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ANLISIS DE ALIMENTOS Y PRODUCTOS


NATURALES
EJERCICIO DE LABORATORIO

Determinacin del nitrgeno total en los


alimentos
y el clculo de protena cruda
(Mtodo Kjeldahl)

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persona responsable: Assoc.Prof. Ing.Kateina Riddellov, Ph.D.

CONTENIDO
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conocimientos necesarios.....................................................................................................................
3
criterios de evaluacin.........................................................................................................................
3
contenido de ejercicio de laboratorio...................................................................................................
3
programa de ejercicios de laboratorio..................................................................................................
4
A. TOTAL DE DETERMINACIN nitrgeno segn el mtodo Kjeldahl
Utilizando el sistema Kjeltec 1002......................................................................................................
5
1 ALCANCE........................................................................................................................................
5
2. PRINCIPIO BSICO......................................................................................................................
5
3. Los equipos, materiales y de laboratorio especial VIDRIO.............................................................
5
4. Los reactivos y disoluciones............................................................................................................
5
5. PROCEDIMIENTO.........................................................................................................................
6
5.1 Digestin....................................................................................................................................
6
5.2 La destilacin utilizando la unidad de destilacin Kjeltec 1002................................................
6
5.2.1 Preparacin de la unidad de destilacin..............................................................................
6
5.2.2 Ejemplo de destilacin........................................................................................................
7
5.2.3 La limpieza final de la unidad.............................................................................................
7
5.2.4 El cierre de..........................................................................................................................
8
5.3 Titulacin...................................................................................................................................
8
5.3.1 titulacin "en blanco"..........................................................................................................
8
5.3.2 titulacin de la muestra.......................................................................................................
8
5.4 Clculo de los resultados...........................................................................................................

8
SEGUNDO. AMMONIA DETERMINACIN DE ACUERDO CON EL MTODO
DE USO KJELDAHL
EL APARATO PARNAS-WAGNER.................................................................................................
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1 ALCANCE......................................................................................................................................
10
2. PRINCIPIO BSICO....................................................................................................................
10
3. Los equipos, materiales y de laboratorio especial VIDRIO...........................................................
10
4. Los reactivos y disoluciones..........................................................................................................
10
5. PROCEDIMIENTO.......................................................................................................................
11
5.1 Ejemplo de preparacin...........................................................................................................
11
5.2 Destilacin...............................................................................................................................
11
5.2.1 La destilacin utilizando el aparato Parnas-Wagner.........................................................
11
5.2.2 La destilacin utilizando la unidad de destilacin Kjeltec 1002.......................................
11
5.3 Titulacin - ver Determinacin de nitrgeno...........................................................................
11
5.4 Clculo de los resultados.........................................................................................................
11

conocimientos necesarios
- Protenas - definicin de crudo, verdadera y protenas digeribles. Principio de amonaco
y determinacin de nitrgeno total en los alimentos mediante el mtodo de Kjeldahl
- Principio de cenizas hmedas
- Mtodos volumtricos: Principio de anlisis volumtrico, nociones bsicas, clculos
relacionados
- Soluciones - clculos bsicos

criterios de evaluacin
- Conocimientos tericos demostrado
- Calidad de la ejecucin de los trabajos prcticos
- El cumplimiento de las normas de trabajo de laboratorio (seguridad, el orden)
- Protocolo - integridad de los datos experimentales, los resultados de clculo y discusin

contenido de ejercicio de laboratorio


A. determinacin de nitrgeno total segn el mtodo de Kjeldahl usando el
Kjeltec
sistema 1002 (Residencia en DOSN ISO 1871; adaptados para fines didcticos
y para el instrumento Kjeltec)
SEGUNDO. determinacin de amonaco segn el mtodo de Kjeldahl usando
el
Parnas-Wagner
aparato

la determinacin de nitrgeno mediante el sistema Kjeltec - Especificacin:

Cada estudiante en un par lleva a cabo un anlisis completo de la misma muestra


de harina, incluyendo la digestin. Cada estudiante en un par de estados ambos
resultados estn dentro de su / Protocolo dado.
Anlisis de hidrolizado de protena diluida preparada para la determinacin de
amonaco (vase ms adelante) est as realizada.

