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MTODO PARA DETERMINAO DE CARBOIDRATOS EMPREGADO NA TRIAGEM DE

ADULTERAES EM CAF
Elis Daiane Pauli, Valderi Cristiano e Suzana Lucy Nixdorf*
Departamento de Qumica, Centro de Cincias Exatas, Universidade Estadual de Londrina, CP 6001, 86051-970 Londrina PR,
Brasil
Recebido em 7/5/10; aceito em 22/9/10; publicado na web em 7/1/11

Nota Tcnica

Quim. Nova, Vol. 34, No. 4, 689-694, 2011

METHOD FOR DETERMINATION OF CARBOHYDRATES EMPLOYED IN THE SELECTION OF ADULTERATIONS IN


COFFEE. The objective in this work was to validate a chromatography method for the determination of total carbohydrates in
soluble coffee, using a HPLC-UV-VIS with postcolumn derivatization system, in order to verify adulterant additions. The validated
method was accurate and robust. Adulteration could be observed by increasing xylose and glucose levels in samples with addition
of coffee husks and starchy products while decreasing of galactose and mannose characteristic carbohydrates presenting in high
concentration in soluble coffees produced by arabica and robusta coffee beans.
Keywords: adulterants; carbohydrates; HPLC-UV-VIS.

INTRODUO
O caf uma das bebidas mais populares consumidas no mundo1
conhecida por ser smbolo de hospitalidade, estimulante e, mais recentemente, pelos efeitos benficos sade atribudos a componentes
bioativos.2 No comrcio internacional, um dos produtos bsicos mais
valiosos, ou seja, a segunda maior commodity no mundo, permanecendo atrs somente do petrleo.3,4 O Brasil por sua vez, o maior
produtor mundial de caf, sendo responsvel por aproximadamente
30% do mercado internacional.5
O elevado valor comercial do caf o torna atrativo para aes
fraudulentas. Por fraude, considera-se a mistura, intencional ou no,
de materiais estranhos ao produto, normalmente de baixo custo, que
alteram a sua qualidade e causam danos ao consumidor, especialmente, os de ordem econmica.6 As misturas so os produtos adicionados
ao caf para fraud-lo, enquanto impurezas so substncias resultantes
do mau beneficiamento do produto, como cascas, paus, torres, que
em grandes quantidades pressupem fraude intencional.7 No caso
do Brasil os produtos mais acrescentados ao caf torrado e modo
so cascas, paus, milho, cevada, triguilho, acar mascavo e soja.6,7
De acordo com Bernal et al.8 e Garcia et al.,9 a determinao
individual de carboidratos tem importncia significativa no somente
por prover informao composicional das amostras, mas tambm,
por auxiliar na identificao de adulterantes. Nos ltimos anos tm
sido feitas diversas pesquisas relacionadas ao perfil dos carboidratos
especialmente de cafs solveis, devido enorme gama destes tipos
de produtos comercialmente disponveis, necessitando de mtodos
analticos para classific-los, monitorar a presena de componentes
diferentes do caf e definir os limites de um produto no adulterado.10
Os carboidratos podem, segundo Bernal et al.,8 ser determinados
utilizando-se cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC - High
Performance Liquid Chromatography) com combinaes apropriadas
da fase estacionria e do sistema da deteco. Pelo fato dos carboidratos no apresentarem ligaes conjugadas, no podem ser
diretamente detectados por espectroscopia no ultravioleta visvel (UV*e-mail: snixdorf@uel.br

