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Gliclise e Oxidao do Piruvato

A glicose, quando entra dentro das clulas, entra atravs de um transportador e vocs
j viram, no semestre passado, como que a glicose entrava dentro das clulas do epitlio
intestinal. Quer para entrar quer para sair, a glicose atravessa a membrana atravs de um
transportador. Para ter a certeza que a glicose no volta a sair das clulas, ela tem que ser
fosforilada, porque quando a glicose est fosforilada, no atravessa a membrana, no passa
pelos transportadores. Seno o que que acontecia? A glicose entrava dentro da clula, se
acumulasse muita glicose aqui, ela tenderia a sair porque estes transportadores so a favor do
gradiente de concentrao. Depois, a glicose fosforilada pode entrar em vrias em vias. Vamos
considerar s a gliclise. A glicose transformada em piruvato e, conforme foram as condies
de estado redox ou a maior ou menor quantidade de oxignio ou o facto de a cadeia
transportadora de eletres funcionar mais ou menos, o piruvato pode ter dois destinos: pode
ser convertido em lactato ou entrar dentro da mitocndria, sendo convertido em acetil-CoA,
que pode entrar no ciclo de Krebs, havendo depois a produo de NADH ou

, os

eletres passam para a cadeia de eletres com a produo de ATP, o que significa que a glicose
totalmente oxidada a dixido de carbono e gua.
Hoje vamos falar detalhadamente sobre a transio de glicose a piruvato e de piruvato
a lactato ou a acetil-CoA. Adicionalmente, o acetil-CoA pode ser utilizado para a sntese de
cidos gordos.
Agora vocs tem aqui as vrias vias ou os vrios destinos da glicose. A glicose entra
para dentro das clulas, fosforilada e, depois, a glicose-6-fosfato, se for convertida em
glicose ou fosfato, pode ser armazenada na forma de glicognio, pode ser transformada em
frutose-6-fosfato, ou a glicose-6-fosfato pode ser transformada em 6-fosfogliconato.
Na passagem de glicose a glicose-6-fosfato, as enzimas que fazem esta fosforilao no
so especficas da gliclise porque se se inibir a passagem de glicose a glicose-6-fosfato, no
se estar s a inibir a gliclise. Inibe-se tambm, por exemplo, a sntese de glicognio ou a
produo da ribose-5-fosfato.
Para termos mais ou menos glicose-6- fostato dentro das clulas, ela poder vir da
alimentao, da degradao do glicognio ou ento da gliconeognese, que a sntese de
glicose a partir de substratos que no so glcidos.
Numa situao de anaerobiose, o piruvato pode ser convertido em lactato, em alanina
ou a vrios outros aminocidos, em oxalo-acetato e daqui comea uma das possibilidades da
gliconeognese, em acetil-CoA, que pode ser utilizado na sntese de cidos gordos ou, se
entrar no ciclo de Krebs, leva oxidao completa da glicose.

Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

2013/2014

Dentro das vias associadas ao metabolismo dos glcidos, temos a gliclise. Todas as
reaes da gliclise ocorrem no citoplasma e so, ao todo, dez. Primeiro, a glicose convertida
em glicose-6-fosfato. A principal funo desta reao o impedimento da sada da glicose das
clulas, bem como a ativao da glicose de modo que esta possa entrar numa via metablica.
Em todas as vias metablicas, as molculas que nelas participam so, de alguma forma,
ativadas. Esta ativao pode ocorrer, por exemplo, por fosforilao, por adio da coenzima A,
por ligao a um nucletdeo. As molculas so sempre, de algum modo, ativadas e, neste caso,
a glicose ativada por fosforilao. Depois, a glicose-6-fosfato transformada em frutose-6fostato por uma isomerase, ou seja, isto uma isomerizao. Neste caso, a isomerizao de
uma aldose (glicose) em cetose (frutose). De seguida, a frutose-6-fosfato vai sofrer nova
fosforilao, passando assim a frutose-1,6-difosfato, que vai posteriormente ser quebrada ao
meio, formando duas trioses, cada uma monofosfatada. Uma das trioses o gliceraldedo-3fosfato e a outra a dihidroxiacetona-fosfato. A dihidroxiacetona convertida em
gliceraldedo-3-fosfato, pela fosfotriose isomerase, portanto, daqui para a frente sempre a
dobrar. O gliceraldedo-3-fosfato convertido em 1,3-difosfoglicerato, depois em 3fosfoglicerato, 2-fosfoglicerato, fosfoenolpiruvato e, finalmente, (enol)piruvato. Alm da
glicose, para que a gliclise possa ocorrer, ainda necessrio ADP, ATP e NAD+. Para alm
disso, a glicose-6-fosfato, a frutose-6-fosfato, a frutose-1,6-difosfato e o gliceraldedo-3-fosfato
so tambm intermedirios da Via das Pentoses-fosfato.
As reaes onde vai ocorrer gasto de ATP correspondem quelas em que vai haver um
investimento na ativao das molculas para que as reaes a seguir se possam dar. Temos,
depois, uma molcula em que, ao ser quebrada em duas, cada uma das partes j se vai
encontrar fosforilada, logo j est ativada.
O NAD um transportador de equivalentes redutores e, quando est na forma de
+

