siete
profesores de la asignatura de Redaccin entrevistados,
se pueden sacar conclusiones muy concretas:
Por principio de cuentas, que de acuerdo con los
resultados de este estudio, la mayora de los alumnos
que llegan a estudiar la carrera de comunicacin o
periodismo lo hacen con un bajo nivel de sus CCE,
que se refleja en un pobre nivel de redaccin.
Como lo hacen notar varios estudiosos del tema
como Tabn o Perrenoud, las competencias se
deben entender precisamente como procesos
complejos, del conocimiento y capacidad de una
persona en este caso un estudiante de la carrera de
comunicacin o periodismo- para actuar eficazmente
en una tarea especfica como la escritura.
Esta situacin presenta un problema real y constante
que los profesores de materias de Redaccin deben
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Referencias
Argudin, Y. (1994) Aprendiendo a pensar leyendo bien.
Habilidades de la lectura a nivel superior. Mxico:
Universidad Iberoamericana.
Argudin, Y. y Luna, M. (1996). Las habilidades de la lectura
de la docencia universitaria. Mxico: Universidad
Iberoamericana.
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Facultad
de
Ciencia
Tecnologa
mlauragonzalez@ciencias.unam.com
Resumen
Abstract
The results of richness, composition and distribution of species in four particular environments
at Playa Muecos, Veracruz, Mexico are presented, 91 species of benthic algae, 48 Rhodophyta,
15 Phaeophyta, 21 Chlorophyta and 7 Cyanoprokaryota/Cyanobacteria are reported, where,
these last represent new records for this locality and Kyrtuthrix sp. for the Gulf of Mexico.
Our results indicate that the combination of physicochemical factors, determine a great
environmental heterogeneity affecting algae distribution and composition in this locality.
Keywords: Benthic algae, specific environments, diversity, cyanoprokariota
Introduccin
Mxico es uno de los pases ms diversos en trminos
de litorales y en cuanto a superficie marina es el
dcimo segundo pas mejor dotado del mundo; sin
embargo, el conocimiento sobre las comunidades
marinas es an menos destacado que el de las comunidades terrestres (Sarukhn, et. al., 2009).
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Objetivo
Caracterizar los ambientes particulares presentes
en el morro de Playa Muecos, Veracruz, a partir de
la composicin y distribucin de las algas bnticas.
rea de estudio
Playa Muecos, muy cercana a la Playa Boca Andrea, se localiza al norte de Veracruz en el municipio de Palma Sola, se encuentra a 194438.2N
962423.9W (figura 1). Se caracteriza por ser una
playa rocosa-arenosa, con una plataforma de roca
metamrfica alrededor de un Morro, que est
expuesta a la insolacin y al intenso oleaje, con
afloramientos entre la playa y el morro.
Mtodo
Para realizar el anlisis de la heterogeneidad ambiental, se caracterizaron cuatro ambientes particulares contrastantes. Para cada uno se tomaron
parmetros ambientales como salinidad, pH, intensidad y forma del oleaje, exposicin a la insolacin,
temperatura y pendiente. En trminos de sus caractersticas geomorfolgicas y ambientales se definieron
como: canal de corriente, zona de rompiente, poza
de marea y plataforma insolada.
Canal de corriente, es la separacin o fractura
alargada de la plataforma rocosa que por su
posicin permite la circulacin unidireccional
del agua segn el ritmo del oleaje y las mareas.
Zona de Rompiente, es la zona de la plataforma
a la que el oleaje golpea constantemente.
Poza de marea, es una cavidad irregular en
la plataforma rocosa que presenta paredes y
piso, que contiene agua cuyas caractersticas
(temperatura principalmente) cambian debido al aislamiento temporal respecto del mar,
cambios definidos en parte por el tamao y
posicin de la poza.
Plataforma insolada, es un bloque de roca
con superficie horizontal con poco relieve
que puede estar parcial o intermitentemente
sumergida y que por su altura generalmente
es intermareal (figura 2). Adicionalmente estos
ambientes particulares se ubicaron espacialmente en el sitio de estudio, con la finalidad
de lograr una mejor caracterizacin ambiental
(figura 3).
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Figura 2. Ambientes particulares en Muecos, Veracruz: A), C), I) plataforma; B) poza de marea; E) Padina gymnospora y Laurencia sp.en poza
de marea; D y F) canal de corriente; H) rompiente. G) Panorama general.
Figura 3. Esquema del gradiente espacial de ambientes particulares caracterizados en la plataforma de roca metamrfica Morro. Original
Garca-Snchez y Rodrguez-Jurez.
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En estos cuatro ambientes particulares, se colectaron un total de 23 muestras, donde cada una de ellas represent
una unidad de muestreo (um).
El muestreo se realiz en octubre del 2012. Los ejemplares de algas se colectaron manualmente con martillo y
cincel, se preservaron en formol al 4% glicerinado.
Para la determinacin taxonmica se utilizaron claves especializadas entre las que destacan las obras de Taylor
(1960); Littler y Littler (2000) y Dawes y Mathieson (2007). El arreglo sistemtico fue a partir de Guiry y Guiry
(2014). Para cada uno de los ejemplares se tomaron microfotografas en microscopio ptico Olympus BX51, se
utiliz el programa Sigma ScanPro para medir caracteres taxonmicos especficos.
Para conocer la composicin y distribucin de algas en los distintos ambientes particulares se llevaron a cabo anlisis
multivariados. Las similitudes entre los cuatro ambientes se establecieron por medio de un anlisis de clasificacin
jerrquica (cluster), usando las especies presentes como variables. Para generar la matriz de similitud se utiliz el
ndice de similitud Bray-Curtis (1957). Empleando el algoritmo UPGA (Unweighted Pair Group Average) (Clark y
Warwick, 1994). Para conocer la distribucin de especies se utiliz un anlisis de ordenacin nMDS (non-Metric
Multidimensional Scaling), el anlisis se llev a cabo a partir de una matriz de similitud (Kruskal y Wish, 1978),
entre ambientes particulares. El coeficiente de estrs de Kruskal se utiliz para probar la ordenacin obtenida
(Clarke, 1993).Los anlisis se realizaron con el programa Primer V6. La distribucin geogrfica de los reportes
previos se revis en Ortega, et. al., (2001).
Resultados
Riqueza de especies
En el presente trabajo se reportan 91 especies de las cuales 48 son rodofitas, 15 feofitas, 21 clorofitas y 7 especies
de cianoprocariontes Lyngbya sp., Blennothrix sp., Calothrix sp., Scytonematopsis sp., Scytonema sp., Kyrtuthrix
sp. y Rivularia sp. Estas ltimas representan nuevos reportes para la localidad. Respecto a la riqueza por ambiente
particular se detect que el ms diverso fue la plataforma con 40 especies, seguido del canal de corriente, poza
de marea y rompiente con 39, 35 y 28 especies respectivamente (figura 4).
Figura 4. Grfica de la riqueza de especies por ambiente particular.
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En el anlisis de gradiente se observa la distribucin de especies por ambiente particular (figura 6), en este anlisis
se obtuvo un valor de estrs menor a 0.01, que nos indica que si existe un gradiente y no es un comportamiento
azaroso. En la figura 6, se observa una vez ms que en las pozas de marea y el canal de corriente la distribucin
de especies es semejante. Las especies que comparten estos ambientes y que no se comparten en otros son Dictyopteris delicatula, Blennothrix sp. y Laurencia obtusa.
Figura 6. Anlisis de distribucin o de gradiente (MDS) de las especies por ambiente particular.
Las especies comunes a todos los ambientes particulares son: Centroceras clavulatum, Bostrychia tenella y Lyngbya
sp. Especies exclusivas en ambientes determinados, fueron por ejemplo, en rompiente Champia prvula, y en
rompiente Sargassum sp. El ambiente particular que present mayor nmero de especies fue la plataforma (expuesta
a la insolacin) con el 44%, con respecto del total de especies reportadas aqu.
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Discusin
El nmero total de especies obtenidas para la localidad
es alto (91 especies) si lo comparamos con trabajos
previos cercanos a la zona y particularmente en Playa
Muecos (Boca Andrea), donde anteriormente se
haban reportado slo 40 especies (Lozada, 2000); de
stas 7 son cianoprocariontes. Es importante destacar
que pocos trabajos florsticos o ecolgicos toman en
cuenta los cianoprocariontes debido sobre todo a su
problemtica taxonmica (Len-Tejera, et. al., 2009).
De este componente 5 son heterocitosas y son nuevos
reportes para esta localidad, sin embargo consideramos necesario realizar un trabajo taxonmico ms
detallado para determinar la identidad especifica de
estas especies.
De los resultados de composicin y distribucin presentados se destaca que hay diferencias evidentes por
ambiente particular. Es posible explicar tales diferencias con las caractersticas registradas para cada uno
de ellos. Por observaciones hechas in situ se determin
que los factores ms evidentes en los distintos ambientes particulares fueron: sustrato, fluctuacin de
marea, tipo, fuerza e influencia del oleaje, iluminacin
(directa o indirecta), desecacin y orientacin (pendiente de sustrato) y en las pozas de marea sobre todo
profundidad. Cada uno de estos biotipos representa
una combinacin de factores ambientales, cuya heterogeneidad influye en la diversidad de especies. Los
resultados del anlisis de clasificacin y ordenamiento
revelan que los factores que controlaron la distribucin
de macroalgas, tambin definieron ambientes con un
cierto grado de homogeneidad, traducida en similitud
en la composicin especfica observada (figuras 5 y 6).
Particularmente en los ambientes poza de marea y
canal de corriente se registraron adems de las tres
especies comunes, otras como: Chnoospora minima,
Colpomenia sinuosa, Laurencia spp., Chondria sp.
Asteronema breviarticulatum, Centroceras clavulatum, Ceramium spp. Gelidium pusillum, y Gelidiella
acerosa; en su mayora grupo funcional filamentoso
teretado (Steneck y Dethier, 1994); esto puede ser
indicativo de patrones morfolgicos convergentes que
afectan de manera similar la estructura de las comunidades algales, en dos ambientes con caractersticas
distintivas, pero a veces fsicamente comunicados
(figura 3). Adems, en los fondos de las pozas de
marea se observaron grandes extensiones cubiertas
sobre todo por Padina gymnospora, Dictyota spp. y
Chnoospora minima, especies foliosas con una mayor
complejidad estructural que las filamentosas (Steneck
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Conclusin
Se ampla el nmero de registros de algas bnticas
de 40 previamente registradas, a 91 especies para la
localidad de Playa muecos, Veracruz; evidenciando el
escaso estudio de la zona, puesto que en este trabajo
se aument en ms del doble el nmero de especies
reportadas.
Se incluyen como primer registro para esta localidad
las especies Lyngbya sp., Blennothrix sp., Calothrix sp.,
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Agradecimientos
A la Universidad Simn Bolvar por el apoyo otorgado,
a los alumnos de 7 Semestre de Biologa de la Universidad Simn Bolvar por el apoyo en la colecta. A L.A.V.
Mnica Peralta Caballero por la edicin fotogrfica
y a Jos Alberto Martnez Yerena por la ayuda en la
determinacin de ejemplares.
Referencias
Bray, J. y Curtis, J. (1957). An ordination of the upland forest
communities of Southern Wisconsin. En: Ecological
Monographs. (27). pp. 325-349.
Clark, K. y Warwick, R. (1994). Change in Marine Communities:
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UK: Natural Environment Research Council. 144 pp.
Clarke, K.R. (1993). Nonparametric multivariate analyses of
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Dawes, C. y Mathieson A. (2007). The Seaweeds of Florida. USA:
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Dez, B., Bauer, K. y Bergman, B. (2007). Epilithic Cyanobacterial
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En: Applied and Environmental Microbiology. 73. pp.
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Fong, P. y Paul, V. (2011). Coral reef algae. En: Dubinsky y N.
Stambler (eds.). Coral Reefs: An Ecosystem in Transition.
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Gonzlez-Gonzlez, J. (1992). Estudio florstico ecolgico de
ambientes y comunidades algales del litoral rocoso del
Pacifico tropical Mexicano. Tesis doctoral. Facultad de
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Gonzlez, J. (1994). Las algas: sistemtica de un grupo
filofentico. En: Llorente, J. y Luna, I. (comps.)
Taxonoma Biolgica. Mxico: UNAM y Fondo de
Cultura Econmica. pp. 299-331.
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Resumen
En el intestino medio de la hembra del mosquito Anopheles albimanus la sangre se
digiere por una compleja y no bien definida poblacin de enzimas, principalmente serina
proteasas, las cuales participan, adems, en otros procesos como desarrollo y respuesta
inmune. En este trabajo analizamos las actividades proteolticas presentes e inducidas por
alimentacin con sangre en el intestino medio de mosquitos usando zimogramas, ensayos
espectrofotomtricos e inhibidores especficos. En el epitelio intestinal se detectaron
precursores enzimticos que se mantuvieron constantes. Despus de la alimentacin con
sangre se detect sntesis de enzimas proteolticas alcanzando su mximo a las 24h despus
de la alimentacin y stas fueron secretados al contenido intestinal. Serina proteasas con
pesos moleculares aparentes de 97, 43, 32, 29, 27, 25 and 22 kDa fueron observadas tanto en
el epitelio (EE) como en el contenido intestinal (CE). Ensayos cuantitativos con los sustratos
especficos BApNA (tripsina) y SAAPPpNA (quimiotripsina) confirmaron que la actividad
alcanz su mximo a las 24 h ABM, tanto en el EE como en el CE. Las actividades proteolticas
no fueron eliminadas totalmente por los inhibidores especficos de serina proteasas TLCK
(tripsina) y TPCK (quimiotripsina), lo cual tambin ocurre con las tripsinas de otras especies
de insectos. En zimogramas bidimensionales se separ la poblacin de enzimas en varias
manchas, principalmente en la regin de 32 a 25 kDa en un amplio rango de valores de pI, y
se observaron cambios en el nmero y actividad de las especies proteolticas al alimentar los
mosquitos con sangre. Finalmente dos de las manchas de 29 kDa con pI de 5.7 y 5.9, las cuales
reaccionaron con el sustrato especifico BApNA, fueron inequvocamente identificadas como
enzimas tipo tripsina por espectrometra de masas en tndem.