VIS) requerendo, assim, derivatizaes capazes de gerar subprodutos


fotometricamente ativos. A aplicao do reagente (4Aminobenzoil)
hidrazida na derivatizao ps-coluna em matrizes complexas tem
como objetivos: a simplificao no preparo das amostras, no requerendo desproteinizao; o aumento da especificidade, com reduo
de interferentes; e o aumento na sensibilidade, elevando em 10 vezes
os nveis de deteco comparativamente ao ndice de refrao,11 por
produzir nions cromforos amarelos,12 detectados aps separao
em coluna catinica.
J a cromatografia de troca aninica acoplada com deteco
eletroqumica por amperometria pulsada (HPAE-PAD - High Performance Anion-Exchange Chromatography with Pulsed Amperometric
Detection) tem sido a tcnica adotada internacionalmente para anlise
de carboidratos em caf solvel, cujo mtodo normalizado o ISO
11292,13 por exigir pouco preparo da amostra, apresentar resoluo
e sensibilidade sem necessitar de derivatizaes.14
Contudo, grandes variaes nos teores dos carboidratos so
observadas de acordo com a utilizao dos diferentes sistemas instrumentais, condies de processo e analticas, a exemplo do estudo
realizado por Blanc et al.15 com caf arbica torrado empregado na
produo de caf solvel utilizando HPLC-UV-VIS ps-coluna, que
mostra teores que variam em % (m/m) de: 1,29-2,00 para glicose;
0,08-0,14 para xilose; 3,19-20,93 para galactose; 1,03-6,29 para arabinose; 5,91-19,50 para manose, dependendo das condies de tempo
de extrao - 30 a 240 min e temperatura - 150 a 190 oC. Redgwell et
al.16 encontraram a composio de monossacardeos por HPAE-PAD,
aps hidrlise com 72% H2SO4 por 3 h temperatura ambiente e 2
h a 110 C com 1 M de H2SO4, de acordo com o grau de torra leve,
mdia e escura, e o tipo de caf utilizado em %(m/m) de: glicose de
6,10-8,01; xilose de 1,10-3,65; galactose de 5,50-12,10; arabinose
de 0,74-4,29 e manose de 15,97-24,89.
Segundo descrito por Arya e Rao,10 as elevadas temperaturas
no processo de caf solvel levam hidrlise das fraes de polissacardeos, gerando elevados teores dos monossacardeos arabinose,
galactose e manose. O caf solvel puro caracterizado pelos altos
valores de galactose e manose total.17 Assim, dependendo do perfil
dos carboidratos estes podem ser separados em 2 grupos: os com

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Pauli et al.

altos teores de xilose e glicose adulterados com cascas e, os com altas


concentraes de glicose total e baixos de xilose, adulterados com
materiais constitudos de amido, carboidrato de alto peso molecular.10
Segundo Prodolliet e Hischenhuber,17 a autenticidade do caf solvel
pode ser comprovada pelos limites mximos aceitveis de xilose,
manitol e glicose total nas concentraes de 0,40; 0,30 e 2,10%,
respectivamente. Estes limites foram considerados para o estabelecimento do Cdigo de Prticas para a Indstria de Caf Solvel no
Reino Unido, que considera alm destes um teor mximo aceitvel
para a frutose livre de 0,60%. Para a Associao dos Pases Fabricantes de Caf Solvel da Comunidade Europeia (AFCASOLE),18
a autenticidade do caf solvel pode ser comprovada pelos limites
mximos aceitveis de frutose livre, xilose total e glicose total nas
concentraes de 0,60; 0,40 e 2,10%, respectivamente.
O objetivo do presente trabalho foi validar uma metodologia no
normalizada, para ser aplicada com credibilidade e de forma adequada em rotina,19,20 seguindo parmetros do INMETRO,21 empregada
para a determinao de carboidratos por HPLC-UV-VIS com reao
ps-coluna, para fins de triagem de autenticidade da qualidade de
cafs solveis, baseada no perfil e teores limites estabelecidos pela
AFCASOLE.18
PARTE EXPERIMENTAL
Preparo das amostras
A validao do mtodo foi feita utilizando uma amostra de caf
solvel comercial 100% arbica preparada seguindo os parmetros
descritos na norma ISO 11292,13 adaptada para a etapa de extrao e
hidrlise. A determinao do teor de umidade foi feita empregando
Karl Fisher.22 Para a extrao pesou-se 0,2000 0,001 g de amostra em base seca e transferiu-se para um erlenmeyer de 250 mL,
adicionou-se amostra 10,0 mL de soluo de cido clordrico 0,6
mol L-1. A amostra foi hidrolisada em autoclave por 120 min presso
de @ 1 Kgf a 121 C. A amostra resfriada temperatura ambiente foi
transferida para um balo volumtrico de 100,00 mL e completou-se
o volume com gua ultrapura Milli-Q(Millipore, MA, EUA). Pipetouse 10,00 mL de amostra, que foi neutralizada com o uso de 1,00
0,01 g de resina aninica regenerada com NaOH, filtrada em papel
faixa branca, passada em cartucho Sep-Pak C18 (Waters, Milford,
EUA) pr-condicionado com metanol e gua, e em membrana 0,22
m (GVWP 02500 Millipore, MA, EUA), descartando-se as primeiras gotas e levando ao sistema cromatogrfico para anlise. Este
foi o procedimento considerado padro utilizado para a anlise das
amostras de cafs solveis, puros e adulterados, todas de procedncia
comercial adquiridas de diferentes pases.
Padres
Os padres empregados foram procedentes da Merck (Darmstadt,
Alemanha): D(-) Manitol, D(-) Arabinose, D(+) Galactose,
D(+) Glicose, D(+) Xilose, D(+) Manose, D(-) Frutose, com
99,90; 99,90; 98,00; 99,50; 99,00; 99,50; 99,45 e 99,90% de pureza,
respectivamente. Para a quantificao dos carboidratos nas amostras,
preparou-se uma soluo padro com concentraes similares s
encontradas nas amostras de caf solvel. Os padres de carboidratos foram pesados: 0,030 0,001 g de glicose, 0,020 0,001 g de
xilose, 0,110 0,001 g de galactose, 0,040 0,001 g de arabinose e
0,060 0,001 g de manose, transferidos para um balo volumtrico
de 100,00 mL 0,50 mL e o volume foi completado com gua ultrapura. Sonicou-se a soluo por 5 min em banho ultrassnico. O
padro foi armazenado em geladeira a ~4 C. Esta soluo estoque
foi diluda para a obteno do padro analtico de 25%(v/v) o qual

