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BIOQUIMICA
GENERAL
III CICLO
GUIA DE PRACTICA N 1
I. Objetivo:
Para realizar una puncin elegimos una de las venas que tenemos en el
antebrazo, la ms visible, o palpable (entre la baslica, ceflica o medial
cubital). La puncin puede ser a lo largo de todo el brazo, aunque es
recomendable que se haga en la zona de la fosa del codo. Pero no se
debe de llevar a cabo la puncin si la zona tiene algn tipo de herida ya
sean cortes, quemaduras, etc. Para llevar a cabo la puncin se debe de
llevar puesta la chaqueta de trabajo y guantes para evitar mancharse o
infectar la zona. Tambin se debe de tener todo el material preparado
para evitar por ejemplo tener la aguja incrustada y evitar la falta de
algodn.
IV. Procedimiento:
a) Pedir al paciente que se siente con el brazo elegido apoyado sobre la mesa.
b) Utilizar el algodn para limpiar la zona con alcohol.
c) Rotular el material.
d) Preparar la aguja.
e) Realizar la puncin con pulso seguro en unos 45 en relacin al brazo.
f) Extraer la sangre hasta llenar dos terceras partes del tubo.
g) Retirar el torniquete
h) Situar un algodn encima de la punta de la aguja y retirar la aguja
rpidamente del brazo.
V. Cuestionario:
GUIA DE PRCTICA N 2.
I. Objetivo:
Determinar la presencia de proteinas y su importancia dentro de los
organismos vivos y su mecanismo de accin a nivel molecular.
II. Fundamento terico:
III. Material:
1. Un analizador espectrofotmetro
2. Cubetas de 1 cm de paso de luz, capaz de transmitir 540 y 630 nm
3. Tubos de ensayo del tamao adecuado
4. Pipetas del volmenes adecuados
5. Suero fisiolgico NaCl 0,9g%
6. Un cronmetro
7. Material biolgico: huevos de gallina, codorniz, pato, pavo, etc.,
IV. Procedimiento:
3. Realice una dilucin 1/20 de la clara del huevo usando como diluyente la
solucin NaCl 0,9g% o solucin fisiolgica., mezcle por inversin hasta su total
homogeneidad.
4. En su mesa de trabajo encontrar suero humano diludo 1/10
5. Desarrolle los protocolos para la determinacin de protenas totales y
albmina.
REACTIVO
Estndar
Blanc
Estnda
MP clara
MP
suero
--- --
0.2ml
------
-------
g/dL
------
------
0.2ml
------
------
-------
0.2m
Suero
-------
1ml
diluido
(mL)
Reactivo biuret
1ml
1ml
l
1ml
BLANCO
ESTANDAR
MP CLARA
MP SUERO
ESTANDAR..g/DL
---
0.2ML
---
---
CLARA DILUIDA(mL)
---
---
0,2
---
---
---
0,2
V. Cuestionario:
GUIA DE PRCTICA N 3
I. Objetivo:
Investigar la cintica enzimtica de una hidrolasa mediante el modelo de
Michaelis-Menten, para evaluar sus parmetros cinticos y contrastar
con los establecidos en la literatura.
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11
12
Matraces Erlenmeyer 50 mL
Pipetas graduadas de 1, 10 y 5 mL,
Pipeteros.
Vasos de precipitado 500 mL.
Bureta 25 mL.
Pinzas para bureta.
Soporte universal.
Piseta.
Bao de temperatura controlada.
Urea 0.01 M.
Solucin de ureasa (2.5 mg/mL).
CuCl 2 2%.
HCl 0.01M.
Solucin de fenolftalena 1%.
IV. Procedimiento:
1) Preparar una serie de matraces de acuerdo a lo establecido en la
siguiente tabla:
MATRAZ
UREA 0.01M
AGUA
ml
ml
24
19
10
14
12,5
11.5
15
17.5
6.5
20
22.5
1.5
24
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V. Cuestionario
a) Velocidad de reaccin enzimtica en mEq de NH3/minuto.
b) Grfica de Michaelis-Menten.
c) Grfica de Lineweaver-Burk.
d) Valores de Km y Vmax de la enzima.
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GUIA DE PRACTICA N 4
I. Objetivo:
Verificar la actividad de la amilasa sobre el almidn a travs de su
producto de hidrlisis.
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Materiales
Tubos de ensayo.
Bao mara.
Gradilla.
Pipetas de 1 ml.
Dos pipetas de 5 ml
Dos pipetas de 10 ml
Tres pipeta pasteur.
1 pinzas para tubo.
Solucin de lugol.
Solucin de almidn
IV. Procedimiento
V. Cuestionario
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GUIA DE PRACTICA N 5
I. Objetivo:
El alumno determinar la concentracin de glucosa total en suero
humano.
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IV. Reactivos:
Composicin del Reactivo Enzimtico:
V. Materiales
VI. Procedimiento:
2) Alicuotacin:
Centrifugar la muestra a 3500rpm x 5 minutos, luego de haber
coagulado la muestra sangunea 15 minutos a 37C.
3) Colorimetra:
Unidades
Blanco
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.01
Calibrador
ml
0.01
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
Factor=Concentracin Calibrador/Abs.calibrador
VII. Cuestionario
GUIA DE PRACTICA N 6
RECONOCIMIENTO DE LPIDOS
.
I.- Objetivo:
b) Tincin:
Los lpidos se colorean selectivamente de rojo - anaranjado con el colorante
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Sudn III. El Sudn III es un tinte diazo de tipo lisocromo. Se usa al 0.15%, en
alcohol etlico.
c) Solubilidad:
Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se
dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso,
que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas
de grasa en una capa que, por superior densidad, se sita sobre el agua. Por el
contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter,
cloroformo, acetona, benceno, etc.