Palabras clave: Mosquito Anopheles; alimentacin con sangre; serina proteasa.
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Abstract
In Anopheles albimanus female mosquito midgut, the blood is digested by a complex, nonwell defined population of enzymes, mainly serine proteases which, in addition participate
in processes as development and immune response. In this work, we analyzed in mosquito
midgut using zymograms, spectrophotometric assays and specific inhibitors, the proteolytic
activities present and induced by a blood meal. Midgut epithelium of sugar meal mosquitoes
showed proteolytic activity with trypsin-like and chymotrypsin-like serine proteases as major
activities. After a bloodmeal (ABM) proteolytic enzymes were synthesized reaching the main
activity at 24 h ABM, and they were secreted in the lumen midgut. Serine-proteases with
apparent molecular masses of 97, 43, 32, 29, 27, 25 and 22 kDa were observed in the epithelium
and a complex population of enzymes were observed in midgut content. Quantitative assays
with the specific substrates BApNA (trypsin) and SAAPPpNA (chymotrypsin) confirmed that
main activity was reached at 24 h ABM both, in midgut epithelium and luminal content.
These activities were only partially inhibited by the specific inhibitors of serine-proteases
TLCK (tripsins) and TPCK (chymotripsin). Bidimensional zymograms allowed resolving the
population of enzymes in several spots mainly at zone of 32 to 25 kDa with broad range
of pI in sugar fed and more spots in blood meal condition. Two of the spots at 29 kDa
with pI of 5.7 and 5.9 reacted with the specific substrate BApNA, indicating that they are
trypsin-like enzymes, which was unequivocally proved by their identification by tandemmass spectrometry.
Keywords: Anopheles mosquito; blood feeding; serine protease.
Introduccin
Los insectos son el grupo ms exitoso y diverso del
phylum Artrpoda con ms de un milln de especies.
Entre ellos se encuentra el orden dptera donde una
de las familias ms importantes es la Culicidae que
contiene a los mosquitos, organismos hematfagos
(capaces de alimentarse con sangre) que incluyen
vectores de enfermedades muy importantes en salud
pblica (WHO 2014). Los mosquitos machos y hembras adquieren su energa alimentndose de nctares
de flores y slo las hembras son hematfagas y ellas
emplean las protenas contenidas en la sangre para la
formacin de sus huevos. La hematofagia hace a los
mosquitos los principales vectores de enfermedades
humanas, ya que en este alimento pueden adquirir
los patgenos al ingerir la sangre de un husped
infectado y transmitirlo durante la siguiente alimentacin con sangre, utilizando la saliva como vehculo.
La sangre ingerida por el mosquito se guarda en el
intestino medio (estmago), formado por una sola
capa de clulas epiteliales, donde se realiza la digestin y absorcin de nutrientes.
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Las serina proteasas tienen un papel crucial durante la digestin de la sangre en el estmago del
mosquito. Aunque las proteasas digestivas son las
ms estudiadas y estn presentes en la mayora
de los insectos, las serina proteasa son funcionalmente diversas, ya que adems de participar en la
digestin, participan en la respuesta inmune innata
de los insectos (Schnitger, Kafatos y Osta, 2007),
detoxificacin de insecticidas, reproduccin y desarrollo embrionario (Gorman y Paskewitz, 2001). Las
serina proteasas se sintetizan como zimgenos que
requieren protelisis en un sitio especfico para su
activacin (Zou, Lopez, Kanost, Evans y Jiang, 2006;
Maia, et. al., 2007). Entre las serina proteasas, las
enzimas tipo tripsina y quimiotripsina son las ms
abundantes. Las tripsinas cortan uniones peptdicas
internas sobre el lado carboxlico de los aminocidos
bsicos arginina y lisina y se inhiben irreversiblemente por N-a-tosil-L-lisina chlorometil cetona (TLCK).
Entre los mosquitos se encuentra el gnero Anopheles,
al cual pertenecen los vectores de la malaria humana
(Eldridge, 2005). En los mosquitos anofelinos la
digestin de la sangre la realizan principalmente
las tripsinas (Clements, 1992; Billingsley y Hecker,
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Objetivo
En este trabajo se describe la actividad proteoltica
en estmagos alimentados con sangre y en el contenido estomacal, de mosquitos hembra de la especie
Anopheles albimanus , utilizando zimografa y ensayos espectrofotomtricos aplicando la combinacin
de sustratos e inhibidores especficos. Se observ que
en los estmagos existe una gran cantidad de serina
proteasas de pesos moleculares desde alrededor de
25 hasta 100kDa. Adems se describe la activacin
de tripsinas y quimiotripsinas y la identificacin de
dos de ellas por espectrometra de masas (MS).
Mtodo
Descripcin de materiales: Mosquitos. En todos los
experimentos se usaron mosquitos hembra adultos
de la especie Anopheles albimanus , de tres a cinco
das despus de la emergencia, cultivados a una
temperatura de 24-25 C con una humedad relativa
del 87% y alimentados con una solucin de azcar
al 10%. Los mosquitos fueron proporcionados por
el insectario del CISEI-INSP, Cuernavaca, Morelos.
Para alimentar con sangre a los mosquitos, stos
se pusieron en ayuno de azcar durante 12 h, y
posteriormente se pusieron sobre un ratn rasurado
durante 1 h. Los estmagos se disectaron a las 0, 3, 6,
12, 24 y 48 h despus de la alimentacin con sangre.
Diseccin de estmagos. Para obtener los estmagos,
los mosquitos se inmovilizaron a -20 C durante 1-2
min y se conservaron en hielo. Usando un microscopio
estereoscpico y con la ayuda de agujas muy delgadas, los mosquitos se sujetaron del trax y dando un
tirn suave desde el cuarto segmento abdominal, se
expuso el tubo digestivo y se disec el intestino medio
(estmago), eliminando los tbulos de Malpighi. Los
estmagos se pusieron inmediatamente en una solucin amortiguadora de fosfatos (PBS) sin inhibidores
de proteasas (IP), y se transfirieron a la solucin adecuada para los distintos protocolos realizados en este
trabajo. De los estmagos de mosquitos alimentados
con sangre se recuper en una pieza el contenido
limitado por la matriz peritrfica, se lavaron en PBS
y se pusieron inmediatamente en el amortiguador
adecuado para electroforesis uni- (1D) (Laemmli,
1970) o bi- dimensional (2D) (OFarrel, 1975) sin IP.
Todo el procedimiento se hizo a 4 C. Las muestras se
procesaron inmediatamente y cuando fue necesario
se conservaron a -75 C hasta su uso.
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Resultados
Los estmagos de mosquitos hembras recin disecados se verificaron al microscopio y se observ su
integridad y la presencia de los tbulos de Malpighi
(figura 1A), los cuales fueron retirados para el anlisis
bioqumico posterior (figura 1A, inserto). Los estma-
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gos alimentados con azcar (control) mostraron una morfologa alargada y rugosa en tanto que los alimentados con sangre se observaron distendidos por la sangre ingerida, la cual se observ en el interior (figura 1 B).
Figura 1.
Morfologa de estmagos de mosquito Anopheles albimanus hembra. Los estmagos de mosquitos alimentados con azcar y con sangre se
disecaron y se eliminaron los tbulos de Malpighi. Panel A.- Estmago de mosquito alimentado con azcar que muestra los tbulos de Malpighi, visto a travs de un microscopio estereoscpico. En el inserto se muestra un estmago sin los tbulos. Panel B.- Estmago de mosquito
alimentado con sangre. El estmago fue disecado 1 h despus de la alimentacin con sangre. (Fotos tomadas a 30X).
Anlisis zimogrfico de estmagos de mosquitos alimentados con azcar y con sangre. El proceso de digestin
en el estmago depende de enzimas proteolticas que no se han caracterizado completamente. Para analizar
las proteasas presentes en los estmagos de hembras de Anopheles albimanus las protenas totales del epitelio
de los estmagos (EE) y el del contenido estomacal (CE) de mosquitos alimentados con azcar y con sangre
se separaron por electroforesis 1D y 2D en geles copolimerizados con gelatina y las proteasas se activaron
(zimogramas con sustrato de gelatina).
Para analizar mediante zimografa 1D la actividad de serina proteasas en el EE se tom el equivalente a 0.015
EE tanto de mosquitos alimentados con azcar (control) como de los obtenidos a las 0, 3, 6, 12, 24 y 48 h despus de una alimentacin con sangre (PAS). De las muestras de CE se analizaron 0.50 equivalentes (50% del
volumen del CE recuperado de un estmago). En todos los tiempos analizados, incluido el control, en el EE se
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observaron de seis a ocho bandas con actividad proteoltica entre 110 a 22 kDa (figura 2A, panel izquierdo); la
intensidad de la mayora de las bandas permaneci constante en tanto que la banda de 25 kDa disminuy su
actividad despus de la alimentacin (0 h) y la aument a partir de las 6 h PAS. Por su parte, en el CE apareci
un mayor nmero de bandas con actividad proteoltica (figura 2A, panel derecho), indicando que el proceso
de digestin es muy complejo. Se observ que en el contenido hay dos picos de actividad, uno a las 6 h PAS
con bandas entre 150-25 kDa y un segundo pico a las 24 h PAS con bandas de 180-25 kDa, observndose mayor
intensidad en las bandas de 32 y 29 kDa.
Las principales actividades proteolticas descritas en el estmago de los mosquitos son serina proteasas tipo
tripsina, por lo que se evalu el efecto de TLCK, inhibidor especfico de sta enzima sobre las actividades
principales de 32 y 29 kDa en el EE y se observ un efecto significativo aunque no total, lo que indic que
estas bandas corresponden a serina proteasas tipo tripsina pero que, como en otros insectos, su estructura
determina que los inhibidores que tienen efecto sobre las enzimas de mamfero no eliminan su actividad, an
a una concentracin tan alta como 10mM (Fig 2B) (Novillo, Castaera, y Ortego, 1999; Terra y Ferreira, 2005).
Figura 2.
Anlisis de la actividad proteoltica del estmago de mosquitos hembras por zimografa en una dimensin. La actividad proteoltica de los
estmagos alimentados con azcar y con sangre se analiz por zimografa en geles copolimerizados con gelatina (PAGE-SDS/G, 10%/0.2%,)
y en ausencia de inhibidores de proteasas. La actividad enzimtica se visualiz en forma de manchas blancas sobre fondo azul. Panel A lado
izquierdo.- Actividad proteoltica presente en el epitelio de 0.015 equivalentes de estmagos libres de sangre (EE) de mosquitos alimentados con azcar (A) y horas posteriores a la alimentacin con sangre (0, 1, 3, 6, 12, 24 y 48 h). Panel A lado derecho.- Actividad de proteasas
correspondiente al contenido estomacal (CE). A la izquierda se muestran los marcadores de peso molecular (kDa). Panel B.- Inhibicin de la
actividad proteoltica del estmago por TLCK. La actividad proteoltica de 0.08 equivalentes de estmago alimentado con azcar se inhibi
parcialmente en presencia de TLCK 10 mM, un inhibidor irreversible especfico de serina proteasas tipo tripsina.
Anlisis zimogrfico bidimensional de estmagos de mosquitos alimentados con azcar y con sangre. Extractos
de EE de mosquitos alimentados con azcar y de 0, 3, 6, 12, 24, 36 y 48 h PAS fueron analizados mediante zimogramas 2D (figura 3), utilizando para el isoelectroenfoque un rango de pH 5-7 debido a que en experimentos
preliminares se observ que las molculas activas de nuestras muestras presentan un rango de pI alrededor de
5.8. En los estmagos de mosquitos alimentados con azcar se observaron 12 manchas principales en la regin
de 29 kDa con un pI entre 5.3 y 6.4; otras dos manchas de 60 kDa con pI de 5.9 y 6.4 y otras dos de alrededor
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de 90 kDa con pI de 5.7 a 5.8 (figura 3A). En los EE de mosquitos alimentados con sangre a las 6 h PAS (figura
3B), la actividad de proteasa observada fue mayor que el control, coincidiendo en la mayora de las manchas,
aumentando la de 60 kDa y apareciendo dos nuevas manchas de 58 y 75 kDa con pI de ~6.0 y 6.3.
A las 24 h PAS se observ claramente mayor actividad de serina proteasas (figura 3C), con ms de 30 manchas
claramente visibles y, notablemente, aumentaron en diferente nmero en tres regiones: Regin I, corresponde
a un grupo discreto de proteasas de alto peso molecular entre 150 y 95 kDa con rango de pI muy amplio entre
4.7 a 6.0; Regin II que incluy proteasas de 75 a 43 kDa con aumento en la intensidad de las dos que aparecieron a 6h PAS de 75 con pI 6.3 y otra de 58 y pI 6.0 y la regin III con numerosas especies con peso molecular
entre 34 y 22 kDa y con un rango de pI muy amplio de 5.0 a 6.5 (figura 3).
Figura 3.
Anlisis zimogrfico y enzimoblot bidimensionales de la actividad proteoltica del estmago de mosquitos hembras. La actividad proteoltica
de estmagos alimentados con azcar y con sangre se analiz por zimografa en geles bidimensionales copolimerizados con gelatina (anfolinas 5-7/3-10 en una relacin 3:1; PAGE-SDS/G, 10%/0.2%). La actividad enzimtica se visualiz en forma de manchas blancas sobre fondo
azul (Paneles.- A, B y C). Las actividades se organizaron en tres grupos: alto peso molecular (regin I, 150-95 kDa), peso medio (regin II, entre
75-43 kDa) (las flechas blancas indican las proteasas inducidas de 75kDa/pI 6.3 y la de 58kDa/pI 6.0) y bajo peso (regin III, entre 34 y 22 kDa).
