Modulo Proceso de Biorremediacion PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

Procesos de Bioremediacin
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE
358025 PROCESOS DE BIOREMEDIACIN
(Sinke & van Moll, 2011)
Autor:
Bio. PhD. RAL HERNANDO POSADA
BOGOT
2012

NDICE DE CONTENIDO
NDICE DE CONTENIDO ........................................................................................................... 2

NDICE DE CUADROS ............................................................................................................... 5
NDICE DE FIGURAS................................................................................................................. 6
ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO ............................................. 8
INTRODUCCIN GENERAL ...................................................................................................... 9
UNIDAD 1. CARACTERIZACIN DE CUERPOS Y CONTAMINANTES....................................... 12
CAPTULO 1. GENERALIDADES. ........................................................................................ 12
Leccin 1. Introduccin. ............................................................................................... 12
Leccin 2. Conceptos bsicos de bioremediacin. ....................................................... 15
Leccin 3. Caractersticas de los suelos: fsicas, qumicas y biolgicas. ....................... 18
Leccin 4. Caractersticas del agua: pH, aspectos fsicos, qumicos y aspectos
microbiolgicos............................................................................................................. 23
Leccin 5. Ventajas y desventajas de la bioremediacin. ............................................ 26
CAPTULO 2. CONTAMINANTES.................................................................................... 29
Leccin 6. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos
(alifticos aromticos=BTEX, PAHs). ............................................................................. 30
clorados (PCBs, TCE, PCE, insecticidas, herbicidas). ..................................................... 34
Leccin 8. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Compuestos
nitroaromticos (TNT y otros). ..................................................................................... 37
Leccin 9. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de metales pesados. 40
Leccin 10. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de compuestos
organofosforados, cianuros, fenoles. ........................................................................... 43
CAPTULO 3. PROCESOS QUE INTERVIENEN EN LA BIOREMEDIACIN. ........................... 46
Leccin 11. Interacciones microbianas......................................................................... 46
Leccin 12. Adaptacion, aclimatacin y bioacumulacin. ............................................ 49
Leccin 13. Biodisponibilidad y detoxificacin. ............................................................ 52
Leccin 14. Biodegradabilidad...................................................................................... 55
Leccin 15. Sorcin y biosorcin. ................................................................................. 58
UNIDAD 2. ESPECIES EMPLEADAS PARA LA BIOREMEDIACIN. .......................................... 62
CAPTULO 4. BACTERIAS Y ALGAS. .................................................................................... 63
Leccin 16. Introduccin. ............................................................................................. 63
Leccin 17. Metabolismo aerobio. ............................................................................... 66
2

Leccin 18. Metabolismo anaerobio. ........................................................................... 70

Leccin 19. Metabolismo de metales. .......................................................................... 74
Leccin 20. Aplicaciones. .............................................................................................. 77
CAPTULO 5. HONGOS Y LEVADURAS (MICORREMEDIACIN)......................................... 80
Leccin 22. Metabolismo.............................................................................................. 83
Leccin 23. Micorremediacin con micorrizas. ............................................................ 86
Leccin 24: Degradacin de plaguicidas, insecticidas y organoclorados. .................... 89
Leccin 25. Aplicaciones. .............................................................................................. 92
CAPTULO 6. PLANTAS (FITOREMEDIACIN). ................................................................... 96
Leccin 27. Metabolismo.............................................................................................. 99
Leccin 28. Clases. ...................................................................................................... 103
Leccin 29. Procesos involucrados en la fitoremediacion. ........................................ 108
Leccin 30. Aplicaciones. ............................................................................................ 112
UNIDAD 3. TCNICAS DE BIOREMEDIACIN. ..................................................................... 117
CAPITULO 7: ATENUACIN NATURAL. ........................................................................... 118
Leccin 31. Introduccin. ........................................................................................... 118
Leccin 32. Parmetros de diseo.............................................................................. 121
Leccin 33. Funcionamiento....................................................................................... 124
Leccin 34. Posibles costos......................................................................................... 128
Leccin 35. Parmetros de monitoreo y seguimiento. .............................................. 130
CAPTULO 8. BIOESTIMULACIN. ................................................................................... 134
Leccin 36. Introduccin ............................................................................................ 134
Leccin 38. Funcionamiento ....................................................................................... 139
CAPTULO 9. BIOAUMENTACIN. ................................................................................... 146
Leccin 41. Introduccin. ........................................................................................... 146
Leccin 43. Funcionamiento....................................................................................... 152
3


BIBLIOGRAFA ..................................................................................................................... 161

NDICE DE CUADROS
Cuadro 1: Principales caractersticas del agua.
24
Cuadro 2: Lmites permisibles para metales pesados, cianuros y contaminantes en agua de
acuerdo a la Universidad Autnoma de Mxico (UAM, 2000).
25
Cuadro 3: Ventajas y desventajas de la bioremediacin.
26
Cuadro 4: Ventajas y desventajas de la fitoremediacin con respecto a otros mtodos de
remediacin.
27
Cuadro 5: Comparativo de las tcnicas ex-situ de bioremediacin (Villaseor Roa, 2011). 28
Cuadro 6: Lmites mximos permisibles para hidrocarburos especficos en suelos segn la
norma oficial mexicana NOM -138-SEMARNAT/SS-2003 (SEMARNAT, 2005).
31
Cuadro 7: Lmites permisibles de Cadmio, Niquel y Plomo en suelos de Ecuador.
41
Cuadro 8: Resumen de los umbrales de contaminacin para elementos traza en la
comunidad andaluza.
41
Cuadro 9: Estndares de referencia para medir la biodegradabilidad en USA y Europa. 57
Cuadro 10: Gneros fngicos que contienen especies que degradan hidrocarburos
poliaromaticos (PAHs)(Al-Turki, 2009).
81
Cuadro 11: Degradacin de benzo(a)pyrenos por aislamientos fngicos (Juhasz & Naidu,
2000).
90
Cuadro 12: Ventajas y desventajas de la fitoremediacin (Delgadillo-Lpez et al., 2011). 98
Cuadro 13: Ejemplos de plantas que fitodegradan contaminantes orgnicos (DelgadilloLpez et al., 2011).
99
Cuadro 14: Mecanismos de fitoremediacin (Delgadillo-Lpez et al., 2011).
108
Cuadro 15: Tecnologas de fitoremediacin aplicables a diferentes tipos de
contaminantes1,2 (EPA, 2000).
110
Cuadro 16: Parmetros de monitoreo una vez implementada la fitoremediacin, adaptado
de EPA (2000).
111
Cuadro 17: Ejemplo de mtodos de remediacin. Comparacin de costos, tomado de
Delgadillo-Lpez et al. (2011).
113
Cuadro 18: Costo estimado de la fitoremediacin en el sitio Carswell.
114
Cuadro 19: Costos comparativos de diferentes tecnologas de remediacin por unidad de
suelo, adaptado de Adriano (2001).
128
Cuadro 20: Estructura qumica y biodegradabilidad (EPA, 1994b).
151

NDICE DE FIGURAS
Figura 1: Algunos tipos de estructura de suelo.
19
Figura 2: Movilidad de iones de acuerdo al pH del suelo.
20
Figura 3: Molcula de agua.
23
Figura 4: Estructuras, frmulas qumicas y pesos moleculares de 16 poluyentes PAHs de
acuerdo a la EPA (NRC, 1997).
31
Figura 5: Benceno, Tolueno, Etilbenceno y Xileno.
32
Figura 6: Estructura de los PCBs. Dos anillos fenilos rodeados por cloro.
34
Figura 7: Estructura qumica del DDT y DDE.
36
Figura 8: Algunos compuestos nitroaromticos naturales y sintticos (xenobiticos)
constituidos por un anillo bencnico como principal componente estructural.
38
Figura 9: Estructura qumica del Malation (Ortiz-Hernndez & Snchez-Salinas, 2010). 43
Figura 10: Grupo fenol y algunos derivados (Garric, 1979).
45
Figura 11: Adaptacin y evolucin en el humano.
49
Figura 12: Niveles crecientes de acumulacin de xenobiticos como DDT en tejidos
animales.
51
Figura 13: Interaccin de los metales pesados con las clulas de plantas (Navarro-Avio et
al., 2007).
54
Figura 14: Esquema de las reacciones de acuerdo a Torres Delgado & Zuluaga Montoya
(2009).
66
Figura 15: Ruta de degradacin (via catecol) de compuestos aromticos (Eweis et al.,
1998) utilizada por bacterias como Pseudomonas putida.
67
Figura 16: Transformacin bioqumica de los compuestos nitroaromticos (Gomez Cruz,
2009).
68
Figura 17: Rutas aerbicas oxidativas de degradacin del anillo aromtico de los
compuestos nitroaromticos.
68
Figura 18: Dehalogenacin reductiva de tetracloruro de carbono y tetracloroetileno.
70
Figura 19: Reacciones iniciales durante la degradacin anaerbica de hidrocarburos
saturados y aromticos.
71
Figura 20: Reduccin de los compuestos nitroaromticos.
72
Figura 21: Reduccin del nitrobenceno catalizada por la nitrobenceno reductasa (Tipo I) de
Pseudomoas pseudoalcaligenes.
73
Figura 22: Interaccin entre metales y microorganismos explicando la precipitacin,
acumulacin, produccin o liberacin de sustancias y participacin en el ciclo de
carbono. Adaptado de Ledin (2000).
75
Figura 23: Metabolitos intermediarios formados durante la degradacin aerobia de TNT
por Phanerochaete chrysosporium (Spain, 1995).
83
Figura 24: Transformaciones fungicas del benzo(a)pyreno.
84
Figura 25: Mecanismo enzimtico propuesto para Trichoderma spp. durante la
degradacin de cianuro (Argumedo-Delira et al., 2009; Ezzi & Lynch, 2005).
84
6

Figura 26: Degradacin de Fenantreno y Pireno por Cyclothirium sp. (da Silva, Esposito,
Moody, Canhos, & Cerniglia, 2004)
85
Figura 27: Mecanismos de tolerancia al estrs pormetales pesados desarrollado por la
simbiosis MA.
86
Figura 28: Esquema de la fitoacumulacin (EPA, 2000).
103
Figura 29: Esquema del proceso de rhizofiltracin (EPA, 2000),
104
Figura 30: Esquema del proceso de fitoextraccin y fitoacumulacin (EPA, 2000).
104
Figura 31: Esquema del proceso de fitovolatilizacin (EPA, 2000).
105
Figura 32: Esquema del proceso de fitodegradacin (EPA, 2000).
106
Figura 33: Esquema del proceso de rhizodegradacin (EPA, 2000).
107
Figura 34: Diseo experimental en Carswell (Forth Texas), tomado de EPA (2000)
114
Figura 35: Procesos presentes en la atenuacin natural (Field, 2005)
123
Figura 36: Rutas comunes de biodegradacin (ITRCWG & RTDF, 1999).
126
Figura 37: Tcnica de Landfarming, modificado de (EPA, 1994a).
126
Figura 38: Diagrama de flujo para evaluar la implementacin de la atenuacin natural,
adaptado de ITRCWG & RTDF, (1999).
132
Figura 39. Proceso de bioremediacin in-situ de agua y suelo.
137
Figura 40. Localizacin geogrfica del vertimiento EXXON VALDEZ en Alaska y foto del
proceso de bioremediacin.
140
Figura 41: Representacin grfica de un sistema de biopilas alargadas (Velasco & Volke
Seplveda, 2003)
146
Figura 42: Unidades de tratamiento (Ercoli, 2008).
148

ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

El contenido didctico del curso acadmico Procesos de Bioremediacin fue diseado por
Ral Hernando Posada A. quien es Bilogo, con un magister en microbiologa y doctorado
en Ecologa. Se ha desempeado como investigador y coordinador en la empresa pblica y
privada, tambin como docente universitario y consultor, al momento de la elaboracin
de este material, es docente de la Universidad Autnoma y la Corporacin Universitaria
Minuto de Dios. Para citar este material por favor hacerlo de la siguiente manera:
Posada, R.H (2012). Procesos de Bioremediacin. Mdulo didctico. Bogot: Universidad
Nacional Abierta y a Distancia UNAD.

INTRODUCCIN GENERAL
El desarrollo humano en las ltimas dcadas ha estado muy relacionado con la extraccin
de los recursos naturales, en el proceso se han creado sustancias qumicas no existentes
y/o de difcil descomposicin. Entre estas sustancias se encuentran muchos productos
para la agricultura contra enfermedades y plagas, ampliamente utilizados por muchos
aos en grandes extensiones de terreno en pases desde tercermundistas hasta del primer
mundo, lamentablemente solo hasta hace pocos aos se ha encontrado sus efectos
perjudiciales contra los humanos y el ambiente; esto sumado a su acumulacin en suelo y
aguas ha llevado a grandes problemas ambientales. Tambin podemos citar al petrleo y
sus derivados, los cuales aunque han sido la principal fuente de energa en los ltimos
aos, tambin se encuentran entre los productos ms txicos y de los cuales es muy
frecuente escuchar derrames en ambientes naturales, con graves consecuencias
ambientales.
Por otro lado el desarrollo de materiales resistentes y de poca reactividad qumica se ha
buscado como una propiedad para solucionar problemas relacionados con la conservacin
de alimentos, su transporte, conservacin de edificaciones y desarrollo de las ciudades;
esta propiedad ha llevado a que se acumulen grandes cantidades de basuras de carcter
permanente. A lo anterior le podemos sumar los residuos de minera, los vertimientos de
metales pesados tanto a las aguas como al suelo, ocasionando intoxicaciones a animales,
incluido el hombre y a vegetales tanto de la regin adyacente, como aguas abajo. Estos
minerales producto de la minera o utilizados en su extraccin pueden acumularse en los
tejidos y ocasionar tambin graves problemas de fertilidad y de desarrollo animal y
vegetal, motivo por el cual es importante controlarlos desde su origen.
Bajo este panorama tan desolador hay alternativas de remediacin cultural y natural y es
precisamente de este segundo a que hace referencia el presente curso. Microorganismos
como bacterias, algas y hongos u organismos ms grandes como setas, helechos, plantas
acuticas y rboles, o sus enzimas (en caso de ser muy altas las concentraciones
contaminantes), nos ayudan a reducir o eliminar estos compuestos txicos y perjudiciales
para el ambiente y los humanos. Con su ayuda ha sido posible remediar los problemas de
contaminacin en el proceso denominado bioremediacin, sin embargo son muchos los
esfuerzos infructuosos producto de la inexperiencia o del desconocimiento de los
procesos. Los procesos de bioremediacin estn en auge y constituyen un excelente
negocio, sin embargo es necesario conocer los detalles de su funcionamiento para poder
determinar cul de todos es el ms adecuado dependiendo del problema especfico y las
condiciones ambientales.
El conocimiento adquirido ha servido para desarrollar herramientas de inters
biotecnolgico como por ejemplo, el uso de las bacterias, o parte de ellas en procesos de
biomineria (extraccin de metales de inters usando bacterias), de bioproduccin de
9

sustancias de inters tales como bioplsticos o biopolmeros, energa (electricidad),

sustancias de inters farmacolgico, o enzimas que realizan procesos qumicos de una
forma ms eficiente y ms respetuosa con el medio ambiente que la industria qumica.
Este mdulo se estructura en 3 unidades, equivalente a 9 captulos y 45 lecciones, y a
travs de su contenido se fomentan competencias relacionadas con la comprensin de la
enorme importancia la bioremediacin y su nivel de complejidad, al mismo tiempo que
diferencia el campo de accin de su formacin acadmica del de otros programas que, de
igual forma, toman como objeto de estudio los tratamientos biolgicos, pero desde la
perspectiva del tratamiento de aguas residuales, como uno de los tratamientos
secundarios o terciarios.
En este documento se comenzar en la primera unidad con los conceptos bsicos del
ambiente, de los contaminantes, de bioremediacin. En la segunda unidad se vern en
detalle los organismos ms importantes involucrados en estos procesos, su metabolismo,
clases, procesos involucrados y sus aplicaciones. Finalmente en el tercer captulo se
retomarn las tcnicas ms importantes de bioremediacin existentes en la actualidad, el
proceso de seleccin del proceso ms adecuado, los parmetros a tomar en cuenta,
parmetros de diseo, funcionamiento y los posibles costos involucrados.
Existen abundante informacin en la web, sin embargo solo unas pocas pginas se pueden
consultar en forma acadmica, acerca de los procesos de bioremediacin en general o de
los procesos de contaminacin ambiental directamente relacionados, lamentablemente la
mayora se encuentran en ingls, entre ellas se encuentran:
La Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (EPA, por su sigla en ingls).
http://www.epa.gov/nscep/index.html
El grupo de discusin en bioremediacin.
http://www.bioremediationgroup.org/
Revista Internacional de contaminacin ambiental.
http://www.revistas.unam.mx/index.php/rica/index
Con este panorama de aplicacin y utilidad, dejamos las puertas abiertas al conocimiento
y la instruccin, con miras a la apropiacin del conocimiento y una correcta utilizacin
futura en Colombia o donde se requiera.
Bienvenidos!
10

UNIDAD 1
Nombre de la
CARACTERIZACIN DE CUERPOS Y CONTAMINANTES.
Unidad
CAPTULO 1
GENERALIDADES.
Leccin 1
Introduccin.
Leccin 2
Conceptos bsicos de bioremediacin.
Leccin 3
Caractersticas de los suelos: fsicas, qumicas y biolgicas.
Leccin 4
Caractersticas del agua: pH, aspectos fsicos, qumicos y aspectos

microbiolgicos.
Leccin 5
Ventajas y desventajas de la bioremediacin.
CAPTULO 2
CONTAMINANTES.
Leccin 6
Leccin 7
Leccin 8
Leccin 9
Leccin 10
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos

(alifticos, aromticos = BTEX, PAHs).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos
clorados (PCBs, TCE, PCE, pesticidas, herbicidas).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Compuestos
nitroaromticos (TNT y otros).
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de metales
pesados.
Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de compuestos
organofosforados, cianuros, fenoles.
CAPTULO 3
PROCESOS QUE INTERVIENEN EN LA BIOREMEDIACIN.
Leccin 11
Interacciones microbianas.
Leccin 12
Adaptacion, aclimatacin y bioacumulacin.
Leccin 13
Biodisponibilidad y detoxificacin.
Leccin 14
Biodegradabilidad.
Leccin 15
Sorcin y biosorcin.
11

UNIDAD 1. CARACTERIZACIN DE CUERPOS Y CONTAMINANTES.

CAPTULO 1. GENERALIDADES.
En el campo ambiental existen muchas disciplinas que entrecruzan conocimientos, tales
como biologa, microbiologa, ecologa, ingeniera ambiental, ingeniera sanitaria,
ingeniera agroecolgica entre otros y los conceptos acerca de los tpicos ambientales
difieren en mayor o menor medida en funcin de la formacin que se est brindando. Sin
embargo el ambiente es solo uno y aunque existen muchos conceptos existe una nica
realidad tangible, motivo por el cual es importante comprender claramente los conceptos
bsicos a utilizar en el transcurso del documento, de esta forma los estudiantes tendrn
nociones comunes y podrn comprender y diferenciar mejor los procesos naturales y
antrpicos. Se comenzar con los conceptos bsicos de bioremediacin, suelos, agua y los
beneficios de diferentes mtodos de bioremediacin; luego se continuar con los
diferentes tipos de contaminantes, sus propiedades, composicin y toxicidad, para
finalizar con los principales procesos que se deben de tener en cuenta en la
bioremediacin para que sea efectiva, cualquiera que sea el procedimiento a utilizar.
Leccin 1. Introduccin.
La bioremediacin, como su nombre lo indica (bio=vida, remediacin=arreglo o
remediacin) corresponde a el arreglo del ambiente con seres vivos, mas estrictamente
hablando, se refiere a los procesos de degradacin de contaminantes o transformacin de
ambientes contaminados con el uso de organismos vivos o sus derivados. Actualmente se
conoce como bioremediacin a los procesos que utilizan las habilidades de los organismos
vivos para degradar y/o transformar contaminantes ambientales tanto en ecosistemas
terrestres como acuticos hasta niveles que no representen peligro al humano o al
ambiente (Garbisu, Amzaga, & Alkorta, 2002).
Para la bioremediacin se utiliza el potencial metablico de los microorganismos
(bacterias, hongos y plantas) para transformar contaminantes en compuestos ms
simples, poco o nada contaminantes, con el fin de realizar una mineralizacin (Compuesto
menos txico + CO2 + H2O), una transformacin parcial, la humificacin de residuos o de
agentes contaminantes y una alteracin del estado redox de los metales y por lo tanto se
puede usar para limpiar terrenos o aguas contaminadas (Orosco Verdezoto & Soria Guano,
2008).
La biorremediacin se ha centrado en la explotacin de la diversidad gentica y
versatilidad metablica que caracteriza principalmente a las bacterias (bioremediacin),
as como tambin a los hongos (micorremediacin) y plantas (fitorremediacin) para
transformar contaminantes en productos inocuos o, en su defecto, menos txicos, que
pueden entonces integrarse en los ciclos biogeoqumicos naturales (Garbisu et al., 2002),
12

o para almacenar estos contaminantes en sus tejidos, retenerlos a nivel de suelo en forma
no perjudicial o volatilizarlos (fitoremediacin).
Estrictamente hablando, el uso de organismos vivos para el tratamiento de contaminantes
ambientales no siempre se refiere a bioremediacin, por ejemplo, un sistema de
tratamiento de efluentes o un sistema de compostaje no son biorremediacin, son
tratamientos biolgicos o mixtos para evitar la contaminacin, en cambio la
biorremediacin siempre se utiliza para revertir un dao. Sin embargo el compostaje es
una tcnica amplia y con muchas variaciones, si se utiliza como mtodo para revertir un
dao, empleando material extrado de un sitio contaminado en mezcla con material no
contaminado si se puede hablar de un uso para bioremediacin, pero como lo veremos
posteriormente, solo es aplicable en casos especficos. Tanto el tratamiento de residuos
como la biorremediacin usan microorganismos, pero lo distintivo de la biorremediacin
es la aplicacin de una tecnologa a posteriori, una vez que se ha producido el dao
ecolgico.
La naturaleza tiene mecanismos de defensa contra cualquier inclemencia (fsica, qumica o
biolgica), lo que se conoce como capacidad de resiliencia, pero esta defensa o tolerancia
tiene ciertos lmites, los cuales, de ser superados por factores externos producen daos
irreparables al ambiente. En muchas ocasiones los ecosistemas son tan seriamente
alterados, que los mecanismos de recuperacin naturales son demasiado lentos y hacen
que el ambiente demore prolongados periodos para recuperarse; lamentablemente y
afortunadamente son muchos los mecanismos de recuperacin, los cuales dependen de
las caractersticas fsicas, qumicas y biolgicas de cada sitio especfico, y en general del
ambiente, haciendo casi imposible hacer predicciones de los tiempos requeridos para su
recuperacin total.
Existen muchas referencias de fracasos al intentar aplicar modelos predictivos elaborados
para reactores a procesos de biorremediacin de aguas y suelos contaminados. Por
ejemplo, uno de los tratamientos ms habituales que se realizan cuando se aborda la
biorremediacin de una zona contaminada es la introduccin de una cepa o poblacin
microbiana que posea las rutas degradativas necesarias para metabolizar el contaminante
a eliminar (Garbisu et al., 2002), cuando en realidad el mejor mecanismo pudo haber sido
la fitoremediacin con especies vegetales especficas o una combinacin de tratamientos.
Gran parte de los elementos contaminantes son producidos de forma natural, pero
muchos de estos son de origen sinttico o artificial (hidrocarburos alifticos, aromticos,
como BTEX, PAHs; hidrocarburos clorados como PCBs, TCE, PCE, pesticidas y herbicidas;
compuestos nitroaromticos como TNT; metales pesados; compuestos organofosforados,
cianuros y fenoles), en cualquiera de los casos se convierten en contaminantes solo
cuando superan los lmites mximos permisibles, principalmente para la salud humana, de
acuerdo a la legislacin ambiental de cada pas, siendo diferente los niveles permisibles
13

para un mismo contaminante en suelos y en aguas, as como entre diferentes pases, los
cuales se vern con cada contaminante en este mismo captulo.
Muchos organismos son capaces de degradar compuestos o sustancias contaminantes
gracias a que su estructura qumica es similar a la de otras sustancias de las cuales se
alimenta naturalmente como fuente de carbono, este potencial reposa en su dotacin
gentica, la cual muchas veces es desconocido, de esta manera el organismo adapta su
metabolismo para degradar sustancias nocivas al ambiente. En ambientes severamente
contaminados la ausencia de otras fuentes de nutrientes obliga a los microorganismos
mejor dotados a degradar los contaminantes, pero debido a que no es su alimento
favorito o por encontrarse en muy altas concentraciones, puede repercutir en el
funcionamiento de los microorganismos.
En un ambiente sbitamente contaminado, las concentraciones de la sustancia a degradar
generalmente son muy altas y los organismos deben de pasar por un proceso de
aclimatacin o adaptacin a las nuevas condiciones para poder sobrevivir e iniciar su
proceso de biodegradacin, o esperar largos periodos a que los niveles de contaminacin
disminuyan, motivo por el cual el inicio de este proceso de forma natural es demorado y la
descontaminacin puede ser un proceso prolongado. Gran parte de los microorganismos
aislados e incluso algas deben pasar por este proceso en condiciones de laboratorio, para
probar sus lmites de tolerancia y su capacidad como biodegradadores de cada elemento,
esto se hace mediante aproximaciones a concentraciones crecientes de los diferentes
contaminantes, para posteriormente poder ser utilizados en condiciones de campo. Caso
contrario suele suceder con las plantas superiores, las cuales se pueden adaptar a las
condiciones del entorno en zonas contaminadas y al no incorporar los contaminantes en
su metabolismo, utilizan diferentes mecanismos para aislar o retener los contaminantes
en sus tejidos.
Muchos materiales nunca lograran ser degradados, pero para aquellos que si, existen
diferentes mtodos para lograr este objetivo dependiendo de los contaminantes y las
herramientas disponibles. La bioremediacin ha venido ocupando un lugar cada vez ms
importante al respecto, debido principalmente a los costos implicados, la eficacia de los
procesos y los subproductos del tratamiento. No se pueden descartar las limitantes a los
procesos biolgicos y hace falta mucho conocimiento al respecto, pero es una alternativa
poco invasiva y ambientalmente amigable con el entorno.
14

Leccin 2. Conceptos bsicos de bioremediacin.

En la primera leccin ya abarcamos el concepto de bioremediacin y lo diferenciamos de
los tratamientos biolgicos o mixtos, en done se hace claridad que la bioremediacin se
refiere a la recuperacin a posteriori y no constituye un programa preventivo.
Sin embargo aunque no es tema de la bioremediacin, se hace necesario aclarar que son
los tratamientos primarios y secundarios, los cuales suelen citarse frecuentemente en los
tratamientos de residuos; y es que cuando se habla de tratamiento de residuos
generalmente se habla de tratamientos de primario a terciario, en donde el tratamiento
primario corresponde a procedimientos mecnicos de separacin de los desechos y el
secundario corresponde generalmente a la remocin de materia orgnica por procesos
qumicos y/o biolgicos. El objetivo principal de los tratamientos primarios es remover
aquellos contaminantes que se pueden sedimentar, como slidos, arenas, arcillas o
aquellos que pueden flotar como las grasas, mientras el objetivo principal de los
tratamientos secundarios es la reduccin de la Demanda Bioqumica de Oxgeno (DBO).
La demanda bioqumica de oxgeno o DBO es un trmino que sirve para explicar cuanto
material es susceptible de ser consumido o destruido por microorganismos, debido a que
son estos los que consumen bioqumicamente los residuos; generalmente es evala en un
periodo de 5 das, por eso la convencin ms frecuentemente encontrada es DBO5. Existe
un trmino muy asociado, la Demanda Qumica de Oxgeno (DQO), la cual es diferente al
DBO y corresponde a la cantidad de materia que es posible ser consumida por mtodos
qumicos, es decir que incluye a la DBO y por lo tanto es ms alta que sta; incluyendo lo
que pueden degradar los organismos vivos y algn otro material degradable por procesos
no biolgicos.
Al realizar bioremediacin existen dos grandes grupos de tratamientos, dados por su
nomenclatura en latn y son ex-situ e in-situ y se refieren al lugar de tratamiento. Insitu se refiere al tratamiento en el sitio donde existe el problema del contaminante, bien
sea una mina y sus alrededores, como los cuerpos de agua, ros o lagos que sean
afectados, en este proceso el material a tratar no es removido mecnicamente del sitio
donde est depositado, solo por fenmenos naturales; consiste en estimular la actividad
de la poblacin microbiana degradadora nativa del suelo, por adicin y manejo de
nutrientes y oxgeno. Mientras ex-situ se refiere a los tratamientos en los cuales el
material a tratar, bien sea agua, suelo, turba, entre otros, es llevado de forma voluntaria al
sitio donde se va a realizar el tratamiento, generalmente es una planta de procesamiento
o un sitio preparado con este fin.
Existen varios modos de biorremediacin in-situ: forma aerbica, forma anxica o
anaerbica y cometablica. La primera se refiere al requerimiento de oxgeno para que se
desarrolle, ha demostrado que es la ms eficiente para reducir niveles de contaminantes
15

alifticos (como hexano) e hidrocarburos aromticos del petrleo (como benceno y

naftaleno) muy frecuentes en gasolinas y gasoil. Los modos anaerbicos o anxicos son los
que no requieren oxgeno para ser desarrollados, a cambio se usa otro aceptor de
electrones como los metales, a menudo usados para la remediacin de otros compuestos
tales como solventes clorados, pero generalmente son ms lentos que los aerbicos
rompiendo los hidrocarburos del petrleo (Manacorda & Cuadros, 2005).
El proceso denominado cometabolismo cooxidacin consiste en la transformacin
de aquellos compuestos orgnicos, que no pueden ser utilizados como fuente de carbono
energa por los microorganismos, pero pueden ser potencialmente degradados por
enzimas generadas por los mismos, para metabolizar otras sustancias (Pellini, 2006).
El uso del trmino cometabolismo se encuentra en discusin en el mbito cientfico, ya
que algunos autores utilizan este trmino slo si el cosustrato se encuentra presente
durante la metabolizacin del compuesto secundario (aquel que no aporta nutrientes y
energa para el crecimiento). Sin embargo, el trmino cometabolismo, ha sido el ms
ampliamente empleado para describir el proceso donde un compuesto es transformado
fortuitamente, sin ser utilizado como sustrato para el crecimiento como fuente de
energa. Generalmente, los productos del cometabolismo son metabolitos subproductos
parcialmente oxidados transformados, que pueden ser utilizados por otros
microorganismos y de esta forma continuar hasta la degradacin completa del compuesto
contaminante (Pellini, 2006).
Permeabilidad es un trmino empleado para referirse a la capacidad del suelo de retener
un determinado lquido sin alterar su estructura interna, siendo una superficie
impermeable aquella que no permite el paso de agua y permeable aquella que si lo
permite. En bioremediacin se utiliza con la permeabilidad al agua o a diferentes
materiales txicos que se encuentran en forma lquida y es muy importante con respecto
a los cuerpos de agua para consumo.
Se denomina migracin a todo desplazamiento de cualquier contaminante que se produce
desde un lugar de origen a otro destino y lleva consigo un cambio de la ubicacin. Muy
relacionado est el trmino lixiviacin, el cual conserva el significado ecolgico que indica
el desplazamiento hacia los ros y mares de los contaminantes, generalmente no en forma
superficial sino a travs de las capas del suelo.
Algunos trminos se siguen utilizando por su nombre en ingls, como:
Landfarming o laboreo del terreno: La tcnica consiste en dispersar el contaminante a
biodegradar sobre la capa arable (15-20 cm superficiales) de un terreno destinado a tal fin
(Manacorda & Cuadros, 2005).
16

Biosparging: es definida por Wilson (1999) como un mtodo in-situ que combina el efecto
de la ventilacin y la adicin de nutrientes con la utilizacin de microorganismos
autctonos para degradar compuestos orgnicos absorbidos por el suelo en la zona
saturada (Torres Rodrguez, 2003).
Compost o composta: es el producto que se obtiene del apilamiento y descomposicin de
materia orgnica de forma controlada. La composta se forma de desechos orgnicos, que
en bioremediacin se mezclan con los productos contaminantes para lograr su
descomposicin por procesos aerbicos.
Bioventeo: Consiste en la inyeccin de aire y oxgeno al suelo para estimular la
biodegradacin aerbica del contaminante. El proceso de bioventeo estimula la actividad
biolgica in-situ y promueve la biorremediacin (Manacorda & Cuadros, 2005).
Biofiltracin: Es un proceso que se basa en la entrada de aire contaminado a birreactores
en los cuales la flora microbiana convierte los contaminantes orgnicos voltiles en
dixido de carbono, agua y biomasa (Torres Rodrguez, 2003).
Lodo: es una mezcla de agua, microorganismos y nutrientes, con residuos sedimentables
(Riser-Robers, 1996), suele utilizarse en plantas de tratamiento para los procesos finales.
La concentracin de microorganismos es una medida de la poblacin de hongos, bacterias
y/o algas, generalmente se expresa en unidades por gramo, mililitro o centmetro cbico.
Inhibicin: es la interrupcin de alguna respuesta, en bioremediacin suele usarse para el
crecimiento o reproduccin de los organismos, bien sean microscpicos o macroscpicos.
Biodegradar: se refiere al proceso de descomponer un compuesto en los elementos
qumicos que lo conforman, debido a la accin de agentes biolgicos bajo condiciones
ambientales naturales.
Biodisponibilidad: es la disponibilidad de una sustancia a ser degradada por los
organismos vivos, un fenmeno que afecta de forma negativa a la biodisponibilidad de los
contaminantes es el envejecimiento o ageing que se define como la prdida de la
biodegradabilidad de los compuestos a lo largo del tiempo en el suelo (aunque la
poblacin microbiana mantenga intacto su potencial catablico), el cual es ms
importante en suelos con elevado contenido en materia orgnica (Torres Delgado &
Zuluaga Montoya, 2009).
17

Leccin 3. Caractersticas de los suelos: fsicas, qumicas y biolgicas.

El suelo es algo ms que la superficie donde sembramos las plantas y donde se construyen
los edificios, el suelo es un sistema dinmico, un sistema vivo con muchos componentes
de tipo fsico, qumico y biolgico, en cuyo interior todos los detalles de su composicin
afectan y son afectados por el entorno y en el cual todos los componentes interactan
para mantener un equilibrio dinmico. A continuacin se nombraran secuencialmente y
en negrilla las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas ms importantes.
La porosidad corresponde a los espacios del suelo llenos de aire y/o agua. Los macroporos
no retienen el agua contra la fuerza de la gravedad, y por lo tanto son los responsables del
drenaje y la aereacin del suelo; los microporos son los que retienen agua, parte de la cual
es disponible para las plantas. La porosidad total o espacio poroso del suelo, es la suma de
macroporos y microporos. Las caractersticas del espacio poroso, dependen de la textura y
la estructura del suelo (Rucks, Garca, Kapln, Ponce De Len, & Hill, 2004).
La textura es la proporcin de arena, limo y arcilla. Se dice que un suelo tiene una buena
textura cuando la proporcin de los elementos que lo constituyen le dan la posibilidad de
ser un soporte capaz de favorecer la fijacin del sistema radicular de las plantas y su
nutricin. Cuando en la textura domina la fraccin arcilla, en la porosidad total del suelo
hay muchos ms micro-poros que cuando domina la fraccin arena. Lo anterior se
comprende claramente, si se piensa que entre las microscpicas partculas de arcilla los
espacios son pequeos; en cambio entre las partculas de arena los poros son mayores
(Rucks et al., 2004).
La textura tiene un impacto directo sobre las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del
suelo, ya que la mayora de los procesos de bioremediacin la realizan los
microorganismos y la actividad de estos predomina en las arcillas, y por consiguiente
influye en las tecnologas de remediacin (Pellini, 2006).
La estructura del suelo es el arreglo de las partculas del suelo, siendo las partculas, no
solo la arena, limo y arcilla, sino tambin los agregados o elementos estructurales que se
forman por la agregacin de las fracciones granulomtricas (Rucks et al., 2004). En la
Figura 1 se muestran algunos tipos de estructura; la estructura granular o migajosa
presenta unidades esfricas o casi esfricas, con bordes y caras ms o menos
redondeados. Los contactos entre estas unidades se dan en pocos puntos y queda mucho
espacio entre ellos. Si las unidades mayores son desarmadas, se ve que estn
compuestas por unidades ms pequeas que poseen las mismas caractersticas. Se
desprende de lo anterior que las partculas secundarias tienen porosidad interna cosa
que no ocurre en los granos de arena (Rucks et al., 2004).
18

Figura 1: Algunos tipos de estructura de suelo.

A. Prismtica, B. Columnar, C. Bloques angulares, D. Bloques subangulares, E. Laminar, F.
Granular (Rucks et al., 2004).
La permeabilidad es la facilidad o dificultad con la que un lquido puede fluir a travs de
un medio permeable. La permeabilidad de un suelo es uno de los factores que controla la
efectividad de tecnologas in-situ. En general, una baja permeabilidad en el suelo
disminuye la efectividad de la mayora de las tecnologas de remediacin (Pellini, 2006).
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que afecta la
actividad metablica de los microorganismos y la tasa de biodegradacin. Generalmente,
las especies microbianas crecen a intervalos de temperatura entre 20 y 30 C, decreciendo
la biodegradacin por desnaturalizacin de las enzimas a temperaturas superiores a 40 C
e inhibindose a inferiores a 0C. Aunque en general la velocidad de degradacin aumenta
con la temperatura, alcanzando en el compostaje los 65 oC (Orosco Verdezoto & Soria
Guano, 2008; Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
El carbono es la fuente principal de alimento y se relaciona con casi todas las propiedades
edficas, generalmente se le conoce como materia orgnica y generalmente es el
contaminante; un artculo muy completo que relaciona el carbono orgnico con las
propiedades del suelo fue publicado por Martnez H, Fuentes E, & Acevedo H. (2008).
Entre los macro-elementos o elementos que deben estar en grandes cantidades para el
desarrollo normal de las plantas y microorganismos estn el fsforo y el nitrgeno, el
primero de los cuales se suele fijar a los suelos, mientras el segundo generalmente es
bastante abundante en el suelo. Ambos elementos son importantes por formar parte de
todos los tejidos de microorganismos y plantas. La dosificacin de nitrgeno y fsforo se
realiza en funcin de la concentracin del contaminante C:N:P (100:10:1)(Torres Delgado
19

& Zuluaga Montoya, 2009). La fuente de fsforo interviene en la formacin de

compuestos energticos (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
Otros nutrientes esenciales como el Ca2+, Na+, Fe2+ y SO42- estn presentes en cantidades
suficientes en el suelo; mientras que el calcio, magnesio, potasio, titanio, manganeso,
sodio, nquel y azufre se presentan en pequeas cantidades. Adems es importante
destacar que la accin de los nutrientes inorgnicos puede estar limitada debido a la
interaccin qumica con los minerales del suelo (el amonio se puede unir a las arcillas por
intercambio catinico y el fosfato puede unirse y precipitar con iones calcio, hierro y
aluminio) (Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
El pH es importante para el desarrollo de los organismos degradadores. En consecuencia,
cuanto mayor sea la diversidad de microorganismos existentes, potencialmente mayor
ser el rango de tolerancia. No existen unas condiciones preestablecidas que sean ptimas
en todos los casos; en general, el pH ptimo para las bacterias hetertrofas es neutro (pH
6-8), mientras que es ms cido para los hongos (pH 4-5). El pH ptimo establecido para
procesos de biodegradacin es neutro (pH 7,4-7,8) (Dible & Bartha, 1979; Orosco
Verdezoto & Soria Guano, 2008). As mismo el pH tambin afecta directamente en la
solubilidad del fsforo y en el transporte de metales pesados en el suelo, entre ms cido
el suelo, mas soluble es el fsforo (Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009). El pH
tambin influye en la disponibilidad de los denominados metales pesados (Figura 2).
Figura 2: Movilidad de iones de acuerdo al pH del suelo.