la determinacin de nitrgeno mediante el appartaus Parnas-Wagner Especificacin:

Cada estudiante en un par (o tro) analiza una vez que la misma muestra de
(diluido) hidrolizado de protenas.
La misma muestra se analiza tambin usando el
sistema de Kjetltec. Los resultados adquiridos por
ambos mtodos estn estipuladas en el protocolo.

programa de ejercicios de laboratorio


TAREA

DURACIN (min)

Introduccin y examinar

30 minutos

Pesaje y preparacin de muestras


para la digestin
Digestin

30 minutos

Introduccin a la Parnas-Wagner
aparato
Realizacin de la determinacin de
amonaco
Introduccin al sistema Kjeltec
Realizacin de la determinacin de
nitrgeno
Limpieza

Nota

El 90 - 120 min
20 minutos
100 min
20 minutos
60 - 100 min
20 - 30 min

Despus de iniciar la
digestin
Simultneamente con el
digestin

A.

Determinacin de nitrgeno total, segn


KJELDAHL MTODO DE USO DEL SISTEMA Kjeltec 1002

1 ALCANCE
El mtodo es aplicable a la determinacin de nitrgeno se producen en el estado
trinegative en alimentos y materias primas. No se aplica al N-N y enlaces N-S (por
ejemplo, azidas, nitratos, nitritos, grupos nitro, etc.).

2. PRINCIPIO BSICO
El mtodo consta de tres pasos: 1) La digestin de la muestra en cido sulfrico
con un catalizador. El nitrgeno contenido en la muestra se convierte en amoniaco; ser
sulfato de amonio formado. 2) la destilacin de amoniaco liberado de sulfato de
amonio por adicin de un exceso de hidrxido de sodio; amonaco atrapado en una
solucin de captura (cido sulfrico). 3) Valoracin por retroceso del exceso de la
solucin de captura.

3. Los equipos, materiales y de laboratorio especial


VIDRIO
- escalas de anlisis
- Unidad de digestin Tecator 2006
- Soporte para tubos de digestin (6 posiciones)
- tubos de digestin (250 ml)
- Aspirador de vapor de sellado con tefln conectado a un aspirador de agua
- Tecator escape DS6
- Unidad de destilacin Kjeltec 1002 equipado con un bote que contiene 30%
(w / w) de solucin de hidrxido de sodio
- Cristalera de laboratorio comn

4. Los reactivos y disoluciones

- agua destilada
- cido sulfrico para la digestin, se concentr, el 95 - 98%
- Catalizador mixto tabletas de digestin Kjeltabs S / 3.5 (3,5 g K2SO4 + 0,0035 g
Se)

- De sodio o hidrxido de potasio (para liberar amonaco a partir de


mineralizate) - 45% (w / w) solucin
- Indicador Tashiro
- cido sulfrico (solucin de atrapar), la concentracin c = 0,05 mol / L
- Hidrxido de sodio (reactivo de
valoracin), la concentracin c = 0,1 mol / L Todos
los productos qumicos de P. A. grado.

5. PROCEDIMIENTO
5.1 Digestin
Coloque 2 tabletas de digestin en un tubo de digestin. Pesar
aproximadamente 1 g de la muestra (con una precisin de 2 decimales) usando un
bote de pesaje. Transferir cuantitativamente la muestra en el tubo de digestin usando
12 ml de cido sulfrico concentrado.
Advertencia: Compruebe la parte inferior de los tubos de digestin de grietas estrella
antes de aadir la muestra y reactivos. Slo manejar el cido sulfrico
concentrado en una campana de humos dedicado; vistiendo guantes de proteccin
y un protector facial. En primer lugar se vierte el cido en un vaso de precipitados. A
continuacin, medir 12 ml de la vaso de precipitados en un cilindro. Transferir la
muestra al tubo de digestin de tal manera que las paredes se mantienen limpias.
Enjuagar cualquier resto de la muestra utilizando cido sulfrico a partir del cilindro.
Despus de agitarlo en forma circular, colocar el tubo en un soporte de la digestin.
Adjuntar
un
extractor
de
vapores,
cambiar un aspirador de vaco de agua y ajuste la temperatura de la digestin
recomendada (es decir, 420 oC). Despus de alcanzar la temperatura requerida (aprox.
15
minutos),
digerir
la
muestra
durante
40
minutos.
Cambie la unidad de digestin y deje el soporte con los tubos de digestin se enfre en un
lugar separado (aprox. 20 minutos).
Advertencia: Slo el instructor puede poner los tubos de digestin en la unidad de
digestin, o llevarlos a cabo. Slo el instructor puede cambiar la unidad de digestin de
encendido / apagado.
Nota: La digestin se acorta con el propsito de este ejercicio. Para habilitar la digestin
de resistente compuestos (lisina, tirosina) un adicional de 60 minutos de digestin sera
necesario despus de aclarar el contenido tube's.