NAD , encontra-se oxidado e, na forma de NADH, encontra-se reduzido.


Ento, na gliclise, vai-se produzir NADH, a glicose oxidada e vai-se gastar NAD+, e
nesta mesma fase, em que se reduz o NADH, que se produz o ATP. Ento, existe uma parte em
que se investe ATP, outra em que a molcula quebrada em duas e h depois uma
interconverso, e, por ltimo, uma em que produzida energia. Esta seco da gliclise em
que h produo de energia que a seco em que h produo de ATP e de NADH.
Voltando agora primeira reao, esta uma reao considerada, em termos
fisiolgicos, irreversvel. Por isso, a reao ocorre sempre no sentido da glicose para a glicose6-fosfato. Em quase todas estas reaes da gliclise, ou as enzimas em si precisam de
magnsio ou o ATP e o ADP, para reagirem, precisam de estar complexados com o magnsio.
O que esta enzima, a hexocnase, tem de caracterstico o facto de ser inibida pelo seu
Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

2013/2014

produto, o que significa que quando a clula tem no seu interior grande quantidade de glicose6-fosfato, vai inibir a fosforilao da glicose em glicose-6-fosfato. Se este mecanismo no
existisse, quando houvesse um excedente de glicose na clula, ela voltaria a sair.
No entanto, este mecanismo de feedback negativo no compatvel com o
funcionamento do fgado. Por exemplo, se se comer muitos chocolates sucessivamente, o
fgado tem de ter a capacidade de retirar a glicose em excesso da corrente sangunea. Por
outro lado, em jejum, o fgado tem de ser capaz de repr e manter os nveis basais de glicose
no sangue. Ou seja, o facto de haver uma enzima que inibida pelo seu produto no
co1mpatvel com o funcionamento do fgado.
No fgado e nas clulas pancreticas, entre outras, a entrada da glicose independente
da insulina. No tecido adiposo, a entrada da glicose depende da insulina. Isto significa que a
expresso dos transportadores na membrana aumenta quando aumenta a insulina na corrente
sangunea. No fgado e nas clulas pancreticas isto no acontece. O msculo e o tecido
adiposo s expressam a hexocnase, enquanto que o fgado e as clulas pancreticas
expressam a hexocnase e a glicocnase.1 O que acontece que para as concentraes normais
de glicose, a hexocnase j est a trabalhar perto da sua velocidade mxima e a glicocnase
no. Das duas isoformas, a que tem maior afinidade para a glicose a que tem um Km menor,
logo a hexocnase. Deste modo, a glicocnase no fgado vai continuar a permitir a retirada de
glicose da corrente sangunea, uma vez que esta enzima, ao contrrio da hexocnase, no
inibida pela glicose-6-fosfato. A regulao da glicocnase faz-se pela quantidade de glicose na
corrente sangunea: quando esta elevada, a enzima ativada; quando a glicemia baixa, a
enzima inibida.
Prosseguindo agora na gliclise, a glicose-6-fosfato sofre uma isomerizao em
frutose-6-fosfato e, de seguida, a segunda fosforilao em frutose-1,6-difosfato, sendo gastas,
at esta etapa, duas molculas de ATP. Depois, havia a quebra de frutose-1,6-difosfato em
gliceraldedo-3-fosfato e dihidroxiacetona-fosfato e a converso desta no primeiro produto,
ficando-se assim com duas molculas de gliceraldedo-3-fosfato. Cada um dos gliceraldedos
vai ser fosforilado a 1,3-fosfoglicerato e, depois, a passagem deste a 3-fosfoglicerato com a
produo de duas molculas de ATP (uma por cada molcula de gliceraldedo-3-fosfato).
Ento, at esta etapa, j houve compensao das molculas de ATP que foram gastas para
ativar esta via. At este momento, houve tambm a produo de duas molculas de NADH.

