El diagnstico molecular de enfermedades neurodegenerativas

El diagnstico molecular proporcionan un poderoso mtodo para detectar y

diagnosticar diversas enfermedades neurolgicas como el Alzheimer y la enfermedad
de Parkinson. La confirmacin de este diagnstico permite la deteccin temprana y el
asesoramiento mdico posterior que ayudan a los pacientes a someterse a las pruebas
especficas de importancia clnica de la droga. Esto proporciona una va mdica para
tener un mejor conocimiento de la neurognesis y la eventual cura de las
enfermedades neurodegenerativas. En esta breve resea, se presentan los ltimos
avances en el diagnstico molecular especialmente biomarcadores y espectroscopia de
imagen para las enfermedades neurolgicas. Se describen los avances realizados en la
enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP), la esclerosis lateral
amiotrfica (ELA) y la enfermedad de Huntington (EH), y, finalmente, presentamos una
perspectiva sobre las futuras direcciones para proporcionar un marco para futuros
desarrollos y mejoras de molecular diagnstico para combatir enfermedades
neurodegenerativas.

Introduccin
Los trastornos neurodegenerativos corresponden a los trastornos en el sistema
nervioso central que se caracterizan por la prdida progresiva de los tejidos
neuronales. Los cambios en las neuronas hacen que funcionen de manera anormal y
finalmente resultan en la desaparicin de las clulas. La razn es la incapacidad de las
neuronas de regenerarse por s solos despus de que el deterioro neuronal o dao
grave. En la actualidad, aproximadamente unos 5 millones de estadounidenses sufren
de la enfermedad de Alzheimer (EA); 1000000 de la enfermedad de Parkinson (EP);
400.000 de esclerosis mltiple (EM); 30.000 de esclerosis lateral amiotrfica (ALS), y
3.000 de la enfermedad de Huntington (HD). Se espera que la incidencia de elevarse a
medida que envejece la poblacin, debido a las enfermedades neurodegenerativas
atacan principalmente a mediados de a finales de la vida. Neuroregeneracin es un
camino viable para frenar trastornos neurodenegerative. Uno de los enfoques actuales
es terapia con clulas madre que ha demostrado ser potencialmente til en la
neuroregeneracin o incluso la sustitucin de las clulas neuronales.
Una deteccin temprana de la aparicin de la neurodegeneracin es vital ya que puede
proporcionar una oportunidad para que un tratamiento precoz que puede ser til para
prevenir la progresin de la enfermedad. Entre los diagnsticos actuales,
neuropatologa se considera como el estndar de oro. Sin embargo, generalmente se
basa en la autopsia que se realiza despus de la muerte de un paciente. Por lo tanto,
los investigadores mdicos estn en bsqueda de un mtodo de diagnstico no
invasivo eficaz que puede ser empleado para una deteccin precoz de
neurodegeneracin cuando una intervencin farmacolgica es todava posible.
Diagnstico molecular ha surgido como una poderosa tcnica que puede ser til para
una deteccin temprana de diversos trastornos neurodegenerativos. Uno de los
poderosos diagnstico molecular es la aplicacin de biomarcadores. Los biomarcadores
son bsicamente sustancias biolgicas moleculares que se utilizan para indicar la
presencia o aparicin de un determinado trastorno. Los procesos biolgicos normales y
anormales pueden ser detectados por el uso de biomarcadores. El director de la
necesidad de un buen biomarcador es su precisin y fiabilidad. Tambin debe ser capaz
de distinguir entre los sanos y los tejidos enfermos, y debe diferenciar entre diferentes
enfermedades. Los biomarcadores son considerados prometedores en ayudar en el
diagnstico precoz y el establecimiento de normas para el desarrollo de nuevas
soluciones para el tratamiento de trastornos neuronales. Los biomarcadores pueden ser
medidos utilizando tcnicas de imagen como la tomografa por emisin de positrones

(PET), resonancia magntica (MRI) y la espectroscopia de resonancia magntica

nuclear (NMRS). La Tabla 1 resume varios marcadores moleculares de diagnstico para
las enfermedades neurodegenerativas.

TABLA 1 | Un resumen dando marcadores diagnsticos genticos y

bioqumicos para el Alzheimer, el Parkinson, la esclerosis lateral
amiotrfica, y Huntington'Disease.

Entre otras diagnstico molecular desarrollados recientemente, biomarcadores junto

con la espectroscopia de resonancia magntica (MRS) ha mostrado ser prometedor. Se
trata de una tcnica de imagen cuantitativo que permite la medicin in vivo de
determinados metabolitos neuronales como biomarcadores que pueden ser utilizados
para estudiar las disfunciones metablicas y dao neuronal irreversible. El papel
potencial de MRS como un biomarcador de imagen molecular in vivo se investig para
el diagnstico precoz de la EP y el seguimiento de la eficacia de las intervenciones
teraputicas (Ciurleo et al., 2014).
La expresin alterada de microRNAs (miRNAs) en muchos estados de la enfermedad,
incluyendo la neurodegeneracin junto con las aplicaciones de miRNAs en fluidos
biolgicos en diferentes patologas en candidatos prometedores como biomarcadores
de enfermedades neurodegenerativas que pueden conducir a identificar nuevas dianas
teraputicas hacer. El papel de los miRNAs en la patognesis de la neurodegeneracin
se investig para obtener informacin sobre las posibilidades y los retos de la