Paneles A y E.- Estmagos de mosquitos alimentados con azcar. Paneles B y E.- Estmagos de mosquitos alimentados con sangre a las 6 PAS.
Paneles C y F.- Estmagos de mosquitos alimentados con sangre a las 24 h PAS. Paneles D, E y F.- Identificacin de la actividad proteoltica
por enzimoblot, usando el sustrato cromognico BApNA, especfico para tripsinas. Las flechas negras sealan las manchas 1 y 2, con actividad
tipo tripsina que reaccionaron con el sustrato especfico slo en la regin II y que fueron identificados por espectrometra de masas. La escala
en la parte inferior corresponde al gradiente de pH generado en la primera dimensin.
Para probar que las especies proteolticas principales en el estmago de esta especie de mosquito son serina
proteasas tipo tripsina, se hizo el enzimoblot usando el sustrato especfico BApNA y se observaron slo tres
especies una de 32kDa, que se observ slo en mosquitos alimentados con azcar y dos de 29 kDa, con valores
de pI 5.8 y 5.9 que se revelaron como tripsinas cannicas en las tres condiciones y que aumentaron su intensidad con la alimentacin con sangre.
Medicin de las actividades proteolticas tipos tripsina y quimiotripsina usando sustratos especficos y
espectrofotometra.
Para complementar la caracterizacin de las proteasas presentes en el EE (figura 4 A y C) y CE (figura 4 B y D) de
los mosquitos Anopheles albimanus, se midi especficamente la actividad tipo tripsina con el sustrato BApNA y el
inhibidor TLCK (figura 4 A y B) y el anlisis se ampli a caracterizar la actividad tipo quimiotripsina con el sustrato
e inhibidor especficos SAAPPpNA y TPCK (figura 4 C y D). Ambas actividades tuvieron un pico de actividad a las
24 h PAS, tanto en el EE como en el CE, siendo mayor la actividad de ambas en el CE.
Tambin se observ que si bien los inhibidores especficos disminuyeron las actividades entre el 60% y 80%, un
remanente importante de actividad (>25%) persisti en todos los casos, confirmando la diferencia en el efecto
de estos reactivos entre las enzimas de insecto y las de mamferos (figura 4).
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Figura 4.
Cuantificacin de las actividades de tripsina y quimiotripsina en el epitelio y contenido del estmago de mosquitos hembras alimentadas
con azcar y sangre. La actividad de tripsina se midi en un ensayo colorido con el sustrato cromognico especfico BApNA y se midi al
espectrofotmetro a 405 nm, en ausencia (-) y presencia (+) del inhibidor especfico de tripsina (TLCK) en el epitelio intestinal (Panel A) y en
el contenido intestinal (Panel B).
La actividad de quimiotripsina se midi con el sustrato cromognico especfico SAAPPpNA, en ausencia (-) y presencia (+) del inhibidor especfico de quimiotripsina (TPCK) en el epitelio intestinal (Panel C) y en el contenido intestinal (Panel D).
Identificacin de dos enzimas tipo tripsina por espectrometra de masas. Las manchas correspondientes a las dos
enzimas de 29 kDa con pI 5.7 y 5.9 que se identificaron por enzimoblot como tripsinas cannicas, se recuperaron
de un gel 2D (datos no mostrado) y por los datos de carga masa (m/z), obtenidos por espectrometra de masas
en tndem correspondieron a protenas hipotticas deducidas a partir de la base de datos traducida a partir del
genoma del mosquito relacionado An. gambiae que, como se predijo, corresponden a serina proteasas (tabla 1).
Tabla 1.
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Discusin
En el estmago del mosquito el Plasmodium, agente causal de la malaria, se lleva a cabo parte de
su desarrollo indispensable para continuar con su
transmisin. Para que esto ocurra, el parsito debe
enfrentarse a un medio rico en enzimas digestivas
y molculas del sistema inmune y continuar con su
desarrollo, por lo que es muy importante estudiar la
fisiologa del estmago de este insecto. El desarrollo
del parsito coincide con los eventos que se llevan a
cabo en el estmago del mosquito despus de una
alimentacin con sangre, entre los cuales est la produccin y secrecin de serina proteasas involucradas
en la digestin de la sangre, en el desarrollo y en la
respuesta inmune, (Overall y Blobel, 2007).
En anofelinos se han descrito bsicamente dos
tipos de actividad de tripsina, la constitutiva (que
se expresa todo el tiempo) y la inducible (que se
induce por estmulos externos, en este caso la ingestin de sangre) (Billingsley, 1990; Billingsley y
Hecker, 1991; Hrler y Briegel, 1995) sin embargo
no se conoce con exactitud el nmero de enzimas y
genes implicados en la produccin de stas. Aunque
han sido reportadas algunas tripsinas de anofelinos
(Graf, Boehlen y Briegel, 1991), este conocimiento
es incompleto y en este trabajo se describen por
zimografa uni y bidimensional una compleja diversidad de especies con actividad proteoltica. En
el EE se sintetizan y mantienen molculas inactivas
contenidas posiblemente en grnulos de secrecin,
que al ser secretadas al lumen del intestino se incorporan al CE (Czares-Raga, et. al., 2014), donde se
activan dando una mezcla compleja de enzimas que
deben digerir rpida y eficientemente los componentes de la sangre. En este trabajo, con el mtodo
de zimografa se observaron bandas de actividad
que en el epitelio intestinal se mantuvieron casi
constantes; este material posiblemente corresponde
al contenido en grnulos de secrecin, donde la
actividad est inhibida por la asociacin con pro
y pre pptidos (Mller, et. al, 1993; Mller, et. al,
1995), y estas enzimas se activan hasta despus de
su separacin en los procedimientos electroforticos. De hecho, la incubacin de los extractos de
EE antes de su separacin electrofortica, donde
se rompen los grnulos de secrecin, genera una
poblacin compleja de bandas de actividad similar a
la obtenida del CE (dato no mostrado). En estudios
previos se han descrito algunos RNA mensajeros
representativos de serina proteasas presentes en
el estmago del mosquito, pero esta descripcin
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an debe ser completada y relacionarse con las protenas realmente traducidas durante la digestin.
La actividad proteoltica en el CE, en contraste
con lo observado en las actividades obtenidas
cuidadosamente del EE, posee una poblacin compleja de especies proteolticas, las cuales deben
corresponder a las originadas por activacin de las
molculas secretadas a partir de los grnulos de
secrecin durante el proceso digestivo. En el CE se
observaron dos picos de actividad, el primero a las
6 h y el segundo a las 24 h despus de la alimentacin con sangre. Estas dos olas de secrecin de
proteasas, podran corresponder a las actividades
descritas como actividad proteoltica total descrita
como tripsina temprana con proteasas cuyos
RNA mensajeros estn presentes en An. gambiae
antes de la alimentacin con sangre (constitutivas).
Estas enzimas posiblemente se traducen, secretan
y activan despus del estmulo de la alimentacin.
A tiempos ms largos se ha visto que aparecen
mensajeros de proteasas que se sintetizan de novo
durante la digestin de la sangre (inducidas) (Mller, et. al., 1993; Mller, et. al., 1995). Despus de
las 48h PAS la digestin tiende a terminar y el EE
retorna tanto en sus mRNAs como en la presencia de
enzimas, a niveles basales similares a los presentes
en estmagos de mosquitos alimentados con azcar, en preparacin para la siguiente alimentacin
con sangre.
En el estudio usando zimografa en 2D se observ
que las especies proteolticas presentes en el EE son
numerosas y que cambian notablemente despus
de la alimentacin con sangre. Estas observaciones
indican que la expresin de las enzimas proteolticas en el estmago del mosquito estn altamente
reguladas en su expresin y que posiblemente las
enzimas mostradas aqu, que requieren ser caracterizadas bioqumicamente, tengan especificidad para
la destruccin de pptidos generados en la digestin
de las protenas de la sangre, principalmente hemoglobina, la protena ms abundante en esta fuente de
alimentacin. Los productos que inducen la sntesis y
secrecin de enzimas proteolticas en la cascada de
digestin han permanecido elusivos y an es tema
de investigacin (Caroci y Noriega 2003).
En este trabajo se estudi, con ensayos de zimografa y espectrofotomtricos usando los sustratos
especficos para tripsinas y quimiotripsinas (BApNA
y SAAPPpNA, respectivamente) en presencia de
inhibidores especficos de tripsinas (TLCK) y quimio-
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tripsinas (TPCK), la identidad de las actividades mayoritarias del estmago de los mosquitos Anopheles
albimanus hembras y es interesante mencionar
que la actividad proteoltica slo fue parcialmente
inhibida por los inhibidores especficos. Esto coincide con lo reportado para las tripsinas de varios
insectos, las cuales se diferencian de las tripsinas
de mamferos, las cuales son inhibidas totalmente
(Novillo, et. al., 1999; Terra y Ferreira, 2005). En este
trabajo se defini por espectrometra de masas que
dos manchas con actividad proteoltica entre 32 a 25
kDa, y que degradan al sustrato especfico BapNA
(Ohlsson, et. al., 1986; Rosenfeld y Vanderberg,
1998) son enzimas tipo tripsina.
Por otra parte, inhibidores de cistena proteasas
como iodoacetamida y E64 y de metalo proteasas
como O-fenantrolina tuvieron poco efecto en la
actividad proteoltica de extractos de estmagos
de Anopheles albimanus (datos no mostrados),
indicando que la mayor parte de la actividad es de
tipo serina proteasa con poca participacin de otros
tipos de proteasas.
Conclusin
En el estmago del mosquito Anopheles albimanus
durante la alimentacin con sangre ocurre la
expresin y secrecin de una compleja poblacin
de enzimas digestivas, principalmente tripsinas
y quimiotripsinas, que deben realizar su trabajo
en forma secuencial y el papel que juega cada
una de las proteasas en la fisiologa del insecto
debe ser investigado para discriminar las que
participan en la digestin y en otras funciones
como la respuesta inmune, la cual es fundamental
en el rechazo de agentes infecciosos y afectan la
capacidad del mosquito de funcionar como vector
de enfermedades humanas.
Los mosquitos vectores de enfermedades humanas
son de gran importancia en salud pblica, por lo cual
el conocimiento adquirido al estudiar la biologa del
intestino, rgano blanco con el que los microorganismos patgenos tienen contacto al infectar al mosquito, utilizando herramientas moleculares modernas,
ser de la mayor trascendencia para un mejor manejo
de estos insectos y el control de la transmisin de
enfermedades por artrpodos vectores.
52
Agradecimientos
Nuestro agradecimiento al personal del insectario
del CISEI-INSP, Cuernavaca, Morelos. A la BE Leticia
Corts Martnez, IQ Juan Manuel Ceballos y Sr. Juan
Garca Jimnez por su apoyo tcnico en el laboratorio. Este estudio recibi el apoyo de apoyo de la
Direccin de Investigacin de la Universidad Simn
Bolvar y del CONACyT proyecto 180514.
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Resumen
La regin del Valle de Tehuacn-Cuicatln en el estado de Puebla presenta un gran endemismo
de cactceas columnares, una de las especies ms representativas del paisaje es Neobuxbaumia
tetetzo, misma que se ha visto afectada por diversas enfermedades originadas por hongos,
virus y bacterias causando su pudricin y en casos ms graves, la muerte. Actualmente se
desconocen los patgenos que la afectan as como su distribucin y los daos que causan,
por lo tanto, para esta investigacin se realizaron tres salidas de campo en los meses de mayo
de 2013 a enero de 2014, donde se tomaron muestras de tejido de Neobuxbaumia tetetzo
que presentaran sntomas de putrefaccin para su posterior cultivo y aislamiento de al menos
un microrganismo, con el fin de extraer su DNA y secuenciarlo; con ayuda de herramientas
bioinformticas se compar la secuencia en la base de datos del NCBI, identificando a la
secuencia obtenida con un 99% de identidad con Klebsiella oxytoca, como bacteria asociada
a la pudricin en Neobuxbaumia tetetzo.
Palabras clave: Neobuxbaumia tetetzo, pudricin, Klebsiella oxytoca.
Abstract
The Tehuacan-Cuicatlan Valley in the state of Puebla presents a very high value of endemism
richness of columnar cacti, one of the most representative species is Neobuxbaumia tetetzo,
which has been afected by various diseases caused by fungus, viruses and bacterias causing
rotting and in severe cases, death. Patogens affecting this cacti are unknown such as their
distribution and the damage they cause, therefore, for this research three field trips were
conducted in the months of May 2013 to January 2014, where tissue samples of Neobuxbaumia
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tetetzo with symptoms of putrefaction were taken to subsequently cultivate and isolate at
least one associated microorganism in order to extract its DNA and sequencing it; using
bioinformatics tools the sequence was compared in NCBI database, identifying the sequence
obtained with 99% of identity with Klebsiella oxytoca as bacteria associated with rot in
Neobuxbaumia tetetzo.
Keywords: Neobuxbaumia tetetzo, rot, Klebsiella oxytoca.
Introduccin
La riqueza biolgica mexicana es consecuencia de
una compleja serie de interacciones entre factores
biticos y abiticos como la variedad en la topografa, el clima y los suelos del territorio nacional
(Mittermier, 1988). Un punto de biodiversidad
como ningn otro en su tipo es la regin del Valle
de Tehuacn-Cuicatln en los estados de Puebla y
Oaxaca, provincia considerada parte de la regin
xeroftica mexicana. Las comunidades vegetales
del valle son varias y complejas (De La Torre, 2001).
Dentro de estas comunidades vegetales encontramos a la familia cactcea, su importancia radica en
que algunos de los integrantes de esta familia son
refugio y alimento de muchas especies animales
(Alans-Flores y Velazco-Macas, 2008).