Quim. Nova

foi injetado a cada dia utilizado para a quantificao. A partir dessa


soluo padro estoque foram feitas diluies para o levantamento das
curvas analticas, que possibilitaram a determinao da linearidade na
faixa dinmica de trabalho e do limite de quantificao empregados
nas anlises cromatogrficas.
Fases mveis
Adotou-se a gua ultrapura (Milli-Q) como fase mvel eluente por
apresentar a melhor resoluo cromatogrfica, filtrada em membrana
0,45 m de ster de celulose (Millipore, Billerica, MA), submetida
a vcuo e sonicao em banho ultrassnico simultaneamente para
desgaseificao por 5 min. Para o sistema ps-coluna a derivatizao
empregou como fase mvel uma mistura de duas solues, a primeira
contendo 1,250 g de (4Aminobenzoil)-hidrazida (ABH) (4-aminobenzoyl)hydrazide, C7H9N3O, 95%, Acrs Organics), em 50,0 mL,
adicionando-se 1,00 mL de cido clordrico 37% (Merck, Alemanha,
Darmstadt), dissolvendo-se em banho ultrassnico e completando-se
o volume com gua ultrapura; e a segunda com 4,80 g de hidrxido
de sdio (Merck, Alemanha, Darmstadt), em escamas, e 0,730 g de
cloreto de sdio (Merck, Alemanha, Darmstadt) em 100,0 mL de gua
ultrapura. A soluo foi dissolvida em banho ultrassnico, filtrada em
membrana 0,45 m de ster de celulose (Millipore, Billerica, MA) e
mantida resfriada at o momento de uso. Apesar do exato mecanismo
de reao baseado na elucidao da estrutura dos produtos derivados
no ter sido reportada por Lever,23 o qual props que a reao dos
carboidratos redutores com certos tipos de hidrazidas de cidos aromticos, em meio fortemente bsico, produzia a colorao amarela;
nem por Vrtn et al.,12 que otimizou sua aplicao como reagente de
deteco sem, contudo, estudar suas caractersticas espectrais e cinticas; segundo Honda,24 esta colorao atribuda devido formao
com carboidratos de espcies aninicas cromforas de hidrazonas.
Lever23 mostrou que o ABH apresentou a melhor combinao entre a
fase estacionria/fase mvel eluente gua versus reagente ps-coluna,
apresentando maior especificidade e relao sinal-rudo em 410 nm.
A utilizao do agente cromognico ABH na derivatizao ps-coluna
demonstrou ser aplicvel a todos os carboidratos redutores, de forma
mais rpida (3 min), apresentado maior sensibilidade (4,3x 10-11 mols
de sacarose), comparado a outros derivatizantes utilizados, como o
BCA (bicinconinato dissdico) que provoca distoro de picos e entupimento; o HCF (hexaferrocianato de potssio) que apresenta alto nvel
de rudo e interferentes, o TTB (azul de tetrazlio) solvel somente
em NaOH etanlico, o que causa alterao gradual da cor, provocando
aumento de linha de base, e exige altas vazes de eluente; e o CAA
(2-cianoacetamida) limitado a amostras que contenham cetoses,12 alm
de outras desvantagens, como a corroso de equipamentos utilizando
meio de cido forte para converso a furfural, seguida da condensao
com reagentes cromforos descrita por Honda.24
Sistema instrumental
O sistema instrumental utilizado consistiu em um cromatgrafo lquido de alta eficincia composto de dois frascos mbar para
armazenagem da fase mvel eluente e ps-coluna; duas bombas de
alta presso Waters 515 (Milford, MA, EUA); um injetor automtico
Waters 717 Plus; uma pr-coluna SP 1010 P (6 x 50 mm; Shodex;
NY, EUA); uma coluna de troca inica Aminex HPX-87P (7,8 x 300
mm na forma inica Pb2+, Biorad, CA, EUA); um tee misturador; um
forno termostatizado para coluna, acoplado com um controlador de
temperatura mdulo II Waters; um reator ps-coluna CRX 390 (Pickering Laboratories, Mountain View, CA, EUA) contendo uma bobina
de reao de PTFE no interior do reator de temperatura controlada;
regulador de pulso (pulse dampener) e restritor de presso de 100 psi