utilizacin de estas pequeas molculas de ARN como una firma para enfermedades
neurodegenerativas. Se sabe que miRNAs pueden ser transportados por exosomas que
son pequeas vesculas de membrana derivadas de secretadas por muchos tipos de
clulas, incluyendo neuronas, astrocitos, oligodendrocitos, y microgla. Los exosomas
se desprenden de las clulas sanguneas estimuladas y el endotelio vascular estn
implicados en trastornos neurolgicos. Los exosomas tienen un potencial significativo
como biomarcadores para el diagnstico de enfermedades, ya que su composicin
molecular refleja los cambios fisiolgicos o fisiopatolgicos en su clula de origen.
Adems, pueden ser aislados de biofluidos tales como sangre y orina, lo que los
objetivos muy atractivo para el uso de diagnstico. Se ha informado de que los
pptidos amiloides exosomal se acumulan en las placas cerebrales de pacientes con
AD y tau fosforilada en Thr-181, un biomarcador establecido para AD, est presente en
niveles elevados en exosomas aisladas a partir de muestras de lquido cefalorraqudeo
de los pacientes con EA con sntomas leves. Los estudios tambin han demostrado
liberacin de -sinuclena en exosomas en un sistema modelo in vitro de la EP. Estas
protenas exosomal pueden tener un gran potencial en el diagnstico clnico y se deben
estudiar ms a fondo, ya que el concepto es todava nuevo en la arena el
descubrimiento de biomarcadores.
El campo de investigacin del diagnstico molecular en el trastorno neurodegenerativo
es todava un rea incipiente de la investigacin y el desarrollo. Se prev que los
nuevos acontecimientos en diversos diagnsticos moleculares podran allanar el
camino para la deteccin temprana y el tratamiento eficaz de la neurodegeneracin.
En esta breve revisin, nos centramos en los avances realizados en los principales
trastornos neurodegenerativos-AD, PD, ALS, y HD y las aplicaciones de diagnstico
molecular para los remedios potenciales recientes. Tambin presentamos una
perspectiva sobre la futura direccin de diagnstico y frenar la progresin de trastornos
neuronales.

Diagnstico Molecular de Enfermedades Neurodegenerativas: Una

Potencialmente Mejor Enfoque Sobre la Conducta Sntomas
Diagnstico Basado
Los sntomas de comportamiento pueden ser utilizados para el diagnstico pre-mortem
de los trastornos neurodegenerativos. Sin embargo, el principal inconveniente de los
sntomas conductuales diagnstico basado es sus limitaciones para identificar
pacientes temprano en el curso de su enfermedad, cuando la intervencin
farmacolgica puede prevenir significativamente la progresin de la enfermedad, si se
detecta a tiempo. Por ejemplo, bien establecida pruebas de comportamiento como el
ADAS-Cog que se consideren como el "estndar de oro" para el diagnstico de AD
puede dar resultados falsos negativos para los pacientes con sntomas leves.
Para superar estos desafos de diagnstico, mtodos neuro-patolgico actuales se han
combinado con tcnicas de biologa molecular que han llevado a una mayor
comprensin de los trastornos neurodegenerativos, junto con las clasificaciones con
base biolgica de estos trastornos. El diagnstico molecular proporcionan una poderosa
herramienta en el diagnstico de muchas enfermedades neurolgicas. Por ejemplo, las
pruebas genticas de mutaciones causantes de enfermedades en-genes ha sido
aprovechado para definir y clasificar muchos de los sndromes neurodegenerativos
heredados heterogneos. Cambios en patologas, bioqumica y gentica de los
pacientes nos pueden dar una informacin completa sobre la naturaleza de una
enfermedad en particular. Sin embargo, las pruebas moleculares puede realizarse slo
despus de una cuidadosa consideracin y un consejo gentico. Se describe en las
siguientes secciones principales trastornos neurolgicos, y la capacidad y las
aplicaciones de diagnstico molecular en su deteccin.

Enfermedad de Alzheimer
AD es la enfermedad neurodegenerativa ms comn en la mayora de los pases; es un
trastorno progresivo y degenerativo que ataca a las neuronas del cerebro, lo que
resulta en la prdida de la memoria, el pensamiento y las habilidades del lenguaje, y
los cambios de comportamiento. La mayora de las neuronas que degeneran en esta
enfermedad comunicarse con otras neuronas utilizando el producto qumico o
neurotransmisor acetilcolina en el cerebro. Las alteraciones en la acetilcolinesterasa
(AChE) y butirilcolinesterasa (BuChE) pueden ser observados en AD pero el
agotamiento acetilcolina es el ms comn y sorprendente de todos los sntomas.
Los dos tipos de lesiones anormales que obstruyen el cerebro de pacientes con
Alzheimer son las placas seniles extracelulares (compuesta de pptidos beta-amiloides)
y ovillos neurofibrilares intracelulares (NFTs, compuestas de la protena tau). Formas
A como resultado de la escisin enzimtica de la matriz Protena Precursora de
Amiloide (APP). Las proteasas que intervienen en la descomposicin de la APP, son
secretasas alfa-, -y -. Los NFTs representan la degeneracin sinptica o la atrofia de
las clulas nerviosas despus de daos en los axones conectados sinpticamente. NFTs
se componen de filamentos helicoidales apareados (PHF), que estn hechos
principalmente de forma insoluble hiperfosforilada de la protena tau.
El diagnstico de la EA se basa generalmente en observaciones clnicas y pruebas
cognitivas como pruebas neuropsicolgicas que ayuda en el diagnstico y el
tratamiento de enfermedades como la AD que afectan a la emocin, el pensamiento y
el comportamiento. Las pruebas neuropsicolgicas acompaan una entrevista
exhaustiva con el paciente, e incluyen pruebas para evaluar la atencin, la memoria, el
lenguaje, la capacidad de planificar y de la razn, y modificar la conducta, as como la
evaluacin de la personalidad y la estabilidad emocional, que tambin puede ayudar al
mdico y su familia comprender mejor el impacto de un trastorno en el funcionamiento
cotidiano de un paciente. La enfermedad se confirm finalmente por postmortem
mediante la demostracin de las placas amiloides y los ovillos neurofibrilares en el
cerebro. Sin embargo, la progresin de la enfermedad es un proceso continuo que
fenmeno a largo antes de que aparezcan los hallazgos clnicos significativamente
daa el cerebro. Por lo tanto, bilogos, biomdicos y expertos y biotecnlogos medicina
molecular se unen para disear y desarrollar marcadores moleculares de diagnstico
avanzadas que podran permitir muy diagnstico en etapa temprana de la EA y la
evaluacin objetiva de sus respuestas a los tratamientos putativos. Varios
biomarcadores diagnsticos genticos y bioqumicos se han empleado para detectar y
diagnosticar AD.