(http://reformaminera.files.wordpress.com/2008/05/metales-pesados.pdf)
20

La humedad es el contenido de agua en el suelo, es importante ya que acta como medio

de transporte de nutrientes y oxigeno a la clula y es parte del protoplasma microbiano,
un exceso de humedad produce deficiencia de oxgeno, un dficit impide el desarrollo de
los microorganismos (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008). La humedad del suelo
puede limitar de forma severa la biodegradacin, fundamentalmente en suelos
superficiales afectados por oscilaciones importantes en el contenido de agua. No obstante
el nivel ptimo de humedad depende de las propiedades de cada suelo y el tipo de
contaminacin (Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
Los metales y sales en altas concentraciones intoxican a los microorganismos. En el caso
de los metales se puede aumentar el pH para inmovilizar el metal. Si se tienen suelos muy
contaminados con metales o sales se debera diluir con suelo limpio para reducir la
concentracin (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
El oxgeno en el suelo no es continuo y est localizado en los poros separados por los
slidos, este aire tiene generalmente una humedad ms alta que la de la atmsfera. El
contenido de anhdrido carbnico (CO) es por lo general ms alto y el del oxgeno ms
bajo que los hallados en la atmsfera. La mayor parte de los contaminantes son
degradados con mayor extensin y rapidez de forma aerbica (O2 como aceptor final de
electrones), ya que en ausencia de O2, y en presencia de aceptores de electrones
alternativos (NO3-, SO42-, CO2, Mn4+ y Fe3+) los contaminantes pueden ser degradados,
pero con unas tasas de biodegradacin muy inferiores a las aerbicas (Torres Delgado &
Zuluaga Montoya, 2009).
La diversidad de microorganismos ayuda a que exista un mayor potencial de degradacin
de sustancias txicas, bien sea por la produccin de enzimas o biosurfractantes o por la
presencia de protenas de superficie (molculas de adhesin, receptores y/o
transportadores de contaminantes) que puedan facilitar la degradacin de los
contaminantes. Suelos con mayor diversidad de organismos es ms factible que se pueda
desarrollar el proceso de bioremediacin ms fcilmente en forma natural. Aunque la
porcin de los organismos vivos solamente ocupan un 1% del suelo, son los responsables
en la mayora de los casos de los procesos de biodegradacin en todo el suelo.
Entre los organismos a los que se ha encontrado propiedades de degradacin de
contaminantes se encuentran hongos macroscpicos y microscpicos, bacterias, algas,
micobacterias y plantas, y la presencia de uno no impide la presencia de otros, incluso en
ocasiones trabajan de manera sinergstica; de tal manera que el trabajo conjunto puede
ser ms eficiente que el trabajo de un solo organismo, como suele suceder con plantas y
microorganismos a nivel de raz, por lo tanto entre ms diverso sea un sistema, mayor
posibilidad tiene de degradar diversos contaminantes.
21

Finalmente, es importante resaltar las propiedades emergentes del sistema suelo, las
cuales son producto de las interacciones entre todos sus componentes, entre estas
propiedades emergentes se encuentran la capacidad de bioremediacin, biosorcin o la
capacidad de resiliencia o resistencia ante impactos externos.
22

Leccin 4. Caractersticas del agua: pH, aspectos fsicos, qumicos y aspectos

microbiolgicos.
En 1781 el cientfico ingls Henry Cavendish (1731 1810) descubri que el elemento
agua no es un elemento simple, sino complejo y susceptible de descomponerse en
oxgeno e hidrgeno. Pocos aos ms tarde el qumico francs Gay-Lussac (1778 1850)
confirm la teora de Cavendish, al lograr obtener agua a partir de la mezcla de dos
volmenes de hidrgeno con uno de oxgeno. El hecho vendra a confirmar que el agua es
un compuesto qumico, un conjunto de dos molculas formadas a su vez por
encadenamiento de dos tomos de hidrgeno con uno de oxgeno, de ah la formula que
se emplea para designarla sea H2O.
Las propiedades del agua pesada (con deuterio) difieren ligeramente de las del agua
ligera, pero ambas poseen un momento elctrico que se manifiesta en sus propiedades
fsicas y elctricas, es por ellos que el agua es del tipo de lquidos polares. Se adopta para
su representacin, un modelo triangular que debido al carcter electronegativo del
oxgeno el ngulo que forman los enlaces H-O-H es de 105o aproximadamente.
La estructura del agua depende de su estado fsico, el estado gaseoso (vapor) corresponde
exactamente a la formula H2O y, en especial al modelo angular indicado (Figura 3a). Los
estados condensados (lquido y slido) son ms complicados y esta complicacin explica
sus propiedades anormales; en estado slido, la disposicin elemental consiste en una
molcula de agua central y cuatro perifricas, tomando el conjunto la forma de un
tetraedro (Figura 3b).
A.
B.
Figura 3: Molcula de agua.
A. en estado lquido (tomado de http://www.kalipedia.com/ecologia/tema/graficosmolecula-agua.html?x1=20070417klpcnatun_87.Ees&x=20070417klpcnatun_97.Kes), B.
En estado slido (tomado de http://www.diasporaweb.es/13.html).
En el agua en estado lquido hay una asociacin entre varias molculas por enlaces
especiales llamados enlaces de hidrgeno: cada tomo de hidrgeno de una molcula de
23

agua, se une al tomo de oxgeno de la molcula vecina; en el espacio la estructura es

tetradrica; al respecto hay una animacin muy sencilla en la direccin:
(http://www.ucm.es/info/diciex/proyectos/agua/estructura_moleculas.html).
En
el
Cuadro 1 se pueden observar las principales caractersticas del agua.
Cuadro 1: Principales caractersticas del agua.
Peso molecular (g/mol)
Temperatura crtica (oC)
Punto de ebullicin a 1 atmsfera de presin (oC)
Punto de fusin a 1 atmsfera de presin (oC)
Conductividad elctrica (Siemens/m) a 20oC en estado puro.
Agua con sales (electrolitos) posee mayor CE, a mayor temperatura mayor CE
Densidad a 0oC en estado lquido (g/cm3)
Densidad de agua de mar (35 g/dm3) a 0oC en estado lquido.
Conforme la temperatura aumenta o disminuye a partir de los 4oC, disminuye la
densidad.
Capacidad calorfica a 15oC (cal/mol oC)
Calor de vaporizacin (Kcal /mol)
Calor especfico (cal/g)
Calor de fusin (Kcal/mol)
Estos valores, relativamente muy elevados, hacen que el agua sea muy buena
termorreguladora.
Viscosidad cinemtica a 0oC (m2/s)
Dificultad que ofrece un lquido para que algo se mueva a travs de l, si aumenta
la temperatura, entonces disminuye la viscosidad, si existe concentracin de sales,
entonces aumenta. Con un pequeo aumento de presin y baja temperatura,
disminuye la viscosidad (comportamiento anmalo).
Turbidez (mg /L SiO2, m de disco Secchi, JTU, UNF)
Dificultad en la transmisin de la luz, producida por partculas coloidales y en
suspensin. La transparencia depende de la longitud de onda de la luz que la
atraviesa, rayos UV pasan fcilmente, rayos IF penetran poco, el agua absorbe
bastante el anaranjado y el rojo, de all la coloracin verde-azul.
18.16
374.1
100
0
4.2 * 10-6
0.99987
1.0000
0.95838
1.0281
18.0
9.719
0.999
1.435
1.792
La gran estabilidad del agua en la naturaleza, sumado a sus propiedades elctricas y a su

constitucin molecular, le confieren el poder de disolver variados compuestos minerales,
productos orgnicos, de mezclarse con lquidos miscibles o inmiscibles, as tambin el de
disolver un buen nmero de gases. La disolucin de slidos (sales) esta favorecida por las
reacciones cido-base, las reacciones de oxidacin-reduccin, la hidratacin y la hidrlisis.
La velocidad de disolucin depende de factores, tales como la concentracin real en el
agua, la superficie de contacto que aumenta al triturar y al mezclar, la agitacin, el tiempo
y la temperatura puesto que a mayor temperatura, mayor velocidad de disolucin.
24

Los lmites permisibles para muchos elementos txicos o no, disueltos en el agua
dependen del uso que se le piense dar al agua y del elemento en cuestin, como se puede
observar en el Cuadro 2.
Cuadro 2: Lmites permisibles para metales pesados, cianuros y contaminantes en agua de
acuerdo a la Universidad Autnoma de Mxico (UAM, 2000).
Entre los elementos importantes para el crecimiento algal, en particular Chlorella vulgaris
(alga bioremediadora), se encuentra el contenido de P y N, as como su relacin
estequiomtrica, los cuales determinan su tasa de crecimiento, siendo ambos elementos
limitantes del crecimiento y no se pueden considerar por separado (Aguirre Ramrez,
Palacio Baena, Correa Ochoa, & Hernndez Atilano, 2007).
25

Leccin 5. Ventajas y desventajas de la bioremediacin.

Se pueden hacer varios comparativos respecto a las ventajas y desventajas de la
bioremediacin. Por ejemplo se puede comparar la bioremediacin con respecto a los
mtodos mecnicos de remediacin, tambin entre la fitoremediacin y los otros
mtodos de bioremediacin; cualquiera que sea la comparacin son ms las ventajas que
las desventajas tanto econmicas como ambientales.
Comenzaremos con el punto de vista ms general, comparando la bioeremediacin con
los mtodos clsicos de remediacin. A continuacin en el Cuadro 3 se presenta un
compendio de las ventajas y desventajas de la bioremediacin a partir de varios autores
como (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008; Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009;
Villaseor Roa, 2011).
Cuadro 3: Ventajas y desventajas de la bioremediacin.
Ventajas
Generalmente solo origina cambios fsicos
menores sobre el medio.
Permite la revegetalizacin natural.
Puede ser til para retirar algunos de los
compuestos txicos del petrleo.
Ofrece una solucin ms simple y completa que
las tecnologas fsicas o qumicas, como la
incineracin utilizada para remover sustancias
txicas del suelo.
Es menos costosa que otras tecnologas.
Puede aplicarse in-situ o ex situ.
Es ms efectiva que otros mtodos, pudiendo
lograr la detoxificacin completa.
Como subproducto se obtiene un suelo til
para la agricultura.
Apenas se generan residuos y los que se
generan en su mayora no son txicos.
Es un proceso natural, aceptado por la opinin
pblica y normativas medioambientales.
Mientras que los tratamientos fsicos y buena
parte de los qumicos estn basados en
transferir la contaminacin entre medios
Desventajas
Para muchos tipos de vertidos su efectividad no
ha sido determinada.
De muy difcil aplicacin en el mar.
El tiempo necesario para la actuacin es largo.
Su implementacin es especfica para cada
lugar contaminado; requiriendo de diversos
factores del sitio como la presencia de
microorganismos activos y condiciones de
crecimiento adecuadas.
El seguimiento y control de la velocidad y/o
extensin del proceso son dispendiosos.
Dificultad para predecir el funcionamiento de
este tratamiento.
El nivel de contaminantes no debe ser txico
para los microorganismos; en el caso de
hidrocarburos debe ser <30%.
Es aplicable casi solo a compuestos
biodegradables.
Es difcil predecir el tiempo de requerido para
un proceso adecuado.
Es difcil de extrapolar condiciones del
laboratorio o planta piloto al sitio final a
remediar.
La biodegradacin incompleta puede generar
intermediarios metablicos inaceptables, con
un poder contaminante similar o incluso
26

gaseoso, lquido y slido, en la biorremediacin

se transfiere poca contaminacin de un medio
a otro; lo que ocasiona es su degradacin final.
Cuando se utiliza correctamente no produce
efectos adversos significativos.
superior al producto de partida y algunos

compuestos contaminantes son tan resistentes
que pueden incluso inhibir la biorremediacin.
Requiere investigacin multidisciplinaria para
determinar y optimizar las condiciones de
biorremediacin.
No requiere de equipamiento especializado Su
optimizacin
requiere
informacin
para su aplicacin, es poco invasiva y sustancial acerca del lugar contaminado y las
generalmente no requiere componentes caractersticas del vertido.
estructurales o mecnicos que signifiquen una
amenaza para el medio.
Conociendo las ventajas y desventajas de la bioremediacin en comparacin con los

tratamientos mecnicos, fsicos y qumicos, se puede observar mejor las ventajas y
desventajas solamente de la fitorremediacin en comparacin con otros mtodos de
remediacin (Agudelo Betancur, Macias Mazo, & Surez Mendoza, 2005)(Cuadro 4).
Cuadro 4: Ventajas y desventajas de la fitoremediacin con respecto a otros mtodos de
remediacin.
Ventajas
La fitorremediacin utiliza las capacidades
existentes de las plantas y de los sistemas que
apoyan para limpiar los suelos, siendo ms
rentable
que
los
mtodos
usados
tradicionalmente para la recuperacin de
suelos contaminados.
La fitorremediacin implica menos trabajo y no
perturba los alrededores naturales del sitio de
la contaminacin.
Los metales absorbidos por las plantas, pueden
ser extrados de la biomasa cosechada y
despus ser reciclados.
Puede reducir la entrada de contaminantes en
el ambiente, porque los contaminantes quedan
atrapados en las plantas.
Se puede utilizar para limpiar una gran
variedad de contaminantes, por su capacidad
de absorcin de estos en sus races.
Es una buena manera de hacer uso de los
recursos naturalmente existentes.
Desventajas
La fitorremediacin trabaja lo mejor posible
cuando los contaminantes estn al alcance de
las races de las plantas, tpicamente de tres a
seis pies de profundidad para las herbceas y
10 a 15 pies para los rboles.
El metal pesado el contaminante emplea el
ciclo natural de plantas y por lo tanto toma
tiempo.
Algunas plantas absorben muchos metales
venenosos, lo que implica un riesgo potencial a
la cadena alimenticia
Finalmente se hace un comparativo entre los mtodos de bioremediacin ex-situ, en

varios aspectos de utilidad y costos (Cuadro 5):
27

Cuadro 5: Comparativo de las tcnicas ex-situ de bioremediacin (Villaseor Roa, 2011).

Tcnica
Biopilas
Bioreactores
Compostaje
Landfarming
Descripcin
Se utilizan cuando la sustancia contaminante es demasiado voltil como para ser
tratada por landfarming, ya que las emisiones gaseosas seran demasiado altas o
tambin se usa cuando se requiere acelerar el proceso de bioremediacin. El
tratamiento se aplica para la eliminacin de Carbono Orgnico Volatil (COV), de no
halogenados e hidrocarburos. Los COV halogenados, los compuestos semivoltiles y los pesticidas tambin pueden ser tratados mediante esta tecnologa,
pero la eficiencia del proceso puede disminuir y puede ser solo aplicable a ciertos
compuestos dentro de estos grupos.
Cuesta entre 160 y 210 dlares el m3 de suelo.
Se aplica a explosivos, PAHs y plaguicidas.
Se requieren bioreactores secuenciales aerbicos/anaerbicos, los cuales mejoran
la remediacin de PCBs y de algunos explosivos.
Cuesta entre 160 y 210 dlares el m3 de suelo.
Se aplica a explosivos y PAHs.
Se debe mantener las condiciones de aireacin, humedad y temperatura.
Para la aireacin se utiliza la mezcla mecnica de montones, mezcla esttica e
inyeccin y bombeo en pilas.
Se debe controlar la emisin de VOCs.
Los costos van entre 150 y 220 dlares por m3 de suelo.
Se aplica a hidrocarburos del petrleo no VOCs, combustibles, PCP y algunos
plaguicidas.
Degrada, transforma e inmoviliza contaminantes.
Se deben recoger y tratar las escorrentas y los lixiviados.
Cuesta 150 dlares el m3 de suelo.
28

CAPTULO 2. CONTAMINANTES.
Contaminante es un concepto muy amplio y se considera como tal cualquier agente que
tiende a modificar el equilibrio natural del medio ambiente y adems puede incidir sobre
la biosfera. Es importante conocer que se conoce como xenobitico a toda sustancia
extraa o ajena a las que proceden del metabolismo de los seres vivos, por lo tanto,
contaminantes de naturaleza qumica y que suelen producir efectos txicos, o al menos
alteraciones en el normal funcionamiento de las clulas vivas.
Entre los contaminantes ms abundantes en el medio y perjudiciales para los sistemas
biolgicos se pueden destacar los metales pesados y algunas sustancias orgnicas:
plaguicidas, hidrocarburos halogenados y no halogenados, PCBs, DBF y DBD, residuos
qumicos txicos, junto con las radiaciones nucleares, etc. Su riesgo radica en su
persistencia y consecuente acumulacin, en la formacin de asociaciones qumicas
complejas, en su capacidad de reaccin y a veces, como consecuencia, su toxicidad
creciente.
Un txico es cualquier sustancia que causa efectos adversos a los organismos vivos y
ejerce ese efecto con una relacin dosis-respuesta. De acuerdo a la dosis, la toxicidad
puede ser aguda cuando causa mortalidad en el 50% de la poblacin de estudio (DL50) o
crnica o de efecto lento (tumores, lceras, irritaciones, etc.); adems est sometida a una
fuerte influencia de factores externos (dieta, medio ambiente, forma de administracin,
etc) e internos (edad, sexo, condiciones fisiolgicas, genticas, etc).
29


(alifticos aromticos=BTEX, PAHs).
Los hidrocarburos alifticos poliaromticos (PAHs) se encuentran en todas partes, siendo
producidos de forma natural y principalmente antrpicamente. Las principales fuentes son
los incendios de bosques (Blumer & Youngblood, 1975), erupciones volcnicas (Ilnitsky,
Mischenko, & Shabad, 1977) y la degradacin de los materiales biolgicos (White & Lee,
1980). Las principales fuentes antropognicas son la quema de carbn, produccin de
petrleo, automviles, incineradores comerciales y calefactores en base a madera (Lesage
& Jackson, 1992) y asfalto (Lacasaa Navarro, Gonzlez Alzaga, Rodriguez Barranco, &
Daponte Codina, 2008; Quinn, 2012).
Adems de estas fuentes contaminantes, el humo del tabaco es considerado como la
principal fuente de contaminacin por PAHs y benceno en ambientes interiores, pudiendo
incrementar considerablemente su exposicin con respecto a ambientes libres de humo
(Adgate, Chuch, & Ryan, 2004; Lacasaa Navarro et al., 2008; Quinn, 2012).
Los Hidrocarburos Aromticos Polinucleares o Policiclicos son conocidos mas comnmente
como PAHs por su sigla en ingls, son subproductos orgnicos del procesamiento del
petrleo o de su combustin incompleta. Muchos son carcingenos a bajas
concentraciones. Aunque son relativamente insolubles en agua, su carcter peligroso para
la vida acutica y el humano los hace merecedores de evaluarse en aguas potables y de
desecho (Eaton, Clesceri, Rice, & Greenberg, 2005; Van Metre, Mahler, Scoggins, &
Hamilton, 2006). Son sustancias orgnicas neutras, no polares con dos o ms anillos de
benceno en varias configuraciones. Estados Unidos ha incluido 16 PAHs en la lista de
poluyentes de alta prioridad a ser monitoreados en aguas y residuos (NRC, 1997), y
aunque existen cientos de ellos, los dos ms comunes son el benzo(a)pireno y el naftaleno
(Quinn, 2012), los ms peligrosos aparecen listados en la Figura 4.
30

Figura 4: Estructuras, frmulas qumicas y pesos moleculares de 16 poluyentes PAHs de

acuerdo a la EPA (NRC, 1997).
Los hidrocarburos pueden llegar a ser un gran contaminante, sin embargo existen lmites
permisibles, los cuales son establecidos de acuerdo a criterios en cada pas, como se
muestra en el Cuadro 6.
Cuadro 6: Lmites mximos permisibles para hidrocarburos especficos en suelos segn la
norma oficial mexicana NOM -138-SEMARNAT/SS-2003 (SEMARNAT, 2005).
En Ecuador, los lmites permisibles para la identificacin y remediacin de suelos

contaminados en la industria de hidrocarburos son diferentes, se evala los hidrocarburos
totales (mg/kg), los cuales deben ser: para uso agrcola (<2500), para uso industrial
(<4000) y para ecosistemas sostenibles (<1000) (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
Pueden continuar en el aire, agua y suelo por meses o aos y entre los sntomas a corto
plazo se incluye la irritacin ocular, nauseas, vmito, diarrea y confusin y aunque no son
claros los efectos a largo plazo, estos pueden incluir, cataratas, enfermedades renales y
del hgado, rompimiento de los glbulos rojos e incluso en animales de laboratorio ha
inducido cncer (Quinn, 2012).
En el trabajo de (Botello, Villanueva, Diaz, & Pica, 1995) realizado en un puerto de OaxacaMxico, se encontr que las cantidades de PAHs se incrementaron en varios rdenes de
magnitud, lo que indico un importante proceso de bioacumulacin de estos compuestos, y
sobre todo de aquellos conformados por 4 o 5 anillos bencnicos, los cuales se consideran
como carcingenos ambientales, con sus consecuentes efectos e impactos en las
pesqueras (efectos deletreos de tipo sub-letal en camarones reduccin en la tasa de
crecimiento, en la viabilidad de los gametos e irregularidades en el desarrollo larvario).
31

BTEX es una abreviacin usada para cuatro compuestos aromticos voltiles encontrados
en los productos del petrleo: Benceno, Tolueno, Xileno y Etilbenceno (Figura 5), los
cuales son encontrados juntos en suelos contaminados (Communities, 2012).
Figura 5: Benceno, Tolueno, Etilbenceno y Xileno.

El benceno es usado en la produccin de materiales sintticos y productos para el
consumidor, tales como caucho sinttico, plsticos, nailon, insecticidas y pinturas. El
tolueno es usado como un solvente para pinturas, cubiertas, gomas, aceites y resinas. El
etilbenceno puede estar presente en productos para el consumidor como pinturas, tintas,
plsticos y pesticidas. Los xilenos son usados como solventes para impresin, cauchos e
industrias de impresin (Communities, 2012).
Los lmites permisibles para el BTEX son de 0.005, 1.0, 0.7 y 10 mg/L respectivamente. En
Mxico los lmites mximos permisibles para BTEX en agua potable son 0.05, 0.3, 0.7 y 0.5
mg/L respectivamente (Acua Askar et al., 2008). La exposicin a BTEX en poblacin
general se produce fundamentalmente por inhalacin o por contacto, ms que por otras
vas como la ingestin a travs de alimentos o bebidas contaminadas.
Por su carcter cancergeno, el benceno ha sido catalogado como Categoria A por la
Internacional Agency for Research on Cancer (Lacasaa Navarro et al., 2008). Es un
contaminante ambiental ubicuo (Wallace, 1989) y se han constatado efectos graves en la
salud de los trabajadores expuestos al mismo. Con relacin a estos efectos, la exposicin
al benceno puede producir leucemia aguda no linfocitica y una variedad de otros
desordenes hematologicos. El nivel de riesgo establecido por la Organizacin Mundial de
la Salud est entre 3,8 y 7,5 casos de leucemia mieloide por cada milln de personas
expuestas durante toda su vida a 1 Bg/m3 de benceno (Lacasaa Navarro et al., 2008).
Adems de los efectos cancergenos del benceno tambin se han descrito otros daos en
la salud asociados con la exposicin a altas dosis de estos Compuestos Orgnicos Voltiles
(COVs), tales como efectos respiratorios (asma), hematologicos (anemia, trombocitopenia,
32

leucopenia, pancitopenia, anemia aplstica), inmunolgicos, neurolgicos y reproductivos

y de desarrollo (ATSDR., 2007; Lacasaa Navarro et al., 2008).
33

Leccin 7. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Hidrocarburos clorados

(PCBs, TCE, PCE, insecticidas, herbicidas).
Un compuesto organoclorado, hidrocarburo clorado, clorocarbono o compuesto orgnico
clorado es un compuesto qumico orgnico, es decir, compuesto por un esqueleto de
tomos de carbono, en el cual, algunos de los tomos de hidrgeno unidos al carbono,
han sido reemplazados por tomos de cloro, unidos por enlaces covalentes al carbono.
Su amplia variedad estructural y las propiedades qumicas divergentes conducen a una
amplia gama de aplicaciones. Muchos derivados clorados son controvertidos debido a los
efectos de estos compuestos en el medio ambiente y la salud humana y animal, siendo en
general dainos para los seres vivos, pudiendo llegar a ser cancerigenos. Muchos de ellos
se emplean por su accin insecticida o pesticida.
Muchos compuestos organoclorados han sido aislados de fuentes naturales que van desde
las bacterias hasta los seres humanos. Los compuestos orgnicos clorados se encuentran
en casi todas las clases de biomolculas, incluyendo alcaloides, terpenos, aminocidos,
flavonoidess, esteroidess, y cidos grasos. Los organoclorados, incluyendo las dioxinas, se
producen en ambientes de alta temperatura como los incendios forestales. Las dioxinas se
han encontrado en cenizas conservadas de incendios provocados por rayos anteriores a la
produccin de dioxinas sintticas. Adems, muchos hidrocarburos clorados simples como
el diclorometano, cloroformo, y tetracloruro de carbono se han aislado a partir de algas
marinas. La mayor parte del clorometano presente en el medio ambiente es producido
naturalmente por descomposicin de restos biolgicos, incendios forestales y volcanes.
En la legislacin para la provincia de Buenos Aires (Argentina) hay un extenso listado de
contaminantes de diferentes orgenes incluidos productos de desinfeccin, componentes
orgnicos (como hidrocarburos clorados) e inorgnicos con sus lmites tolerables, a los
cuales puede acceder mediante la siguiente liga (ITAM, 2009).
Los PCBs o Bifenilos policlorados son compuestos voltiles solubles en tejido graso, usados
habitualmente como disolventes, aislantes o refrigerantes. Son hasta 200 sustancias
diferentes, con distinto grado de cloracin y de sustitucin (Figura 6).
Figura 6: Estructura de los PCBs. Dos anillos fenilos rodeados por cloro.
34

C=Carbono, Cl=Cloro. El nmero de tomos de Cl vara de 1 a 10 (Arbeli, 2009).

La familia incluye cerca de 200 compuestos con estructura de bifenilo y que estn clorados
en un grado variable. Generalmente en los PCBs comercializados se encuentran alrededor
de 50 o ms de estos congneres. La situacin de los Cl sustituyentes permiten o impiden
la rotacin de los anillos.
Presentan estabilidad inercial qumica (muy lenta degradacin fsico-qumica y biolgica),
no son voltiles, resisten oxidacin cida y bsica, son difcilmente hidrolizables,
hidrfbicos, lipoflicos, presentan una baja evaporacin. Son resistentes al calor (estables
hasta los 200oC), son difcilmente combustibles, buenos conductores de calor, son buenos
aislantes elctricos (alta constante dielctrica). Adicionalmente son absorbidos por los
suelos, sedimentos y acuferos, pudiendo formar complejo con los suelos, produciendo
bioacumulacin y biomagnificacin.
Se absorben por los pulmones y sobre todo por va cutnea, los compuestos menos
clorados desaparecen antes, son ms degradables, tambin son ms txicos. Los mas
clorados son ms persistentes y bioacumulables en el tejido adiposo y tienen tambin
menor poder txico. En los humanos atraviesan la barrera hematoenceflica y la placenta;
retrasan el crecimiento y aceleran el metabolismo de drogas. Los compuestos altamente
clorados producen modificaciones en hgado, alteran los ciclos reproductivos e inducen
malformaciones.
La degradacin de PCB ha sido estudiada ampliamente. Sin embargo, su aplicacin en
campo es an muy limitada. En general, es recomendable usar un esquema constituido
por un proceso de degradacin anaerbica, seguido por uno de degradacin aerbica,
complementado todo esto con la totalidad de la comunidad microbiana que es esencial
para degradar un amplio rango de congneres, adems de un gran nmero de productos
de degradacin. La complejidad de la remediacin de sitios contaminados con PCB
requiere de conocimientos detallados y, por tanto, es necesario seguir investigando y
mejorando la biodisponibilidad de PCB, la deshalogenacin reductiva y el proceso de
degradacin aerbica para superar las barreras relacionadas con la biorremediacin de
sitios contaminados con PCB (Arbeli, 2009). Los PCB han sido reemplazados por los teres
de difenilo polibromados (PBDE), que poseen una toxicidad y problemas de
bioacumulacin similares. Su bioremediacin se desarrolla con microorganismos como
Phanerochaete, Acinetobacter y Alcalgenes.
El DDT y DDE (Dicloro-difenil-etano) se encuentran entre los insecticidas clorados, son
demasiado persistentes y tienden a acumularse en diferentes cadenas alimentarias (Figura
7). Debe distinguirse el efecto agudo de la exposicin crnica a bajas dosis en animales y
humanos; si bien es frecuente encontrar casos de alergias en reas urbanas limtrofes con
campos fumigados, siendo el problema que se pueden absorber de forma cutnea por
35

piel, mucosa o tracto digestivo y pasar de all al hgado, siendo metabolizados y pasando a
formar parte de las clulas grasas; en algunas especies de aves causa problemas
reproductivos (como adelgazamiento de la cscara de huevo). Los insecticidas clorados
desarrollados orgnicamente son de una estructura molecular similar a la de los
hidrocarburos clorados, aunque se diferencian de estos ltimos en que son estimulantes
del sistema nervioso central. No hay que olvidar que algunos de estos insecticidas
clorados se acumulan en la vida silvestre y de ah pueden pasar al ser humano.
Figura 7: Estructura qumica del DDT y DDE.

La mayora de los hidrocarburos clorados de bajo peso molecular como el cloroformo,
diclorometano (DCM), dicloroeteno (DCE) y tricloroetano (TCE) son disolventes tiles.
Estos disolventes tienden a ser relativamente no polares, por lo que son inmiscibles con el
agua y eficaces en aplicaciones de limpieza, tales como desengrasado y limpieza en seco.
La exposicin a altos niveles de clorometano puede causar problemas serios al sistema
nervioso, incluso convulsiones y coma. Tambin puede afectar al hgado, los riones y el
corazn. Esta sustancia se ha encontrado en por lo menos 172 de los 1,467 sitios de la
Lista de Prioridades Nacionales identificados por la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA)
(A. ATSDR, 2008).
Algunos de los sntomas por exposicin a clorometanos incluyen dificultad para mantener
el equilibrio, visin doble o borrosa, mareo, fatiga, cambios de personalidad, confusin,
temblores, movimientos incoordinados, nusea o vmitos. Estos sntomas pueden durar
meses o aos. En condiciones de laboratorio los ratones machos que respiraron aire que
contena clorometano (1000000 ppb) durante 2 aos desarrollaron tumores en los
riones, sin embargo los ratones hembras y ratas de ambos sexos no desarrollaron
tumores. No se sabe si el clorometano puede producir esterilidad, abortos, defectos de
nacimiento o cncer en seres humanos. La EPA considera al clorometano como
posiblemente carcinognico en seres humanos (Grupo C) en base a evidencia limitada de
carcinogenicidad en animales (A. ATSDR, 2008).
36

Leccin 8. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de Compuestos

nitroaromticos (TNT y otros).
Segn Cazar & Lombeida (2011), los nitro-derivados (o nitrocompuestos o compuestos
nitro) son compuestos que tienen el grupo nitro (NO2) en su componente estructural,
ste se encuentra presente en numerosos compuestos orgnicos. Son a menudo
altamente explosivos, impurezas o una manipulacin inapropiada pueden fcilmente
desencadenar una descomposicin exotrmica violenta. Los nitro-derivados en general se
caracterizan por:
Poseer momentos dipolares elevados (altamente insoluble en agua): contienen un
tomo de nitrgeno cargado positivamente y dos tomos de oxgeno cargados
negativamente, la gran electronegatividad de los oxgenos hace que la mayor
densidad electrnica se site sobre los dos tomos de oxgeno.
Tienen puntos de ebullicin anormalmente altos comparados con los valores de
compuestos de peso molecular similar.
Son lquidos o slidos a la temperatura ambiente.
En su mayora son solubles en solventes orgnicos.
Los nitro-derivados se pueden organizar en dos grupos: los compuestos nitroaromticos

(nitrocompuestos aromticos) y los nitroalifticos (nitrocompuestos alifticos), tienen
pocos usos directos que no sean en la fabricacin de explosivos o como disolventes (Cazar
& Lombeida, 2011; Gomez Cruz, 2009).
Los compuestos nitroaromticos se emplean en la industria qumica para la fabricacin de
productos de consumo. Entre ellos se encuentran las espumas flexibles de poliuretano,
fabricados a partir de 2,4 y 2,6dinitrotoluenos (DNT) que se usan en la industria de
colchones, ropa de cama, muebles, tintes y en bolsas de aire de automviles; plaguicidas
como el paratin (dietilp nitrofenilmonotiofosfato) y el dinoseb (2secbutil4,6
dinitrofenol); explosivos convencionales como el TNT (2,4,6trinitrotolueno) y el cido
pcrico (2,4,6trinitrofenol), que se han empleado como cargas explosivas en proyectiles
navales o altos explosivos sintticos como la Goma2; y los mono y dinitrofenoles, que se
encuentran como subproductos de la sntesis de plsticos, barnices, colorantes,
disolventes y frmacos (Luckenbach & Epel, 2005; PrezReinado, 2005; M. D. D. Roldn,
PrezReinado, Castillo, & MorenoVivin, 2008). Tambin se han utilizado como
37

propulsores de cohetes, aditivos de gasolina aceites lubricantes (Chamberlain, 1976;

Gomez Cruz, 2009).
Algunos compuestos nitroaromticos como los nitrofuranos son utilizados como agentes
antimicrobianos (nitrofurazona, furazolidona y nitrofurantona). Es intermediario para
producir aminas, son bsicos para la produccin de los frmacos como el acetaminofn.
Uno de los nitroaromticos naturales es el antibitico cloramfenicol (Cazar & Lombeida,
2011; Chamberlain, 1976; Gomez Cruz, 2009)(Figura 8).
Figura 8: Algunos compuestos nitroaromticos naturales y sintticos (xenobiticos)

constituidos por un anillo bencnico como principal componente estructural.
Muchos compuestos con grupo(s) nitro son txicos y/o mutagnicos, segn revelan
estudios en varios organismos, incluyendo bacterias, algas, plantas, invertebrados y
mamferos (Rieger & Knackmuss, 1995; Robidoux, Hawari, Thiboutot, Ampleman, &
Sunahara, 1999; Schfer & Achazi, 1999) por consiguiente, varios compuestos
nitroaromticos estn incluidos como agentes contaminantes prioritarios, segn la
Agencia de Proteccin Ambiental de los Estados Unidos (Gomez Cruz, 2009)
Los derivados aromticos de la hidroxilamina pueden reaccionar con las biomolculas,
incluyendo el DNA, causando efectos txicos y mutagnicos. Tambin, se ha propuesto
38

que los efectos genotxicos estn asociados a los derivados de la hidroxilamina (Gomez
Cruz, 2009; Mastandrea et al., 2005). En mamferos, los compuestos nitroaromticos se
transforman en metabolitos que son transformados por la microflora intestinal. La
microflora intestinal a travs de enzimas llamadas nitrorreductasas tienen un papel clave
en el metabolismo de los productos nitroaromticos exgenos a los cuales se expone el
hospedador.
Las nitrorreductasas pueden reducir la mutagenicidad generando
compuestos inocuos (Aiub, Mazzei, Pinto, & Felzenszwalb, 2006; Gomez Cruz, 2009;
Mittal, Brar, & Soni, 2008).
En el caso de los dinitropirenos, los efectos txicos se pueden producir como resultado de
la reaccin de arilaminas con otras molculas, como la oxihemoglobina (protena de la
sangre que ayuda al transporte de oxgeno). Ambas, tanto la arilamina como la
oxihemoglobina, se oxidan en presencia del oxgeno, formando un ciclo redox para
producir ferrihemoglobina e hidroxilamina, que puede reaccionar otra vez con la
oxihemoglobina (H. Singh, Purnell, & Smith, 2007; Umbreit, 2007), causando su
inactivacin debido a la formacin de puentes sulfonamidas (Gomez Cruz, 2009; L. Liu,
Wagner, & Hanna, 2008).
Tambin se ha descrito la genotoxicidad y la carcinogenicidad potencial del TNT en seres
humanos expuestos a este explosivo y se ha encontrado la formacin de uniones de
hemoglobina con amino derivados del TNT (Jones, Liu, Sepai, Yan, & Sabbioni, 2005). El
ataque del TNT a las protenas puede causar efectos citotxicos en el hgado (Y. Y. Liu, Lu,
Stearns, & Chiu, 1992). Adems, algunos compuestos nitroaromticos actan como
desacoplantes de la fosforilacin oxidativa, inhibiendo la sntesis de molculas energticas
como ATP, como ocurre en el caso del 2,4dinitrofenol y del cido pcrico (Gomez Cruz,
2009; Hanstein & Hatefi, 1974).
Se ha demostrado la transformacin microbiana de los compuestos nitroaromticos
(Boopathy & Manning, 1996; Spain, Wyss, & Gibson, 1979). Aunque existen algunas
bacterias que mineralizan ciertos compuestos nitroaromticos (Blasco et al., 1999;
Nishino, Spain, & He, 2000), como Desulfovibrio y Clostridium, en general las
caractersticas recalcitrantes y txicas de estas sustancias plantean una amenaza para el
ambiente y para la salud (Gomez Cruz, 2009; M. D. D. Roldn et al., 2008).
39

Leccin 9. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de metales pesados.

