ENZIMAS

Q.F.B. Idalia Martnez Gernimo M.G.C.

ENZIMAS
ANATOMIA
Reacciones
qumicas----interaccin
entre
transformndose en otras molculas (equilibrio).
A+B

CATALIZADORES

molculas-----

C+D

Catalizadores: Aceleran las reacciones qumicas sin alterarse al

final de estas y sin modificar el equilibrio qumico. Slo acortan el
tiempo en que se alcanza el equilibrio. Orgnicos (enzimas) e
inorgnicos (iones H+, OH- y metales).

ENZIMAS
ANATOMIA

ENZIMAS
ANATOMIA

Molculas pequeas, orgnicas (coenzimas) e inorgnicas

(cofactor), que requiere la enzima para su actividad. Se llama
coenzima si la unin con la apoenzima es dbil y se separa con
facilidad. Se llama grupo prosttico si est firmemente unida a
la apoenzima

ENZIMAS
ANATOMIA

ENZIMAS
ANATOMIA

ENZIMAS
ANATOMIA

Mayora de las coenzimas -----formas modificadas de

vitaminas. Ejemplo: vitaminas del complejo B ----Nicotinamida,
riboflavina, tiamina, cido pantotnico, cido flico y
cianocobalamina.
Derivados de nicotinamida---NAD+ (nicotinamida-adeninadinucletido),
NADP+
(nicotinamida-adenina-dinucletidofosfato).

ENZIMAS
ANATOMIA

No todos los cofactores son vitaminas ni todas las vitaminas

cofactores enzimticos.

Sustr
ato
oxida
do

ENZIMAS
ALOSTRICAS
ANATOMIA

Dependen de un metabolito para autoregularse.

ENZIMAS
ALOSTRICAS
ANATOMIA

Inhibidores Bajan el ritmo de catlisis por la enzima.

Activadores Aumentan los ritmos de reaccin.

ENZIMAS
ANATOMIA
Se puede cuantificar en suero aadiendo el sustrato especfico.
CMO ACTUN LAS ENZIMAS?
1)
Aumentan la velocidad de la reaccin qumica, sin
modificar el resultado.
2)
No modifican la energa ni de los reactivos ni de los
productos----s disminuyen la energa de activacin.

CINTICA
ENZIMTICA
ANATOMIA
La enzima es especfica al sustrato y al efecto. En una Rx.
Enzimtica cuando est saturado la cantidad de sustrato, la
velocidad de rx. Se mantiene constante.

Ya saturada aunque se la concentracin de sustrato NO

aumenta la velocidad de reaccin.

CINTICA
ENZIMTICA
ANATOMIA
Las enzimas son especficas, cada una cataliza una determinada
reaccin.
Una enzima puede unir dos sustratos en su sitio activo.

VELOCIDAD
ENZIMTICA
ANATOMIA
LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN ENZIMTICA ES
SIEMPRE LA MISMA?
No, depende de muchos factores, entre ellos:

Concentracin del sustrato

Temperatura
pH

VELOCIDAD
ENZIMTICA
ANATOMIA

Proceso saturante:

Nmero de sitios de la enzima que pueden ser ocupados por la

enzima ocupados-------Aunque se aumente [S]--------Velocidad
permanece constante.
Temperatura
Cada enzima tiene una temperatura ptima en la cual su
velocidad es mxima. Enzima a temperaturas bajas muestran un
aumento de su actividad al incrementar la temperatura.
Altas temperaturas-----Sufren desnaturalizacin trmica ----Velocidad de reaccin disminuye.