Los biomarcadores genticos

Menos de 5% de todos los casos de AD puede explicarse por mutaciones en los
siguientes tres genes. Entre ellos, las mutaciones en los dos genes de presenilina
homlogos: presenilina 1 (PS1, MIM 104 311) situado en el cromosoma 14, y la
presenilina 2 (PS2, MIM 600 759) situados en el cromosoma 1, son los ms comunes y
son responsables de ms de la mitad de los casos AD familiar conocidos, mientras que
las mutaciones en el gen para la protena precursora de amiloide (APP, MIM 104 760)
situado en el cromosoma 21) son comparativamente menos. El cdigo de genes de
presenilina para protenas conocidas como la presenilina, que controlan la proteolisis
de APP en pptidos ms pequeos. Un aumento anormal en la actividad de APP puede
ser debido a cualquier mutacin de sentido errneo en uno de estos genes de la
presenilina resultantes en pptidos A ms. La primera mutacin gentica ligada a AD
se ha encontrado en el gen APP. Este gen APP, codifica una protena transmembrana

glicosilada que contiene 770 aminocidos en su isoforma ms larga. Esto fue

confirmado por el hecho de que los pacientes con sndrome de Down tambin
desarrollaron placas similares y sufrieron Alzheimer encefalopata en sus ltimos aos.
Adems de las mutaciones mencionadas anteriormente, que pueden causar AD, el
alelo E4 de la ApoE se asocia con las formas espordicas de AD. Aunque se detect
alelo E4 en aproximadamente el 40-50% de todos los pacientes con AD, pero no podra
servir como un marcador de diagnstico basado en los criterios de sensibilidad para
biomarcadores. Por lo tanto, ApoE es considerado como un indicador de factor de
riesgo en lugar de un marcador gentico real de AD. Junto con historia familiar positiva,
un inicio temprano (en los aos 40 y 50), que es comn a todas estas formas
monognicas, debe actuar como una indicacin para el diagnstico gentico molecular.

Los marcadores bioqumicos

Los niveles de la protena tau y A en el lquido cefalorraqudeo (LCR) son los dos
marcadores bioqumicos ms prometedores de la EA. A se secreta en el espacio
extracelular y fluidos biolgicos, incluyendo CSF haciendo A42 un indicador
considerable de AD. Una disminucin en los niveles de A en el LCR refleja AD y su
sensibilidad es de alrededor de 80-90%. Como AD progresa pptido A de agregados
de LCR para formar placas en el cerebro, por lo tanto, la reduccin de su concentracin
en el LCR. CSF-A42 parece ser un biomarcador notable para el diagnstico de AD
cuando se utiliza en combinacin con otros biomarcadores AD. CSF-tau tambin
proporciona una muy alta sensibilidad para la EA, pero la razn de su aumento anormal
en los pacientes con EA no est claro. La combinacin de ambos CSF-A42 y CSF-tau
puede mejorar su especificidad y sensibilidad y puede ser un conjunto marcador
bioqumico ideal para AD. 2- (1- {6 - [(2- [18F] fluoroetil) (metil) amino] -2-naftil}
etiliden) malononitrilo ([18F] FDDNP) -PET puede determinar la localizacin y la carga
de amiloide y ovillos neurofibrilares senil placas en el cerebro humano, debido a su
capacidad de cruzar la barrera sangre-cerebro-barrera (BBB). FDG-PET se utiliza para
medir la utilizacin de la energa del cerebro y para inferir nmero sinptica. Por lo
tanto, se emplea de formacin de imgenes PET Molecular para diagnosticar AD. Este
descubrimiento de un nuevo sitio de unin a fibrillas A40 como resultado de la unin
FDDNP ofrece una nueva oportunidad para el tratamiento precoz de la EA. La
sensibilidad clnica para AD utilizando la categora "EA probable" es de 66 17% con
respecto al conformado neuropatolgicamente diagnsticos y puede ser aumentado a
90,5 5,5%, mediante la inclusin de los pacientes "posible AD" a expensas de la
especificidad. La sensibilidad de la 18F-FDG PET es de 91 3%. El uso combinado de
[18F]-PET FDDNP sistema de diagnstico molecular etiquetado y otras pruebas de
diagnstico proporciona una nueva va para el diagnstico precoz de la EA. En una
espectroscopia de imagen de trabajo que emplea relacionada, se usaron trazadores
SPECT y PET en el diagnstico y la investigacin de la EA. La mayora de los trazadores
demuestran la prdida neuronal asociada con la enfermedad y los resultados en
disminucin regional en la utilizacin de glucosa que se puede estudiar con 18F-FDG
PET (Young, 2009). SPECT y PET son mucho ms sensibles con la capacidad de detectar
trazadores en 10-9-10-11 mol / L, en concentraciones de trazadores que no va a
perturbar el funcionamiento normal.
Los microARNs (miRNAs) se han empleado para la deteccin precoz de la EA (Grasso et
al., 2014). miRNAs pertenecen a una familia de ARNs cortos no codificantes, de una
sola hebra 21-22 nucletidos de largo que constituyen aproximadamente el 1% de
todos los genes humanos. Representan la clase ms abundante de pequeos RNAs en
animales. Adems, miRNAs se encuentran en gran abundancia en el sistema nervioso,
donde a menudo se replican un patrn de expresin especfica del cerebro y por lo
general se encuentran para ser co-expresada con sus objetivos. Sus principales
funciones son reguladores clave de diferentes funciones biolgicas, incluyendo la