5.2 La destilacin utilizando la unidad de destilacin Kjeltec 1002


5.2.1 Preparacin de la unidad de destilacin

(Enchufe la unidad y pulse el) interruptor principal (verde. Despus de


comprobar
que
la
vlvula
de
etiquetado
"Fuga", que se encuentra en la parte posterior de la unidad, se cierra (la manija paralela a
la parte posterior), gire el suministro de agua.)
Colocar un tubo limpio de digestin (medio lleno de agua destilada) y un
erlenmeyer
en
el
unidad de destilacin, y cerca de la ventana de seguridad. Pulsando el mango con la
etiqueta "vapor", iniciar el

generador de vapor de agua y se deja correr durante 5 minutos para limpiar y precalentar
toda
la
unidad.
Despus
de
5
minutos
detener la generacin de vapor tirando del asa "vapor" en la posicin superior. Abra
la
seguridad
ventana, retire el tubo y el erlenmeyer, y desechar su contenido en el fregadero con
chorro de agua fra.
Advertencia: Use guantes de proteccin contra el calor para manipular tubos de digestin
- estn calientes No tocar el tubo de tefln con la mano, pero el uso del tubo de digestin
para dirigirlo en el soporte. La unidad de destilacin debe ser limpiado despus de la
destilacin de cada muestra.

5.2.2 Ejemplo de destilacin

diluir con cuidado el compendio fresco mediante la adicin de 30 ml de agua


destilada, y colocar el tubo en la unidad de destilacin.
Advertencia: Sea consciente de los peligros de la manipulacin de cido sulfrico
concentrado y de la adicin de agua en cido !!! La adicin de agua tiene que ser hecho
en una campana extractora dedicada usando guantes de proteccin y un protector facial!
Colocar un matraz de valoracin (receptor) que contiene 25 ml de cido sulfrico
(c = 0,05 mol / L) y unas pocas gotas de indicador Tashiro en la unidad, y elevar la
plataforma. Asegrese de que el extremo del refrigerador se encuentra bajo la superficie;
si no, aadir una pequea cantidad de agua destilada.
- cerrar la ventana de seguridad
- presione suavemente el "LCALI" manejar todo el camino hacia abajo para
dispensar 45 ml
45% (w / w)
solucin de hidrxido de sodio
- abra la vlvula de "vapor" tirando del asa hacia abajo
- ajustar el temporizador de 3,5 minutos
- despus de escuchar la seal, bajar la plataforma con el matraz receptor de
modo que el final de la
enfriador est por encima de la superficie
- cierre la vlvula de "vapor"
- abrir la ventana de seguridad, retire el tubo y desechar el contenido en el
fregadero de fro
agua corriendo
- el contenido del matraz receptor est listo para la titulacin
- limpiar la unidad de acuerdo con el procedimiento descrito en el apartado

5.2.1
Advertencia: No cierre la vlvula de "vapor" antes de bajar el matraz receptor, de lo
contrario el destilado es aspirado en el refrigerador.
Use guantes de proteccin contra el calor para manipular tubos de digestin - estn
calientes No toque el tefln
tubo con la mano, pero el uso del tubo de digestin para dirigirlo en el soporte. Al retirar
el tubo y el matraz receptor utilizar una botella de lavado para enjuagar el tubo de tefln.
5.2.3 La limpieza final de la unidad

Enjuague la unidad con agua destilada y utilice un pao hmedo para


limpiar todas las partes (especialmente el adaptador de caucho) que estaban en
contacto con hidrxido o cido.