Una especie de esta familia es Neobuxbaumia
tetetzo, la cual alcanza alturas superiores a los 10
m, produciendo de dos a cinco ramas por individuo
adulto a partir de un tronco principal. Sus tallos se
caracterizan por ser cilndricos, carecer de hojas
y presentar costillas, sus espinas tienen de 5 a 20
mm de largo y se dirigen hacia abajo (Bravo-Hollis,
1978; Bravo-Hollis y Snchez-Mejorada, 1991).
Crece en laderas de los cerros formando parte
de la vegetacin de las selvas bajas espinosas y
caducifolias (Bravo-Hollis, 1978; Bravo-Hollis y
Snchez-Mejorada, 1991).
En la regin del Valle de Tehuacn-Cuicatln han
encontrado un uso a la estructura vegetativa y
reproductiva de esta cactcea, ya que de ellas se
obtiene alimento, son empleadas para la elaboracin de artesanas, son utilizadas como combustible
o forraje para los animales, de igual manera son
especies muy apreciadas por coleccionistas, por lo
que tienen un valor agregado. Adems los habitantes de la regin obtienen recursos del turismo
que llega a admirar estas especies (Jimnez, 2011).
Objetivo
En la regin de Zapotitln de las Salinas se desconoce qu patgenos afectan a las especies de
plantas dominantes, as como su distribucin y los
daos que causan (De La Torre, 2001), por lo que
el objetivo de esta investigacin es identificar a los
microorganismos asociados con la pudricin de los
cactus Neobuxbaumia tetetzo en el valle de Tehuacn Puebla, por medio de tcnicas moleculares y
herramientas bioinformticas.
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Mtodo
Se realizaron salidas de campo para la identificacin de las cactceas en estado de pudricin Neobuxbaumia
tetetzo, al Valle de Tehuacn-Cuicatln, que es una regin semirida localizada en el sureste de Puebla que
colinda con el estado de Oaxaca, en las coordenadas (18 20 N; 97 28 W). La precipitacin pluvial anual es
de 400 mm, con un promedio de temperatura de 21C (Garca, 1973).
Figura 1. Macrolocalizacin de la localidad, Reserva de la Biosfera Tehuacn-Cuicatln en el estado de Puebla y Oaxaca.
Durante la colecta se llev a cabo una diseccin del cactus para la toma de muestras de tejido blando. Para
realizar los cultivos de los microorganismos asociados, se cort 1cm3 de Neobuxbaumia tetetzo y se coloc
en un tubo de ensaye con agua destilada, preparando diluciones de 10-4 y 10-5, para posteriormente inocular en cajas Petri por triplicado en los medios de cultivo Nutritivo, Papa Dextrosa Agar y MacConkey. Los
cultivos se situaron a temperatura ambiente (27C) por dos das para su incubacin. Obtenindose diferentes
colonias que fueron asiladas y separadas de acuerdo a su morfologa, para identificar al microorganismo
(hongo o bacteria). Una vez que se consiguieron los cultivos puros, se tom una alcuota con ayuda de un
asa bacteriolgica para la extraccin del ADN utilizando el kit UltraClean Tissue & Cells DNA Isolation
Kit de MoBio, se siguieron los pasos como lo indica el manual. Terminada la extraccin se comprob la
integridad del ADN por medio de una electroforesis horizontal en gel de agarosa al 8% usando como
intercalante bromuro de etidio.
Posteriormente, se llev a cabo la amplificacin de un fragmento del 16S ribosomal, utilizando los primers
forward 5`-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 y reverso 5`- AAG GAG GTG ATC CAG CC -3` bajo las siguientes
condiciones: un ciclo inicial 3 min a 95C, seguido de 30 ciclos de 30 seg a 95C, 30 seg a 55 y 60 seg a 72,
y un ciclo final de 5 min a a 72, y 4 C para mantener la reaccin. La visualizacin de los productos de la
reaccin se realiz mediante electroforesis en gel de agarosa 1,2%. Los amplicones se secuenciaron en un
equipo 3130XL Genetic Analyzer de ABI PRISM/HITACHI, en el laboratorio de Bioqumica Molecular de la
Unidad de Biologa y Prototipos (UBIPRO) en la FES-Iztacala. Por ltimo se compar la secuencia obtenida
con los datos registrados en el Centro Nacional para la Informacin de la Biotecnologa (NCBI Gen Bank),
seleccionando la opcin de bsqueda BLAST para la caracterizacin de microorganismos.
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Resultados
Del material vegetal obtenido de Neobuxbaumia tetetzo se desarrollaron crecimientos coloniales, los cuales
se muestran en la figura 2 y la descripcin de las caractersticas morfolgicas se presenta en la tabla 1.
Figura 2. Placas de agar (Agar Nutritivo, PDA y MCK) a dilucin 1x10 -4 con los microorganismos extrados de la pudricin de los individuos
de Neobuxbaumia tetetzo.
Tabla1. Se muestran las caractersticas morfolgicas que presentaron las colonias de bacterias en los diferentes medios de cultivo.
Caracterstica
Colonia AN
Colonia PDA
Colonia MCK
Tamao
2-5 mm
1mm
2mm
Color
Blanca
Blanca
Blanca / Rosa
Forma
Circular
Circular
Circular
Elevacin
Bajo convexa
Bajo convexa
Bajo convexa
Superficie
Lisa
Lisa
Lisa
Borde
Entero
Entero
Entero
Aspecto
Hmeda
Hmeda
Hmeda
Consistencia
Suave
Suave
Suave
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Morfologa Colonial
Posterior a la obtencin de colonias de bacterias se realizaron aislamientos de las mismas para la extraccin del
ADN, de donde se obtuvo material suficiente para realizar la secuenciacin de estos fragmentos de ADN (figura 3).
Figura 3. Electroferograma de un fragmento de la lectura de nucletidos del DNA obtenidos de las bacterias asociadas a los tejidos blandos
de Neobuxbaumia tetetzo.
Mediante un anlisis BLAST de las secuencias obtenidas en este estudio se determin que las bacterias
asociadas a los tejidos blandos de Neobuxbaumia tetetzo muestran un porcentaje de 99% de similitud con
Klebsiella oxytoca (figura 4).
Figura 4. Secuencia de nucletidos del DNA obtenidos de las bacterias asociadas a los tejidos blandos de Neobuxbaumia tetetzo.
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F a c u l t a d
Discusin
Se identificaron bacterias del gnero Klebsiella,
especialmente de Klebsiella oxytoca con un 99%
de identidad en el NCBI GenBank, en las muestras
de tejidos blandos de Neobuxbaumia tetetzo,
esta bacteria es conocida por ser un patgeno
oportunista y hallarse en los sistemas radiculares
de las plantas y en todos los materiales vegetales
en descomposicin (Riechmann, 2004). Adems se
encuentra presente de forma natural en el suelo y
diferentes fuentes de agua (Bartram, 2003).
Es posible que los microorganismos sean transportados por va area, hasta llegar y colarse
entre las fisuras, cortes y otros daos presentes en
ejemplares de Neobuxbaumia tetetzo, causados
por diversos factores, como la accin de algunas
especies de colepteros pertenecientes a la familia
Elateridae, que se introducen en el tejido vegetal
para alimentarse y depositar sus larvas. Es posible
que las larvas contengan a la enterobacteria en su
tracto digestivo, y al causar las heridas en el tejido
vegetal con ayuda de sus grandes mandbulas,
infecten a las cactceas con K. oxytoca. Una vez
dentro, el microorganismo se ver beneficiado por
las condiciones del tejido vegetal vulnerable, rico
en agua y nutrientes, por lo que empezar a hacer uso de esos recursos, provocando la paulatina
pudricin al tejido vegetal.
Se debe considerar que K. oxytoca, probablemente
no sea el nico microorganismo asociado a la pudricin de Neobuxbaumia tetetzo, a pesar de que
sea una bacteria de distribucin universal en el medio ambiente; esto debido a que se sabe ya desde
hace varios aos, que K. oxytoca es un organismo
que se encuentra habitualmente en el humano y
en otras especies animales (Jimnez, 1972).
Otro factor a considerar es la presencia y actividad
humana, ya que en el jardn botnico, la cantidad
de ejemplares de Neobuxbaumia tetetzo afectados
por la pudricin es mayor que los ejemplares en
zonas ms aisladas de la poblacin y del turismo.
Se sabe que esta bacteria habita de manera natural
como comensal en la cavidad bucal, piel o cabello
de las personas, por lo tanto, al transitar por el
lugar, son arrastrados por el aire y esparcidos en
los ejemplares vulnerables. En otros estudios, se
han encontrado microorganismos asociados a la
pudricin de otras especies de Neobuxbaumia, que
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Conclusin
Cuando la estructura vegetativa de la cactcea
Neobuxbaumia tetetzo presenta daos fsicos
causados por colepteros de la familia Elateridae
al depositar sus larvas, stas causan laceraciones
internas con sus grandes mandbulas provocando infecciones debido a que presentan agentes
patgenos para los tejidos vegetales en su tracto
digestivo, como la bacteria Klebsiella oxytoca, que
a su vez, se ver beneficiada por las condiciones del
tejido vegetal vulnerable, rico en agua y nutrientes,
por lo que empezar a hacer uso de esos recursos,
provocando la paulatina pudricin y muerte del
tejido vegetal.
Recomendaciones
En general, las bacterias del gnero Klebsiella
se encuentran en varios materiales vegetales en
descomposicin, sin embargo, se deben realizar
estudios moleculares ms profundos para poder
identificar qu otro tipo de microorganismo participa en la pudricin. Su identificacin podr dar
paso a investigaciones subsecuentes, sobre tcnicas
novedosas en el control de dichos microorganismos
patgenos en Neobuxbaumia tetetzo.
Agradecimientos
Agradecemos a la Unidad de Biotecnologa y
Prototipos de la Facultad de Estudios Superiores
Iztacala y la Facultad de Ciencia y Tecnologa de la
Universidad Simn Bolvar por permitir la realizacin de la presente investigacin, proporcionando
las instalaciones y equipo necesario. A Maurino
Reyes, poblador de la regin Tehuacn-Cuicatln,
por haber brindado apoyo durante los recorridos
realizados para la colecta y a Luis Jimnez Caballero, por la ayuda brindada tanto en la colecta como
en la realizacin de los procedimientos necesarios
para la identificacin del microorganismo.
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Referencias
Alanis-Flores, G.J. y Velazco-Macas, C.G. (2008). Importancia de
las cactceas como recurso natural en el noroeste de
Mxico. En: Ciencia UANL 11. pp. 5-11.
Bartram J., et. al. (eds.). (2003). Heterotrophic plate counts and
drinking-water safety: the significance of HPCs for
water quality and human health. Serie de la OMS
Emerging Issues in Water and Infectious Disease. Reino
Unido, Londres: IWA Publishing.
Bravo-Hollis, H. y Snchez-Mejorada, H. (1991). Las cactceas de
Mxico. Vol. III. . Mxico, D.F.: Universidad Nacional
Autnoma de Mxico. 643 pp.
Campion, R. (2004). Secuenciacin de cidos nucleicos. Instituto
de Biotecnologa, 31.
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Resumen
El tema central de este estudio es la evaluacin in slico de las 18 hidrazincarbotioamidas con
potencial uso antifngico.
Mediante el uso de mtodos computacionales, se obtuvieron las estructuras de mnima
energa aplicando el mtodo MM3 y el mtodo semiemprico PM3 utilizando el programa
Spartan10. Con las geometras optimizadas se realizaron los clculos puntuales de los
descriptores moleculares y al correlacionarlos con la actividad arrojaron informacin tales
como dureza, electronegatividad y LUMO (orbital molecular no ocupado de ms baja
energa) son de los que tuvieron mejor correlacin y por lo tanto, stos deben influir en la
actividad antifngica.
Palabras clave: Descriptores moleculares, Candida, hidrazincarbotioamida.
Abstract
The main subject of this research is the evaluation in silico of the 18- hydrazinecarbothioamide
with potential antifungal application.
With the use of computational methods, structures of minimumenergy were obtained applying
the method MM3 and the semiempiric method PM3, using the Spartan10 program. The precise
calculations were obtained with optimized geometries of the moleculars descriptors and when
they were correlated with the activity they showed results such as hardness, electronegativity
and LUMO (Lowest Unoccupied Molecular Orbital) which were the ones that had the greatest
correlation and therefore these must have influence in antfungal activity.
Keywords: Molecular descriptors, Candida, hydrazinecarbothioamide.
I N V E S T I G A C I N U N I V E R S I T A R I A M U L T I D I S C I P L I N A R I A - AO 13, N 13, ENERO - DICIEMBRE 2014
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Introduccin
Existen ms de 150 especies de Candida, aunque
slo se reconocen 15 patgenas para el hombre;
C. albicans es la ms frecuente (Pappas, 2006).
Candida sp. es una levadura que forma parte de la
microbiota de las superficies mucosas de la cavidad
bucal, mucosa vaginal y el aparato gastrointestinal
en 50% de los individuos sanos, si bien esta cifra se
incrementa en los sujetos que han recibido algn
tipo de atencin mdica. Otras especies de Candida,
saprfitas del medio ambiente (suelo, vegetales),
pueden encontrarse transitoriamente en la piel o
las mucosas (Glick y Siegel, 1999).
El trmino candidiasis invasiva comprende una gran
variedad de padecimientos graves que incluyen:
candidemia, candidiasis diseminada, endocarditis,
meningitis, endoftalmitis (Glick y Siegel, 1999).
La invasin de Candida sp. al torrente sanguneo,
llamada candidemia, sigue siendo la forma de candidiasis invasiva diagnosticada con ms frecuencia.
