Você está na página 1de 17

SENAI - Curso de Tecnologia em

Processos Quimicos

Faculdade de Tecnologia SENAI Roberto Mange


Curso de Tecnologia em Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA

FUNDAMENTOS
DE
CROMATOGRAFIA

Michael Tswett - 1906

Separao da clorofila de uma


mistura de pigmentos de planta.

EDUARDO SANTOS
LOUZADA
1

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA

ter de
petrleo

Carbonato de clcio em p

mistura de
Pigmentos
(clorofila)

CaCO3

Pequena quantidade de amostra

pigmentos
separados

ter de petrleo
Bandas separadas e de cores distintas.

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA
PROBLEMA:

Graph = escrever

Kroma = cor

Escrevendo em cores
5

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Uma amostra a ser analisada


freqentemente uma mistura de vrios
componentes numa matriz complexa.
Para
amostras
que
contenham
componentes desconhecidos, eles precisam ser
separados dos demais, de modo que cada
componente individual possa ser identificado .
6

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA
FASE ESTACIONRIA

Princpio Bsico

Separao de misturas por interao


diferencial dos seus componentes entre
uma FASE ESTACIONRIA e uma
FASE MVEL.
7

Nos processos
cromatogrficos, esto
envolvidos duas fases,
sendo que uma se
locomove atravs de uma
outra. Assim, a fase que se
move denomina-se
fase mvel, e a que no se
locomove denomina-se
fase estacionria ou
suporte.

CROMATOGRAFIA

10

CROMATOGRAFIA
USOS E APLICAES
 Ferramenta analtica para separao de
misturas.
 Combinada com qumica convencional ou
instrumental identificar espcies qumicas.

TEMPO

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

11

Qualitativamente e Quantitativamente

12

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

CROMATOGRAFIA PLANAR

Mtodos Cromatogrficos
Cromatografia

Planar

Coluna

F.M. Lquida
C.Papel

C.Camada
Delgada

F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE

 A Fase
Estacionria
colocada em uma
superfcie plana
(Placa de Vidro
ou Papel)

13

CROMATOGRAFIA EM COLUNA

14

Critrios de Classificao
1) Quanto ao mtodo de aplicao da
amostra e seu subseqente
desenvolvimento:

A Fase Estacionria colocada em um


tubo cilndrico (Coluna Cromatogrfica)

Eluio
Deslocamento
Anlise Frontal
15

16

Eluio:

Deslocamento:

A Introduo da amostra feita


em uma nica aplicao, com uma fase
mvel pura, que arrasta a amostra
ao longo da placa ou coluna.
Este o mtodo mais utilizado
na cromatografia analtica.

Os componentes da amostra so
retirados da fase estacionria usando
uma fase mvel que tem mais
afinidade por
eles. Este mtodo mais utilizado
em cromatografia preparativa, em
nvel industrial.

17

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

18

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

Anlise Frontal:

Critrios de Classificao

A amostra
continuamente
aplicada uma
coluna, contendo a
fase estacionria,
sendo o
componente
menos retido, o
nico que sai na
forma pura.

2) Mecanismos de separao:
Fsico
Qumico
Mecnico
19

Fsico:
Quando se trata da
fase estacionria
slida , a adsoro
do soluto ocorre na
interface entre o
slido e a fase
mvel, devido a
presena de grupos
ativos na suas
superfcies.

Qumico:
usado em
cromatografia por
troca inica. A
fase estacionria
constituda de
uma matriz onde
so adicionados
grupos funcionais
ionizveis
..
21

Mecnico:
usado em
cromatografia por
excluso. As
molculas menores
da amostra so
separadas das
maiores porque
so capazes de
penetrar
facilmente em
todos os poros da
fase estacionria.

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

20

22

PROCEDIMENTO SIMPLES DE SEPARAO

Centrifugao

Cristalizao

Destilao

Extrao

Filtrao
MTODOS INSTRUMENTAIS DE SEPARAO

Cromatografia
23

24

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

Faculdade de Tecnologia SENAI Roberto Mange


Curso de Tecnologia em Qumica Frmaco-Industrial

Mtodos Cromatogrficos
Cromatografia

CROMATOGRAFIA
PLANAR

Planar
F.M. Lquida
C.Papel

EDUARDO SANTOS
LOUZADA

C.Camada
Delgada

Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
25

CROMATOGRAFIA EM PAPEL

CROMATOGRAFIA EM PAPEL

 Tcnica simples e econmica de separao dos


componentes de uma mistura.
 Cromatografia
lquida-lquida e a
separao ocorre
por absoro
(solubilidade) do
soluto entre os dois
lquidos.

26

27

 Diferentes solubilidades relativas dos


componentes da amostra na fase mvel (lquida solventes) e na fase estacionria (lquida gua
retida na celulose).