Alguns autores consideram apenas hexocnases, enumerando-as para as diferenciar. Nestes casos, a glicocnase

corresponde hexocnase-4.

Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

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Depois, h a passagem de 3-fosfoglicerato a 2-fosfoglicerato, de seguida, a fosfoenolpiruvato


e, finalmente, a piruvato (ou cido pirvico), com a produo de mais duas molculas de ATP.
Em termos de rendimento energtico, h a produo de duas molculas de ATP, e em
termos de equivalentes redutores, so produzidas duas molculas de NADH.
O ATP produzido na fosforilao oxidativa, em funo do funcionamento da cadeia
transportadora de eletres, na gliclise ou em consequncia de alguma reaes do ciclo de
Krebs. Ou seja, o ATP pode ser formado quer por fosforilao nvel do substrato, quer dizer
que as reaes no esto associadas cadeia transportadora de eletres nem sntase de
ATP, quer por fosforilao oxidativa, onde vai ser consumido oxignio que depois convertido
em gua.
Ao longo da gliclise ocorrem duas reaes que podem ser chamadas fosforilaes ao
nvel do substrato. No caso da gliclise a produo de ATP pode ocorrer em situaes de
anaerobiose.
As reaes que ocorrem nos dois sentidos representam reaes reversveis e so as
mesmas da gliconeognese. Quando as setas na reao aparecem apenas num sentido
significa que a reao fisiologicamente irreversvel e quando se pretende produzir glicose h
enzimas que fazem exactamente a ao contrria a estas enzimas.
Se todas as enzimas tivessem ao reversvel no era possvel inibir a gliclise sem
inibir a gliconeognese. Assim, as enzimas de ao irreversvel so os pontos de regulao das
vias.
O primeiro ponto especifico de regulao da gliclise a cnase 1 da frutose-6-fosfato
que catalisa a reao frutose-6-fosfato + ATP frutose-1,6-bisfosfato + ADP uma vez que a
hexocinase no especifica da gliclise.
A enzima desidrogenase do gliceraldeido 3-fosfato tem vrios resduos de cistena e a
cistena na extremidade da cadeira tem grupos tiol e um destes grupos est no centro ativo
tendo a vantagem que o substrato se liga covalentemente. Os equivalentes redutores que se
perdem so captados pelo NAD que passa de NAD+ a NADH, ocorrendo uma oxidao do
substrato e uma oxidao do NAD. O NAD na sua forma oxidada est associado enzima mais
fortemente.
A fosforlise (muito importante no metabolismo do glicognio) semelhante a uma
hidrlise mas h quebra de uma ligao por entrada de um fosfato. O grupo carbonilo que
antes est ligado enzima passa a estar ligado ao cido fosfrico; assim o fosfato serve para
quebrar a ligao do substrato que entretanto foi oxidado enzima.
3 enzimas so responsveis pela regulao da gliclise mas apenas 2 so especficas
pata a gliclise.
Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