Se definen como metales pesados aquellos elementos qumicos que presentan una
densidad igual o superior a 5 g/cm3 cuando estn en forma elemental, o cuyo nmero
atmico es superior a 20 (excluyendo a los metales alcalinos y alcalinotrreos) (Vardanyan
& Ingole, 2006). Su presencia en la corteza terrestre es inferior al 0.1% y casi siempre
menor del 0.01%. Se pretende indicar con este trmino aquellos metales que, siendo
elementos pesados, son txicos para la clula. Sin embargo en realidad cualquier
elemento que a priori es beneficioso para la clula, en concentraciones excesivas puede
llegar a ser txico (Navarro-Avio, Aguilar Alonso, & Lpez-Moya, 2007).
Junto a ellos hay otros elementos que, aunque son metales ligeros o no metales, se suelen
englobar con ellos por orgenes y comportamientos asociados; es este el caso de Arsnico
(As), Boro (B), Bario (Ba) y Selenio (Se). Los metales pesados se clasifican en dos grupos: 1)
Oligoelementos o micronutrientes: Necesarios en pequeas cantidades para los
organismos, pero txicos una vez pasado cierto umbral; incluyen As, B, Co, Cr, Cu, Mo,
Mn, Ni, Se y Zn. 2) Sin funcin biolgica conocida: Son altamente txicos, e incluyen Ba,
Cd, Hg, Pb, Sb y Bi (Navarro-Avio et al., 2007).
Los elementos pertenecientes a estos dos grupos tambin varan segn los diferentes
autores. Adems, cuando se habla de metales pesados tampoco se especifica el estado del
elemento, es decir, si se trata del elemento puro, o de algunos o la totalidad de sus
diversos estados de oxidacin (compuestos), que no presentan las mismas propiedades
fsicas, qumicas, txicas ni ecotxicas. Este aspecto complica todava ms su clasificacin.
Por ejemplo, algunos compuestos de cromo hexavalente (Cr+6) son citados como
carcingenos humanos, pero prcticamente no se encuentra informacin sobre cnceres
ocasionados por exposicin a ese metal puro (Navarro-Avio et al., 2007).
La toxicidad est causada frecuentemente por la imposibilidad del organismo afectado
para mantener los niveles necesarios de excrecin. Estos elementos muestran una elevada
tendencia a bioacumularse y a biomagnificarse a travs de su paso por los distintos
eslabones de las cadenas trficas, debido a que los niveles de incorporacin sufren un
fuerte incremento a lo largo de sus sucesivos eslabones, siendo en los superiores donde se
hallan los mayores niveles de contaminantes. A este proceso se le denomina
biomagnificacin; es decir, muchas toxinas que estn diluidas en un medio, pueden
alcanzar concentraciones dainas dentro de las clulas, especialmente a travs de la
cadena trfica (Delgadillo-Lpez, Gonzlez-Ramrez, Priego-Garca, Villagmez-Ibarra, &
Acevedo-Sandoval, 2011; Navarro-Avio et al., 2007). En concentraciones elevadas,
ocasionan graves problemas en el desarrollo, crecimiento y reproduccin de los seres
vivos (Delgadillo-Lpez et al., 2011; Roy et al., 2005)
40

La causa primaria del elevado nivel de toxicidad a nivel qumico es que los metales
pesados poseen una gran capacidad para unirse con molculas orgnicas. En efecto, estos
efectos txicos en sistemas biolgicos dependen de reacciones con ligandos que son
esenciales para su asimilacin, y estos ligandos estn, a su vez, presentes en gran
abundancia en la clula, ya sea formando parte de molculas de mayores dimensiones, ya
sea como molculas aisladas. En este sentido, cabe destacar la gran afinidad que
muestran los metales pesados, como principales ligandos, por grupos sulfidrilo, radicales
amino, fosfato, carboxilo e hidroxilo. El resultado de estas uniones ligando-metal puede
ser muy perjudicial para la clula, destacndose por: (1) la accin genrica sobre protenas
por inhibicin de la actividad o por rompimiento en la estructura de las mismas, (2) el
desplazamiento de elementos esenciales de su metabolismo normal, produciendo
deficiencias, y (3) la catlisis de reacciones de generacin de molculas ROS (Reactive
Oxigen Species) o radicales libres que provocan fenmenos de estrs oxidativo (NavarroAvio et al., 2007) y que en la actualidad se suelen asociar a diferentes tipos de cncer.
Los valores lmites o de tolerancia definida son en su mayora adoptados de la
reglamentacin de otros pases ya que faltan estudios especficos para cada metal, de tal
manera que son muy variables y dependen del uso del suelo o del agua; as, son muy
diferentes los niveles permisibles para consumo humano que para uso agrcola, industrial
o de ecosistemas. Los lmites permisibles para la identificacin y remediacin de suelos
contaminados en la industria de hidrocarburos en Ecuador se resumen en el Cuadro 7.
Cuadro 7: Lmites permisibles de Cadmio, Niquel y Plomo en suelos de Ecuador.
Parmetro
Unidad
Uso agrcola*
Uso industrial
Cadmio
Niquel
Plomo
mg/kg
mg/kg
mg/kg
<2
<50
<100
<10
<100
<500
Ecosistemas
sostenibles
<1
<40
<80
* Valores permisibles basados en proteccin de suelos y cultivos (Orosco Verdezoto &

Soria Guano, 2008).
Mientras en el Cuadro 8 se encuentran los valores lmites para la comunidad andaluza en
Espaa, en donde se incluyen mas metales y los valores lmites suelen diferir.
Cuadro 8: Resumen de los umbrales de contaminacin para elementos traza en la
comunidad andaluza.
Los valores representan concentraciones totales y estn expresados en mg/kg (Aguilar,
Dorronsoro, Galn, & Gmez Ariza, 1999), citado por Galn Huertos & Romero Baena,
(2008).
41

Mientras que para fuentes lquidas para consumo humano, los lmites son mas
restringidos: Bario (0.1 mg/litro), Cadmio (0.005 mg/litro), Cromo (0,05 mg/litro), Plomo
(0.05 mg/litro).
Finalmente las enfermedades y sntomas que genera los niveles txicos son muy variados
y debido al conjunto de reacciones qumicas descritas hasta ahora, la toxicidad de los
metales pesados se puede definir como elevada, tanto para microorganismos como para
animales y plantas. Los metales pesados pasan del suelo a las plantas, y de ah a los
mamferos. En humanos, en general, crean problemas en los tejidos reproductivos y en
desarrollo (Navarro-Avio et al., 2007). Entre los efectos conocidos tenemos (para los
metales pesados que suponen un mayor problema):
As: bronquitis; cncer de esfago, laringe, pulmn y vejiga; hepatoxicidad; enfermedades
vasculares; polineuritis. El efecto txico se produce al interaccionar con el ADN o con
protenas, alterando el metabolismo (Navarro-Avio et al., 2007; Ordoez, 2012).
Cd: bronquitis; enfisema; nefrotoxicidad; infertilidad; cncer de prstata; alteraciones
neurolgicas; hipertensin; enfermedades vasculares y seas. En el ambiente, el cadmio
es peligroso porque muchas plantas y algunos animales lo absorben eficazmente y lo
concentran dentro de sus tejidos (Navarro-Avio et al., 2007).
Hg: alteraciones neurolgicas y del sistema respiratorio. En realidad todas las formas de
mercurio son potencialmente txicas, pero el vapor de mercurio la forma ms peligrosa,
dado que puede difundir a travs de los pulmones hasta la sangre y luego hasta el
cerebro, donde puede causar daos importantes (Navarro-Avio et al., 2007).
Pb: alteraciones neurolgicas, nefrotoxicidad, anemia, cncer de rin. La anemia es el
primer sntoma de envenenamiento crnico producido por el plomo en los animales
(Navarro-Avio et al., 2007).
42

Leccin 10. Clasificacin, composicin, propiedades y toxicidad de compuestos

organofosforados, cianuros, fenoles.
Figura 9: Estructura qumica del Malation (Ortiz-Hernndez & Snchez-Salinas, 2010).

Los pesticidas organofosforados (OF) constituyen un grupo ampliamente usado, son
compuestos muy heterogneos que comparten una estructura qumica fosfrica derivada
de cidos. Actualmente hay 140 compuestos OF usados como pesticidas y como
reguladores del crecimiento de planas alrededor del mundo. Estos compuestos son
componentes de mas de 100 tipos diferentes de pesticidas comercialmente disponibles
(tales como Paraoxon, Parathion, Caoumaphos y Diazinon, Figura 9), y ha sido estimado
que cerca de 1500 diferentes OF han sido sintetizados durante el siglo pasado (Kang, Choi,
& J., 2006; Ortiz-Hernndez & Snchez-Salinas, 2010).
Muchos compuestos OF sintticos son altamente txicos y son inhibidores poderosos de
la acetilcolinesterasa, una enzima vital envuelta en la neurotransmisin, en forma de
sustitutos de acetilcolina (Bakry, El-Rashidy, Eldefrawi, & Eldefrawi, 2006; Grimsley,
Rastogi, & Wild, 1998). Los organofosfatos pueden tambin causar efectos neurotxicos
demorados, los cuales no son debidos a la inhibicin de la acetilcolinesterasa. La funcin
de otras esterasas encontradas en animales no es an bien entendida. En la presencia de
OF, estas enzimas son fosforiladas e inactivadas. Una vez el 80% de la enzima es
inactivada, usualmente dentro de cuatro das despus de la exposicin, los sntomas
potencialmente letales pueden ser observados, incluyendo debilidad de los msculos del
cuello, diarrea y dificultad respiratoria (Ortiz-Hernndez & Snchez-Salinas, 2010).
Para la bioremediacin de organofosforados se usa Agrobacterium radiobacter
Por su parte el cianuro es un trmino general que se aplica a un grupo de sustancias
qumicas que contienen carbono y nitrgeno, con una conformacin R-CN, donde R es el
grupo radical que se puede sustituir y CN es el grupo Ciano. Los compuestos de cianuro
contienen sustancias qumicas (de origen humano) que se encuentran presentes en la
naturaleza o que han sido producidas por el hombre. Existen ms de 2,000 fuentes
naturales de cianuro, entre ellos, distintas especies de artrpodos, insectos, bacterias,
algas, hongos y plantas superiores como la yuca y el sorgo. Las principales formas de
cianuro producidas por el hombre son el cianuro de hidrgeno gaseoso y el cianuro slido
43

de sodio y de potasio. Debido a sus propiedades nicas, el cianuro se utiliza en la

fabricacin de partes metlicas y en numerosos productos orgnicos comunes como los
plsticos, las telas sintticas, los fertilizantes, los herbicidas, los tintes y algunos productos
farmacuticos (Logsdon, Hagelstein, & Mudder, 2001). Son sustancias muy reactivas y
participan en las reacciones de adicin nucleoflica, pueden ser slidos, lquidos o
gaseosos y su punto de ebullicin es mayor que el de los alcoholes.
No obstante a pesar de su abundancia en muchas plantas y animales, el cianuro es una
sustancia "potencialmente" letal en la medida en que se use sin tomar precauciones
necesarias. Acta a travs de la inhibicin de ciertas clulas, bloqueando el proceso de
respiracin celular. Ello podra conllevar a posibles problemas en el corazn o en el
cerebro producto de la falta de oxigenacin en el organismo. El envenenamiento por
cianuro, depender de la cantidad a la que haya estado expuesta una persona, la forma de
exposicin y la duracin de la misma. Dependiendo de ella se presenta sntomas como:
respiracin rpida, dolor de cabeza, nuseas, convulsiones, presin sangunea baja,
prdida de la conciencia entre otros.
Los cianuros son relativamente mviles en el suelo. Una vez en el suelo, el cianuro puede
ser removido a travs de varios procesos. Algunos compuestos de cianuro en el suelo
pueden formar cianuro de hidrgeno y evaporarse, mientras que otros sern
transformados a otras sustancias qumicas por los microorganismos en el suelo.
Consecuentemente, los cianuros generalmente no se filtran hacia el agua subterrnea. Sin
embargo, se ha detectado cianuro en aguas subterrneas de unos pocos vertederos y en
sitios para disposicin de residuos industriales. Las concentraciones altas de cianuro que
se encuentran en algunos filtrados de vertederos y en la basura que se almacena en
algunos sitios son txicas para los microorganismos del suelo. Debido a que estos
microorganismos ya no pueden transformar el cianuro a otras formas qumicas, el cianuro
puede pasar a travs del suelo hacia el agua subterrnea.
Por su parte los fenoles (Figura 10) son un grupo de compuestos orgnicos que presentan
en su estructura un grupo funcional hidroxilo unido a un radical arilo. Por lo tanto, la
frmula general para un fenol se escribe como Ar OH. Los fenoles se nombran,
generalmente, como derivados del miembro ms sencillo de la familia que es el fenol o
hidroxibenceno. Para algunos fenoles, suelen emplearse nombres comunes como cresoles
(metilfenoles), catecol (o-dihidroxibenceno), resorcinol (mdihidroxibenceno) y e
hidroquinona (p-dihidroxibenceno).
44

Figura 10: Grupo fenol y algunos derivados (Garric, 1979).

Los fenoles sencillos son lquidos o slidos, de olor caracterstico, poco hidrosolubles y
muy solubles en solventes orgnicos. Algunos se usan como desinfectantes, pero son
txicos e irritantes (Garric, 1979).
Debido a su mayor acidez, los fenoles reaccionan con bases fuertes como el hidrxido de
sodio formando fenxidos. Siendo un aromtico, el fenol se comporta como tal de
acuerdo al mecanismo de sustitucin electroflica. Las quinonas son los productos de
oxidacin de ciertos difenoles, preparadas utilizando agentes oxidantes suaves como
cloruro frrico, xido de plata o incluso aire. Algunos compuestos biolgicos que
intervienen en etapas importantes de los procesos biolgicos de oxidacin reduccin
contienen un sistema quinoide. Un ejemplo importante es la ubiquinona o Coenzima Q o
CoQ, que interviene en una de las etapas de la cadena de transporte electrnico, donde se
realiza la produccin celular de ATP. En la vitamina K2, uno de los factores de coagulacin
sangunea tambin aparece un rasgo estructural quinoide (Garric, 1979).
Algunos fenoles importantes son (Garric, 1979):
El fenol es un slido cristalino, incoloro, ligeramente soluble en agua y de olor
caracterstico. Poderoso germicida al igual que sus derivados. Se absorbe a travs de la
piel. Es txico y custico.
Los cresoles son menos txicos que el fenol y de propiedades farmacolgicas idnticas a
las del fenol.
El resorcinol es un bactericida y fungicida. Localmente, precipita las protenas. En su
accin general, se parece al fenol con mayor excitacin central.
El hexilresorcinol es un antisptico, inodoro y no mancha. Es irritante a los tejidos.
La hidroquinona se usa para aclarar la tez en reas de la piel oscurecida (pecas y lunares).
Conviene ensayar la sensibilidad del paciente antes de iniciar el tratamiento para
descartar reaccin alrgica.
El p-clorofenol tiene propiedades y usos similares a las del fenol. Es un antisptico mas
poderoso que el fenol, pero sus acciones custicas y txicas son tambin mayores.
El hexaclorofeno es un bis-fenol policlorado. Es un eficaz bactericida y se ha empleado en
forma diluida en la fabricacin de jabones antispticos y desodorantes. Es txico por va
bucal y tpica.
45

CAPTULO 3. PROCESOS QUE INTERVIENEN EN LA BIOREMEDIACIN.

Son variados los procesos que intervienen en la bioremediacin y los organismos de los
que ms se conoce son las bacterias ya que es la tecnologa de bioremediacin mas
difundida. Menos informacin es conocida acerca de los procesos relacionados con
hongos, algas y plantas, por lo tanto sern vistos en menor detalle dentro de cada
apartado.
Estos procesos se relacionan con diversos aspectos de los organismos, de los
contaminantes y del entorno, para que la biota pueda realizar la bioremediacin, tales
como la expresin enzimtica que hace que los contaminantes sean ms disponibles para
ser degradados, o hacer mas biodisponible los contaminantes, la aclimatacin ante las
altas concentraciones de stos, la detoxificacin, la biodegradabilidad de los
contaminantes y la sorcin o retencin por parte del suelo.
Leccin 11. Interacciones microbianas.
La ecologa es un campo que est adquiriendo importancia debido a que estamos
sintiendo los efectos y estamos padeciendo las consecuencias de no cuidar el medio
ambiente. La ecologa abarca muchos aspectos tanto visibles como invisibles; invisible es
todo aspecto que no podemos ver a simple vista pero podemos saber que existe por sus
resultados, como sucede con los aspectos microbiolgicos del suelo, los cuales no
podemos observar pero si podemos a largo plazo observar su efecto. Toma en cuenta
aspectos biticos y abiticos y las relaciones existentes entre ellos, para comprender el
funcionamiento de todo sistema y de esta manera poder aplicar este conocimiento para
cumplir con los objetivos de bioremediacin deseados.
El xito de cualquier tratamiento de bioremediacin depende no solo de factores
abiticos como el pH, temperatura, potencial de reduccin y la disponibilidad de agua y
nutrientes, sino tambin de factores biticos tales como la competencia microbiana,
amensalismo, parasitismo y depredacin que pueden limitar el crecimiento y desarrollo de
las poblaciones inoculadas.
Comenzando con las interacciones organismo-ambiente, son importantes de tener en
cuenta algunos factores del entorno, en especial cuando los tratamientos se realizan en el
sitio de contaminacin in-situ.
Abundancia de hidrocarburos biodegradables (lineales de cadena sencilla) y escasa
presencia de resinas y asfaltenos muy pesados en la mezcla.
Concentraciones bajas de contaminantes, que no sean txicas o inhibitorias para el
crecimiento de los bioremediadores.
46

Adecuada oxigenacin, la mayora de los bioremediadores requieren oxgeno para

funcionar adecuadamente, los organismos que trabajan sin oxgeno son menos
eficientes.
pH entre 6 y 8, por arriba o debajo de estos lmites principalmente los
microorganismos crecen menos o son menos eficientes, as mismo la produccin
de enzimas en muchas ocasiones requieren un pH especfico del medio para
poderse producir.
Temperaturas superiores a 15oC e inferiores a 40oC, aunque se ha dado
biodegradacin a temperaturas muy bajas (zonas articas) y muy altas
(compostaje), la velocidad del proceso se ve severamente reducida.
Porosidad media para permitir la circulacin de agua y oxgeno.
Elevada permeabilidad del suelo para permitir la reduccin de altas
concentraciones de contaminantes y la circulacin de aire.
Mineraloga uniforme, suelos arcillosos o arenosos afectan la eficiencia del
proceso, debido a la inmovilizacin de nutrientes esenciales para que los
microorganismos realicen la biodegradacin o al lavado de estos elementos. Son
preferibles suelos francos o arcillosos y homogeneidad mineralgica.
Homogeneidad hidrogeolgica, esto nos permite saber cual va a ser el proceso de
irrigacin adecuado para el crecimiento de los organismos.
Debemos combinar el enfoque tradicional proveniente del campo de la ingeniera (que
toma en cuenta solo aspectos ambientales como los mencionados anteriormente) con un
planteamiento ms ecolgico, que reconozca desde el comienzo que la naturaleza es
heterognea y que se apoye en los principios que rigen el comportamiento de poblaciones
biolgicas naturales (la ecologa microbiana ha experimentado avances espectaculares en
los ltimos aos). De esta manera, el campo de la biorremediacin sufrira un cambio
drstico pero, a su vez, muy beneficioso, pues supondra un avance de gran magnitud en
el conocimiento de los procesos de degradacin de contaminantes y su aplicacin con
fines ambientales.
Las interacciones biticas son un factor clave en todo proceso biolgico y en la
biodegradacin por involucrar organismos vivos, deben ser abordadas para entender y
poder manejar este proceso. Las interacciones se refieren al efecto conjunto de dos o ms
organismos para suplir una funcin que cada organismo por separado no podra cumplir o
sera menos eficiente; esto incluye relaciones simbiticas, quimitacticas y de
cometabolismo, tanto entre microorganismos as como tambin entre microorganismos y
plantas. La biodegradacin de componentes orgnicos es catalizada por enzimas, las
enzimas son generalmente especficas para cada sustancia a degradar y es por ello, que
para una mezcla compleja de compuestos, como son el petrleo sus derivados, o para
una contaminacin de minera, ser necesaria una gran variedad de enzimas para
biodegradar totalmente los componentes orgnicos y/o disponer de los metales pesados.
De esta forma, la biodegradacin de un compuesto es tpicamente un proceso gradual,
47

que implica la participacin de varias especies de organismos, generalmente organizados

en asociaciones, consorcios cohortes, antes de que muchos compuestos recalcitrantes
puedan se mineralizados (Pellini, 2006).
La quimiotaxis es la habilidad que tienen algunos microorganismos, incluidas bacterias y
hongos, para detectar y responder a compuestos producidos por otros organismos. Este
fenmeno puede intervenir o tener importancia a muchos niveles diferentes, como puede
ser a nivel fisiolgico, supervivencia o incluso intervenir a nivel poblacional.
Por ejemplo la quimiotaxis interviene en la formacin de ndulos en las races de
legumbres por especies de Rhizobium, Agrobacteruim etc... Estas plantas producen
exudantes que contienen molculas que pueden actuar como seales quimio-atrayentes y
que son capaces de inducir la expresin en estas bacterias de genes relacionados con la
formacin de estas asociaciones. Tambin se presenta entre muchas plantas y hongos de
micorriza (con funcin simbitica) y entre plantas y microorganismos edficos. Las races
de las plantas segregan una gran cantidad de sustancias las cuales estimulan la interaccin
entre hongos de micorriza arbuscular y la races, simultneamente promueven el
crecimiento de bacterias y hongos (principalmente benficos para la planta) a su
alrededor, creando una zona con mayor densidad de organismos que el resto del suelo,
llamada rizsfera.
Debido a la abundancia de organismos y su diversidad en la rizsfera es ms factible
encontrar organismos con potencial biodegradador en esta zona; de hecho es muy
frecuente este tipo de interacciones para procesos de bioremediacin de hidrocarburos.
Mientras la relacin simbitica micorrcica es una caracterstica que ha permitido y/o
potenciado el tratamiento de la contaminacin con metales pesados, gracias a que
aumenta la tolerancia de las plantas a estos metales en sus tejidos o participan en su
retencin en los tejidos del hongo.
48

Leccin 12. Adaptacion, aclimatacin y bioacumulacin.

Todos los organismos vivientes son diferentes y son estas diferencias las que los hacen tan
valiosos. Algunas de esas grandes diferencias se encuentran entre grandes grupos, como
son organismos microscpicos (observables solo por microscopio y estereoscopio) y
macroscpicos (observables a simple vista), en donde los primeros tienen ciclos de vida
cortos y los segundos son relativamente largos. Poniendo un ejemplo las bacterias pueden
duplicarse al cabo de cerca de una hora, de tal manera que en un dia se tienen 24
generaciones, en una semana 168, en un ao 8760 generaciones y en cada generacin
existe la posibilidad de mutaciones genticas, logrando una tasa de mutacin muy alta con
respecto a otros organismos. Por otro lado, las plantas solo alcanzan a dejar una
generacin, aproximadamente a los tres meses si son de ciclo reproductivo corto,
logrando solo 4 posibles generaciones al ao.
En este punto se encuentran dos conceptos claves, el primero es adaptacin y consiste en
el ajuste de una poblacin durante generaciones a cambios medioambientales asociados
(al menos en parte) a los cambios genticos que resultan de la seleccin impuesta por el
propio cambio ambiental (Figura 11). De esta manera los microorganismos (bacterias,
hongos, actinomicetes) son los que logran una mejor adaptacin a las condiciones del
entorno en menor tiempo y es el motivo por el cual es muy probable encontrar
microorganismos con capacidad de degradar compuestos txicos, una vez son expuestos
a estas condiciones, como pueden ser los repentinos derrames de crudo, explotaciones
mineras y exposicin a desechos txicos en suelos y aguas.
Figura 11: Adaptacin y evolucin en el humano.

Es importante aclarar que los microorganismos que no tengan la dotacin gentica para
degradar los agentes contaminantes no lo van a hacer al exponerse a stos, solo los que
tengan el potencial lo van a hacer; no van a adquirir esta capacidad por exponerse a los
contaminantes, pero tampoco indica que van a morir al no poderlo descomponer o
degradar. Es posible que sobrevivan al poder utilizar otras fuentes de alimento
directamente disponibles, o fuentes que se vuelvan disponibles al haber una degradacin
parcial del contaminante principal, en un mecanismo de cometabolismo como fue
explicado anteriormente.
49

Este es uno de los principios en los que se basa una de las tcnicas empleadas para
obtener aislamientos microbianos aptos para la bioremediacin. A partir de muestras de
material contaminado se hacen aislamientos de organismos, con la esperanza de que
algunos de estos tengan la capacidad de degradar el contaminante en estudio y
posteriormente poder potencial su capacidad con miras a utilizarse industrialmente
cuando existan vertimientos similares a donde fue aislado. Sin embargo el concepto de
adaptacin no debe confundirse con el de aclimatacin (FAO, 2004).
El segundo concepto es aclimatacin, la cual es la adaptacin de un organismo vivo
(planta, animal o microorganismo) a un cambio medioambiental que le somete a un estrs
fisiolgico, y aunque tiene que ver con la dotacin gentica de los organismos, la
aclimatacin no tiene que ver con los cambios generacionales (FAO, 2004).
Este concepto se aplica principalmente a organismos macroscpicos, y haciendo alusin a
la bioremediacin, se refiere a aquellos organismos que son expuestos lentamente a un
contaminante, cuya concentracin incrementa paulatinamente, como suele suceder en
explotaciones mineras. Principalmente las plantas, no tienen la opcin de migrar a nuevas
locaciones evitando los contaminantes, de forma que solo les queda la opcin de
aclimatarse o intoxicarse por la alta concentracin de los contaminantes. Pero la
aclimatacin es un proceso gradual, en el cual los organismos primero son expuestos a
bajas concentraciones, las cuales se incrementan por la acumulacin en el sustrato (suelo
o medio de cultivo) y poco a poco va siendo mayor; los organismos que sobrevivan se dice
que estn aclimatados a las condiciones del entorno, incluidos los contaminantes.
En fitoremediacin (remediacin con plantas), la tolerancia a altas concentraciones de
contaminantes, sin una intoxicacin notoria, es un indicativo de aclimatacin y de un
posible mecanismo de tolerancia, muy probablemente conducente a un mecanismo de
bioremediacin. Esta aclimatacin usa la dotacin gentica existente en las plantas, para
tomar los contaminantes y disponer de ellos, bien sea incorporarlos en su metabolismo,
excluyndolos de ste, detoxificandolos o englobndolos de forma que no causen alguna
alteracin fisiolgica.
Finalmente, no todos los mecanismos de tolerancia conducen a la desintegracin de los
contaminantes en materiales mas simples sin efecto txico, algunos de estos simplemente
son acumulados en los organismos, produciendo diferentes sntomas dependiendo del
tipo y concentracin del contaminante y del organismo en cuestin que acumula estos
elementos. Muchos derivados del petrleo y metales pesados como cadmio, plomo y
mercurio se pueden acumular en los tejidos grasos de los animales, en vacuolas y paredes
celulares de plantas, en un proceso conocido como bioacumulacin, sin efectos notorios a
menos que sobrepasen los lmites tolerables; sin embargo las concentraciones de estos
50

contaminantes pueden fcilmente aumentar en los niveles superiores de la cadena

alimenticia (Figura 12).
Figura 12: Niveles crecientes de acumulacin de xenobiticos como DDT en tejidos

animales.
Algunos ejemplos de bioacumulacin se presentan con uranio por la bacteria
Pseudomonas aeruginosa, el cual fue detectado ntegramente en el citoplasma, al igual
que en la levadura Saccaromyces cerevisiae. Algunas levaduras son capaces de acumular
importantes concentraciones de metales empleando sistemas de transporte activo.
En Colombia se han observado algunos problemas ambientales, debido al exceso de
xenobiticos o algunos problemas de bioacumulacin progresiva de estos en cuerpos de
agua. Las repercusiones son notirias debido a la mortandad de peces, hecho que afecta
notablemente a las poblaciones costeras y que son debidas a vertimientos de
contaminantes xenobiticos en los cuerpos de agua, la absorcin y acumulacin de estos
en el plancton y la posterior incorporacin e incremento de su concentracin en peces.
51

Leccin 13. Biodisponibilidad y detoxificacin.

La biodisponibilidad es un factor del entorno relacionado con la disponibilidad del
contaminante para ser accedido por los organismos que van a descomponerlo. La
toxicidad y biodisponibilidad de los productos de la degradacin no siempre se conocen y
pueden movilizarse o bioacumularse en animales (Agudelo Betancur et al., 2005). Dos
caractersticas microbianas pueden aumentar esta biodisponibilidad y podran ser
utilizadas en tecnicas de biorremediacin.
Los hidrocarburos son molculas hidrofbicas que forman micelas entre ellas y son
altamente insolubles en agua. Esto hace que la superficie de contacto que tienen los
microorganismos diminuya en gran medida, por lo tanto reduce la biodisponibilidad del
sustrato. Para que ocurra la degradacin de hidrocarburos es necesario que estos entren
en contacto directo con la membrana celular de los microorganismos para que el
xenobitico sea interiorizado y puedan actuar las enzimas oxigenasas (las primeras que
actan en el proceso de bioremediacin).
Para que los hidrocarburos sean ms disponibles se requiere de surfactantes que hagan
ese papel. Algunos microorganismos pueden producir algunos de stos de forma natural y
estos biosurfactantes se pueden clasificar en dos grupos
De bajo peso molecular: suelen ser glicolpidos (azcar + lpido). El mas estudiado
es el rhamnolipido producido por diversas especies de Pseudomonas. La funcin
principal de estos biosurfactantes es reducir las tensiones entre las fases (aguaroca por ejemplo). Las Pseudomonas son bacterias productoras de este tipo de
biosurfactantes. Algunos microorganismos productores de biosurfactantes
extracelulares solubilizan y facilitan la penetracin de los hidrocarburos a travs de
la pared celular hidroflica; contienen adems enzimas degradadoras de
hidrocarburos en la membrana citoplasmtica (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009).
De alto peso molecular: Son producidos por diferentes especies y suelen ser
polisacridos, protenas, lipoprotenas, lipopolisacridos o mezclas de estos
polmeros. Estos biosurfactantes no son tan eficaces reduciendo tensiones entrefases, pero si son buenos emulsionantes. Adems se ha demostrado que son
eficaces a bajas concentraciones y tienen una considerable afinidad por el sustrato;
entre estos se encuentra el Alasan, producido por Acinetobacter radioresistens.
Las funciones de estos biosurfactantes a la hora de aumentar la biodisponibilidad seran:
Dispersar el petrleo aumentando la superficie de contacto.
Aumentar la biodisponibilidad de compuestos hidrofbicos.
Son selectivos.
52

Brindan mayor eficiencia para aumentar la biodisponibilidad de compuestos

hidrofbicos.
Son menos estables, por lo tanto ms biodegradables.
La detoxificacin por su parte es el proceso mediante el cual una sustancia se transforma
de txica a no txica; los metales no se pueden descomponer en sustancias ms sencillas
por no ser biodegradables, sin embargo lo que hacen las plantas y algunos
microorganismos es convertir los metales en forma txica mediante oxidacin o reduccin
a su forma no txica. Dentro de las biotecnologas modernas es comn escuchar de
detoxificacin de metales pesados por parte de las plantas.
La detoxificacin es observable en bacterias sulfatorreductoras o sulfooxidantes mediante
la precipitacin reductora usando enzimas. Muchos de los organismos utilizan los metales
como aceptores de electrones en su respiracin anaerobia (sin oxgeno), acoplando su
reduccin con la oxidacin de compuestos orgnicos (reduccin disimilatoria). Las formas
oxidadas ms solubles se reducen a formas menos solubles y a su vez menos bioactivas,
las cuales luego se excretan al exterior de la clula dando como resultado la detoxificacin
y/o precipitacin del contaminante. Se ha comprobado con uranio (U), cromo (Cr),
vanadio (V), selenio (Se), molibdeno (Mo), cobre (Cu), oro (Au), mercurio (Hg), plata (Ag) y
tecnecio (Tc).
Los mecanismos de tolerancia en plantas varan entre las especies y estn determinados
por el tipo de metal, eficiencia de absorcin, traslocacin y secuestro. Las fases del
proceso por el cual las plantas incorporan y acumulan metales pesados son las siguientes
(Delgadillo-Lpez et al., 2011):
Fase I. Transporte de los metales pesados al interior de la planta y, despus, al interior de
la clula. La raz constituye el tejido de entrada principal de los metales, los cuales llegan
por difusin en el medio, mediante flujo masivo o por intercambio catinico. La raz posee
cargas negativas en sus clulas, debido a la presencia de grupos carboxilo, que
interaccionan con las positivas de los metales pesados, creando un equilibrio dinmico
que facilita la entrada hacia el interior celular, ya sea por va apoplstica o simplstica
(Navarro-Avio et al., 2007).
Fase II. Una vez dentro de la planta, las especies metlicas son secuestradas o
acomplejadas mediante la unin a ligandos especficos (Figura 13). Entre los quelantes
producidos por las plantas se encuentran los cidos orgnicos (cidos ctrico, oxlico y
mlico), algunos aminocidos (histidina y cistena) y dos clases de pptidos: fitoquelatinas
y metalotionenas. Las fitoquelatinas son ligandos de alta afinidad que tienen como
sustrato al glutatin (Navarro-Avio et al., 2007).
53

Las metalotioneinas son polipptidos de unos 70-75 aminocidos con un alto contenido en
cistena, aminocido capaz de formar complejos con cationes mediante el grupo sulfidrilo
y tienen una marcada afinidad por las formas inicas de Zn, Cd, Hg y Cu (Navarro-Avio et
al., 2007).
Figura 13: Interaccin de los metales pesados con las clulas de plantas (Navarro-Avio et
al., 2007).
Fase III. Corresponde a la compartimentalizacin y detoxificacin, proceso por el cual, el
complejo ligando-metal queda retenido en la vacuola (Navarro-Avio et al., 2007).
Uno de los aspectos ms importantes de la acumulacin de metales pesados es el que se
refiere al proceso de complejacin. Un complejo o compuesto de coordinacin es el
resultado de la interaccin de un tomo central, esto es, un ion metlico con orbitales de
valencia vacos que puede actuar como aceptor de electrones, y una o varias bases
dadoras de electrones con pares de electrones libres. La planta utiliza este mecanismo de
complejacin en el interior de la clula para detoxificar (amortiguar) los metales pesados,
uniendo a ellos ligandos para formar complejos (Navarro-Avio et al., 2007).
En plantas tambin se puede encontrar que incrementan la polaridad de los xenobiticos,
lo cual aumenta su difusibilidad y por tanto puede incrementar su velocidad de excrecin.
Adems, muchas sustancias txicas que ven incrementada su polaridad se convierten en
sustratos accesibles para posteriores reacciones de detoxificacin, reacciones que, por
otra parte, no seran posibles de no incrementar la polaridad (Navarro-Avio et al., 2007).
54

Leccin 14. Biodegradabilidad.

La biodegradabilidad ha sido definida como la capacidad intrnseca de una sustancia a ser
transformada en una estructura qumica ms simple por va microbiana. En el mismo
sentido una sustancia es biodegradable cuando puede ser descompuesta con cierta
rapidez por organismos vivientes (bacterias, hongos, gusanos e insectos), de los cuales los
ms importantes bacterias aerobias. Lo contrario corresponde a sustancias no
biodegradables, como plsticos, latas, vidrios que no se descomponen o desintegran, o lo
hacen muy lentamente. Algunos rganoclorados, los metales pesados, algunas sales, los
detergentes de cadenas ramificadas y ciertas estructuras plsticas no son biodegradables.
Sin embargo el que una sustancia pueda ser degradada o descompuesta no implica que es
biodegradable, ya que los procesos qumicos y fsicos del ambiente pueden producir
degradacin de ciertas sustancias, sin que intervengan organismos vivos. Muchos
productos artificiales son biodegradables, pero otros (insecticidas organoclorados y
detergentes "duros") son muy resistentes a la accin bacteriana, mientras el vidrio y las
latas no son biodegradables segn el lmite de tiempo que impone el concepto de
biodegradabilidad, generalmente de menos de 20 meses.
Cada material contaminante tiene sus propios tiempos de degradacin, entre ellos
encontramos los vasos plsticos de polipropileno, el vidrio y el icopor (100 aos), los
envases tetra-pack depende de sus componentes, el alunimio dura (30 aos), las bolsas de
plstico (150 aos), el papel (1 ao), los pitillos y tapones plsticos (mas de 100 aos), las
tapas de botellas (30 aos) y los jabones (161 das) (Biodegradabilidad y
contaminacin.pdf). Entre los derivados del petrleo las fracciones de alcanos (incluidos
los alcanos normales y ramificados) tienen una biodegradabilidad alta; los compuestos
aromticos e hidrocarburos policiclicos aromticos (de mayor importancia debido a su
toxicidad y tendencia a bioacumulacin) tienen una biodegradabilidad media; mientras la
fraccin polar, que son las resinas (piridinas, quinolinas, carbazoles, sulfxidos y amidas) y
asfaltenos (fenoles, cidos grasos, cetonas, esteres y porfirinas) son de muy baja
biodegradabilidad (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
De las distintas familias de hidrocarburos del petrleo, los n-alcanos y los alcanos
ramificados (isoprenoides) de cadena intermedia (10 a 20 carbonos) son los sustratos ms
fcilmente degradables por los microorganismos del suelo, y que por lo tanto tienden a
ser eficazmente biodegradados. Sin embargo, los alcanos de cadena larga (> 20 carbonos)
son ms difciles de degradar debido a su (elevado peso molecular) y su baja solubilidad
en agua. Los cicloalcanos, por norma general, se degradan ms lentamente que los nalcanos y alcanos ramificados. De igual forma, los HAPs que contienen de 2 a 3 anillos
aromticos pueden ser biodegradados eficazmente en el suelo en condiciones
ambientales ptimas, mientras que los HAP de 4 anillos, y especialmente, los de 5 o ms
anillos bencnicos presentan una mayor recalcitrancia inherente y una baja solubilidad.
55

Las fracciones de resinas y asfaltenos son las que presentan una menor degradabilidad
debido a las complejas estructuras qumicas y al elevado peso molecular de sus molculas
(Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
El crecimiento de los microorganismos degradadores depende de varios factores como la
presencia de nutrientes suficientes, la disponibilidad de humedad, oxgeno, temperatura y
pH idneos. Por su parte, la biodegradabilidad tambin depende de la complejidad
compuesto a degradar y del microorganismo utilizado. No existen organismos
especializados para cada tipo de sustancias (Morn y Morn & Espinosa Marvn, 2008)
La biodegradacin se puede presentar tanto en condiciones aerobias (bacterias, hongos,
algas y plantas superiores) como anaerobias (bacterias):
Biodegradacin aerobia: en presencia de oxgeno suficiente y otros nutrientes
elementales, los organismos degradan los contaminantes orgnicos hasta convertirlos
finalmente en dixido de carbono (CO2), agua (H2O) y nueva biomasa celular. En la
Bioestimulacin es comn la inyeccin del agua junto con los nutrientes y oxgeno
disuelto, que favorezca el proceso. En algunas ocasiones y para microorganismos
concretos se puede aadir perxido de hidrgeno disuelto, que dar lugar al oxgeno para
que ste acte como aceptor final de electrones.
Biodegradacin anaerobia: en ausencia de oxgeno (condiciones anaerobias), los
contaminantes orgnicos son metabolizados hasta metano (CH4) y cantidades limitadas de
dixido de carbono (CO2) e hidrgeno molecular (H2). Bajo condiciones sulfato-reductoras,
el sulfato es transformado a in sulfuro o azufre elemental; y bajo condiciones nitratoreductoras se genera como producto final nitrgeno molecular (N2). A menudo, los
contaminantes son degradados a compuestos intermedios o finales que son ms txicos
que el contaminante inicial. Por ejemplo, la biodegradacin anaerobia del 1,1,1tricloroetano, ms conocido como TCE, generar cloruro de vinilo, el cual es ms txico y
persistente. Este Compuesto Orgnico Volatil (COV) puede ser degradado si se crean
condiciones aerobias.
El CO2 y CH4 son considerados como los indicadores de cantidad de sustrato utilizado por
los microorganismos, en procesos de biodegradacin y es la base para los estndares
ASTM, ISO, EN y OECD para medir la biodegradabilidad de las sustancias qumicas.
Tcnicas como la Respirometra se basa en la medicin del consumo de oxgeno por parte
de microorganismos que trabajan sobre un sustrato orgnico, el cual es degradado y
oxidado a CO2. Los anlisis respiromtricos permiten adquirir datos sobre el consumo de
oxgeno en respuesta al metabolismo de un sustrato por la respiracin de
microorganismos tanto en condiciones aerbias como anaerobias. La Respirometra
ahorra tiempo y trabajo requeridos con los experimentos de agotamiento de substratos y
56

provee puntos de referencia de alta calidad para la valoracin de parmetros biocinticos

(Morn y Morn & Espinosa Marvn, 2008).
La tcnica de agotamiento de sustratos mas conocidas es el DBO5 o demanda bioqumica
de oxgeno, es una prueba emprica que se utiliza para determinar los requerimientos
relativos de O2 de las aguas. Mide el O2 utilizado durante un periodo de incubacin
especificado (5 das) para la degradacin bioqumica de materia orgnica y de forma
menos importante el gastado en la oxidacin de los compuestos inorgnicos como
sulfuros, in ferroso, etc, y tambin el utilizado para oxidar compuestos reductores de N 2,
a no ser que se adicione un inhibidor. La tcnica se refiere a la determinacin de la
degradacin de sustancias principalmente orgnicas por microorganismos. Para llevar a
cabo esta degradacin, las bacterias toman oxgeno del medio y liberan CO2 (Morn y
Morn & Espinosa Marvn, 2008).
Finalmente, para la evaluacin de la biodegradabilidad se han diseado una serie de
pruebas, las cuales buscan cuantificar el grado de persistencia de estructuras qumicas en
ambientes naturales o industriales, los cuales aparecen en el Cuadro 9.
Cuadro 9: Estndares de referencia para medir la biodegradabilidad en USA y Europa.
57

Leccin 15. Sorcin y biosorcin.