plasticidad sinptica y neurognesis, donde canalizar la fisiologa celular hacia la

diferenciacin neuronal. Adems, pueden influir indirectamente en la neurognesis
mediante la regulacin de la proliferacin y la auto-renovacin de las clulas madre
neurales.
Es interesante observar que miRNAs estn desreguladas en varias enfermedades
neurodegenerativas, un espectro de etiologas que culminan en una va final comn de
la muerte celular neuronal. La disfuncin de miRNAs en los trastornos
neurodegenerativos se puede aprovechar para el diagnstico precoz de la EA, que es
un nuevo enfoque para la comprensin de las enfermedades neurodegenerativas.
Adems, el uso de marcadores de diagnstico miRNAs como biomoleculares tiene
algunas ventajas: primero de todo lo que permiten la facilidad de deteccin con
especificidad extrema. Adems, a diferencia de las grandes molculas de ARN como
ARNm, los miRNAs pueden ser bien conservados en formalina, tejidos embebidos en
parafina (FFPE) y tambin en muestras snap-congelados frescos.
Deterioro cognitivo leve (MCI) es un estado intermedio entre el envejecimiento normal
y AD (y otras demencias), que generalmente se define como la primera etapa en la que
los sntomas clnicos se hacen evidentes. Se inform biomarcadores plasma miARN
para detectar MCI, donde se seleccion un grupo inicial de miRNAs entre cerebroconocido y miRNAs neuronas enriquecido. Luego, los investigadores identificaron los
pares de marcadores de diagnstico biomolecular representados por dos grupos: la
"familia miR-132", que consiste de miR-128 / miR-491-5p, miR-132 / miR-491-5p y miR874 / miR-491 -5p y el "miR-134 de la familia" que comprende el miR-134 / miR-370,
miR-323-3p / miR-370 y miR-382 / miR-370 con bastante alta sensibilidad y
especificidad en el 79-100% y 79- 95%, respectivamente. En un estudio longitudinal
separado, los miARN pares de marcadores de diagnstico biomolecular identificados
detectaron xito MCI en la mayora de los pacientes en la fase asintomtica de 1-5
aos antes del diagnstico clnico.
Se hicieron observaciones recientes relacionados a cambios en los niveles de
fosfolpidos de plasma; que pueden ser aprovechados para el desarrollo de nuevo
marcador diagnstico bimolecular para la EA. Se prev que la reduccin en el nivel de
fosfolpidos para permitir que la prediccin precisa, que si un individuo cognitivamente
normales se va a desarrollar MCI o AD dentro de los 2 aos. Hay un estudio en el panel
de biomarcadores basados en la sangre para la deteccin de AD preclnica con
exactitud por encima de 90% mayor que la obtenida a partir de estudios publicados.

Enfermedad de Parkinson

La bsqueda de biomarcadores de diagnstico molecular en la EP es fundamental para

identificar la enfermedad en etapas tempranas que permitan el seguimiento de la
eficacia de las terapias neuroprotectoras para la EP. En la EP, la degeneracin de las
neuronas, se producen las neuronas dopaminrgicas ms especficamente entre el
substantianigra (SN) y el cuerpo estriado. Como resultado, una gran mayora de las
clulas productoras de dopamina en el substantianigra se pierden en los pacientes con
PD. Los sntomas de la EP estn temblando en las manos, los brazos, las piernas y la
cara; rigidez de las extremidades y el tronco; lentitud de movimiento; y trastornos del
equilibrio y la coordinacin. A medida que estas neuronas se destruyen
progresivamente, los pacientes pueden tener dificultad para caminar, hablar y
completar otras tareas sencillas. PD generalmente afecta a personas mayores de
sesenta aos.
Actualmente, se emplean slo criterios clnicos para el diagnstico de la EP. La
evaluacin del estado clnico y la evolucin de la EP se basa en diversos factores y
medidas mdicas. Estos incluyen el examen de los sntomas, la utilizacin de los