El programa de vigilancia antimicrobiana SENTRY
2008-2009 report 1,752 casos de candidemia,
44.5% ocurri en pacientes hospitalizados en
unidades de cuidados intensivos y en 55.4% de
pacientes con estancia fuera de este sitio (Pfaller y
Messer, 2011).
Los factores de riesgo ms importantes de candidiasis invasiva son: la prdida de los mecanismos de
defensa del hospedero, los clsicos ejemplos son:
inmunosupresin, prdida de las barreras cutneas
y mucosas (debido a intervenciones quirrgicas,
heridas, intubacin, quimioterapia o catteres
vasculares) y la colonizacin de estas barreras por
la administracin previa de antibiticos de amplio
espectro. Otros factores de riesgo son: enfermedad grave subyacente, nutricin parenteral total,
tratamiento con esteroides y ventilacin mecnica
(Mandell, Bennett y Dolin, 2011).
En general, para el tratamiento de una infeccin por
Candida spp., se utilizan anfotericina y azoles como
frmacos de eleccin, pero estos agentes no satisfacen las necesidades mdicas debido a su toxicidad,
efectos secundarios, vas de administracin limitadas, surgimiento de resistencia a estos frmacos y
aparicin de cepas de baja susceptibilidad (Enoch,
Ludlam y Brown 2006).
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Objetivo
1. Determinar las principales caractersticas de
la estructura electrnica y las propiedades
fisicoqumicas de las 18 hidrazincarbotioamidas mediante un estudio terico utilizando el
mtodo MM3 y el mtodo semiemprico PM3.
2. Proponer un modelo terico basado en diversos descriptores qumico-cunticos que aporten informacin y que contribuyan a entender
la actividad antifngica.
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2i) N-(4-metilfenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2j) N-(3-metilfenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2k) N-(2-metilfenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2l) N-(3-clorofenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2m) N-(2-metoxifenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
Mtodo
Se comenz con la bsqueda y seleccin hemerogrfica de un artculo actual que contenga la sntesis de
compuestos con su actividad farmacolgica.
Posteriormente, partiendo de 18 molculas (Mashooq y Abdul 2014), se obtuvieron las estructuras
de mnima energa mediante el mtodo MM3 y el
mtodo semiemprico PM3 con el programa Spartan10 para cada una de las hidrazincarbotioamidas
(Spartan10, 2011).
2a) N-fenil-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2b) N-ciclohexil-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2c) N-(4-clorofenil)-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2d) N-(4-metoxifenil)-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2n) N-(3-metoxifenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2o) N-(4-acetamidofenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2p) N-(4-etoxifenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2q) N-(4-yodofenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
2r) N-(2-nitrofenil)-2-(piridin-4-il-carbonyl)
hidrazincarbotioamida
Para cada molcula se realiz la bsqueda de la
estructura geomtrica de mnima energa. Es importante mencionar que las hidrazincarbotioamidas consideradas en este trabajo, tienen la misma
estructura genrica y varan solo en R (figura 1).
Figura 1. Estructura genrica de las molculas bajo estudio
2e) N-(2,6-dimetilfenil)-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2f) N-(3-etilfenil)-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2g) N-(4-nitrofenil)-2-(piridin-4-il-carbonil)
hidrazincarbotioamida
2h) N-(4-sulfapirimidinfenil)-2-(piridin-4-ilcarbonil)hidrazincarbotioamida
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Electronegatividad
Descriptores Qumico-Cunticos
Dureza
ELUMO (orbital molecular no ocupado de ms baja energa)
EHOMO (orbital molecular ocupado de ms alta energa)
Polarizabilidad molecular
Dependientes de la estructura
en tercera dimensin
Volumen molecular 3
Ovalidad
rea molecular 2
Lipoflico
a
LogP
Los valores obtenidos para cada uno de los descriptores por el programa son de carcter terico
Resultados y discusin
El primer paso dado para realizar este trabajo de investigacin fue efectuar una bsqueda exhaustiva de artculos de publicacin reciente en los que se informara compuestos con actividad antimicrobiana o antimictico
que cumplieran con datos de actividad cuantitativos.
El artculo que cumpli con lo anterior fue encontrado en Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters del ao
2014 y fue realizado por Mashooq Ahmad Bhat y colaboradores de Arabia Saudita (Mashooq y Abdul, 2014).
En l se informaba la sntesis y la actividad antimictica de una serie de 18 molculas nuevas sobre cepas de
Candida tropicalis ATCC 66029, Candida parapsilosis ATCC 22019, Candida albicans ATCC 66027, Candida sp.
[HVS] 13184, Candida sp. [HVS] 11972, Candida sp. [HVS] 178, Candida sp. [orina] 300, Candida sp. [orina] 12341,
Candida sp. [orina] 12485, Candida sp. [sangre] 12810, de los cuales se decidi trabajar con las cepas donde
los compuestos probados fueron ms activos. (tabla 2)
Tabla 2. Concentracin mnima inhibitoria antimictica in vitro (MIC en mg/mL) de los nuevos compuestos
Compuesto
Candida tropicalis
ATCC 66029
Candida parapsilosis
ATCC 22019
Candida albicans
ATCC 66027
2a
1.6
0.39
0.19
0.78
1.6
2b
>50
>50
>50
>50
>50
2c
0.19
0.19
0.09
0.09
0.19
>50
2d
>50
>50
>50
>50
2e
0.78
0.78
0.78
1.6
6.25
2f
>50
>50
>50
>50
>50
2g
>50
>50
>50
>50
>50
>50
2h
>50
>50
>50
>50
2i
>50
>50
>50
>50
>50
2j
>50
>50
>50
>50
>50
2k
>50
>50
>50
>50
>50
0.19
0.09
0.78
2l
64
1.6
0.78
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2m
>50
>50
>50
>50
>50
2n
>50
>50
>50
>50
>50
1.6
2o
0.19
0.19
0.39
1.6
2p
>50
>50
>50
>50
>50
2q
0.19
0.19
0.39
0.39
0.19
2r
0.19
6.25
1.6
0.39
6.25
1.56
0.25
0.09
Itraconazol
0.19
0.04
: sustituyentes electroatractores
: sustituyentes electrodonadores
Un anlisis simple de relacin estructura-actividad, muestra que los compuestos que presentan una mejor
actividad en las cinco cepas de Candida consideradas son aquellos sustituidos por R = fenil, 4-clorofenil,
2,6-dimetilfenil, 3-Clorofenil, 4-acetamidofenil, 4-yodofenil y 2-nitrofenil (tabla 2). Se observa que el grupo
fenil es una estructura plana y aromtica, por lo tanto es importante para la actividad ya que disminuye
considerablemente en el compuesto 2b que contiene un grupo ciclohexil. Es importante mencionar que los
compuestos que tuvieron mejor actividad estn relacionados con sustituyentes electroatractores o con sustituyentes altamente polarizables (como los halgenos).
A partir de lo anterior se construyeron las 18 estructuras moleculares en tres dimensiones con tal de realizar
su posterior optimizacin geomtrica (minimizacin de energa). Tal tarea fue realizada en dos etapas, primero mediante el mtodo MM3, basado en la Mecnica Molecular, y posteriormente, mediante el mtodo
semiemprico PM3 (figura 2). ste ltimo mtodo (como parte de la paquetera Spartan10) permiti realizar
la estimacin terica de cada uno de los descriptores moleculares (tabla 3).
Figura 2. Estructuras optimizadas de 2a y 2b por mecnica molecular (MM3) y semiemprico (PM3).
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Tabla 3. Valores obtenidos para cada descriptor molecular despus de la optimizacin geomtrica con PM3.
Compuesto
PM3 OPT
GEOMETRICA
kJ/mol
Vol
molecular
3
rea
superficial
2
Ovalidad
HOMO
LUMO
Electronegatividad
Dureza
Polarizabilidad
LogP
(GhoseCrippen)
2a
334.8289
266.77
292.34
1.459
-9.1351
-1.1449
0.19
0.15
61.128
1.5
2b
124.8367
279.82
308.1
1.489
-9.125
-1.0416
0.19
0.15
62.165
1.39
2c
309.2247
279.92
307.33
1.485
-9.1915
-1.2491
0.19
0.15
62.206
2.06
2d
176.2361
294.35
326.63
1.526
-9.0129
-0.9979
0.18
0.15
63.36
1.38
2e
267.734
302.78
330.01
1.513
-9.0903
-0.9406
0.18
0.15
64.012
2.48
2f
278.319
303.37
335.75
1.538
-9.0272
-1.0352
0.18
0.15
64.097
2.41
2g
310.8763
288.63
320.44
1.517
-9.5233
-1.9165
0.21
0.14
62.991
1.54
2h
-54.2185
390.13
423.4
1.64
-9.1993
-1.4908
0.2
0.14
71.202
2.34
2i
294.6489
284.81
312.07
1.491
-9.0968
-1.0995
0.19
0.15
62.59
1.99
2j
296.5036
284.8
312.11
1.491
-9.1128
-1.1128
0.19
0.15
62.589
1.99
2k
300.9923
284.74
310.88
1.485
-9.118
-1.1117
0.19
0.15
62.582
1.99
2l
310.026
279.92
307.45
1.486
-9.2036
-1.2399
0.19
0.15
62.201
2.06
2m
179.585
294
322.07
1.506
-8.9916
-0.9862
0.18
0.15
63.334
1.38
2n
176.511
293.95
321.92
1.506
-9.1076
-1.1374
0.19
0.15
63.338
1.38
2o
157.565
318.92
350.3
1.552
-9.0751
-1.1318
0.19
0.15
65.37
0.41
2p
149.806
312.34
341.25
1.533
-9.0556
-1.0738
0.19
0.15
64.827
1.72
2q
426.974
290.34
317.11
1.496
-9.1746
-1.2381
0.19
0.15
63.053
2.86
2r
327.7
287.81
314.59
1.492
-9.3546
-1.923
0.21
0.14
62.966
1.54
A partir de los valores calculados para cada descriptor molecular dentro de la serie de 18 estructuras moleculares,
se llev a cabo la determinacin de los coeficientes de correlacin cruzada mediante regresin simple entre los
10 descriptores de las siete molculas consideradas por su mayor actividad frente a diversas cepas de Candida
(sombreado verde en la tabla 3). Dicha tarea se llev a cabo con el fin de saber cul de estos descriptores mantena
una mejor correlacin con la actividad. Como ejemplo se puede ver en la tabla 4 que los descriptores de LUMO,
electronegatividad y dureza presentaron una correlacin aceptable con la actividad contra C. parapsilosis ATCC
22019. Mientras que es esperado que factores electrnicos pudieran estar influyendo en la actividad, resulta
interesante que tambin el descriptor dureza mantenga una adecuada correlacin por s solo con la actividad
contra C. albicans ATCC 66027. Por ltimo, es importante comentar que los descriptores polarizabilidad, volumen
y rea molecular tuvieron baja correlacin con la actividad contra Candida sp. (sangre) 12810.
Tabla 4. Matriz de correlacin cruzada entre los descriptores y la actividad de cada cepa de Candida.
Descriptor molecular
C. tropicalis ATCC
66029
C. parapsilosis ATCC
22019
C. albicans ATCC
66027
Candida sp.
(sangre) 12810
Candida sp.
(orina) 12341
0.08521074
0.11624192
0.018762659
-0.67408582
-0.19049586
Vol molecular 3
-0.55295763
-0.05530702
0.231022624
0.72608389
0.26948643
rea superficial 2
-0.54624014
-0.07117772
0.201765817
0.71475692
0.23503627
Ovalidad
-0.53308151
-0.10184216
0.142877634
0.67691049
0.16150567
HOMO
0.17668394
-0.84425832
-0.615674341
0.69080048
-0.26314925
LUMO
0.32586059
-0.91069103
-0.718062501
0.48911905
-0.32589722
Electronegatividad
-0.29949228
0.87366155
0.667526012
-0.43245885
0.26483337
Dureza
0.32242782
-0.99288894
-0.903753207
0.21302454
-0.63042952
Polarizabilidad
-0.56904561
-0.02105447
0.259697615
0.71365563
0.28325916
LogP (Ghose-Crippen)
0.06093887
-0.1331509
-0.063233531
-0.39430014
-0.02901015
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Conclusin
Con base en las geometras de las molculas se encontr que todas stas no presentaron planaridad
con el farmacforo.
Los descriptores que ms influyeron en este estudio fueron dureza, electronegatividad, LUMO y
en menor grado polarizabilidad, volumen y rea
molecular, este estudio podra sentar las bases para
propuestas futuras sobre estructuras tericas con
posibilidad de tener mayor actividad antifngica.
De todos los descriptores que tuvieron mayor correlacin ante dos especies de Candida fue el descriptor
de dureza.
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Resumen
El uso emprico de las plantas medicinales como el Zoapatle (Montanoa tomentosa) y la Ruda
(Ruta graveolens), para solucionar diversos malestares, puede ocasionar efectos secundarios
prevenibles, por tal motivo se realiz el presente trabajo, el cual es la primera fase de una
serie de pruebas para investigar el efecto de las plantas antes mencionadas durante el
desarrollo embrionario. Para tal fin se utiliz como modelo a Drosophyla melanogaster,
la cual se cultiv en tres medios por separado: 1) con Zoapatle, 2) con Ruda y 3) con agua,
este ltimo como control; en cada medio se sembraron 4 parejas y se corri por triplicado.
Se cultivaron durante 3 ciclos de vida (30 das aproximadamente). Al trmino de los cuales
se analizaron las fases de desarrollo a partir del 3er. estadio larvario, pupa y adulto, en
cada caso se analizaron las caractersticas externas y se midi la longitud de los adultos.
Los resultados obtenidos en los cultivos con Zoapatle fueron: adultos con menor longitud y
anormalidades en el desarrollo del abdomen, presentando malformaciones como esbozos
de patas, abdomen estrecho y trax ancho y en algunos casos el abdomen reducido; en
los cultivos con la Ruda los adultos tuvieron una mayor longitud y no se observaron mal
formaciones. Con base en estos resultados concluimos que la Ruda tiene efecto en el tamao
de los adultos y el Zoapatle tiene efecto teratognico que se expresa en el adulto.
