Hidrolisis de Las Grasas Por Accion de La Lipasa Pancreatica II

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS MANUAL DE PRACTICAS DE
BIOQUIMICA
AO DE LA INVERSIN PARA EL
DESARROLLO RURAL
Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA
UAP
ESCUELA :
CURSO
FARMACIA Y BIOQUIMICA
:
BIOQUIMICA II
DOCENTE :
CICLO
VI
ING. MILAGROS QUEZADA

:
INTEGRANTES:
BRICEO BALMACEDA ,ROSMERY
BERNAL LEON CYNTHIA PAOLA
RAMOS RIOS YOHANA
Universidad alas Peruanas-farmacia y bioqumica- ciclo VI
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BIOQUIMICA
HIDROLISIS DE LAS GRASAS POR ACCION DE LA LIPASA PANCREATICA

I.
OBJETIVOS
Determinar los meq-acido grasos liberados por
accin de la pancretica.
Observar como es que actua y que efectos trae
las sales biliares sobre el aceite.
Observar la actividad de la enzima lipasa
indirectamente por titulacin de los acidos
grasos liberados utilizando en la titulacin
usando la base de hidrxido de sodio
II.
FUNDAMENTO TEORICO
Las grasas de la dieta incluyen triglicridos,
fosfolpidos y colesterol. Los trigleceridos son una rica
fuente de caloras, y constituyen el mayor porcentaje
de las grasas incorporadas en la dieta. La digestin de
las grasas comprenden la hidrolisis de estos
triglicridos a acidos grasos libres y monogliceridos
para que puedan ser captados por las clulas. Este
proceso comienza en el estomago, mediante la lipasa
gstrica que es secretada por las clulas principales
que tambin secretan pepsina. Esta lipasa gstrica es
especialmente importante en el recin nacido para
digerir la grasa de leche.
La lipasa pancretica es esencial para la absorcin
normal de las grasas, pues en casos en que el
pncreas no funcione en mas de un 70%, la grasas no
se absorbe.
Las sales biliares tambin tienen un rol importante en
la digestin y absorcin de las grasa no se absorbe.
Las sales biliares tambin tienen un rol importante en
la digestin y absorcin de las grasas. Son
sintetizadas, a partir del colesterol, en el hgado en
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BIOQUIMICA
cantidad aproximada de 200 a 600mg. Por dia, y

excretadas en la bilis junto con los aminocidos glicina
y taurina. La mayor parte de las sales biliares
conjugadas se absorben nuevamente en el ilion, y
luego de entrar a la vena porta, estan sujetas a la
llamada circulacin enterohepatica (intestinohigado).
Por este proceso, un 90% de las sales biliares que
llegan al ileon es reabsorbidos, como consecuencia,
unos 200 a 600 mg. De sales biliares son excretadas
en la materia fecal por dia, a pesar de que sean 3 4
gr. Que pasan a travs del circulo enterohepatico
muchas veces por dia. Esto permite que pueda entrar
al duodeno ( a travs de la via biliar principal unos 20
a 30 gr. De sales biliares por dia para participar
activamente, en la digestin de los alimentos.
Si el ileon esta enfermo o se lo ha removido en una
operacin, se produce una significativa perdida de
sales biliares por materia fecal. Esto puede ocasionar
una mala absorcin de las grasas y de las vitaminas
solubles en grasas, como las vitaminas A, D y K.
Los productos de la digestin y los trigleceridos
(acidos grasos libres y monogliceridos) pueden luego
penetrar en la celula intestinal ( enterocito). All son
sintetizados nuevamente y envueltos para ser
liberados a la circulacin y distribuidos por todo el
organismo.
III.
MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
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BIOQUIMICA
Aceite neutralizado
Fenoltaleina
NaOH
Buffer fosfato 0.1 mol/L
Sales biliares 1% en buffer fosfato
0.1 mol/L pH =8
Pncreas 1% en buffer fosfato 0.1
mol/ pH= 8
Pipetas
VI. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

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BIOQUIMICA
1. Primero cogemos tres recipientes, de los cuales agregamos cada

muestra de aceite, bilis y el pncreas.
Aceite
Extraemos 1ml de
aceite
Agregamos buffer
0.1mol/L
2. Cogemos un recipiente y colocamos a la bilis
Bilis
Extraemos 1ml de
sales biliares
Aadimos 0.1mol/L de
buffer
3. En este caso trabajaremos con las pncreas, la cual ser extrada

una cierta cantidad para experimentacin.
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BIOQUIMICA
pancreas
Extraemos 1ml de pncreas,

luego colocamos en otro
recipiente la cual aadimos
buffer fosfato 0.1 mol/L
4. para cada muestra de pncreas, sales biliares y aceite. se va a