sistemas de puntuacin estructurados [Unified Parkinson Disease Rating Scale

(UPDRS), Short Parkinson Escala de Evaluacin, (SPES), Balanzas para Resultados en
enfermedades- de Parkinson (SCOPA), y el de Hoehn y Yahr puesta en escena (H & Y)
escala. Criterios clnicos diagnstico basado de la EP se puede hacer con una
presentacin tpica y la respuesta positiva a la levodopa con una sensibilidad del 93%.
Sin embargo, la principal limitacin de esta tcnica es el diagnstico diferencial con
otras entidades presentar parkinsonismo [por ejemplo, el temblor esencial, la parlisis
supranuclear progresiva (PSP), atrofia multisistmica (MSA), la degeneracin
corticobasal (CDB)] que puede ser un reto.
Investigaciones recientes han demostrado que las herramientas de diagnstico
molecular se pueden aprovechar para superar los retos actuales sobre limitaciones a la
deteccin temprana y el diagnstico diferencial efectiva. Se inform de una firma de
diagnstico molecular en sangre que identifica principios de la DP. La evaluacin se
hizo sobre si una firma gentica podra ser detectado en la sangre desde temprano /
pacientes con EP leves que podran apoyar el diagnstico de la EP temprana,
centrndose en los genes que se encuentran particularmente alterados en el
substantianigra de la EP espordica. Los resultados de la investigacin proporcionan
pruebas de la capacidad de un panel de cinco genes para el diagnstico temprano / PD
leve, con un posible valor diagnstico para la deteccin de la EP asintomtica antes de
expresin abierta de la enfermedad.
Este estudio piloto demuestra que el modelo de genes en la sangre puede tener un
fuerte valor predictivo para el diagnstico PD que, posiblemente, puede ayudar a
identificar a los individuos en etapas presintomticos (pacientes con depresin,
trastornos del sueo o hiposmia o pacientes portadores de factores de riesgo
genticos) que son buenos candidatos para el tratamiento neuroprotector . Un
marcador de diagnstico biomolecular Tal para la EP puede ser de gran valor para la
identificacin de un subgrupo fisiopatolgico de los pacientes con EP que pueden
responder favorablemente a los agentes destinados a los mecanismos reflejados por el
panel de genes.

Los biomarcadores genticos

PD se hereda en un autosmica recesiva mendeliana moda dominante o autosmica en
un pequeo nmero de familias. Las mutaciones se encuentran en -sinuclena (SNCA)
y rica en leucina repetir kinase2 genes (LRRK2) para la enfermedad de inicio tardo y
parkin (PARK2), ubiquitina carboxiterminal hidrolasa L1 (UCH-L1), PTEN inducida
putativo Kinase1 (PINK1) , DJ1 oncogn (DJ1) para la aparicin temprana.
Las mutaciones puntuales, duplicaciones, y triplicacin en el gen -sinuclena, que se
localiza en el cromosoma 4, son una caracterstica de la PD y que se producen en la
mayora de formas, incluyendo la forma familiar rara aparicin temprana de la EP. Los
genes y productos gnicos han sido identificados por la caracterizacin de los
autosmicos monogentico formas dominantes de PD. Varios productos gnicos de los
genes mutados en las formas autosmicas dominantes se han relacionado con la
disfuncin mitocondrial, el estrs oxidativo, y mal manejo de formas impedidas o
aberrantes de los productos gnicos (por ejemplo, oligometric -sinuclena). Ms de 70
mutaciones en el gen parkin grande se han asociado con la forma de aparicin
temprana de parkinsonismo. Las mutaciones en el gen parkin puede dar cuenta de PD
en hasta el 50% de los casos familiares del juvenil autosmico recesivo parkinsonismo.
Otro gen ubiquitina carboxi-terminal hidrolasa L1 (UCH-L1) localizado en el cromosoma
4 codifica una protena que pertenece a la familia de enzimas deubiquitinating. La
protena UCH-L1 constituye 1% de la protena del cerebro y su funcin se presume que
actuar para reciclar ubiquitina por hidrlisis de los pptidos ubiquitinated. Esta enzima

juega un papel en la modificacin de las protenas daadas que de otro modo podran
acumularse hasta niveles txicos en la neurona. Tambin se encontraron dos
mutaciones homocigticas en el gen PINK1 asociada con EP en las familias espaolas e
italianas. Este hallazgo proporciona evidencia adicional de que las mutaciones se
asocian con PINK1 PARK6. Y las mutaciones asociadas con PARK7 estn en DJ-1 gen. La
evidencia sugiere DJ-1 protena de participacin en el estrs oxidativo y la
neurodegeneracin. La progresin lenta de los sntomas con respuesta sostenida al
tratamiento con levodopa es las caractersticas clnicas de DJ-1 parkinsonismo.
Revelando el papel fisiolgico de estos genes puede promover la comprensin de los
mecanismos de cerebro de mantenimiento neuronal.