2013/2014

A passagem do 1,3-bifosfoglicerato para o 3-fosfoglicerato d-se pela ao de uma


cnase mas nos eritrcitos pode haver um mecanismo alternativo para esta passagem. Pode
ser uma mtase que passa o 1,3-bifosfoglicerato para 2,3-bifosfoglicerato e depois temos uma
fosfatase que tira o fosfato da posio 2 e passa a ser 3-fosfoglicerato.
Em termos de contas para a gliclise, no processo de gliclise normal h nesta fase
produo de 2 ATP que d para compensar os ATP gastos, enquanto que nesta via alternativa o
rendimento da gliclise nos eritrcitos poder ser 0 (no quer dizer que seja sempre). A
vantagem para os eritrcitos desta via alternativa que o 2,3-bifosfoglicerato diminui a
afinidade da hemoglobina para o oxignio ajudando a libertar o oxignio da hemoglobina. Esta
via no a predominante nos eritrcitos porque, uma vez que os eritrcitos no tm
mitocndrias no podem obter ATP pela cadeia transportadora de eletres e ento a produo
de ATP pela gliclise normal fundamental.
Se os eritrcitos no tm mitocndrias eles no conseguem transformar o NADH a
NAD+, ou seja a passagem de NAD reduzido a NAD oxidado no ocorre, mas tem de ocorrer
porque seno os eritrcitos deixam de produzir ATP. Este problema resolve-se com a
passagem de piruvato a lactato, em que o NADH oxidado. Isto tem sempre de ocorrer nos
eritrcitos e tambm ocorre noutras clulas onde no haja mitocndrias ou haja algum
problema no ciclo de Krebs ou no aceitador final (O2).
Recapitulando: da glicose at ao piruvato existem reaes reversveis e irreversveis (
na aula de gliconeognese, vamos ter a passagem de piruvato entre outros substratos a glicose
e as reaes reversveis vo ser as mesmas e as reao irreversveis no vo ser as mesmas, o
que significa que se se pretender ter a gliclise muito ativa ou a gliconeognese mito inibida
ou ao contrrio, teremos de simultaneamente estar a ativar as enzimas irreversveis da
gliclise e a inibir as enzimas irreversveis da gliconeognese).
Agora vamos ver como que o piruvato pode ser oxidado a acetilCOA.
A passagem de piruvato a lactato acontece em tecidos que no h mitocndrias ou
quando a disponibilidade de oxignio no acompanha a produo de piruvato. Mas o piruvato
pode ser oxidado a aceitlCOA para depois entrar no ciclo de krebs.
O piruvato produzido no citoplasma e depois entra por um transportador na
mitocndria onde oxidado. A enzima um complexo enzimtico e inicialmente o piruvato
descarboxilado e o que sobra da descarboxilao vai ficar ligado tiamina difosfato. Este
complexo enzimtico (estas trs atividades enzimticas distintas) ao conjunto todo chama-se
desidrogenase do piruvato que tambm o nome da primeira enzima que catalisa a primeira
reao de descarboxilao.

Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

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O piruvato descarboxilado, fica ligado tiamina difosfato e depois a tiamina difosfato


vai transferir o resto do piruvato para a alipoamida oxidada.
As molculas podem ser ativadas por fosforilao, por adio da coenzima A, por
ligao a um nucletdeo, como foi referido anteriormente, ento o que sobra da
descarboxilao do piruvato liga-se agora coenzima A para depois poder entrar no ciclo de
krebs. A ligao coenzima A d-se no segundo componente que diidrolipoil transacetilase.
Os tomos de enxofre passam a estar reduzidos, ou seja, ligados a hidrognios em vez de
estarem ligados um outro e os eletres e protes passam para o NADH. A vantagem de termos
um complexo enzimtico e dos intermedirios estarem sempre ligados s enzimas que no
se perdem pelo caminho tornando a reao muito mais eficiente.
Ento, o piruvato descarboxilado e uma descarboxilao oxidativa porque para
alm de haver uma descarboxilao tambm vai haver uma reduo do NADH e oxidao do
substrato.
Produz-se NADH e acetilCOA o que significa que se houver muita acetilCOA e muito
NaDH este complexo enzimtico vai ser inibido. O NADH e a acetilCOA inibem a converso de
piruvato a acetilCOA.
As enzimas podem ser reguladas por alosteria. Este complexo enzimtico pode ser
regulado por fosforilao e desfosforilao. Ela quando est desfosforilada est na sua forma
ativa e quando est fosforilada est na sua forma inativa.
O NADH e acetilCOA alm de inibirem diretamente a enzima por alosteria tambm a
inibem indiretamente porque vo ativar a cnase que vai fosforilar a enzima (quando est
fosforilada est inativa).

Ana Clara Oliveira e Andreia Preda

2013/2014