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METODO DE RECUENTO EN PLACA DE MICROORGANISMOS MESOFILOS

POE No.
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MC-001
ELABORADO
POR

0
Agosto 2003

AUTORIZADO
POR

Firma

Pilar Rincn

Firma

Director Tcnico

OBJETIVO
Determinar l numero de aerbios mesfilos.
ALCANCE
El mtodo esta diseado para el anlisis de aerobios mesfilos en aguas, alimentos
para consumo humano, animal y anlisis de ambientes.
1.

FUNDAMENTOS

Mtodo utilizado para determinar el nmero de clulas viables o de unidades

formadoras de colonia (UFC) en un alimento. Indicador mas amplio y general en el
control de calidad de alimentos, incluye todos los gneros de aerobios y facultativos
que crecen en medios simples a temperaturas entre 20C y 45C. Indicador del grado
de contaminacin de los alimentos en cualquier etapa del proceso de produccin
Utilizado para determinar eficacia de procesos de limpieza y desinfeccin, control de
temperaturas durante procesos industriales, transporte y almacenamiento, etc.
Permite obtener informacin sobre alteraciones incipientes en alimentos, probable
vida til, descongelacin incontrolada, fallas en cadenas de fro.
Indican frecuentemente materias primas contaminadas, limpieza y desinfeccin no
correctas o condiciones inadecuadas de tiempo/ temperatura durante la produccin o
la conservacin de los alimentos.

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Es indicador tambin de calidad ambiental y de higiene de manipuladores de

alimentos ( frotis de manos / guantes).
2.

EQUIPOS Y MATERIALES

Todo material de vidrio, instrumental, agua de dilucin y/o medio de cultivo, debe
ser utilizado en perfectas condiciones de esterilidad.

Agua de dilucin en tubos x 9 mL y dems equipo de pesaje y homogeneizacin.

Incubadora 35C +/- 2C
Bao de agua o incubadora a 45-50C
Refrigerador a 0-5C
Contador de colonias
Cajas de petri estriles
Pipetas volumtricas de 1mL y 10 mL estriles
3.

MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

Agar plate count (Agar peptona de casena glucosa extracto de levadura), Agar
Casoy (Agar peptona de casena harina de soya y otros
4.

PROCEDIMIENTO

FROTIS DE SUPERFICIES:
- Numeral 5.11.1 (Tiempo de incubacin: 48 horas, 35C +/- 2C)
ANALISIS DE AMBIENTES
-

Numeral 5.11.2 (Tiempo de incubacin: 48 horas, 35C +/- 2C)

MUESTRAS DE ALIMENTOS Y AGUAS

-

Numeral 5.9.1.1: Esquema general de dlilucin para recuentos en placa

Numeral 5.9.2.1: Siembra e incubacin cajas de petri
(Tiempo de incubacin: 48 horas, 35C+/- 2C)

Numeral 5.10: Recuento de microorganismos y expresin de resultados

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Numeral 5.10.1: caso general- recuento en placa

Numeral 5.10.2: conteos estimados- recuento en placa

1. Preparar la muestra y las diluciones de los homogeneizados tal como se expresa

en el numeral 5.9.1.1
2. Transferir por duplicado, alcuotas de 1mL de cada una de las diluciones
consecutivas en cajas de petri estriles Numeral 5.9.2.1
3. Verter en las cajas de petri, 15 mL de Agar Plate count fundido y mantenido a
45C.
4. Mezclar l inoculo con el medio de cultivo fundido. No debe transcurrir mas de 20
minutos entre la realizacin de las diluciones y el vertido del medio. La manera
mas indicada de mezclar l inoculo es:
a)
b)
c)
d)

Mover la caja de arriba hacia abajo 5 veces

Rotar la caja cinco veces en el sentido de las agujas del reloj,
Mover la caja 5 veces haciendo ngulo recto sobre el movimiento (a)
Rotar las cajas cinco veces en el sentido contrario de las agujas del reloj.

5. Hacer control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja que contenga
Agar plate count.
6. Hacer control de esterilidad del agua peptonada 0.1% incubando una caja que
contenga 1 mL de agua peptonada y Agar plate count.
7. Una vez solidificado el medio de cultivo, invertir las placas e incubarlas a 35C+/2C durante 48 horas.

5. CLCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Contar las Cajas que contengan entre 30 a 300 colonias y l numera obtenido se
multiplica por el factor de dilucin de la caja.
Los resultados se reportan como UFC/g o mL
Si no hay colonias presentes en la caja de mayor dilucin el recuento se reporta como
menor de 1 multiplicado por el factor de dilucin ms concentrado.
5.
-

ACTIVIDADES CRITICAS

Mantenimiento de condiciones de esterilidad de ambientes e implementos de

dilucin y siembra.
Vertimiento de caja control del medio de cultivo utilizado.
Control de esterilidad del medio de cultivo incubando una caja que contenga Agar
plate count.
Control de esterilidad del agua peptonada usada en las diluciones.

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REFERENCIAS

Manual de tcnicas de anlisis para control de calidad microbiolgico de

alimentos para consumo humano MinSalud-Invima 1998.