Mtodo para determinao de carboidratos

Vol. 34, No. 4

(back pressure) conectado na sada do detector; um detector UV-VIS


Waters 2487; e o software Empower Build 1154, para aquisio e
tratamento de dados por um microcomputador.

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deteco, limite de quantificao e robustez para as condies padro.


A Tabela 3 apresenta as Equaes das regresses lineares utilizadas na faixa dinmica de trabalho para a glicose, xilose, galactose,
arabinose e manose, demonstrando sua linearidade, com coeficientes
de correlao superiores a 0,99. Pela inclinao das retas observa-se
que o carboidrato mais sensvel entre os cinco analisados foi a glicose.
O limite de deteco calculado para a galactose foi de 0,07%
(m/m), considerando-se trs vezes a relao sinal/rudo.20 O limite de
quantificao considerando-se o ponto de concentrao mais baixo
da curva de calibrao foi de 0,13 % (m/m) para xilose.21
A faixa linear de trabalho do mtodo analtico, calculada de acordo com o INMETRO21 no intervalo entre os nveis inferior e superior
da curva de calibrao, foi dada pelos valores apresentados na Tabela
3, com o menor de 2,6 g mL-1 ou 0,13 % (m/m) para xilose e maior
de 481,2 g mL-1 ou 24,06 % (m/m) para galactose.
A preciso foi determinada pela repetitividade de 7 injees sucessivas de amostras de caf solvel comercial 100% arbica extradas
pelo procedimento padro, obtendo-se os coeficientes de variao de
4,95; 9,10; 1,94; 2,87 e 1,22% (m/m) para glicose, xilose, galactose,
arabinose e manose, respectivamente. A preciso intermediria,
calculada a partir da injeo em 9 dias diferentes de uma amostra
de caf solvel comercial 100% arbica, apresentou coeficientes
de variao de 6,43; 10,06; 4,07; 6,90 e 5,83% (m/m) para glicose,
xilose, galactose, arabinose e manose, respectivamente, inferiores a
15%, valor adotado como referncia de acordo com a Resoluo n
899, de 29/5/2003, da Anvisa.25