Los marcadores bioqumicos

Otros dos importantes marcadores de diagnstico biomoleculares se han empleado
para reconocer el inicio de PD. Estos incluyen (1) la prdida de el transportador de
dopamina "DAT" detectada por PET y (2) la presencia de la protena -sinuclena
situado en las lesiones del cuerpo de Lewy. DAT media la captacin de dopamina (DA)
en neuronas dopaminrgicas por un electrognico, Na + - mecanismo de transporte
acoplado - y Cl. DA y la cocana (bloqueadores de captacin) se unen a los dominios
compartidos y por separado sobre el transportador, que se observa a ser influenciados
drsticamente por la presencia de cationes. DAT tambin est implicado en la
absorcin de toxinas que generan el sndrome de Parkinson. Por lo tanto, la localizacin
de estriatal, preferentemente putamen concentracin DAT se considera un parmetro
de alta sensibilidad para la deteccin de fases tempranas de la PD y el mejor marcador
de diagnstico molecular. Descubrimiento de cuerpos de Lewy y Lewy neuritis, las
lesiones caractersticas en los cerebros de pacientes con enfermedad de Parkinson y la
demencia se debe a dos mutaciones en el gen -sinuclena. Dado que -sinuclena se
encuentra tambin en otros sinucleinopatas, que debe ser usado con la ayuda de otros
mtodos de diagnstico para aumentar la especificidad y sensibilidad para PD.
Varias tcnicas de imagen han sido empleados para el diagnstico de la EP, por
ejemplo, PET con [18F] DOPA trazador y la tomografa por emisin de fotn nico
(SPECT) con [123I] --CIT. PET se considera que es la herramienta ms til para el
diagnstico PD mediante la medicin de la emisin de positrones del cerebro despus
de una pequea cantidad de istopos o marcadores radioactivos han sido inyectados
en la corriente sangunea. Los estudios han demostrado una reduccin media del 40%
en el estriado 18F-Dopa captacin entre los controles y los pacientes con enfermedad
de Parkinson. Pacientes con EP relacionados con la medicacin suelen tener
distribucin normal 18F-DOPA. Trazador [18F] DOPA tiene disponibilidad clnica muy
limitado, pero Ioflupano Yodo-123 (DaTSCAN) es un trazador SPECT ampliamente
disponible que modela el sistema presinptica receptor de dopamina (DAT). SPECT slo
se diferencian de PET en que utiliza istopos con vidas medias ms prolongadas que se
pueden almacenar en el lugar. Recientemente, un SPECT con 99mTc-TRODAT-1 se
realiz en 16 pacientes consecutivos con EP (9 hombres, 7 mujeres) y en los 6 aos
igual voluntarios sanos (4 hombres, 2 mujeres; sintosta et al, 2014).. Las imgenes se
obtuvieron 3 h despus de la inyeccin intra-venosa del trazador. Una reduccin
gradual en la captacin estriatal especfico de 99mTc-TRODAT-1 se encontr con el
aumento de la severidad de la enfermedad entre los controles sanos vs. Etapa I Etapa II
vs. vs. Etapa III en pacientes con EP (es decir, 3,77 vs. 2,56 vs. 1,57 vs 0,63 , P <0,05).
99mTc-TRODAT-1 es precisa y ampliamente disponibles para la evaluacin de la
actividad de DAT. Estas tcnicas podran mejorar el diagnstico diferencial de
parkinsonismo, pero coste-eficacia sigue siendo un problema.

Los fluidos biolgicos son excelente fuente de biomarcadores como su estrecha

proximidad a las clulas refleja su condicin biolgica y son fciles de obtener y
rentable. Con la creciente importancia de miRNAs en biofluidos el desarrollo de la
circulacin de los biomarcadores para la EP tiene un gran potencial. Un estudio con
QRT-PCR sugiri que en la sangre perifrica de los niveles de expresin de miR-1, MIR22-5p, y miR-29 permiten distinguir los pacientes con EP de sujetos sanos, y miR-16-23p, miR 26a-2-3p, y miR30a diferenciar entre pacientes tratados y no tratados. En un
estudio reciente utilizando la secuenciacin de prxima generacin para los leucocitos
sanguneos totales se encontr que, 16 miRNAs incluidos miR-16, MIE-20a y miR-320
alterados significativamente en pacientes con EP en comparacin con los controles
sanos.
No hay ninguna prueba de diagnstico estndar para el Parkinson. Los investigadores
todava estn trabajando para desarrollar una precisa "marcador biolgico", como un
anlisis de sangre o de un escaneo de imgenes. Hasta la fecha, las pruebas consisten
en tcnicas especializadas de escaneo cerebro para medir el sistema de la dopamina y
el metabolismo cerebral es la mejor prueba objetiva para PD. Pero estas pruebas son
caras y realizado slo en centros de imagen especializados.

Esclerosis lateral amiotrfica

La ELA es una enfermedad neurolgica rpidamente progresiva, invariablemente fatal
que ataca a las neuronas encargadas de controlar los msculos voluntarios. Los
mensajes de las neuronas motoras en el cerebro (llamadas neuronas motoras
superiores) se transmiten a las neuronas motoras en la mdula espinal (llamado
neuronas motoras inferiores) y desde ellas a los msculos particulares. En la ELA, tanto
las neuronas motoras superiores e inferiores degeneran o mueren, y dejar de enviar
mensajes a los msculos. No puede funcionar, los msculos se debilitan gradualmente,
perder (atrofia), y tienen tics muy finos (llamados fasciculacin). Finalmente, se pierde
la capacidad del cerebro para iniciar y controlar el movimiento voluntario. ALS es un
resultado de complejo conjunto de factores, incluyendo todos o slo algunos de ellos
como el estrs oxidativo, estrs del retculo endoplasmtico, disfuncin mitocondrial, el
trfico de dysregulated endosomal, la transcripcin dysregulated, y el procesamiento
del ARN, la excitotoxicidad, la apoptosis, la inflamacin, y la susceptibilidad gentica
(Figura 1;. Calvo et al, 2014).

FIGURA 1 | mecanismos Diferente va molecular salteredin esclerosis

lateral amiotrfica, allofthes desregulados motor pronta muerte
neuronal (Figuretakenfrom:. Calvoetal, 2014).

El diagnstico de la ELA se basa principalmente en los sntomas, el examen clnico y

una serie de pruebas para descartar otras enfermedades. No tenemos un biomarcador
prctica de diagnstico para la ELA, a pesar de una intensa investigacin en los ltimos
aos, que conducen a retrasos diagnsticos. Enfoques neurofisiolgicos como el
nmero de unidades motoras de estimacin (MUNE) y electromiografa (EMG), una
tcnica de grabacin especial que detecta la actividad elctrica en los msculos,
desempean habitualmente un papel clave en la bsqueda de biomarcadores vlidos
para reconocer ALS.