Componentes menos solveis na fase


estacionria tm uma movimentao mais rpida,
enquanto os mais solveis sero seletivamente
retidos com uma movimentao mais lenta.
28

FASE MVEL E

FASE MVEL E

FASE ESTACIONRIA

FASE ESTACIONRIA
 Lquidos menos polares (solventes
orgnicos): so repelidos por essa estrutura
e funcionam como fase mvel.

 A celulose do papel constituda por 2.000


ou mais unidades de glicose anidra ligadas
por tomos de oxignio.
 Um lquido polar como a gua ter grande
afinidade pelas hidroxilas de cada glicose,
formando pontes de hidrognio: fica retido e
funciona como fase estacionria.

n-pentano, ciloexano, tetracloreto de carbono,

29

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

benzeno, tricloroetileno, clorofrmio, ter


etlico, acetato de etila, amnia, acetona,
etanol, metanol, acetonitrila e gua

30

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

APLICAO DA AMOSTRA

TIPOS

Aplica-se atravs de
um tubo capilar ou
micropipeta.
recomendvel
que a amostra seja
dissolvida num
solvente bastante
voltil

 Ascendente.
 Descendente.
 Horizontal (circular).
 Bidimensional.

31

 Ascendente.

32

 Horizontal (circular).

 Descendente.

 Bidimensional.

33

Cromatografia em papel
Deteco

Mtodos Cromatogrficos
Cromatografia

Anlise qualitativa:
 Rf (fator de reteno)
 Cor da Mancha

Planar
F.M. Lquida

Anlise quantitativa:
 Diretamente no papel

C.Papel

Comparao da intensidade das cores das manchas


rea da mancha
Densitmetria ( Intensidade da cor)

C.Camada
Delgada

Coluna
F.M. Gasosa
C. Gasosa

F.M. Lquida
CCC

CLAE

CCC
CCC-Cromatografia
em Coluna Clssica.
CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.
CLAE
35

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

34

36

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

INTRODUO

INTRODUO

A Cromatografia em Camada Delgada


(CCD) ou Thin Layer Chromatography
(TLC) uma tcnica simples, sendo
desenvolvida sobre uma placa de
vidro, que contm uma fina camada de
adsorvente.
um tipo de cromatografia lquidoslido

Seu desenvolvimento por Eluio e o


mecanismo de separao, por Adsoro.

37

38

Separao
Fsica:

Desenvolvimento
Eluio:
A Introduo da amostra feita
em uma nica aplicao, com uma fase
mvel pura, que arrasta a amostra
ao longo da placa ou coluna.
Este o mtodo mais utilizado
na cromatografia analtica.
39

Quando se trata da
fase estacionria
slida , a adsoro
do soluto ocorre na
interface entre o
slido e a fase
mvel, devido a
presena de grupos
ativos na suas
superfcies.

..
40

APLICAES

APLICAES

- No estudo preliminar de um sistema ou de uma


situao..
situao

- No estudo preliminar de um sistema ou de uma


situao.
situao.

 Os farmacuticos aprendem muito sobre a


complexidade dos componentes do extrato de
uma planta, qualitativamente, por exemplo,
aminocidos em vegetais, fermentao, soro
sangneo, urina etc.
41

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Consiste num mtodo cromatogrfico


planar, com Fase Mvel lquida e Fase
Estacionria slida.

 A medicina legal investiga casos de


envenenamento; emprega a tcnica na
identificao de estimulantes ingeridos por
atletas.
 A tcnica pode ainda ser aplicada a reaes
de sntese e tambm para reaes de
degradao de um produto natural extrado de
uma
planta
ou
de
uma
substncia
desconhecida.
42

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

APLICAES

APLICAES

- Especialmente na Qumica Orgnica temos estas


utilidades

- No isolamento de produtos de reao


 Esta tcnica pode ser aplicada no
isolamento de produtos de reao de
diversas formas, analisando a eficincia e
a preciso de uma destilao ou de uma
cristalizao, podendo at mesmo
verificar a pureza das fraes obtidas.
43

estabelecer a identidade de dois ou mais


compostos;
 determinar o nmero de componentes de uma
mistura;
 determinar o solvente apropriado para uma
separao por cromatografia em coluna;
.

44

PRINCPIO DA TCNICA

APLICAES

Na CCD, a fase lquida se move atravs da


fase estacionria.

Em todas estas
aplicaes, a CCD tem a
vantagem de utilizar
pequenas quantidades de
amostras..
amostras

Como h uma interao preferencial do


composto a ser identificado com uma das
fases, o percurso total percorrido pelo composto
ser diferente do percurso percorrido pela fase
mvel.
45

46

PRINCPIO DA TCNICA

Se o percurso
percorrido pelo
composto for
menor do que o
percorrido pela
fase mvel, diz-se
que h uma maior
adsorso do
composto na fase
estacionria.