Parmetros analticos empregados para as anlises


cromatogrficas
A validao da metodologia no normalizada, para a anlise de carboidratos em caf solvel utilizando a tcnica HPLC-UV-VIS ps-coluna,
empregou os parmetros de extrao e anlise apresentados nas Tabelas
1 e 2 denominado de procedimento padro, pela adoo e adaptao das
condies de reao ps-coluna, descritas por Femia e Weinberger.11 e
estudos de desempenho dependentes do instrumental feitos para otimizao do ABH por Vrtn et al.,12 aplicando os princpios de Lever.23
As variaes apresentadas foram efetuadas para avaliao da robustez,
considerando os testes de aplicabilidade prtica12 e os fatores crticos
de anlise e suas potencialidades descritos na reviso de Honda,24 como
controle da vazo e da temperatura do reator ps-coluna.
RESULTADOS E DISCUSSO
Validao
A validao do mtodo foi feita considerando os parmetros
de linearidade na faixa de trabalho, seletividade, especificidade,
sensibilidade, exatido, preciso e preciso intermediria, limite de

Tabela 1. Condies e parmetros analticos empregados na extrao dos carboidratos em amostra de caf solvel comercial 100% arbica e suas respectivas variaes
Condies de extrao

Parmetros adotados
(procedimento padro)

Variaes

Concentrao de cido clordrico de hidrlise (mol L-1)

0,6

0,4 0,8

Equipamento de hidrlise

autoclave vertical

Banho-maria termosttico

Temperatura de hidrlise (C)

121

100

Tempo de hidrlise (h)

Massa da amostra em base seca

0,200 g

20% e no considerando umidade

pH final da amostra

neutralizada (pH = 7,0)

pH = 1,5 e pH = 3,5

Cartucho Sep Pak C-18(Waters)

empregado

no empregando

Tabela 2. Condies cromatogrficas adotadas para a anlise dos carboidratos em amostra de caf solvel comercial 100% arbica e suas respectivas variaes
Condies de anlise

Parmetros de anlise
(procedimento padro)

Variaes

20,0

15,0 25,0

Vazo da fase mvel eluente da coluna - gua ultrapura (Milli-Q ) Bomba 1 (mL min )

0,5

0,4 0,6

Vazo da fase mvel ps-coluna NaOH + ABH Bomba 2 (mL min-1)

0,6

0,5 0,7

Temperatura da coluna (forno) (C)

85

83 87

Temperatura do reator ps-coluna (C)

100

95 105

Volume de injeo (L)

-1

Tabela 3. Parmetros utilizados para a verificao da linearidade na faixa dinmica de trabalho, utilizados para o levantamento das curvas de calibrao feitas
a partir da mistura de padres dos cinco carboidratos injetados em triplicata
Carboidratos

Concentrao de carboidratos em % (m/m)

Glicose

0,19

0,75

0,94

1,88

3,75

5,63

Regresso

Faixa dinmica
(g mL-1)

6,56

y = 300485,67 x - 8391,58

0,9996

3,8 - 131,2

Xilose

0,13

0,50

0,63

1,25

2,50

3,75

4,38

y = 33124,06 x - 8356,88

0,9999

2,6 - 87,6

Galactose

0,69

2,75

3,44

6,88

13,75

20,63

24,06

y = 190629,97 x - 6309,10

0,9993

13,8 - 481,2

Arabinose

0,25

1,00

1,25

2,50

5,00

7,50

8,75

y = 246050,89 x + 4451,33

0,9993

5,0 - 175,0

Manose

0,38

1,50

1,88

3,75

7,50

11,25

13,13

y = 233222,94 x - 3525,05

0,9996

7,6 - 262,6

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Pauli et al.

Quim. Nova

Tabela 4. Exatido pelo procedimento de recuperao, calculada a partir das concentraes realizadas em triplicata
Carboidratos

Mdia no fortificada
(%) (m/m)

Concentrao
adicionada
(%) (m/m)

Concentrao
esperada
(%) (m/m)

Mdia fortificada
(%) (m/m)

Taxa de recuperao
(%)

Glicose

1,29

1,50

2,85

2,70

96,71

Xilose

0,29

1,00

1,33

1,30

100,71

Galactose

17,13

5,50

21,29

21,87

96,65

Arabinose

2,78

2,00

4,74

4,95

103,49

Manose

13,75

3,00

15,57

16,53

98,73

Tabela 5. Teores mdios de carboidratos encontrados pela determinao empregando HPLC-UV-VIS ps-coluna, feitas em duplicata em caf solvel comercial
puro e adulterado com misturas de derivado de amido e cascas de caf
Carboidrato
% (m/m)

Padro de
carboidratos

Caf solvel
100% arbica

Caf solvel
100% robusta

Caf solvel adulterado


com amilceos

Caf solvel adulterado


com casca de caf

Glicose

3,75

1,46

1,78

18,90

2,82

Xilose

2,50

n.d.

n.d.