Sorcin es un trmino general utilizado para describir la asociacin de compuestos
qumicos en forma disuelta o gaseosa con el suelo, sin referirse a un mecanismo
especfico. Aunque se produce por una serie de fenmenos como son: la adsorcin con la
materia particulada del suelo, absorcin a la materia orgnica del suelo, a la baja
difusividad de los compuestos, principalmente desde los microporos; a la disolucin en
fases lquidas no acuosas (FLNAs), y a la formacin de uniones covalentes con la materia
orgnica e inorgnica del suelo (Alexander, 1994). Esta asociacin puede ser adsorcin en
una matriz de dos dimensiones o absorcin en una matriz de tres dimensiones. Este
proceso de transferencia de fases puede darse entre una fase slida y molculas de vapor
o bin entre una fase slida y molculas en forma disuelta y es un fenmeno propio de la
transferencia de masas, que condiciona la biodisponibilidad de los contaminantes (Torres
Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
La sorcin es uno de los mecanismos mediante los cuales en el proceso de atenuacin
natural, se puede reducir el riesgo potencial los contaminantes, reduciendo su movilidad y
biodisponibilidad de los componentes unindolos al suelo o a la roca madre. Metales o no
metales pueden ser atenuados mediante adsorcin, precipitacin, absorcin a la matriz
del suelo o particin con la materia orgnica. Sin embargo la atenuacin no es completa,
para remediar los daos por contaminantes, solo contribuye en el proceso de atenuacin
natural, es necesario estudiar su complementariedad con procesos como dilucin,
dispersin a las aguas y las propiedades qumicas de los suelos (Mateu, 2008; Torres
Pero la sorcin no elimina los contaminantes, solo son retenidos en el suelo y pueden
constituir un problema en los tratamientos biolgicos. Con la finalidad de aumentar la
biodisponibilidad de los contaminantes para realizar una bioremediacin existen ejemplos
en la bibliografa de la utilizacin de tensoactivos sintticos y biotensoactivos en la
biorremediacin de suelos contaminados por hidrocarburos (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009).
La sorcin no solo se presenta con contaminantes como hidrocarburos, es un fenmeno
natural de los suelos que en la ingeniera ambiental se conoce solo por la bioremediacin,
en la sorcin se incluye el proceso de inmovilizacin de nutrientes por parte del suelo, en
particular en fsforo, el cual suele ser agregado en los procesos de bioestimulacin para
incrementar los niveles de nutrientes y que los microorganismos realicen sus procesos. La
mayor parte del fsforo agregado en forma mineral es inmovilizado en el suelo al
acomplejarse con los iones aluminio y hierro, abundantes en los suelos cidos de la regin
tropical, donde Colombia se encuentra ubicada. Al quedar inmovilizado no est disponible
ni para plantas ni microorganismos, reduciendo rpidamente los niveles de este nutriente
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y con ste, la eficiencia de los sistemas; debido a lo anterior los niveles de fsforo al
realizar la bioestimulacin deben ser elevados.
Por otra parte, la biosorcin o bioadsorcin es la acumulacin o atrapamiento pasivo y no
especfica de algunas sustancias especialmente metales txicos en las estructuras externas
de las clulas por material biolgico (vivo o muerto). Este proceso es independiente del
metabolismo celular (Garza Gonzlez, 2005; Wase & Forster, 1997). Es uno de los
enfoques de bioremediacin de metales actualmente empleados y consiste bsicamente
en procesos de pseudo-intercambio inico y/o adsorcin: los iones metlicos son
retenidos en la biomasa por componentes de carga opuesta. Este mecanismo pasivo
reduce los costos de remediacin, ya que no implica adicin de nutrientes, al no requerir
un metabolismo activo.
Una de las caractersticas de la biosorcin es que es un proceso de remocin de los
contaminantes muy rpida, pero dependiente de los factores del entorno, por ejemplo,
Gutirrez, Gonzlez, Snchez, & Mellado (2005) mencionan que a pH 5,0 se present la
mayor tasa de bioadsorcin de plomo (85%) en los primeros cinco minutos por parte de la
biomasa seca de Saccharomyces cereviceae, y que en valores de pH inferiores o superiores
a ste, la retencin de plomo disminuye (Pauro Roque, Choque Yucra, Poccohuanca
Aguilar, & Mamani Canqui, 2009).
La biosorcin incluye mecanismos fsico-qumicos por los que los metales son sorbidos y/o
complejados en la biomasa o productos microbianos, en la cual pueden generarse ncleos
de precipitacin de minerales estables. Su eficacia depende de las caractersticas qumicas
del metal, la concentracin de ste, la temperatura, el pH del medio, la presencia de otros
cationes y aniones (Pauro Roque et al., 2009); es una tcnica que se suele efectuar en
biorreactores pero en la actualidad al emplearse con plantas superiores no
necesariamente se realiza en stos.
Como biosorbentes pueden emplearse organismos activos (bacterias, hongos, algas y
plantas superiores), biomasa muerta, biopolmeros como cidos hmicos y flvicos,
polisacridos entre otros. Los grupos funcionales implicados en la biosorcin son los
hidroxilos, carbonilos, carboxilos, aminas, amidas, sulfhidrilos, tioteres, fosfatos.
Cuando se utiliza la biomasa activa tiene la ventaja que se renueva por si sola, los
productos metablicos excretados pueden contribuir a una mayor eliminacin de metales
y el transporte intracelular da mayor capacidad acumuladora. Cuando se emplea la
biomasa inactiva se evita problemas de toxicidad, la biosorcin se realiza en las
membranas celulares (no conlleva transporte), con lo que es ms rpida, es ms barata y
la recuperacin de metales es ms sencilla (sin destruccin celular).
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Por otra parte, algunos hongos poseeran habilidades de captacin o bioadsorcin de

metales pesados, gracias a la composicin qumica de la pared celular, ya que contienen
diversos componentes quelantes tales como grupos carboxilos, fosfatos, amidas, tioles,
hidroxilos, quitina, glucoprotenas, las cuales jugaran un rol importante en la bioadsorcin
de metales pesados. Tambin se considera que se desprenden H+ equivalentes a la
cantidad de metal enlazado a la biomasa microbiana (Arica, Bayramoglu, Yilmaz, Bektas, &
Genc, 2004; Garza Gonzlez, 2005; Naja, Deneux-Mustin, Rouiller, Hunier-Lamy, &
Berthelin, 1999).
Se ha utilizando biomasa seca de algunas especies de algas cafs (Ascophyllum y
Sargassum), para acumular metales (Pb, Cd) hasta ms de 30% del peso seco de la
biomasa, el micelio de hongos de uso industrial (Rhizopus y Absidia) como biosorbente
para Pb, Cd, Cu y Zn y otros con retenciones de un 25% del peso seco de la biomasa.
Cepas de las bacterias Bacillus cereus, Bacillus brevis, Staphylococcus simulans,
Corynebacterium jeikeim, Pseudomonas sp., Pseudomonas fluorescens, Alcaligenes
faecalis y Acinetobacter sp. de los hongos Fusarium sp., Paecilomyces lilacinus,
Acremonium falcifolme, Rhizopus sp., Penicillium sp., Aspergillus sp., Trichoderma sp.,
Alternaria sp. y Rhodotorula mucilaginosa y el alga Chlorella pyrenoidosa presentan
Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) de Pb(II), Cd(II), Zn(II), Cr(VI), y Cu(II) superiores a
500 mg/L; la elevada multitolerancia de estas cepas no ha sido informada en la literatura
(Garza Gonzlez, 2005).
Se ha demostrado la capacidad de bioadsorcin de Pb(II), Cr(VI), Cd(II), Cu(II), Zn(II) y Ni(II)
por Bacillus brevis, Rhodotorula mucilaginosa y Acremonium falciforme. De los cationes
evaluados, el plomo(II) fue el de mayor afinidad para ser removido de medio acuoso
(Garza Gonzlez, 2005). As tambin se ha demostrado la capacidad de Chlorella
pyrenoidosa de remover plomo(II), zinc (II), cobre(II), cadmio(II), nquel(II) y cromo(VI) en
soluciones mono-, bi- y multimetlicas. La mayor selectividad de la biomasa corresponde a
la remocin de plomo(II). La biomasa del alga tanto libre como inmovilizada reduce cuatro
veces la concentracin de Pb(II) respecto al nivel mnimo permisible en las Normas
Mexicanas (Garza Gonzlez, 2005).
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UNIDAD 2
Nombre de la
ESPECIES EMPLEADAS PARA LA BIOREMEDIACIN.
Unidad
CAPTULO 4
BACTERIAS Y ALGAS.
Leccin 16
Introduccin.
Leccin 17
Metabolismo aerobio.
Leccin 18
Metabolismo anaerobio.
Leccin 19
Metabolismo de metales.
Leccin 20
Aplicaciones.
CAPTULO 5
HONGOS Y LEVADURAS (MICORREMEDIACIN).
Leccin 21
Introduccin.
Leccin 22
Metabolismo.
Leccin 23
Micorremediacin con micorrizas.
Leccin 24
Degradacin de plaguicidas, insecticidas y organoclorados.
Leccin 25
Aplicaciones.
CAPTULO 6
PLANTAS (FITOREMEDIACIN).
Leccin 26
Introduccin.
Leccin 27
Metabolismo.
Leccin 28
Clases.
Leccin 29
Procesos involucrados en la fitoremediacion.
Leccin 30
Aplicaciones.
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UNIDAD 2. ESPECIES EMPLEADAS PARA LA BIOREMEDIACIN.

La bioremediacin como proceso solo pueden realizarla los organismos vivos o sus partes
(tejidos secos o enzimas), y teniendo esto claro es necesario aclarar que no todos los
organismos vivos pueden realizar procesos de bioremediacin. Como anteriormente se
mencion solo lo pueden realizar aquellos organismos que tengan el potencial gentico
(enzimas, tejidos, mecanismos, estructuras celulares, estructuras epidrmicas u otros) que
les permitan retener, metabolizar o transformar los contaminantes. Los contaminantes
referidos son de origen natural (petrleo y derivados, metales pesados) o artificial
(xenobiticos o productos de sntesis qumica).
Son conocidas principalmente las bacterias en los procesos de bioremediacin, sin
embargo no todos los bioremediadores son microscpicos y tampoco son solo bacterias.
Los ms conocidos en la actualidad son las bacterias, los hongos, las algas y las plantas
superiores, sin embargo hay otros organismos que pueden degradar contaminantes y
materia orgnica para obtener energa, como algunos nematodos (vermiremediacin),
cianobacterias y protistos (Abed et al., 2002; Cortn & Viale, 2006; Torres Rodrguez,
2003).
La mayora de los mecanismos descritos para la bioremediacin se limitan a la
degradacin aerobia y anaerobia, dando como producto de est el CO2, H2O, CH4 y
biomasa. Este es el reflejo del nivel de conocimiento adquirido hasta el momento, ya que
estos organismos degradadores son hetertrofos (se alimentan de materia orgnica
elaborada), mientras que actualmente se conoce del papel bioremediador de los
auttrofos (producen su propio alimento a partir de CO2 liberando O2), como las plantas
superiores y las algas.
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CAPTULO 4. BACTERIAS Y ALGAS.

Tanto las bacterias como las algas involucran organismos microscpicos, las bacterias
carecen de nucleo y por eso se les conoce como procariotas, mientras las algas tienen un
nucleo verdadero y por eso se les conoce como eucariotas. De los dos grupos solo las algas
pueden tener tamaos visibles y formar tejidos de varios metros de longitud. Aunque los
dos grupos son casi cosmopolitas (habitan en todas las regiones del planeta), sus
metabolismos son diferentes, las bacterias son hetertrofas, mientras las algas son
auttrofas y esto repercute grandemente en los mecanismos de degradacin, que se
vern con mayor detalle en la leccin 17 o de metabolismo.
Existen bacterias tiles para degradar una gran cantidad de contaminantes, se incluyen
Achromobacter sp., Alcaligenes denitrificans, Arthrobacter, A. sulphureux, Acidovorax
delafieldi, Bacillus cereus, Brevibacterium sp., Burkholderia sp., Chryseobacterium sp.,
Jambacter sp., Mycobacterium sp., M. flavescens, Pseudomonas sp., Pseudomonas putida,
Pseudomonas aeruginosa, Ralstonia sp., Rhodonobacter sp.,
Rhodococcus sp.,
Staphylococcus sp., Stenotrophomonas sp., Sphingomonas sp., Terrabacter sp. y
Xanthomonas sp. para degradar derivados del petrleo, aromticos y similares.
Existen por ejemplo bacterias que pueden degradar con relativa facilidad el petrleo,
benceno, tolueno y otros derivados. Los metales pesados como uranio, cadmio, y
mercurio no son biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlo y aislarlos para
poder eliminarlos ms fcilmente (Montoya, 1990). Tambin son inhibidas por altas
concentraciones de los contaminantes, por ejemplo se ha encontrado que los mayores
valores de Concentracin Mmima Inhibitoria (CMI) oscilan entre: 200- 3700 mg.L-1 de
plomo (II), 200 - 3400 mg.L-1 de cromo (VI) , 200 -2400 mg.L-1 de cadmio (II), 200 3700
mg.L-1 de cobre (II), 200 - 3200 mg.L-1 de zinc (II), y nquel (II) 200-3200 mg.L-1 para
aislamientos bacterianos de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Acinetobacter,
Alcaligenes, Staphylococcus y Corynebacterium (Garza Gonzlez, 2005).
Tres de las grandes ventajas de las bacterias residen en su alta velocidad de replicacin y
crecimiento, en su amplia variabilidad gentica y en el hecho de que son los nicos
organismos que pueden trabajar en condiciones anaerobias para degradar gran cantidad
de xenobiticos y contaminantes, estas caractersticas hacen que las bacterias sean
altamente adaptables a muchas condiciones del entorno. El hecho de poder trabajar en
condiciones anaerobias las capacita para trabajar en condiciones de anoxia,
predominantes en regiones hmedas, en lechos acuticos, pantanos, lagos y similares,
incluso condiciones anaerobias producidas por los mismos derrames.
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En condiciones in-situ, altas concentraciones de crudo pueden cubrir grandes reas

impidiendo el ingreso de oxgeno, bajo estas condiciones se puede favorecer el
crecimiento de bacterias anaerobias o anaerobias facultativas como Pseudomonas
aeruginosa o Phormidium sp. para la degradacin de hidrocarburos, la cual es lenta pero
efectiva. De la misma manera se ha empleado bacterias anaerobias en condiciones de
rellenos sanitarios, donde la profundidad de los contaminantes dificulta el tratamiento
aerobio. En el trabajo ex-situ en muchos casos son requeridos bioreactores para
procesos de degradacin aerobia y/o anaerobia para abarcar todos los contaminantes que
en encuentran en los suelos; es frecuente encontrar que sea necesario un tratamiento
anaerobio inicial, para producir sustratos degradables por la va aerobia, motivo por el
cual es imprescindible el trabajo de las bacterias; como sucede con el benceno,
hidrocarburos aromticos y poliaromticos. Sin embargo el ser anaerobias no exime que
sus respuestas no dependan del pH, acidez, temperatura y capacidad de intercambio
catinico del suelo.
Las algas por su parte, son importantes productores primarios en la cadena alimenticia.
Las algas tienen la capacidad de modificar el pH, la alcalinidad, el color y la turbiedad. En
el proceso de purificacin natural, las algas oxigenan el agua y utilizan los subproductos
del proceso de depuracin. Las pequeas algas verdes unicelulares son las ms
importantes para mantener el nivel adecuado de oxgeno disuelto en los estanques de
estabilizacin (Rivas Cevallos & Vera Vera, 2011). La importancia de las algas para el
funcionamiento del planeta es enorme, aunque desde el punto de vista (terrestre) pasan
inadvertidas. Las algas son enormemente diversas (desde unicelulares de 1m de
dimetro hasta gigantescas algas marina de 50m de largo) y estn presentes en
prcticamente todos los ecosistemas de la biosfera (Rivas Cevallos & Vera Vera, 2011).
Una de las caractersticas ms importantes de las algas es su capacidad depuradora del
medio ambiente, ya que a travs del proceso de fotosntesis incorporan oxgeno,
contribuyendo de esta manera a la oxidacin de la materia orgnica, por una lado y por el
otro a aumentar el oxgeno disuelto en el agua, el cual ser utilizado por las otras
comunidades u organismos que componen la flora y fauna del medio acutico donde
viven (Lujan de Fabricius, 2000), citado por Rivas Cevallos & Vera Vera (2011).
Algunas microalgas se cultivan en fitorreactores para procesos de depuracin de aguas
residuales y de desechos industriales (Rivas Cevallos & Vera Vera, 2011). En el Centro de
Investigacin y de Estudios Avanzados del Instituto Politcnico Nacional (CINVESTAV) en
Mxico, se ha tenido algunas contribuciones relacionadas con el tratamiento terciario de
aguas residuales porcinas, en los que ha explotado el potencial de las cianobacterias
Phormidium sp. y Spirulina maxima. Los resultados obtenidos indican que el crecimiento
de las cianobacterias disminuy la demanda qumica de oxgeno (DQO) de los residuales
dando como resultado un efluente terciario cuya calidad hace posible su vertimiento a
cuerpos de agua o su utilizacin en actividades de regado y de limpieza. Para Phormidium
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sp., los mejores resultados de remocin de nutrientes se obtuvieron utilizando residual

anaerobio diluido al 25% y residual aerobio diluido al 50%. En tanto que el mayor
crecimiento de Spirulina maxima se obtuvo en residual aerobio diluido al 50% (FerreraCerrato, Rojas-Avelizapa, Poggi-Varaldo, Alarcn, & Caizares-Villanueva, 2006)
En los ltimos 10 aos, se ha venido investigando la capacidad de las microalgas para
biotransformar y biodegradar contaminantes orgnicos como hidrocarburos, plaguicidas,
etc., que resultan de alta peligrosidad para los seres vivos. Los contaminantes orgnicos
en el medio acutico son biodegradados por diversos microorganismos, incluyendo algas,
las cuales han demostrado que son capaces de biotransformar y biodegradar
contaminantes aromticos comnmente encontrados en aguas naturales y residuales
(Semple, Cain, & Schmidt, 1999). Las microalgas y cianobacterias proveen carbono
reducido y nitrgeno a la microbiota presente en los ecosistemas acuticos, lo que
incrementa el potencial de degradacin y eliminacin de contaminantes (Ferrera-Cerrato
et al., 2006).
La utilizacin de organismos fotosintticos para la oxidacin de compuestos orgnicos
incluyendo los hidrocarburos policclicos aromticos (HPA), ha sido demostrada.
Microalgas como Prototheca zopfii, Selenastrum capricornutum, Scenedesmus acutus,
Ankistrodesmus braunii, Chlamydomonas ulvaensis, Chlorella pyrenoidosa y Scenedesmus
brasiliensis, el fitoflagelado Euglena gracilis y las cianobacterias Anabaena cylindrica,
Phormidium foveolarum, Oscillatoria sp. y Agmenellum quadruplicatum, han mostrado ser
eficientes para degradar diversos compuestos orgnicos incluyendo derivados del
petrleo y HPA (Ferrera-Cerrato et al., 2006)
Respecto a la cianobacteria Spirulina maxima y su capacidad para remover HPA utilizando
fenantreno (compuesto altamente txico para los organismos acuticos), se encontr que
cuando la concentracin de fenantreno fue de 100 ppm (partes por milln o mg/kg), se
logr una remocin de 4.72% a las 72 horas de exposicin, mientras que a 200 ppm la
remocin fue de 4.34% en el mismo tiempo de incubacin. La presencia del contaminante
no afect de manera directa el contenido de protena ni el crecimiento de la
cianobacteria, no obstante, la clorofila a result ser un factor de respuesta importante en
el comportamiento del cultivo expuesto a fenantreno (Ferrera-Cerrato et al., 2006).
Con respecto a los metales pesados, algunas Geobacter sp. son capaces de respirar usando
metales, es decir de reducirlos, su aplicacin en el terreno de la bioremediacin es muy
amplia. Por ejemplo en el caso de la contaminacin por Uranio (VI) el cual es insoluble,
pero que al ser metabolizada por Geobacter sp. es reducido a Uranio (IV), el cual es
soluble y puede ser removido.
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Leccin 17. Metabolismo aerobio.

En esta leccin se har nfasis solo en el metabolismo bacteriano aerobio, debido a lo
extenso y complejo de todo el metabolismo, posteriormente en la seccin de
fitoremediacin se hara alusin al metabolismo de algas, debido a las similaridades que
presentan en gran parte del metabolismo.
Para los sustratos que pueden ser biodegradados existen dos mecanismos de
degradacin, aerbio y anaerobio, cuyas reacciones siempre producen CO2 y materia
orgnica (Figura 14).
Figura 14: Esquema de las reacciones de acuerdo a Torres Delgado & Zuluaga Montoya
(2009).
La biodegradacin se basa en la cadena respiratoria o en la cadena transportadora de
electrones, la cual produce una serie de reacciones de oxido-reduccin con el fin de
obtener energa. La cadena se inicia con un sustrato orgnico externo a la clula y acta
como dador de electrones, de modo que la actividad metablica de la clula termina
degradando o consumiendo dicha sustancia. Los aceptores ms comnmente usados por
las bacterias son el oxgeno, nitratos, sulfatos y dixido de carbono. Cuando se usa
oxigeno es un proceso aerobio, con cualquiera de los otros es anaerobio (Losser, 2001).
Cualquiera que sea el xenobitico, lo primero que se hace es quitar este carcter
mediante la accin de enzimas especficas catablicas (oxigenasas, hidrolasas,
deshidrogenasas, amidadas, transferasas, entre otras), para servir de intermediario
metablico y posteriormente continuar en el metabolismo normal de las bacterias.
Enzimas ligninolticas como las ligninoperoxidasas y manganeso peroxidasas utilizan H 2O2
como aceptor de electrones y catalizan la oxigenacin de diversos compuestos incluyendo
los polmeros de lignina. Numerosas bacterias y hongos degradan hidrocarburos lineales,
solventes halogenados y cicloalcanos en condiciones aerbicas, en ocasiones en
cooxidacin de otros metabolitos.
Los microorganismos han involucrado sistemas enzimticos catablicos para el
metabolismo de compuestos aromticos. En la oxidacin de compuestos aromticos el
66

oxgeno es la clave para la hidroxilacin y fusin del anillo aromtico. La biodegradacin

de una molcula aromtica sigue dos pasos: la activacin del anillo y el rompimiento del
anillo (Figura 15). La activacin involucra la incorporacin del oxgeno molecular al anillo,
esto es, dihidroxilacin del ncleo aromtico. Este paso es llevado a cabo por enzimas
conocidas como oxigenasas. Las dioxigenasas, catactersticas de las bacterias, catalizan la
incorporacin de dos tomos de oxgeno molecular en un solo paso para formar un
dihidrodiol. Los hidrodioles despus se oxidan a derivados dihidroxilados como los
catecoles, que son precursores del rompimiento del anillo. El catecol puede ser oxidado ya
sea por la via orto para dar el cido mucnico, o la via meta que va a dar el semialdehido
2-hidroximucnico (Eweis, Ergas, Chang, & Schroeder, 1998).
Figura 15: Ruta de degradacin (via catecol) de compuestos aromticos (Eweis et al.,
1998) utilizada por bacterias como Pseudomonas putida.
Si bien el grupo nitro aumenta la resistencia del anillo aromtico a la biodegradacin,
diversos autores han descrito aislamientos bacterianos capaces de utilizar estos
compuestos como fuente de carbono, liberando nitrito al medio. Entre estas cepas se
incluyen especies pertenecientes a los gneros Arthrobacter (Chauhan, Chakraborti, &
Jain, 2000), Bacillus (Kadiyala, Smets, Chandran, & Spain, 1998), Pseudomonas (Zeyer,
Kocher, & Timmis, 1986), Burkholderia (Bhushan, Chauhan, Samanta, & Jain, 2000),
Rhodobacter (M. D. Roldn, Blasco, Caballero, & Castillo, 1998), Sphingomonas
(Zablotowicz et al., 1999), Nocardioides (Ebert, Rieger, & Knackmuss, 1999) y Rhodococcus
(Gomez Cruz, 2009; Lenke, Pieper, Bruhn, & Knackmuss, 1992).
En general, los compuestos nitroaromticos pueden ser degradados a travs de dos tipos
diferentes de mecanismos dependiendo del nmero de sustituyentes nitro del anillo: uno
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de ellos es el mecanismo oxidativo tpico de compuestos mononitroaromticos y el otro es

el mecanismo reductivo que ocurre frecuentemente en los compuestos
polinitroaromticos (M. D. D. Roldn et al., 2008). La oxidacin de los compuestos
nitroaromticos ocurre en aerobiosis (Spain, 1995; Spain et al., 1979; Zeyer et al., 1986);
sin embargo, la reduccin de los compuestos nitroaromticos ocurre tanto en aerobiosis
como en anaerobiosis (Gomez Cruz, 2009; Hallas & Alexander, 1983)(Figura 16).
Figura 16: Transformacin bioqumica de los compuestos nitroaromticos (Gomez Cruz,

2009).
El metabolismo oxidativo puede seguir la ruta de las mono o dioxigenasas, las monooxigenasas se ha encontrado que actan sobre el 4-nitrofenol, 4nitrocatecol (Chauhan et
al., 2000; Jain, Dreisbach, & Spain, 1994), onitrofenol (Xiao, Zhang, Liu, & Zhou, 2007;
Zeyer et al., 1986) y dependiendo del aislamiento pueden eliminar el grupo nitro en forma
de nitrito, aunque tambin se puede hidroxilar el anillo sin salida del grupo nitro (Gomez
Cruz, 2009)(Figura 17a).
Figura 17: Rutas aerbicas oxidativas de degradacin del anillo aromtico de los
compuestos nitroaromticos.
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(a) conversin de p-nitrofenol a nitrocatecol y su posterior degradacin y (b) conversin

de o-nitrotolueno a metilcatecol (Castillo et al., 2005; Gomez Cruz, 2009).
Cuando se emplean dioxigenasas se adicionan simultneamente dos grupos hidroxilos
(Figura 17b), se ha encontrado en las rutas de biodegradacin del 2,4dinitrotolueno, 1,3
dinitrobenceno, 3nitrobenzoato, 2nitrotolueno y nitrobenceno (Caravatti, 2007). Sin
embargo, la oxidacin de compuestos dinitroaromticos tales como el 2,4dinitrotolueno
(DNT) se ha demostrado solamente en pocas ocasiones (Gomez Cruz, 2009; Heidi,
Boardman, & Freedman, 2000).
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Leccin 18. Metabolismo anaerobio.

Debido a la amplitud de los procesos, se van a tomar solo el metabolismo de solventes
halogenados, hidrocarburos lineales, compuestos aromticos y nitroaromticos.
Los solventes halogenados son degradados en condiciones aerbicas y anaerbicas. La
dehalogenacin reductiva de un halgeno a la vez, puede ser utilizada como fuente nica
de carbono. Las dehalogenasas reductoras usan la decloracion reductiva, mientras las
alquil succinato sintetasas usan la adicin de fumarato (Figura 18).
Figura 18: Dehalogenacin reductiva de tetracloruro de carbono y tetracloroetileno.

Para profundizar un poco mas acerca del metabolismo anaerobio de halogenados, se
recomienda la siguiente lectura (Janssen, Oppentocht, & Poelarends, 2001).
Los hidrocarburos saturados y todos los hidrocarburos aromticos, incluido el benceno,
tienen un proceso de biodegradacin anaerbica que tiene que pasar por una activacin
inicial que puede ser carboxilacin, metilacin, hidroxilacin o adicin de fumarato, donde
la ruta mas utilizada es la adicin de fumarato (Figura 19).
70

Figura 19: Reacciones iniciales durante la degradacin anaerbica de hidrocarburos

saturados y aromticos.
a-d) adicin de fumarato, e) hidroxilacin, f) carboxilacin (Widdel & Rabus, 2001). A estos
mecanismos ha de agregarse la metilacin o adicin de CH3.
Los procesos posteriores dependen del organismo que realice la biodegradacin del
hidrocarburo especfico, requiere de mecanismos enzimticos especficos, muchos de los
cuales no se han dilucidado completamente. Para una visin mas completa de los
mecanismos durante la degradacin de hidrocarburos aromticos se puede revisar a
Widdel & Rabus (2001).
Por su parte, la presencia de los grupos nitro en el anillo de los compuestos
nitroaromticos dificulta el ataque oxidativo y favorece el mecanismo reductivo. La
presencia de dos o ms grupos nitro determina una mayor resistencia a la oxidacin. Por
lo tanto, los compuestos polinitroaromticos son degradados a travs de rutas reductivas
(Gomez Cruz, 2009; Hallas & Alexander, 1983; M. D. D. Roldn et al., 2008).
Dos procesos se pueden llevar a cabo, bien sea la reduccin del anillo mediante la adicin
de iones hidruros, o bien a la reduccin de grupo nitro para obtener los derivados: nitroso,
hidroxilamino o amino. El nitrito o el amonio liberado del anillo aromtico por vas
degradativas pueden ser utilizados como fuente de nitrgeno para el crecimiento
bacteriano (Gomez Cruz, 2009; M. D. D. Roldn et al., 2008)(Figura 20).
71

Figura 20: Reduccin de los compuestos nitroaromticos.

Reduccin del anillo aromtico (arriba) y reduccin del grupo nitro (abajo). Adaptada de
M. D. D. Roldn et al. (2008).
Las nitroreductasas mas estudiadas son las tipo I (insensibles a oxgeno), que catalizan la
reduccin de una gran variedad de compuestos nitroaromticos mediante la adicin de
pares de electrones formando intermediarios nitroso (NO) e hidroxilamino (NHOH) y,
finalmente, el producto aminoderivado (NH2) (Gomez Cruz, 2009; Nishino et al., 2000;
M. D. D. Roldn et al., 2008)(Figura 21).
72

Figura 21: Reduccin del nitrobenceno catalizada por la nitrobenceno reductasa (Tipo I) de
Pseudomoas pseudoalcaligenes.
El proceso se realiza mediante la adicin secuencial de pares de electrones del NADPH
(Gomez Cruz, 2009; Johnson & Spain, 2003; Nishino et al., 2000).
Eschericha coli, Salmonella entrica, Enterobacter cloacae, Klebsiella sp., Pseudomonas
pseudoalcaligenes, Pseudomonas putida, Vibrio fischeri, Vibrio harveyi, Synechocystis sp.,
Rhodobacter capsulatus, Bacillus subtilis, Staphyllococcus aureus y Clostridium
acetobutylicum se encuentran entre las bacterias que producen nitroreductasas
bacterianas tipo I (M. D. D. Roldn et al., 2008).
Por su parte, Rhododoccus sp. posee una gran variedad de vas metablicas para la
degradacin y modificacin anaerbica de compuestos aromticos, hidrocarburos
alifticos halogenados y numerosos compuestos aromticos, como los PAHs (Torres
Delgado & Zuluaga Montoya, 2009). Pseudomonas aeruginosa tambin degrada gran
cantidad de sustratos como el n-hexadecano, compuestos alifticos, hidrocarburos
aromticos y poliaromticos en condiciones anaerobias (Torres Delgado & Zuluaga
Montoya, 2009). Finalmente tambin se ha encontrado Desulfomonile tiedjei como
degradador del Monoclorobenzoato (Compuesto orgnico voltil) en condiciones
anaerobias.
73

Leccin 19. Metabolismo de metales.
Para los metales pesados las rutas metablicas son diferentes a las de otros
contaminantes, debido a que los metales no se degradan, solo sufren reacciones de
transformacin para ser detoxificados o acumulados, pero no son utilizados como sustrato
para generar biomasa.
La mayora de las transformaciones de metales efectuadas por microorganismos tienen
funciones primarias no relacionadas con la transformacin de metales, pero que alteran
su solubilidad, movilidad y/o toxicidad, por lo tanto, pueden emplearse como estrategias
de remediacin.
Las vas por las cuales los microorganismos pueden influenciar los metales pueden ser
(Figura 22):
1- Acumulacin de metales de forma independiente del metabolismo (adsorcin
pasiva) o intracelular o dependiente del metabolismo (absorcin activa). Ambos
mecanismos pueden ocurrir en el mismo organismo. Si un metal es acumulado por
el microorganismo, el destino del metal, estar relacionado con el destino de la
clula. De otra parte si los microorganismos son transportados, el metal se mover
con ellos.
2- Algunos metales pueden ser transformados por procesos redox (p. ej. Fe y Mn) o
por alquilacin (p. ej. Hg). La movilidad y toxicidad del metal transformado
usualmente difiere en gran medida a su forma original.
3- Los microorganismos pueden producir o liberar sustancias, como compuestos
orgnicos o sulfuros que cambian la movilidad de los metales, reduciendo la
movilidad de stos.
4- Los microorganismos participan en el ciclaje de carbono y por lo tanto influencian
la cantidad y caractersticas de la materia orgnica. Esto es de gran importancia
para la movilidad de los metales porque la materia orgnica se suele unir a los
metales. La degradacin microbiana de los complejos rgano-metlicos puede
cambiar la especiacin del metal. Sin embargo los metales unidos a varias
sustancias orgnicas pueden disminuir la degradacin microbiana del compuesto
orgnico. El resultado puede ser materia orgnica con los metales acumulados, la
cual no es biodegradada.
5- En adicin a estos procesos directos, los microorganismos pueden influenciar
indirectamente la movilidad de los metales debido a que afectan el pH y las
propiedades del suelo.
74

Figura 22: Interaccin entre metales y microorganismos explicando la precipitacin,

acumulacin, produccin o liberacin de sustancias y participacin en el ciclo de carbono.
Adaptado de Ledin (2000).
Por su parte, la acumulacin pasiva puede principalmente ser influenciada por: a) las
propiedades de la superficie tales como la carga y orientacin de los grupos funcionales
del metal sobre la superficie de la clula y b) la especiacin del metal y la qumica en la
fase acuosa (Ledin, 2000). En organismos que solo realizan acumulacin pasiva, se ha
encontrado que se puede seguir un proceso, comenzando con una reaccin electrosttica
de los metales con los grupos de la superficie y luego se convierten en centros de
agregacin de stos, logrando alcanzar hasta el mismo peso de la clula, lo que lleva a que
la clula se precipite.
Algunas bacterias tienen capacidad para unirse a iones metlicos del exterior de la
superficie celular en un mecanismo de adsorcin pasiva, y adems utilizan los metales
para funciones estructurales y/o catalticas, en este caso los transportan hacia el interior
mediante absorcin activa, esto lo hacen mediante:
Captacin de metales traza en forma inica para incorporacin a metalo-enzimas o
para la activacin de enzimas.
Utilizacin de metales como donadores/aceptores de electrones en el metabolismo
energtico).
Detoxificacin enzimtica de metales txicos: son convertidos a formas con menor o
nula toxicidad por oxidoreduccin enzimtica.
75

Formacin de una biopelcula, generalmente de polisacricos en la superficie del metal

con diferentes tipos de bacterias; algunos productos metablicos resultan corrosivos.
Las bacterias (vivas o muertas) tienen la capacidad de unir cationes a la superficie
celular y acumularlos, lo cual depende de la presencia de sitios de unin de metales,
de la presencia de grupos carboxlicos como aminas y grupos fosfricos.
Algunas bacterias pueden promover con productos metablicos la lixiviacin (selectiva
o no) de constituyentes metlicos de minerales (Biolixiviacin).
Ciertos microorganismos excretan productos metablicos inorgnicos (sulfuros,
carbonatos, fosfatos) en su metabolismo respiratorio que precipitan iones metlicos
(Bioprecipitacin).
Entre los metales que pueden ser adsorbidos se encuentran Hg (II), U, Cd(II), Zn(II), (II),
Cu(II), Ag(I), La(III), Pb(II), Ni(II), Fe(III), Ca(II), Cr(VI), TcO4-, Sr(II), Mn(II) y Tl(I), por
microorganismos como Pseudomonas putida, Scherichia coli, Pseudomonas sp.,
Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas capecia, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus
mucilagenosus, Thiotrix sp., Rhodococcus erythropolis, Synechocistis sp., Synechococcus
sp. y Plectonema borianum (Ledin, 2000; Mo & Lian, 2010; Murthy, Bali, & Sarangi, 2012).
Entre los factores que afectan la eficiencia de adsorcin de metales se encuentra la
temperatura, ya que las tasas de reaccin se incrementan a altas temperaturas, pero muy
altas temperaturas tambin pueden matar las clulas; tambin es importante la edad de
las clulas ya que clulas de un solo da acumulan menos metales que aquellas de dos o
tres das, as tambin si la clula est muerta acumula la mitad de una clula viva (Ledin,
2000).
Entre los factores ms influyentes se encuentra el pH del medio, la dependencia del pH
depende mucho de la concentracin del metal, a altas concentraciones de Pb no hay casi
dependencia de la adsorcin por Pseudomonas atlentica (Lion & Rochlin, 1989), mientras
la adsorcin incrementa significativamente con el pH a bajas concentraciones de Pb. Lo
opuesto, un incremento de la dependencia del pH con el incremento de la concentracin
del metal se ha visto con la acumulacin de Cd en Pseudomonas cepecia (Savvaidis,
Hughes, & Poole, 1992).
La dependencia del pH en la acumulacin microbiana de metales puede ser
completamente dependiente de los metales y organismos. Los perfiles de dependencia de
cada metal incrementan o disminuyen su acumulacin con el pH, los valores mnimo y/o
mximo generalmente son encontrados alrededor de la neutralidad. Por lo general la
dependencia del pH por los aniones es significativamente diferente de la de los cationes.
Para una informacin mas completa se puede consultar el artculo escrito por (Ledin,
2000).
76