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Preparao das Placas:


Espalhamento

Manual
Espalhadores

Pr-Fabricadas
47

48

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

Manual:
Soluo do adsorvente aplicada
manualmente sobre a placa de vidro,
com o auxlio de uma bagueta.
Pode-se tambm fazer uma soluo
do adsorvente em solvente voltil e
mergulhar a placa.
Este tipo de espalhamento gera
superfcies no uniformes.

49

Preparao das placas


utilizando
Espalhador
Utiliza-se quando
h necessidade
de camadas bem
uniformes e
espessuras
definidas do
adsorvente

50

Placas PrFabricadas:
Existem no mercado Placas
Pr-Fabricadas, dos
adsorventes mais comuns.

Preparao
das placas
utilizando
Espalhador

51

PREPARAO DA SUSPENSO DO ADSORVENTE

Celulose
Aplicao: Utilizada para separao de compostos
hidroflicos (acares, aminocidos, ons
inorgnicos, cidos nuclicos).

Alumina ( Al2O3)
Aplicao: Geralmente empregadas na separao de
compostos lipoflicos. (Hidrocarbonetos, vitaminas
lipossoluveis, corantes sintticos)

Slica ( SiO2)
Aplicao: Utilizada para separao de compostos
53
lipoflicos (fenis, aminocidos, esterides ).

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Apesar do custo mais


elevado, elas dispensam a
preparao e so bem mais
uniformes e homogneas, o
que melhora a separao e
torna o Rf mais reprodutvel.

52

ATIVAO DAS PLACAS

A ativao consiste em aquecer as placas


em temperaturas relativamente elevadas, por
tempo prolongado. Isto aumenta o seu poder
de adsorso.
Este processo promove a remoo de vapor
dgua e outros resduos possivelmente
adsorvidos na placa.
54

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

ATIVAO DAS PLACAS

ATIVAO DAS PLACAS

Adsorventes como slica, alumina so ativadas


a 105-110C por 30 a 60 minutos.
A celulose no deve ser aquecida por mais de
10 minutos a 105C.
As placas podem ser conservadas, prontas para
uso, em ambientes secos como dessecadores ou
caixas tipo estantes fechadas.
55

56

ATIVAO DAS PLACAS

Aps estarem as
placas todas
ativadas, costuma-se
riscar as placas de
formas a fazer com
que uma amostra, na
sua ascenso, no
interfira na da outra
amostra.
57

ESCOLHA DA FASE MVEL

ESCOLHA DA FASE MVEL

Um ensaio cromatogrfico eficiente


significa uma separao total dos
componentes de uma amostra, num
tempo relativamente curto.
Para isto acontecer, necessrio
empregar um solvente adequado a
cada sistema cromatogrfico, isto ,
amostra e adsorvente empregado

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

58

Aplica-se a soluo da amostra em pontos


diferentes separados por alguns centmetros.
Depois das manchas secas, aplica-se um
solvente diferente sobre o centro da mancha.

59

O lquido dever migrar radialmente se o


eluente for apropriado a separao ser
eficiente.

60

10

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

ESCOLHA DA FASE MVEL

ESCOLHA DA FASE MVEL

61

62

APLICAO DA AMOSTRA

As amostras so aplicadas
nas cromatoplacas na forma
de solues, em solventes
bem volteis.

Grandes quantidades de
amostras geram manchas
muito grandes, o que no
desejado.
63

64

APLICAO DA AMOSTRA

APLICAO DA AMOSTRA

A amostra deve ser aplicada com micropipeta,


quando a quantidade da amostra importante, ou
com tubo capilar, quando no, de 1,5 cm a 2,0 cm,
da base da placa.

Tcnica de aplicao
Ponto -anlise qualitativa e quantitativa.
Faixa - Anlise quantitativa e preparativa.
A

distncia entre as gotas no deve ser


menor a 1,0 cm
65

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Forma incorreta
de aplicao

Forma correta de
aplicao
66

11

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

APLICAO DA AMOSTRA

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

Cromatografia ascendente o mtodo


mais utilizado e pode ser considerado a
tcnica mais bsica.

67

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

As cubas cromatogrficas, em geral de vidro


com fundo plano, devem ter junto s paredes
um pedao de papel de filtro que permita a
subida da fase mvel, saturando rapidamente
o interior das mesmas.

68

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

As placas so colocadas numa cuba


cromatogrfica quase na posio vertical,
apoiadas no fundo da cuba e inclinadas para
as paredes laterais.