0,63

6,08

Galactose

13,75

19,59

17,99

10,18

10,13

Arabinose

5,00

3,87

3,53

1,70

4,47

Manose

7,50

17,99

12,83

5,19

3,44

n.d. = no detectado

A especificidade foi avaliada pela anlise individual de cada carboidrato verificando seu tempo de reteno, os quais no apresentaram
nenhum outro pico alm do carboidrato injetado.
A exatido foi calculada pela recuperao, feita a partir da adio
dos padres amostra analisada, calculada pela Equao e apresentada na Tabela 4, permanecendo entre os limites de 70,00 a 120,00%
previstos para que um mtodo seja considerado exato.21

rec(%) =

(C1 - C2) x 100


C3

onde: rec = recuperao; C1 = concentrao determinada na amostra


com adio de padro; C2 = concentrao determinada na amostra
original sem adio de padro; C3 = concentrao adicionada.
A seletividade foi verificada pela ausncia de resposta no tempo
de reteno de cada um dos carboidratos comparando-se com o
padro analtico de 25% (v/v), permanecendo em linha de base para
a anlise da gua ultrapura e do cido clordrico 0,6 mol L-1 quando
submetidos ao procedimento padro de extrao, concluindo-se que
os reagentes utilizados para a hidrlise no interferiram na amostra.
O mtodo foi considerado robusto considerando os resultados das
variaes descritas nas Tabelas 1 e 2 para os valores de Fcalculado < Ftabelado
para o Teste F, num intervalo de confiana de 95%, das varincias entre
as matrizes de dados, seguido do Teste t presumindo varincias equivalentes para as variaes de concentrao de cido clordrico da hidrlise
( 0,2 mol L-1); massa em peso seco ( 20%(m/m)); pH final da amostra
(1,5 e 3,5); limpeza empregando cartuchos de extrao em fase slida;
vazes das bombas das fases mveis da coluna cromatogrfica ( 0,1
mL min-1) e do sistema ps-coluna ( 0,1 mL min-1); e temperatura do
forno da coluna ( 2 oC). Estes resultados concordam com os de Vrtn
et al.,12 que verificaram que as curvas para os sacardeos se mostraram
insensveis a pequenas variaes de vazo.
Houve diferena nos valores empregando equipamentos distintos,
autoclave vertical (Phoenix modelo AV18) e banho termosttico
(Fanaem modelo 146) e tempo de hidrlise (1 e 2 h). Portanto, os
teores dependem das condies de hidrlise que afetam os resultados,
o que concordou com a literatura,15,16 ressaltando a importncia de se
manter os parmetros previamete padronizados.

A temperatura de 95 oC para o reator ps-coluna foi adotada nas


condies padro, baseando-se na instabilidade da linha de base
100 oC, atribuda formao de bolhas, descrita nos estudos de otimizao feitos por Vrtn et al..12 Contudo, como o estudo avaliando a
dependncia da temperatura da reao com o cromforo revelou que
o ponto timo no foi alcanado sob a faixa testada de 80 a 100 oC,
uma vez que, o tempo de reao (40 s) foi significativamente menor
que o plat determinado pelo procedimento manual, a sugesto foi
que novos testes fossem realizados em sistema automatizado. Considerando que a reao de derivatizao ps-coluna deve ocorrer aps
a separao e antes da deteco,24 por ser automatizado, o sistema de
HPLC utilizado no trabalho atende a este requisito, permitindo que
a reao se d de forma apropriada, atravs da mistura contnua na
bobina de reao em temperatura e velocidade controladas, reduzindo
assim a disperso.12 Conhecendo-se que a reao dependente da
temperatura, com teoricamente seu ponto timo prximo ao ponto de
ebulio da soluo reativa,24 a instabilidade da linha de base devido
a bolhas e turbulncia foi minimizada pela utilizao de dispositivo
restritor na sada do detector, produzindo aumento de presso que,
associado adio do sal (NaCl), geraram elevao da temperatura
de ebulio da soluo reativa, permitindo a realizao de testes
mantendo o reator a 100 e 105 C.
Os cromatogramas da Figura 1 mostram que no houve flutuaes
de linha de base com a elevao da temperatura, porm a variao
interferiu significativamente, gerando um ganho de sinal analtico,
mostrando ser uma alternativa vivel, caso o aumento de sensibilidade
seja requerido. No entanto, em termos de robustez, exige a fixao
em determinado patamar de temperatura, com rigoroso controle.
Perfil qualitativo e anlise quantitativa de carboidratos
A Figura 2 apresenta os cromatogramas com os perfis dos monossacardeos presentes nas amostras de caf solvel comerciais: 100%
arbica; 100% robusta; adulterados com produtos base de amido
e com casca de caf, quantificados pela mistura de padres externos
a 25% (v/v) (Tabela 5).
Observando o perfil dos 2 cafs comerciais puros (Figura 2b e
2c), percebe-se que praticamente no h diferena entre eles, exceto
pela manose que apresentou um teor ligeiramente maior. possvel