Palabras clave: Teratognesis, zoapatle, ruda, Drosophyla.
Abstract
The empirical use of medicinal plants like Zoapatle (Montanoa tomentosa) and Rue (Ruta
graveolens), to solve various ailments, can cause side effects preventable, for this reason the
present work was performed, which is the first phase of a series of tests to investigate the
effect of the plants specified above, during embryonic development. This end was used as a
model Drosophyla melanogaster, which was grow in three separate media: 1) with Zoapatle,
2) Ruda and 3) with water, the latter as control; four couples in each medium were seeded
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and ran in triplicate. Cultured for three life cycles (approximately 30 days). At the end of
which the development phases were analyzed from the 3rd. larva, pupa and adult stage, in
each case the external characteristics were analyzed and the length of adults was measured.
The results obtained in cultures with Zoapatle were shorter and adults with developmental
abnormalities of the abdomen, presenting malformations such as sketches of legs, abdomen
and thorax narrower width and in some cases the reduced abdomen; in cultures with Ruda
adults had a greater length and no malformations were observed. Based on these results we
conclude that the Ruda has an effect on the size of adults and Zoapatle have teratogenic
effect is expressed in.
Keywords: Teratogenesis, zoapatle, rue, Drosophyla.
Introduccin
Desde la poca prehispnica, entre los mexicas,
el Zoapatle (Montanoa tomentosa) o Cihuapatli
(figura 2a), que significa medicina o remedio para
la mujer (cihuatl), ha sido una planta de suma
importancia para resolver problemas relacionados
con el parto (figura 1). Actualmente contina destacando su utilidad para inducirlo, acelerarlo y/ o
facilitarlo; aunque con frecuencia es tambin usado
como abortivo, considerndolo como eficaz pero
peligroso. Se le atribuyen otros usos medicinales
como: aumentar la secrecin de leche y en baos
para despus del parto; contra el reumatismo y la
flojera. En el S. XIX, la Sociedad Mexicana de Historia Natural la report como ocitcica, antitumoral,
diurtica, emenagoga, galactgena, txica y para
tratar las enfermedades de la madre. En el S. XX,
el Instituto Mdico Nacional la describi como
hemosttico uterino, oxitcico, digitlico, vasoconstrictor, bradicardia y para la paresia intestinal.
Varios estudios del Zoapatle han revelado la presencia de compuestos con actividad farmacolgica
relacionada. As, se han aislado los cidos kaurenoico y monogynico, que ejercen una actividad
de control en la fertilidad de mamferos y el cido
angeloylgrandiflrico, el cual se ha visto que inhibe
la contraccin espontnea del tero de cobayos, a
la concentracin de 1.2 mg/ml. Se le han atribuido
varios tipos de lactonas sesquiterpnicas, aisladas de
las hojas de esta planta y se ha observado actividad
citotxica. (Atlas de Plantas Medicinales, 2009).
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Mtodo
Se elaboraron infusiones acuosas de Zoapatle
(Montanoa tomentosa) y Ruda (Ruta graveolens)
al 20%, las cuales fueron utilizadas, de manera
separada, para la preparacin de los medios de cultivo
elaborados de acuerdo con Ramos et. al., (1993).
a)
b)
Resultados
Objetivo
Determinar el efecto teratognico de las plantas
medicinales Zoapatle (Montanoa tomentosa)
y Ruda (Ruta graveolens) en el modelo de la
mosca Drosophyla melanogaster en las fases
de desarrollo correspondientes al 3er. estadio
larvario, pupa y adulto.
70
Se analiz la morfologa externa de las fases de desarrollo de Drosophyla melanogaster iniciando con
el 3er. estadio larvario, en el cual se observaron los
12 segmentos rodeados por una cutcula y en borde
anterior un anillo con pequeos ganchos quitinosos,
en la cabeza se observan los ganchos bucales oscuros
y se distingui la actividad larvaria por los surcos y
canales de la misma; estas caractersticas no tuvieron
diferencias en los tres tratamientos (figura 3).
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Figura 3. Tercer estadio larvario de Drosophyla melanogaster. a. Esquema de referencia, b. Control, c. Ruda y d. Zoapatle (60x).
En fase de pupa, que es la ltima muda larvaria y en la que se lleva a cabo la metamorfosis, se observ la organizacin de las estructuras del adulto a partir de los discos imagales. Se hidrolizaron las glndulas salivales,
el intestino, los cuerpos grasos y los msculos, se form el trax por la combinacin de los discos imagales.
Comparando los tres tratamientos no se observ diferencias entre ellos (figura. 4).
Figura 4. Pupa de Drosophyla melanogaster. a. Esquema de referencia, b. Control, c. Ruda y d. Zoapatle (60x).
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En el anlisis del adulto se identificaron las nervaduras de las alas, sin embargo para los tres tratamientos no
se observ ninguna diferencia (figura. 5)
Figura 5. Comparacin de las nervaduras del ala de Drosophyla melanogaster. a. Esquema de referencia, b. Control, c. Ruda y d. Zoapatle (200x).
En el adulto si se encontraron diferencias morfolgicas entre los tratamientos. En el cultivo elaborado con Zoapatle
se observ el abdomen reducido en longitud y ancho, en ejemplares por separado, en comparacin con el control
y la Ruda (figura 6 y 7a.), adems de prolongaciones en el ltimo segmento del mismo (figura 7 a y b).
Figura 6. Adulto de Drosophyla melanogaster. a. Esquema de referencia, b. Control, c. Ruda y d. Zoapatle (60x).
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Figura 7. Malformaciones en el abdomen de Drosophyla melanogaster cultivadas con Zoapatle a. (60x), b. acercamiento de a (200x) y c
abdomen reducido (60x).
En los adultos de Drosophyla melanogaster, cultivados con Ruda, la longitud del cuerpo del fue mayor (3.5 0.5),
que en el control (2.75 0.4) y el de Zoapatle (1.75 0.2) (figura 8).
Figura 8. Comparacin del tamao de los adultos con a. Ruda, b Control y c. Zoapatle.
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Discusin
Los agentes teratognicos que provocan alteraciones durante el desarrollo embrionario se conocen desde la
tragedia ocasionada por la talidomida, que en 1962 provoc el nacimiento de 10 000 nios malformados en
Alemania, Japn y otros pases. La droga sedativa ejerce sus efectos nocivos entre los das 35 y 50 del embarazo,
pero no produce ningn efecto en el embrin en desarrollo antes o despus de este periodo (Rodrguez, 1995),
lo cual nos indica que es importante identificar el momento en el cual acta cada droga.
Hoy da se conocen muchos factores que alteran el desarrollo y producen nios malformados. (figura 9).
Figura 9. Orgenes de las malformaciones embrionarias.
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Conclusin
El Zoapatle y la Ruda, plantas de amplio uso entre
la poblacin, favorecen cambios durante el desarrollo embrionario de la Drosophila melanogaster;
teniendo un mayor efecto el Zoapatle que provoca
malformaciones a nivel del abdomen, en tanto
que la Ruda provoc un aumento en la longitud
del adulto. Por lo anterior se concluye que dichas
plantas tienen una elevada probabilidad de ocasionar efectos teratognicos en diversas especies
incluyendo al ser humano.
Recomendaciones
Por los resultados anteriormente descritos se continuar la investigacin utilizando como modelo al
ratn Mus msculus para la determinacin del efecto del Zoapatle y Ruda en el ciclo reproductor, en
la ovognesis y en su desarrollo embrionario.
Referencias
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Resumen
El presente trabajo analiza el contenido de compuestos polifenlicos, presentes en la
cscara de manzana Red Delicious y analiza su relacin en la pigmentacin fitoqumica y
con el contenido de azcares; esta bioactividad es importante para explicar el contenido
fitoqumico, actividad antioxidante. Se analizaron los extractos acuosos de cscara de
manzana, comparando y evaluando su color con el contenido fenlico total, flavonoides,
capacidad antioxidante total y cido Urslico presentes.
Palabras clave: Antioxidantes, Red delicious, pigmentacin.
Abstract
This document analyzes the content of polyphenolic compounds present in the peel of
Red Delicious apple and analyzes their relationship in pigment and phytochemical content
of sugars, this bioactivity is important to explain the phytochemical content, antioxidant
activity. Aqueous extracts of apple peel were analyzed by comparing and evaluating their
color with the total phenolic content, flavonoids, total antioxidant capacity and Ursolic acid
present.
Keywords: Antioxidant, Red delicious, pigmentation.
Introduccin
Las manzanas son una buena fuente de compuestos polifenlicos, su contenido total representa
entre el 0.01 a 1 % de su peso fresco, las principales estructuras incluyen cido hidroxicinmico,
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Adems de los polifenoles, la cscara de manzana contiene una considerable cantidad de triterpenoides
lipoflicos, que se concentran en la capa de cera cuticular, entre los ms abundantes, se encuentra el cido
Urslico (ver figura 2) (He & Liu, 2007).
Figura 2. Estructuras orgnica del triterpenoide Acido Urslico.
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Objetivo
Evaluar los compuestos polifenlicos, capacidad
antioxidante equivalente total en los diferentes
periodos de maduracin y pigmentacin fitoqumica
de la cscara de manzana Red delicious y examinar
esta relacin con el contenido de estos compuestos
polifenlicos y su color.
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Mtodo
Para evaluar los momentos de maduracin y pigmentacin fitoqumica se emple la metodologa
de Yam y Papadakis (2004), en coordenadas CIE-Lab,
que reporta la luminosidad (L*) en porcentaje, con
sus dos componentes cromticas, (con rango de -120
a +120) la componente de verde a rojo (a*) y componente de azul a amarillo (b*) de tres grupos de
manzana que representan los equivalentes estados
de maduracin ensayados, asimismo en apoyo a su
visualizacin en el modelo RGB (Red, Green, Blue)
y su respuesta a diferentes extractos de cscara de
manzana para la Capacidad Antioxidante Equivalente a la vitamina C (VCEAC), contenido de fenoles
totales (TPC), contenido total de flavonoides (TFC),
contenido de antocianina total (TAC).
Preparacin del material orgnico: Es necesario pesar y secar la cscara de manzana a una temperatura
de 30-35 C, durante 24 horas, esto con la finalidad
de retirar el porcentaje de humedad presente en
la cscara (aprox. 85%), para poder tener as el
peso real de la materia prima a utilizar y despus
triturarlas.
Extraccin: Para la extraccin por infusin de agua
caliente, se pesaron 100 mg de las cscaras previamente secas por cada 10 mL de agua y se colocaron
en tubos de centrifuga, los cuales fueron llevados
a Bao Mara a 85 C con agitacin cada 5 minutos
durante 1 hora para permitir que se llevara a cabo
la infusin. Las muestras preparadas por triplicado
y centrifugadas por 5 minutos a 1000 rpm. Filtrado
el sobrenadante que ser utilizado en las pruebas
siguientes. Cada extracto fue almacenado en refrigeracin hasta el momento en que fue utilizado.
A cada extracto acuoso de cscara de manzana se
analiz la Capacidad Antioxidante Equivalente a
vitamina C (VCEAC) utilizando el ensayo con ABTS+,
(Ayse, Beraat y Samim, 2009) (Nenadis, Wang, Tsimodou y Zhang, 2004). El contenido de fenoles totales
(TPC) por el mtodo de Folin Ciocalteu (Kumar,
Kumar y Om, 2008) (Ya-Qin, Y., Xing-Qian y L.DongHong, 2008). El contenido total de flavonoides (TFC)
con el ensayo colorimtrico de cloruro de aluminio
(Kumar, 2008) y el contenido total de antocianinas
(TAC) por el mtodo del pH diferencial (Lee, Durst y
Wrolstad, 2005) adems el contenido de cido urslico por HPLC, a 220 nm, a un flujo de 1 ml/min, con
fases metanol: agua: THF en una proporcin 94:5:1
a pH 5 y una columna C18 fase reversa.
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Resultados y discusin
Uno de los principales registros en este trabajo es la seleccin de los estados de madurez de la manzana Red
Delicious por su grado de madurez y color, de acuerdo a esto, fueron seleccionadas por grupos equivalentes
a las mostradas en la figura 3.
Figura 3. Pigmentacin de la manzana Red Delicious en sus diferentes etapas de maduracin postcosecha y los respectivos valores que
corresponden al modelo de color Cie-Lab. y modelo RGB.
L : 7
R :48
a* : 26
G: 0
b* : 10
B :12
L : 25
R :105
a* : 47
G: 0
b* :34
B :17
L : 31
R :127
a* : 54
G: 2
b* :46
B: 0
Se desarrolla un aumento de la luminosidad de la misma manera que los valores hacia el rojo y el amarillo
en las manzanas de madurez menor, estos acompaan en esta secuencia de incremento solo a la capacidad
antioxidante total.
80
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Tabla 1 Resultados de la evaluacin de capacidad antioxidantes, compuestos polifenlicos y cido Urslico presentes en tres grupos diferentes de maduracin y pigmentacin fitoqumica de la cscara de manzana.
Color Cie-Lab
Color Cie-Lab
Color Cie-Lab
La*b*(7,26,10)
La*b*(25,47,34)
La*b*(31,54,46)
1100+500
1723+225
2221+221
621.3+1.4
425.8+0.5
250.8+1.2
55+11.4
32+9.7
22+8.5
TAC
400+23.2
321+12.5
102+10.5
Acido Urslico
0.842+0.0052
0.478+0.0014
0.238+0.0025
VCEAC
(mg Vit C eq/100g de peso seco)
TPC
(mg glico eq/100g de peso seco)
TFC
catequina
Eso puede deberse que adems de los compuestos analizados el incremento de cido ascrbico sea un factor
importante en la madurez del fruto.