medir el pH.
MUESTRA DE PANCREAS
Antes de medir cada muestra,

se tiene que calibrar el
pechimetro, para cada muestra
En esta imagen podemos
observar que estamos
agregando NaOH a la
muestra de pncreas para
suber el pH, y asi llegar
hasta pH=8
Agregamos poco a
poco NaOH a la
muestra de pncreas,
empez a aumentar el
pH, luego logramos
nuestro objetivo pH=
8
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BIOQUIMICA
MUESTRA
DE ACEITE
Observamos la
muestra de aceite,
medimos su pH, la
fue el inicio 7.12,
como no llego a
pH=8 tuvimos que
aadir unas cuantas
gotas de NaOH para
alcanzar el pH=8
Se agrega NaOH que es una base, solo se

aade a la muestra en caso que no llegue a
pH=8
Por ultimo habamos

agregado 3 gotas de
NaOH a la muestra de
aceite y nos dio como
resultado
aproximadamente
de
pH=8.12
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BIOQUIMICA
Muestra de
aceite
MUESTRA DE SALES
La muestra de la sales
biliares tubo pH=7.97 inical
la cual no llego al pH=8
BILIARES
Por esta razn habamos aadido

NaOH como resultado se obtuvo
aproximadamente pH=8.03
5. En este procedimiento utilizaremos 4 tubos de ensayo para las

siguientes muestras pncreas, sales biliares y aceite.
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BIOQUIMICA
Tubo N1
Agremos aceite neutralizado 1ml +

2ml de agua destilada + 5ml de
panceatina
Aadimos 2ml de
sales biliares en
buffer
TUBO N2
Extraemos 1ml de aceite

neutralizado + 5ml de
pancreatina
Muestra de aceite
neutralizado
Aadimos 2ml de buffer fosfato 0.1mol/L
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BIOQUIMICA
Tambin vamos agregar

2ml de agua destilada
Despus agregamos 5ml

de pancreatina
TUBO N B1
En el tubo N B1 aadimos lo
siguiente:
3ml de agua
Universidad
alas Peruanas-farmacia
y bioqumica- ciclo VI
destilada
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BIOQUIMICA
2ml Sales biliares en

buffer
Aadimos 5ml de
pancreatina
Una vez que agregamos cada

solucin, al tubo B2 empezamos
agitar
TUBO NB2
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BIOQUIMICA
En el tubo N B2 aadimos
2ml buffer fosfato 0.1mol/L
tubo N B2 agregamos 3ml

de agua destilada
Agitamos la
muestra para
que se pueda
disolver bien
5ml de pancreatina
IV.
PROCEDIMIENTO EXPERIEMNTAL
Preparar tubos de ensayo segn como se indica en la
siguiente tabla.
MUESTRAS
Aceite neutralizado (ml) 1
tubos
B1
2
B2
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BIOQUIMICA
1
Buffer fosfato 0.1 mol/L

pH8(ml)
Sales biliares en buffer

(ml)
Agua destilada (ml)
Pancreas (ml)
2
5
3
5
2
5
3
5
Homogenizer y dejar incubar por 1 hora a 37C

(bao maria)
Agregar 3 gotas de fenoltaleina y homogenizar
Luego titular con NaOH 0.05N (empezar con los
tubos blancos), hasta una coloracin rosa,
anotarel gasto en ml.
RESULTADOS
Restar los blancos de sus respectivos tubos 1y 2, para
obtener el gasto de cada sistema.
G1=
GB1=
G1-GB1=
G2=
GB2=
G2-GB2=
Calcular los miliequivalentes de cada sistema.
Meq-cido graso= Vol. NaOH X(NaOH)
Meq-cido graso 1 = (G1-GB1)x 0.05 =0.195
Meq-cido graso 2 = (G1-GB1)x 0.05 =0.041
En la parte de la titulacin con NaOH sealaremos el
gasto del mismo en el siguiente cuadro:
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BIOQUIMICA
Volumen de NaOH gastados
tubos
B1
2
B2
Realice un cuadro de comparacin con las

otras mesas
Mesa
1
2
3
VI.
Eq
Eq
CUESTIONARIO
1. CUAL ES LA ACCION DE LAS SALES BILIARES EN EL
SISTEMA DE REACCION?
2. Por qu SE USO BUFFER FOSFATO 0.1M A PH8 EN

EL SISTEMA?
Por qu es una solucin capaz de resistir cambios en el pH.
Consiste de una mezcla de cidos y bases conjugados. Al
mezclarlos, se transforman en otra solucin que gana y
pierde protones. Los sistemas buffer son utilizados cuando
existe la necesidad de mantener el pH de una solucin a un
nivel constante
El sistema buffer de fosfato consiste en iones de fosfato de
dihidrgeno (H2PO4), el cual dona los iones de hidrgeno, y los
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BIOQUIMICA
iones de fosfato de hidrgeno (HPO42) los aceptan. Ambos
iones estn en equilibrio el uno con el otro.. Cuando el fluido
celular llega a ser ms cido, HPO43 reacciona con iones extra
de hidrgeno para formar H2PO4 y el equilibrio se instala en la
izquierda. Cuando el fluido celular llega a ser alcalino, los iones
de hidrxido reaccionan con H2PO4 para formar HPO42 y el
equilibrio pasa a la derecha.
3. PARA QUE SE USARON LOS TUBOS BLANCOS EN LA