VELOCIDAD
ENZIMTICA
ANATOMIA

Temperatura ptima de la mayora de las enzimas

entre 30 y 37C

Por cada 10C de aumento de temperatura

la velocidad enzimtica se duplica.

pH
ANATOMIA

Las enzimas tienen un pH ptimo en el cual la actividad

enzimtica es la mxima.
Protenas------Enzimas------Punto isoelctrico-carga elctrica es
cero-----No es el pH de mxima velocidad de la enzima----Cambios de pH afectan el carcter inico de los grupos
funcionales de la enzima----Alteran la conformacin de la
protena y con ello el sitio cataltico.
Adems valores altos o bajos de pH----------Desnaturalizacin
de la enzima.

pH ptimo de la mayora de las enzimas entre 5 y 9

DESNATURALIZACIN
ANATOMIA

Prdida de las estructuras de orden superior (secundaria,

terciaria y cuaternaria), quedando la cadena polipeptdica
reducida a un polmero sin ninguna estructura tridimensional fija.

Desnaturalizacin------destruccin permanente de la molcula.

Agentes desnaturalizantes:
1)
Fsicos (calor)
2)
Qumicos (detergentes, disolventes, orgnicos, pH, fuerza
inica).

CONSTANTE
DE MICHAELIS-METEN
ANATOMIA
Concentracin de sustrato (mol/L) que determina una velocidad
de reaccin igual a la mitad de la mxima posible.
El valor de KM (Constante de Michaelis) se expresa en moles/L,
resulta de las constantes de velocidad:

CONSTANTE
DE MICHAELIS-METEN
ANATOMIA
1. Constante de equilibrio de disociacin del complejo ES (en
condiciones de equilibrio rpido).
2. Medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato
(en condiciones de equilibrio rpido).
3. Mide la funcin de fijacin (en condiciones de equilibrio
rpido).
4. Concentracin de sustrato para la que la velocidad se hace
igual a la mitad de la mxima (s0.5).
5. Se define para una pareja enzima-sustrato.
6. Se mide en unidades de concentracin.

CONSTANTE
DE MICHAELIS-METEN
ANATOMIA
1. Velocidad asinttica para S.
2. Directamente proporcional a la concentracin de enzima (hoy
se prefiere caracterizar a la enzima por k+2).
3. Mide funcin de transformacin cataltica.
4. Se expresa en unidades de velocidad.

INHIBIDORES
ENZIMTICOS
ANATOMIA
1Un inhibidor enzimtico es cualquier agente qumico capaz de
disminuir la velocidad de la reaccin sin desnaturalizar la
enzima.
Tienen la capacidad de unirse a enzimas ----- impiden la
combinacin E-S.
Existen 2 tipos de acuerdo con su interaccin:
1)
con centro activo (isostricos) o
2)
especficos (alostricos)---Ejercen su accin sobre otra
parte de la molcula causando un cambio conformacional con
repercusin negativa en la actividad de la enzima.

INHIBIDORES
ENZIMTICOS
ANATOMIA

INHIBIDORES
ENZIMTICOS
ANATOMIA
Regulacin por modificacin covalente
Procesos a nivel supracelular (orgnico); regulacin a gran
escala de actividades enzimticas, a travs de modificacin
covalente de enzimas, provocadas por seales (transduccin de
seales).

INHIBIDORES
ENZIMTICOS
ANATOMIA
En la clula no hay acmulo de productos, este mismo se
convierte en sustrato-----Va metablica----Mecanismo
irreversibles-----flujo unidireccional de metabolitos.
Regulacin de una va metablica-----Enzimas limitantes.

Regulacin alostrica
Procesos a nivel celular; regulacin de ajuste fino de la
actividad enzimtica, a travs de efectos de retroalimentacin
(negativa o positiva) por molculas que producen un cambio en
la
actividad
enzimtica----se
denominan
efectores,
modificadores o moduladores.

INHIBIDORES
ENZIMTICOS
ANATOMIA

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
INHIBICIN REVERSIBLE
a)
Inhibicin competitiva
Molcula parecida estructuralmente al sustrato que se une al
sitio cataltico pero no se transforma. Forma un complejo
reversible con la enzima (EI)----compite continuamente con el
sustrato por el sitio cataltico.

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
Caractersticas:
- Las fijaciones de sustrato e inhibidor son mutuamente exclusivas
- A muy altas concentraciones de sustrato desaparece la inhibicin
- Por lo general, el inhibidor competitivo es un anlogo qumico del
sustrato.
- El inhibidor es tan especfico como el sustrato
Intensidad de la inhibicin depende de:
1)
2)
3)

Concentracin del inhibidor.