Leccin 20. Aplicaciones.
En esta leccin se abarcarn algunos casos de aplicacin de bacterias en procesos de

bioremediacin, algunos casos corresponden a Colombia, mientras otros corresponden a
otras partes del mundo; tambin se debe considerar que la biotecnologa basada en
bacterias es una de las mas difundidas y empleadas, por lo tanto los casos en que se
puede aplicar abarcan un amplio rango de contaminantes, los cuales intentare explicar la
forma mas sencilla posible.
En Colombia alrededor de una planta productora de TNT (Tri-nitro-tolueno, un
nitroaromtico xenobitico recalcitrante), se aislaron bacilos gran-negativos degradadores
de este elemento, se requiri adicionar una fuente de carbono al medio para favorecer la
degradacin (Villegas Plazas, 2009), es una biotecnologa importante debido al carcter
contaminante del TNT y su condicin recalcitrante.
Segn Golovleva, Aharonson, Greenhalg, Sethunathan, & Vonk (1990), las Pseudomonas
son las bacterias ms eficientes en la degradacin de compuestos txicos, la capacidad de
estas bacterias para degradar estos compuestos depende del tiempo de contacto con el
compuesto, las condiciones ambientales en las que se desarrollen y su versatilidad
fisiolgica. En Peru, Vsquez y Reyes (2002) evaluaron tres especies de Pseudomonas para
la biodegradacin del herbicida Aroclor 1242, los resultados obtenidos demuestran la
gran capacidad de las bacterias para degradarlo, encontrando un porcentaje de
degradacin entre 99,8 y 98,4% (Torres Rodrguez, 2003)
En Mxico se aisl un consorcio bacteriano de suelos agrcolas, capaz de degradar el
plaguicida tetraclorvinfos (cido fosfrico, 2-cloro-1-(2,4,5-triclorofenil) etenil dimetil
ester, TVC). Este consorcio estuvo formado por seis cepas puras que fueron caracterizadas
con base en sus caractersticas bioqumicas y morfolgicas. Las cepas fueron
presumiblemente identificadas como Stenotrophomonas malthophilia, Proteus vulgaris,
Vibrio metschinkouii, Serratia ficaria, Serratia spp. y Yersinia enterocolitica. El consorcio y
las seis cepas puras fueron cultivados en medios mineral y enriquecido, para evaluar su
capacidad para degradar TCV. Los resultados mostraron que el consorcio es capaz de
crecer en presencia de TCV como nica fuente de carbono; todas las cepas removieron
este plaguicida en el medio enriquecido, sin embargo slo una cepa removi el TCV del
medio mineral. Estos datos indican que las cepas aisladas pueden ser utilizadas para la
biodegradacin de residuos o para la biorremediacin de suelos o aguas contaminadas
con este plaguicida (Ortiz-Hernndez & Snchez-Salinas, 2010).
En el altiplano boliviano los drenajes cidos de las minas estn caracterizados por la
acidez extrema, altas concentraciones de metales pesados y sulfatos. Las bacterias sulforeductoras reducen sulfatos oxidando la materia orgnica para la produccin de sulfuro de
77

hidrgeno y bicarbonato. La bioremediacin consiste en la precipitacin insoluble del

sulfuro con los metales pesados y la alcalinizacin del medio por el bicarbonato. Se
establecieron dos consorcios sulfato reductores acidfilos, capaces de ser aplicados a
bioreactores para la produccin de sulfuro de hidrgeno en condiciones cidas. El
establecimiento de un sistema de bioremediacin en dichas condiciones permitir el
tratamiento directo de drenajes cidos de mina utilizando residuos agrcolas como
materia orgnica oxidable (Gutierrez R., Terrazas S., & Alvarez A., 2007)
En Holanda, la refinera de Zn de Budel-Dorplein, est diseada para remover
contaminantes metlicos de aguas subterrneas por reduccin de sulfatos mediante
bacterias (bacterias sulfato reductoras). Esta planta tiene un afluente de 300 m 3/h con una
carga contaminante de 100 mg/l Zn, 1 mg/l Cd y 1000 mg/l sulfato, el efluente de la planta
tiene una carga contaminante de <0.3 mg/l Zn, <0.01 mg/l Cd y <200 mg/l sulfato. En esta
planta los sulfuros metlicos precipitados por el H2S y el S elemental producido por la
oxidacin microbiana del exceso de H2S, son transportados a un horno de fundicin donde
se recuperan los metales y el sulfuro es convertido en cido sulfrico. El pH se eleva
debido a la produccin de bicarbonato como consecuencia de la oxidacin de los
nutrientes orgnicos.
En la costa de Galicia suelos saturados con Diesel fueron tratados con sistemas anaerobios
debido a las limitantes de oxgeno ya que los hidrocarburos totales (HCT) se encontraban
a 4.6 mts de profundidad. Se recurri al uso de aceptores alternativos de electrones,
mediante la adicin de nutrientes y bioaumentacin. Como resultado se elimin ms del
90% de los contaminantes en las zonas ms crticas y una considerable reduccin de
hidrocarburos en casi todo el lugar. A 4.6 metros de profundidad las concentraciones de
HCT se redujeron de 1000 mg/kg a menos de 100 mg/kg; se complet la remediacin
aproximadamente de 27400 m3 de suelo y acufero contaminado con diesel, cubriendo un
rea de aproximadamente 12200 m2 a una profundidad de 6 metros, cumpliendo con
todas las regulaciones y leyes ambientales estatales y federales.
En un sistema de bioremediacin por Landfarming en Argentina, una muestra de suelo en
actividad se us para determinar la capacidad de la comunidad bacteriana de biodegradar
petrleo y sus destilados, de sta se caracterizaron sus propiedades fsicas, qumicas y
microbiolgicas. La comunidad bacteriana del suelo poseia la capacidad de biodegradar
los hidrocarburos existentes en el mismo, principalmente la fraccin aliftica, as como los
destilados gasoil, kerosn y aceite lubricante, mientras la fraccin aromtica, la polar y el
destilado nafta no fueron degradados. Est comunidad constituida principalmente por
Rhodococcus erythropolis, Achromobacter xylosoxidans y Brevundimonas diminuta,
mostr la utilidad del componente bacteriano en el sistema de landfarming para la
degradacin de derivados de petrleo (A. Acua, Pucci, Morales, & Pucci, 2010).
78

En toda Colombia existen yacimientos de petrleo y los derrames ms que un accidente

son una regla general, para lo cual el Instituto Colombiano del Petrleo (ICP) ha obtenido
aislamientos bacterianos y ha desarrollado tecnologas de vanguardia con las que pueden
sobrellevar estos vertimientos en un tiempo corto con una alta eficiencia, dependiendo de
la regin y las condiciones de la zona que se necesita recuperar. En el Caribe colombiano
se han encontrado nueve aislamientos bacterianos con capacidad de degradacin de
hidrocarburos alifticos pero no de los aromticos, que corresponden a los a los gneros
Klebsiella, Chromobacterium, Flavimonas, Enterobacter, Pseudomonas y Bacillus. Las
cepas evaluadas tienen el potencial enzimtico para degradar hidrocarburos, bsico para
disponer de un consorcio efectivo para la aplicacin en campo adaptado a las condiciones
del Caribe colombiano (Narvez-Flrez, Gmez, & Martnez, 2008).
A nivel acutico se ha observado la remocin de fenantreno por Azolla caroliniana y su
microsimbionte Bacillus stearothermophilus, utilizando bioaumentacin con
microorganismos hidrocarbonoclastas, en Mxico se han encontrado resultados positivos
ante concentraciones menores a 60 mg/L, importante para la limpieza de acuferos
contaminados con hidrocarburos (Castro Carrillo, Delgadillo Martnez, Ferrera Cerrato, &
Alarcn, 2008).
El ltimo caso corresponde a una ex-refinera de hidrocarburos localizada en Mxico a la
que denominaremos 18 de marzo, cuyos suelos se encontraban contaminados. El rea
total considerada para tratamiento es de 55 hectreas. A partir del 18 de febrero de 2011
se contrataron los servicios de la Universidad Autnoma de Puebla para realizar los
trabajos de remediacin, la cual procedi con cuatro tecnologas (bioventeo, cultivo slido
o biopilas, biobarreras reactivas y fitoremediacin), las cuales utilizan bacterias total o
parcialmente para sus procesos. A la fecha se tiene un avance general del 98% y se ha
retornado el material tratado al sitio de excavacin.
Asimismo, el 30 de marzo del presente ao el Instituto Tecnolgico Agropecuario de
Oaxaca inici la remediacin de 44672 m2 (89325 m3) aplicando las tcnicas antes
mencionadas. Al momento se tiene un avance del 97% y se retorna el material tratado a la
zona de excavacin.
79

CAPTULO 5. HONGOS Y LEVADURAS (MICORREMEDIACIN).

Los hongos son un grupo muy grande de organismos, tanto hoy en da se consideran un
reino aparte, comprende desde organismos microscpicos hasta de hasta un metro de
longitud en sus estructuras reproductivas. Siendo un grupo tan diverso, heterogneo y
ampliamente distribuido por el planeta, con un papel principalmente descomponedor o
saprobio de prcticamente toda materia orgnica, es de suponer que algunos de ellos
tengan propiedades de bioremediacin.
La bioremediacin en una de sus ramas, usa los hongos para limpiar ambientes
contaminados, aprovechando la capacidad que tienen algunas especies para degradar,
transformar, acumular, tolerar y/o extraer diversos contaminantes (orgnicos
xenobiticos, metales pesados, elementos radioactivos, etc)(Alonso, 2007).
Para la degradacin de compuestos orgnicos y xenobiticos, como hidrocarburos
aromticos se usan Trametes versicolor, Stereum hirsutum, Bjerkandera adusta, Phellinus
pini, Lentinus edodes, Hypholoma fasciculare, Pleurotus ostreatus y diversas especies de
Ganoderma, Phlebia, Phellinus, etc. Para eliminar iones metlicos como Torio y Uranio de
disoluciones y aguas contaminadas (Biosorcin), se utilizan Saccharomyces, Aspergillus,
Penicillium y Rhizopus (Alonso, 2007).
Como tcnica utilizando hongos se encuentra la micoextraccin, la cual consiste en la
extraccin con apoyo de hongos (generalmente se usan gneros o especies de gran
tamao, de forma que sean visibles y fcil trabajar con ellos), de cadenas y sustratos
slidos contaminados por metales pesados. Los mas empleados son Agaricus bisporus y
Pleurotus ostreatus con los cuales se ha logrado extraer platino de pilas de compost. Con
Agaricus macrosporus tambin se ha logrado extraer Cadmio, Mercurio, Plomo, Cobre y
Zinc (Alonso, 2007).
Hay una serie de ventajas en el uso de hongos en relacin al uso de las plantas.
1. La infiltracin del hongo al sustrato es muy superior al de las plantas (debido a que
su cuerpo constituido por hifas puede penetrar mas profundo por su dimetro mas
pequeo).
2. Las especies mas acumuladoras, especialmente el gnero Agaricus, seccin
arvensis, poseen una capacidad de acumulacin de metales como cadmio o
mercurio superior a la de las plantas. Su crecimiento y productividad no se ve
inhibido por la presencia de concentraciones elevadas de metales txicos como el
mercurio.
3. Los cultivos de Agaricus sobre sustratos ricos en materia orgnica esta
ampliamente estudiado y comprendido. Especies como Agaricus macrosporus o
80

Agaricus arvensis son perfectamente cultivables con altas producciones de

carpforos (cuerpos reproductivos).
4. La actividad descomponedora del micelio sobre el sustrato, permite no solo seguir
la depuracin de metales, sino tambin la degradacin de xenobiticos orgnicos
en las pilas de compost o el reciclado para un posterior uso agrcola.
5. El crecimiento y productividad de Agaricus macrosporus no se ve
significativamente afectada por la presencia de mercurio y otros metales (Alonso,
2007).
Sin embargo, tambin se presentan inconvenientes, como:
1. Conseguir la inoculacin del micelio sobre sustratos pobres en materia orgnica
puede dificultase, debido a que requieren materia orgnica a descomponer para
poder crecer.
2. Obtener altas producciones de carpforos en condiciones ambientales no
controladas, como son las condiciones de campo.
3. Posibles dificultades en el cultivo y produccin por competencia con otros hongos
y microorganismos, ya que la mayora de los micoextractores no son altamente
competitivos (Alonso, 2007).
Ciertos hongos son muy efectivos en la remocin de un amplio rango de contaminantes,
por ejemplo:
Sustancias empleadas en la preservacin de la madera.
Hidrocarburos aromticos policclicos.
Organoclorados.
Bifenilos policlorados.
Tinturas.
Pesticidas.
Fungicidas.
Herbicidas.
Lignina.
Aunque los macromycetos sean los preferidos para los procesos de fitoextraccin, son los
hongos microscpicos los que predominan entre los degradadores de hidrocarburos
poliaromticos, como se observa en el Cuadro 10.
Cuadro 10: Gneros fngicos que contienen especies que degradan hidrocarburos
poliaromaticos (PAHs)(Al-Turki, 2009).
81

Los hongos pueden biodegradar solos, en cooperacin con plantas resaltando sus
funciones, o con bacterias en cometabolismo; cualquiera que sea el caso, algunos de sus
procesos metablicos son similares o complementarios, p. ej, el uso de enzimas mono y
dioxigenasas para la degradacin inicial, con la diferencia de que son diferentes enzimas,
como lignoperoxidasas y manganeso peroxidasas, las cuales usan H2O2 como aceptor de
electrones y catalizan la oxigenacin de diversos compuestos incluyendo los polmeros de
lignina.
Al igual que las bacterias es mucha la informacin que se desconoce para poder ser
utilizada, se puede argumentar que los estudios en este campo estn en desarrollo y
muchas de las rutas metablicas y los mecanismos de biodegradacin y biorecuperacin
son especficos para gneros o especies, por lo tanto es difcil generalizar en cuanto a los
resultados que se pueden obtener en cifras y hechos. Los hongos tienen sus ventajas y
desventajas, los cuales pondremos en tela de juicio a lo largo del presente captulo.
82

Leccin 22. Metabolismo.

Debido a la existencia de especificidad en los procesos metablicos para degradar gran
parte de los contaminantes, se har referencia solo a algunos procesos metablicos
haciendo alusin a los organismos de los cuales se conoce su bioqumica. Se incluye la
degradacin del TNT por Phanerochaete chrysosporium (Figura 23), la degradacin del
benzo(a)pyreno por Cunninghamella elegans y Aspergillus ochraceus (Figura 24), Cianuro
por Trichoderma sp (Figura 25) y finalmente del Fenantreno y Pireno por Cyclothirium sp
(Figura 26).
Figura 23: Metabolitos intermediarios formados durante la degradacin aerobia de TNT

por Phanerochaete chrysosporium (Spain, 1995).
Los intermediarios 2,2, 6,6-tetranitro-4,4-aoxitolueno y 4-amino-2,6-dinitrotolueno han
sido reportados durante la degradacin de TNT por Trichoderma viride (Argumedo-Delira,
Alarcn, Ferreta-Cerrato, & Pea-Cabriales, 2009; Bayman & Radka, 1997).
83

Figura 24: Transformaciones fungicas del benzo(a)pyreno.

La formacin de benzo(a)pyrenos hidrolizados y de dihidrodioles de benzo(a)pyreno
ocurre por la via de epxidos de benzo(a)pyreno. Los dihidrodioles pueden ser
transformados a diol epxidos los cuales posteriormente sern transformados para formar
tetraoles cis y trans (Juhasz & Naidu, 2000) adaptado de Datta & Samanta (1988).
Varias especies de Trichoderma tienen la capacidad de metabolizar cianuro va rodanasa y
cianuro hidratasa (Figura 25), pero no se ha encontrado evidencia de que utilicen la ruta
de la -cianoalanina sintetasa (Ezzi & Lynch, 2005), lo que indica que no es comn
encontrar esta enzima en los hongos, en comparacin con plantas y algunas bacterias
(Raybuck, 1992).
Figura 25: Mecanismo enzimtico propuesto para Trichoderma spp. durante la

degradacin de cianuro (Argumedo-Delira et al., 2009; Ezzi & Lynch, 2005).
84

Figura 26: Degradacin de Fenantreno y Pireno por Cyclothirium sp. (da Silva, Esposito,
Moody, Canhos, & Cerniglia, 2004).
85

Leccin 23. Micorremediacin con micorrizas.

La micorriza es una asociacin simbitica entre grupos particulares de hongos y las
plantas, los dos tipos principales son las micorrizas arbusculares (MA) y las ectomicorrizas
(EM), se har nfasis en las MA por ser las ms estudiadas. Cabe sealar que debido a la
biotrofa obligada de los hongos de micorriza arbuscular (HMA), los mecanismos por los
cuales hacen frente a altos niveles de metales pesados (MP) se expresan prcticamente en
su totalidad en el estado simbitico, formando la micorriza arbuscular (MA). Estos
mecanismos son en su mayora muy similares a los que presentan las plantas, destacando
(Figura 27)(Cornejo, Meier, & Borie, 2008; Siddiqui, Sayeed Akhtar, & Futai, 2008):
(1) inmovilizacin en el suelo por la secrecin de sustancias quelantes (reduce la toma o
incrementa el flujo, formacin de complejos fuera de las clulas, liberacin de cidos
orgnicos, etc).
(2) enlace de MP a los biopolmeros de la pared celular (quitina, celulosa), melaninas en
las EM (Galli, Schepp, & Brunold, 1994).
(3) inmovilizacin sobre la superficie de la membrana plasmtica una vez atravesada la
pared celular.
(4) transportadores de membrana que ingresan MP desde el suelo al citosol.
(5) quelacin intracelular por sntesis de ligandos como metalotionenas, cidos orgnicos,
polifosfatos, aminocidos, etc.
(6) exportacin de MP desde el citosol mediante transportadores de membrana.
(7) confinamiento de MP en vacuolas.
(8) absorcin biolgica via glomalina.
Figura 27: Mecanismos de tolerancia al estrs pormetales pesados desarrollado por la

simbiosis MA.
86

Tanto la planta como el hongo poseen mecanismos similares: 1) quelacin extracelular; 2)

enlace del MP a la pared celular; 3) membrana plasmtica como barrera selectiva; 4)
incorporacin mediante transportadores de membrana; 5) quelacin en el citosol; 6)
exportacin por transportadores; 7) secuestro en la vacuola. Slo el hongo presenta los
siguientes mecanismos: 8) transporte de MP en las hifas; y 9) transporte a la planta a
travs de arbsculos (Cornejo et al., 2008), adaptado de Ghre & Paszkowsky (2006), en
los cuales se ha encontrado altas concentraciones de metales pesados (Siddiqui et al.,
2008).
El Cu se acumula principalmente en forma extracelular asociado al Fe, tambin se asocia
con trazas de arsenato dentro del citoplasma en el micelio externo de Glomus mosseae;
por su parte el arsenato tambin se puede acumular dentro del citoplasma en forma
similar a los polifosfatos, lo cual indica que existen diferentes mecanismos de acumulacin
de Cu y Arsenato (Siddiqui et al., 2008), al igual puede suceder con otros metales.
El transporte de MP a travs de las hifas es favorecido por tratarse de organismos con
hifas cenocticas (sin septos o divisiones celulares claras). Por otra parte, la posible
existencia de transportadores en la membrana de los arbsculos que exportan MP hacia la
matriz interfacial (zona de contacto ntimo entre la membrana plasmtica del hongo y la
clula radical), permitira una mayor incorporacin de MP por la planta. Esto explicara
que algunas especies de plantas micorrizadas incrementen sus contenidos de MP en la
parte area (Ebbs & Kochian, 1998). Esta asociacin es un componente clave en
ecosistemas contaminados con estos elementos, como ocurre con los suelos afectados
por el depsito de residuos provenientes de la minera; adems, se convierte en una
herramienta biotecnolgica muy importante a tener en cuenta al momento de disear
programas de fitorremediacin (Cornejo et al., 2008).
En suelos contaminados con altos niveles de MP, se ha observado la presencia de
poblaciones naturales de HMA que generan colonizaciones micorrcicas efectivas o incluso
incrementadas por altas concentraciones de Cd, Zn y Pb (Cornejo et al., 2008; Turnau,
Miszalki, Trouvelot, Bonfante, & Gianinazzi, 1996). As mismo la tolerancia de las
micorrizas arbusculares y ectomicorrizas a altas concentraciones de MP se refleja en el
nmero de esporas de HMA, colonizacin de raz por HMA y EM, y la abundancia de
cuerpos fructferos de EM. En el mismo sentido el tipo de metaloide o metal pesado
influye en el sentido de estas variaciones, as por ejemplo la esporulacin es la mas
reducida por estrs a metaloides (Al, As, Ba, Cd, Cr, Cu, Pb, Se, Sr y Zn) a largo plazo,
mientras el Ni aumenta la esporulacin de HMA (Siddiqui et al., 2008). Estos hechos
revisten un elevado inters biotecnolgico si se consideran las ventajas que la simbiosis
micorrcica puede aportar en la biorremediacin de suelos afectados por actividades
mineras (Cornejo et al., 2008).
87

Existen numerosos estudios que muestran la significativa contribucin de los HMA en

biorremediacin. Por ejemplo, se ha observado que la micorrizacin confiere a las plantas
una mayor capacidad de establecimiento en suelos afectados por actividades mineras
(Shetty, Hetrick, Figge, & Sshwab, 1994). Esto se puede deber a la mayor velocidad de
adaptacin de los hongos respecto de las plantas frente a condiciones ambientales
adversas (Wilkinson & Dickinson, 1995). Esto los convierte en un grupo de organismos ms
tolerantes a elevados niveles de MP y otras limitantes. Esta mayor tolerancia otorgada por
el HMA a las plantas, incluso sin otro beneficio evidente, justificara el uso de este tipo de
hongos en biorremediacin de suelos contaminados con MP, como los presentes en reas
influidas por la actividad minera (Cornejo et al., 2008).
De forma ms particular, se ha demostrado que plantas micorrizadas (como Avena sativa
y Hordeum vulgare) extraen cantidades considerables de algunos MP (como Pb y Zn),
llegando a igualar lo extrado por plantas hiperacumuladoras no micorrizables (como
Brassica juncea (Ebbs & Kochian, 1998), lo que demuestra su utilidad en procesos de
fitoextraccin. Por otra parte, los procesos de fitoestabilizacin tambin se favorecen en
plantas micorrizadas, como lo demuestran diversos estudios donde se ha observado el
transporte de algunos MP (como Zn, Cd y Cu) por hifas y races de plantas micorrizadas de
Trifolium repens y Zea mays, sin que se produzca su posterior translocacin a la parte
area. En este caso, el MP queda en el suelo, pero de formas menos disponibles para
otros organismos, por lo que se reduce su toxicidad. Por lo anteriormente sealado, los
HMA resultan una importante herramienta a considerar al momento de optar por el
desarrollo de procesos de fitoestabilizacin (Leyval, Joner, Del Val, & Haselbandter, 2002).
An sin que existiese un efecto promotor de la fitoacumulacin o fitoestabilizacin, la
formacin de MA efectivas sera muy beneficioso, ya que facilitara el establecimiento de
una mayor densidad y diversidad de plantas (Pawlowska, Chaney, Chin, & Charvat, 2000),
generndose as una espiral de efectos beneficiosos para el sistema suelo-planta. Adems,
en el caso particular de plantas bioacumuladoras, la micorrizacin puede incrementar su
crecimiento, vindose incrementada tambin la cantidad total de MP extrada desde el
suelo (Cornejo et al., 2008; Khan, Kuek, Chaudhry, Khoo, & Hayes, 2000).
La asociacin MA se encuentra en el 80% de las plantas en el planeta y su eficiencia en
cuanto a la tolerancia a los metales puede variar dependiendo factores como (Siddiqui et
al., 2008; Smith & Read, 2008):
Los ecotipos de HMA (provenientes o no de suelos ricos en metales, sitios
metalferos o minas poluidas con metales pesados).
Expresin fngica.
Produccin de metalotioneinas (protena que se une al metal).
La especie de HMA.
88

Leccin 24: Degradacin de plaguicidas, insecticidas y organoclorados.

En suelos contaminados con TNT (1,1,1-Tricloro-2,2-bis(4-clorofenil)-etano) se ha logrado
aislar bacterias y hongos capaces de degradarlo, de los cuales se han identificado algunos
gneros fngicos como Alternaria, Aspergillus, Penicillium, y Trichoderma, los cuales
muestran variaciones en su tolerancia hacia el TNT (Bennett, Hollrah, Waterhouseb, &
Horvathc, 1995). En el caso particular de Trichoderma viride, este hongo es capaz de
transformar al TNT en un 16 % en metabolitos solubles como 2,2,6,6-tetranitro-4,4azoxitolueno, 4-amino-2,6-dinitrotolueno y 2-hidroxilamino-4,6- dinitrotolueno. Este
hongo presenta mayor tolerancia al TNT, en comparacin con Schizophyllum commune y
Cladosporium resinae (Bayman & Radka, 1997). En condiciones anaerobias los grupos
nitrogenados del TNT se reducen uno a uno en grupos amino; sin embargo, cada proceso
de reduccin es ms lento y menos completo que el anterior. Si las condiciones pasan a
una condicin aerobia, los intermediarios parcialmente reducidos forman productos de
condensacin de tipo azo, que son molculas ms estables y por lo tanto ms
recalcitrantes, adems de ser agentes mutagnicos.
La ruta de degradacin del TNT ha sido caracterizada a travs de la actividad del hongo
causante de la pudricin blanca de la madera P. chrysosporium (Fernando, Bumpus, &
Aust, 1990; Spain, 1995). Algunos de los intermediarios formados durante la degradacin
de TNT por P. chrysosporium, tambin han sido reportados para T. viride (ArgumedoDelira et al., 2009; Bayman & Radka, 1997).
La mayora de los plaguicidas organoclorados como el DDT, el dieldrin y el endosulfn,
son persistentes en la naturaleza, (el DDT con una vida media mayor a 100 das, aunque
en algunos bosques su vida media llega a ser de 20 a 30 aos; Mitra y Raghu 1998),
adems presentan alta toxicidad. Hongos como Phanerochaete chrysosporium, son
capaces de transformar el DDT enzimticamente al inducir la deshalogenacin va
procesos aerobios (Argumedo-Delira et al., 2009; Paszczynski & Crawford, 1995), y
Trichoderma es capaz de degradar los tres plaguicidas (Hay & FoCht, 1998; Snedeker,
2001). Los principales metabolitos de biodegradacin de endosulfan por T. harzianum son
el sulfato de endosulfn y el diol de endosulfn, que se generan por la accin de un
sistema enzimtico oxidativo. Lo anterior sugiere que la enzima hidroltica sulfatasa es la
responsable indirecta de la formacin del diol de endosulfan (Argumedo-Delira et al.,
2009; Mukherjee & Mittal, 2005).
Insecticidas como forato o carbofurano (con vida media en el ambiente de 9.1 a 10.4
meses) pueden estimular o inhibir el crecimiento de especies de Trichoderma (Das,
Chakravarty, Sukul, & Mukherjee, 2003). Ms an, T. viride contribuye en la degradacin
del herbicida triflurina (concentracin inicial: 1 mg/L) en ms del 90 % en
aproximadamente 10 das (Zayed et al., 1983). Anderson & Domsch (1976) mencionan que
89

la degradacin del herbicida arvadex (concentracin inicial: 2.5 mg/L) por T. harzianum es
muy lenta en cultivo lquido, ya que fue menor al 20% despus de 10 das de incubacin.
En contraste, las especies T. harzianum y T. longipilus son sensibles al herbicida
fosfinotricina a una concentracin de 1 mM (Ahmad & Malloch, 1995; Argumedo-Delira et
al., 2009).
Los organofosforados son empleados como insecticidas, plastificantes y como armas
qumicas, que se caracterizan por tener alta toxicidad hacia mamferos y que se
encuentran contaminando tanto ecosistemas acuticos como terrestres (B. K. Singh &
Walker, 2006). As, T. harzianum es capaz de utilizar el insecticida organofosforado
clorpirifos como fuente de azufre y de fsforo (Omar, 1998) y tambin es capaz de
degradar glifosato y cido aminometil fosfrico (Argumedo-Delira et al., 2009).
Una de las actividades industriales cuyas descargas causan efectos adversos sobre el
medio ambiente es la industria de la celulosa (Sponza, 2003), la cual utiliza cloro y dixido
de cloro durante el proceso de blanqueo de la pulpa (Stinchfield & Woods, 1995). En este
proceso se generan diversos compuestos organoclorados altamente txicos, entre ellos se
encuentran
4,5-dicloroguaiacol,
3,4,5-tricloroguaiacol,
4-etil-2-metoxifenol,
pentaclorofenol, 2,3,5,6-tetra- cloro-4-metoxifenol, eugenol, tetracloroguaiacol, 4,5,6tricloroguaiacol, hexaclorociclohexano, cido hexadecanoico, 2-metoxifenol, 2,6dimetoxifenol, 4,5-dicloro-2-metoxifenol, por mencionar algunos (Kovacs, Gibbons,
Tremblay, OConnor, & Voss, 1995)(Gaete, Larrain, BaySchmith, Baeza, & Rodrguez,
2000).
Algunas
especies
del
gnero
Trichoderma
pueden
degradar
pentacloronitrobenceno y pentaclorofenol, pero no degradan al hexaclorociclohexano
(Montiel et al., 2004). En este sentido, se ha demostrado que T. harzianum tiene la
capacidad de degradar 2,4,6-triclorofenol, 4,5-dicloroguaiacol, 3,4,5-tricloroguaiacol,
tetracloroguaiacol y otros compuestos halogenados (Argumedo-Delira et al., 2009; van
Leeuwen, Nicholson, Levay, Hayes, & Mulcahy, 1997).
Gran cantidad de hongos puede degradar los benzo(a)pyrenos, creciendo sobre diferentes
sustratos con eficacias desde 18 a 99% en su remocin y con tiempos de incubacin de 2
horas a 15 semanas; en el proceso producen metabolitos caractersticos de cada
aislamiento fngico (Cuadro 11).
Cuadro 11: Degradacin de benzo(a)pyrenos por aislamientos fngicos (Juhasz & Naidu,
2000).
90

Experimentos de degradacin preparados con ligninasa cruda y preparada de P. chrysosporium.

Experimentos de degradacin preparados con lacasa cruda y preparada de T. versicolor.
c
Experimentos de degradacin preparados con lacasa purificada de T. versicolor.
d
MYPD: Extracto de malta, extracto de levadura, peptona y dextrosa.
e
Experimentos de degradacin preparados con preparaciones de manganeso peroxidasa cruda de N.
frowardii.
f
Experimentos de degradacin preparados con preparaciones de manganeso peroxidasa cruda de N.
frowardii y una sustancia mediadora (5 mM de glutation).
b
A los anteriormente mencionados debemos agregar hongos filamentosos como

Trichoderma viride, Fusarium solani y Fusarium oxysporum, con eficacias de (50%, 58% y
30% respectivamente) los cuales son capaces de degradar los benzo(a)pirenos cuando la
concentracin inicial de stos es inferior a 0.4 mM y se encuentran en condiciones
controladas a 25C durante 30 das (Argumedo-Delira et al., 2009).
91


Se pueden considerar tres clases de aplicacin con hongos, biodegradacin por hongos
independientes, degradacin en simbiosis micorrcica y degradacin por cometabolismo;
cualquiera que sea el mecanismo, la biosorcin va microbiana es ms econmica tanto en
trminos de costo de instalacin como de operacin y mantenimiento, pues los mtodos
qumicos resultan costosos debido a que el agente activo no puede ser recuperado para su
posterior reutilizacin (Argumedo-Delira et al., 2009; Caizares-Villanueva, 2000).
Aunque las bacterias poseen las rutas catablicas para los PAHs, las cuales se presumen
degradan los Benzo(a)pirenos (Bap), su degradacin puede no ocurrir debido a que estos
compuestos no pueden pasar la pared celular bacteriana (Hammel, 1996). Sin embargo
esta limitacin no aplica a hongos debido a su habilidad de producir enzimas
extracelulares (enzimas degradadoras de lignina). La degradacin fungica de los BaP no
resulta en una significativa reduccin del compuesto, sin embargo las ligninasas
convierten el BaP en productos solubles al agua los cuales son mas biodisponibles
(Meulenberg, Rijnaarts, Doddema, & Field, 1997) y potencialmente mas txicas que los
productos de origen. Como la degradacin de los PAHs por las bacterias est limitado por
su incapacidad de hidroxilar los compuestos, la transformacin inicial de los BaP por los
hongos, seguido por la degradacin bacteriana de los metabolitos polares puede llevar a
una estrategia efectiva de bioremediacin, como se ha demostrado en algunos pocos
estudios. Este fenmeno tambin se ha observado con otros PAHs tales como pireno y
Antraceno (Juhasz & Naidu, 2000; Meulenberg et al., 1997).
La presencia de Elementos Potencialmente Txicos (EPT) puede afectar la nutricin del
hongo que se refleja en el limitado crecimiento del micelio, lo cual puede ser un serio
limitante para el tratamiento con hongos. Lo anterior se ejemplifica con la disminucin del
micelio, longitud y ramificaciones de Trichoderma viride observada en presencia de Cu y
de Cd (Gadd, Ramsay, Crawford, & Ritz, 2001). Algunos estudios reportan la habilidad de
T. viride para tolerar y bioacumular Cu en su biomasa; por ejemplo, (Anand, Isar, Saran, &
Saxena, 2006) sealan una remocin de 3.4 mg/L en 72 h, a partir de una concentracin
inicial de 100 mg de CuCl2/L, sealando tambin que la temperatura y el pH afectan la
biosorcin de Cu por este hongo. Algunos EPT como el Cd (1-2 mM) adems de reducir el
crecimiento, tambin pueden inducir cambios en la diferenciacin morfolgica y causar
mutaciones en T. viride (Frank, Tmov, & Takcsov, 1993). En contraste, el crecimiento
de T. viride es significativamente inhibido a concentraciones de mercurio de 1 a 5 mM,
pero sin inducir mutaciones en este organismo (Argumedo-Delira et al., 2009; Frank et al.,
1993).
Por su parte el cianuro es liberado al ambiente en desechos slidos y aguas residuales de
las diferentes actividades industriales como el galvanizado de metales, electrolisis de
aluminio, gasificacin de carbn, lixiviacin de minerales y en la sntesis de frmacos,
92

fibras y plsticos. El hongo Trichoderma sp. se ha empleado para la destoxificacin de

cianuro ya que posee dos enzimas (rodanasa y cianuro hidratasa) capaces de degradarlo
(Ezzi & Lynch, 2002). Adems, la adicin de glucosa como una fuente de carbono
alternativa al medio contaminado incrementa la velocidad de degradacin del cianuro por
las cepas de Trichoderma spp. (Ezzi & Lynch, 2005). Varias especies de Trichoderma tienen
la capacidad de metabolizar cianuro va rodanasa y cianuro hidratasa, pero no se ha
encontrado evidencia de que utilicen la ruta de la -cianoalanina sintetasa (Ezzi & Lynch,
2003), lo que indica que no es comn encontrar esta enzima en los hongos, en
comparacin con plantas y algunas bacterias (Raybuck, 1992). A su vez, (Ezzi & Lynch,
2005) han demostrado que para la degradacin de cianuro de potasio en el suelo (50 y
100 mg kg-1) es posible al utilizar Trichoderma spp. en combinacin con plantas como
alverja (Pisum sativum L.) y trigo (Triticum aestivum L.). Lo anterior denota el potencial
uso de cepas del grupo Trichoderma en sistemas de fitorremediacin, lo cual requiere de
mayor estudio (Argumedo-Delira et al., 2009).
El gnero Pestalotiopsis posee robusta actividad de degradacin, sus microsporas son
capaces de crecer sobre un poliuretano en condiciones con y sin oxigeno, esto es posible
gracias a la enzima 'serina hidrolasa' la cual degrada poliuretano, una de las formas de
plstico existentes en la actualidad.
Las colillas de cigarrillos son basuras comunes en todo el mundo, que contaminan el
ambiente y se fuman cerca de 5,6 millones de cigarrillos al ao. Las sustancias contenidas
en las colillas, como nicotina y alquitrn, son txicas para los peces tanto de agua dulce
como salada, segn el British Medical Journal, citado por la UNAM. Adems de la
contaminacin del agua, los organismos marinos y terrestres, las colillas de cigarrillos
permanecen hasta 10 aos sin descomponerse. Con este reto en manos, los estudiantes
de licenciatura en Biologa en la Facultad de Estudios Superiores Iztacala, perteneciente a
la UNAM, colectaron las colillas de cigarrillos en la propia universidad hasta reunir 8
kilogramos. Despus estudiaron la degradacin por los hongos Pleurotus ostreatus y
Trametes versicolor. Los hongos degradaron cerca del 18% de las colillas e incluso
crecieron en el lquido resultante de la degradacin.
Torres Rodrguez (2003) report que Ouahiba et al. en el 2001 aislaron varias especies de
hongos en suelos contaminados con pesticidas de Argelia. Las especies ms frecuentes
fueron Aspergillus fumigatus, A. Nger, A. terreus, Absidia corymberifera y Rhizopus
microsporus var microsporis. 53 de las especies aisladas se destacaron por su habilidad
para la degradacin del herbicida metribuzin en medio lquido; simultneamente se
demostr que el herbicida promova el crecimiento de los gneros Absidia y Fusarium, los
cuales lograron eliminar el 50% del compuesto despus de 5 das. Por otra parte, 31
especies pudieron eliminar el metroburon, mientras Botrytis cinerea elimin el
metroburn y el linuron casi completamente, destacandose de las otras especies (Torres
Rodrguez, 2003).
93

Los hongos de pudricin blanca poseen un sistema enzimtico oxidativo extracelular capaz
de degradar compuestos orgnicos persistentes. Esta capacidad les permite ser utilizados
en procesos de biorremediacin de aguas y suelos contaminados. Sin embargo, el uso de
estos hongos requiere la determinacin de condiciones adecuadas para aumentar su
crecimiento y expresin enzimtica, en condiciones diferentes a su ambiente natural
(Rubilar Araneda, 2007).
Tres cepas fngicas de pudricin blanca: Anthracophyllum discolor, Inonotus sp. y Stereum
hirsutum, fueron seleccionadas, cultivadas en medio lquido con concentraciones de
nitrgeno (0,2 y 1,2 g/L) y con dos fuentes de carbono (glucosa y carboximetilcelulosa),
para evaluar el efecto del medio de cultivo sobre la produccin de las enzimas
ligninoltica: manganeso peroxidasa, lignina peroxidasa, verstil peroxidasa y lacasa (MnP,
LiP, VP y lacasa) y posteriormente ser usadas en la remocin de PENTACLOROFENOL (PCF)
adicionado en concentraciones de 50 y 100 mg/L (Rubilar Araneda, 2007).
En el medio con glucosa y con 0,2 g/L de nitrgeno se encontraron las mejores
producciones enzimticas por A. discolor, as mismo una elevada remocin de PCF (90%
con 50 mg/L y 40% con 100 mg/L), despus de 37 das de incubacin. Llevando estos
resultados a condiciones de campo, se evalu el efecto de la aplicacin de diferentes
materiales lignocelulsicos (paja de trigo, granos de trigo y viruta de madera) en el
crecimiento de A. discolor. Se evalu la biorremediacin de suelo contaminado con PCF
(250 y 350 mg/kg) utilizando A. discolor y P. chrysosporium, colonizado en granos de trigo
(Rubilar Araneda, 2007).
Los granos de trigo utilizados como soporte lignocelulsico permitieron un mayor
crecimiento y colonizacin por A. discolor. As mismo, la aplicacin de los hongos A.
discolor y P. chrysosporium inmovilizados en granos trigo favoreci la propagacin de los
hongos en el suelo y por lo tanto la remocin del PCF (70-85%). La aplicacin de granos de
trigo en el suelo no inoculado, permiti la proliferacin de microorganismos degradadores
de PCF. Por otro lado, se observ un efecto sinrgico entre la microflora autctona y A.
discolor incrementando la remocin de PCF en los suelos. El pH del suelo influy en la
adsorcin de PCF, siendo ms elevada en suelos cidos (Umbrisol). Adems, los suelos
cidos redujeron la actividad de la enzima MnP de A. discolor, afectando la degradacin de
PCF. Los hongos de pudricin blanca A. discolor presenta gran potencial para ser utilizado
en procesos de biorremediacin de suelos y aguas contaminadas con compuestos
orgnicos persistentes (Rubilar Araneda, 2007).
Finalmente los hongos formadores de micorriza arbuscular y sus plantas asociadas han
sido empleadas para la remocin de residuos de plomo (Alvarado, Dagubta-Schubert,
Ambriz, Snchez-Yaez, & Villegas, 2011), para la recuperacin de suelos contaminados
94

por actividad minera (Cornejo et al., 2008) y de suelos y aguas contaminados con
hidrocarburos de petrleo (Ferrera-Cerrato et al., 2006).
95

CAPTULO 6. PLANTAS (FITOREMEDIACIN).