69

70

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

Cuba saturada

71

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

Quando a fase mvel atinge uma


determinada posio nas placas (2/3), estas
devem ser retiradas e importante marcar a
distncia percorrida pela fase mvel,
possibilitando o clculo dos valores de Rf.

Cuba no saturada

72

12

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

73

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

75

DESENVOLVIMENTO
DA CROMATOGRAFIA

77

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

74

76

DESENVOLVIMENTO DA CROMATOGRAFIA

78

13

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

Fsicos

Aps a eluio, as cromatoplacas so


secas e reveladas, tornando visvel as
substncias incolores existentes na
amostra. Os mtodos podem ser:
Fsicos
Qumicos
Biolgicos

Muitos compostos se tornam fluorescentes quando


excitados por luz UV, ou utiliza-se o adsorvente
contendo uma substncia fluorescente

79

80

Fsicos

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

Fsicos

81

82

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

Qumicos
Utiliza-se agentes cromognicos
(vanilina, tricloreto de Antimmio) que,
em contato com as substncias da
amostra, tornam-nas coloridas e,
portanto, visveis.
O mais utilizado o iodo, que torna as
manchas marrons.
83

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

84

14

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

DOS CROMATOGRAMAS
REVELAO PELO
MTODO QUMICO

Biolgicos
Utiliza-se reaes enzimticas
ou bacterianas para tornar
a mancha visvel.
 Placa de slica, eluda com
diclorometano:metanol (97:3). A
placa foi borrifada com soluo
esporos de fungos e, onde
apareceram manchas brancas
porque houve inibio dos fungos
pelas substncias contidas nos
extratos de uma planta.

Aplicadores de vidro

85

REVELAO DOS CROMATOGRAMAS

86

REVELAO COM APLICADOR COMERCIAL

Revelando o cromatograma

Modo de dirigir o jato


ao longo da placa
cromatogrfica

87

FORMAS DE DESENVOLVIMENTO

Desenhando as cromatoplacas

A tcnica bsica mais utilizada o


desenvolvimento ascendente
(unidimensional).

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

DOCUMENTAO DOS CROMATOGRAMAS

Os resultados obtidos aps a revelao das


cromatoplacas, podem ser documentados:

O objetivo do desenvolvimento
sempre a melhor separao das
substncias da amostra.

Existem tambm desenvolvimento


bidimensional.

88

Delineando as cromatoplacas sobre papel de seda


Fotografando as cromatoplacas
Xerocando as cromatoplacas
89

90

15

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

Fator de Reteno (R.f.)

ANLISE QUALITATIVA

Leva em considerao a Cor e o Fator de Reteno :

91

Ws1

Ws2

dr1

onde dr a
distncia
percorrida pela
amostra e dm
a distncia
percorrida
pela fase
mvel

Linha de chegada da FM

dr2

O mtodo quantitativo ser


citado posteriormente.

R.f.=dr/dm

dm

Comparaes feitas do Rf obtido


com a amostra e o Rf de padres
considerado como o mtodo qualitativo.

Ponto de partida da amostra


Profundidade da FM92

CLCULO DA RESOLUO

Resoluo
Uma outra medida de separao de dois
componentes consecutivos a resoluo;
Usada em cromatografia calculada a partir da
distncia que separa as manchas dividido pela
mdia das larguras de suas respectivas bases:

Rs = 2(dr1 dr2)
(Ws1 + Ws2)

Rs = 2(dr1 dr2) / (Ws1 + Ws2)


93

PARMETROS UTILIZADOS NA CCD

ANLISE QUANTITATIVA

A CCD pode ser utilizada para quantificao.

Fator de Reteno (Rf):


Rf = dr / dm

Retira-se da cromatoplaca a rea que


contenha a substncia desejada que extrada
e quantificada posteriormente.

Resoluo (Rs):
Rs = 2(dr1 dr2) / (Ws1 + Ws2)

Frequentemente, utiliza-se a densitometria, e


medidas de fluorescncia.
95

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

94

96

16

SENAI - Curso de Tecnologia em


Processos Quimicos

ANLISE QUANTITATIVA

Densitometria

Densitometria

ANLISE QUANTITATIVA

97

98

Exerccios
Calcule o Rf de cada substncia e a Resoluo

ANLISE QUANTITATIVA

Densitometria

Linha de chegada da FM

1cm
10cm
0,5cm
8cm

Ponto de partida da amostra


99

100
Profundidade da FM

Exerccios
Calcule o Rf de cada substncia e a Resoluo
Linha de chegada da FM

0,6cm
15cm

0,3cm

0,7cm
9cm

12cm
0,5cm
Ponto de partida da amostra
101
Profundidade da FM

Analise Instrumental Prof Eduardo Louzada

17

Você também pode gostar