Concentracin del sustrato.
Afinidades relativas (KM) entre inhibidor y sustrato por la enzima.

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
B) Inhibicin no competitiva
El inhibidor se fija a la enzima independientemente de que lo haga o no al
sustrato; el inhibidor, por tanto, no impide la fijacin del sustrato a la enzima,
pero si impide la accin cataltica.

El inhibidor se fija indistintamente a la enzima libre E y al complejo enzimasustrato ES; ni el complejo EI ni el complejo ESI son productivos

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
La inhibicin slo depende de:
Concentracin del sustrato
Afinidad del inhibidor por la enzima
Complejo E-I puede o no ocurrir en el sitio activo de la enzima.

Inhibidor no competitivo puede ser una molcula que no se

une en el sitio activo, sino cerca de el, incluyendo a grupos
de la enzima o metales.

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
c) Inhibicin anticompetitiva:
En este tipo de inhibicin el inhibidor se fija al complejo E-S una vez
formado----------Impide su accin cataltica.
La reaccin puede retrasarse pero no impedirse-------Se presenta sobre
todo cuando hay ms de un sustrato en la reaccin.
Estrictamente los productos son inhibidores especficos de la reaccin
enzimtica. En otros casos, el sustrato puede inhibir o activar su propia
reaccin.

INHIBICIN
ENZIMTICA
ANATOMIA
INHIBICIN IRREVERSIBLE
Los inhibidores irreversibles reaccionan con un grupo qumico de la enzima,
modificndola covalentemente----Son llamados tambin envenenadores.
-

Su accin no se describe por una constante de equilibrio K i, sino por

una constante de velocidad KiS---------------------E + I
E

- A diferencia de la inhibicin reversible, el efecto de los inhibidores

irreversibles depende del tiempo de actuacin del inhibidor.
- Los inhibidores irreversibles son, por lo general, altamente txicos.
Algunos inhibidores irreversibles:
1. Reactivos de grupos -SH
2. Organofosfricos
3. Ligandos de metales
4. Metales pesados

CINTICA
ENZIMTICA
ANATOMIA
ISOENZIMAS
Son diferentes protenas con la misma actividad enzimtica----se
originan en diferentes tejidos-----desplazamiento electrofortico
diferente-----diferente composicin de aminocidos (gentico).
Ejemplo: Deshidrogenasa lctica, creatinafosfocinasa, fosfatasa
alcalina.

CINTICA
ENZIMTICA
ANATOMIA
COMPLEJOS MULTIENZIMTICOS
Mltiples enzimas asociadas que participan en una reaccin de
manera secuencial.

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
1.

BASADA EN LA REACCIN CATALIZADA

Con frecuencia emplean coenzimas del tipo NAD,

NADPH, FAD, cido lipoico, CoQ como aceptores
de hidrgenos. Otros incluyen grupo hemo y
oxgeno molecular.

Muchos pasos importantes del metabolismo

requieren la transferencia de una molcula a otra
de grupo amino, carboxilo, carbonilo, metilo,
cido, glucosilo o fosforilo.
Coenzimas: tetrahidrofolato (FH4), coenzima A
(CoA-SH) y fosfato de piridoxal (PPal).
Ejemplos: grupo amino de aminocidos a
cetocidos (transaminasas), fosfato de ATP a
grupos aceptores (glucocinasa)-

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
Se pueden considerar una especie de transferasas
en las que el grupo donador se transfiere al agua.
Ejemplo: peptidasas que destruyen enlace
peptdico (pepsina, tripsina, quimiotripsina);
esterasas
(lipasa,
colinesterasa,
colesterol
esterasa); fosfatasas (glucosa 6 fosfatasa,
fosfatasa cida y alcalina).