Retire la cubeta de drenaje en la parte inferior de la unidad y limpiarla con agua.


Limpie
la
unidad
de
eliminar cualquier derrame. Colocar un tubo de digestin vaca y un matraz receptor a
su
posicin,
y
cerrar
el
ventana de seguridad.
5.2.4 El cierre de

Cierre el grifo de agua, apague el dispositivo y abra la vlvula marcada "fuga" en


la parte posterior de la unidad. Toda el agua en el generador de vaso de expansin y el
vapor fluir.
5.3 Titulacin
5.3.1 titulacin "en blanco"

valoracin en blanco se lleva a cabo para poner a prueba el cambio de


color
del
indicador
Tashiro.
Tashiro
indicador es una mezcla de metilen rojo azul y metilo, el color de los cuales cambia
(dependiendo
pH) como sigue:
intervalo cido: Violeta
intervalo neutro: sin color, matiz grisceo
gama
bsica: verde
El punto final (punto de equivalencia) ser identificada por la decoloracin de una
violeta originalmente solucin. Mediante la adicin de una gota ms de valorante la
solucin se vuelve verde (es decir, el exceso de titulados).
Usando una bureta, aadir 10 ml de cido sulfrico (c = 0,05 mol / l) en
un matraz de valoracin que contiene aprox. 10 ml de agua y unas gotas de indicador
Tashiro. Valorar esta solucin usando hidrxido de sodio (c = 0,1 mol / L), el volumen de
valorante aadida debe ser 10 mL.
5.3.2 titulacin de la muestra

Valorar el contenido del matraz receptor (vase 5.2.2) con una solucin de
hidrxido de sodio (c = 0,1 mol / L) en el punto final neutral. Registrar el volumen de
hidrxido requerido.

5.4 Clculo de los resultados


Las reacciones implicadas en todo el procedimiento se resumen de la siguiente manera:

digestin de la muestra
Organic N + H2SO4 CO2 + H20 + (NH4) 2SO4
La neutralizacin de la mezcla de digestin y
liberacin de amoniaco (NH4) 2SO4 + 2NaOH
2NH3 + Na2SO4 + 2H2O
La reaccin de amoniaco con una solucin de captura (H2SO4)
2NH3 + H2SO4 (NH4) 2SO4
nNH3 = 2nH2SO4
valoracin por retroceso del exceso de solucin de captura
H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O
NH2SO4 = nNaOH

Con respecto a la estequiometra, y teniendo en cuenta la concentracin de valorante


(NaOH,
c
=
0,1
mol / L) y la captura (H2SO4, c = 0,05 mol / L) de solucin, el volumen de hidrxido
de
sodio
necesario
para
valorar la muestra (VNaOH) corresponde al exceso de cido sulfrico en la solucin
de
captura
(VExH2SO4).
Para calcular la cantidad de nitrgeno en la muestra, es necesario determinar la
cantidad de cido sulfrico (solucin de captura) que se hace reaccionar con amonaco
para formar sulfato de amonio (VReact H2SO4), Es decir, para restar el exceso de cido
sulfrico a partir de la cantidad total (original) de cido sulfrico en la solucin de
captura (VTotH2SO4):
VReact H2SO4 = VTotH2SO4 - VExH2SO4 (ml)
VExH2SO4 =
VNaOH
La cantidad de nitrgeno se calcula entonces segn la siguiente igualdad:
1 ml de 0,05 mol / L de H2SO4 ...... ...... .corresponds A ..1.4 mg de nitrgeno
El resultado debe ser expresado en gramos de nitrgeno por 100 g de muestra, y
tambin en g de crudo protena por 100 g de muestra.
Para el clculo de la protena cruda, multiplicar la cantidad de nitrgeno por el factor F
(Fflour = 5,70)

B. AMMONIA DETERMINACIN DE ACUERDO CON EL


KJELDAHL MTODO DE USO DEL APARATO
PARNAS-WAGNER

1 ALCANCE
El mtodo es aplicable a la determinacin de amonaco en los hidrolizados de
protenas cidas.

2. PRINCIPIO BSICO
El amonaco, liberado de la muestra mediante la adicin de un exceso de
hidrxido de sodio,
se destila y atrapado en un (cido sulfrico) solucin de captura. Back-titulacin del
exceso de la solucin de captura sigue.