Vol. 34, No. 4

Mtodo para determinao de carboidratos

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Figura 3. Sobreposio dos cromatogramas de amostras comerciais de caf


solvel 100% arbica (linha preta mais intensa); caf solvel adulterado com
derivado de amido (linha cinza claro) e caf solvel adulterado com casca
de caf (linha cinza escuro)
Figura 1. Sobreposio dos cromatogramas de uma amostra de caf solvel
comercial 100% arbica conforme procedimento padro de extrao e anlise para a temperatura do reator de 95; 100 e 105 C. Pico: (1) glicose; (2)
xilose; (3) galactose; (4) arabinose; (5) manose

0,63 e 6,08% (m/m), maiores do que 0,40% descrito pela AFCASOLE, bem como os de glicose tambm se encontraram mais elevados
com 18,90 e 2,82% em relao a 2,10% (m/m), comprovando a
adulterao por produtos derivados de amido e casca, respectivamente. Assim, o uso desta metodologia se mostra uma alternativa
vivel para fins de triagem, uma vez que o detector UV-VIS o mais
comumente encontrado nos laboratrios e de operao mais simples,
quando comparado ao eletroqumico (HPAE-PAD). Entretanto, para
as amostras consideradas adulteradas recomenda-se submeter metodologia oficialmente adotada internacionalmente normalizada pela
ISO 11292,13 para avaliao quantitativa.
CONCLUSO
A metodologia validada proposta para determinao de carboidratos totais em caf solvel empregando a HPLC-UV-VIS ps-coluna
apresentou-se linear na faixa de concentrao de trabalho, precisa,
exata, especfica e seletiva, o que garantiu resultados analticos confiveis que podem ser aplicados rotineiramente para efetuar triagem
das amostras comerciais quanto suspeita de adulterao, uma vez
que se apresentaram compatveis com a literatura, considerando os
perfis e teores limites estabelecidos pela AFCASOLE.
AGRADECIMENTOS
CAPES pelo suporte financeiro na forma de bolsa de estudos
no Programa de Ps-Graduao em Qumica.
REFERNCIAS

Figura 2. Cromatogramas com perfil de carboidratos para: (a) mistura


de padres a 25% (v/v), (b) caf solvel comercial 100% arbica, (c) caf
solvel comercial 100% robusta, (d) caf solvel comercial adulterado com
derivado de amido, (e) caf solvel comercial adulterado com casca de caf

ainda notar a ocorrncia dos elevados teores de galactose (pico 3)


e manose (pico 5), monossacardeos descritos como caractersticos
para a matriz caf. J para os produtos adulterados, observa-se uma
elevao da glicose (pico 1) quando adicionado derivado de amido,
possivelmente milho ou maltodextrina (Figura 2d), ou ainda, adio de
casca apresentado o aumento do teor de xilose (pico 2) na Figura 2e.
Uma sobreposio dos cromatogramas de caf arbica puro com
os dois adulterados foi feita na Figura 3, para mostrar a diminuio
no teor dos carboidratos galactose (pico 3) e manose (pico 5), na
medida em que ocorre reduo da proporo do caf quando so
misturadas outras matrizes, confirmando os dois grupos descritos
por Ayra e Rao,10 que geram o aumento de glicose (pico 1) e xilose
(pico 2) para casca e elevao de glicose (pico 1) para os amilceos.
Embora utilizando tcnica e metodologia distintas da literatura,
e, portanto, de difcil comparao em termos quantitativos, possvel
observar que nas amostras adulteradas os teores de xilose foram de