Los biomarcadores genticos

Se han encontrado mutaciones en ms de una docena de genes que causa la ELA
familiar. Alrededor de un tercio de todos los casos familiares (y un pequeo porcentaje
de casos espordicos) resulta de un defecto en un gen conocido como "el cromosoma 9
marco abierto de lectura 72," o C9ORF72. La funcin de este gen es an desconocido.
Otro 20 por ciento de los casos familiares resultan de mutaciones en el gen SOD1 que
codifica la enzima de cobre y zinc superxido dismutasa 1 (SOD1). Aunque todava no
est claro cmo las mutaciones en el gen SOD1 a la degeneracin de las neuronas
motoras, existe una creciente evidencia de que la protena SOD1 mutante se vuelven
txicos. Otro 5 por ciento de los casos familiares y <1% de casos espordicos
resultados de mutaciones en el FUS gen, que codifica fusionado en el sarcoma /
translocado en liposarcoma (FUS / TLS), y tres por ciento de los casos familiares
restantes son el resultado de mutaciones en el gen TARDBP, ADN que codifica la
protena de unin TAR-43.
Otra posibilidad es el papel de la epigentica. Mecanismos epigenticos modificar la
estructura de la cromatina y pueden imitar cambio gentico; estas modificaciones son
reversibles, heredable, y no hereditarios en el ADN o cromatina estructura, pero no en
la secuencia de ADN. Hay diferentes tipos de modificaciones epigenticas, tales como
la metilacin del ADN y la acetilacin de histonas. En un estudio, se utilizaron
microarrays de metilacin CpG al perfil extractos de ADN de la autopsia de la mdula
espinal de los casos de ELA espordicos. ADN bisulfito convertidos-se amplifica y se
hibrida con matrices Infinium Methylation27 Humano ADN BeadChip. La metilacin de

27.578 sitios CpG que abarcan 14.495 genes humanos se determin y hipo o
hipermetilacin 726 Martin y Wong se encontr en 112 genes en los casos de ELA.

Los marcadores bioqumicos

Los estudios demostraron que la expresin del subtipo de receptor metabotrpico de
glutamato mGluR2, que es conocido para proporcionar proteccin contra la
excitotoxicidad, se disminuy en la ELA linfocitos T, lo cual fue confirmado por la alta
concentracin de glutamato detectado en el CSF de muchos pacientes. Tambin se
encontr La actividad enzimtica de la glutatin peroxidasa y SOD1 a disminuir en los
eritrocitos ALS . El aumento de cantidades de 8-hidroxi-2 'desoxiguanosina (8OH2'dG
en pacientes con ELA, que es un producto de la lesin oxidativa en el ADN es tambin
un buen biomarcador. Hay un aumento incontrolado de microglial las clulas en el
sistema nervioso central y otras clulas inmunes, que contribuyen a la degeneracin
de las neuronas motor en la ELA. Los factores que intervienen en estas reacciones
inflamatorias como las citoquinas pueden seguirse en la periferia como potenciales
biomarcadores. Por tanto, los niveles circulantes de la interleucina-6, factor de necrosis
tumoral- (TNF-), interfern-, monocitos quimio atrayente de protena-1 se
encontraron (MCP-1), y la protena C-reactiva-amplia gama (wrCRP) para ser
aumentado en ALS pacientes. inhibidores de la excrecencia de neuritas (Nogo), uno de
los biomarcadores potenciales para ALS posee actividad inhibidora del crecimiento
axonal y tiene un papel central en la ELA. Junto con la ausencia de biomarcadores
diagnsticos y pronsticos fiables y de gran alcance, la ELA es una causa importante
de preocupacin.

Enfermedad de Huntington
H es un trastorno neurodegenerativo hereditario que puede afectar a motor, cognitivo
y funcionamiento psiquitrico. Disminucin de la capacidad cognitiva y el cambio en la
personalidad son sntomas de HD. La patologa es causada por una repeticin CAG
expandido en el gen HTT, lo que resulta en una protena huntingtina mutada (mHtt). La
formacin de agregados de protena mutante y prdida de clulas neuronales, con la
desregulacin transcripcional son caracterstica prominente de tejido cerebral HD.
Recientemente, los niveles de protena huntingtina mutada (mHtt) se cuantificaron por
una sola molcula ultrasensible de conteo (SMC) mHtt inmunoensayo para la primera
vez en muestras de LCR de individuos que llevan la mutacin HD. Es importante tener
un biomarcador progresin de la enfermedad que debe ser capaz de identificar los
cambios antes de los sntomas clnicos. Huntingtina se expresa de forma ubicua y
cambios-huntingtina mutante especfica podra reflejarse por cambios en la expresin
gnica en la sangre. La participacin de los leucocitos en la regulacin del sistema
inmune de la sangre hizo una fuente ideal para la identificacin de eventos de alta
definicin como la inflamacin perifrica. Varios estudios tambin han identificado HD
cambios de ARNm de sangre utilizando la tecnologa de microarrays, pero eran difciles
de validar todos los estudios. La validacin de biomarcadores para HD ha sido siempre
un desafo ya que la enfermedad presentarse a s misma a travs de una variedad de
sntomas y las tasas de progresin.