Ante la diversidad de organismos para bioremediacin, se ha abierto las puertas a
organismos cuyo tamao pueden hacer mas eficiente el proceso de descontaminacin y
pueden aprovechar la energa del sol para apoyar el proceso, en este sentido se han
encontrado plantas con capacidad de bioremediacin, con sus limitantes y beneficios,
pero que abre las perspectivas para poder incluirlas para los tratamientos mixtos que
incluyen tanto plantas como microorganismos.
La fitoremediacin es el uso de plantas para contener, remover o neutralizar compuestos
orgnicos, metales pesados o compuestos radioactivos. Hay muchas especies vegetales
que tienen capacidades bajas o medias de acumular metales y contaminantes peligrosos,
las cuales se encuentran como habitantes en las zonas intervenidas y con problemas de
derrames, pero adicionalmente existen plantas con una gran capacidad para acumular
metales pesados, denominadas hiperacumuladoras, con capacidades cercanas a 10 veces
la capacidad de las tolerantes. Estas especies puede acumular Cd, As, Co, Cu, Cr, Ni y Pb,
entre otros contaminantes.
La fitoremediacin usa las plantas para limpiar ambientes contaminados debido a la
capacidad que tienen algunas especies vegetales para absorber, retener, o eliminar
concentraciones altas de diversos tipos de contaminantes como metales pesados,
compuestos orgnicos o radioactivos.
Este tipo de uso vegetal en la limpieza de ambientes contaminados es un enfoque
novedoso e interesante, debido a que constituye una tcnica de biorremediacin basado
en el uso de plantas verdes y sus microrganismos asociados, as como el manejo de suelos
y tcnicas agronmicas
que permitan la mejor absorcin de los elementos
contaminantes.
La tcnica de la fitoremediacin (phyto = planta y remediacin = mal, por corregir) es un
proceso que se realizar in-situ o ex-situ. Existen varios mecanismos de fitoremediacin:
rizodegradacin, fitoxtraccin, fitodegradacin y fitoestabilizacin (Agudelo Betancur et
al., 2005; Steven, 2005).
Las estrategias empleadas por las plantas para resistir los efectos txicos causados por los
metales pesados, se relacionan con diferentes mecanismos como el establecimiento de
enlaces entre los metales y la pared celular; el nivel de tolerancia por la membrana celular
hacia los metales; reduccin del transporte por la membrana celular; flujo activo de
metales desde las clulas hacia el exterior; el nivel de tolerancia de las enzimas vegetales
hacia los metales; la acumulacin o compartimentacin del exceso de metales en rganos
96

sub-celulares como las vacuolas; la quelacin del metal por ligandos orgnicos y/o
inorgnicos, y la precipitacin del metal al formar compuestos de baja solubilidad (Torres
Los resultados de la tcnica de la fitorremediacin se han valorado como positivos y por lo
tanto su aplicacin en la recuperacin de suelos contaminados es cada vez mayor. Es una
alternativa especialmente atractiva en medios con bajo riesgo, donde los contaminantes
estn limitados a la zona radicular y donde no haya fuertes contrastes climticos (Torres
Cuando la planta ha realizado su funcin de acumulacin de contaminantes, son
cosechadas y desechadas; sin embargo, si sus molculas finales son inocuas como el
dixido de carbono no requieren ser desechadas en su disposicin final.
De acuerdo a lo establecido por Agudelo Betancur y colegas, (2005); existen varias
limitaciones que se debe considerar para la aplicacin de la fitoremediacin:
1. El tipo de plantas utilizado, ya que determina la profundidad a tratar.
2. La concentracin de los contaminantes: altas concentraciones de contaminantes
pueden resultar txicas.
3. La estacin climtica en la que se haga el procedimiento.
4. La toxicidad y biodisponibilidad de los productos de la degradacin no siempre se
conocen y pueden movilizarse o bioacumularse en los animales que las consuman.
La incineracin controlada es el mtodo ms comn para disponer las plantas que han
absorbido cantidades grandes de contaminantes. Este proceso produce cenizas, que se
pueden desechar en los sitios destinados para tal fin (Agudelo Betancur et al., 2005).
Ventajas de la fitoremediacin:
Las plantas suelen ser utilizadas como bombas extractoras de bajo costo para
depurar suelos y aguas contaminadas.
Algunos procesos degradativos ocurren en forma ms rpida con plantas que con
microrganismos.
Es un mtodo apropiado para descontaminar superficies grandes o para finalizar la
descontaminacin de cualquier rea.
Limitaciones de la fitoremediacin:
El proceso se limita a la profundidad de penetracin de las races o aguas poco
profundas.
La fitotoxicidad es un limitante en reas fuertemente contaminadas.
Los tiempos del proceso pueden ser muy prolongados.
La biodisponibilidad de los compuestos o metales es un factor limitante de la
captacin.
97

Se requiere comprender mejor la naturaleza de los productos de degradacin

(fitodegradacion).
Las anteriores caractersticas son complementadas en el Cuadro 12.

Cuadro 12: Ventajas y desventajas de la fitoremediacin (Delgadillo-Lpez et al., 2011).
Para la descontaminacin de elementos txicos en suelos se han empleado las tcnicas de

fitoextraccin y fitoestabilizacin o fitoinmovilizacin (Carpena & Bernal, 2007)
Para una gua completa de referencias que se pueden revisar en cuanto a fitoremediacin
se puede recurrir a la (EPA, 2000) y a libros un poco mas actualizados como (Walker,
2007).
98

Leccin 27. Metabolismo.

La capacidad de metabolismo de las plantas verdes, en especial las plantas arbreas, les
permiten sintetizar, modificar y degradar una gran y mayor cantidad de molculas. Es
especialmente relevante en las fitoalexinas, ya que inhibe la germinacin de esporas y el
desarrollo del micelio en hongos patgenos, rompiendo la pared celular.
De hecho, las reacciones que permiten crear nuevos enlaces intra e intermoleculares C-O,
han sido descritas en el metabolismo de benzofenonas y bencilisoquinolinas,
respectivamente, siendo catalizadas por citocromos P-450.
La existencia en plantas arbreas de un metabolismo secundario capaz de sintetizar y
modificar compuestos aromticos (Cuadro 13), cuya estructura es la base de
contaminantes orgnicos de primer nivel, abre la puerta a la identificacin de enzimas
capaces de modificar y probablemente degradar xenobiticos.
Cuadro 13: Ejemplos de plantas que fitodegradan contaminantes orgnicos (DelgadilloLpez et al., 2011).
Algunos compuestos orgnicos son utilizados por los microrganismos como fuente de
carbono (Vias, 2005). Los compuestos alifticos se degradan fcilmente por oxidaciones
sucesivas, en cambio los compuestos aromticos se degradan luego de la ruptura del
anillo.
El orden decreciente de biodegradacin es generalmente: n-alcanos > isoprenoides >
aromticos de bajo peso molecular > cicloalcanos > poliaromticos > molculas polares
(Delgadillo-Lpez et al., 2011; Leahy & Colwell, 1990).
99

Otro tema importante es la atraccin electrosttica que existe entre las cargas elctricas
que generan las races de las plantas con las cargas opuestas de las partculas coloidales
que les permiten adherirse a las superficies de las races, donde son absorbidas y
transportadas a las partes areas donde las metaboliza o volatiliza.
La metabolizacin de los compuestos orgnicos en las plantas se realiza en tres pasos
(Delgadillo-Lpez et al., 2011):
Fase I: Involucra la conversin/activacin de los compuestos orgnicos lipoflicos
(Komives & Gullner, 2005).
Fase II: Permite la conjugacin de los metabolitos de la fase I a una molcula
hidroflica endgena como los azcares, aminocidos y glutationa (Dietz &
Schnoor, 2001).
Fase III: Promueve la compartimentalizacin de los compuestos orgnicos
modificados en las vacuolas o formacin de enlaces con los componentes de la
pared celular.
Los mecanismos de tolerancia a los compuestos orgnicos varan entre las distintas
especies de plantas y se determinan por el tipo de metal, eficiencia en la absorcin,
traslocacin y secuestro. La incorporacin y acumulacin de estos metales pesados se
resume en tres fases que son:
Fase I: Inicia con el transporte de los metales pesados al interior de la planta, y
luego, al interior de la clula. La raz tiene cargas negativas en sus clulas, por
contener grupos carboxilo que interaccionan con las cargas positivas de los
metales pesados, creando un equilibrio dinmico que facilita la entrada hacia el
interior celular (Delgadillo-Lpez et al., 2011).
Fase II: Los metales pesados ya ubicados en el interior de la planta, son
secuestrados o acomplejados mediante la unin a ligandos especficos.
Fase III: Involucra la compartimentalizacin y detoxificacin, proceso por el cual, el
complejo ligando-metal queda retenido en la vacuola.
Mecanismos usados por las plantas
a. Micorrizas: Las plantas micorrizadas presentan una mayor tolerancia a los metales
pesados, gracias a la capacidad para inmovilizar los metales en la raz, impidiendo que
stos pasen a la parte area de la planta (Navarro-Avio et al., 2007).
El hongo restringe el movimiento del metal a las races de la planta de diversas
maneras, segn el tipo de hongo, de planta y de metal. Adems favorece la
acumulacin, por lo que es una alternativa en la fitoremediacin.
En general, los procesos de las micorrizas en la fitoremediacin son:
absorcin/adsorcin de metales pesados en el hongo, reduccin del acceso de los
metales pesados al apoplasto por hidrofobia, quelacin de los metales pesados con
100

exudados del hongo (Navarro-Avio et al., 2007).

b. Proteccin de la membrana plasmtica: El metal produce efectos especficos a la
membrana plasmtica, segn su tipo; generando daos mediante varios mecanismos:
oxidacin y entrecruzamiento de protenas (conteniendo grupos tiol); inhibicin de
protenas de membrana que son esenciales; cambios en composicin y fluidez de los
lpidos de membrana y cambios en la permeabilidad.
La membrana genera mecanismos de reparacin que mantienen su integridad
utilizando protenas de choque trmino como mtodo de proteccin; mejorando los
mecanismos de homestasis del metal incorporado; promoviendo un influjo reducido
y un eflujo selectivo de manera metablica.
c. Compartimentalizacin vacuolar (Navarro-Avio et al., 2007): El eflujo de iones y el
transporte al interior de la vacuola son dos formas diferentes de conseguir el mismo
objetivo: reducir la concentracin de metales txicos en el citoplasma. El eflujo de
iones no confirma que el problema de la toxicidad est resuelto; el transporte a la
vacuola si lo garantiza, ya que se forman complejos de alto y bajo peso molecular,
reafirmando que el procesamiento y almacenamiento es complejo y debe ser
estudiado mas a fondo.
d. Biotransformacin (Navarro-Avio et al., 2007): Se denomina biotransformacin al
conjunto de procesos metablicos por los cuales los tejidos incrementan la polaridad
de un txico o la transformacin qumica de un compuesto en un organismo. Al
incrementar la polaridad aumenta la di fusibilidad del txico y por lo tanto puede
incrementar la velocidad de excrecin. La funcin es convertir un xenobitico no polar
en un compuesto soluble en agua.
La biotransformacin se divide en dos fases:
Fase I: Biotransforma los xenobiticos convirtindolos en substratos de las

enzimas, hacindolos ms hidrfilos.
Fase II: Agrega un grupo polar de tamao relativamente grande a los productos de
las reacciones de la fase anterior.
e. Mejora de la entrada y acumulacin de metales pesados en plantas (Navarro-Avio et

al., 2007): Para lograr que una planta acumule ms metales se tiene que estudiar la
secuencia de acontecimientos que permiten la mayor acumulacin del txico, a saber:
1. Transporte: Entrada y salida de metales pesados al interior de la planta y de la
clula.
2. Quelacin: Secuestro de los metales contaminantes mediante la unin a ligandos
especficos.
101

3. Compartimentalizacin: El complejo ligando-metal queda retenido en una vacuola.

4. Biotransformacin: Conjunto de reacciones de descomposicin, conjugacin o
sntesis implicadas en el correcto procesamiento de los contaminantes.
5. Mecanismos de reparacin celular: Respuesta celular al deterioro sufrido por el
metal txico, restableciendo sus caractersticas iniciales.
Se debe asegurar que el metal no produzca un efecto txico importante. El dao
no se producir si el metal fluye de una manera rpida por la raz y los tejidos.
Luego se debe disponer del complejo ligando-metal en vacuola, porque el metal
sigue siendo txico mientras no se deposite en este organelo. Despus se
incrementa el transporte ya que el metal ser adecuadamente dispuesto.
Finalmente quedan los procesos de biotransformacin y los mecanismos de
reparacin celular.
102

Leccin 28. Clases.

Existen varias clases de fitoremediacin, se muestran los aspectos ms importantes de
cada una de ellas.
A. FITOESTABILIZACIN.
Figura 28: Esquema de la fitoacumulacin (EPA, 2000).

Permite inmovilizar contaminantes en el suelo a travs de su absorcin y acumulacin
en las races, o por precipitacin en la rizsfera (lugar donde estn las races);
reduciendo la movilidad de los contaminantes y evitando su migracin a aguas
subterrneas o al aire (Barton et al., 2005; Mendez & Maier, 2008)(Figura 28). En otras
palabras, reduce la biodisponibilidad de los contaminantes en el entorno, mejorando
las propiedades fsicas y qumicas del medio (Carpena & Bernal, 2007).
La fitoestabilizacin es ms efectiva en suelos de textura fina con alto contenido de
materia orgnica (Padmavathiamma & Li, 2007), es de menor costo, fcil de aplicar y
estticamente agradable.
Con este mtodo se han tratado lagunas de deshecho de yacimientos mineros y aguas
residuales (Arias Martnez, Betancur Toro, Gmez Rojas, Salazar Giraldo, & Hernndez
ngel, 2010).
B. RIZOFILTRACIN.
103

Figura 29: Esquema del proceso de rhizofiltracin (EPA, 2000),

Utiliza las plantas para eliminar del medio hdrico contaminantes a travs de la raz
(Dushenkov, Kumar, Motto, & Raskin, 1995) Se cultivan de forma hidropnica. Cuando
el sistema radicular est bien desarrollado, las plantas se introducen en el agua
contaminada con metales, donde la raz los absorbe y acumula. Cuando las races se
saturan, las plantas se cosechan y se disponen para su disposicin final (Figura 29).
La rizofiltracin est indicada para aguas contaminadas con cadmio, cobalto, cromo,
nquel, mercurio, plomo, selenio, zinc, istopos radiactivos y compuestos fenlicos.
C. FITOEXTRACCIN O FITOACUMULACIN.
Figura 30: Esquema del proceso de fitoextraccin y fitoacumulacin (EPA, 2000).

Es la absorcin de metales contaminantes mediante las races de la planta y su
acumulacin en tallos y hojas (Figura 30). En este mtodo se deben seleccionar las
plantas ms adecuadas para el tipo de contaminante presente y sus caractersticas de
emplazamiento. Estas plantas se siembran y se permite que completen su desarrollo
vegetativo, luego de lo cual se cortan y se incineran, eliminando sus cenizas en un
vertedero de seguridad. Esta accin de puede repetir indefinidamente hasta que la
concentracin de metales en el suelo este dentro de los lmites aceptables (Kumar,
Dushenkov, Motto, & Raskin, 1995).
104

D. FITOVOLATILIZACIN.
Figura 31: Esquema del proceso de fitovolatilizacin (EPA, 2000).

Se produce simultneamente al proceso en el cual rboles y otras plantas en
crecimiento absorben agua con contaminantes orgnicos e inorgnicos. Estos
contaminantes pueden llegar hasta las hojas y evaporarse o volatilizarse en la
atmsfera en bajas concentraciones por medio de la transpiracin (Figura 31). De esta
manera se han eliminado elementos voltiles como el benceno, tolueno y m-xileno,
reconocidos compuestos orgnicos txicos. Tambin funciona para eliminar
contaminantes del aire.
La fitovolatilizacin se ha realizado en aguas residuales agropecuarias, aguas con
mercurio, selenio y solventes clorados.
105

E. FITODEGRADACIN.
Figura 32: Esquema del proceso de fitodegradacin (EPA, 2000).

Las plantas y los microrganismos asociados a ellas degradan los contaminantes
orgnicos en productos inofensivos o los mineraliza hasta llegar a CO2 y H2O. En este
proceso los contaminantes son metabolizados dentro de los tejidos vegetales y las
plantas producen enzimas que ayudan a catalizar la degradacin (O. V. Singh & Jain,
2003).
Torres Delgado & Zuluaga Montoya (2010) lo presentan como el proceso mediante el
cual las plantas toman el contaminante y lo metabolizan transformndolo en un
material sin riesgos para el medio natural (Figura 32).
Esta tcnica se ha empleado para eliminar explosivos como el TNT, DNT, RDX y
pesticidas organoclorados y organofosforados, entre otros (Hannink et al., 2001),
aguas residuales agropecuarias, solventes clorados, DDT, fenoles, nitrilos, etc. (Arias
Martnez et al., 2010).
106

F. RIZODEGRADACIN.
Figura 33: Esquema del proceso de rhizodegradacin (EPA, 2000).

Tambin llamada biodegradacin de la rizsfera, fitoestimulacin o bioremediacin
asistida, es la disminucin de contaminantes en el suelo por medio de la actividad
microbiana por la presencia de rizosfera, siendo un proceso ms lento que la
fitodegradacin. Los microrganismos consumen y digieren sustancias orgnicas para
su nutricin y energa (Figura 33).
La rizodegradacin se lleva a cabo en el suelo que rodea a las races. Las sustancias
excretadas naturalmente por stas, suministran nutrientes para los microrganismos,
mejorando as su actividad biolgica.
Algunos microrganismos consumen sustancias orgnicas como combustibles o
solventes que son peligrosos para los humanos y los degradan a productos inofensivos
por medio de la biodegradacin.
G. FITOINMOVILIZACIN.
Provoca la sujecin y reduccin de la biodisponibilidad de los contaminantes mediante
107

la produccin de compuestos qumicos en la interfaz suelo-raz, los que inactivan las

sustancias txicas por procesos de absorcin, adsorcin o precipitacin (Carpena &
Bernal, 2007; Delgadillo-Lpez et al., 2011).
En resumen, son 6 los mecanismos que pueden utilizar las plantas para la fitoremediacin,
los cuales pueden usarse independientemente o pueden ser utilizados simultneamente
Cuadro 14.
Cuadro 14: Mecanismos de fitoremediacin (Delgadillo-Lpez et al., 2011).
Proceso
Fitoestabilizacin
Mecanismo
Complejacin
Fitoextraccin
Fitovolatilizacin
Hiperacumulacin
Volatilizacin a
travs de las hojas
Acumulacin en la
rizosfera
Uso de plantas y
microorganismos
asociados para
degradar
contaminantes
Uso de races para
absorber y
adsorber
contaminantes del
agua.
Fitoinmovilizacin
Fitodegradacin
Rhizofiltracin
Contaminantes
Orgnicos e
inorgnicos.
Inorgnicos
Orgnicos e
inorgnicos.
Orgnicos e
inorgnicos
Orgnicos.
Orgnicos e
inorgnicos.
Al proceso por el cual la concentracin de contaminantes del suelo se reduce a niveles

tolerables a travs de la accin de las plantas se le denomina FITODESCONTAMINACIN y
comprende:
- Fitoextraccin.
- Fitovolatilizacin.
- Fitodegradacin.
Leccin 29. Procesos involucrados en la fitoremediacion.
La toma de una decisin de si usar o no una tcnica de fitoremediacin como una opcin
viable es indicado por un conjunto de pasos (EPA, 2000).
1. Definir el problema, conduciendo una caracterizacin e identificando el problema:
medios/contaminantes, los requerimientos de la entidad reguladora, identificar los
108

2.
3.
4.
5.
objetivos de la remediacin, establecer criterios para definir el xito de un sistema de

fitoremediacin.
Obtener informacin del sitio.
Localidad (tambin la informacin relacionada a la vegetacin propia de la zona).
Temperatura: promedio y rango.
Precipitacin: cantidad y periodicidad.
Longitud del periodo de crecimiento.
Cantidad de sol y sombra.
Textura, salinidad, pH, fertilidad del suelo, contenido de agua, estructura, etc.
Forma del contaminante y concentracin.
Consideraciones o caractersticas propias del sitio.
Identificacin de las plantas que crecen en la seccin contaminada del sitio (provee
una idea de las plantas a seleccionar).
Identificar las cosechas y plantas locales (brinda una idea de las plantas a
seleccionar).
Identificar criterios importantes para la seleccin de las plantas.
General: Resistencia a enfermedades, tolerancia al calor y fro, tolerancia a
insectos, sequia, sales, a las condiciones qumicas, condiciones de estrs,
seleccionar si leguminosa o no, si plantas anuales, bimensual o perenne.
Requerimientos de cultivo: debido a que las plantas se someten a una nueva
condicin de estrs, las condiciones de cultivo y mantenimiento han de ser
cuidadosamente monitoreados, como tratamiento de semillas antes de la
germinacin, mtodo de siembra, irrigacin, control de pH del suelo, fertilizacin,
proteccin contra plagas y enfermedades, hojas cadas y residuos, requerimientos
para cosecha, la labor y costos no deben ser excesivos.
Metabolicas: Caractersticas txicas, invasivas o indeseables, fuente de las semillas,
tasa de establecimiento, tasa y mtodo de reproduccin, tasa de crecimiento,
efectos alelopticos o competitivos, valor de la planta como cosecha.
Relacionados con la fitoremediacin (Cuadro 15): Eficacia demostrada de la planta,
fitotoxicidad del contaminante, tipo y forma de la raz, profundidad de la raz,
profundidad y distribucin del contaminante, especies deciduas o no, monocultivo
Vs cultivos mixtos, plantas nativas Vs no nativas, temporada de crecimiento,
esterilidad (masculino o femenino), rotacin de plantas, tecnologa de
fitoremediacin mas adecuada.
Comparar los anteriores criterios con la lista de plantas propuestas y disponibles
Seleccionar todos los candidatos apropiados (eliminar plantas no apropiadas).
Desarrollar una evaluacin detallada de los criterios de las plantas restantes.
Realizar un anlisis de costo-beneficio de las principales plantas.
Realizar estudios preliminares para valorar la germinacin, sobrevivencia y
biomasa.
Seleccionar las plantas e implementar la fitoremediacion (
109

6. Cuadro 16).
Disear y construir el sistema.
Mantener y operar el sistema.
Monitorear y evaluar el crecimiento de las plantas y el xito de la fitoremediacin.
Reevaluar la seleccin de especies basado en las observaciones.
Realizar una medicin cuantitativa.
Resembrar y replantar conforme sea necesario con la misma o diferentes plantas.
Conocer los criterios de xito.
Cuando se planea cualquier sistema de remediacin, es importante primero definir el
objetivo de remediacin deseado: el destino que se desea para los contaminantes y la
concentracin que se desea al final. Una tecnologa de remediacin adecuada o diferentes
tecnologas como parte de un tratamiento pueden ser seleccionados, basados en las
caractersticas y desempeo de una tecnologa en miras a alcanzar las metas.
Cuadro 15: Tecnologas de fitoremediacin aplicables a diferentes tipos de
contaminantes1,2 (EPA, 2000).
Tecnologa
Medio
Solventes clorinados
Metales
Metaloides
Municiones
No metales
Nutrientes
PAHs
PCBs
PCP
Pesticidas
Hidrocarburos de petrleo
Radionucleotidos
Surfactantes
1
Fitoextraccin Rizofiltracin Fitoestabilizacin Rizodegradacin Fitodegradacin

Suelo Agua
Agua
Suelo
Suelo
Suelo
Agua
T
F
G
F
F
F
F
F
T
F (Se)
T
G
G
F
T
F3
G
T
G
G
F
T
F
F
F
Fitovolatilizacin
Suelo
Agua
T
T
T (Hg)
G
F (Se)
F/F
F
F
T
T
G
T
La aplicabilidad de un mtodo de fitoremediacin en particular para cada tipo de

contaminante ha sido juzgado en el momento de aplicacin, este es indicado por las
siguientes convenciones:
T La aplicacin est en estado terico.
G La aplicacin ha de ser investigada en invernadero o laboratorio.
F La aplicacin ha de ser investigada usando cuadrantes de campo o ha de ser
aplicada a sistemas de campo a escala completa.
2
Todos los contaminantes pueden ser controlados usando coberturas vegetales. La
cobertura vegetal, corredores riparios, zonas de transicin o buffer y el control hidrulico
no son incluidos en la tabla porque pueden ser considerados combinaciones de otras
tecnologas de fitoremediacin.
3
En humedales construidos
110

Cuadro 16: Parmetros de monitoreo una vez implementada la fitoremediacin, adaptado

de EPA (2000).
Parmetro
Datos climticos
Temperatura.
Precipitacin.
Humedad relativa.
Radiacin solar.
Direccin y velocidad del viento.
Plantas
Caractersticas visuales (viabilidad, sntomas
de estrs, dao por insectos o animales,
crecimiento, masa foliar, etc.).
Composicin de tejidos (Races, tallos,
hojas).
Gases transpirados.
Tasa de transpiracin.
Densidad de races.
Suelo
Parmetros geoqumicos (pH, concentracin
de nutrientes, contenido de agua y oxgeno,
etc.).
Poblaciones microbianas.
Contaminantes y grado de rompimiento de
los stos.
Aguas subterrneas.
Informacin de acuferos (direccin y tasa de
flujo, profundidad).
Contaminantes y grado de rompimiento de
los stos.
Razones de monitoreo
Mantenimiento de los
requerimientos de irrigacin.
Determinar el balance de agua y
las tasas de evapotranspiracin.
Mantenimiento (remplazo de
plantas, fertilizantes, aplicacin
de pesticidas, etc.).
Cuantificar contaminantes y
subproductos.
Cuantificar y/o predecir la
operacin del sistema.
Optimizar el crecimiento de la
parte area o radical de la planta o
de los microorganismos.
Determinar el balance hdrico y las
tasas de evapotranspiracin.
subproductos.
subproductos.
111


La fitoremediacin es un mtodo para el tratamiento de aguas y suelos contaminados con
sustancias txicas que permite su remocin de acuerdo al tipo y tiempo del mtodo
usado.
Se conocen alrededor de 400 especies de plantas con capacidad para hiperacumular
selectivamente alguna sustancia. Por lo general son plantas conocidas. El girasol
(Heliantus annus) es capaz de absorber grandes cantidades de uranio depositado en el
suelo. Los lamos absorben niquel, cadmio y zinc. Otras posibles fitoremediadoras que
estn en estudio son la alfalfa, la mostaza, el tomate, la calabaza, el esparto, el sauce y el
bamb (EPA, 2000).
Se han utilizado plantas con hongos de micorriza arbuscular para la extraccin de plomo
de sitios de alta concentracin de este metal pesado, principalmente por el mecanismo de
fitoestabilizacin y fitoextraccin del suelo (Alvarado et al., 2011).
El boletn docente El cuaderno de por qu Biotecnologia (Consejo Argentino para la
Informacin y el Desarrollo de la Biotecnologa indica ejemplos en laboratorio y campo
sobre experimentos con la tcnica de la fitoremediacin:
Encontraron que el geranio tolera ms la contaminacin por Ni y Pb mientras la mostaza
es ms tolerante al Cd. El mtodo de rizofiltracin fue usado para la extraccin de uranio
de aguas subterrneas de Asthabula, Ohio, USA. Tambien fue usada a nivel de cultivo in
vitro para detoxificar compuestos fenlicos en aguas contaminadas en la Universidad
Nacional de Rio Cuarto, Crdoba por el grupo de investigacin de la Dra. Elizabeth
Agostini.
Se ha logrado la fitovolatilizacin de Hg por medio de plantas transgnicas que fueron
transformadas por dos genes provenientes de microrganismos que pueden transformar el
mercurio inico en mercurio ms estable. Haciendo uso tambin de plantas transgnicas
de tabaco con genes provenientes de bacterias que le permiten detoxificar TNT y GTN, se
han encontrado resultados positivos en suelos minados.
En conclusin, la fitoremediacin es una alternativa novedosa, eficiente y con costos
menores en relacin a los tratamientos convencionales de remocin de contaminantes
txicos. Se puede realizar tanto en medios acuticos como terrestres y ofrece variedad de
opciones de acuerdo al tipo de contaminante, al tipo de planta usado como
fitoremediador y al mtodo de remocin de dicho material.
112

Se conocen alrededor de 400 especies de plantas con capacidad para hiperacumular

selectivamente alguna sustancia. En la mayora de los casos, no se trata de especies raras,
sino de cultivos conocidos. As, el girasol (Heliantus anuus) es capaz de absorber en
grandes cantidades el uranio depositado en el suelo. Los lamos (gnero Populus)
absorben selectivamente nquel, cadmio y zinc. Tambin la pequea planta Arabidopsis
thaliana de gran utilidad para los bilogos es capaz de hiperacumular cobre y zinc.
Los costos de la implementacin de tcnicas de fitoremediacin implican considerables
reducciones y ahorros, sin embargo es poco generalizado su uso dado el desconocimiento
de las precisiones requeridas para cada especie vegetal y las condiciones de campo, en el
Cuadro 17, se detallan algunos costos comparativos entre el tratamiento convencional y
con fitoremediacin.
Cuadro 17: Ejemplo de mtodos de remediacin. Comparacin de costos, tomado de

Delgadillo-Lpez et al. (2011).
Como algunos ejemplos puntuales se puede citar al rea de Edgewood en Maryland (EPA,
2000) en el cual un suelo contaminado con Tricloroetileno a concentracin de 170 ppm,
fue tratada con Populus tricocarpa X deltoides (conocido como Poplar hbrido), se sembr
un rea de 1 acre y se logr la descontaminacin en abril de 1996. En el procedimiento se
midi el crecimiento de las plantas por medio de observaciones visuales (dimetro, altura,
salud, reproduccin y remplazo), tambin la zona bajo tierra mediante anlisis en el cual
se determin contaminantes voltiles, metales y nutrientes. El suelo fue muestreado para
evaluar la actividad de biodegradacin y los derivados voltiles contaminantes; el
muestreo de tejidos fue analizado en cuanto a degradacin de los productos absorbidos y
el contenido de compuestos voltiles. Adicionalmente se valor el flujo de sabia para ser
correlacionado a los datos meteorolgicos y se realiz un muestreo y anlisis de los gases
transpirados mediante varios mtodos para medir la tasa de evapotranspiracin de
tricloroetileno en forma de vapor.
113

El costo de instalacin de cada rbol fue aproximadamente 80 dlares o

aproximadamente 15000 dlares por 184 rboles, el costo de monitoreo fue altamente
variable debido a las numerosas tcnicas de monitoreo empleadas.
La fitoremediacin usando rboles para limpiar aguas contaminadas con compuestos
orgnicos voltiles fue la decisin ideal para el sitio debido al bajo costo, bajo
mantenimiento y bajo impacto asociado con la tecnologa.
En el sitio Carswell de Fort Worth, Texas (EPA, 2000) fue realizado un experimento para
evaluar la capacidad de biodegradacin de Populus deltoides (algodn de madera del
este) en comparacin a especies de Populus tradas y probadas. En un terreno de una
hectrea (Figura 34) contaminada a nivel subsuperficial con Tricloroetileno en 1996 se
sembraron los rboles, dejando como testigo algunos rboles de la misma especie en
zonas vecinas y hacia donde no se movilizaba el TCE. Al cabo de 16 meses se observ una
reduccin substancial de la contaminacin, con el inconveniente de que las tasas de
transpiracin dependan mucho de la poca del ao y por lo tanto los tratamientos eran
mas efectivos en los meses de verano cuando las hojas haban alcanzado su mximo
tamao.
Figura 34: Diseo experimental en Carswell (Forth Texas), tomado de EPA (2000).
Cuadro 18: Costo estimado de la fitoremediacin en el sitio Carswell.

114

Los costos son un poco elevados (Cuadro 18) debido a la innovacin de la tecnologa de
monitoreo. Los costos finales del proyecto no estn dados en el documento consultado,
pero estn alrededor del 10 al 20% del tratamiento mecnico.
115

UNIDAD 3
Nombre de la
TCNICAS DE BIOREMEDIACIN.
Unidad
CAPTULO 7
ATENUACIN NATURAL
Leccin 31
Introduccin.
Leccin 32
Parmetros de diseo.
Leccin 33
Funcionamiento.
Leccin 34
Posibles costos.
Leccin 35
Parmetros de monitoreo y seguimiento.
CAPTULO 8
BIOESTIMULACIN.
Leccin 36
Introduccin.
Leccin 37
Parmetros de diseo.
Leccin 38
Funcionamiento.
Leccin 39
Posibles costos
Leccin 40
CAPTULO 9
BIOAUMENTACIN
Leccin 41
Introduccin.
Leccin 42
Parmetros de diseo.
Leccin 43
Funcionamiento.
Leccin 44
Posibles costos.
Leccin 45
116

UNIDAD 3. TCNICAS DE BIOREMEDIACIN.

Una vez se conocen los conceptos bsicos acerca de bioremediacin, del suelo, el agua y
se han logrado diferenciar los trminos que se usan en bioremediacin del significado que
puede tener en otras disciplinas del conocimiento, se cuenta con el esqueleto sobre el que
se pueden basar los procesos de bioremediacin. El conocimiento de los xenobiticos fue
explorado en detalle, para conocer su origen, clasificacin, toxicidad, permanencia y
consecuencias de su presencia, de esta manera se posee los criterios para poder
diferenciar diferentes contaminantes, los cuales son bses para saber como estos pueden
ser degradados por entes biolgicos o como pueden ser afectados por stos.
Luego se conocieron los organismos con capacidad de degradar xenobiticos, los procesos
metablicos que subyacen el proceso de degradacin de stos y se conoci la
especificidad y eficiencia de cada organismo con respecto a los contaminantes; todo esto
fue confirmado con ejemplos particulares, lo que indica que se comprendido la
importancia de los aspectos biticos, por lo tanto se poseen las herramientas para poder
comprender las diferentes tcnicas involucradas en la bioremediacin.
Finalmente la presente unidad muestra una integracin entre aspectos biticos, qumicos,
fsicos, ambientales e ingenieriles en bsqueda de dar solucin a los problemas de
contaminacin por xenobiticos. Solo se pretende mostrar tres de las tcnicas mas
usadas, como son la atenuacin natural, la bioaumentacin y la bioestimulacin, as
mismo se muestra elementos importantes a tomar en cuenta para la seleccin de uno u
otro y la forma como se puede planear su implementacin.
117

CAPITULO 7: ATENUACIN NATURAL.