En el anlisis total de compuestos polifenlicos, sucede lo contario el incremento de estos constituyentes es
ms significativo, de acuerdo a lo mostrado en la tabla 1, el contenido de fenoles, flavonoides, antocianinas
y cido urslico, se elevan conforme la madurez del fruto se alcanza.
Conclusin
En los ltimos aos se han desarrollado numerosas investigaciones para identificar las propiedades funcionales
de los alimentos, y en particular es notable el caso de los compuestos con capacidad antioxidante. En este
sentido, la cscara de manzana que es un subproducto de la industria alimentaria, puede ser aprovechada
para la elaboracin de infusiones con capacidad antioxidante y especifico contenido de estos, de aqu se
desprende la importancia de entender que el cido urslico un triterpeno se encuentre en los estadios ms
maduros del fruto y los compuestos similares al ctrico en los primeros momentos de la madurez del mismo.
El objetivo del presente trabajo fue analizar la capacidad antioxidante de la cscara de manzana, en trminos de las determinaciones de Flavonoides totales, Fenoles totales, Antocianinas monomricas y capacidad
antioxidante por reduccin del catin radical del ABTS. Adicionalmente la vinculacin del color posterior a
su secado, puede dar respuestas al oscurecimiento del mismo y por ello recomendar que la cscara seca de
manzana en tonalidades maduras es la mejor opcin de consumo.
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82
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Resumen
El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un mtodo de cultivo in vitro para la obtencin
de callos embriognicos de Coffea arabica L. Para ello, se indujo la proliferacin de callo en
explantes de hoja inmadura por medio de 2 tipos de citocinina, Kinetina y 2-isopentiladenina,
adems de evaluar el tratamiento de luz ultravioleta en stos. Se obtuvieron callos de tipo
embriognico en los cultivos de Coffea arabica L. con Kinetina como regulador de crecimiento
vegetal, 15 das antes de lo esperado. El tratamiento con luz UV favoreci la obtencin de
callos en un mayor nmero de explantes, generando clulas con caractersticas morfolgicas
del tipo embriognico.
Palabras clave: Coffea arabica, cultivo in vitro, induccin para la formacin de callos.
Abstract
The purpose of this study was to develop a method of in vitro culture for the production of
embryogenic callus Coffea arabica L. Callus proliferation using 2 types of cytokinin, kinetin
and 2-isopentiladenina was induced in immature leaf explants, in addition to evaluating
UV treatment. Embryogenic callus type were obtained in cultures of Coffea arabica L. with
Kinetin as plant growth regulator, 15 days before expected. UV light treatment favored callus
obtaining a larger number of explants producing cells with embryogenic morphology type.
Keywords: Coffea arabica, in vitro culture, induction of callus.
Introduccin
El caf es la segunda bebida en preferencias de
consumo a nivel mundial, slo despus del agua.
Para la produccin de caf de altura se requiere de
granos de la especie Coffea arabica (L.). Para la pro-
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Objetivo
Mtodo
84
Desarrollar un mtodo de cultivo in vitro para la obtencin de callos embriognicos de Coffea arabica L.
Material vegetal
Las plantas de Coffea arabica L. fueron amablemente donadas por la Dra. en C. Mirna Surez Quiroz
del Instituto Tecnolgico de Veracruz, Ver. Se aclimataron 4 semanas en condiciones de invernadero
antes de iniciar los cultivos in vitro.
Medios de cultivos
Para la induccin de callos in vitro se us el medio
MS (Murashige y Skoog, 1965) a la mitad de su
concentracin de sales (Van Boxtel y Berthouly,
1996), suplementado con las vitaminas del medio
B5 (Gamborg, et. al., 1968), 100 mg/L de casena hidrolizada, 400 mg/L de extracto de malta, 0.5 mg/L
del cido 2,4-diclorofenoxiactico, 1.5 mg/L de cido
indolbutrico, 30 g/L de sacarosa, 2 g/L de phytagel,
pH 5.6. Para la proliferacin celular se usaron 2
fuentes diferentes de citocininas, Kinetina (Kin) y
2-isopentiladenina (2ip), ambas en niveles de 2 mg/L.
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Estudio histolgico
En el anlisis histolgico se utilizaron segmentos de hojas con callos nodulares en diferentes estados de
incubacin. Los explantes fueron preparados en fresco en agua destilada. Para la observacin directa de
la morfologa de las clulas, los callos se disectaron de los explantes en el microscopio estereoscpico
Iroscope Zeiss y se disgregaron con la ayuda de navaja de bistur. Las fotografas fueron tomadas en el
microscopio ptico de campo claro Carl Zeiss, con los objetivos seco dbil y fuerte, un ocular con reglilla
milimtrica y con una cmara fotogrfica digital Cyber shot de Sony de 7.2 megapixeles, con zoom ptico
de 3X, modelo DSC-W80.
Resultados
Se logr la aclimatacin de las plantas de Coffea arabica L. a condiciones de invernadero. Durante las cuatro
semanas que permanecieron en ste, las plantas de caf generaran hojas nuevas libres de contaminacin con
las que se pudieron establecer los cultivos in vitro iniciales.
Se present una oxidacin generalizada en los explantes durante las etapas iniciales del cultivo. Por ello, se
us ascorbato de sodio al 1% (p/v) como agente antioxidante al momento de la obtencin de los explantes,
durante su diseccin. Con ello se logr detener parcialmente tal efecto, adicional al tratamiento con luz UV.
Los explantes reaccionaron muy rpido, pues a los 7 das de cultivo se observ un curvamiento indicativo de
que el medio ejerca efecto en ellos, con ambos tratamientos, es decir, con Kin y 2ip (figura 1A). Asimismo,
en este punto se empezaron a formar los callos en los explantes, evidenciado slo por el microscopio (figura
1B). Se obtuvieron callos nodulares en la zona de corte en los explantes cultivados en el medio con Kin y 2ip
despus de 15 das de incubacin (figura 1C). Esta velocidad contrasta con los 30 das informados en la bibliografa (Van Boxtel y Berthouly, 1996). Con el regulador Kin los callos fueron de consistencia disgregable en
comparacin con los compactos obtenidos con 2ip y la morfologa de clulas, por ende, fue diferente.
A los 15 das de incubacin, los explantes generaban callo o se oxidaban en la zona de corte, observndose
clorticos. Asimismo, se observ que la luz aceler la oxidacin de los callos incipientes, principalmente cuando
fueron expuestos a ella al momento de la revisin de los cultivos. Por lo anterior, se subcultivaron los callos
junto con sus explantes a medio E, segn Van Boxtel y Berthouly (1996), para la formacin de embriones
somticos. De esta manera, se logr que la mitad o hasta una tercera parte de los explantes continuaran su
proliferacin celular y se seleccionaran los callos embriognicos.
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Figura 1. Etapa de induccin para la formacin de callos durante el cultivo in vitro de Coffea arabica L. Despus de 7 das de incubacin
es evidente la reaccin de los explantes a los componentes del medio (A). En este periodo empiezan a proliferar los callos en la zona de
corte (flecha en B), imagen amplificada 110X. Despus de 15 das de incubacin se observaron a simple vista los callos (C) de tipo nodular
(D), imagen amplificada 110X. Barra indicadora en B y D 20 mm.
De los tratamientos que se hicieron con los dos reguladores de crecimiento de tipo citocinina para promover
la proliferacin celular, result que en apariencia con Kin se obtuvieron ms explantes con callo con respecto
a 2ip (figura 2). Sin embargo, las diferencias observadas en cuanto al nmero de callos obtenidos en los explantes fueron estadsticamente no significativas, puesto que P>F > a (tabla 1). A pesar de ello, se presentaron
diferencias cualitativas, pues los callos generados con Kin fueron ms disgregables que con 2ip. Considerando
estas diferencias, los experimentos posteriores se desarrollaron con Kin.
Figura 2. Nmero de explantes que reaccionaron con los tratamientos de Kin y 2ip (barras de color azul), comparados con el total de explantes sembrados, barras rojas.
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Tabla 1. Anlisis de varianza de los resultados obtenidos con los reguladores de crecimiento vegetal de tipo citocinina.
FV
GL
SC
CM
P>F
Tratamientos
787.609
787.609
0.962
0.654
Error
13
10642.590
818.661
Total
14
11430.199
87
F a c u l t a d
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Tabla 2. Anlisis de varianza de los resultados obtenidos con los tratamientos con luz UV y sin luz UV aplicados a las hojas de las que se
derivaron los explantes.
FV
GL
SC
CM
P>F
Tratamientos
12,239.465
12,239.465
17.837
0.001
Error
18
12,351.520
686.196
Total
19
24,590.984
88
F a c u l t a d
Discusin
Se indujo la formacin de callos en hojas de Coffea
arabica L. por el uso de Kin y 2ip para promover la
proliferacin celular y tratamiento con luz ultravioleta con el objetivo de desarrollar un mtodo
de cultivo in vitro para la obtencin de callos
embriognicos en la planta. La desigualdad en las
actividades de los reguladores de crecimiento en
nuestro trabajo vers en el hecho de que Kin es
una citocinina sinttica, con un tiempo de permanencia mayor y por tanto una accin distinta en los
cultivos in vitro comparada con 2ip, la cual es una
citocinina natural (Salisbury y Ross, 2007). Es posible
que la diferencia observada en la consistencia de
los callos sea atribuible a esta naturaleza sinttica
de Kin, y por ende, a los tipos celulares observados
de morfologa embriognica (fig. 4). No se tienen
informes acerca del impacto que tienen a nivel
molecular estas sustancias en las clulas vegetales,
si son preferidas unas en relacin con las otras.
nicamente se les atribuye su efecto al tiempo de
permanencia en las clulas de las plantas. Por lo
que este es un tema que amerita ser investigado.
A pesar de que las diferencias encontradas entre
los dos reguladores de crecimiento vegetal no tuvieron significancia estadstica, los autores usamos
y recomendamos emplear Kin en Coffea arbica L.
debido al tipo de callo que produce, el cual contiene mayor proporcin de clulas embriognicas.
Otra diferencia importante entre nuestros resultados y los publicados por Van Boxtel y Berthouly
(1996), estriba en el menor tiempo necesario para
la obtencin de callos en los explantes, 15 das
contra 30. Esta disparidad la atribuimos a que en el
presente trabajo se utilizaron hojas inmaduras y no
completamente desarrolladas. Las hojas inmaduras
presentan mayor nmero de clulas poco diferenciadas capaces de reaccionar a los componentes
del medio de cultivo y redireccionar su ruta celular,
de tal forma que se promueve la generacin de un
tejido diferente.
Las diferencias observadas en el desarrollo de callos
con y sin luz UV (figura 3), posiblemente se deban
al estrs al que fueron sometidas las hojas de las
plantas de caf, y para sobrevivir, desarrollaron
mayor proporcin de callos con respecto a aquellos explantes que no tuvieron el tratamiento. Al
parecer la luz UV tiene una funcin semejante a
la de un inductor. Por otro lado, sabemos que es
promotora de cambios en el material gentico, por
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Conclusin
Se obtuvieron callos de tipo embriognico en los
cultivos de Coffea arabica L. con Kin como regulador
de crecimiento vegetal, 15 das antes de lo esperado.
El tratamiento con luz UV favoreci la obtencin de
callos en un mayor nmero de explantes, generando clulas con caractersticas morfolgicas del tipo
embriognico.
Referencias
Barbn, R., Jimnez, E., Capote, A., Gil, V. y Ocaa, B. (2011).
Transformacin gentica de Cof fea arabica L .
c v. C aturra rojo m e diante la ele c tro p o ra ci n
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Biotecnologa Vegetal. Vol. 11, No. 1. pp. 33 42.
Fuentes-Cerda, C.F.J., Montoforte-Gonzlez, M., Mndez-Zeel,
M., Rojas-Herrera, R. y Loyola-Vargas, V.M. (2001).
Modification of the embryogenic response of Coffea
arabica L. by the nitrogen source. En: Biotechnol. Lett.
23. pp.1341-1343.
Gamborg, O.L., Miller, R.A. y Ojima, K. (1968). Nutrient
requirements of suspension cultures of soybean root
cells. En: Exp. Cell. Res. 50. pp.151-157.
Gatica, A. M., Arrieta, G. y Espinoza, A. M. (2007). Comparison
of three in vitro protocols for directed somatic
embryogenesis ans plant regeneration of Coffea
arabica L. cvs. Caturra and Catua. En: Agronoma
Costarricense 31(1). pp. 85-94.
Gutirrez-Pulido, H. y De la Vara-Salazar, R. (2008). Anlisis y
diseo de experimentos. 2a. ed. Mxico: McGraw Hill.
545 pp.
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L o s
a u t o r e s
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Abraham Faustino-Vega
abraham.faustino@gmail.com
Licenciado en qumico farmacutico bilogo por la Facultad de Qumica de la UNAM institucin por la que obtuvo el
grado de Doctor en Ciencias con la tesis Diseo farmacutico, desarrollo y caractersticas reolgicas de un sistema coloidal que contiene closantel. Cuenta con una amplia participacin en congresos nacionales e internacionales del rea
de tecnologa farmacutica y qumica. Docente a nivel licenciatura en la Universidad Nacional Autnoma de Mxico
y la Universidad Simn Bolvar
Fernando Garca-Gil-de Muoz
ferngg_69@yahoo.com.mx
Bilogo egresado de la Universidad Simn Bolvar. Obtuvo el grado de Doctor en Ciencias en la especialidad de Patologa
Experimental del CINVESTAV-IPN en el 2007. Fue Coordinador Acadmico de la Maestra en Ciencias Ambientales de la
USB y profesor titular de las asignaturas de Qumica General, Qumica Orgnica y Biotecnologa del ADN. Sus lneas de
investigacin estn orientadas a describir la respuesta inmune en insectos de importancia industrial y en los insectos
vectores de enfermedades, empleando herramientas de biologa molecular con el propsito de manipular haciendo
ms eficientes los mecanismos de defensa de estos organismos ante la presencia de microorganismos agresores.
