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1. Seleccionar un artculo
2. Seleccionar una tcnica
3. Preparar los conceptos de la tcnica seleccionada: fundamento,
aplicaciones, ventajas y desventajas
4. Proponer un ejemplo de un experimento donde utilizara la tcnica
seleccionada por qu y para qu.
Desarrollo:
1. Seleccionar un artculo:
Esta tcnica se caracteriza por tener varios ciclos (25-40 veces), de igual
manera a su vez se distingue por tener varias etapas al igual que la
PCR convencional:
1. Desnaturalizacin (95C): separa las dos hebras del DNA molde de
doble hlice.
2. Anillamiento (Menor o igual 60 C): Unin de primer a la secuencia
complementaria, Taq polimerasa extiende cada primer, provee el
grupo de su extremo 3` por la polimerizacin de dNTP`s
3. Extensin (60-72 C): Elongacin de la cadena mediante la DNA
polimerasa.
Requerimientos:
-ADN molde
-Par de cebadores o primers especficos
-dNTP`s
-Tampn de reaccin adecuado
-ADN polimerasa termoestable
En esta tcnica se emplea un molde de ADN, un par de cebadores o
primers especficos, dNTP`s, una tampn de reaccin adecuado y una
ADN polimerasa termoestable. A la anterior mezcla se le agrega una
sustancia que posee un florforo (los sensores del termociclador
excitan al flourforo para medir la generacin de los productos
especficos).A esta tcnica se le conoce como PCR en tiempo-real o
PCR cuantitativa ya que la anterior medicin se realiza luego de cada
ciclo de amplificacin (PCR inmediato o de manera simultnea).
En conclusin la PCR en tiempo real surgi para resolver el problema de
la cuantificacin de la tcnica de la PCR, es por eso que en esta tcnica
se emplean sondas marcadas con fluorocromos y sondas de hidrlisis
que son oligonucletidos que presentan flourocromos en ambos
extremos y tienen una secuencia complementaria a parte del fragmento
de ADN que se quiere amplificar. A diferencia de la PCR comn, la PCR
en tiempo real es una tcnica netamente cuantitativa.
Aplicaciones: Los principales usos son:
-Diagnstico: Enfermedades
genticas, entre otras.
infecciosas,
cncer,
anormalidades