La atenuacin natural aprovecha recursos naturales para contener la contaminacin
causada por derrames de productos qumicos y reducir la concentracin y la cantidad de
contaminantes en los lugares afectados.
Conocida tambin como medidas correctivas intrnsecas, bioatenuacin o biocorreccin
intrnseca, es un mtodo de tratamiento in-situ, o sea que se dejan los contaminantes
donde estn mientras se produce la atenuacin natural. Con frecuencia se utiliza la
atenuacin natural como parte de la limpieza de un sitio donde tambin se recurre al
control o la extraccin de la fuente de contaminacin.
La atenuacin natural es un mtodo de bioremediacin que puede ser utilizado
eficazmente en ambientes contaminados especficos. La bioremediacin puede ser
efectiva para un amplio rango de hidrocarburos del petrleo, siendo de ms rpida la
degradacin de los solubles en agua, de cadena corta y bajo peso molecular que los
compuestos de cadena larga, alto peso molecular y menor solubilidad.
La bioremediacin puede ser in-situ o ex-situ. La bioremediacin in-situ busca estimular y
crear un ambiente favorable para el crecimiento microbiano a partir de los contaminantes
(Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008). Dentro de los mtodos in-situ se encuentra la
forma aerobia, anaerobia y cometablica. La aerbica es mas eficiente para reducir
niveles de contaminantes alifticos e hidrocarburos aromticos del petrleo. Los mtodos
anaerbico y cometablicos son a menudo usados para la remediacin de otros
compuestos como solventes clorados (Manacorda & Cuadros, 2005).
Los mtodos o tcnicas ms usados en la bioremediacin in-situ son la bioestimulacin,
bioventeo y bioaumentacin. Los mtodos ex-situ incluyen biodegradacin, landfarming,
compostaje, biopilas y biorreactores.
Habitualmente la bioremediacin es usada como un paso posterior a la limpieza por
medios fsicos o mecnicos de la parte ms palpable del vertido o bien directamente sobre
determinados residuos. Para implementar un programa de bioremediacin se requiere un
estudio de bioviabilidad que debe contar con las siguientes fases (Rodrguez Gallego &
Snchez Martn, 2003):
a. Revisin bibliogrfica, para obtener datos sobre la biodegradabilidad de los
contaminantes del emplazamiento y sobre la existencia de casos similares (Head &
Swannell, 1999).
118

b. Estudios iniciales, para obtener parmetros ambientales de importancia:

nutrientes, presencia de aceptores de electrones, potencial redox, pH,
temperatura, etc. (Gallego, Loredo, Llamas, & Snchez, 2001a; B. Vallejo,
Izquierdo, Blasco, Prez del Campo, & Luque, 2001).
c. Muestreo detallado, para analizar los microrganismos autctonos, la densidad de
las poblaciones biodegradadoras y su potencial enzimtico (Gallego, Loredo,
Llamas, & Snchez, 2001b; Rling et al., 2002).
d. Estudios de laboratorio y a escala piloto, que permitan evaluar las diferentes
alternativas de bioremediacin (Head, 1998; Rodrguez Gallego & Snchez Martn,
2003; Skladany & Baker, 1994).
e. Evaluaciones permanentes a lo largo de un tiempo prolongado para mantener un
monitoreo de la eficiencia de la bioremediacin y proponer medidas adicionales en
caso de ser necesario.
El estudio previo de los parmetros de degradacin en el laboratorio es una fuente muy
valiosa para su aplicacin posterior en el campo (Pritchard, 1997; Rodrguez Gallego &
Snchez Martn, 2003). La capacidad intrnseca de asimilacin de un medio depende de las
capacidades metablicas de los microorganismos, del tipo de contaminante y de la
bioqumica e hidrogeografa de la zona (Orosco Verdezoto & Soria Guano, 2008).
Durante el desarrollo del proceso de bioremediacin, la monitorizacin juega un papel
clave en la evaluacin de la efectividad del trabajo, con el objeto de evaluar la
desaparicin del contaminante con el tiempo y la disminucin del riesgo para el medio
receptor (Rodrguez Gallego & Snchez Martn, 2003; Shannon & Unterman, 1993).
La tcnica de la atenuacin natural se aplica en aquellos casos en los que exista
contaminacin tanto en suelos como aguas subterrneas producidas por hidrocarburos
halogenados y no halogenados. Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad
de esta tcnica se destacan: a) la exigencia de proteccin y el riesgo de los potenciales
receptores durante el tiempo que dura la atenuacin, b) la existencia de unas condiciones
geolgicas y geoqumicas favorables, c) las necesidades de reduccin de la masa
contaminante en un intervalo razonable de tiempo (meses a aos), tanto en la superficie
del suelo como en la zona ms subsuperficial del mismo, asi como de la calidad de las
aguas subterrneas, d) confirmacin de la existencia de los tipos y nmeros de
poblaciones de microrganismos que puedan biodegradar los contaminantes, e)
produccin y conservacin en el medio de subproductos de carcter persistente o ms
txicos que los iniciales, durante y despus de la atenuacin natural, f) no existencia de
producto libre en flotacin sobre el nivel fretico, g) para condiciones aerobias la
condicin ambiental ptima de concentracin de oxgeno disuelto en el agua debe ser
superior a 0,5 mg/L., h) el potencial redox debe estar situado entre un rango de -400 y 800
mV, i) que se produzca una dilucin suficiente para que la concentracin se vea
disminuida aguas abajo del foco contaminante, j) la dispersin de los contaminantes aguas
119

abajo del foco y en la direccin del flujo debe ser adecuada para que exista una mayor
disponibilidad y proporcin entre los contaminantes y los aceptores de electrones
(Corona-Ramrez & Iturbe-Argelles, 2005).
Los procesos de atenuacin natural a menudo se clasifican en destructivos y no
destructivos. Los procesos destructivos destruyen el contaminante. Los procesos no
destructivos no destruyen el contaminante, sino que reducen su concentracin. Estos
procesos pueden reducir la masa del contaminante (por medios de procesos destructivos
tales como biodegradacin y transformaciones qumicas), reducir su concentracin
(mediante dilucin o dispersin) o unir los contaminantes a partculas de tierra a fin de
que la contaminacin no se propague o no se extienda demasiado (adsorcin) (EPA, 1996).
La biodegradacin o biocorreccin es un proceso en el cual los microorganismos naturales
levaduras, hongos o bacterias - descomponen o degradan sustancias peligrosas,
transformndolas en sustancias menos txicas o inocuas, principalmente dixido de
carbono y agua en caso de la biodegradacin aerobia. Una vez degradados los
contaminantes, la poblacin de microorganismos disminuye porque ha agotado su fuente
de alimentos.
Los microorganismos muertos o una poblacin pequea de
microorganismos sin alimentos no presentan riesgo de contaminacin. Ciertos
microorganismos pueden digerir sustancias orgnicas, como combustibles o solventes,
que son peligrosas para los seres humanos; la biodegradacin tambin puede
descomponer solventes clorados, como tricloroetileno en aguas subterrneas. Cuando los
compuestos clorados se biodegradan, es importante que la degradacin sea completa
porque algunos productos de la descomposicin pueden ser ms txicos que los
compuestos originales (EPA, 1996).
120

Leccin 32. Parmetros de diseo.

La atenuacin natural (AN) es un mtodo activo centrado en la confirmacin y la vigilancia
de procesos de correccin natural. Los hidrocarburos mviles y txicos son buenos
candidatos para la atenuacin natural; no slo son difciles de atrapar debido a su
movilidad, sino que tambin se encuentran entre los contaminantes que ms fcilmente
se destruyen con la biodegradacin. La atenuacin natural es un mtodo no invasivo, la
superficie del suelo puede seguir usndose mientras se produce la atenuacin natural en
el subsuelo.
Para calcular el resultado que dar la AN y cuanto tardar se necesita un estudio
pormenorizado del lugar contaminado; la atenuacin natural no es una opcin apropiada
para cualquier lugar debido a que los procesos naturales generalmente son lentos. Se
necesita una vigilancia a largo plazo para comprobar que la concentracin de
contaminantes disminuya continuamente y lo suficiente para que no se convierta en una
amenaza para la salud (EPA, 1996).
Como la eficacia de la AN como mtodo de limpieza depende de diversas condiciones, es
necesario caracterizar bien el sitio a fin de determinar si se est produciendo o se
producir atenuacin natural. Los suelos con gran cantidad de materia orgnica, como las
zonas pantanosas o antiguos pantanos, con frecuencia son aptos para la atenuacin
natural.
Hay muchos factores que pueden limitar o impedir la AN en un medio como: a) la ausencia
de elementos esenciales para los microorganismos, b) ausencia de aceptores adecuados,
generalmente oxigeno, c) ausencia de poblaciones microbianas con el potencial
enzimtico adecuado para degradar los contaminantes, d) presencia de componentes
txicos en la mezcla contaminante (Corona-Ramrez & Iturbe-Argelles, 2005).
El diseo y aplicacin de los sistemas de biotratamiento comprende varias fases (Maroto
Arroyo & Rogel Quesada, 2001):
1. Investigacin y Caracterizacin de la contaminacin y del emplazamiento.
Para realizar el diseo del biotratamiento se debe hacer un estudio exhaustivo de la
caracterizacin del emplazamiento y del tipo y concentracin de la contaminacin
existente. Dicha caracterizacin se lleva a cabo mediante el estudio del mismo
detallando la volumetra del suelo a tratar, las condiciones geolgicas e
hidrogeolgicas, analizando las caractersticas del suelo y sus propiedades.
La caracterizacin del contaminante se centrar en la investigacin del tipo y
concentracin del mismo, as como la biodisponibilidad de los compuestos del
suelo.
121

2. Anlisis y eleccin de las medidas biocorrectivas.

Luego de la investigacin inicial, se pasa al anlisis y eleccin de las medidas
biocorrectivas ms adecuadas. Para esto se debe tener en cuenta lo siguiente:
a. Identificar y cuantificar los contaminantes: Propiedades fsico-qumicas,
identificacin y clasificacin de los compuestos, concentracin en suelos y aguas
subterrneas, caracterizacin de la presin de vapor, constante de Henry,
densidad y grado de solubilidad del contaminante.
b. Conocer los factores que influyen en la transformacin biolgica de los
contaminantes: Factores ambientales y microbiolgicos.
c. Designar las medidas biocorrectivas: En funcin de los factores estudiados,
elegir el sistema de bioremediacin ms adecuados.
3. Diseo y evaluacin del sistema.
Es necesario establecer unas etapas de trabajo que determinen los parmetros
fundamentales para la eficacia del diseo. Estas etapas son:
a. Evaluacin de la viabilidad de la tcnica.
b. Evaluacin del diseo.
c. Evaluacin del control y seguimiento.
4. Control y Seguimiento.
Para una correcta optimizacin se deben controlar los siguientes puntos:
a. Control de las condiciones de degradacin y biodegradacin.
b. Control de los parmetros que afectan directamente en el funcionamiento del
sistema.
5. Anlisis e Interpretacin de resultados.
En esta ltima etapa se analizan los resultados obtenidos, haciendo un balance
entre los objetivos alcanzados y los propuestos inicialmente. En este punto, si es
necesario, se deben proponer y estudiar mejoras o modificaciones necesarias para
la optimizacin del sistema.
Procesos de Atenuacin Natural Monitoreada:
La Atenuacin Natural Monitoreada (ANM) es un mtodo de limpieza o remediacin del
sitio cuidadosamente controlado y monitoreado, se usa en combinacin con el control de
la fuente de contaminacin. En la prctica se debe demostrar que la pluma de
contaminacin no alcanzar ningn lugar de impacto ambiental y que los procesos de
remocin estn ocurriendo activamente, siempre protegiendo la salud humana.
De acuerdo a Field, (2005) los procesos que intervienen en la ANM (Figura 35) son:
a. Biodegradacin: es la parte ms importante de la atenuacin natural, ya que causa
la remocin total de los contaminantes txicos.
122

b. Adsorcin: La adsorcin del contaminante a las partculas del suelo retardar y

reducir la posibilidad de que el contaminante alcance a llegar a lugares de
impacto ambiental.
c. Dispersin y Dilucin: A medida que la pluma del contaminante se mueve la
concentracin del contaminante ser menor debido a la dispersin. Se recomienda
ver detalladamente el video asociado (Video), en el cual se observa lo que puede
suceder con la dispersin del contaminante y su concentracin a medida que se
dispersa en el suelo y se aleja de la fuente.
d. Reacciones
qumicas: Son reacciones no biolgicas que transforman al
contaminante.
e. Volatilizacin: Las prdidas por volatilizacin son consideradas mayormente como
otras formas de dilucin.
Figura 35: Procesos presentes en la atenuacin natural (Field, 2005).

Para que la ANM sea un mtodo de bioremediacin eficaz se deben tener en cuenta los
siguientes aspectos:
1. Informacin especfica requerida del sitio: datos histricos de la qumica del agua
subterrnea y/o suelo, datos hidrogeolgicos y geoqumicos, estudios de campo y
de microcosmos.
2. Tiempo estimado razonable: uso actual, potencial y futuro del agua subterrnea
afectada, relatividad del tiempo estimado de uso del acufero, aceptacin pblica
de la remediacin a largo plazo, confiabilidad de los controles de monitoreo e
institucionales.
3. Condiciones necesarias: humedad (50-80%), temperatura (> 5oC requerida para
biodegradacin significante), pH (6.5 a 8.5), disponibilidad de oxgeno, nutrientes,
aceptores de electrones alternativos, donadores de electrnes, potencial redox (>
50mV aerbico, < 50mV anaerbico).
4. Evidencia de atenuacin natural: evidencia geoqumica (disminucin del
contaminante en el campo, incremento de la poblacin microbiana, cambios en los
aceptores de electrones, evidencia de istopos) y estudios de microcosmos.
123

Leccin 33. Funcionamiento.

Cuando el medio ambiente se halla contaminado con sustancias qumicas, la naturaleza las
elimina por cuatro vas:
1. Accin bacteriana: las bacterias que viven en el suelo y en las aguas subterrneas
utilizan algunas sustancias qumicas como alimento. Cuando las sustancias
qumicas estn completamente digeridas, las transforman en agua y en gases
inofensivos.
2. Sorcin: las sustancias qumicas se pegan o sorben al suelo, que las fija al lugar. De
ese modo no se eliminan las sustancias qumicas pero si se impide que contaminen
las aguas subterrneas y que escapen del lugar.
3. Mezcla y dilucin: la contaminacin se puede mezclar con el agua limpia, diluyendo
la contaminacin.
4. Evaporacin: algunas sustancias qumicas, como el petrleo y los solventes, se
evaporan, lo que significa que se convierten de lquidos a gases dentro del suelo.
Adems, si esos gases escapan al aire en la superficie del terreno, la luz del sol
puede destruirlos.
Tomando en cuenta las consideraciones necesarias para realizar el proceso de atenuacin,
uno de los elementos mas importantes y crticos a considerar es asegurar proveer las
caractersticas adecuadas para el desarrollo de los microorganismos degradadores, entre
estas caractersticas se encuentra el contenido de oxgeno, el cual se debe asegurar a lo
largo del proceso en especial cuando la contaminacin es por hidrocarburos. Segn Prez
& Saval (2007) las bacterias degradadoras de diesel inoculadas no sobreviven en el suelo
al parecer por la falta de nutrientes y oxgeno, lo que indica que el control de los
parmetros en la bioaumentacin y en las compostas debe manejarse con mucho cuidado
para lograr los objetivos de bioremediacin deseados.
Un aspecto importante es proveer desde el inicio y a lo largo del proceso los nutrientes
adecuados en la cantidad necesaria, la ausencia de los contenidos de nitrgeno, fsforo
necesarios para el crecimiento microbiano, la relacin C: N: P debe ser 100:10:1, la adicin
de nutrientes es clave para garantizar que los microorganismos logren realizar los
procesos metablicos que sustentan la biorremediacin. La adicin de nutrientes debe
realizarse en base a un anlisis previo ya que una sobreexposicin puede inhibir el proceso
y provocar contaminacin del suelo; por otro lado puede haber una prdida de nutrientes
por la adsorcin del suelo o procesos paralelos.
De acuerdo a los resultados de A. J. Acua, Pucci, & Pucci (2008) en suelos deficientes de
nitrgeno en la Patagonia, es posible la degradacin de hidrocarburos siempre y cuando
los tiempos de tratamiento sean ms prolongados que en aquellos que se realiza una
fertilizacin con nitrgeno. El nitrgeno necesario para el proceso ser obtenido por los
microorganismos del suelo por fijacin biolgica.
124

En el trabajo de Garcia, Roldn, & Garzn (2011) se encontr que el empleo de sales
inorgnicas simples (SIS) estimularon ms el metabolismo microbiano en comparacin a
los fertilizantes inorgnicos compuestos (FIC), lo cual posiblemente est relacionado con
el efecto inhibitorio generado por la acumulacin de amoniaco, limitando el crecimiento
de la poblacin degradadora.
Algunos sistemas recuperados con AN se recuperan ms efectivamente que otros, lo cual
parece estar asociado al material parental, la presencia de piritas como material
constituyente del suelo. Soler, Otero, Mencio, Mas-Pla, & Torrento (2006) han mostrado
que la biodegradacin funciona de una manera significativa a partir de la oxidacin de las
piritas, abriendo nuevas perspectivas en cuanto a su uso en barreras permeables
reactivas.
La ANM funciona con mayor eficacia en los sitios donde se ha eliminado previamente la
fuente de contaminacin. Dado que se realiza bajo tierra, no es necesario excavar ni
construir. Por lo tanto, no es necesario eliminar desechos enterrndolos, por lo que se
afecta menos el medio ambiente al evitar el contacto con la contaminacin, siendo usada
en derrames de petrleo y gasolina de los tanques.
La tcnica de tipo landfarming (Figura 37), aprovecha la superficie donde se ha realizado el
vertimiento, luego de hacer la remocin de ste, las operaciones principales son, en
primer lugar, la promocin de la humificacin de manera controlada, mediante la adicin
de materia orgnica al suelo, y en segundo lugar, el incremento del metabolismo de los
microorganismos mediante la agregacin de fuentes de carbono de pequeo peso
molecular, fcilmente asimilables por los microorganismos, as como otros nutrientes; los
procesos bioqumicos que realizan los microorganismos a cada proceso en el transcurso
de la ANM se pueden observar en la Figura 36. Se trata de proporcionar poco nitrgeno
como nutriente, ya que de esta forma los microorganismos se vern obligados a degradar
los contaminantes, utilizndolos como fuente de nitrgeno (Cortn & Viale, 2006).
125

Figura 36: Rutas comunes de biodegradacin (ITRCWG & RTDF, 1999).
Figura 37: Tcnica de Landfarming, modificado de (EPA, 1994a).

La atenuacin natural se est usando para limpiar la contaminacin causada por fugas de
petrleo de depsitos subterrneos en todo Estados Unidos. Ha sido uno de los mtodos
de limpieza de 73 lugares con agua subterrnea contaminada, siendo algunos de estos
sitios vertederos municipales e industriales, refineras y centros de reciclaje.
126

En Estados Unidos, al emplear la AN, en un sitio con presencia de aguas contaminadas con
Tricloroetileno (TCE), se pudo aevaluar su movimiento subterrneo desde su lugar de
origen hasta el punto de entrada al lago Michigan. En el predio se encontraron
concentraciones de TCE superiores a 200.000 microgramos por litro, pero cuando la estela
lleg a la orilla del lago Michigan, contena mil veces menos TCE. La estela tard alrededor
de 20 aos en llegar desde la fuente de contaminacin hasta el lago Michigan, dando
suficiente tiempo a los microorganismos naturales que estn en el agua subterrnea para
destruir el TCE sin intervencin externa. De hecho, los microorganismos estaban
destruyendo alrededor de 270Kg de TCE por ao (EPA, 1996).
127

Leccin 34. Posibles costos.

Son pocos los estudios comparativos encontrados en diferentes fuentes bibliogrficas a
pesar de realizarse estudios comparativos cuando se van a proponer diferentes
alternativas de tratamiento, por lo tanto la informacin se restringe a algunos pocos
casos.
La atenuacin natural puede ser menos costosa que otras opciones dirigidas para el
tratamiento de bioremediacin, ya que no requieren una fuente de energa ni equipo
especial, como otros tratamientos que se usan para el agua subterrnea (Olguin,
Hernndez, & Snchez-Galvn, 2007).
De acuerdo con los diferentes estudios que se han realizado, la atenuacin natural es un
proceso largo, lento generada por organismos autctonos degradadores de petrleo y ha
demostrado su efectividad en manglares, pantanos y suelos limosos y arcillosos antes que
en los arenosos; ya que la permeabilidad permite poco desplazamiento de los
contaminantes.
La atenuacin natural monitoreada requiere menos equipamento y trabajo que la mayora
de otros mtodos y por lo tanto resulta ms econmico (Cuadro 19). Puede que la
supervisin durante aos sea costosa, pero el costo sigue siendo menos que el de otros
mtodos de biocorreccin.
Tratamiento in-situ
Enjuague de suelo
Bioremediacin
Fitoremediacin
Tratamiento ex-situ
Excavacin y trasporte a vertedero
Disposicin en un vertedero
Incineracin o pirlisis
Lavado de suelo.
Bioremediacin
Solidificacin
Vetrificacin
Costos (Dlares por m3)

50-80
50-100
10-35
30-50
100-500
200-1500
150-200
150-500
100-150
hasta 250
Cuadro 19: Costos comparativos de diferentes tecnologas de remediacin por unidad de

suelo, adaptado de Adriano (2001).
Por otro lado, an no existen estudios que especifiquen claramente las ventajas de las
diversas opciones de biorremediacin en trminos de costos. Sin embargo, es posible
prever que la opcin de aireacin a gran escala puede ser muy costosa y que
128

prcticamente es preferible la opcin de labranza manual para favorecer la aireacin de

capas poco profundas del suelo de manglar (Olguin et al., 2007).
Limitando la visin slo a los grandes trazos, puede decirse que a las ventajas que la ANM
presenta (menor cantidad de residuos, ausencia de riesgos asociados al traslado de
equipos, materiales y residuos, menor intrusin de estructuras superficiales, menor costo
potencial asociado a actividades de remediacin, etc.), se contrapone la dificultad de
caracterizacin de cada situacin especfica, por el nmero y tipo de factores a tener en
cuenta, la incertidumbre asociada a los datos experimentales (algunos de difcil obtencin)
y las predicciones que de stos se implican. Hay que sumar, adems, el costo y tiempo de
la mayor cantidad de anlisis y monitoreos que involucra, en relacin con otras
alternativas de remediacin activas (Mateu, 2008).
En una comparacin realizada por (ITRCWG & RTDF, 1999) entre la atenuacin natural y
otras tecnologas de remediacin con respecto a una fuente con solventes clorinados se
encuentran detalles como:
Asumiendo el costo de 20 pozos.
La restauracin completa.
El largo tiempo de restauracin.
El 3% de inflacin.
El impuesto del 12%.
Incluyendo todos los costos asociados al sistema de atenuacin natural por un periodo de
30 aos y mostrados en la tabla 4 del mismo documento (ITRCWG & RTDF, 1999), el costo
estimado es de U$ 908.300, mientras que el sistema con bombas el costo es de U$
2134.000, dando una diferencia de U$ 1225.700, lo cual confirma los menores costos de la
atenuacin natural.
Siempre ha de considerarse la contraparte a los bajos costos en la atenuacin natural,
como lo son la extensin del proceso de recuperacin a aos y el monitoreo asociado por
el mismo periodo de tiempo, el cual depende en muchas ocasiones de la voluntad de
seguimiento por parte de las instituciones encargadas, por el periodo estimado.
129

Leccin 35. Parmetros de monitoreo y seguimiento.

La decisin de emplear la ANM como remedio debe ser adecuadamente soportada en una
exhaustiva caracterizacin del sitio especfico: ya que es necesario que esta sea ms
compleja y detallada que cuando se trata de aplicar un mtodo activo. Tambin se
requiere la obtencin de elementos adicionales, por ejemplo: evaluar las contribuciones
de la sorcin, la dilucin y la dispersin a las aguas subterrneas contaminadas (Mateu,
2008).
Una evaluacin cuantitativa de la masa contaminante, el flujo del agua subterrnea
incluyendo caminos preferenciales, la distribucin del contaminante entre fases y la
particin entre suelo y agua, suelo y gas, y las tasas de transformacin biolgica y no
biolgica, adems de saber cmo todos estos factores varan con el tiempo, son tambin
necesarios para una adecuada decisin acerca de la viabilidad de la ANM (Mateu, 2008).
El monitoreo consiste en la caracterizacin inicial del sitio y/o material a remediarse, debe
de realizarse un monitoreo de por lo menos un muestreo con los respectivos anlisis cada
6 meses y una caracterizacin final una vez concluidos los trabajos (Orosco Verdezoto &
Soria Guano, 2008), el cual muchas veces no se sabe cuando ser. Los marcos temporales
requeridos para la ANM son a menudo ms largos que los requeridos para otros remedios
activos, lo que incrementa la incertidumbre asociada a las determinaciones de las tasas de
atenuacin, y a todo aquel factor sobre el cual deba ser efectuada una prediccin a futuro
(Mateu, 2008).
Se determinan la mineralizacin y se mide el contenido de hidrocarburos, se deben hacer
recuentos bacterianos al inicio y final del experimento, para esto se deben realizar
siembras peridicas en medios de cultivo selectivos, en las cuales se determinarn las
UFC/g suelo de bacterias hetertrofas e hidrocarbonoclastas. Los aislamientos bacterianos
que crecen en cultivo utilizando el diesel como nica fuente de carbono deben ser
caracterizados por mtodos bioqumicos y moleculares (Arrieta Ramrez, 2011); tambin
se debe determinar el contenido de nitratos, nitritos y amonio de manera semanal (A. J.
Acua et al., 2008), y se deben medir variables de control como humedad, tempratura, pH
y potencial redox (Arrieta Ramrez, 2011).
Diferentes factores deben ser puestos en consideracin como la clasificacin del recurso
afectado, el tiempo estimado en que el recurso tenga un determinado uso; condiciones
subsuperficiales que pueden llegar a afectar en el largo plazo otros recursos cercanos;
determinacin de las masas de contaminantes y los anlisis predictivos (Mateu, 2008).
Existen mltiples mtodos para evaluar los procesos de biorremediacin, entre los que se
encuentran:
Mtodos no moleculares:
130

Cultivo y nmero ms probable de organismos con actividad catalitica (NMP).

Patrones de utilizacin de sustrato (BIOLOG).
Respirometra (metabolismo aerbico).
Evaluacin del potencial redox (metabolismo anaerbico).
Anlisis de biomasa (acido murimico para bacterias, ergosterol para hongos).
Anlisis de la formacin de sub productos, metabolitos o desaparicin de sustratos en
el terreno, aguas contaminadas y/o percolados de pilas de biorremediacin.
Uso de tcnicas de anlisis qumico:
Prediccin de biodegradabilidad mediante modelos (QSBRs): Acidos grasos de los
fosfolpidos (PLFAs).
Enzimas en suelo (deshidrogenasas, lipasas, ureasas, fosfatasas cidas y alcalinas).
Mtodos inmunoqumicos: (Elisa para el contaminante, inmunofluorescencia directa).
Metodos moleculares: Razn rDNA/rRNA 16S (RNA aumentado en condiciones de alto
metabolismo).
PCR / microarreglo para genes catablicos especie especficos.
Biosensores.
Mtodos analticos para estimar el grado de biorremediacin.
Mecanismos mixtos de remediacin abiticos +biticos.
Reacciones qumicas o procesos fsicos que complementan los procesos de
biorremediacin.
Reacciones de fenton en hongos ligninolticos.
Fotocatlisis mediada por TiO2.
Oxidacin por Ozono, Permanganato, Ion ferrato (FeVI) .
Reaccin de Fenton: Fe2+ + H2O2 ----> Fe3+ + .OH + OHFe3+ + H2O2 ----> Fe2+ + .OOH + H+
Adicin: OH + C6H6 ----> (OH)C6H6.
Abstraccin de hidrogeno: OH + CH3CH2OH ----> CH2CH2OH + H2O.
Transferencia de electrones: OH + [Fe(CN)6]4- ----> [Fe(CN)6]3- + OH.
Interaccin con otros radicales: OH + OH ----> H2O2.
Durante todo el desarrollo del proceso de biorremediacin, la monitorizacin juega un

papel clave en la evaluacin de la efectividad del trabajo, con el objeto de evaluar la
desaparicin del contaminante con el tiempo y la disminucin del riesgo para el medio
receptor (Shannon & Unterman, 1993). En este sentido es necesario distinguir entre la
desaparicin de contaminantes por fenmenos fsicos o qumicos y por la accin biolgica,
para lo cual se aplican diversos procedimientos, como el anlisis de biomarcadores (Bragg,
Prince, Harner, & Atlas, 1994; Rodrguez Gallego & Snchez Martn, 2003).
131

Para asegurar la correcta ejecucin y un progreso adecuado del tratamiento se debe llevar
a cabo un plan de control y seguimiento del sistema, los cuales se pueden observar en la
Figura 38.
Figura 38: Diagrama de flujo para evaluar la implementacin de la atenuacin natural,

adaptado de ITRCWG & RTDF, (1999).
132

Y para una correcta optimizacin se debern controlar los siguientes puntos:

1. Control de las condiciones de degradacin y biodegradacin. Se registrar la
variacin de concentracin de TPH, BTEX, COVs, CO2 desprendido y oxgeno
disuelto, variacin de nutrientes (N, P, etc).
2. Control de los parmetros que afectan directamente en el funcionamiento del
sistema (Arrieta Ramrez, 2011).
No debe desestimarse que la necesidad de controles y monitoreos de largo plazo implican
voluntad institucional firme y estable para su mantenimiento durante largo tiempo y, por
sobre todo, la provisin de los recurso econmicos para su realizacin (Mateu, 2008).
133

CAPTULO 8. BIOESTIMULACIN.
Leccin 36. Introduccin

La bioestimulacin as como la bioaumentacin son mtodos de bioremediacin que
implican la circulacin de oxgeno a travs del suelo contaminado, para mejorar la
biodegradacin de contaminantes orgnicos o la inmovilizacin de contaminantes
inorgnicos (Van Deuren, Wang, & Ledbetter, 1997). En muchos trabajos se requiere que
ambos mtodos sean utilizados de forma simultnea o intercalada, brindando los mejores
resultados de degradacin de contaminantes, sin embargo hay situaciones en donde solo
uno de ellos es necesario o adecuado para descontaminar el suelo o agua.
En actividades como el compostaje es una de estas situaciones particulares, donde se
adicionan los contaminantes a degradar en conjunto con el suelo, sustrato vegetal o
materia orgnica, cal, lo que constituye una bioestimulacin, pero adicionalmente se
adicionan mezclas de microorganismos con el potencial de poder degradar los
contaminantes agregados, por lo tanto se est haciendo bioaumentacin. En este caso es
necesario realizar ambos procesos para que se realice el compostaje, la diferencia radica
en los microorganismos utilizados, los cuales pueden ser generalistas o adicionados con
aislamientos especializados en la degradacin de los contaminantes agregados.
Otro caso muy comn es el landfarming o labranza del terreno, en la cual lo ms comn es
el arado del suelo con el fin de brindar oxgeno a la flora autctona del suelo, en algunas
ocasiones con retroexcavadoras para hacer una labor mas profunda, en este caso se
puede hablar de una bioestimulacin, sin embargo se encuentran reportes en literatura
donde para mejorar el proceso se adicionan nutrientes como N y P al suelo con el fin de
estimular la degradacin de los contaminantes por la flora nativa. Actualmente con miras
a mejorar el proceso se ha optado por dos alternativas para la adicin de
microorganismos, la primera es obtener los organismos nativos y cultivar aquellos que
presenten el potencial de degradacin, o la segunda es agregar microorganismos
alctonos con capacidad reconocida de degradacin de los contaminantes; cualquiera sea
el caso se procura hacer la bioaumentacin con el fin de acelerar o mejorar los procesos
biodegradativos.
En el captulo 9 referente a la bioaumentacin se har ms nfasis en los procesos de
compostaje y labranza de terreno landfarming, dando lugar a que en el presente
captulo se haga nfasis en algunos procesos ms especficos de aplicacin de la tcnica de
bioestimulacin.
La bioestimulacin es un mtodo de bioremediacin in-situ, que implica la circulacin de
soluciones acuosas que contengan nutrientes y/o oxgeno a travs del suelo contaminado,
134

para estimular la actividad de los microorganismos autctonos y mejorar asi la

biodegradacin de contaminantes orgnicos o la inmovilizacin de contaminantes
inorgnicos in-situ (Van Deuren et al., 1997).
La bioestimulacin no es un mtodo recomendable para suelos arcillosos, altamente
estratificados o demasiado heterogneos, ya que pueden provocar limitaciones en la
transferencia de O2. Otros factores que pueden limitar su aplicacin, incluyen:
a) Que el tipo de suelo no favorezca el crecimiento microbiano.
b) El incremento en la movilidad de los contaminantes.
c) La obstruccin en los pozos de inyeccin provocada por el crecimiento microbiano.
La bioestimulacin puede favorecer que los procesos se realicen de forma ms acelerada
que con otros mtodos de bioremediacin como la atenuacin natural, de tal forma que
en periodos prolongados los resultados pueden ser los mismos con diferentes
procedimientos, haciendo que la bioestimulacin haga ms rapidos los procesos como se
ha demostrado por V. Vallejo, Salgado, & Roldan, (2005) con los hidrocarburos totales de
petrleo, en un estudio realizado en la Universidad Javeriana sede Bogot.
La bioaumentacin tambin se ha usado con xito para remediar suelos contaminados con
gasolinas, Compuestos Orgnicos Voltiles, Compuestos Orgnicos Solubles y pesticidas
(Alexander, 1994); incluso estudios a escala piloto, han mostrado la biodegradacin de
suelos contaminados con desechos de municiones. Tambin se ha demostrado su
eficiencia en el tratamiento de aguas subterrneas contaminadas con hidrocarburos,
derivados de petrleo, pesticidas, disolventes, conservantes de la madera y otros
qumicos contaminantes.
135

Leccin 37. Parmetros de diseo

La bioestimulacin requiere para su diseo los siguientes estudios iniciales:
A. Caracterizacin general del rea: Comprende entre otros la topografa, hidrogeologa,
las caractersticas climticas, caractersticas edficas del suelo, caractersticas
microbiolgicas, procedencia y composicin del residuo. La entrega de nutrientes
depende de las caractersticas hidrogeolgicas del terreno: Terrenos compactos, rocosos,
impermeables as como fracturas en la superficie disminuyen distribucin de nutrientes.
B. Caracterizacin fisicoqumica y edafolgica del suelo: Los parmetros edficos que
determinan y condicionan la eleccin de un suelo para landfarming son la textura,
estructura, pH, temperatura, porosidad, velocidad de percolacin, capacidad de retencin
de agua, infiltracin, contenido de oxgeno, contenido de macro y micronutrientes, y
humedad (Mara Graciela Pozzo Ardizzi, Ferrari, & Caldern, 2010).
C. Caracterizacin microbiolgica: Se debe estudiar la compatibilidad residuo-poblacin
microbiana autctona.
1) Microorganismos nativos con el hidrocarburo como nica fuente de carbono.
2) Microorganismos alctonos de suelos empetrolados, en medio mnimo y con
gasoil como nica fuente de carbono.
3) Microorganismos de preparacin comercial (alctonos), en medio mnimo y con
gasoil como nica fuente de carbono.
4) Microorganismos nativos, en medio mnimo y con emulsin inversa pura como
nica fuente de carbono.
5) Microorganismos nativos con medio mnimo desarrollado con agua extrada del
pozo y gasoil como fuente de carbono.
6) Microorganismos nativos, en medio mnimo desarrollado con agua destilada y
con gasoil como fuente de carbono.
D. Monitoreo y evaluacin del biotratamiento:
1) El seguimiento, control y eficiencia del laboreo mecnico permiten visualizar en
escala macroscpica la marcha del bioproceso.
2) El registro de parmetros climticos, ayuda a la toma de decisiones respecto a
ciertas acciones de manejo, por ejemplo frecuencias a intensidades de riego.
3) Los resultados de las pruebas fisicoqumicas y microbiolgicas que se obtienen
en los monitoreos, reflejan en escala microscpica la eficiencia del laboreo y
permiten corregir acciones.
El plan de monitoreo debe realizarse respecto al sistema suelo- microorganismos
residuo:
136

a) Seguimiento superficial del bioproceso, es decir en el sector de suelo de los

primeros 20 a 30cm, donde se realiza el tratamiento biolgico del residuo.
b) Seguimiento del proceso en el perfil del suelo.
E. Modificacin del ambiente para estimular el crecimiento o la actividad de bacterias ya
existentes: la adicin de nutrientes y aceptores de electrones (fsforo, nitrgeno, oxgeno
o carbono) por medio de una inyeccin de aire en forma de burbujas o como perxido de
hidrogeno soluble.
En los lugares de clima frio donde la temperatura del agua es baja, el uso de calefactores
sobre el terreno ayuda a aumentar la temperatura del suelo y la tasa de degradacin.
Cuando la fuente de contaminacin es profunda o cuanto la contaminacin no solo es
superficial sino principalmente a unos cuantos metros de la superficie del suelo, las
consideraciones anteriores tienen ciertos cambios.
En algunos casos la mayor parte del residuo de hidrocarburos en el sitio contaminado se
encuentra en la zona vadosa del suelo, en el margen de capilaridad e inmediatamente por
debajo de la tabla de agua, en estas circunstancias el aire a presin se inyecta por debajo
de la tabla de agua y a medida que va llenando los poros desplaza el agua de la matriz del
suelo y con ella los contaminantes (Figura 39), proceso que generalmente es conocido
como bioventeo. Los compuestos que presentan baja presin de vapor difcilmente se
volatilizan por lo que su desaparicin se le atribuye a la biodegradacin incentivada por el
bioventeo. El proceso de bioventeo estimula la actividad biolgica in-situ y promueve la
biorremediacin (Manacorda & Cuadros, 2005).
Figura 39. Proceso de bioremediacin in-situ de agua y suelo.

http://superfund.pharmacy.arizona.edu/toxamb/c4-3-2-2.html
137

Generalmente debe ser aplicado en zonas vadosas y es aplicado para aquellos qumicos
que son biodegradados aerbicamente, aunque en principio se ha utilizado para sitios
contaminados con petrleo. Es uno de los mtodos considerado de mayor costo-beneficio
para la remediacin de la zona vadosa.
El excesivo calcio, magnesio o hierro en el agua subterrnea puede reaccionar con el
fosfato, el cual es suministrado como un nutriente en la forma de tripolifosfato, o con el
dixido de carbono (producido por los microorganismos en la respiracin aerbica). Los
productos de estas reacciones pueden afectar negativamente la operacin de un sistema
de biorremediacin in-situ. Cuando el calcio, magnesio o hierro reaccionan con el fosfato o
el CO2, se forma sarro o cristalina precipitada; produciendo una compresin en los canales
de flujo, pudiendo daar los equipos (por ej: pozos de inyeccin). Adems los precipitados
de fosfatos de calcio o de magnesio unidos a compuestos fosforados no se encuentran
disponibles por los microorganismos para ser usados como nutrientes (Manacorda &
Cuadros, 2005).
El oxgeno introducido como aceptor de electrones, puede reaccionar disolviendo el Fe(II)
a una forma insoluble del mismo (oxido frrico), este precipitado puede ser dispuesto en
el flujo de canales del acufero, reduciendo su permeabilidad y dejando pozos de inyeccin
inoperables; entonces, el manejo de O2, nutrientes y rgimen de agua es fundamental
para contener hidrulicamente a la zona contaminada y prevenir la migracin de
contaminantes mviles o de metabolitos potencialmente txicos fuera del sistema.
138

Leccin 38. Funcionamiento
Como funciona la bioestimulacion? Bsicamente es la aplicacin de oxgeno y los

nutrientes necesarios para la que la microbiota funcione mejor que procesos como la
atenuacin natural monitoreada. Pero la conveniencia de aplicacin de stos depende de
una evaluacin previa de las condiciones del sistema, en donde se determina los
principales contaminantes y su concentracin, la presencia de microorganismos con la
capacidad degradadora de estos contaminantes y su concentracin en el sustrato, la
presencia de los nutrientes bsicos para su crecimiento y las proporciones de stos con
respecto al contaminante, los niveles de oxgeno en el sustrato contaminado y finalmente
la actividad biodegradadora in-situ, dadas las condiciones actuales del sistema.
Para realizar la bioestimulacin se deben seguir los siguientes pasos:
1) Realizar un estudio para determinar si la adicin de nutrientes es la tecnologa
apropiada para el vertido y la zona, si lo es, entonces.
2) Aplicacin de nutrientes.
3) Realizar estudios adicionales para evaluar las tcnicas de aplicacin de
nutrientes.
4) Poner en marcha un programa de larga duracin para monitorizar la zona
tratada.
5) Evaluar el potencial de utilizacin de microorganismos en la zona.
Por lo general se usan nutrientes aplicados de liberacin lenta, solubles en agua aplicados
en forma de briquetas y granulares o con aspersores y con nutrientes oleofilicos liquidos.
Uno de los ejemplos exitosos mas conocidos de bioaumentacin sucedi en las playas de
Alaska con la empresa EXXON VALDEZ, los cuales tuvieron en en 1989 una catstrofe
ambiental por vertimiento de hidrocarburos en 470 millas de playa y la tecnologa mas
apropiada fue la aplicacin de nutrientes en 110 de stas (Figura 40). Como resultado se
obtuvo un incremento en la velocidad de biodegradacin entre 2 y 4 veces,
adicionalmente se evalu el potencial de la utilizacin de microoganismos a esas playas
para favorecer la biodegradacin (Chau, 2003).
La Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos (EPA) determin que el mtodo
mas prctico para estas playas era la aplicacin de nutrientes oleoflicos (superficial) y
granulares de liberacin lenta (superficial + sub-superficial)(Chau, 2003).
139