Yessica Garca-Santos
bambina92@live.com
Estudiante de noveno semestre de la Licenciatura en Ingeniera en Alimentos por la Universidad Simn Bolvar. Se
encuentra realizando su tesis para obtencin del ttulo de licenciatura.
Gonzalo Gallardo-Garca
ggallardo@cnbv.gob.mx
Licenciado en Administracin de Empresas por la Universidad Nacional Autnoma de Mxico (UNAM), Titulado con
Mencin Honorifica, egresado de la Maestra en Supervisin Bancaria por la Universidad La Salle, cuenta con estudios
de Doctorado en Direccin de la Empresa por la Universidad Complutense de Madrid (UCM). Profesor en la Universidad Simn Bolvar en la Licenciatura en Administracin de Empresas, Licenciatura en Contadura y en la Maestra
en Ciencias Administrativas. En la actualidad se desempea profesionalmente en la Comisin Nacional Bancaria y de
Valores (CNBV). En este organismo pblico, destaca su participacin en la actualizacin de los procesos de inspeccin
y vigilancia que este organismo realiza al Sistema Financiero Mexicano
Laura Mara Garca-Snchez
laumaloretta@hotmail.com
Estudiante de 7 semestre de la licenciatura en Biologa en la Facultad de Ciencia y Tecnologa USB. Ha participado
en el VII Congreso Nacional de Ficologa, en la Jornada de Investigaciones de la Facultad de Ciencia y Tecnologa USB,
ganadora del concurso de carteles del noveno Congreso Estudiantil de Ciencia y Tecnologa 2014. Imparti una conferencia de la Diversidad de Algas Bnticas de Playa Muecos, Veracruz, Mxico a alumnos y profesores de la materia
optativa ficologa del semestre 2014-I, de la carrera de Biologa, Facultad de Ciencias, UNAM.
Margarita Ivonne Garrido-Gutirrez
maguigarrido@yahoo.com
Doctora en Ciencias por parte de la Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas del IPN, con especializacin en Fisiologa y
biologa molecular en plantas. Tiene una posdoctorado en el Centro de Investigacin y Estudios Avanzados del IPN. Su
experiencia laboral es en docencia en instituciones como la UNAM, IPN y USB desde 1997. Ha impartido 7 ponencias
en diversos congresos y encuentros, algunos de ellos publicados como trabajos in extenso. Cuenta con numerosos cursos impartidos y tomados. Ha sido sinodal y asesor interno en el desarrollo de tesis de licenciatura de varios alumnos.
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Eugenio Pablo-Leyva
epablo@bolivar.usb.mx
Licenciado en Periodismo egresado de la Escuela Carlos Septin Garca. Tiene 29 aos de trayectoria periodstica
profesional como reportero, articulista, y columnista especializado. Es catedrtico en Periodismo, Organizacin de Empresas de Comunicacin, Periodismo en Lnea, Gneros Periodsticos Informativos, de Opinin, y materias de Expresin
Oral y Escrita; Lectura y Redaccin Profesional, Redaccin Periodstica, Redaccin e Investigacin Documental, Redaccin Cientfica, Anlisis del Discurso, Anlisis Literario, Comunicacin en la Industria de la Hospitalidad, Habilidades
de Comunicacin, Comunicacin Integral, Evolucin del Pensamiento de la Comunicacin, Opinin e Imagen Pblica,
Comunicacin y Cultura en la era de la Informacin, y Seminario de Tesis en la Escuela de Periodismo Carlos Septin
Garca, la Universidad Simn Bolvar (USB) y la Universidad Anhuac del Norte. Eugenio Pablo Leyva curs y se titul
con el grado de Maestra en Docencia Universitaria en la Universidad Simn Bolvar.
Alma Pamela Palacios-Castillo
pame_k-i@hotmail.com
Estudiante de sexto semestre de la Licenciatura en Qumico Farmacutico Bilogo por la Universidad Simn Bolvar.
Jos Guillermo Rodrguez-Jurez
disgorge_butcher86@hotmail.com
Estudiante de 7 semestre de la licenciatura en Biologa en la Facultad de Ciencia y Tecnologa de la USB. Ha participado
en el VII Congreso Nacional de Ficologa, en la Jornada de Investigaciones de la Facultad de Ciencia y Tecnologa USB,
ganador del concurso de carteles del noveno Congreso Estudiantil de Ciencia y Tecnologa 2014. Imparti una conferencia de la Diversidad de Algas Bnticas de Playa Muecos, Veracruz, Mxico a alumnos y profesores de la materia
optativa ficologa del semestre 2014-I, de la carrera de Biologa, Facultad de Ciencias, UNAM.
Rosa Salgado-Brito
dirqfb@bolivar.usb.mx
Doctora en Ciencias en el rea de Biotecnologa y Bioingeniera. Maestra en Ciencias con especialidad en Microbiologa.
Qumica Bacteriloga y Parasicloga egresada de la Escuela de Ciencias Biolgicas del Instituto Politcnico Nacional.
Socia y directora de investigacin y desarrollo en Biotecnologa de Smart Solutions TS. Actualmente es coordinadora
de las Licenciaturas de Qumico Farmacutico Bilogo, Qumico Farmacutico, Bioqumica Clnica y Biotecnologa de la
USB, Las lneas de investigacin en las que se desarrolla son en el rea de Biotecnologa ambiental, donde destacan:
aislamiento y seleccin de microorganismos de importancia biotecnolgica y metabolismo y funcin de los microorganismos que degradan residuos orgnicos.
Rosalba Santiago-Reyes
rsantiago@bolivar.edu.mx
Licenciada en Qumico Bacterilogo y Parasitlogo, maestra en Ciencias con especialidad en Bioqumica, con mencin honorfica, por la ENCB-IPN, donde ahora cursa el Doctorado en Bioqumica. Durante ocho aos colabor como
investigadora en el Laboratorio de Biomembranas del Departamento de Bioqumica de la ENCB-IPN. Ha participado
en congresos nacionales e internacionales con trabajos sobre transfeccin gentica, y publicado algunos artculos en
revistas internacionales.
Como docente, se inici en la ENCB-IPN y, actualmente, imparte ctedra en la USB, donde adems es coordinadora
de los laboratorios de QFB.
Ha participado en proyectos de investigacin sobre transfeccin celular utilizando liposomas. Cuenta con publicaciones
en revistas internacionales
Martha Alicia Santos-Cruz
Martha.alicia2006@hotmail.com
Estudiante de la Licenciatura en Biotecnologa por la Universidad Simn Bolvar. Es su primera publicacin.
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UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR
COORDINACIN DE INVESTIGACIN
CRITERIOS EDITORIALES PARA LAS PERSONAS QUE DESEEN PUBLICAR EN LA REVISTA INVESTIGACIN
UNIVERSITARIA MULTIDISCIPLINARIA DE LA UNIVERSIDAD SIMN BOLVAR
1 La revista se distribuye de manera digital en la pgina de la universidad, as como en Dialnet, In4mex y la red Scribd.
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Conclusin
Recomendaciones (opcional)
Agradecimientos (opcional)
Referencias
Apndices (opcional)
Recomendaciones (opcional)
Agradecimientos (opcional)
Referencias
Apndices (opcional)
Los artculos deben elaborarse en el procesador de palabras Word para Windows, extensin.doc, tomando
en cuenta los siguientes aspectos (ver tabla 2):
Tabla 2. Criterios editoriales para la presentacin de artculos de investigacin
Fuente
Arial
Tamao
12
Interlineado
1.5 renglones
Extensin
Sangras
Sin sangras
Margen
Justificado
Numeracin
Formato de
Tablas y de
Figuras
Fuente Arial 10
Espaciado sencillo
En la parte inferior derecha especificar la fuente de
la tabla
Incluir fotografa tamao infantil
Datos de los
autores
100
G u a
p a r a a u t o r e s
Los autores que publiquen constantemente debern sealar las modificaciones pertinentes en su currculum,
actualizar su correo electrnico y enviar una nueva fotografa si lo consideran necesario.
Redaccin
Debe escribirse en altas y bajas, segn las reglas gramaticales.
No debe omitirse la tilde en las maysculas.
El ttulo y los subttulos deben escribirse sin punto, en negritas (bold) y estar claramente especificados.
Cuando se haga uso de siglas (USB) y acrnimos (Bancomer) debe aclararse su significado la primera vez
que se nombran y colocar la sigla o el acrnimo entre parntesis; a partir de la segunda mencin, stos
podrn ir solos y sin parntesis.
Los smbolos, a diferencia de las abreviaturas, no llevan punto final ni especificacin de nmero (plural
o singular) y van separados de la cantidad a la que se refieren (20 km, 10 cm, 25 C, 150 g), a excepcin
de los porcentajes, cuyo smbolo va pegado a la cantidad (10%). Se utilizar L (mayscula) como smbolo
de litro cuando ste se encuentre slo (8 L o 6.5 mg/ L), pero se usar l (minscula) cuando se trate de
fracciones de un litro (8 ml o 4 mg/ dl). Se escribir N (mayscula y cursiva) para sealar el nmero total
de elementos de una muestra y n (minscula y cursiva) para indicar un nmero parcial o limitado de
miembros de esa muestra.
Referencias incluidas dentro del texto
Cuando se haga una referencia o una cita de un solo autor, se pondr inmediatamente el primer apellido
del autor y el ao en el que se edit el material consultado, separados por una coma (Saramago, 1998),
todas las veces que sea citado.
Cuando se trate de dos autores, se incluirn los apellidos de ambos (Barajas y Hernndez, 1998), todas
las veces que sean citados; en caso de que sean tres, cuatro y cinco, se pondr el apellido de todos la
primera vez (Barajas, Hernndez, Gmez, Prez y Ruiz, 1987), a partir de la segunda referencia, slo se
indicar el apellido del primer autor seguido de et al. (Barajas et al., 1987).
En los casos en que la referencia incluya seis autores o ms, desde la primera vez se sealar slo el
apellido del primer autor seguido de et al. (sin cursivas) (Magaa et al., 1999). No obstante, en las
referencias finales deben aparecer como mnimo el nombre de seis autores.
Todas las referencias que se citan en el texto deben aparecer en la lista final de referencias y viceversa.
Citas textuales
Cuando la cita es menor de cinco lneas se pone entrecomillada y a rengln seguido.
Si el texto citado excede las cinco lneas, debe hacerse un punto y aparte, sangrar 1 cm del lado izquierdo,
cerrar el interlineado y bajar la letra a 10 puntos.
En ambos casos, la referencia se pone al final del texto citado, siguiendo las mismas pautas establecidas
en el apartado anterior ms el nmero de la pgina o pginas donde se ubica la cita: (Saramago, 1998,
p. 77), (Barajas y Hernndez, 1998, pp. 68-69), etctera.
Dentro de las citas textuales, se usarn tres puntos seguidos entre comas cuando se omitan palabras u
oraciones; si los tres puntos pertenecen al texto citado irn pegados a la ltima palabra y sin parntesis.
Los corchetes con tres puntos se usarn cuando se omitan prrafos y en caso de que el autor del artculo
incluya palabras o comentarios personales dentro de la cita.
Lista de referencias
Debe aparecer al final del artculo en orden alfabtico.
Los apellidos e iniciales de los autores citados deben indicarse tal y como aparecen en los textos
consultados.
Asimismo, deben incluirse los apellidos e iniciales de todos los autores, independientemente de su
nmero.
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G u a
p a r a a u t o r e s
Los ltimos nombres que se mencionan empezarn por el apellido (no por las iniciales) y se unirn al
resto mediante la conjuncin y.
Si en el listado se hace referencia a ms de una obra del mismo autor, se enlistarn de acuerdo con el
ao de publicacin, comenzando por la ms antigua, en el caso de que las obras hayan sido publicadas
en el mismo ao, se distinguirn, tanto en texto como al final, agregando una letra del alfabeto por vez
junto al ao de publicacin a, b, c. (1997a), (1997b).
Cuando se abrevie el nombre de una revista, verificar que sea el correcto y que siempre aparezca del
mismo modo.
Enciclopedia Historia Universal del Arte (vol. IX). (1992). Barcelona: Planeta.
Pequeo Larousse Ilustrado. (1980). Mxico: Larousse. INBA. (1997).
102
G u a
p a r a a u t o r e s
Tesis no publicadas
Apellido, iniciales. (Ao de impresin). Ttulo de la tesis. Especificar de qu grado es la tesis, Universidad en
donde se realiz. (Si se trata de una universidad extranjera, poner la ciudad y pas).
Betancourt-Ocampo, D. (2002). Las relaciones parentales y el apego en adolescentes que han y no han
intentado suicidarse. Tesis de licenciatura en Psicologa, Facultad de Psicologa, UNAM, Mxico.
Lee, K. (1963). Geology of San Juan de Guadalupe Quadrant (East Harlf), Durango and Coahuila, Mexico. M. A.
Thesis, Lousiana State University. Lousiana, United States.
Internet
Apellido, iniciales u Organizacin. (Ao). Ttulo del artculo (versin electrnica). Nombre de la publicacin.
Recuperado en (fecha de la consulta), de (direccin electrnica).
SEP (2001). Programa Nacional de Educacin 2001-2006. Mxico: Comisin Nacional de Libros de Texto Gratuitos (versin electrnica). Recuperado el 11 de septiembre de 2003 en http://www.sep.gob.mx/wb2/sep/
sep_2734_programa_nacional_de_educacin 2001-2006.
Nota: Los criterios editoriales y los modelos para las referencias siguen los lineamientos de la American
Psychological Association (APA). Si su referencia no encaja en ninguno de los ejemplos anteriores, por favor
consulte el Manual de Estilo de Publicaciones APA.
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