III. Materiales y Reactivos
3.1 Materiales
Tinta china roja.
Aceite de oliva.
3.2 Material de vidrio
Tubos de ensayo.
Gradilla.
Varillas de vidrio.
Mechero.
Cocina elctrica.
Rejilla de asbesto por cocina.
Vasos de precipitado de 150 250 ml.
Pipetas.
3.3 Reactivos
Solucin de NaOH al 20%.
Solucin de Sudn III.
Eter.
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Cloroformo.
Acetona
IV. Procedimiento
a) Saponificacin:
1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%.
2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
3. Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior
clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada,
otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de
aceite inalterado.
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b) Tincin:
1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de
aceite.
2. Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III.
3. Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que
aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el
aceite no estar teido.
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c) Solubilidad.
1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
2. Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente
orgnico.
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y,
en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad.
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V. Cuestionario
1. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?
2. Cul es el fundamento terico del sudan III, a lo que se refiere a la tincin
de grasas?
3. Explique el principio de entropa y su relacin con la insolubilidad de las
grasas en el agua.
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GUIA DE PRCTICA N 7
DETERMINACIN DE COLESTEROL
I. Objetivo:
El alumno determinar la concentracin de colesterol total en suero humano.
IV. Reactivos:
V. Materiales
VI. Procedimiento
2) Alicuotacin:
Centrifugar la muestra a 3500rpm x 5 minutos, luego de haber
coagulado la muestra sangunea 15 minutos a 37C.
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3) Colorimetra
Unidades
Blanco
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.01
Calibrador
ml
0.01
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
Factor=Concentracin Calibrador/Abs.calibrador
Colesterol (mg/dl) = Factor x Abs. Muestra
VII. Cuestionario
a) Indique la importancia del pH en la medicin de colesterol en suero?
b) Cules son los interferentes pre-analticos que deben de ser tomados en
cuenta en la medicin de colesterol?
c) Cules son los valores de referencia del colesterol?
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GUIA DE PRCTICA N 8
I. Objetivo:
Suero humano.
Espectrofotmetro.
Bao Mara.
Micropipeta 10 uL / 1000 uL.
Tubo de vidrio 12x75
Tips
Gradilla
V. Procedimiento
2) Alicuotacin:
Centrifugar la muestra a 3500rpm x 5 minutos, luego de haber
coagulado la muestra sangunea 15 minutos a 37C.
3) Precipitacin:
Agregar en un tubo de centrfuga 0,5 ml de reactivo precipitante y 0,05
ml. de muestra, mezclar y esperar 10 minutos a temperatura ambiente
(15 a 25C.). Centrifugar 15 minutos a 3500 r.p.m. Extraer el
sobrenadante dentro de los 10 minutos posteriores a la precipitacin.
4) Colorimetra:
Unidades
Blanco
31
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.01
Calibrador
ml
0.01
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
VI. Cuestionario
a) Cules son los inconvenientes, que encontr en la prctica, que dificultan la
correcta valorizacin del colesterol LDL?
b) Mencione 3 mtodos que determinan la concentracin de colesterol LDL.
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GUIA DE PRCTICA N 9
I. Objetivo:
Bao Mara
Termmetro
Tubos de Ensayo
Pinza de madera
Vasos de precipitacin 250 ml
Embudo
NaCl 0,15 M
Acetona
Casena
4. Procedimiento:
Diluir 1:4 cada muestra con solucin de cloruro de sodio 0,15M, tenerlas
a temperatura ambiente unos minutos. Anotar sus observaciones.
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5. Cuestionario:
35
GUIA DE PRCTICA N 10
Objetivo:
Reactivo Biuret
Tubos de vidrio 12x75.
Ligadura.
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Algodn.
Alcohol 70.
10 Agujas 21 .
Esparadrapo.
Campo estril.
Reactivo de urea.
Micropipeta 200 1000ul.
Micropipeta 5 25 ul.
Bao Mara
Tips azules
Tips amarillos
Espectofotmetro
V. Procedimiento:
Unidades
Blanco
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.020
Calibrador
ml
0.020
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
Factor=Concentracin Calibrador/Abs.calibrador
Colesterol (mg/dl) = Factor x Abs. Muestra
VI. Cuestionario:
a) Indique en qu condiciones clnicas las protenas totales se encuentran
disminuidas?
b) Cules son los interferentes pre-analticos que deben de ser tomados en
cuenta en la medicin de protenas totales?
c) Cules son los valores de referencia?
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GUIA DE PRCTICA N 11
DETERMINACIN DE UREA
I. Objetivo:
Algodn.
Alcohol 70.
10 Agujas 21 .
Esparadrapo.
Campo esteril.
Reactivo de urea.
Micropipeta 200 1000ul.
Micropipeta 5 25 ul.
Bao Mara
Tips azules
Tips amarillos
Espectofotmetro
V. Procedimiento
Unidades
Blanco
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.01
Calibrador
ml
0.01
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
Reactivo 2
Mezclar e incubar 5 minutos a 37C o 10 minutos a temperatura ambiente (20 25C). Leer las absorbancias ajustando a cero el espectrofotmetro con el
40
Factor=Concentracin Calibrador/Abs.calibrador
VI. Cuestionario
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GUIA DE PRCTICA N 12
I. Objetivo:
42
V. Procedimiento
Unidades
Blanco
Calibrador
Muestra
Muestra
ml
------
0.025
Calibrador
ml
0.025
------
Reactivo
ml
1.00
1.0
1.0
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Factor=Concentracin Calibrador/Abs.calibrador
Colesterol (mg/dl) = Factor x Abs. Muestra
VI. Cuestionario
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