Agregan o quitan grupos qumicos, formando

dobles ligaduras, catalizan el rompimiento no
hidroltico entre C-C, C-S, C-N, C-O y C-H.
Ejemplo:
Descarboxilasas,
(aldolasa, fumarasa).

aldehdo

liasas

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
Catalizan la interconversin de todo tipo de
ismeros pticos, geomtricos, de posicin y
reacciones de xido reduccin intramolecular.
Ejemplos: Racemasas, epimerasas y mutasas.

Catalizan la formacin de enlaces entre C-C, C-O,

C-N, C-S a expensas de un grupo fosfato de alta
energa de ATP.
El trmino sintetasas se reserva para este grupo
de enzimas.
Ejemplos: Piruvato carboxilasa, acetil CoA
sintetasa.

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
SEGN LA FISIOLOGA ENZIMTICA:
1.

Enzimas plasmaespecficas Papel fisiolgico en el plasma (enzimas de la

coagulacin, LPL, pseudocolinesterasa).

2. Enzimas no plasmaespecficas Sin papel fisiolgico en el plasma (CK, ALT,

Fac, amilasa, etc).

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
SEGN CRITERIO DE SCHMIDT:
1.

Enzimas de secrecin Aquellas que son vertidas a lquidos orgnicos.

Enzimas de la coagulacin, enzimas digestivas.

2. Enzimas celularesSlo se pueden encontrar en el citoplasma, intracelulares,

enzimas de la membrana celular o los organelos intracelulares; LDH, AST, ALT,
Falk, hexoquinasa, glucoquinasa, piruvato quinasa.
3. Enzimas patognomnicas Son enzimas que indican o se presentan en una
enfermedad especfica. Aumento de la liberacin por el tejido, aumento en la
cantidad disponible para liberacin o disminucin en su eliminacin. Tambien
pueden disminuir.
Enzimas de enfermedad neoplsica, aproximada a la masa total del tumor.
Depende del contenido enzimtico normal en el tejido afectado y extensin o
tipo de necrosis.

CLASES
DE ENZIMAS
ANATOMIA
Colestasis Colinesterasa.
Cardiacas AST, LDH, CK, CK-MB
Pancreticas Tripsina, amilasa, lipasa
Hepticas ALT, AST, Falk, GGT
Atrofia de mucosa gstrica Pepsingeno
Infarto cerebral: CK, CK-BB
4. Enzimas organoespecficas Enzimas especficas de
determinados rganos tejidos que actan en procesos
metablicos, enzimas del ciclo de la urea, glucosa 6 fosfatasa,
5ND.
5. Enzimas ubicuas Diferentes localizaciones, isoenzimas de
implicacin clnica: LDH, CK, Falk, determinacin por mtodos
fsicos, inmunolgicos y estructurales.

UNIDAD
DE ACTIVIDAD ENZIMTICA
ANATOMIA
UNIDAD DE ENZIMA
Cantidad que cataliza la transformacin de 1 micromol de
sustrato por minuto, en condiciones optimas y a una temperatura
definida
(25C)
mU/mL,
U/mL,
U/mL
o
mU/mLgeneralmente se expresa como U/L.

MEDICIONES
ENZIMTICAS
ANATOMIA
UNIDAD DE ENZIMA
Cantidad que cataliza la transformacin de 1 micromol de
sustrato por minuto, en condiciones optimas y a una temperatura
definida
(25C)
mU/mL,
U/mL,
U/mL
o
mU/mLgeneralmente se expresa como U/L.

MEDICIONES
ENZIMTICAS
ANATOMIA
CONDICIONES PARA MEDIR ENZIMAS
Se debe medir la enzima en condiciones optimas de:

pH
Temperatura
Presencia de cofactores
Se utiliza en concentraciones de saturacin de sustrato
Se mide la aparicin de productos o la desaparicin de
reactivos

MEDICIONES
ENZIMTICAS
ANATOMIA
Recomendaciones:
1.
2.
3.
4.
5.

Pertenecer a cintica de orden cero

Estudio de proporcin a incremento de muestra.
Empleo de suero congelado
Material liofilizado
Repetir para valorar prueba.