Figura 40. Localizacin geogrfica del vertimiento EXXON VALDEZ en Alaska y foto del
proceso de bioremediacin.
En el trabajo de Arrieta Ramrez (2011) con bacterias hetertrofas e hidrocarbonoclastas
se ha encontrado que bacterias como Enterobacter sp, Bacillus sp, Staphylococcus aureus,
Sanguibacter soli, Arthrobacter sp y Flavobacterium sp. se encuentran entre las
responsables de los procesos de degradacin de hidrocarburos en procesos de
bioestimulacin.
En estudios de laboratorio desarrollados por Gmez, Gaviria, & Cardona (2009) se ha
podido confirmar la mayor eficiencia (7.66%) de la bioestimulacin con respecto a la
atenucacin natural, en aspectos como cantidad de hidrocarburos degradados y tiempos
de accin, sin embargo los resultados son similares a los obtenidos con procesos de
bioaumentacion. En el estudio de Gmez et al. (2009), tanto para el tratamiento de
atenuacin natural como de bioestimulacin la poblacin microbial decrece despus de la
sptima semana, comportamiento que fue similar al encontrado por Menndez et al.
(2007) despus de 4 meses.
Finalmente un rea que est tomando fuerza es el uso de algas para procesos de
bioremediacin en casos especficos a cambio de hongos y bacterias; en un trabajo de
laboratorio desarrollado por Aguirre Ramrez et al. (2007), se evalu el efecto de
diferentes concentraciones de nitrgeno y fsforo sobre las poblaciones de Chlorella
vulgaris, un alga bioremediadora. Se encontr que para una proporcin de N:P de 46,67:1,
correspondiente al 200% del control de nitrgeno (8,4 mg/L N) se present inhibicin,
mientras para una proporcin de N:P de 11,67:1, correspondiente al 200% del control de
fsforo (0,36 mg/L P) se present estimulacin. Este contraste implica que el fsforo es el
nutriente limitante, sin embargo, el fsforo no debe ser analizado independientemente;
su estudio debe ser realizado en trminos de la relacin estequiomtrica con respecto a la
concentracin del nitrgeno; por lo tanto, al aumentar estequiomtricamente el
140

nitrgeno la concentracin el fsforo se hace limitante; es por ello que existe una
inhibicin en el crecimiento de la poblacin cuando la relacin N:P estequiomtricamente
favorece al nitrgeno; a su vez, cuando la cantidad de fsforo es mayor su condicin no es
limitante puesto que proporcionalmente la relacin N:P favorece en este caso a dicho
nutriente y en consecuencia la tasa de crecimiento poblacional aumenta. A pesar de que
en la naturaleza el fsforo es considerado el nutriente ms limitante, las concentraciones
de nitrgeno deben conservar una proporcin mayor en relacin al fsforo.
141

Los costos de la bioestimulacin son bajos comparados con otros mtodos de remediacin
usados para el tratamiento de vertimiento de hidrocarburos, pero son un tratamiento a
largo plazo, que puede llevar muchos aos para su completo funcionamiento.
Son muy escasos los reportes donde se de una informacin clara acerca de los costos de
diferentes casos exitosos de bioremediacin por medio de bioestimulacin (Olguin et al.,
2007), sin embargo todos ellos coinciden en mencionar que es una de las alternativas ms
econmicas que pueden existir dentro de todas las tcnicas de bioremediacin in-situ
(Arrieta Ramrez, 2011; Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
La naturaleza y profundidad de los contaminantes y el uso de bioaumentacin puede
aumentar los costos (Van Deuren et al., 1997). Cuando la contaminacin se realiza en
suelos permeables, la filtracin de los contaminantes pueden constituir un gran problema
debido al incremento de los costos por el movimiento de tierra requerido (Torres Delgado
& Zuluaga Montoya, 2009). Tambin es importante considerar los costos implicados en la
seleccin y aplicacin de los nutrientes apropiados; despus de la evaluacin de los
contaminantes se procede a seleccionar los aislamientos ms promisorios para la
degradacin y a la seleccin de los nutrientes y cantidades adecuadas para agregar al
suelo y promover el crecimiento microbiano. Sin embargo no es suficiente con agregar
nutrientes y esperar a que estimulen el crecimiento, tambin se requiere de una
dosificacin permanente y mantener las condiciones de aireacin, o bien la adicin de
estos fertilizantes por mecanismos de lenta liberacin, todo dependiente del
contaminante y de las condiciones del terreno donde se ha producido la contaminacin.
No es lo mismo agregar fertilizantes inorgnicos compuestos (FIC) que sales inorgnicas
simples (SIS). El FIC es de fcil aplicacin, bajo costo y, por ser un fertilizante de liberacin
lenta, aporta los nutrientes en forma gradual y continua, a una tasa ajustada a las
necesidades de los microorganismos. Sin embargo, su presentacin en forma de grnulos
secos en algunos casos dificulta su distribucin uniforme y la homogenizacin en el suelo.
Por el contrario, aunque las SIS se disuelven ms rpidamente en el agua, son ms
costosas y aportan una baja cantidad de fsforo, el cual se consume rpidamente por los
microorganismos degradadores al inicio de la biodegradacin (V. Vallejo et al., 2005).
De acuerdo al estudio realizado en la costa da Morte en una playa de sobre la costa del
Golfo de Alaska, se aplicaron nutrientes a 110 millas de playa contaminada, el costo de la
bioestimulacin oscila entre 30 y 100 dlares/m3. En la bioremediacin usada el
tratamiento de bioestimulacin fue econmico, tras comparar el gasto de 12.000 euros
por 500m de costa limpiados, frente al milln de euros necesarios en la catstrofe del
Exxon Valdez para la limpieza fsica de cada kilmetro de litoral.
142


Desde un principio y a lo largo de todo el proceso es necesario realizar el seguimiento a
algunos parmetros que se dividen en dos categoras:
a. Anlisis fisicoqumico de suelos y aguas. Toma de muestras de suelos, calidad del
suelo, contenido de hidrocarburos, cromatografa separativa fase slido-lquido,
cromatografa gaseosa, pH por potenciometria, conductividad elctrica, humedad,
gravimetra, capacidad de retencin de agua, nitrgeno total, carbono orgnico y
total, fosforo asimilable, metales alcalinos y metales pesados.
b. Anlisis microbiolgicos. Toma de muestras, manejo y almacenamiento para
ensayos con microorganismos aerbicos, poblacin hetertrofa total, poblacin
hidrocarburolitica.
Los datos microbiolgicos obtenidos en los monitoreos temporales y espaciales de los
suelos del biotratamiento, graficados en funcin de la concentracin de hidrocarburos
totales permiten el seguimiento global del biotratamiento. Estos grficos permiten
visualizar cuando un bioproceso llega a un estado estacionario, donde tanto la poblacin
hidrocarburolitica como la concentracin de HTP remanente permanecen casi constantes.
(Eusebi, Sosa, Altamirano, & Pozzo Ardizzi, 1998; M. G. Pozzo Ardizzi, 1998).
Se pueden medir variables como humedad, temperatura, pH y potencial redox, pruebas
de respirometria para cuantificar el CO2 producido y asi evaluar la actividad metablica de
los microorganismos del suelo durante el proceso de degradacin del diesel. Los
resultados muestran que el tratamiento de bioestimulacin es el mas eficiente en la
remocin de hidrocarburos totales de petrleo (Arrieta Ramrez, 2011).
El pH es uno de los parmetros que mas variaciones registra pues favorece el desarrollo
de los microorganismos degradadores (Arrieta Ramrez, 2011). Esto puede deberse a la
adicion de nutrientes que estimula el crecimiento de microorganismos aumentando la
biomasa y generando incrementos de pH; el descenso de pH observable
aproximadamente despus de la decima semana se deben a que la cantidad de oxgeno en
el medio disminuye, presentndose incluso condiciones anxicas, aumentando la cantidad
de CO2 en el medio.
La humedad debe mantenerse alrededor del 25%, cuando se observa exceso de agua en el
microcosmos, el suelo se torna pantanoso y puede interferir en el transporte de oxgeno
en el medio. La aireacin en el medio favorece la degradacin del hidrocarburo por
volatilizacin, facilitando la migracin de la fase voltil de los contaminantes, y por
biodegradacin, ya que al incrementar la oxigenacin del suelo se va a estimular la
actividad bacteriana.
143

La temperatura influye en la velocidad de degradacin de los hidrocarburos, las

temperaturas ms adecuadas para un ptimo proceso de bioremediacin se encuentran
entre 20C y 40C.
Los suelos contaminados con una poblacin de microorganismos heterotrficos superior a
1000 UFC/g suelo (Troy, 1994), indica que puede llevarse a cabo la degradacin de
hidrocarburos mediante el uso de la bioestimulacin (Arrieta Ramrez, 2011).
Los procedimientos para valorar variables fsico-qumicas y baceriolgicas estn definidos
segn normas, lo que garantiza que siempre van a medirse de la misma manera y no van a
diverger en los valores obtenidos, estas normas segn Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al.
(2010) son:
Normas ASTM D 5745 95 Standard Guide for Developing and Implementing Short Terms
Measures or Early Actions for Site Remediation.
Anlisis fisicoqumicos de suelos y aguas:
Gua de diseo para toma de muestras en suelos, segn Norma IRAM 29481-1;
ISO-DIS 10381-1: 1993. Soil quality.
Toma de muestras de suelos, segn Norma IRAM 29481-2; ISO-DIS 10381- 2: 1993
Soil quality.
Pretratamiento de muestras para anlisis fisicoqumicos. Segn Norma IRAM
29402: 1998.
Calidad del suelo: equivalente a ISO 11464: 1994.
Contenido de hidrocarburos (%) (HTP). Extraccin por Soxhlet, con tetracloruro de
carbono. (segn Mtodo EPA 418.1). Con modificaciones prxima Norma IRAM.
Cromatografa separativa fase slido-lquido. Analiza por fracciones: saturados,
aromticos, resinas y asfaltenos.
Cromatografa gaseosa-Espectrometra de masa (GC/MS) (analiza componentes de
cada fraccin).
pH Potenciometra. Segn Norma IRAM 29410-ISO 10390.
Conductividad elctrica. Potenciometra. Segn Norma ISO 11265: 1994.
Humedad (%). Gravimetra. Segn Norma ISO 11465: 1993.
Capacidad de retencin de agua. Segn Norma ISO-FDIS 11274: 1998.
Nitrgeno total. Segn Norma ISO 11261: 1995.
Carbono orgnico y total. Segn Norma ISO 10694: 1995.
Fsforo asimilable. Segn Norma ISO 11263: 1994.
Metales alcalinos. Espectrofotometra de Absorcin atmica (Segn Standard
Methods 3113 B).
144

Metales Pesados. Espectrofotometra de Absorcin atmica (Segn Standard

Methods 3113 B).
Anlisis microbiolgicos:
Toma de muestras, manejo y almacenamiento para ensayos con microorganismos
aerbicos, segn Norma IRAM 29481-6: 1998; ISO 10381-6: 1993.
Poblacin hetertrofa total. Recuento por NMP.
Poblacin hidrocarburoltica. Recuento por NMP, en medio mnimo con petrleo
estril como nica fuente de carbono. Bioensayos para establecer compatibilidad y
biodegradabilidad. Segn Norma ISO 11266:1994 (con modificaciones).
Las especies que respondan sin indicar alteraciones en sus distintos estados fenolgicos,
sern las elegidas para repoblar los suelos del predio. Durante los bioensayos con plantas,
se obtendrn muestras de material vegetal donde se analizar contenido de hidrocarburos
en los tejidos vegetales. Los controles sobre las plantas se realizarn siguiendo la Norma
ISO 11269-1: 1993. Calidad del Suelo. Determinacin de los efectos de contaminantes en
la flora del suelo (Norma IRAM en estudio) segn Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al.
(2010).
145

CAPTULO 9. BIOAUMENTACIN.
La bioaumentacin es el trmino general que se suele emplear para referirse al
incremento en la cantidad de agentes descontaminantes, en especial a microorganismos
(virus, bacterias, actinomicetos), proceso que se puede llevar a cabo tanto in-situ como
ex-situ, siempre dependiendo de factores econmicos, del tipo de contaminante y de las
facilidades que existan para manejo ex-situ o la adquisicin de los bioremediadores en las
cantidades y de la calidad requeridos.
La introduccin de organismos puede realizarse tanto de organismos nativos como de
organismos moficados genticamente siempre teniendo en cuenta los conteos iniciales de
microorganismos y las capacidades degradadoras de los organismos seleccionados, en
especial cuando se trata de organismos genticamente modificados.
Cualquiera que sea el caso, en tratamientos in-situ o ex-situ, se debe tener en cuenta las
propiedades del sustrato, para lo cual se requiere de una valoracin inicial de los
principales contaminantes y sus concentraciones, debido a que si se superan los lmites
tolerantes por los microorganismos ests sern ihhibidos o eliminados. A partir de estos
datos tambin es importante considerar el tipo de tratamiento que va a ser mas
adecuado, debido a que la degradacin de algunos contaminantes se realiza mejor bajo
condiciones aerbias y en otros casos en condiciones anaerobias, mientras en otros casos
se requerir de tratamientos mixtos (aerobio-anaerobio) o trabajo complementario entre
varios organismos, de acuerdo a esto se debe considerar el mejor tratamiento de
bioaumentacin y los microorganismos que han de ser empleados.
Una de las tcnicas ms empleadas para reducir la contaminacin por hidrocarburos exsitu en Ecuador es el uso de compostas, cuya efectividad fue comprobada por Espinosa
Andrade, (2009)(Figura 41).
Figura 41: Representacin grfica de un sistema de biopilas alargadas (Velasco & Volke
Seplveda, 2003).
146

Un pila o apilamiento de compost est compuesta de capas de material vegetal verde

muerto que entra en proceso de descomposicin, material vegetal seco y generalmente
con adicin de cal para reducir el pH, y como requerimiento la adicin de
microorganismos que van a realizar la actividad biodegradadora. Cuando la pila de
compost tiene propsitos de bioremediacin se adicionan los sustratos a recuperar o
bioremediar en capas intermedias y por lo general son suplementados con
microorganismos y/o nutrientes.
Si en el proceso se generan gases o vapores de hidrocarburos voltiles regulados por la
autoridad ambiental, o las condiciones climatolgicas de la zona pueden afectar
negativamente la eficiencia del proceso, la pila del suelo se debe cubrir con membranas o
poner techo de forma similar a los invernaderos. Los vapores generados en el proceso se
deben colectar y tratar antes de ser emitidos a la atmsfera. Lo que incurre a costos
adicionales.
Entre las tcnicas ex-situ tambin se encuentra el tratamiento de biosuspensin, el cual es
conocido como sistema biorreactor o contacto lquido-slido. El procedimiento consiste
en excavar el suelo contaminado y luego introducirlo en un reactor aadiendo nutrientes,
agua, y los cultivos microbianos adecuados para que se lleve a cabo la degradacin. Se
mezcla bien y se airea la suspensin hasta que las transformaciones de los compuestos
seleccionados su eliminacin alcanzan el nivel deseado. A continuacin se detienen el
mezclado y la aireacin, y se deja a los slidos separarse de los fluidos por sedimentacin.
El sedimento es retirado y, si la transformacin ha tenido xito, el suelo se devuelve a su
lugar de origen, mientras que los lquidos se tratan como aguas residuales.
El tratamiento va suspensin puede aplicarse en particular a los suelos contaminados con
residuos oleosos y de consistencia alquitranada (siendo estos compuestos difciles de
biode gradar). Es ms rpido y requiere menos superficie que otros sistemas. Se ha usado
para tratar suelos contaminados con herbicidas (2,4-D, clorofam), insecticidas (lindano,
clordano, paratin), clorofenoles (PCP) y nitrofenoles, BPCs, HTPs y HAPs (Alexander,
1994). Tambin se ha aplicado efectivamente para tratar desechos con concentraciones
relativamente altas de metales (Eweis et al., 1998).
Debido al energtico mezclado y a la aireacin forzada se favorece el escape de emisiones
de aire, por ello la suspensin no es una buena eleccin para suelos donde la mayora de
los compuestos sean voltiles. Esta tcnica demanda mayor cantidad de dinero a
comparacin de otras tcnicas de biodegradacin (Torres Delgado & Zuluaga Montoya,
2009).
El xito de estas inoculaciones depende no slamente de factores abiticos como el pH,
temperatura, potencial de reduccin y la disponibilidad de agua y nutrientes, sino tambin
147

de factores biticos tales como la competencia microbiana, amensalismo, parasitismo y

depredacin, que pueden limitar el crecimiento y desarrollo de las poblaciones inoculadas
(Garbisu et al., 2002).
Entre los beneficios se encuentran: A) Reduccin de la formacin del H2S (cido
sulfhdrico). B) Mejoramiento de la bioactividad. C) Reduccin de la DBO (Demanda
bioqumica de oxgeno). D) Mejoramiento de la estabilidad del sistema. E) Mejoramiento
de la sedimentacin de slidos. F) Reduccin del volumen de lodos.
Para el tratamiento in-situ, dentro de los cuales el ms ampliamente conocido es el
landfarming, dada la necesidad de excavacin y posterior depsito del suelo
contaminado, se requiere una superficie de trabajo relativamente grande cuyas
dimensiones dependen del volumen de suelo a tratar (Figura 42).
Figura 42: Unidades de tratamiento (Ercoli, 2008).

Antes de llevar a cabo la bioaumentacin en un sitio, deben realizarse cultivos de
enriquecimiento, aislar microorganismos capaces de cometabolizar o utilizar el
contaminante como fuente de carbono, y cultivarlos hasta obtener grandes cantidades de
biomasa (Alexander, 1994).
148

Leccin 42. Parmetros de diseo.

Rben (2002) describio un conjunto de elementos a estudiar antes de crear una planta de
compostaje, estos procesos pueden ser tambin aplicados en el caso de bioaumentacin
en el proceso de Landfarming, en donde la premisa fundamental radica en estudiar
minuciosamente la situacin actual y las posibilidades econmicas.
El estudio de factibilidad debera comprender al menos los siguientes puntos (Rben,
2002):
1. Desechos slidos.
- Cantidad de los desechos slidos.
- Cantidad de los desechos biodegradables.
- Los desechos biodegradables especiales para considerar (tipo de contaminante);
cantidad y tipo de esos desechos.
2. Lugar previsto.
- Area disponible (considerando la tecnologa que se intenta implementar, la
cantidad de material, un rea adecuada para almacenar el compost y una laguna
de tratamiento de las aguas lixiviadas).
- Material del suelo.
- Costo del terreno.
3. Clima local.
- Nivel de precipitaciones (importante especialmente en la Amazona).
4. Operacin de la planta de compostaje.
- Personal disponible en el municipio (obreros, personal tcnico).
- Posibilidades de contratar nuevo personal.
- Nivel de formacin del personal.
- Capacitaciones necesarias.
- Alternativa de contratar el manejo de la planta de compostaje a una
microempresa.
- Anlisis econmico y tcnico.
5. Tecnologa seleccionada.
- Planta manual o mecanizada?.
- Cuales unidades de la planta se pueden o deben mecanizar?.
- Presupuesto necesario para inversin y operacin de las alternativas
consideradas.
- Ventajas y desventajas tcnicas.
- Capacidad financiera para asumir los costos.
- Cotizaciones de diferentes productores para las unidades mecanizadas.
Una vez hecha la anterior valoracin, el diseo de la bioremediacin es bastante sencillo y
depende mucho de los requerimientos de las entidades gubernamentales en cuanto a
eficiencia del proceso, los tiempos estimados y los resultados esperados.
149

Cualquiera que sea el proceso se requiere de:
Caracterizacin de los contaminantes y su distribucin en el terreno.

Caracterizacin del terreno, determinar caractersticas geolgicas e
hidrogeolgicas (Ej: presencia y velocidad de aguas subterrneas).
Seleccin de los nutrientes y condiciones de biorremediacin. Ej: Oxgeno (proceso
aerobico) y/o poder reductor (proceso anaerbico), necesidad de calefaccin o
electroestimulacin.
Generalmente requiere del estudio de los microorganismos presentes en el sitio y
su capacidad para realizar la remediacin deseada. Esta sujeta a las restricciones
de geologa e hidrogeologa.
Optimizacin de acceso a nutrientes y contaminantes: Vas de inyeccin o entrega
de nutrientes, uso de biosurfactantes.
Evaluar uso de procesos qumicos y/o fsicos complementarios a la
biorremediacin.
Determinar las vas metablicas principales y la posible produccin de metabolitos
inhibitorios o txicos.
Disear e implementar mtodos de evaluacin del proceso de biorremediacin:
NMP, BIOLOG, determinacin de sustratos, productos y metabolitos
intermediarios.
En el caso del compostaje, la pila de material vegetal ha de ser de por lo menos un metro
de altura por uno de ancho, y el largo solo est limitado de las dimensiones del terreno, lo
cual favorece la actividad de los diferentes microorganismos involucrados (mesfilos,
termfilos, aerobios y anaerobios). Aunque las dimensiones de ancho y alto pueden ser
mucho mayores ya que en al finalizar el proceso las pilas de compost pueden
corresponder a la tercera parte del volumen inicial. En el fondo de la pila el sistema cuenta
con un aislante que generalmente son geomembranas o canales plsticos para el control
de lixiviados. Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la
pila, o bien de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireacin, con distribucin
permanente de nutrientes, microorganismos y aire. En principio, las biopilas se pueden
aplicar a la mayora de los compuestos orgnicos, siendo ms eficaz en los compuestos de
carcter ms ligero.
Entre los factores a tener en cuenta se encuentran la humedad, el pH, la temperatura del
suelo, el contenido de oxgeno, la concentracin de nutrientes, la textura del suelo; y
entre los parmetros de los contaminantes se encuentran la volatilidad, la estructura
qumica, concentracin y toxicidad (Cuadro 20). Entre los factores que influyen en la
aplicacin de las biopilas se destacan los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben
encontrarse en el suelo en concentraciones menores a 50.000 ppm.
150

Cuadro 20: Estructura qumica y biodegradabilidad (EPA, 1994b).
Los parmetros edficos que determinan y condicionan la eleccin de un suelo para

"landfarming" son: textura, estructura, pH, temperatura, porosidad, velocidad de
percolacin, capacidad de retencin de agua, infiltracin, contenido de oxgeno,
contenido de macro y micronutrientes, humedad. La bibliografa existente al respecto
indica la necesidad de mantener la relacin hidrocarburo/N/P/K de manera que no exceda
los valores 100/10/1/1 (Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al., 2010).
La fase bitica indgena de un suelo, posee naturalmente formas de resistencia que les
permiten sobrevivir por largos perodos sin realizar actividades metablicas, ante
condiciones ambientales desfavorables. Un adecuado manejo del sistema suelo, permite
amortiguar los efectos ambientales, generando una proliferacin cuali y cuantitativa de
los microorganismos autctonos, permitiendo que realicen sus funciones bioqumicas en
forma continua, aunque temporalmente menos activa. Los organismos alctonos que se
puedan incorporar a un suelo, generalmente, no participan significativamente en la
actividad comunitaria. Esta poblacin demanda un cierto perodo de adaptacin, llegando
a crecer y reproducirse, mantenindose por cortos perodos, debiendo competir con las
poblaciones autctonas, por espacio colonizante, por nutrientes y oxgeno, pero sin llegar
a contribuir en forma significativa a las numerosas transformaciones e interacciones de
importancia ecolgica que ocurren en el suelo (Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al., 2010).
151

Leccin 43. Funcionamiento.
Industrialmente el compostaje comprende los siguientes elementos:

1. Recepcin de la fraccin orgnica de la basura. Se tamiza para eliminar las pocas
impurezas que an contenga.
2. Una gran criba cilndrica que separa la materia orgnica.
3. Seleccin manual, tras este control, un electroimn elimina los residuos metlicos.
4. Recepcin de la fraccin vegetal y trituracin.
5. Mezcla y homogenizacin. Se mezclan las dos fracciones as: 65-75% orgnica y 2535% vegetal triturada. El resultado es lo que se compostar.
6. Disposicin en pilas: Con una pala mecnica se forman pilas en un cobertizo sin
paredes y preparado para recoger los lixiviados.
7. Volteado de las pilas y control de las condiciones ambientales del proceso. Para que
se descomponga bien, hay que mantener las condiciones de humedad, temperatura
y oxgeno. Por eso se riegan las pilas con los propios lixiviados y se remueven con
una mquina volteadora.
8. Cribado del compost maduro. A las 12-14 semanas el compost se criba para que
quede homgeneo y fino. Si quedan deshechos vegetales, vuelven al proceso.
9. El final del proceso es el compost. Sirve de abono o de corrector de suelos.
La fase bioremediadora del proceso de composting o compostaje puede dividirse en

cuatro perodos, atendiendo a la evolucin de la temperatura:
1. Mesoltico: La masa vegetal est a temperatura ambiente y los microorganismos
mesfilos se multiplican rpidamente. Como consecuencia de la actividad
metablica la temperatura se eleva y se producen cidos orgnicos que hacen
bajar el pH.
2. Termoflico: Cuando se alcanza una temperatura de 40C, los microorganismos
termfilos actan transformando el nitrgeno en amonaco y el pH del medio se
hace alcalino. A los 60C estos hongos termfilos desaparecen y aparecen las
bacterias esporgenas y actinomicetos. Estos microorganismos son los encargados
de descomponer las ceras, protenas y hemicelulosa.
3. De enfriamiento: Cuando la temperatura es menor de 60C, reaparecen los hongos
termfilos que reinvaden el mantillo y descomponen la celulosa. Al bajar de 40C
los mesfilos tambin reinician su actividad y el pH del medio desciende
ligeramente.
4. De maduracin: Es un periodo que requiere meses a temperatura ambiente,
durante los cuales se producen reacciones secundarias de condensacin y
polimerizacin del humus.
152

En cuanto al landfarming la actividad bioremediadora se ve limitada por la competencia

de los organismos nativos cuando la bioaumentacin es realizada por organismos
alctonos (Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al., 2010), sin embargo la tendencia actual es a
emplear organismos aislados del mismo sustrato contaminado, factor que lleva a una
reduccin de la competencia, una mayora adaptacin a las condiciones del terreno y por
consiguiente un mejor funcionamiento de la flora en los procesos de bioremediacin;
aunque surge el limitante si la flora autctona o nativa tiene el potencial de descomponer
los materiales contaminantes de una manera eficiente, lo que puede llevar a que los
tratamientos sean mas demorados que lo esperado. Sin embargo este proceso no puede
ser exitoso sin la adicin de los nutrientes adecuados en especial nitrgeno, fsforo y
potasio requeridos para el crecimiento y reproduccin de los microorganismos. El carbono
es proveido por el material contaminante, as como una abundante oxigenacin, la cual en
la mayora de las ocasiones se realiza con ayuda de un tractor que permanentemente est
arando el terreno.
El proceso de biodegradacin en el landfarming adicionado a bioaumentacin puede
llegar a constituirse en un proceso lento (hasta 3 aos) en comparacin al de compostaje
(6 meses), pero los estudios consultados indican que pueden llegar a ser similarmente
eficientes en destruir los hidrocarburos, aromticos y diferentes contaminantes. Tanto en
el el uso de pilas de compost como en landfarming, priman los procesos aerobios sobre los
anaerobios y esto garantiza que el proceso se realice de una forma ms eficiente.
153


La bioaumentacin es una tecnologa que puede durar varios meses o aos, y su
utilizacin no implica mucho capital ni costos de operacin.
Como todos los tratamientos Ex-situ, cuando la contaminacin es muy profunda, el
movimiento de tierra puede implicar costos ms altos.
Las tcnicas que se asocian con bioaumentacin se caracterizan por:
Son simples en cuanto a implementacion y diseo.
Escaso requerimiento de infraestructura operativa.
Tecnica destructiva, ya que el contaminante es transformado en productos inocuos
para el ambiente.
Tiempos de tratamientos relativamente cortos comparados con otros procesos
biolgicos.
Adecuada para distintos tipos de suelos y de contaminantes.
No requiere dilucion del material a tratar con lo cual se evita el incremento de
volumen.
Adecuada para el tratamiento de suelos en zonas aridas o semiridas.
Adecuada para el tratamiento en diversos climas.
No requiere incorporacion de agua, excepto en periodos de extrema sequia.
Es posible obtener metas de limpieza bastante rigurosas.
Cualquiera que sea la tcnica, bien sea compostaje o landfarming, unos altos costos se
relacionan con la extraccin de los microorganismos nativos con propiedades
biodegradadoras y la posterior produccin de los microorganismos en suficiente cantidad
para poderse aplicar al sitio de donde fueron extraidos; as como un estudio piloto previo
a la bioremediacin a escala completa (Rben, 2002).
En cuanto al compostaje en plantas manuales (sin ser industriales), aparte de la compra y
nivelacin del terreno, las plantas manuales casi no tienen costo de inversin. Se deberan
confeccionar las tamices, comprar palas y, segn el clima, se debe construir un techo para
las pilas o lechos.
Los costos de operacin segn Rben (2002) son:
Costos de personal: 1 obrero para 3 toneladas diarias.
1 tecnico o profesional con buenos conocimientos de biologa para la supervisin del
trabajo (puede ser a la mitad del tiempo en plantas pequeas).
Costos de herramientas: palas, trinches, picas, carretillas, lampas, regadoras etc.
1 unidad por obrero y por ao.
Equipamiento personal de los obreros (uniformes, botas, guantes, masques): 2 overoles
por ao, 6 pares de guantes por ao, 1 par de botas/ao.
154

Compra de materiales: Saquillos, hilo, malla etc. Agua de riego.

Las plantas mecanizadas implican mayores costos, se deben tomar en consideracin los
costos de inversin par una o ms de las unidades siguientes:
Pre-condicionamiento:
Confeccin del tamiz tambor.
Confeccin de la banda transportadora.
Confeccin de la trituradora / molino.
Compostaje:
Cargador.
Contenedores o tnel de compostaje.
Mquina para mezcla/ revuelta.
Adems:
Tubera y motor de aireacin filtro biolgico (con tubera de aireacin y desage).
Condicionamiento del producto listo:
Tamiz tambor.
Equipo para separar materiales forneos (cicln, tamiz aireado, separador a
corriente del aire).
En el caso de compostaje o landfarming con bioaumentacin, un costo importante lo
constituye los anlisis qumicos y biolgicos asociados, los cuales requieren de equipos y
personal especializado. Estos anlisis pueden subir los costos, pero son compensados con
la rapidez (hasta aprox. 3 aos en el caso de landfarming) en que pueden ocurrir los
procesos.
Adems, hay costos de electricidad o de combustible, dependiente del tipo de la
maquinaria. Se deberan obtener cotizaciones para el consumo de energa para cada tipo
de maquina requerida. En general, se puede decir que cambia el consumo de energa
elctrica entre 10 kWh/ (tonelada de basura cruda) y 50 kWh / (tonelada de basura
cruda). Se obtiene el valor bajo si se utiliza solamente un tamiz tambor con banda
transportadora para el pre-condicionamiento, y un tamiz aireado para la separacin de los
materiales forneos del producto listo. Si se intenta hacer una planta sofisticada con
aireacin, filtro biolgico y mquina de mezcla/ revuelta, y por supuesto, precondicionamiento y condicionamiento del producto, el consumo de energa sube hacia los
50 kWh/ (t de basura cruda) (Rben, 2002).
Los costos de repuestos y de mantenimiento se pueden estimar entre 5 - 10 % de los
costos de inversin.
Los costos proyectados segn la Agencia de proteccin ambiental de Estados Unidos (EPA)
no difieren mucho de las anteriores observaciones, pero dan valores cuantitativos, e
indican que para el caso del landfarming los costos van de 150 dlares por metro cbico
155

de suelo contaminado (EPA, 1994a), y en el caso de compostas el valor va de 150 a 220

dlares (EPA, 1994b), lo cual indica que los dos tratamientos, al adicionarle el
procedimiento de bioaumentacin pueden incrementarse hasta en un 50% y an as
siguen siendo econmicos en comparacin con los tratamientos qumicos y fsicos
(Villaseor Roa, 2011).
156


En los tratamientos por bioaumentacin es importante tener parmetros de seguimiento
tanto de los microorganismos incorporados, de las densidades de organismos presentes y
activos en el sustrato, de las caractersticas fsico-qumicas del sustrato (suelos o aguas) y
de las concentraciones y tipos de contaminantes presentes en cada etapa del proceso.
En el caso de las pilas de compost, estas se deben estar aireando permanentemente bien
sea por volteo o de forma mecnica, en cualquiera de los casos es necesario evaluar la
cantidad de oxgeno disponible. El pH puede ser un factor crtico para que se desarrollen
los procesos en cualquiera de las etapas que se est realizando ya que el sustrato debe
conservarse cerca a la neutralidad (EPA, 1994b), esta valoracin se tiene que realizar al
menos con una frecuencia semanal.
Debido a que si se desea realizar bioremediacin, los suelos contaminados han de ser
agregados a la pila de compost, as como los microorganismos controladores, es necesario
un monitoreo permanente de las poblaciones de microorganismos mesfilos, termfilos,
aerobios y anaerobios, ya que pueden fcilmente competir por los sustratos y hacer el
proceso de degradacin menos eficiente, en este sentido el tratamiento de composteo
demora aproximadamente 3 meses, durante los cuales se debe de realizar una valoracin
al menos quincenal de las poblaciones de microorganismos de inters.
Estas valoraciones tienen que realizarse simultneamente con una determinacin del
contenido de los contaminantes a degradar, los cuales se pueden realizar cada vez que se
realice un volteo (cuando se realiza aireacin mecnica) o quincenalmente cuando se
dispone de un sistema de aireacin (EPA, 1994b). Cuando el contaminante se agrega de
forma lquida, este lquido debe de remplazar al agua que se adiciona en el proceso
normal de compostaje y por lo tanto las valoraciones deben realizarse justo antes de la
adicin de nuevas dosis de contaminantes.
Dentro de los parmetros de seguimiento se encuentra los contenidos nutricionales, en
especial N:P:K, los cuales deben estar en proporciones definidas para que se puedan llevar
a cabo los procesos de respiracin, crecimiento y degradacin, la fuente de carbono
puede ser suplida tanto por el contaminante empleado como por la materia orgnica
agregada desde el principio (EPA, 1994b).
Cuando se realiza una valoracin siempre ha de realizarse en varios sitios de la pila (la
cantidad depende de las dimensiones de la pila), tomando muestras tanto de la parte
superficial, intermedia y profunda y en cada caso son diferentes los microorganismos a
evaluar. Parmetros como temperatura, humedad, oxgeno, pH y contenido nutricional
son homogneos en cualquier parte donde se est muestreando, pero los
157

microorganismos dependen de la temperatura, la cual est directamente relacionada con

la profundidad donde se est realizando el muestreo.
La emisin de gases es un parmetro importante a evaluar si dentro de los contaminantes
a degradar se encuentran algunos que produzcan compuestos orgnicos voltiles (COVs),
esta valoracin se ha de evaluar permanentemente desde un principio, ya que de su
presencia se determinar la necesidad de una cubierta y la recoleccin de stos (EPA,
1994b). Tambin como producto de la descomposicin, los lixiviados deben ser
permanentemente evaluados en bsqueda de compuestos no degradables o
recalcitrantes, los cuales no se puede permitir que se viertan ni en cuerpos de agua ni en
los suelos.
Cuando el tratamiento se realiza por biosuspensin es supremamente importante valorar
las poblaciones de microorganismos, ya sea por nmero mas probable o UFC, dibido a que
los procesos son supremamente rpidos y los productos del proceso son recogidos para
ser tratados como aguas residuales (Torres Delgado & Zuluaga Montoya, 2009).
Muy diferente cuando se trata de tratamientos in-situ, en los cuales debido a las grandes
dimensiones de las pilas de tratamiento se hace ms difcil una evaluacin detallada de los
parmetros; en tal caso se asegura por una parte la aireacin por volteo, mientras que
parmetros como pH, humedad y poblaciones de microorganismos deben realizarse por
muestreo aleatorio.
El plan de monitoreo en el landfarming debe realizarse en dos dimensiones respecto al
sistema suelo- microorganismos-residuo:
a) Seguimiento superficial del bioproceso, es decir en el sector de suelo de los
primeros 20 a 30 cm, donde se realiza bsicamente el tratamiento biolgico del
residuo. La frecuencia de este monitoreo debe ser inmediata a la puesta en
funcionamiento de cada celda de landfarming, luego al mes, para seguir
bimensualmente. Prcticamente comprende la toma de muestras de suelo en la
capa arable.
b) Seguimiento del proceso en el perfil del suelo. Las calicatas en el muestreo
pretratamiento se realizan hasta 2 a 2,5 m de profundidad, luego de extradas las
muestras se tapan y luego cada 6 meses se realizan calicatas dentro de cada celda,
hasta una profundidad de 1 m y en un sitio prximo a la anterior, pero nunca en el
mismo lugar porque la primer excavacin altera las propiedades del perfil aunque
se sea muy cuidadoso en la reposicin del material al suelo (Mara Graciela Pozzo
Ardizzi et al., 2010).
En las condiciones de landfarming es importante valorar la densidad microbiana en el
suelo, el pH, la humedad y temperatura del suelo, la concentracin de nutrientes y la
158

textura. Dentro de los productos a bioremediar es necesario valorar la volatilidad, la

composicin qumica, toxicidad y concentracin tanto original como de productos
metablicos intermediarios. Finalmente dentro de los parmetros ambientales es
importante valorar la temperatura, precipitacin y vientos (EPA, 1994a).
En cada pas existen normas definidas para las determinaciones fisicoqumicas y
bacteriolgicas, entre ellas encontramos:
Normas ASTM D 5745 95 Standard Guide for Developing and Implementing Short
Terms.
Measures or Early Actions for Site Remediation.
Anlisis fisicoqumicos de suelos y aguas:
Gua de diseo para toma de muestras en suelos, segn Norma IRAM 29481-1;
ISO-DIS 10381-1: 1993. Soil quality.
Toma de muestras de suelos, segn Norma IRAM 29481-2; ISO-DIS 10381-2: 1993
Soil quality.
Pretratamiento de muestras para anlisis fisicoqumicos. Segn norma IRAM
29402: 1998.
Calidad del suelo; equivalente a ISO 11464: 1994.
Contenido de hidrocarburos (%) (HTP) Extraccin por Soxhlet, con tetracloruro de
carbono. (segn Mtodo EPA 418.1). Con modificaciones prxima Norma IRAM.
Cromatografa separativa fase slido-lquido (analiza por fracciones: saturados;
aromticos; resinas y asfaltenos).
Cromatografa gaseosa-espectrometra de masa (GC/MS)(analiza componentes de
cada fraccin).
pH Potenciometra. Segn Norma IRAM 29410-ISO 10390.
Conductividad elctrica. Potenciometra. Segn Norma ISO 11265: 1994.
Humedad (%). Gravimetra. Segn Norma ISO 11465: 1993.
Capacidad de retencin de agua. Segn Norma ISO-FDIS 11274: 1998.
Nitrgeno total. Segn Norma ISO 11261: 1995.
Carbono orgnico y total. Segn Norma ISO 10694: 1995.
Fsforo asimilable. Segn Norma ISO 11263: 1994.
Metales alcalinos. Espectrofotometra de Absorcin atmica (segn Standard
Methods 3113 B).
Metales Pesados. Espectrofotometra de Absorcin atmica (segn Standard
Methods 3113 B).
Anlisis microbiolgicos:
Toma de muestras, manejo y almacenamiento para ensayos con microorganismos
aerbicos, segn Norma IRAM 29481-6: 1998; ISO 10381-6: 1993.
Poblacin hetertrofa total. Recuento por NMP.
159

Poblacin hidrocarburoltica. Recuento por NMP en medio mnimo con petrleo

estril como nica fuente de carbono.
Bioensayos para establecer compatibilidad y biodegradabilidad. Segn Norma ISO
11266: 1994 (Mara Graciela Pozzo Ardizzi et al., 2010).
160

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