1. Ferraz, M. B. M.; Farah, A.; Iamanaka, B. T.; Perrone, D.; Copetti, M.


V.; Marques, V. X.; Vitali, A. A.; Taniwaki, M. H.; Food Control 2010,
21, 872.
2. Farah, A. Em Functional and Speciality Beverage Technology; Paquin,
P., ed.; Woodhead: New York, 2009, cap. 15.
3. http://www.ico.org/pt/coffee_storyp.asp, acessada em Abril 2010.
4. Nabais, J. V.; Carrott, P.; Carrott, M. M. L.; Luz, V.; Ortiz, A. L.;
Bioresour. Technol. 2008, 99, 7224.
5. http://www.abic.com.br/scafe_historia.html, acessada em Abril 2010.
6. Assad, E. D.; Sano, E. E.; Cunha, S. A. R.; Correa, T. B. S.; Pesq.
Agropec. Bras. 2002, 37, 211.
7. Santos, M. C. S.; Dissertao de Mestrado, Universidade Federal de
Lavras, Brasil, 2005.
8. Bernal, J. L.; Del Alamo, M.; Del Nozal, M. J.; J. Agric. Food Chem.
1996, 44, 507.
9. Garcia, L. M. Z. ; Pauli, E. D.; Cristiano, V.; Camara, C. A. P.;
Scarmnio, I. S.; Nixdorf, S. L.; J. Chromatogr. Sci. 2009, 47, 825.
10. Arya, M.; Rao, J. M.; CRC Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2007, 47, 51.
11. Femia, R. A.; Weinberger, R.; J. Chromatogr. 1987, 402, 127.
12. Vrtn, P.; Brinkman, U. A. T.; Frei, R. W.; Anal. Chem. 1985, 57, 224.

694

Pauli et al.

13. International Organization For Standardization; ISO 11292. Instant


coffee - Determination of free and total carbohydrate contents. Method
using high performance anion-exchange chromatography, 1995.
14. http://www.dionex.com/en-us/webdocs/61831-Bro_Carbohydrates_
Food_Beverage_29Aug2007_LPN1971.pdf, acessada em Abril 2010.
15. Blanc, M. B.; Davis, G. E.; Parchet, J. M.; Viani, R.; J. Agric. Food
Chem. 1989, 37, 926.
16. Redgwell, R. J.; Trovato, V.; Curti, D.; Fischer, M.; Carbohydr. Res.
2002, 337, 421.
17. Prodolliet, J.; Hischenhuber, C.; Z. Lebensm.-Unters. Forsch. A 1998,
207, 1.
18. Association des Fabricants de Caf Soluble des Pays de la Communaut
Europenne (AFCASOLE); Statement on Soluble Coffee Authenticity,
BD/CPD/65/95, 1995.

Quim. Nova

19. Ribani, M.; Bottoli, C. B. G.; Collins, C. H.; Jardim, I. C. S. F.; Melo,
L. F. C.; Quim. Nova 2004, 27, 771.
20. Lanas, F. M.; Validao de Mtodos Cromatogrficos de Anlise, Rima:
So Carlos, 2004.
21. Instituto Nacional de Metodologia, Normalizao e Qualidade Industrial
(INMETRO); Orientaes sobre Validao de Mtodos de Ensaios
Qumicos, Documento Orientativo: DOQ-CGCRE-008, 2007.
22. Zenebon, O.; Pascuet, N. S.; Tiglea, P.; Mtodo Fsico-Qumicos
para Anlise de Alimentos, 4 ed., Instituto Adolpho Lutz: So Paulo,
2005, cap. 4.
23. Lever, M.; Anal. Biochem. 1972, 47, 273.
24. Honda, S.; J. Chromatogr., A 1996, 720, 183.
25. Brasil, Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA); Resoluo
RE n 899, de 29/05/2003.