Biomarcadores moleculares
Los individuos con HD sobre expresan el gen, la familia de la histona H2A, miembro Y
(H2AFY), en su sangre. La sobreexpresin de este gen en la sangre y el cerebro fue

validado en muestras procedentes de estudios clnicos. En concreto, la investigacin

demuestra una sobreexpresin 1,6 veces de H2AFY en pacientes con HD.
Recientemente, un estudio mostr perfiles de expresin gnica, con la ayuda de la
secuenciacin de prxima generacin y tecnologas Fluidigm y produjo un conjunto de
cinco genes como potenciales biomarcadores de alta definicin que son altamente
expresado en HD sangre. Prokineticin 2 (PROK2) se ha propuesto para tener un papel
en los ritmos circadianos alteraciones que han demostrado que se correlaciona con el
deterioro cognitivo en HD (Aziz et al., 2010). Imposicin farmacolgico de sueo
ralentiza el deterioro cognitivo y revierte la desregulacin de PROK2 en modelos de alta
definicin. PROK2 es muy prometedor biomarcador de HD progresin. Evidencias
sugieren que los mecanismos de represin de genes tambin estn asociados con HD y
Zinc dedo protenas 238 (ZNF238) es un represor transcripcional que est implicado en
el desarrollo del cerebro y la miognesis. Un estudio de la expresin gnica reciente
mostr que el aumento de los niveles de mRNA de Aquaporin 9 (AQP9) y la presencia
de AQP9 en la sangre podra representar eventos inflamatorios perifricos o centrales
cuando se acompaa con el aumento de los niveles de otros cuatro genes. A3 Anexina
(ANXA3) y rica en cistena, transmembrana (TM) mdulo (CYSTM) son otros dos
biomarcadores potenciales para HD. ANXA3 se encuentra para ser regulado en modelos
de lesin neuronal y CYSTM est implicado en la respuesta al estrs tolerancia a
metales pesados especficamente.

Los marcadores bioqumicos

La variabilidad en el fenotipo clnico de HD y potenciales factores de confusin de los
factores ambientales y farmacolgicas, los resultados en el uso de la combinacin de
diferentes biomarcadores que podra ser eficaz en el seguimiento de la progresin de la
HD. Muchos biomarcadores potenciales han sido identificados durante el
descubrimiento de la homeostasis alterada en HD. En un estudio reciente, con la ayuda
de MRS transversal los investigadores tienen metabolitos putaminal distinguidos en
individuos pre-manifiesto y principios de HD de los controles. Se encontr que el total
aspartato N-acetil (TnaA) es menor en HD temprano y HD pre-manifiesto que en los
controles, mientras que el marcador de gliosis myo-inositol (MI) fue elevada firmeza a
principios de HD. Otro estudio, tambin han demostrado cambios de metabolitos en el
ncleo caudado y putamen de los portadores del gen HD alrededor de inicio de la
enfermedad. Estas correlaciones de NAA total con puntuacin de carga de la
enfermedad sugieren que este metabolito puede ser til en la identificacin de
respuestas neuroqumicas a agentes teraputicos.
La vasopresina tiene un papel en la homeostasis equilibrio de lquidos, aumento de las
concentraciones sricas de la vasopresina se han reportado en HD. El aumento de las
concentraciones de 8-hidroxi-2-desoxiguanosina (8OHdG), un indicador de dao
oxidativo del ADN, y el aumento de las concentraciones de perxido de lpidos en
plasma, cido lctico, 4-hydroxynoneal y malondialdehdo en pacientes con HD a tomar
un biomarcador potencial. Disminucin de la glutatin peroxidasa y superxido
dismutasa de cobre y zinc se observ en los eritrocitos de los pacientes en HD en
comparacin con los controles. Niveles elevados de citoquinas, incluyendo
interleuquinas 4, 6, 8, 10, y 23, TNF-, y la clusterina se han identificado en el cerebro
y plasma muestras post-mortem de pacientes con HD. Las diferencias perfil
inflamatorias entre transportistas de control y de genes sirven como potencial
marcador bioqumico para HD incluyendo resto de los biomarcadores anteriores. Todos
estos biomarcadores facilitaran una evaluacin precisa de la eficacia de nuevas
terapias y mejorar la seguridad y la eficiencia de los ensayos clnicos.

Conclusin y Futuro Perspectiva

En esta breve resea, hemos descrito las tendencias actuales en las aplicaciones de las
tcnicas de diagnstico molecular para la deteccin temprana y el diagnstico de los
trastornos neurodegenerativos centrados en AD, PD, ALS, y HD. Hemos hablado de
varios marcadores de diagnstico biomoleculares que se han identificado en la ltima
dcada que tienen un alcance enorme para futuras investigaciones en las reas de
ambos marcadores moleculares genticos y bioqumicos. Marcadores de diagnstico
Biomolecular pueden proporcionar nuevos conocimientos en relacin con diferentes
diagnstico y orientacin teraputica para enfermedades neurodegenerativas
especficas.
El diagnstico molecular para enfermedades neurodegenerativas representan un rea
de investigacin multidisciplinar donde se requiere una colaboracin slida entre
neurlogos, psiclogos, bilogos, y biomateriales cientficos y otro personal capacitado
con la experiencia necesaria en el manejo de las enfermedades. Lneas de
investigacin futuras podran incluir el diseo y desarrollo de una combinacin de
varios marcadores de diagnstico biomoleculares para multifunctionalities. Una
plataforma de tecnologa de diagnstico molecular multifuncional mejorara
significativamente la precisin, especificidad y sensibilidad. El desarrollo de diagnstico
molecular basado en la circulacin de miRNAs tambin podra ser un enfoque muy
prometedor para el desarrollo de pruebas de deteccin mnimamente invasivos para
trastornos neurodegenerativos.
Los estudios futuros tambin podran incluir el desarrollo de un estudio multicntrico y
diseo prospectivo de herramientas de diagnstico molecular; medicin de mltiples
biomarcadores potenciales y un prolongado perodo de seguimiento clnico (hasta que
la muerte como punto final) que proporcionan la evaluacin de ambas caractersticas
clnicas y determinaciones de los diagnsticos biolgicos y confirmacin finalmente
neuropatolgico examinando los cerebros de los pacientes con la muerte.