3. Los equipos, materiales y de laboratorio especial


VIDRIO
- balance analtico
- tubos de digestin (250 ml)
- Aparato de destilacin de Parnas-Wagner

4. Los reactivos y disoluciones


- agua destilada
- De sodio o hidrxido de potasio (para liberar amonaco a partir de sulfato
de amonio) - 35% (w / w) solucin
- Indicador Tashiro

- cido sulfrico (solucin de atrapar), la concentracin c = 0,05 mol / L


- Hidrxido de sodio (reactivo de
valoracin), la concentracin c = 0,1 mol / L Todos
los productos qumicos de P. A. grado.

5. PROCEDIMIENTO
5.1 Ejemplo de preparacin
Pesar aproximadamente 5 g de la muestra (con una precisin de 2
decimales) en un 50 ml matraz volumtrico. Completar el volumen con agua destilada.

5.2 Destilacin
5.2.1 La destilacin utilizando el aparato Parnas-Wagner

Precalentar y enjuagar el aparato con agua destilada. Colocar un recipiente de


valoracin
(receptor)
que
contiene
25
cido sulfrico ml (c = 0,05 mol / L) y unas pocas gotas de indicador Tashiro bajo el
extremo
del
refrigerador,
asegrese de que el refrigerador se encuentra bajo la superficie; si no, aadir una
pequea
cantidad
de
agua
destilada.
Usando
un
pipeta, transferir 10 ml de la muestra diluida en el aparato. Despus de enjuagar el
embudo
con
agua destilada aadir 20 - solucin de hidrxido de sodio 30 ml 35% (w / w). Lavar
la
ampolla
utilizando
agua destilada otra vez. Medir 15 min de la primera evolucin de vapor (burbujas
subiendo
a
travs
de
la
muestra). Enjuagar el extremo ms fro en el matraz receptor utilizando agua
destilada.
El
contenido
de
la
matraz receptor est listo para la titulacin. Retire el resto de la muestra y enjuagar el
aparato
con
agua destilada.
5.2.2 La destilacin utilizando la unidad de destilacin Kjeltec 1002

Con una pipeta, transferir 10 ml de la muestra diluida en un tubo de digestin que


contiene aprox. 30 ml de agua destilada. Adems proceder de acuerdo con el apartado
5.2.2 en la determinacin de nitrgeno.
5.3 Titulacin - ver Determinacin de nitrgeno
5.4 Clculo de los resultados

Las reacciones implicadas en todo el procedimiento se resumen de la siguiente manera:


La reaccin de amoniaco (liberado de la muestra) con una solucin de captura (H2SO4)
2NH3 + H2SO4 (NH4) 2SO4
nNH3 = 2nH2SO4
valoracin por retroceso del exceso de solucin de captura
H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O
NH2SO4 = nNaOH
Con respecto a la estequiometra, y teniendo en cuenta la concentracin de valorante
(NaOH,
c
=
0,1
mol / L) y la captura (H2SO4, c = 0,05 mol / L) de solucin, el volumen de hidrxido
de
sodio
necesario
para
valorar la muestra (VNaOH) corresponde al exceso de cido sulfrico en la solucin
de
captura
(VExH2SO4).

Para calcular la cantidad de amonaco en la muestra, es necesario determinar la


cantidad de cido sulfrico (solucin de captura) que se hace reaccionar con amonaco
para formar sulfato de amonio (VReact H2SO4), es decir, para restar el exceso de
cido sulfrico a partir del total (original) cantidad de cido sulfrico en la solucin de
captura (VTotH2SO4):
VReact H2SO4 = VTotH2SO4 - VExH2SO4 (ml)
VExH2SO4 =
VNaOH
La cantidad de amonaco se calcula entonces segn la siguiente igualdad:
1 ml de 0,05 mol / L de H2SO4 ...... .corresponds A ...... .. 1,7 mg
de

amonaco

El resultado debe ser expresado en g de amoniaco por cada 100


g de muestra.

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