PRACTICA?
4. EXPLIQUE EL PROCESO DE DIGESTION Y ABSORCION

DE LOS LIPIDOS.
El consumo diario de lpidos es de unos 60-100 g. En su mayor parte son triglicridos y slo una
pequea porcin se encuentra en forma de lecitinas, steres de colesterol o vitaminas liposolubles.
Emulsificacin, digestin e incorporacin a las micelas
La solubilizacin slo es posible por incorporacin a las micelas de la bilis. Cuando la bilis se
mezcla con las gotitas de lpidos en el intestino, los lpidos se absorben en las micelas y as se
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BIOQUIMICA
mantienen estables pasando de formar parte de gotas cuyo dimetro era de 0,5 a 1 , a micelas
cuyo dimetro es de 4 a 6 nm (aproximadamente 1.000 veces ms pequeas).
La digestin de los lpidos se lleva a cabo a nivel de intestino delgado gracias a la presencia de las
enzimas lipolticas del pncreas. La lipasa pancretica, es la ms importante, desdobla los
triglicridos en monogliceridos y cidos grasos; tambin parece existir una lipasa gstrica, capaz
de digerir triglicridos de cadena corta, pero su actividad es muy reducida. La fosfolipasa disocia
las lecitinas en lisolecitinas y cidos grasos. La colesterol-sterhidrolasa hidroliza el colesterol
esterificado, originando cidos grasos y colesterol libre.
Al mismo tiempo, la lipasa se absorbe tambin, mantenindose anclada a los cidos biliares
gracias a una protena, la colipasa pancretica. Entonces se produce la hidrlisis de los
triglicridos, con formacin de monoglicridos y cidos grasos, que se incorporan a las micelas ya
que los productos de la hidrlisis de los lpidos son compuestos insolubles en el medio acuoso
intestinal.
Entrada al enterocito o clula epitelial intestinal
Una vez producida la incorporacin a las micelas mixtas, los productos de la digestin de los
lpidos pueden ya ponerse en contacto con las microvellosidades y absorberse a travs de la
membrana celular por difusin. Para penetrar en el interior de los enterocitos, las molculas
lipdicas difunden primero a la zona de lquido que rodea a stos y luego penetran a travs de la
membrana epitelial. Las micelas difunden entonces en sentido retrgrado y vuelven a absorber
nuevos lpidos, que son transportados hacia las clulas de las vellosidades.
La absorcin intestinal de los lpidos es un proceso muy eficaz. Ms del 95% de los mismos se
recuperan, fundamentalmente a nivel duodenal, y slo una pequea cantidad se pierde cada da a
travs de las heces.
Metabolismo celular y formacin de quilomicrones

Una vez en el interior de las clulas intestinales, los productos de la digestin de los lpidos se
unen a una protena transportadora de bajo peso molecular, la cual los lleva hasta el retculo
endoplasmtico liso. En ste tiene lugar la resntesis de triglicridos, la de lecitinas y la de
colesterol esterificado.
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BIOQUIMICA
Los diferentes lpidos se agrupan posteriormente y se rodean de una cubierta de betalipoprotenas
formadas en el aparato de Golgi, dando lugar a la aparicin de los quilomicrones. Su composicin
aproximada sera: 87% de triglicridos, 9% de fosfolpidos y colesterol libre, 3% colesterol
esterificado y 1% de vitaminas liposolubles y protenas.
PROCEDIMIENTO ABSORCION Y DIGESTION
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BIOQUIMICA
5. REALICE UN ESQUEMA DE LA CLASIFICACION DE

LOS LIPIDOS
VII. CONCLUSIONES
VIII. RECOMENDACIONES
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BIOQUIMICA
Mantenga la limpieza y el orden en los lugares

de trabajo.
Los reactivos deben estar siempre colocados

en el lugar que se indique.
Esta prohibido hacer experimentos no

autorizados por el profesor.
Es obligatorio el uso permanente de la bata y
gafas de seguridad dentro del laboratorio.
No toque con las manos directamente los
productos qumicos, ni los pruebe.
IX.
FUENTES DE CONSULTA
Laguna.fmedic,unam.mx/
evasquez/
/triacilglecerido.html
www.doschivos.com/display.asp?ID=576&F
soco.com.ar/Biologa/cuerpo/Ap_dig.htm
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BIOQUIMICA
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